CN105981583B - 添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法。其操作步骤主要包括：（1）下垂虫草菌种活化；（2）新鲜昆虫蛋白培养基制备；（3）新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长效果检测。使用本发明所提出的添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法，促进下垂虫草菌丝体生长，提高下垂虫草菌丝体的产率。本发明操作简便，效果良好，可推广应用到下垂虫草的大规模实际生产过程中。

Description

添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法
技术领域
本发明属微生物生物技术领域，涉及一种添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法。
背景技术
下垂虫草Ophiocordyceps nutans (Patouillard) G. H. Sung, J. M. Sung,Hywel-Jones & Spatafora是下垂虫草菌与寄主蝽象的复合体。野生下垂虫草多生长在山谷斜坡混交林的阴湿处林木腐叶中，采集时间每年7-10月。民间用该虫草泡酒或煎服，用于理气、止痛、壮阳，治疗胃痛、腰腿疼痛等症。下垂虫草野生资源分布较广，但资源数量较少，而且其单只虫草的重量较轻，人工可采集规模不大，限制了下垂虫草的开发利用。
下垂虫草的无性型菌株人工培养生长比较缓慢，菌丝体产率很低。本课题组前期研究发现采用昆虫干粉对下垂虫草菌丝体的生长并无明显促进作用，而在下垂虫草菌培养基中添加从活体昆虫中提取的新鲜昆虫蛋白，能够显著促进下垂虫草菌的生长。现在人工培养的昆虫如家蚕、蜜蜂、黄粉虫、玉米螟、蝽象等材料已经达到工厂化生产规模，可以满足下垂虫草菌培养所需的新鲜昆虫蛋白材料。为了寻找一条大规模培养下垂虫草的途径，本发明尝试在下垂虫草培养基中添加新鲜昆虫蛋白，有效促进下垂虫草菌丝体的生长，为下垂虫草人工大规模培养奠定基础。
发明内容
本发明提供了一种添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法。
该方法的操作步骤如下：
（1）下垂虫草菌种活化：将4℃保存的下垂虫草菌株接种到PDA平皿培养基上，于15-20℃恒温培养30-45天，接种块边缘有新菌丝长出，菌落周围培养基颜色变为褐色；
（2）新鲜昆虫蛋白培养基制备：选取生长健壮的昆虫如黄粉虫幼虫、玉米螟幼虫或蝽象成虫等作为新鲜昆虫蛋白来源；每800 ml水中加入活体昆虫50-150 g，去皮鲜马铃薯200 g，在搅拌机中搅拌打碎，用2层纱布过滤；在此滤液中加入20 g葡萄糖，加水定容为1000 ml，混匀；按每瓶100 ml的装量，分装入500 ml三角瓶，用透气膜封口，121℃常规灭菌30 min；
（3）新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长效果检测：用3 mm直径无菌打孔器取3块活化的下垂虫草菌种，转接到装有100 ml新鲜昆虫蛋白培养基的500 ml三角瓶中，在摇床上以120 rpm的转速，15-20℃恒温培养30天，用2层纱布过滤下垂虫草菌丝体，50℃干燥至恒重，采用分析天平称重；以在常规PDA液体培养基中培养下垂虫草菌丝体为对照，比较新鲜昆虫蛋白对下垂虫草菌丝体产率的促进作用。
本发明的关键点在于：采用的昆虫蛋白材料是用活体昆虫提取出来的，新鲜昆虫蛋白能够促进下垂虫草菌丝生长；根据不同昆虫种类调整培养基中添加新鲜昆虫蛋白的量；另外，培养过程中控制好温度等生长因素。以上关键点如能把握好，可以显著促进下垂虫草菌丝体的生长，提高下垂虫草菌丝体的产率。
本发明操作简便，效果良好，可推广应用到下垂虫草的大规模人工培养实际生产过程中。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。
实施例1：添加新鲜黄粉虫幼虫蛋白促进下垂虫草菌丝体生长
（1）下垂虫草菌种活化：将4℃保存的下垂虫草菌株接种到PDA平皿培养基上，于15℃恒温培养45天，接种块边缘有新菌丝长出，菌落周围培养基颜色变为褐色；
（2）新鲜昆虫蛋白培养基制备：选取生长健壮的黄粉虫幼虫作为新鲜昆虫蛋白来源；每800 ml水中加入活体昆虫100 g，去皮鲜马铃薯200 g，在搅拌机中搅拌打碎，用2层纱布过滤；在此滤液中加入20 g葡萄糖，加水定容至1000ml，混匀；按每瓶100 ml的装量，分装入500 ml三角瓶，用透气膜封口，121℃常规灭菌30 min；
（3）新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长效果检测：用3 mm直径无菌打孔器取3块活化的下垂虫草菌种，转接到装有100 ml新鲜黄粉虫幼虫蛋白培养基的500 ml三角瓶中，在摇床上以120 rpm的转速，15℃恒温培养30天，用2层纱布过滤下垂虫草菌丝体，50℃干燥至恒重，采用分析天平称重；以在常规PDA液体培养基中培养下垂虫草菌丝体为对照，比较新鲜黄粉虫幼虫蛋白对下垂虫草菌丝体产率的促进作用。
添加新鲜黄粉虫幼虫蛋白促进下垂虫草菌丝体生长
实施例2：添加新鲜玉米螟幼虫蛋白促进下垂虫草菌丝体生长
（1）下垂虫草菌种活化：将4℃保存的下垂虫草菌株接种到PDA平皿培养基上，于18℃恒温培养40天，接种块边缘有新菌丝长出，菌落周围培养基颜色变为褐色；
（2）新鲜昆虫蛋白培养基制备：选取生长健壮的玉米螟幼虫作为新鲜昆虫蛋白来源；每800 ml水中加入活体昆虫150 g，去皮鲜马铃薯200 g，在搅拌机中搅拌打碎，用2层纱布过滤；在此滤液中加入20 g葡萄糖，加水定容至1000ml，混匀；按每瓶100 ml的装量，分装入500 ml三角瓶，用透气膜封口，121℃常规灭菌30 min；
（3）新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长效果检测：用3 mm直径无菌打孔器取3块活化的下垂虫草菌种，转接到装有100 ml新鲜玉米螟幼虫蛋白培养基的500 ml三角瓶中，在摇床上以120 rpm的转速，18℃恒温培养30天，用2层纱布过滤下垂虫草菌丝体，50℃干燥至恒重，采用分析天平称重；以在常规PDA液体培养基中培养下垂虫草菌丝体为对照，比较新鲜玉米螟幼虫蛋白对下垂虫草菌丝体产率的促进作用。
添加新鲜玉米螟幼虫蛋白促进下垂虫草菌丝体生长
实施例3：添加新鲜蝽象成虫蛋白促进下垂虫草菌丝体生长
（1）下垂虫草菌种活化：将4℃保存的下垂虫草菌株接种到PDA平皿培养基上，于20℃恒温培养30天，接种块边缘有新菌丝长出，菌落周围培养基颜色变为褐色；
（2）新鲜昆虫蛋白培养基制备：选取生长健壮的蝽象成虫作为新鲜昆虫蛋白来源；每800 ml水中加入活体昆虫50 g，去皮鲜马铃薯200 g，在搅拌机中搅拌打碎，用2层纱布过滤；在此滤液中加入20 g葡萄糖，加水定容至1000ml，混匀；按每瓶100 ml的装量，分装入500 ml三角瓶，用透气膜封口，121℃常规灭菌30 min；
（3）新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长效果检测：用3 mm直径无菌打孔器取3块活化的下垂虫草菌种，转接到装有100 ml新鲜蝽象成虫蛋白培养基的500 ml三角瓶中，在摇床上以120 rpm的转速，20℃恒温培养30天，用2层纱布过滤下垂虫草菌丝体，50℃干燥至恒重，采用分析天平称重；以在常规PDA液体培养基中培养下垂虫草菌丝体为对照，比较新鲜蝽象成虫蛋白对下垂虫草菌丝体产率的促进作用。
添加新鲜蝽象成虫蛋白促进下垂虫草菌丝体生长

Claims (1)

1.一种添加新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长的方法，其特征在于该方法的操作步骤包括：
(1)下垂虫草菌种活化：将4℃保存的下垂虫草菌株接种到PDA平皿培养基上，于15-20℃恒温培养30-45天，接种块边缘有新菌丝长出，菌落周围培养基颜色变为褐色；
(2)新鲜昆虫蛋白培养基制备：选取生长健壮的昆虫包括黄粉虫幼虫、玉米螟幼虫或蝽象成虫作为新鲜昆虫蛋白来源；每800ml水中加入活体昆虫50-150g，去皮鲜马铃薯200g，在搅拌机中搅拌打碎，用2层纱布过滤；在此滤液中加入20g葡萄糖，加水定容至1000ml，混匀；按每瓶100ml的装量，分装入500ml三角瓶，用透气膜封口，121℃常规灭菌30min；
(3)新鲜昆虫蛋白促进下垂虫草生长效果检测：用3mm直径无菌打孔器取3块活化的下垂虫草菌种，转接到装有100ml新鲜昆虫蛋白培养基的500ml三角瓶中，在摇床上以120rpm的转速，15-20℃恒温培养30天，用2层纱布过滤下垂虫草菌丝体，50℃干燥至恒重，采用分析天平称重；以在常规PDA液体培养基中培养下垂虫草菌丝体为对照，比较新鲜昆虫蛋白对下垂虫草菌丝体产率的促进作用。
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