CN102138436A - 一种富硒北冬虫夏草的培育方法 - Google Patents

一种富硒北冬虫夏草的培育方法 Download PDF

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一种富硒北冬虫夏草的培育方法，是采用有机硒酵母，避免无机亚硒酸、亚硒酸钠对菌丝生长的毒害，使培养基的含硒量达到50mg/L，从而培育出的富硒北冬虫夏草的含量达到35-50mg/L。本发明采用对北冬虫夏草生长抑制最少的有机硒酵母，使培养基的含硒量达到50mg/L，培育出的富硒北冬虫夏草含硒量达到35-50mg/kg，比添加无机硒的含硒量高2倍，产量高20％。

Description

一种富硒北冬虫夏草的培育方法
技术领域
本发明属于一种富硒北冬虫夏草的培育方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素之一，它具有防癌、抗癌、抗氧化，保护机体免受活性氧自由基的损害，保护心脏，抗肝坏死，提高免疫力，延缓衰老等多种药理作用，被誉为“抗癌之王”。现代医学研究表明，人体多种疾病如癌症、心脑血管疾病、糖尿病、高血压等都与缺硒有关。
硒在自然环境中的分布极不均匀，我国三分之二的地区处于缺硒状态，为了增进人体健康，众多科研机构和生物工程企业将无机硒通过微生物、植物、动物转化为有机硒生产出安全、无毒、便于人体吸收利用的富硒保健食品。随着人们对硒与免疫功能，心脑血管病以及防癌抗癌认识的普及，富硒保健食品的需求日益增多，为富硒保健食品的开发提供了广阔的市场。
富硒北冬虫夏草是在培养基中添加微量元素硒，通过对菌丝在生长过程中的吸收，转化，结合将无机硒转化为有机硒富集在子实体中，生产出富硒北冬虫夏草。现有技术都是在培养基中添加无机亚硒酸或亚硒酸钠，微量的亚硒酸或亚硒酸钠对北冬虫夏草菌丝的生长有促进作用，但当无机硒在培养基中达到20mg/L时菌丝生长即受到抑制，超过30mg/L菌丝不能生长，因而限制了无机硒在培养基中的添加量，使培育的北冬虫夏草含硒量一般在10-20mg/L内，未能充分体现富硒北冬虫夏草在防癌、抗癌、增强免疫力、抗衰老、防治克山病、糖尿病等的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种富硒北冬虫夏草的培育方法，是采用有机硒酵母，避免无机亚硒酸、亚硒酸钠对菌丝生长的毒害，使培养基的含硒量达到50mg/L，从而培育出的富硒北冬虫夏草的含量达到35-50mg/L。
本发明包括如下步骤：
一、试管斜面富硒菌种的培养：
1、培养基成份、配制方法
马铃薯200克，葡萄糖10-30克，蛋白陈10-20克，琼脂15-30克，磷酸二氢钾1-3克，含硒量2000mg/kg的硒酵母10-50克。
称取洗净去皮马铃薯簿片200克，加入1000毫升煮沸20分钟，过滤，取马铃薯汁放入1000毫升烧杯中，加入葡萄糖20克，琼脂20克，蛋白陈10克，磷酸二氢钾05克，硒酵母15克，水浴加热至琼脂完全溶化，加水补足1000毫升，分装在
Figure BSA00000408566400021
Figure BSA00000408566400022
试管内，每支试管装12毫升，用棉塞塞紧，在高压灭菌锅120℃保持灭菌40分钟，出锅后趁热将试管摆成培养基离棉塞5-6cm的斜面，冷却后斜面成固体状备用。
2、菌种分离、接斜面菌种
选生长粗壮圆形、色泽桔红的野生北冬虫夏草子实体或人工培育的北冬虫夏草子实体，用75％酒精灭菌1分钟，用灭菌水洗去酒精，在接种箱中将子实体切成2mm簿片接入试管培养基中间，切口向上，在20℃恒温箱中培养15天取出见光，散射光照3天转色，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草母种，放入5℃恒温箱内保存备用。
二、富硒北冬虫夏草液体菌种的培养
营养液的配方：
葡萄糖20克，蛋白陈10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，硒酵母15克，水1000毫升。
操作方法：
称取配方所列的原料放入1000毫升水中煮沸10分钟，冷却至室温后用多层纱布过滤，将清液装入500毫升盐水瓶中，每瓶装250毫升，用棉塞塞紧，放入高压灭菌锅，120℃保持灭菌30分钟，冷却至室温后连同母种放入接种箱中，用接种刀切母种一片约0.5平方厘米接入浮在液面上，放入暗室，控制温度20-22℃静置培养3天，母种长出白色菌丝，放在摇床中5天即成富硒北冬虫夏草液体菌种。
三、富硒北冬虫夏草的培育
1、固体培养基营养液的配制
称取葡萄糖20克，蛋白陈10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，维生素B1 100毫克，硒蛋白35克，放入1000毫升70-80℃热水中，搅拌至物料溶解。
2、固体培养基的配制
在600毫升大口玻璃瓶中，每瓶装入大米40克，营养液60毫升，用聚丙烯簿膜封瓶口，放入高压灭锅内，在120℃温度下保持灭菌60分钟，缓慢排放压力后出锅，冷却待用。
3、接种、培育
在超净台上用带喷咀的接种枪每瓶接入富硒北冬虫夏草液体菌种3毫升，移入暗室控制温度20-22℃发菌，经过8天避光发菌，培养基表面全部长满白色菌丝即可见光，在散射光照下3-5天菌丝转为桔黄至桔红色，控制温度20-22℃，相对湿度80-85％，10-天出现子实体原基，再经30-天的生长，子实体长到4-8厘米，形成孢子时子实体成熟即可采收，及时干燥至水份不超过5％，用塑料袋密封包装。
本发明采用对北冬虫夏草生长抑制最少的有机硒酵母，使培养基的含硒量达到50mg/L，培育出的富硒北冬虫夏草含硒量达到35-50mg/kg，比添加无机硒的含硒量高2倍，产量高20％。
具体实施方式
实施例1
在本发明中，
第一步，试管斜面富硒菌种的培养
1、称取洗净去皮马铃薯200克切成簿片，加入1000毫升煮沸20分钟，用纱布过滤，取滤液放入1000毫升烧杯中，加入琼脂20克，蛋白陈10克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.5克，含硒量2000mg/kg的硒酵母15克，水浴加热至琼脂完全溶化，加入热水补足1000毫升，分装在
Figure BSA00000408566400031
试管内，每支试管装12毫升，用棉塞塞紧，在手提高压灭菌锅120℃保持灭菌40分钟，出锅后趁热将试管摆成培养基离棉塞5-6cm的斜面，冷却后斜面成固体状备用；
2、菌种分离
选生长粗壮、色泽桔红的野生北冬虫夏草子实体或人工培育的北冬虫夏草子实体，放入烧杯中，再用75％酒精灭菌1分钟，去掉酒精，用灭菌水浸没清洗3次，去酒精，去掉清洗水备用；
3、接斜面菌种
在接种箱中将灭菌清洗过的北冬虫夏草子实体用接种刀横切成2mm簿片，接一片入试管斜面培养基中间处，切口向上，塞好棉塞，在20℃恒温箱中培养15天，移出恒温箱，保持20-22℃在室内散射光照3天让菌丝转色，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草母种，用黑色纸包好放入5℃恒温箱内保存备用。
第二步，富硒北冬虫夏草液体菌种的培养
称取葡萄糖20克，蛋白陈10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，硒酵母15克，放入1000毫升水中煮沸10分钟，冷却至室温后用多层纱布过滤，将清液装入500毫升盐水瓶中，每瓶装250毫升，用棉塞塞紧，放入手提高压灭菌锅，在120℃保持灭菌40分钟，冷却至室温后连同母种放入接种箱中，按无菌操作，先将斜面母表面的菌丝用接种刀轻轻刮掉，切取菌块的0.5平方厘米，去掉培养基，将菌块放入盐水瓶，菌丝面向上，浮在液面上，塞好棉塞，放入暗房，控制温度20-22℃静置培养3天，观察菌块表面及边沿长出白色菌丝，营养液澄明无混浊，移放在摇床培养5天即成富硒北冬虫夏草液体菌种；
第三步，富硒北冬虫夏草的培育
1、固体培养基营养液的配制
称取葡萄糖20克，蛋白陈10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，维生素B1 100毫克，硒蛋白35克，放入1000毫升70-80℃热水中，搅拌至物料溶解；
2、固体培养基的配制
在600毫升大口玻璃瓶中，每瓶装入大米40克，营养液60毫升，用聚丙烯簿膜封瓶口，放入高压灭锅内，在120℃温度下保持灭菌60分钟，待缓慢排放压力后出锅，冷却待用；
3、接种
在超净台上用带喷嘴的接种枪，每瓶接入富硒北冬虫夏草液体菌种3毫升，均匀喷在培养基面上，接种后移入无光培养室，控制温度20-22℃发菌；
4、富硒北冬虫夏草的培育
经过8-10天避光发菌，培养基表面全部长满白色菌丝，即可见光转色，在散射光照下3-5天，菌丝转为桔黄至桔红色，控制温度20-22℃，相对湿度80-85％，10天出现米粒状子实体原基并长出子实体，用2-3毫升粗的不锈钢针在瓶口簿膜上扎孔换气及吸收空间水份，控制湿度90℃，再经30天的生长，子实体长到4-8厘米，形成孢子时子实体成熟即可采收，及时干燥至水份不超过5％，放入塑料袋密封包装，每瓶可得含硒量35-50mg/kg的富硒北冬虫夏草干品4-5克。

Claims (4)

1.一种富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征是包括如下步骤：
(1)试管斜面富硒菌种的培养
a、称取洗净去皮马铃薯200-克切成簿片，加入1000-毫升煮沸20-分钟，用纱布过滤，取滤液放入1000-毫升烧杯中，加入琼脂15-30克，蛋白陈10-20克，葡萄糖10-30克，磷酸二氢钾1-3克，含硒量2000mg/k g的硒酵母10-15克，水浴加热至琼脂完全溶化，加入热水补足1000-毫升，分装在
Figure FSA00000408566300011
试管内，每支试管装12-毫升，用棉塞塞紧，在手提高压灭菌锅-120℃保持灭菌40-分钟，出锅后趁热将试管摆成培养基离棉塞5-6c m的斜面，冷却后斜面成固体状备用；
b、菌种分离
选生长粗壮、色泽桔红的野生北冬虫夏草子实体或人工培育的北冬虫夏草子实体，放入烧杯中，再用-75％酒精灭菌-1分钟，去掉酒精，用灭菌水浸没清洗3次，去酒精，去掉清洗水备用；
c、接斜面菌种
在接种箱中将灭菌清洗过的北冬虫夏草子实体用接种刀横切成-2mm簿片，接一片入试管斜面培养基中间处，切口向上，塞好棉塞，在-20℃恒温箱中培养-15天，移出恒温箱，保持20-22℃在室内散射光照-3天让菌丝转色，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草母种，用黑色纸包好放入-5℃恒温箱内保存备用。
(2)富硒北冬虫夏草液体菌种的培养
称取葡萄糖-20克，蛋白陈-10克，磷酸二氢钾-1克，硫酸镁-1克，硒酵母-15克，放入-1000毫升水中煮沸-10分钟，冷却至室温后用多层纱布过滤，将清液装入-500毫升盐水瓶中，每瓶装-250毫升，用棉塞塞紧，放入手提高压灭菌锅，在-120℃保持灭菌-40分钟，冷却至室温后连同母种放入接种箱中，按无菌操作，先将斜面母表面的菌丝用接种刀轻轻刮掉，切取菌块的-0.5平方厘米，去掉培养基，将菌块放入盐水瓶，菌丝面向上，浮在液面上，塞好棉塞，放入暗房，控制温度20-22℃静置培养-3天，观察菌块表面及边沿长出白色菌丝，营养液澄明无混浊，移放在摇床培养-5天即成富硒北冬虫夏草液体菌种；
(3)富硒北冬虫夏草的培育
a、固体培养基营养液的配制
称取葡萄糖-20克，蛋白陈-10克，磷酸二氢钾-1克，硫酸镁-1克，维生素B1-100毫克，硒蛋白35克，放入-1000毫升70-80℃热水中，搅拌至物料溶解；
b、固体培养基的配制
在-600毫升大口玻璃瓶中，每瓶装入大米-40克，营养液-60毫升，用聚丙烯簿膜封瓶口，放入高压灭锅内，在-120℃温度下保持灭菌-60分钟，待缓慢排放压力后出锅，冷却待用；
c、接种
在超净台上用带喷嘴的接种枪，每瓶接入富硒北冬虫夏草液体菌种-3毫升，均匀喷在培养基面上，接种后移入无光培养室，控制温度20-22℃发菌；
d、富硒北冬虫夏草的培育
经过8-10天避光发菌，培养基表面全部长满白色菌丝，即可见光转色，在散射光照下3-5天，菌丝转为桔黄至桔红色，控制温度20-22℃，相对湿度80-85％，-10天出现米粒状子实体原基并长出子实体，用2-3毫升粗的不锈钢针在瓶口簿膜上扎孔换气及吸收空间水份，控制湿度-90℃，再经-30天的生长，子实体长到4-8厘米，形成孢子时子实体成熟即可采收，及时干燥至水份不超过-5％，放入塑料袋密封包装。
2.据权利要求1所述的一种富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征是培养基成份、配制方法
马铃薯-200克，葡萄糖10-30克，蛋白陈10-20克，琼脂15-30克，磷酸二氢钾1-3克，含硒量-2000mg/k g的硒酵母10-50克。
3.据权利要求1所述的一种富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征是营养液的配方：
葡萄糖-20克，蛋白陈-10克，磷酸二氢钾-1克，硫酸镁-1克，硒酵母-15克，水-1000毫升。
4.据权利要求1所述的一种富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征是固体培养基营养液的配制：
称取葡萄糖-20克，蛋白陈-10克，磷酸二氢钾-1克，硫酸镁-1克，维生素B1-100毫克，硒蛋白-35克，放入-1000毫升70-80℃热水中，搅拌至物料溶解。
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