CN101830753B - 一种广东虫草子实体高产培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明的一种广东虫草子实体培养基,其特征是由大米和营养液按大米1g和营养液1~2mL的比例组成,其中每升营养液由碳源10~30g,氮源5~15g,钾盐5~10g,以及余量的水组成,pH6.0~7.5,所述的碳源是蔗糖或麦芽浸出物或葡萄糖,所述的氮源是牛肉浸膏、酵母浸膏、黄豆、牛肉浸膏和黄豆或酵母浸膏和黄豆,钾盐是氯化钾或硝酸钾,使营养液中的钾离子含量为0.05~2.0mol/L。本发明的培养基成分容易得到,制备方便,成本低廉,可用于广东虫草的子实体规模化生产,每瓶培养基的子实体干重最高可达3.67g。
Description
技术领域
本发明涉及一种真菌培养基,具体来说涉及一种高产的广东虫草子实体培养基。
背景技术
现今世界范围内已发现的虫草属(Cordyceps)真菌有450多种,国内已报道的超过100种,广东地区则发现了30多种。有资料表明,许多虫草属真菌富含多种氨基酸、微量元素和维生素等营养成分,以及腺苷,虫草素,虫草酸等活性成分,具有抗肿瘤、抗病原、抗氧化、以及增强人体免疫力等多种药理功能,因此,积极开发利用虫草属真菌资源具有十分重要的意义。
子实体的人工栽培是虫草资源开发利用的重要途径。由于子实体形成和生长所需的条件不明确或难以满足,导致许多虫草无法进行大量的人工栽培。因此,研究不同虫草的子实体形成条件及其影响因子,是虫草产业化技术的关健。至今,仅有蛹虫草实现了规模化生产,其它如冬虫夏草、古尼虫草(C.gunnii(Berk.)Berk.)和蝉花虫草(C. sobolifera(Hillex Watson)Berk.et Broome)等尚处于试验研究阶段。
广东虫草(Cordyceps guangdongensis T.H.Li,Q.Y.Lin&B.Song)是目前仅发现于广东地区的一种虫草新资源。前期的试验表明,该虫草可以实现子实体的人工培养。为进一步提高广东虫草子实体的产量,筛选针对性的高产培养基是关键环节。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种能实现广东虫草子实体稳定高产的培养基。
本发明的一种广东虫草子实体培养基,其特征是由大米和营养液按大米1g和营养液1~2mL的比例组成,其中每升营养液由碳源10~30g,氮源5~15g,钾盐4~33g,以及余量的水组成,pH 6.0~7.5,所述的碳源是蔗糖或麦芽浸出物或葡萄糖,所述的氮源是牛肉浸膏、酵母浸膏、黄豆、或牛肉浸膏和黄豆、或酵母浸膏和黄豆,钾盐是氯化钾或硝酸钾。
本发明所用麦芽浸出物、牛肉浸膏、酵母浸膏、钾盐、黄豆等均购自市场。
本发明的一种广东虫草子实体培养基,最好由大米和营养液按按大米1g和营养液1.5mL的比例组成,其中每升营养液由蔗糖20g,黄豆4g,牛肉浸膏5g,KNO310g/L,以及余量的水组成,pH 6.5。
本发明的广东虫草子实体培养基的制备方法是,先大米装入培养瓶内,再按比例装入营养液,混合,封口,121℃灭菌40min,冷却至室温得到。
本发明的培养基成分容易得到,制备方便,成本低廉,可用于广东虫草的子实体规模化 生产,每瓶培养基的子实体产量最高可达3.67g(干重),生物转化率为18.35%,虫草酸含量可达151.00mg/g[高于冬虫夏草(127.8mg/g)和蛹虫草(39mg/g)],腺苷为0.81mg/g(是冬虫夏草的3倍),虫草素为0.015mg/g、水解氨基酸总量为15%(分别比冬虫夏草和蛹虫草低5%和低2%),微量元素含量与冬虫夏草和蛹虫草相近,重金属含量符合食用菌安全标准。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,不是对本发明的限制。
以下实施例所用麦芽浸出物、牛肉浸膏、酵母浸膏、钾盐等购自广东省环凯微生物科技有限公司,黄豆购自农贸市场;所用广东虫草(Cordyceps guangdongensis T.H.Li,Q.Y.Lin&B.Song)菌种即日本虫草广东变型(Cordycepsjaponica f.guangdongensisT.H.Li,Q.Y.Lin etB.Song)GDIM C050423CCTCC No.M206051,由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得,已于2006年5月16日保藏在中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,保藏号为CCTCC No.M206051。该虫草菌株首先公开在中国专利ZL200610035774.3中。
实施例1:
母种:由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得,于豆芽汁PDA培养基(每升含豆芽100g,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,pH 6.0)上培养、保存。
液体菌种:在液体培养基(每升含葡萄糖10g,麦芽浸出物3g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,pH 6.0),接入斜面菌种,进行振荡培养,培养合适时间后,可用作栽培种,或继续进行下一级液体培养,所得液体种作为栽培种。
高产培养基:每升营养液按蔗糖20g,黄豆4g,牛肉浸膏5g,KNO310g和余量的水的比例配出pH6.5的营养液,将大米20g和营养液30mL装入容量为250mL,12cm×6.5cm×6.5cm的组培瓶,121℃灭菌40min,冷却至室温后备用。
对照培养基:由大米和营养液(每升含葡萄糖10g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,麦芽浸出物3g),按大米1g和营养液1.5mL的比例进行配制。
接种与培养:在无菌条件下,将经稀释液体种15~20mL接入高产培养基内,然后转移至培养房内进行菌丝培养。另外以常用的培养基进行对照。经过菌丝生长、原基形成和子实体生长各阶段,待子实体成熟后,采收子实体。于60℃下烘干子实体,称重。每瓶子实体的平均干重为3.67g,对照培养基得到的子实体干重为1.87g。
实施例2:
母种:由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得,于豆芽汁PDA培养基(每升含豆芽100g,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,pH 6.0)上培养、保存。
液体菌种:在液体培养基(每升含葡萄糖10g,麦芽浸出物3g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,pH 6.0),接入斜面菌种,进行振荡培养,培养合适时间后,可用作栽培种,或继续进行下一 级液体培养,所得液体种作为栽培种。
高产培养基:每升营养液按麦芽浸出物10g,牛肉浸膏5g,KNO35g和余量的水的比例配出pH6.0的营养液,将大米20g和营养液20mL装入容量为250mL,12cm×6.5cm×6.5cm的组培瓶,121℃灭菌40min,冷却至室温后备用。
对照培养基:由大米和营养液(每升含葡萄糖10g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,麦芽浸出物3g),按大米1g和营养液1mL的比例进行配制。
接种与培养:在无菌条件下,将经稀释液体种15~20mL接入高产培养基内,然后转移至培养房内进行菌丝培养。另外以常用的培养基进行对照。经过菌丝生长、原基形成和子实体生长各阶段,待子实体成熟后,采收子实体。于60℃下烘干子实体,称重。每瓶子实体的平均干重为2.87g,对照培养基得到的子实体干重为1.87g。
实施例3:
母种:由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得,于豆芽汁PDA培养基(每升含豆芽100g,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,pH 6.0)上培养、保存。
液体菌种:在液体培养基(每升含葡萄糖10g,麦芽浸出物3g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,pH 6.0),接入斜面菌种,进行振荡培养,培养合适时间后,可用作栽培种,或继续进行下一级液体培养,所得液体种作为栽培种。
高产培养基:每升营养液按葡萄糖30g,酵母浸膏15g,氯化钾10g和余量的水的比例配出pH6.5的营养液,将大米20g和营养液40mL装入容量为250mL,12cm×6.5cm×6.5cm的组培瓶,121℃灭菌40min,冷却至室温后备用。
对照培养基:由大米和营养液(每升含葡萄糖10g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,麦芽浸出物3g),按大米1g和营养液2mL的比例进行配制。
接种与培养:在无菌条件下,将经稀释液体种15~20mL接入高产培养基内,然后转移至培养房内进行菌丝培养。另外以常用的培养基进行对照。经过菌丝生长、原基形成和子实体生长各阶段,待子实体成熟后,采收子实体。于60℃下烘干子实体,称重。每瓶子实体的平均干重为2.44g,对照培养基得到的子实体干重为1.87g。
实施例4:
母种:由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得,于豆芽汁PDA培养基(每升含豆芽100g,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,pH 6.0)上培养、保存。
液体菌种:在液体培养基(每升含葡萄糖10g,麦芽浸出物3g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,pH 6.0),接入斜面菌种,进行振荡培养,培养合适时间后,可用作栽培种,或继续进行下一级液体培养,所得液体种作为栽培种。
高产培养基:每升营养液按葡萄糖30g,黄豆15g,氯化钾5g和余量的水的比例配出pH6.5 的营养液,将大米20g和营养液30mL装入容量为250mL,12cm×6.5cm×6.5cm的组培瓶,121℃灭菌40min,冷却至室温后备用。
对照培养基:由大米和营养液(每升含葡萄糖10g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,麦芽浸出物3g),按大米1g和营养液1.5mL的比例进行配制。
接种与培养:在无菌条件下,将经稀释液体种15~20mL接入高产培养基内,然后转移至培养房内进行菌丝培养。另外以常用的培养基进行对照。经过菌丝生长、原基形成和子实体生长各阶段,待子实体成熟后,采收子实体。于60℃下烘干子实体,称重。每瓶子实体的平均干重为2.47g,对照培养基得到的子实体干重为1.87g。
实施例5:
母种:由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得,于豆芽汁PDA培养基(每升含豆芽100g,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,pH 6.0)上培养、保存。
液体菌种:在液体培养基(每升含葡萄糖10g,麦芽浸出物3g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,pH 6.0),接入斜面菌种,进行振荡培养,培养合适时间后,可用作栽培种,或继续进行下一级液体培养,所得液体种作为栽培种。
高产培养基:每升营养液按葡萄糖30g,酵母浸膏5g,黄豆5g,氯化钾5g和余量的水的比例配出pH6.5的营养液,将大米20g和营养液30mL装入容量为250mL,12cm×6.5cm×6.5cm的组培瓶,121℃灭菌40min,冷却至室温后备用。
对照培养基:由大米和营养液(每升含葡萄糖10g,蛋白胨5g,酵母浸膏3g,麦芽浸出物3g),按大米1g和营养液1.5mL的比例进行配制。
接种与培养:在无菌条件下,将经稀释液体种15~20mL接入高产培养基内,然后转移至培养房内进行菌丝培养。另外以常用的培养基进行对照。经过菌丝生长、原基形成和子实体生长各阶段,待子实体成熟后,采收子实体。于60℃下烘干子实体,称重。每瓶子实体的平均干重为2.67g,对照培养基得到的子实体干重为1.87g。
Claims (2)
1.一种广东虫草子实体培养基,其特征是由大米和营养液按大米1g和营养液1~2mL的比例组成,其中每升营养液由碳源10~30g,氮源5~15g,钾盐5~10g,以及余量的水组成,pH6.0~7.5,所述的碳源是蔗糖或麦芽浸出物或葡萄糖,所述的氮源是牛肉浸膏、酵母浸膏、黄豆、或牛肉浸膏和黄豆、或酵母浸膏和黄豆,钾盐是氯化钾或硝酸钾。
2.根据权利要求1所述的一种广东虫草子实体培养基,其特征是由大米和营养液按大米1g和营养液1.5mL的比例组成,其中每升营养液由蔗糖20g,黄豆4g,牛肉浸膏5g,KNO310g/L,以及余量的水组成,pH6.5。
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