CN105165401A

CN105165401A - 一种北虫草液体菌种稳定技术

Info

Publication number: CN105165401A
Application number: CN201510606844.5A
Authority: CN
Inventors: 刘晓红
Original assignee: Eastern Liaoning University
Current assignee: Eastern Liaoning University
Priority date: 2015-09-12
Filing date: 2015-09-12
Publication date: 2015-12-23

Abstract

本发明公开了一种北虫草液体菌种稳定技术，包括由取玉米芯60～110份，木屑30～40份、葡萄糖11～15份，蛋白胨3～5份，琼脂7～13份，松针营养液90～196份、硫酸镁0.3～0.7份、磷酸二氢钾0.3～0.7份、氨基酸螯合锰0.2～0.3份、一水硫酸锌0.2～0.3份混合所得的扩种培养基培育步骤；由麦芽糖，蛋白胨，MnSO4粉末、CuSO₄粉末、ZnSO4粉末、NiSO4粉末、(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末混合所得的固体培养基培育步骤；以及由马铃薯渣、红薯藤、酵母膏、蛋氨酸锰和硒蛋氨酸混合所得培养基的培养步骤。本发明所制备的产品虫草素含量不低于0.2％，而且含量稳定。

Description

一种北虫草液体菌种稳定技术

技术领域

本发明涉及真菌子实体的栽培领域，具体涉及一种北虫草液体菌种稳定技术。

背景技术

蛹虫草又名北冬虫夏草，属于子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属。我国从20世纪80年代开始研究人工蛹虫草栽培技术，目前已形成常规的栽培工艺，并进入产业化阶段。蛹虫草作为一个新型的产业正在兴起，但普通的栽培者多注重栽培产量，忽视了产品功能的重要性，对其有效成分特别是虫草素含量稳定提高方面研究甚少。近年来，国内外医学专家学者对虫草素进行了深入的研究，对其重要性和深远意义已达成共识。也有不少虫草工作者对在生产中如何提高虫草素的含量作了诸多的研究和探讨，但至今没有一个稳定含量的标准，总是在或高或低甚至在有或无之间徘徊。卫生部新资源食品公告中也只规定了腺苷和多糖的标准，未规定虫草素含量的限度。如何在栽培工艺中探索虫草素提高和稳定的有效方法，是保证蛹虫草产业化健康发展的一个重要课题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种北虫草液体菌种稳定技术。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种北虫草液体菌种稳定技术，包括如下步骤：

S1、取玉米芯60～110份，木屑30～40份、葡萄糖11～15份，蛋白胨3～5份，琼脂7～13份，松针营养液90～196份、硫酸镁0.3～0.7份、磷酸二氢钾0.3～0.7份、氨基酸螯合锰0.2～0.3份、一水硫酸锌0.2～0.3份混合后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种虫草的菌丝体，在20℃～25℃的培养箱中，避光培养3～4天，降温至20℃培养4～5天，然后在18～22℃自然光照24小时；

S2、按组分含量称取麦芽糖20～24g/L，蛋白胨30～34g/L，MnSO₄粉末0.1～0.4g/L、CuSO₄粉末0.02～0.1g/L、ZnSO₄粉末0.1～0.2g/L、NiSO₄粉末0.2～0.4g/L、(NH₄)₆Mo₇O₂₄.4H₂O粉末0.2～0.4g/L，混合后，灭菌，按体积比为该液体培养基的50～60％的量，接种步骤S1所得的菌丝体，在20～24℃，180r/min的旋转式摇床上液态培养1～1.5d，得培养液；

S3、取马铃薯渣260～400份、红薯藤520～800份完全浸湿，搅拌均匀后，取5～11份混合菌液稀释2～5倍后喷入原料中并混匀；同时按1.3～2.2L/m³用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4～5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4～5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在70％～80％；

S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料400～600克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至100～105℃，保温20～25min；然后将温度上升至110～115℃，保温60～70min；再将温度升至120～125℃，在压力为0.13～0.14MPa的情况下保温60～70min，最后再闷置30～35min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，加入酵母膏9～15份、蛋氨酸锰2～3份、硒蛋氨酸2～3份混合均匀后装瓶，无菌条件下接种步骤S2所得的培养液，放入培养暗室18～23℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在15～22℃，昼夜温差控制在5～8℃，每天给予500～1000lx散射光，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。

其中，混合菌液由白腐菌、磺酸菌、向病菌混合而成。

其中，所述白腐菌、磺酸菌、向病菌的比例为1∶2∶1。

其中，所述松针营养液的制备方法为：取生长六年以上的干油松松针，加9～11倍量水煮沸1.5～2小时，取滤液，加水补足至初始液体量，加入16～24％蚕蛹粉后混合即得。

本发明具有以下有益效果：

所制备的产品虫草素含量不低于0.2％，而且含量稳定。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下实施例中，所使用的混合菌液由白腐菌、磺酸菌、向病菌按1∶2∶1的重量比混合而成，松针营养液的制备方法为：取生长六年以上的干油松松针，加9～11倍量水煮沸1.5～2小时，取滤液，加水补足至初始液体量，加入16～24％蚕蛹粉后混合即得。磺酸菌采样来自于腐烂的树木；向病菌采样来自于向日葵病株；白腐菌采样来自于腐烂树木；磺酸菌：该菌种在生长过程中产生的次级代谢产物为磺酸，磺酸对木质纤维素降解起一定作用，因此命名为磺酸菌。向病菌：在向日葵茎中发现，该菌可以使向日葵弯折，降解向日葵茎中的木质纤维素，因此命名为向病菌。

实施例1

S1、取玉米芯60份，木屑30份、葡萄糖11份，蛋白胨3份，琼脂7份，松针营养液90份、硫酸镁0.3份、磷酸二氢钾0.3份、氨基酸螯合锰0.2份、一水硫酸锌0.2份混合后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种虫草的菌丝体，在20℃的培养箱中，避光培养3天，降温至20℃培养4天，然后在18自然光照24小时；

S2、按组分含量称取麦芽糖20g/L，蛋白胨30g/L，MnSO4粉末0.1g/L、CuSO₄粉末0.02g/L、ZnSO4粉末0.1g/L、NiSO4粉末0.2g/L、(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末0.2g/L，混合后，灭菌，按体积比为该液体培养基的50％的量，接种步骤S1所得的菌丝体，在20℃，180r/min的旋转式摇床上液态培养1d，得培养液；

S3、取马铃薯渣260份、红薯藤520份完全浸湿，搅拌均匀后，取5份混合菌液稀释2倍后喷入原料中并混匀；同时按1.3L/m³用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在70％；

S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料400克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至100℃，保温20min；然后将温度上升至110℃，保温60min；再将温度升至120℃，在压力为0.13MPa的情况下保温60min，最后再闷置30min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，加入酵母膏9份、蛋氨酸锰2份、硒蛋氨酸2份混合均匀后装瓶，无菌条件下接种步骤S2所得的培养液，放入培养暗室18℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在15℃，昼夜温差控制在5℃，每天给予500lx散射光，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。

实施例2

S1、取玉米芯110份，木屑40份、葡萄糖15份，蛋白胨5份，琼脂13份，松针营养液196份、硫酸镁0.7份、磷酸二氢钾0.7份、氨基酸螯合锰0.3份、一水硫酸锌0.3份混合后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种虫草的菌丝体，在25℃的培养箱中，避光培养4天，降温至20℃培养5天，然后在22℃自然光照24小时；

S2、按组分含量称取麦芽糖24g/L，蛋白胨34g/L，MnSO4粉末0.4g/L、CuSO₄粉末0.1g/L、ZnSO4粉末0.2g/L、NiSO4粉末0.4g/L、(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末0.4g/L，混合后，灭菌，按体积比为该液体培养基的60％的量，接种步骤S1所得的菌丝体，在24℃，180r/min的旋转式摇床上液态培养1.5d，得培养液；

S3、取马铃薯渣400份、红薯藤800份完全浸湿，搅拌均匀后，取11份混合菌液稀释5倍后喷入原料中并混匀；同时按2.2L/m³用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在80％；

S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料600克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至105℃，保温25min；然后将温度上升至115℃，保温70min；再将温度升至125℃，在压力为0.14MPa的情况下保温70min，最后再闷置35min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，加入酵母膏15份、蛋氨酸锰3份、硒蛋氨酸3份混合均匀后装瓶，无菌条件下接种步骤S2所得的培养液，放入培养暗室23℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在22℃，昼夜温差控制在8℃，每天给予1000lx散射光，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。

实施例3

S1、取玉米芯85份，木屑35份、葡萄糖13份，蛋白胨4份，琼脂10份，松针营养液143份、硫酸镁0.5份、磷酸二氢钾0.5份、氨基酸螯合锰0.25份、一水硫酸锌0.25份混合后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种虫草的菌丝体，在22.5℃的培养箱中，避光培养3.5天，降温至20℃培养4.5天，然后在20℃自然光照24小时；

S2、按组分含量称取麦芽糖22g/L，蛋白胨32g/L，MnSO4粉末0.25g/L、CuSO₄粉末0.06g/L、ZnSO4粉末0.15g/L、NiSO4粉末0.3g/L、(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末0.3g/L，混合后，灭菌，按体积比为该液体培养基的55％的量，接种步骤S1所得的菌丝体，在22℃，180r/min的旋转式摇床上液态培养1.25d，得培养液；

S3、取马铃薯渣330份、红薯藤660份完全浸湿，搅拌均匀后，取8份混合菌液稀释3.5倍后喷入原料中并混匀；同时按1.75L/m³用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4.5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4.5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在75％；

S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料500克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至102.5℃，保温22.5min；然后将温度上升至112.5℃，保温65min；再将温度升至122.5℃，在压力为0.135MPa的情况下保温65min，最后再闷置32.5min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，加入酵母膏12份、蛋氨酸锰2.5份、硒蛋氨酸2.5份混合均匀后装瓶，无菌条件下接种步骤S2所得的培养液，放入培养暗室20.5℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在18.5℃，昼夜温差控制在6.5℃，每天给予750lx散射光，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种北虫草液体菌种稳定技术，其特征在于，包括如下步骤：

S2、按组分含量称取MnSO₄粉末0.1～0.4g/L、CuSO₄粉末0.02～0.1g/L、ZnSO₄粉末0.1～0.2g/L、NiSO₄粉末0.2～0.4g/L、(NH₄)₆Mo₇O₂₄.4H₂O粉末0.2～0.4g/L，混合后，灭菌，按体积比为该液体培养基的50～60％的量，接种步骤S1所得的菌丝体，在20～24℃，180r/min的旋转式摇床上液态培养1～1.5d，得培养液；

2.根据权利要求1所述的一种北虫草液体菌种稳定技术，其特征在于，混合菌液由白腐菌、磺酸菌、向病菌混合而成。

3.根据权利要求2所述的一种北虫草液体菌种稳定技术，其特征在于，所述白腐菌、磺酸菌、向病菌的比例为1∶2∶1。

4.根据权利要求1所述的一种北虫草液体菌种稳定技术，其特征在于，所述松针营养液的制备方法为：取生长六年以上的干油松松针，加9～11倍量水煮沸1.5～2小时，取滤液，加水补足至初始液体量，加入16～24％蚕蛹粉后混合即得。