CN103483038B - 一种冬虫夏草培养基的制备、培养方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种冬虫夏草固体培养基及其培养方法，解决冬虫夏草固体培养长势慢、周期长的问题。固体培养基成分主要由玉米粉、马铃薯、胰蛋白胨、酵母浸出粉、蚕蛹粉、氯化钠、硫酸镁，磷酸二氢钾、维生素、琼脂粉、水分组成。本发明提供的冬虫夏草固体培养基及其培养方法，能够促进冬虫夏草固体培养的菌丝生长、缩短培养时间，可应用于发酵工厂中冬虫夏草菌种的保存、母种制备、菌种活化、菌种复壮等步骤。
Description
技术领域
本发明属于一种冬虫夏草培养基的制备方法、培养方法及应用。
背景技术
冬虫夏草在我国传统中医药中用于补肺益肾、化痰止咳，在《本草从新》和《中华人民共和国药典》中都有记录。据报道冬虫夏草具有抗肿瘤、抗疲劳、抗氧化、提高免疫力、增强肾功能等功效，已经成为当前中药研究和开发的一大热点。
冬虫夏草固体培养是冬虫夏草人工培养和发酵的基础，可以用于冬虫夏草菌种的分离、保存等步骤，也可以用于冬虫夏草液体深层发酵工业生产中的母种制备、菌种复壮等步骤。目前科研工作者发表了一些相关专利和论文，公开了一些冬虫夏草固体培养基和培养方法，但是普遍存在培养时间长、菌丝长势慢等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种冬虫夏草培养基的制备方法，菌丝体长势好，培养时间短，可应用于发酵工厂中冬虫夏草的母种制备、菌种保存、菌种活化、菌种复壮等步骤。
本发明提供的一种冬虫夏草培养基的制备方法，其步骤如下：
1、将1cm见方的马铃薯丁用水煎煮，铃薯丁与水的重量比为1:5；时间为水沸后30分钟，呈粘稠状的马铃薯汤；
2、取重量比例700-800马铃薯汤，然后按重量比例加入下列原料：
10.0-25.0玉米粉、50.0-100.0马铃薯、2.0-5.0胰蛋白胨、2.0-5.0酵母浸出粉、5.0-15.0蚕蛹粉、0.1-0.5氯化钠、0.2-0.6硫酸镁、0.2-0.6磷酸二氢钾、0.5-1.0维生素B1；
在容器中加热至100℃，使物料溶解、混匀；加水至总重量比例为1000；121℃下0.15MPa压力下灭菌30-50分钟，冷却使温度降至室温即成冬虫夏草液体培养基。
在上述培养基的原料中加入重量比例为10.0-20.0的琼脂粉，在容器中加热至100℃，使物料溶解、混匀；加水至总重量比例为1000；121℃下0.15MPa压力下灭菌30-50分钟，冷却使温度降至室温即凝固成冬虫夏草固体培养基。
本发明提供的利用上述冬虫夏草培养基培养方法为：取冬虫夏草组织或者菌丝，接入上述冬虫夏草培养基中，放入光照培养箱中，光照设置为12小时光照加12小时黑暗间隔培养，模拟天然光照环境，培养温度10-20℃。
本发明提供的冬虫夏草培养基培养方法应用，可应用于发酵工厂中冬虫夏草的母种制备、菌种保存、菌种活化、菌种复壮。
本发明与传统的培养基和培养方法相比，菌丝体长势好，培养时间短，能应用于发酵工厂中冬虫夏草的母种制备、菌种保存、菌种活化、菌种复壮等步骤。
具体实施方式
一、制备冬虫夏草液体培养基，其步骤如下：
1、将1cm见方的马铃薯丁用水煎煮，马铃薯丁与水的重量比为1:5；时间为水沸后30分钟，呈粘稠状的马铃薯汤；
2、取700-800g马铃薯汤，然后加入下列原料：
20.0g玉米粉、3.0g胰蛋白胨、3.0g酵母浸出粉、10.0g蚕蛹粉、0.3g氯化钠、0.4g硫酸镁，0.3g磷酸二氢钾、0.8g维生素B1。
在容器中加热至100℃，使物料溶解、混匀；加水至1000克；121℃下0.15MPa压力下灭菌30-50分钟，冷却使温度降至室温即成冬虫夏草液体培养基。
二、、制备冬虫夏草固体培养基，其步骤如下：
1、将1cm见方的马铃薯丁用水煎煮，铃薯丁与水的重量比为1:5；时间为水沸后30分钟，呈粘稠状的马铃薯汤；
2、取700-800g马铃薯汤，然后加入下列原料：
20.0g玉米粉、3.0g胰蛋白胨、3.0g酵母浸出粉、10.0g蚕蛹粉、0.3g氯化钠、0.4g硫酸镁，0.3g磷酸二氢钾、0.8g维生素B1、10.0g琼脂粉；
在容器中加热至100℃，使物料溶解、混匀；加水至1000克；121℃下0.15MPa压力下灭菌30-50分钟，冷却使温度降至室温即凝固成冬虫夏草固体培养基。
实施例1. 应用于冬虫夏草发酵工厂中的母种制备
从冬虫夏草产地采收新鲜冬虫夏草（拉丁学名是Cordyceps sinensis，也写作Ophiocordyceps sinensis），将冬虫夏草虫子的致密组织接入到本发明的固体培养基中，放入光照培养箱中，根据冬虫夏草在天然生长条件下的实际光照情况，设置为持续光照12小时后持续黑暗12小时，如此反复，培养温度10-20℃。培养30天，冬虫夏草菌种的直径可以达到4-6厘米。
实施例2. 应用于冬虫夏草发酵工厂中的菌种保存
在冬虫夏草发酵工厂中，本发明所述的冬虫夏草固体培养基可应用于冬虫夏草菌种保存，用接种针将冬虫夏草菌种转接到本发明的固体培养基中，根据需要，在完全黑暗环境下培养，培养40天时，冬虫夏草菌种的直径可以达到3-5厘米，培养基仍然具有很强的保水性，可继续保存或转接。
实施例3. 应用于冬虫夏草发酵工厂中的菌种复壮
在冬虫夏草发酵工厂中，菌种退化是个严重的问题，菌种复壮是克服这个问题的有效手段。本发明所述的冬虫夏草固体培养基及培养方法，可用于菌种复壮，培养方法同实施例1，转接3-5世代后，即可实现冬虫夏草长势很好，复壮效果显著。
Claims (4)
1.一种冬虫夏草培养基的制备方法，其特征是步骤如下：
（1）、将1cm 见方的马铃薯丁用水煎煮，铃薯丁与水的重量比例为1:5 ；时间为水沸后30分钟，呈粘稠状的马铃薯汤；
（2）、取重量比例700-800 马铃薯汤，然后按重量比例加入下列原料：
10.0-25.0 玉米粉、2.0-5.0 胰蛋白胨、2.0-5.0 酵母浸出粉、5.0-15.0 蚕蛹粉、0.1-0.5氯化钠、0.2-0.6 硫酸镁、0.2-0.6 磷酸二氢钾、0.5-1.0 维生素B1 ；
在容器中加热至100℃，使物料溶解、混匀；加水至总重量比例为1000 ；121℃下0.15MPa 压力下灭菌30-50 分钟，冷却使温度降至室温即成冬虫夏草液体培养基。
2.根据权利要求1 所述的冬虫夏草培养基的制备方法，其特征是在上述培养基的原料中加入重量比例为10.0-20.0 的琼脂粉，在容器中加热至100℃，使物料溶解、混匀；加水至总重量比例为1000 ；121℃下0.15MPa 压力下灭菌30-50 分钟，冷却使温度降至室温即凝固成冬虫夏草固体培养基。
3.一种利用权利要求1 所述制备方法得到的冬虫夏草培养基培养冬虫夏草的方法，其特征是：取冬虫夏草组织或者菌丝，接入上述冬虫夏草培养基中，放入光照培养箱中，光照设置为12 小时光照加12 小时黑暗间隔培养，模拟天然光照环境，培养温度10-20℃。
4.一种如权利要求1 所述制备方法得到的冬虫夏草培养基的应用，其特征是：可应用于发酵工厂中冬虫夏草的母种制备、菌种保存、菌种活化、菌种复壮。
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