CN1274006A - 人工培育冬虫夏草的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种人工培育冬虫夏草的方法,首先将菌种接入以大米、玉米、谷糠、蚕蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、柠檬酸三胺、维生素B1配成的营养液的培养基中,然后在12—17摄氏度避光环境下培养20—25天,再在200勒克斯光照下培养10天转色,在昼夜温差10摄氏度下刺激10天子实体生长,摘收。经检测,人工冬虫夏草与天然虫草在化学成分、药理药效方面无明显差异,具有较高的产量,可极大地满足人们对冬虫夏草日益增大的需求。
Description
本发明属真菌人工培育技术，涉及一种人工培育冬虫夏草的方法。
冬虫夏草是一种极其珍贵的药食两用真菌，在真菌学上分类为子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、草虫属。野生冬虫夏草均寄生在鳞翅目昆虫体内，且对生长环境要求较高，所以其产量受到极大限制。随着社会的发展和人们生活水平的提高，特别是对冬虫夏草医药作用的进一步挖掘，它的需求量越来越大，仅靠采集野生冬虫夏草远不能满足社会的需要。目前，人工培育的报道很少，仅是在实验室试管条件下，或是采用发酵方法生产冬虫夏草菌丝的方法。如CN1197843A公开的“中国冬虫夏草真菌的发酵生产方法”，就是采用液体培养基进行发酵生产，其产品无子实体。
本发明的目的是用人工模拟其生长条件的方法，来培育冬虫夏草子实体，以提高产量，满足人们的需要。
本发明采用的培养基原料为大米、玉米、谷糠、蚕蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、柠檬酸三铵、维生素B1配制而成的营养液。营养液的配方是：每1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克、柠檬酸三铵1克、维生素B110毫克。培养基原料组分重量配比为：大米20-25％、玉米10-15％、谷糠4-8％、蚕蛹粉1-2％、营养液50-55％。
本发明的培育方法(步骤)：
1、培养基的制作。在容器中按上述比例加入大米、玉米、谷糠、蚕蛹粉及营养液，容器封口，用常规方法灭菌后冷却备用。
2、接种。在无细菌条件下操作，将冬虫夏草菌接入培养基中。
3、养菌。将接入菌的容器置于12-17摄氏度的避光环境下培养20-25天，直至白色菌丝长满培养基2/3以上。
4、转色。在200勒克斯以上的光照条件下继续培养10天左右，菌丝由白色转为黄色。
5、刺激子实体原基的产生。转色后在昼夜温差10摄氏度以上的条件下予以刺激10天，培养基表面产生大量子实体原基。昼夜温差范围：5-25摄氏度，同时在封口处穿孔，使培养空间适度通风，以供给充足的氧气。
6、子实体生长。在18-25摄氏度、相对湿度85-90％的条件下，稳定培养20-25天，子实体长满容器，长度达6-7cm。
7、摘收。打开封口，用带弯头的小铁铲将子实体从根部轻轻铲下，置于阴凉处凉干或烘干。
本发明的显著优点及积极效果：
1、人工培育的冬虫夏草经中国绿色食品学会检验，与天然冬虫夏草的化学成分基本相同；氨基酸种类完全相同，其含量大部分比天然冬虫草高出一倍。具体成分见附表1。
无机元素 在测定的26种无机元素中有15种元素与天然冬虫草相同，含量甚微；其余11种元素的含量较高，具体含量列入附表2。其中Ca、Al、Si、Zn、Cr略高于天然冬虫夏草，Ti、Cu略低于天然冬虫夏草，Fe比天然冬虫夏虫低270ppm，Mn低45ppm，重金属含量不超过15ppm。
核苷 人工与天然冬虫夏草的核苷类化合物含量比较接近，但人工虫草多含腺苷。具体含量列入附表3。
麦角甾醇和D-甘露醇。送检样品的麦角甾醇含量比天然虫草高出一倍，分别为0.15％和0.069％；D-甘露醇含量则比天然虫草低30％，分别为5.5％和8.1％。
维生素核黄素含量基本相同，为1.25mg/100g；硫胺素含量比天然虫草高得多，分别为0.34mg/100g和0.018mg/100g；β-类葫萝卜素含量为0.76mg/100g，而天然虫草中未检出；维生素C含量大大低于天然虫草，分别为4mg/100g和23.1mg/100g。
2、人工培育的冬虫夏草与天然冬虫夏草的药理功能无明显差异。
选用美国小白鼠进行动物试验，分为三组：I空白、II人工虫草、III天然虫草。以一定剂量连续分别喂养45天，对其12项生理指标测试，结果表明II、III组明显优于I组，II、III组之间无明显差异。证明人工冬虫夏草在药理药效上与天然冬虫夏草基本一样，属药食两用高级滋补品。
3、人工培育冬虫夏草的方法具有较高的产量，采用室内立体培育，单位平方米每周可采150-200g，具有较好的经济效益。
4、本发明可极大地满足人们日益增大的对冬虫夏草的需求，保护野生冬虫夏草资源，具有较大的社会效益。
实施例1
培养基为：大米20％、玉米10％、谷糠4％、蚕蛹粉1％、营养液50％。其中营养液的配方为：1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克、柠檬酸三胺1克、维生素B110毫克。培育步骤：1、将上述培养基装入容器中，用聚丙烯塑料膜封口，置于0.1Mpa、120摄氏度下灭菌1.5小时后冷却备用；2、将冬虫夏草菌接入培养基中(在无菌条件下操作)；3、将接入菌种的容器置于12摄氏度的避光环境下培养20天，生长菌丝；4、在200勒克斯以上的光照条件下培养10天转色；5、将转色后的菌丝体在昼夜温差10摄氏度以上(白天5摄氏度，夜晚15摄氏度)的条件下刺激10天，并用牙签在封口处穿孔通风，产生大量的子实体原基；6、在18摄氏度、85％的相对湿度良好通风条件下，稳定培养20天，子实体长满容器(达6-7cm长)；7、打开封口，摘收子实体。
实施例2
培养基为：大米25％、玉米15％、谷糠8％、蚕蛹粉2％、营养液55％。其中营养液的配方同例1。培育步骤：1、制备培养基(同例1)，2、接种(同例1)，3、养菌环境温度17摄氏度，避光培养25天，4、转色(同例1)，5、刺激子实体原基产生。昼夜温差10摄氏度(白天15摄氏度，夜晚25摄氏度)刺激10天，其余同例1，6、子实体生长在温度25摄氏度，相对湿度90％通风条件下培养25天，7、摘收子实体。
附表1：人工虫草与天然虫草氨基酸成分比较
氨基酸种类 天然虫草(％) 人工虫草(％)
天门冬氨酸 1.646 3.449
苏氨酸 0.911 1.715
丝氨酸 1.080 1.424
谷氨酸 2.360 4.172
甘氨酸 0.954 10886
丙氨酸 1.140 2.698
胱氨酸 0.381 0.333
缬氨酸 0.719 1.634
蛋氨酸 0.285 0.543
异亮氨酸 2.280 5.529
亮氨酸 0.937 2.821
酪氨酸 0.853 0.384
苯丙氨酸 0.781 1.008
赖氨酸 0.913 2.114
氨 0.339 0.527
组氨酸 0.791 0.680
精氨酸 1.426 0.479
脯氨酸 1.029 1.465
附表2：人工虫草与天然虫草无机离子含量比较
元素名称 天然虫草(％) 人工虫草(％)
P 0.92 0.093
Mg 0.068 0.057
Fe 0.022 0.006
Ca 0.013 0.013
Al 0.0006 0.0051
Si 0.0034 0.0054
Zn 0.0031 0.0041
Mn 0.0014 0.0012
Cu 0.0005 0.0004
Ti 0.0002 未检出
Cr 0.0001 0.0002
附表3：人工虫草与天然虫草苷类含量比较(单位mg/g/％)
尿嘧啶 尿苷 腺嘌呤 腺苷 脱氧腺苷天然虫草 0.243/33.2 0.308/42.1 0.162/22.1 -- 0.0183/2.5人工虫草 0.215/34.7 0.275/44.4 0.105/17.0 0.0116/1.9 0.0121/2.0
Claims (4)
1、一种人工培育冬虫夏草的方法，其特征在于：首先将菌种接入以大米、玉米、谷糠、蚕蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、柠檬酸三胺、维生素B1配成的营养液的培养基中，然后将接入冬虫夏草菌的容器置于12-17摄氏度的避光环境下，培养20-25天，生出白色菌丝，再在光照条件下继续培养10天，菌丝体由白色转为黄色，转色后在昼夜温差10摄氏度的条件下刺激10天，产生子实体原基，在温度18-25摄氏度，相对湿度85-90％的条件下，稳定培养20-25天，子实体长大、摘收；培养基的组分重量配比为：大米20-25％、玉米10-15％、谷糠4-8％、蚕蛹粉1-2％、营养液50-55％，其中营养液的配方为：每1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克、柠檬酸三胺1克、维生素B110毫克。
2、按照权利要求1所述的人工培育冬虫夏草的方法，其特征在于：所述的光照条件大于200勒克斯。
3、按照权利要求1所述的人工培育冬虫夏草的方法，其特征在于：所述的刺激子实体原基产生的条件，昼夜温差应在5-25摄氏度范围内，并在容器封口处穿孔通风。
4、按照权利要求1所述的人工培育冬虫夏草的方法，其特征在于：所述的培养基的最佳组分重量配比为：大米25％、玉米13％、谷糠6％、蚕蛹粉1％、营养液55％。
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