CN103980047B - 一种抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制备方法。本发明首先通过鹤羽田戴尔福特菌、侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌菌种分别发酵制得菌液，然后将其混合制得混合发酵菌液；最后在有机物料中加入混合肥料、混合发酵菌液和无菌水，发酵，发酵结束后，将发酵后肥料与腐殖酸、草炭混匀，经对辊挤压式造粒机制备抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。本发明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料能有效降低水稻旱育秧立枯病的发生，还能降低病原菌对水稻秧苗生长的抑制作用，显著地促进水稻秧苗的生长。

Description

一种抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物肥料领域，尤其涉及的是一种抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制备方法。
背景技术
水稻立枯病是水稻旱育秧最主要的病害之一，从种子出苗到插秧的整个育秧过程中均可发生，但在离乳期发病最为严重。病苗表现为叶片无露珠，心叶或上叶片打绺，根少暗黄色无新根，茎基部逐渐黄枯，软化至腐烂。一旦发病很难防治，近几年，早稻旱育秧发生较重，轻者成撮成片发生，重者幼苗全部死亡。因此需要一种有效防治水稻秧苗立枯病的微生物有机肥料，既能促进秧苗生长，又能减轻病害的发生，同时有利于机械化插秧的开展。目前，尽管生产上关于微生物有机肥料的产品很多，但针对于防治水稻秧苗立枯病的微生物有机肥料较少。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供了一种抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料及其制备方法。
本发明的技术方案如下：
一种抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料的制备方法，其步骤如下：
(1)鹤羽田戴尔福特菌的发酵
将在LB固体培养基上活化的鹤羽田戴尔福特菌菌株单菌落，在超净工作台上转接到装有10mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的容积为50mL的三角瓶中，于30℃、180rpm条件下振荡培养20h；将培养后得到的培养液接种于装有400mL牛肉膏蛋白胨培养基的容积为1000mL的三角瓶中，180rpm、30℃条件下振荡培养20h后接种于装有20L发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵条件设定为：溶氧100％，搅拌速度350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h，pH6.8-7.2；发酵到达终点后，取样检测活芽孢浓度，确保活芽孢浓度≥1.0×108cfu/mL；
(2)侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌的发酵
将在LB固体培养基上分别活化的侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌(保藏编号为ACCC10369)、解淀粉芽孢杆菌或肺炎克雷伯氏菌菌株单菌落，在超净工作台上转接到装有10mLLB液体培养基的容积为50mL的三角瓶中，于30℃、180rpm条件下振荡培养20h；将培养后得到的培养液接种于装有400mL牛肉膏蛋白胨培养基的容积为1000mL的三角瓶中，180rpm、30℃条件下振荡培养20h后接种于装有20L发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵条件设定为：溶氧100％，搅拌速度350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h，pH6.8-7.2；发酵到达终点后，取样检测活芽孢浓度，确保活芽孢浓度≥1.0×108cfu/mL；
(3)混合发酵菌液的制备
将(1)、(2)中发酵得到的鹤羽田戴尔福特菌、侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌按照体积比2:1:1:1:1混合，制得混合发酵菌液；
(4)微生物肥料的制备
将菜籽饼、大豆饼按照重量比1:1混匀作为有机物料，添加氮磷钾肥按照纯氮：纯磷：纯钾重量比为3:1:1混匀作为混合肥料，将有机物料中加入混合肥料，混匀后添加混合发酵菌液，同时添加无菌水，在发酵罐中发酵1周；发酵结束后，将发酵后的肥料与腐殖酸、草炭混匀，经对辊挤压式造粒机制备抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料，并检测微生物肥料的活芽孢、有机质和水分含量，使活芽孢含量≥1.0×108cfu/g，有机质含量≥60％，水份含量控制在8-10％之间，检验合格后包装。
所述的发酵培养基的配方为：大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，酵母提取物5g/L，红糖50g/L，碳酸钙1g/L，MnSO45mg/L，pH7.0-7.2，用蒸馏水配制。
所述的制备方法，步骤(4)中，每kg有机物料加12-15g混合肥料；每吨有机物料添加50L混合发酵菌液；每kg有机物料添加200ml的无菌水。
所述的制备方法，步骤(4)中，发酵后的肥料与腐殖酸、草炭的重量比为10:1:2。
所述的制备方法制得的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。
本发明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料能有效降低水稻旱育秧立枯病的发生，还能降低病原菌对水稻秧苗生长的抑制作用，显著地促进水稻秧苗的生长。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
所用菌种购自中国工业微生物菌种保藏中心和中国农业微生物菌种保藏中心。
实施例1
1、鹤羽田戴尔福特菌的发酵
将在LB固体培养基上活化的鹤羽田戴尔福特菌菌株单菌落，在超净工作台上转接到装有10mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的容积为50mL的三角瓶中，于30℃、180rpm条件下振荡培养20h。将培养后得到的培养液接种于装有400mL牛肉膏蛋白胨培养基的容积为1000mL的三角瓶中，180rpm、30℃条件下振荡培养20h后接种于装有20L发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵条件设定为：溶氧100％，搅拌速度350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h，pH6.8-7.2。其中，所述发酵培养基的配方为：大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，酵母提取物5g/L，红糖50g/L，碳酸钙1g/L，MnSO45mg/L，pH7.0-7.2，用蒸馏水配制。发酵到达终点后，取样检测活芽孢浓度，确保活芽孢浓度≥1.0×108cfu/mL。
2、侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌的发酵
将在LB固体培养基上分别活化的侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌或肺炎克雷伯氏菌菌株单菌落，在超净工作台上转接到装有10mLLB液体培养基的容积为50mL的三角瓶中，于30℃、180rpm条件下振荡培养20h。将培养后得到的培养液接种于装有400mL牛肉膏蛋白胨培养基的容积为1000mL的三角瓶中，180rpm、30℃条件下振荡培养20h后接种于装有20L发酵培养基(同1)的机械搅拌式发酵罐中，发酵条件设定为：溶氧100％，搅拌速度350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h，pH6.8-7.2。发酵到达终点后，取样检测活芽孢浓度，确保活芽孢浓度≥1.0×108cfu/mL。
将上述发酵得到的鹤羽田戴尔福特菌、侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌按照2:1:1:1:1(体积比)混合，制得混合发酵菌液。
3、微生物肥料的制备
将菜籽饼、大豆饼按照重量比1:1混匀作为有机物料，添加氮磷钾肥按照纯氮(尿素)：纯磷(过磷酸钙)：纯钾(硫酸钾)＝3:1:1(重量比)混匀作为混合肥料，每kg有机物料加14g混合肥料，混匀后添加混合发酵菌液，每吨有机肥料添加50L混合发酵菌液，同时每kg有机物料添加200ml的无菌水，在发酵罐中发酵1周。发酵结束后，将发酵后的肥料与腐殖酸、草炭按照重量比为10:1:2混匀，经对辊挤压式造粒机制备抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料，并检测微生物肥料的活芽孢、有机质和水分含量，使活芽孢含量≥1.0×108cfu/g，有机质含量≥60％，水份含量控制在8-10％之间，检验合格后包装。
实施例2盆栽试验
在中国水稻研究所浙江省富阳基地温室进行水稻对比试验，所选用的土壤为含有立枯病菌的发病稻田土，试验设3个处理，CK：化肥对照，即为微生物肥料中的混合肥料；F：为实施例1中的有机物料--菜籽饼、大豆饼按照重量1:1混匀的混合物；A：施用实施例1制备的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料用量：水稻育秧时按土重的10％施用，常规管理。20天之后观察水稻秧苗生长情况，确认抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料是否有防治水稻立枯病的效果。经观察发现，随着水稻秧苗生长时间的延长，施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料处理(A)，其长势远好于施用化肥(CK)和有机物料(F)的水稻秧苗(表1)，发病明显减轻。
表1施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料对水稻秧苗生长的影响
结果表明，含病原菌土壤中水稻秧苗的发病率为75％，并且存活植株长势矮小，在施用本发明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料处理后发病率为26％(表1)(防治率63％)，并且秧苗长势良好，说明本发明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料能有效的抑制水稻旱育秧立枯病的发生。与CK比较，施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料后，水稻秧苗地上部干重、根系总长度分别增加了184％和77％。与F比较，施用抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料后，水稻秧苗地上部干重、根系长度分别增加了74％和42％。这些结果表明，本发明的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料除了能有效降低水稻旱育秧立枯病的发生，还能降低病原菌对水稻秧苗生长的抑制作用，显著地促进水稻秧苗的生长。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (5)

1.一种抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料的制备方法，其特征是，其步骤如下：
(1)鹤羽田戴尔福特菌的发酵
将在LB固体培养基上活化的鹤羽田戴尔福特菌菌株单菌落，在超净工作台上转接到装有10mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的容积为50mL的三角瓶中，于30℃、180rpm条件下振荡培养20h；将培养后得到的培养液接种于装有400mL牛肉膏蛋白胨培养基的容积为1000mL的三角瓶中，180rpm、30℃条件下振荡培养20h后接种于装有20L发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵条件设定为：溶氧100％，搅拌速度350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h，pH6.8-7.2；发酵到达终点后，取样检测活芽孢浓度，确保活芽孢浓度≥1.0×108cfu/mL；
(2)侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌的发酵
将在LB固体培养基上分别活化的侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌或肺炎克雷伯氏菌菌株单菌落，在超净工作台上转接到装有10mLLB液体培养基的容积为50mL的三角瓶中，于30℃、180rpm条件下振荡培养20h；将培养后得到的培养液接种于装有400mL牛肉膏蛋白胨培养基的容积为1000mL的三角瓶中，180rpm、30℃条件下振荡培养20h后接种于装有20L发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵条件设定为：溶氧100％，搅拌速度350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h，pH6.8-7.2；发酵到达终点后，取样检测活芽孢浓度，确保活芽孢浓度≥1.0×108cfu/mL；
(3)混合发酵菌液的制备
将(1)、(2)中发酵得到的鹤羽田戴尔福特菌、侧孢芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌按照体积比2:1:1:1:1混合，制得混合发酵菌液；
(4)微生物肥料的制备
将菜籽饼、大豆饼按照重量比1:1混匀作为有机物料，添加氮磷钾肥按照纯氮：纯磷：纯钾重量比为3:1:1混匀作为混合肥料，将有机物料中加入混合肥料，混匀后添加混合发酵菌液，同时添加无菌水，在发酵罐中发酵1周；发酵结束后，将发酵后的肥料与腐殖酸、草炭混匀，经对辊挤压式造粒机制备抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料，并检测微生物肥料的活芽孢、有机质和水分含量，使活芽孢含量≥1.0×108cfu/g，有机质含量≥60％，水份含量控制在8-10％之间，检验合格后包装。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述发酵培养基的配方为：大豆粉5g/L，玉米粉5g/L，酵母提取物5g/L，红糖50g/L，碳酸钙1g/L，MnSO45mg/L，pH7.0-7.2，用蒸馏水配制。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤(4)中，每kg有机物料加12-15g混合肥料；每吨有机物料添加50L混合发酵菌液；每kg有机物料添加200ml的无菌水。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤(4)中，发酵后的肥料与腐殖酸、草炭的重量比为10:1:2。
5.根据权利要求1～4任一所述的制备方法制得的抗水稻秧苗立枯病的微生物肥料。
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