CN104756754B - 一种牛樟芝子实体的栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于农业生物技术领域，公开了一种牛樟芝子实体的栽培方法，该方法选取牛樟芝野生子实体或染有牛樟芝菌的牛樟木，除杂菌后首先在培养箱中培养出一级菌种；然后将一级菌种接种到培养液中，以适宜的条件在玻璃瓶中培养出二级菌种；最后将二级菌种滴入生长栽培培养基中心，进一步培养得到牛樟芝子实体。经检测，采用本发明所提供的方法制备得到的牛樟芝子实体的各种理化指标与野生牛樟芝一致。本发明所提供的瓶栽式的牛樟芝子实体培养方法具有成本低、产量高的特点，适合于工厂化生产。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，特别涉及一种瓶栽式牛樟芝子实体的栽培方法。
背景技术
牛樟芝，又名牛樟菇，属于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌属、多年生蕈菌类，拉丁名为Antrodia camphorata，是1990年才被生化界发表、发现于台湾的食药用真菌，由于牛樟芝为台湾的特有品种，故传统中医资料中未有记载。牛樟芝的生长区域为台湾山区海拔450-2000米山林间，只生长在台湾特有百年以上的牛樟树树干腐朽之心材内壁，或枯死倒伏之牛樟树木材潮湿表面，因其采集不易，加上野生牛樟木近年已被政府列为国宝级生物之一，牛樟芝的自然资源来源日益稀有。
牛樟芝因其富含萜类化合物和多糖成份对维护人类健康及克服许多文明疾病有优异功效。目前全球医学专家纷纷投入针对牛樟芝的相关研发领域，但其研究方向多为针对液体发酵生产菌丝体产品及其生理生态、营养成分等方面，对牛樟芝的人工栽培难题一直未得到解决。随着野生牛樟芝接近绝迹，价格愈渐飙涨，而在牛樟芝的人工培育方面，直至目前未见成功的经验报道，更无工厂化生产牛樟芝子实体的实例。
鉴于牛樟芝自然来源的稀有匮乏，如能找到可对牛樟芝成功进行人工培育方法将十分有意义。我们经过十余年的研发，目前已可达到工厂化生产牛樟芝子实体的技术能力，并且总结实施了全套生产工艺。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种牛樟芝子实体的栽培方法，该方法为一种简单易行的瓶栽式培养技术，且适合于工厂化生产。
为解决上述技术问题，本发明的实施方式提供的一种牛樟芝子实体的栽培方法，包括以下步骤：
(1)一级菌种培养：取牛樟芝野生子实体或染有牛樟芝菌的牛樟木，除杂菌后放入培养箱中，在无菌状态下以温度为26℃、相对湿度为60％～90％的条件恢复培养15～20天，得到一级菌种；
(2)二级菌种培养：将上述一级菌种接种到菌种培养液中，以光照强度1klx、温度30℃、相对湿度60％的条件培养20天，培养液由白色变为红色，得到二级菌种；
(3)子实体培养：将上述二级菌种滴入生长栽培培养基中心，以光照强度1klx、温度26℃、相对湿度90％以上的条件培养60天，即得到牛樟芝子实体。
发明的实施方式将适宜牛樟芝生长的培养材料和培养条件、与驯化选优的牛樟芝菌种相结合，通过瓶栽式手段培育出牛樟芝子实体。在提供合适的控温控湿等条件下，利用本发明的实施方式所提供的栽培方法，可在室内常年进行培育、批量生产出牛樟芝子实体。利用本发明的实施方式所提供的方法，可获得完整的圆形片状牛樟芝子实体，经检测各种理化指标与野生牛樟芝一致。
本发明的实施方式所制备得到的牛樟芝子实体，其营养价值和药用价值均与野生牛樟芝无差异，但由于可实现工厂化生产，投入低、产出高，因此售价低于野生牛樟芝，在国内外有较大的潜在市场，具有很好的经济效益和社会效益。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(2)中的菌种培养液采用以下方法制备：分别称取下述质量份的马铃薯、生石灰、核酸和草木灰：马铃薯400份、生石灰8份、核酸1份和草木灰8份；将马铃薯以沸水煮20分钟、将生石灰和草木灰以沸水冲开，混合，以水定容至每1L混合液中分别含有马铃薯200克、生石灰4克、核酸0.5克和草木灰4克，然后冷却，即得到的菌种培养液。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(2)中进行二级菌种培养时，在规格为500ml的三角玻璃瓶中进行，且每个三角玻璃瓶内装有菌种培养液400ml。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(3)中的生长栽培培养基采用以下方法制备：分别称取下述质量份的马铃薯、生石灰、甘蔗粉、牛肉细粉和大米：马铃薯6份、生石灰2份、甘蔗粉1份、牛肉细粉1份和大米10份，混合均匀，即得到生长栽培培养基。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(3)中进行子实体培养时，将二级菌种滴入生长栽培培养基时的配比为：每50克所述生长栽培培养基上滴入0.3ml所述二级菌种。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(3)中进行子实体培养时，在规格为直径9cm、高9cm的圆柱形玻璃瓶中进行培养。利用该种型号的玻璃瓶进行瓶栽培养，既适合于培育出的牛樟芝子实体的形状和大小，也适合于工厂化生产中的成本控制。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(3)中进行子实体培养时，培养期的前30天为密封培养期，后30天为非密封培养期。在密封培养期，对培养瓶关闭瓶盖培养；而在非密封培养期，则打开瓶盖培养，且每天向牛樟芝子实体的培养空间喷洒雾状水以保证相对湿度、促进生长至牛樟芝子实体采收。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(3)中进行子实体培养时，每天通风1小时以上，每天光照时间9小时，以促进子实体的生长。
在本发明的实施方式所提供的牛樟芝子实体的栽培方法中，步骤(2)进行二级菌种培养时和步骤(3)进行子实体培养时，二氧化碳补偿点均为55mg/LCO2。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本申请而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本申请各权利要求所要求保护的技术方案。
实施例1
(1)一级菌种培养：
菌种购自上海农科院，经多年实验驯化培育，选择出其中适合培养的子实体，除杂菌后放入培养箱中在无菌状态下恢复培养20天，温度26℃，相对湿度60％～90％，15天后即得到一级菌种。
(2)二级菌种培养：
制备菌种培养液：称取马铃薯200克、生石灰4克、核酸0.5克、和草木灰4克，先将土豆煮以沸水20分钟过滤，将生石灰和草木灰以沸水冲开，定容至1000ml后高压灭菌30分钟，冷却后即为菌种培养液。
用500ml三角瓶装上述制备好的菌种培养液400ml，将一级菌种2克接种到菌种培养液中，在温度30℃，二氧化碳补偿点是55mg/LCO2(30℃，光照1klx左右)，相对湿度60％的环境培养箱中培养20天，看到培养液由白变为红色，即得到二级菌种。
(3)子实体培养：
制备生长栽培培养基：分别称取马铃薯600克、生石灰200克、甘蔗粉100克、牛肉细粉100克、大米1000克、合计2000克为1份，分为40份装瓶，即每瓶装生长栽培培养基50克。
将二级菌种滴入生长栽培培养基中心每瓶滴入液体0.3ml，在培养室中培养60天，即可获得圆形牛樟芝子实体。子实体培养条件为：温度26℃，相对湿度90％以上，每天9小时光照，二氧化碳补偿点是55mg/LCO2(26℃，光照1klx左右)，每天开门1小时通风。培养30天后进行开瓶盖培养，每天一次向空间喷雾状水以保证相对湿度。
本实施例所栽培得到的牛樟芝子实体呈片状、圆形，鲜活时为砖红色，每片约7克重，冻干后红褐色。每片约0.6克重，鲜品持水量86％。质量为明显菇肉状，有韧性、有樟香味、品尝时味觉明显、辛、苦。
(4)菌种检测和鉴定
经上海市食品安全工程技术研究中心检测，上述制备得到的菌种子实体，其樟芝三萜含量为2.08g/100g，樟芝多糖(中国药典2010版)含量为10.43g/100g，含有各种营养成份(如下表1所示)，显示与野生牛樟芝的相关含量一致。
此外，经上海交通大学和派森诺生物科技有限公司进行基因图谱测定，上述制备得到的菌种子实体与已知牛樟芝菌种的同源性达到99％～100％，根据分子学鉴定同源性分析，同源性在96％以上可以认为是同一种属，因此鉴定结果显示实验菌株为樟芝。
表1营养成分检测结果
本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。
Claims (6)
1.一种牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)一级菌种培养：取牛樟芝野生子实体或染有牛樟芝菌的牛樟木，除杂菌后放入培养箱中，在无菌状态下以温度为26℃、相对湿度为60％～90％的条件恢复培养15～20天，得到一级菌种；
(2)二级菌种培养：将上述一级菌种接种到培养液中，以光照强度为1klx、温度为30℃、相对湿度为60％的条件培养20天，培养液由白色变为红色，得到二级菌种；
步骤(2)中所述的菌种培养液采用以下方法制备：分别称取下述质量份的马铃薯、生石灰、核酸和草木灰：马铃薯400份、生石灰8份、核酸1份和草木灰8份；将马铃薯以沸水煮20分钟、将生石灰和草木灰以沸水冲开；混合并以水定容至每1L混合液中分别含有马铃薯200克、生石灰4克、核酸0.5克和草木灰4克，然后冷却，即得到所述的菌种培养液；
(3)子实体培养：将上述二级菌种滴入生长栽培培养基中心，以光照强度为1klx、温度为26℃、相对湿度为90％以上的条件培养60天，即得到牛樟芝子实体；
步骤(3)中所述的生长栽培培养基采用以下方法制备：分别称取下述质量份的马铃薯、生石灰、甘蔗粉、牛肉细粉和大米：马铃薯6份、生石灰2份、甘蔗粉1份、牛肉细粉1份和大米10份，混合均匀，即得到所述生长栽培培养基；
所述步骤(3)中进行子实体培养时，培养期的前30天为密封培养期，后30天为非密封培养期，且在所述非密封培养期，每天向栽培所述牛樟芝子实体的空间内喷洒雾状水。
2.根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤(2)中进行二级菌种培养时，在规格为500ml的三角玻璃瓶中进行，且每个三角玻璃瓶内装有菌种培养液400ml。
3.根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤(3)中进行子实体培养时，将二级菌种滴入生长栽培培养基时的配比为：每50克所述生长栽培培养基上滴入0.3ml所述二级菌种。
4.根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤(3)中进行子实体培养时，在规格为直径9cm、高9cm的圆柱形玻璃瓶中进行培养。
5.根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤(3)中进行子实体培养时，每天通风1小时以上，每天光照时间9小时。
6.根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤(2)进行二级菌种培养时和步骤(3)进行子实体培养时，二氧化碳补偿点均为55mg/LCO2。
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