CN102845225A - 海鲜菇液体菌种发酵工艺方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，它包括以下步骤：培养试管种，将试管种转移到摇瓶中，在摇瓶中培养液体菌种，将摇瓶中的菌种接种到发酵罐中，将发酵罐中的菌种接入菌包。本发明具有菌种活力强，制种周期短、接种速度快、菌龄一致、污染率低等优点，液体菌种可以通过接种枪进行接种，实现半机械化，效率高，节省人力，适于在食用菌栽培领域推广。

Description

海鲜菇液体菌种发酵工艺方法

技术领域

本发明属于农业生物工程领域，具体的说是一种海鲜菇液体菌种发酵工艺方法。

背景技术

海鲜菇，学名［Hypsizygus marmoreus (Peck) H.E.Bigelow］，中文名：真姬菇，又名玉蕈、斑玉蕈，质地脆嫩，味道鲜美，具有海蟹味，在日本称之为“蟹味菇”、“海鲜菇”。海鲜菇营养丰富，是近年来十分具有商业潜力的食用菌品，目前多为工厂化栽培。

现阶段海鲜菇的栽培是固体菌种栽培法，在试管中的固体斜面培养基上培养好菌种之后直接从试管中接入菌包中，上述固体菌种栽培法接种时完全依靠人工，效率较低。此外，固体菌种培养过程是静止的，在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养分的壁障，养分的摄入受到阻碍，导致菌种的活力低，培养时间长，间接导致提高了成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，该方法具有培养时间短、菌种活力强、接种效率高的特点。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）培养试管种；将海鲜菇的纯菌种接种在试管中的固体斜面培养基上，于21～23℃恒温培养10～15天；

上述的固体斜面培养基由马铃薯、琼脂、葡萄糖及蒸馏水构成，马铃薯与蒸馏水的重量比为20%，琼脂与蒸馏水的重量比为1.5～2.0%，葡萄糖与蒸馏水的重量比为2%，PH自然；

（2）将试管种转移到摇瓶中；用接种钩和接种铲将试管中固体培养基上的菌种划分为小块，在无菌操作下将试管中的菌种接种到摇瓶中的液体培养基上，每个摇瓶中接种6～8块；

上述的液体培养基由马铃薯、麸皮、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁及蒸馏水构成，马铃薯与蒸馏水的重量比为20%，麸皮与蒸馏水的重量比为1.5～2.0%，葡萄糖与蒸馏水的重量比为2%，蛋白胨与蒸馏水的重量比为0.05～0.07%，磷酸二氢钾与蒸馏水的重量比为0.2%，硫酸镁与蒸馏水的重量比为0.05%，并根据液体培养基体积总量按照10毫克/升的含量添加入维生素B1，PH自然；

（3）在摇瓶中培养液体菌种；摇瓶中的菌种在21～23℃静止培养3～4天后，观察长势和有没有污染杂菌，确定没有染菌后放置于摇床上，摇床为旋转式摇床，摇床的转速为120～140转/分；然后摇瓶中的菌种于摇床上21～23℃恒温培养3～4天；

（4）将摇瓶中的菌种接种到发酵罐中；按照菌种与发酵罐的体积比为10%将菌种接种到发酵罐中，发酵罐的内压为正压且内压小于0.02兆帕，菌种在发酵罐中于21～23℃恒温培养4～6天；

（5）将发酵罐中的菌种接入菌包；每一个菌包接入菌种的量为15～25毫升，终止发酵。

所述的固体斜面培养基的制作方法如下：

1）将马铃薯洗净去皮，已发芽的要挖掉芽眼，按量称取后切成薄片，置于铝锅加水煮沸30分钟，用4～6层纱布过滤取汁，加入按照重量比称取的蒸馏水；琼脂按量称取，剪碎后加入马铃薯汁液内，微火加热，不时搅拌直至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮3～6分钟，其液汁装入试管；

2）趁热分装入试管，装量为试管长度的1/4～1/5，紧塞棉塞，分装时应注意不使培养基黏附在试管口上，以免杂菌感染；

3）及时高压灭菌，灭菌时将试管每7～10支扎成一捆，棉塞一端用牛皮纸包好，直立放入高压锅内进行蒸汽灭菌，当压力达0.05兆帕时，打开排气阀，使压力降至“0”，继续加热，在0.110兆帕的压力下保持30～35分钟，待压力表自动降到“0”时再打开锅盖，取出试管按照下述操作趁热摆斜面；

4）试管取出后趁热将试管口一端垫高，斜靠在桌上的小木棒上，使试管内培养液斜面长度达试管长度的2/3～3/5，试管上面覆盖毛巾，冷却后即成斜面固体培养基；

5）灭菌后置常温下48小时，未发现有杂菌产生，即可接种。

试管中固体培养基上的菌种划分为小块的体积大小为0.3立方厘米。

所述的液体培养基制作方法如下：

1）将马铃薯洗净去皮，已发芽的要挖掉芽眼，按量称取后切成薄片；麸皮选用新鲜无霉变的大麸，按量称取后与马铃薯同煮，煮沸后文火维持20～30分钟，用4～6层纱布过滤取汁，加入按照重量比称取的蒸馏水和其他原料煮沸然后分装；

2）分装入摇瓶，容量为1000毫升的摇瓶每瓶装入500～600毫升，瓶口用棉塞、牛皮纸密封；

3）及时高压灭菌，直立放入高压锅内进行蒸汽灭菌，在0.12～0.14兆帕的压力下保持40分钟，高压锅排两次冷气，冷却压力降到0.03兆帕时缓慢把高压锅内的压力排尽；

4）冷却后即成液体培养基。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、菌种活力强。液体培养基在通气或在振荡的条件下，可消除固体菌种在静止条件下形成的壁障，从而消除了菌种吸收养分的障碍，且增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高生产量；仅培养4～6天的菌丝体，正值生长旺盛期，生活力强，接种后，菌丝恢复生长快，发菌时间短，菌丝健壮。液体菌种发满菌的时间为29～33天，固体菌种40天左右。

2、制种周期短。固体菌种制种周期需70～95天，而液体菌种制种周期为24～35天，缩短了一半以上。

3、接种速度快。固体菌种接种时完全依靠人工，接种速度为125～150包/人/小时；而液体菌种接种时可采用接种枪，实现了半机械化，接种速度能够达到400包/人/小时，效率高，节省人力，从而节约了生产成本。

4、菌龄一致。固体菌种，瓶或袋上下部的菌龄差异很大，瓶底前端的菌丝正处于萌动阶段，而上层表面的菌丝已接近老化程度，上下部菌丝的菌龄相差20～30天。液体菌种因含有许多小的菌丝球和菌丝片段，可以形成许多生长中心，多点同步增殖，菌丝体生长发育比较整齐、均匀，菌龄比较一致。

5、污染率低。液体接种各环节无菌条件可控，从而减少了人为因素造成的污染；此外，液体接种方式速度快，使菌包敞口时间缩短，大大缩短了外界空气与物料的接触时间，从而减少了污染机率。固体接种污染率在5～15%，液体接种污染率可控制在1‰以内。

具体实施方式

海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，包括以下步骤：

（1）培养试管种；将海鲜菇的纯菌种接种在试管中的固体斜面培养基上，于23℃恒温培养14天；

上述的固体斜面培养基的配方是马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，蒸馏水1000克，PH自然；

所述的固体斜面培养基的制作方法如下：

1）将马铃薯洗净去皮，已发芽的要挖掉芽眼，称取200克切成薄片，置于铝锅加水煮沸30分钟，用6层纱布过滤取汁，补足蒸馏水1000克；琼脂20克，剪碎后加入马铃薯汁液内，微火加热，不时搅拌直至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮4分钟，其液汁装入试管；

2）趁热分装入试管，装量为试管长度的1/4，紧塞棉塞，分装时应注意不使培养基黏附在试管口上，以免杂菌感染；

3）及时高压灭菌，灭菌时将试管每7支扎成一捆，棉塞一端用牛皮纸包好，直立放入高压锅内进行蒸汽灭菌，当压力达0.05兆帕时，打开排气阀，使压力降至“0”，继续加热，在0.110兆帕的压力下保持33分钟，待压力表自动降到“0”时再打开锅盖，取出试管趁热按照下述操作摆斜面；

4）试管取出后趁热将试管口一端垫高，斜靠在桌上的小木棒上，使试管内培养液斜面长度达试管长度的2/3，试管上面覆盖毛巾，冷却后即成斜面固体培养基；

5）灭菌后置常温下48小时，未发现有杂菌产生，即可接种。

（2）将试管种转移到摇瓶中；用接种钩和接种铲将试管中固体培养基上的菌种划分为体积为0.3立方厘米的小块，在无菌操作下将试管中的菌种接种到摇瓶中的液体培养基上，每个摇瓶中接种7块；

上述的液体培养基的配方是马铃薯200克，麸皮20克，葡萄糖20克，蛋白胨0.6克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，蒸馏水1000克，并根据液体培养基体积总量按照10毫克/升的含量添加入维生素B1，PH自然；

所述的液体培养基制作方法如下：

1）将马铃薯洗净去皮，已发芽的要挖掉芽眼，称取200克切成薄片；麸皮选用新鲜无霉变的大麸，称取20克与马铃薯同煮，煮沸后文火维持25分钟，用6层纱布过滤取汁，补足蒸馏水1000克和其他原料煮沸，添加入维生素B1，然后分装；

2）分装入摇瓶，容量为1000毫升的摇瓶每瓶装入500～600毫升，瓶口用棉塞、牛皮纸密封；

3）及时高压灭菌，直立放入高压锅内进行蒸汽灭菌，在0.13兆帕的压力下保持40分钟，高压锅排两次冷气，冷却压力降到0.03兆帕时缓慢把高压锅内的压力排尽；

4）冷却后即成液体培养基。

（3）在摇瓶中培养液体菌种；摇瓶中的菌种在23℃静止培养3天后，观察长势和有没有污染杂菌，确定没有染菌后放置于摇床上，摇床为旋转式摇床，摇床的转速为130转/分；然后摇瓶中的菌种于摇床上23℃恒温培养4天；

（4）将摇瓶中的菌种接种到发酵罐中；按照菌种与发酵罐的体积比为10%将菌种接种到发酵罐中，发酵罐的内压为0.015兆帕，菌种在发酵罐中于23℃恒温培养5天；

（5）将发酵罐中的菌种接入菌包；每一个菌包内接入菌种的量为20毫升，终止发酵。

Claims (4)

1.海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）培养试管种；将海鲜菇的纯菌种接种在试管中的固体斜面培养基上，于21～23℃恒温培养10～15天；

上述的固体斜面培养基由马铃薯、琼脂、葡萄糖及蒸馏水构成，马铃薯与蒸馏水的重量比为20%，琼脂与蒸馏水的重量比为1.5～2.0%，葡萄糖与蒸馏水的重量比为2%，PH自然；

（2）将试管种转移到摇瓶中；用接种钩和接种铲将试管中固体培养基上的菌种划分为小块，在无菌操作下将试管中的菌种接种到摇瓶中的液体培养基上，每个摇瓶中接种6～8块；

上述的液体培养基由马铃薯、麸皮、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁及蒸馏水构成，马铃薯与蒸馏水的重量比为20%，麸皮与蒸馏水的重量比为1.5～2.0%，葡萄糖与蒸馏水的重量比为2%，蛋白胨与蒸馏水的重量比为0.05～0.07%，磷酸二氢钾与蒸馏水的重量比为0.2%，硫酸镁与蒸馏水的重量比为0.05%，并根据液体培养基体积总量按照10毫克/升的含量添加入维生素B1，PH自然；

（3）在摇瓶中培养液体菌种；摇瓶中的菌种在21～23℃静止培养3～4天后，观察长势和有没有污染杂菌，确定没有染菌后放置于摇床上，摇床为旋转式摇床，摇床的转速为120～140转/分；然后摇瓶中的菌种于摇床上21～23℃恒温培养3～4天；

（4）将摇瓶中的菌种接种到发酵罐中；按照菌种与发酵罐的体积比为10%将菌种接种到发酵罐中，发酵罐的内压为正压且内压小于0.02兆帕，菌种在发酵罐中于21～23℃恒温培养4～6天；

（5）将发酵罐中的菌种接入菌包；每一个菌包接入菌种的量为15～25毫升，终止发酵。

2.根据权利要求1所述的海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，其特征是，所述的固体斜面培养基的制作方法如下：

1）将马铃薯洗净去皮，已发芽的要挖掉芽眼，按量称取后切成薄片，置于铝锅加水煮沸30分钟，用4～6层纱布过滤取汁，加入按照重量比称取的蒸馏水；琼脂按量称取，剪碎后加入马铃薯汁液内，微火加热，不时搅拌直至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮3～6分钟，其液汁装入试管；

2）趁热分装入试管，装量为试管长度的1/4～1/5，紧塞棉塞，分装时应注意不使培养基黏附在试管口上，以免杂菌感染；

3）及时高压灭菌，灭菌时将试管每7～10支扎成一捆，棉塞一端用牛皮纸包好，直立放入高压锅内进行蒸汽灭菌，当压力达0.05兆帕时，打开排气阀，使压力降至“0”，继续加热，在0.110兆帕的压力下保持30～35分钟，待压力表自动降到“0”时再打开锅盖，取出试管按照下述操作趁热摆斜面；

4）试管取出后趁热将试管口一端垫高，斜靠在桌上的小木棒上，使试管内培养液斜面长度达试管长度的2/3～3/5，试管上面覆盖毛巾，冷却后即成斜面固体培养基；

5）灭菌后置常温下48小时，未发现有杂菌产生，即可接种。

3.根据权利要求1所述的海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，其特征是，试管中固体培养基上的菌种划分为小块的体积大小为0.3立方厘米。

4.根据权利要求1所述的海鲜菇液体菌种发酵工艺方法，其特征是，所述的液体培养基制作方法如下：

1）将马铃薯洗净去皮，已发芽的要挖掉芽眼，按量称取后切成薄片；麸皮选用新鲜无霉变的大麸，按量称取后与马铃薯同煮，煮沸后文火维持20～30分钟，用4～6层纱布过滤取汁，加入按照重量比称取的蒸馏水和其他原料煮沸然后分装；

2）分装入摇瓶，容量为1000毫升的摇瓶每瓶装入500～600毫升，瓶口用棉塞、牛皮纸密封；

3）及时高压灭菌，直立放入高压锅内进行蒸汽灭菌，在0.12～0.14兆帕的压力下保持40分钟，高压锅排两次冷气，冷却压力降到0.03兆帕时缓慢把高压锅内的压力排尽；

4）冷却后即成液体培养基。