CN105875198B - 一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，利用小麦代替常规的马铃薯制备固体、液体菌种培养基，并在所有采用的培养基中均加入鱼粉、虾米粉来满足蛹虫草生长过程中所需的碳源、氮源、维生素及各种矿质元素，以提高菌种稳定性。将母种扩繁接种至制备好的斜面培养基培养；之后选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中培养制备液体菌种；最后将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养。通过上述技术方案，本发明提供的蛹虫草的培养方法能够提高菌种稳定性，保持其优良性状得以延续，菌种使用期限约为普通培养方法的5倍。
Description
技术领域
本发明涉及蛹虫草生产领域，具体涉及一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法。
背景技术
蛹虫草为子囊菌门，肉座目，虫草菌科，学名为Cordyceps militaris，又名北冬虫夏草、北虫草等，与冬虫夏草同属，世界性分布，天然资源数量很少。蛹虫草含有多种与冬虫夏草相同的生物活性物质，包括虫草素、腺苷等核苷类物质、还包括虫草多糖、SOD（超氧化物歧化酶）及氨基酸等，而其中最主要的活性成分为虫草素，研究表明虫草素具有调节免疫、抗肿瘤、抗真菌、抗白血病、降血脂等多种药理活性。近年来，由于冬虫夏草资源严重匮乏，蛹虫草已渐渐在医疗保健领域成为冬虫夏草的替代品，以满足市场需求。
目前蛹虫草已进入规模化生产阶段，其人工培养技术已经相当成熟，但其仍面临着一个巨大的问题是菌种不稳定，极易退化，在周年生产的情况下，一株菌种最多使用半年，产量就会严重下降，这就大大影响了蛹虫草的产量。菌种退化是食用菌使用过程中普遍存在的现象，其中菌种退化的一个重要原因就是营养缺乏，优良菌株的生产性能是和培养条件紧密相关的，若培养条件不佳，如培养基中缺乏某些元素，会导致菌种生长速度减慢、性能衰退，也会引起子实体生长速度减慢、产量降低等，因此为蛹虫草生长提供丰富的适宜比例的营养成分及培养方法就成为关键，目前就关于蛹虫草栽培培养基配制成分有很多，包括麦麸、小米、蛋氨酸、赖氨酸等，未发现有用小麦煮汁、添加鱼粉、虾米粉的制备培养基进行提高蛹虫草菌种稳定性的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，克服现有蛹虫草栽培中菌种不稳定、极易退化的技术难点，提供丰富且适当比例的营养成分来提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，既能保证蛹虫草的产量和质量的稳定性，又能缩短生长周期，提高蛹虫草生产稳定性。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，所述的方法包括如下：
（1）选取菌丝生长健壮的母种扩繁接种至制备好的试管斜面培养基；
（2）接种完成后，置于恒温箱中22-24℃下进行黑暗培养1-3天，之后在18-22℃下每日光照7-9小时培养2-4天，最后在16-20℃下每日光照15-18小时培养2-4天，即得栽培种；
（3）选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中制备液体菌种；
（4）接种完成后，置于18-22℃下静置培养1-2天，之后在摇床上进行振荡培养，120-180r/min、20-25℃下培养2-4天，最后在18-22℃下、100-120r/min条件下培养两天，即得液体菌种；
（5）将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养，栽培35-40天时即进行采摘，采摘前一周选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基、液体培养基中进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用。
所述的斜面培养基配方：180-220g/L小麦汁、葡萄糖18-22g/L、琼脂18-22g/L、硫酸镁0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、维生素B 0.05-0.15g/L、虾米粉3-7g/L、鱼粉3-7g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至试管，121℃下灭菌30min，取出搁斜面，冷却后储存备用。
所述的液体培养基配方： 180-220g/L小麦汁、葡萄糖18-22g/L、硫酸镁0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、维生素B 0.05-0.15g/L、虾米粉3-7g/L、鱼粉3-7g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至三角瓶，121℃下灭菌30min，冷却备用。
大米培养基配方为大米25-35g,营养液40-45ml，所述营养液配方：蔗糖18-22g/L、蛋白胨8-12g/L、硫酸镁0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾1-3g/L,维生素B 0.05-0.15g/L、鱼粉3-7g/L、虾米粉3-7g/L。
本发明主要是提供一种蛹虫草菌种培养方法，通过提供的培养基培养的菌丝健壮、不易断裂、活力高、生长速度快，子实体粗细均匀、整齐、颜色鲜亮，反复周年使用的情况下，菌种可使用的时间为普通培养的5倍左右。
本发明的优点在于：在固体培养完成后，菌丝基本覆盖整个斜面，短小、浓密、呈橙黄色，显微镜下观察菌丝粗壮，不易断裂，与母种菌丝显微结构极为相似；液体菌种培养完成后，菌丝球密度大，细小的微粒，不需要进行切碎，均匀分布在培养基内，对液体菌种进行处理，观察显微结构，发现菌丝形态结构与母种极为相似；且经过此方法培养的菌株，液体菌丝球细小、密度大，可以稀释8-10倍进行接种，一定程度上节约了菌种制备成本，同样一支试管菌种利用率提高2倍左右；蛹虫草一直保持着生长速度快、整齐、子实体产量多、颜色鲜艳的特征。本发明不但能大大增强菌种的生产能力，还降低生产成本，获得菌种不仅保证了生产的稳定性，还缩短了蛹虫草的生产周期，符合规模化生产需求。
具体实施方式
实施例1
（1）选取菌丝生长健壮的母种扩繁接种至制备好的试管斜面培养基；
（2）接种完成后，置于恒温箱中22℃下进行黑暗培养2天，之后在20℃下每日光照8小时培养3天，最后在18℃下每日光照16小时培养3天，即得栽培种；
（3）选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中制备液体菌种；
（4）接种完成后，置于20℃下静置培养1天，之后在摇床上进行振荡培养，150r/min、22℃下培养3天，最后在20℃下、110r/min条件下培养两天，即得液体菌种；
（5）将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养，栽培35天时即进行采摘，采摘前一周选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基、液体培养基中进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用。
所述的斜面培养基配方：200g/L小麦汁、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、硫酸镁1g/L、磷酸二氢钾2g/L、维生素B 0.1g/L、虾米粉5g/L、鱼粉5g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至试管，121℃下灭菌30min，取出搁斜面，冷却后储存备用。
所述的液体培养基配方： 200g/L小麦汁、葡萄糖20g/L、硫酸镁1g/L、磷酸二氢钾2g/L、维生素B 0.1g/L、虾米粉5g/L、鱼粉5g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至三角瓶，121℃下灭菌30min，冷却备用。
大米培养基配方为大米30g,营养液42ml，所述营养液配方：蔗糖20g/L、蛋白胨10g/L、硫酸镁1g/L、磷酸二氢钾2g/L,维生素B 0.1g/L、鱼粉5g/L、虾米粉5g/L。
接种大米培养基，放入栽培室进行常规培养，35天后进行采摘，28天时选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用，菌种可使用时间是普通培养的5.0-5.4倍。
实施例2
一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，所述的方法包括如下：
（1）选取菌丝生长健壮的母种扩繁接种至制备好的试管斜面培养基；
（2）接种完成后，置于恒温箱中22℃下进行黑暗培养1天，之后在18℃下每日光照7小时培养2天，最后在16℃下每日光照15小时培养2天，即得栽培种；
（3）选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中制备液体菌种；
（4）接种完成后，置于18℃下静置培养1天，之后在摇床上进行振荡培养，120r/min、20℃下培养2天，最后在18℃下、100r/min条件下培养两天，即得液体菌种；
（5）将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养，栽培37天时即进行采摘，采摘前一周选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基、液体培养基中进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用。
所述的斜面培养基配方：180g/L小麦汁、葡萄糖18g/L、琼脂18g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、维生素B 0.05g/L、虾米粉3g/L、鱼粉3g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至试管，121℃下灭菌30min，取出搁斜面，冷却后储存备用。
所述的液体培养基配方： 180g/L小麦汁、葡萄糖18g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、维生素B 0.05g/L、虾米粉3g/L、鱼粉3g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至三角瓶，121℃下灭菌30min，冷却备用。
大米培养基配方为大米25g,营养液40ml，所述营养液配方：蔗糖18g/L、蛋白胨8g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1g/L,维生素B 0.05g/L、鱼粉3g/L、虾米粉3g/L。
接种大米培养基，放入栽培室进行常规培养，37天后进行采摘，30天时选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用，菌种可使用的时间是普通培养方法的4.1-4.6倍。
实施例3
一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，所述的方法包括如下：
（1）选取菌丝生长健壮的母种扩繁接种至制备好的试管斜面培养基；
（2）接种完成后，置于恒温箱中24℃下进行黑暗培养3天，之后在22℃下每日光照9小时培养4天，最后在20℃下每日光照18小时培养4天，即得栽培种；
（3）选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中制备液体菌种；
（4）接种完成后，置于22℃下静置培养2天，之后在摇床上进行振荡培养， 180r/min、25℃下培养4天，最后在22℃下、120r/min条件下培养两天，即得液体菌种；
（5）将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养，栽培40天时即进行采摘，采摘前一周选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基、液体培养基中进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用。
所述的斜面培养基配方： 220g/L小麦汁、葡萄糖22g/L、琼脂22g/L、硫酸镁1.5g/L、磷酸二氢钾3g/L、维生素B 0.15g/L、虾米粉7g/L、鱼粉7g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至试管，121℃下灭菌30min，取出搁斜面，冷却后储存备用。
所述的液体培养基配方： 220g/L小麦汁、葡萄糖22g/L、硫酸镁1.5g/L、磷酸二氢钾3g/L、维生素B 0.15g/L、虾米粉7g/L、鱼粉7g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至三角瓶，121℃下灭菌30min，冷却备用。
大米培养基配方为大米35g,营养液45ml，所述营养液配方：蔗糖22g/L、蛋白胨12g/L、硫酸镁1.5g/L、磷酸二氢钾3g/L,维生素B 0.15g/L、鱼粉7g/L、虾米粉7g/L。
接种大米培养基，放入栽培室进行常规培养，40天后进行采摘，32天时选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述斜面培养基进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用，菌种可使用时间是普通培养的4.5-4.9倍。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (2)
1.一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，其特征在于：所述的方法包括如下：
（1）选取菌丝生长健壮的母种扩繁接种至制备好的试管斜面培养基；
（2）接种完成后，置于恒温箱中22-24℃下进行黑暗培养1-3天，之后在18-22℃下每日光照7-9小时培养2-4天，最后在16-20℃下每日光照15-18小时培养2-4天，即得栽培种；
（3）选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中制备液体菌种；
（4）接种完成后，置于18-22℃下静置培养1-2天，之后在摇床上进行振荡培养，120-180r/min、20-25℃下培养2-4天，最后在18-22℃下、100-120r/min条件下培养两天，即得液体菌种；
（5）将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养，栽培35-40天时即进行采摘，采摘前一周选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述试管斜面培养基、液体培养基进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用；
所述的试管斜面培养基配方：180-220g/L小麦汁、葡萄糖18-22g/L、琼脂18-22g/L、硫酸镁0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、维生素B 0.05-0.15g/L、虾米粉3-7g/L、鱼粉3-7g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至试管，121℃下灭菌30min，取出搁斜面，冷却后储存备用；
所述的液体培养基配方： 180-220g/L小麦汁、葡萄糖18-22g/L、硫酸镁0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、维生素B 0.05-0.15g/L、虾米粉3-7g/L、鱼粉3-7g/L；培养基制备：小麦煮汁40min,八层纱布过滤，取汁，加入其余物质，蒸馏水定容至1000ml，分装至三角瓶，121℃下灭菌30min，冷却备用；
大米培养基配方为大米25-35g,营养液40-45ml，所述营养液配方：蔗糖18-22g/L、蛋白胨8-12g/L、硫酸镁0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾1-3g/L,维生素B 0.05-0.15g/L、鱼粉3-7g/L、虾米粉3-7g/L。
2.根据权利要求1所述的一种提高蛹虫草菌种稳定性的培养方法，其特征在于：所述的方法包括如下：
（1）选取菌丝生长健壮的母种扩繁接种至制备好的试管斜面培养基；
（2）接种完成后，置于恒温箱中22℃下进行黑暗培养2天，之后在20℃下每日光照8小时培养3天，最后在18℃下每日光照16小时培养3天，即得栽培种；
（3）选取菌丝生长健壮的栽培种接种到液体培养基中制备液体菌种；
（4）接种完成后，置于20℃下静置培养1天，之后在摇床上进行振荡培养，150r/min、22℃下培养3天，最后在20℃下、110r/min条件下培养两天，即得液体菌种；
（5）将液体菌种接种到大米培养基中，放入栽培室进行常规培养，栽培35天时即进行采摘，采摘前一周选择幼嫩的子实体进行菌种分离，利用上述试管斜面培养基、液体培养基进行培养，再次进行栽培，如此循环周年使用。
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