CN113388567A - 一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及冬虫夏草领域，具体公开了一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，该方法包括以下步骤：S1、斜面培养，S2、摇瓶培养，S3、种子扩大培养，S4、发酵培养，S5、发酵带放再培养，在原有的发酵培养基基础上添加维生素、菊芋、叶酸、核苷类前体物、褐藻液、蝉花粉和植物油等组分，另外，通过水解法将培养基中的玉米粉和蚕蛹粉预先进行酶解，从而提高了发酵中国被毛孢菌丝体中核苷类物质、D‑甘露醇、多糖、脂肪酸、麦角甾醇和γ‑氨基丁酸等活性成分，增强了人工发酵的冬虫夏草的药效。
Description
技术领域
本发明涉及冬虫夏草领域，更具体地说，它涉及一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法。
背景技术
青藏高原独有的野生冬虫夏草是我国传统的名贵珍稀药材，它系麦角菌科虫草属真菌中国被毛孢菌寄生于蝙蝠蛾的幼虫所形成的虫菌复合体。由于冬虫夏草具药性温和、补而不峻的特点,国内外尤其是日本及东南亚市场对其的需求长盛不衰。
近年来，由于冬虫夏草的资源有限,在采挖过程中破坏严重，导致冬虫夏草资源日益稀缺，科研工作者们对冬虫夏草进行了长期而深入的研究，试图通过人工介入的方式增加冬虫夏草的产出，从冬虫夏草中分离提取的冬虫夏草菌株经人工液体深层发酵加工得到的菌粉，即发酵冬虫夏草菌粉，已逐渐成为天然冬虫夏草的替代品。现代药理学证明，发酵冬虫夏草菌粉与冬虫夏草有效成分类似，具有相似的药理作用，且药理作用优于天然冬虫夏草，毒性更小，不存在重金属超标问题。中国被毛孢菌是从青海采集的新鲜冬虫夏草上分离获得的虫草属菌株，专家认定中国被毛孢是冬虫夏草唯一的无性型菌种，其发酵物与天然虫草有相似的成分。因此，中国被毛孢的规模化、高质量的工业发酵生产对于促进人们身体健康，提高生活质量有重要意义。
虽然人工发酵的冬虫夏草和天然冬虫夏草的药理作用相似，但由于生长环境和生长周期的不同，人工合成的冬虫夏草的活性成分含量相比于天然冬虫夏草还是较低，营养价值自然低于天然冬虫夏草。
经中科院微生物研究所进行菌种鉴定，核苷类物质是中国被毛孢菌丝体最重要的药效活性成分，且中国被毛孢菌丝体粉中含量较高的几种核苷类物质主要为尿苷、鸟苷和腺苷，此外，天然中国被毛孢菌丝体粉中还有D-甘露醇、多糖、脂肪酸、麦角甾醇和氨基酸等活性成分。此外，还发现中国被毛孢菌丝体粉中一种名为γ-氨基丁酸的活性成分药效较显著。
发明内容
为了提高人工发酵冬虫夏草内的活性成分，本发明提供一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法。
本发明提供的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法采用如下的技术方案：
一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，所述方法包括以下步骤：S1、斜面培养：将中国被毛孢菌丝体接种到斜面培养基上培养内恒温培养；S2、摇瓶培养：步骤S1培养好的菌种全部接入摇瓶培养基内恒温培养；S3、种子扩大培养：将步骤S2培养好的菌种按照5.0％～10.0％的接种量接入种子扩大培养基内恒温培养；S4、发酵培养：将步骤S3培养好的菌种按照9.0％～18.0％的接种量接入发酵培养基内恒温培养；S5、发酵带放再培养：将步骤S4中培养好的菌种按20.0～55.0％的接种量接入发酵带放再培养基内恒温培养，至达到放罐要求进行放罐；其特征在于，所述各培养基组成成分如下：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.4～3.6％、土豆汁1.6～4.5％、琼脂2.3～4.8％、蛋白胨0.2～2.0％、磷酸二氢钾0.04～0.35％、硫酸镁0.01～0.06％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.05～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.05～0.15％、蝉花粉0.09～0.20％、植物油0.02～0.15％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.0～4.5％、牛肉膏2.0～4.8％、土豆粉1.0～2.5％、蛋白胨0.8～2.5％、磷酸二氢钾0.03～0.28％、硫酸镁0.01～0.06％、醋酸锌0.01～0.07％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.04～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.05～0.15％、蝉花粉0.09～0.20％、植物油0.02～0.15％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.4～2.5％、酵母膏1.5～3.5％、蛋白胨0.5～2.0％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.25％、醋酸锌0.01～0.05％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.05～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.04～0.15％、蝉花粉0.08～0.20％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖0.6～2.0％、玉米粉1.0～2.5％、蚕蛹粉0.5～2.0％、酵母浸粉0.1～0.8％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.25％、醋酸锌0.01～0.06％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.05～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.03～0.10％、蝉花粉0.06～0.15％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖0.5～2.0％、玉米粉1.0～2.5％、蚕蛹粉0.5～2.0％、酵母浸粉0.1～1.0％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.25％、醋酸锌0.01～0.05％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.04～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、蝉花粉0.06～0.15％，其余为水。
通过采用上述技术方案，由于在培养基中另外添加了核苷类前物质、维生素C和叶酸，维生素可C促进中国被毛孢菌吸收叶酸，而叶酸可促进核苷类前物质与发酵菌丝体融合，进而提高发酵冬虫夏草菌丝体鸟苷、尿苷和腺苷的含量，增强冬虫夏草发酵菌丝体内的生物活性。
此外，用蝉花研磨而成的蝉花粉中含有大量腺苷、虫草酸、脂肪酸、麦角甾醇等有效成分，植物油中富含丰富的脂肪酸，褐藻液中含有大量的D-甘露醇和水溶性多糖-褐藻糖胶，可在发酵过程中为发酵菌丝体进一步补充活性成分，增强发酵菌丝体内各活性成分的含量，增强人工发酵的冬虫夏草的药效。另外，菊芋可促进菌丝体生长增殖，调节代谢，促进矿物质吸收。
优选的，所述各培养基组成成分如下：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.6～3.0％、土豆汁2.0～3.5％、琼脂2.0～3.8％、蛋白胨0.2～1.5％、磷酸二氢钾0.10～0.25％、硫酸镁0.01～0.04％、维生素C0.03～0.05％、菊芋0.25～0.35％、叶酸0.08～0.12％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.12～0.15％、蝉花粉0.15～0.20％、植物油0.08～0.12％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.5～3.5％、牛肉膏3.0～4.5％、土豆粉1.5～2.0％、蛋白胨1.2～2.0％、磷酸二氢钾0.05～0.15％、硫酸镁0.02～0.05％、醋酸锌0.03～0.06％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.08～0.10％、蝉花粉0.08～0.15％、植物油0.08～0.12％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.8～2.1％、酵母膏2.0～3.0％、蛋白胨1.2～2.0％、硫酸镁0.02～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.15％、醋酸锌0.01～0.03％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.06～0.10％、蝉花粉0.08～0.15％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.2～1.8％、玉米粉1.5～2.5％、蚕蛹粉1.0～2.0％、酵母浸粉0.3～0.8％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.10～0.20％、醋酸锌0.01～0.03％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.08～0.10％、蝉花粉0.08～0.15％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.5～2.0％、玉米粉1.5～2.5％、蚕蛹粉1.0～2.0％、酵母浸粉0.3～0.8％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.10～0.20％、醋酸锌0.01～0.03％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、蝉花粉0.08～0.15％，其余为水。
通过采用上述技术方案，根据实施例可知，培养基中各活性成分的添加量在该范围区间内，效果最佳。
优选的，所述核苷类前体物包括鸟嘌呤、尿嘧啶和腺嘌呤，以重量百分比计，在对应培养基内鸟嘌呤占0.04～0.16％、尿嘧啶占0.10～0.45％和腺嘌呤占0.05～0.20％。
通过采用上述技术方案，在培养基中分别加入核苷类前体物鸟嘌呤、尿嘧啶和腺嘌呤，在叶酸的辅助作用下缩合，生成相应的鸟苷、尿苷和腺苷，在发酵过程中，鸟苷、尿苷和腺苷融入到发酵冬虫夏草菌丝体中，从而提高了发酵冬虫夏草菌丝体中核苷类物质的含量。
优选的，所述玉米粉和蚕蛹粉经预处理后加入培养基中，其处理过程为：将玉米粉和蚕蛹粉混合后加水配成液化料，先加入0.30～0.8％的碱性蛋白酶进行酶解；再加入0.2～1.0％的淀粉酶进行酶解，过滤，获得澄清透明料液。
通过采用上述技术方案，利用多种酶协同水解蚕蛹粉和玉米粉，分解出蚕蛹粉和玉米粉中的蛋白质和糖类成分，提高发酵液中氨基酸和多糖含量。此外，氨基酸进一步提供了大量的L-谷氨酸，在培养基发酵过程中，通过控制发酵液通气量，在低氧或缺氧的情况下，发酵菌丝体内源酶增加，部分L-谷氨酸合成γ-氨基丁酸，从而使氨基酸含量增加的同时，也使γ-氨基丁酸的含量增加，为发酵菌丝体提供γ-氨基丁酸，增强药效活性。
优选的，所述褐藻液由蒸馏水室温浸泡新鲜褐藻粒3～4h，将浸泡液过滤后所得。
通过采用上述技术方案，由于褐藻中的D-甘露醇和褐藻糖胶均易溶于水，所以采用水浴法浸泡后便可提取，将浸泡所得的褐藻液经过滤后可直接加入到培养基中，褐藻液中的D-甘露醇和褐藻糖胶为发酵菌丝体提供D-甘露醇和多糖。
优选的，所述浸泡液先用1mg/mL碳酸钠碱化至pH为10～11，过滤后浸泡液再用1:1醋酸中和至pH为6～7。
通过采用上述技术方案，由于浸泡液中含有的多糖类粘性物与蛋白质结合在一起，所以需要加碱性物质通过碱解法使多糖类粘性物与蛋白间的结合键断裂，促使多糖释放，再将浸泡液以酸中和。为保证发酵菌丝体安全无毒，所以采用可食用的碳酸钠和醋酸。
优选的，所述植物油可选用大豆油或玉米油。
通过采用上述技术方案，大豆油或玉米油中富含有由于脂肪酸，且大部分为不饱和脂肪酸，对人体危害较小，放入到发酵菌丝体中，进一步提高冬虫夏草中脂肪酸的活性成分。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1、由于本发明采用在培养基中另外添加了核苷类前物质、维生素C和叶酸，维生素可C促进中国被毛孢菌吸收叶酸，而叶酸可促进核苷类前物质与发酵菌丝体融合，进而提高发酵冬虫夏草菌丝体鸟苷、尿苷和腺苷的含量，增强冬虫夏草发酵菌丝体内的生物活性。此外，在培养基中还加入了蝉花粉、植物油、褐藻液等成分，进一步为发酵中国被毛孢菌丝体补充活性成分，增强发酵菌丝体内各活性成分的含量，增强人工发酵的冬虫夏草的药效。
2、本发明中优选采用多种酶协同水解蚕蛹粉和玉米粉，分解出蚕蛹粉和玉米粉中的蛋白质和糖类成分，提高发酵液中氨基酸和多糖含量；而氨基酸液进一步提供了大量的L-谷氨酸，使部分L-谷氨酸在培养基发酵过程中合成γ-氨基丁酸，从而在增加氨基酸含量的同时，也使γ-氨基丁酸的含量增加，为发酵菌丝体提供γ-氨基丁酸，增强药效活性。
3、本发明中由于褐藻中的D-甘露醇和褐藻糖胶均易溶于水，所以采用水浴法浸泡后便可提取，将浸泡所得的褐藻液经过滤后可直接加入到培养基中，增强了发酵中国被毛孢菌丝体中D-甘露醇和多糖的活性成分。
具体实施方式
以下实施例对本发明作进一步详细说明。
原料的制备例
制备例1
褐藻液的制备
称取1Kg新鲜褐藻，先后用乙醇和蒸馏水洗净，剪碎，得到褐藻粒，加3L蒸馏水，室温浸泡褐藻粒3h，得到的浸泡液用1mg/mL碳酸钠碱化至pH为10，搅拌5min，过滤得到褐藻液，再用1:1醋酸中和至pH为6，得到中性褐藻液，待用。
制备例2
酶解玉米粉和蚕蛹粉
将玉米和蚕蛹分别粉碎、筛分过40目筛、混合，按照规定比例混合配料(玉米粉：蚕蛹粉＝2：3)加入液化罐，总投加量为2.6吨，加水配成6.5％度的液化料，加入相对于底物为0.25％的碳酸钙，调节溶液pH为8.5，加入相对于底物为0.45％的碱性蛋白酶，升温至55℃，进行蛋白酶酶解，酶解时间3.5h；到达酶解时间后，调节溶液pH为5.5，加入0.40％的α-淀粉酶，酶解温度90℃，酶解时间3.0h；然后降温至55℃，调节pH值为4.5，加入0.30％的葡萄糖淀粉酶，酶解时间1.5h，然后过滤获得澄清透明料液。
实施例
实施例1
选用中国被毛孢(Cs-C-Q80)为菌株进行发酵培养，按以下发酵工艺流程依次进行发酵培养：
S1、斜面培养：在无菌条件下，首先将中国被毛孢菌接种到斜面培养基上，16～20℃恒温培养5～7天；
S2、摇瓶培养：将步骤S1培养好的菌种全部接入摇瓶培养基内，置于16～20℃恒温培养，摇床转速220～260r/min，暗处培养5～7天；
S3、种子扩大培养：再将步骤S2中培养好的菌种按5.0～10.0％的接种量接入种子扩大培养基中，16～20℃恒温培养，罐压0.05～0.10Mpa，通气量1:(1.0～1.6)(V/V)，暗处培养6～9天；
S4、发酵培养：再将步骤S3中培养好的菌种按10.0～20.0％的接种量接入发酵培养基中，16～20℃恒温培养，罐压0.05～0.10Mpa，通气量1:(0.9～1.5)(V/V)，暗处培养6～9天；
S5、发酵带放再培养：将步骤S4中培养好的菌种按20.0～55.0％的接种量接入发酵带放再培养基中，16～20℃恒温培养，罐压0.05～0.10Mpa，通气量1:(0.9～1.5)(V/V)，暗处培养6～12天。
以重量百分比计，各培养基组成成分如下所示：
斜面培养基：以重量百分比计，各成分在培养基中所占的比例为：葡萄糖1.4％、土豆汁1.6％、琼脂2.3％、蛋白胨0.2％、磷酸二氢钾0.04％、硫酸镁0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.15％、叶酸0.05％、核苷类前体物0.33％(其中鸟嘌呤0.08％、尿嘧啶0.15％、腺嘌呤0.10％)、褐藻液0.05％、蝉花粉0.09％、植物油0.02％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.0％、牛肉膏2.0％、土豆粉1.0％、蛋白胨0.8％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.01％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.15％、叶酸0.05％、核苷类前体物0.33％(其中鸟嘌呤0.08％、尿嘧啶0.15％、腺嘌呤0.10％)、褐藻液0.05％、蝉花粉0.09％、植物油0.02％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.4％、酵母膏1.5％、蛋白胨0.5％、硫酸镁0.01％、磷酸二氢钾0.05％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.15％、叶酸0.05％、核苷类前体物0.33％(其中鸟嘌呤0.08％、尿嘧啶0.15％、腺嘌呤0.10％)、褐藻液0.04％、蝉花粉0.08％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖0.6％、玉米粉1.0％、蚕蛹粉0.5％、酵母浸粉0.1％、硫酸镁0.01％、磷酸二氢钾0.05％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.15％、叶酸0.05％、核苷类前体物0.33％(其中鸟嘌呤0.08％、尿嘧啶0.15％、腺嘌呤0.10％)、褐藻液0.03％、蝉花粉0.06％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖0.5％、玉米粉1.0％、蚕蛹粉0.5％、酵母浸粉0.1％、硫酸镁0.01％、磷酸二氢钾0.05％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.15％、叶酸0.04％、核苷类前体物0.33％(其中鸟嘌呤0.08％、尿嘧啶0.15％、腺嘌呤0.10％)、蝉花粉0.06％，其余为水。发酵结束后，取发酵终点发酵液1000ml，过滤，收集菌丝体于105℃烘1h，称重得菌丝体的质量。
实施例2
选用中国被毛孢(Cs-C-Q80)为菌株进行发酵培养，发酵工艺流程与实施例1相同。
以重量百分比计，各培养基组成成分如下所示：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖3.6％、土豆汁4.5％、琼脂4.8％、蛋白胨2.0％、磷酸二氢钾0.35％、硫酸镁0.06％、维生素C0.06％、菊芋0.45％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.81％(其中鸟嘌呤0.16％、尿嘧啶0.45％、腺嘌呤0.20％)、褐藻液0.15％、蝉花粉0.20％、植物油0.15％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖4.5％、牛肉膏4.8％、土豆粉2.5％、蛋白胨2.5％、磷酸二氢钾0.28％、硫酸镁0.06％、醋酸锌0.07％、维生素C0.06％、菊芋0.45％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.81％(其中鸟嘌呤0.16％、尿嘧啶0.45％、腺嘌呤0.20％)、褐藻液0.15％、蝉花粉0.20％、植物油0.15％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.5％、酵母膏3.5％、蛋白胨2.0％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.25％、醋酸锌0.05％、维生素C0.06％、菊芋0.45％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.81％(其中鸟嘌呤0.16％、尿嘧啶0.45％、腺嘌呤0.20％)、褐藻液0.15％、蝉花粉0.20％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.0％、玉米粉2.5％、蚕蛹粉2.0％、酵母浸粉0.8％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.25％、醋酸锌0.06％、维生素C0.06％、菊芋0.45％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.81％(其中鸟嘌呤0.16％、尿嘧啶0.45％、腺嘌呤0.20％)、褐藻液0.10％、蝉花粉0.15％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.0％、玉米粉2.5％、蚕蛹粉2.0％、酵母浸粉1.0％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.25％、醋酸锌0.05％、维生素C0.06％、菊芋0.45％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.81％(其中鸟嘌呤0.16％、尿嘧啶0.45％、腺嘌呤0.20％)、蝉花粉0.15％，其余为水。
发酵结束后，取发酵终点发酵液1000ml，过滤，收集菌丝体于105℃烘1h，称重得菌丝体的质量。
实施例3
选用中国被毛孢(Cs-C-Q80)为菌株进行发酵培养，发酵工艺流程与实施例1相同。
以重量百分比计，各培养基组成成分如下所示：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.6％、土豆汁2.0％、琼脂2.0％、蛋白胨0.2％、磷酸二氢钾0.10％、硫酸镁0.01％、维生素C0.03％、菊芋0.25％、叶酸0.08％、核苷类前体物0.45％(其中鸟嘌呤0.10％、尿嘧啶0.23％、腺嘌呤0.12％)、褐藻液0.12％、蝉花粉0.15％、植物油0.08％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.5％、牛肉膏3.0％、土豆粉1.5％、蛋白胨1.2％、磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.02％、醋酸锌0.03％、维生素C0.02％、菊芋0.20％、叶酸0.08％、核苷类前体物0.45％(其中鸟嘌呤0.10％、尿嘧啶0.23％、腺嘌呤0.12％)、褐藻液0.08％、蝉花粉0.08％、植物油0.08％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.8％、酵母膏2.0％、蛋白胨1.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.05％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.20％、叶酸0.08％、核苷类前体物0.45％(其中鸟嘌呤0.10％、尿嘧啶0.23％、腺嘌呤0.12％)、褐藻液0.06％、蝉花粉0.08％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.2％、玉米粉1.5％、蚕蛹粉1.0％、酵母浸粉0.3％、硫酸镁0.01％、磷酸二氢钾0.10％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.20％、叶酸0.08％、核苷类前体物0.45％(其中鸟嘌呤0.10％、尿嘧啶0.23％、腺嘌呤0.12％)、褐藻液0.08％、蝉花粉0.08％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.5％、玉米粉1.5％、蚕蛹粉1.0％、酵母浸粉0.3％、硫酸镁0.01％、磷酸二氢钾0.10％、醋酸锌0.01％、维生素C0.02％、菊芋0.20％、叶酸0.08％、核苷类前体物0.45％(其中鸟嘌呤0.10％、尿嘧啶0.23％、腺嘌呤0.12％)、蝉花粉0.08％，其余为水。
发酵结束后，取发酵终点发酵液1000ml，过滤，收集菌丝体于105℃烘1h，称重得菌丝体的质量。
实施例4
选用中国被毛孢(Cs-C-Q80)为菌株进行发酵培养，发酵工艺流程与实施例1相同。
以重量百分比计，各培养基组成成分如下所示：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖3.0％、土豆汁3.5％、琼脂3.8％、蛋白胨1.5％、磷酸二氢钾0.25％、硫酸镁0.04％、维生素C0.05％、菊芋0.35％、叶酸0.12％、核苷类前体物0.71％(其中鸟嘌呤0.14％、尿嘧啶0.40％、腺嘌呤0.17％)、褐藻液0.15％、蝉花粉0.20％、植物油0.12％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖3.5％、牛肉膏4.5％、土豆粉2.0％、蛋白胨2.0％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.05％、醋酸锌0.06％、维生素C0.05％、菊芋0.36％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.71％(其中鸟嘌呤0.14％、尿嘧啶0.40％、腺嘌呤0.17％)、褐藻液0.10％、蝉花粉0.15％、植物油0.12％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.1％、酵母膏3.0％、蛋白胨2.0％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.15％、醋酸锌0.03％、维生素C0.05％、菊芋0.36％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.71％(其中鸟嘌呤0.14％、尿嘧啶0.40％、腺嘌呤0.17％)、褐藻液0.10％、蝉花粉0.15％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.8％、玉米粉2.5％、蚕蛹粉2.0％、酵母浸粉0.8％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.20％、醋酸锌0.03％、维生素C0.05％、菊芋0.36％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.71％(其中鸟嘌呤0.14％、尿嘧啶0.40％、腺嘌呤0.17％)、褐藻液0.10％、蝉花粉0.15％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.0％、玉米粉2.5％、蚕蛹粉2.0％、酵母浸粉0.8％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.20％、醋酸锌0.03％、维生素C0.05％、菊芋0.36％、叶酸0.15％、核苷类前体物0.71％(其中鸟嘌呤0.14％、尿嘧啶0.40％、腺嘌呤0.17％)、蝉花粉0.15％，其余为水。
发酵结束后，取发酵终点发酵液1000ml，过滤，收集菌丝体于105℃烘1h，称重得菌丝体的质量。
实施例5
选用中国被毛孢(Cs-C-Q80)为菌株进行发酵培养，发酵工艺流程与实施例1相同。
以重量百分比计，各培养基组成成分如下所示：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.5％、土豆汁3.0％、琼脂2.8％、蛋白胨0.8％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.02％、维生素C0.04％、菊芋0.30％、叶酸0.10％、核苷类前体物0.57％(其中鸟嘌呤0.12％、尿嘧啶0.30％、腺嘌呤0.15％)、褐藻液0.12％、蝉花粉0.17％、植物油0.08％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖3.0％、牛肉膏3.8％、土豆粉1.8％、蛋白胨1.6％、磷酸二氢钾0.10％、硫酸镁0.03％、醋酸锌0.04％、维生素C0.04％、菊芋0.30％、叶酸0.10％、核苷类前体物0.57％(其中鸟嘌呤0.12％、尿嘧啶0.30％、腺嘌呤0.15％)、褐藻液0.10％、蝉花粉0.12％、植物油0.08％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.9％、酵母膏2.5％、蛋白胨1.6％、硫酸镁0.03％、磷酸二氢钾0.10％、醋酸锌0.02％、维生素C0.04％、菊芋0.30％、叶酸0.10％、核苷类前体物0.57％(其中鸟嘌呤0.12％、尿嘧啶0.30％、腺嘌呤0.15％)、褐藻液0.08％、蝉花粉0.11％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.5％、玉米粉2.0％、蚕蛹粉1.5％、酵母浸粉0.5％、硫酸镁0.03％、磷酸二氢钾0.15％、醋酸锌0.02％、维生素C0.04％、菊芋0.30％、叶酸0.10％、核苷类前体物0.57％(其中鸟嘌呤0.12％、尿嘧啶0.30％、腺嘌呤0.15％)、褐藻液0.08％、蝉花粉0.11％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.8％、玉米粉2.0％、蚕蛹粉1.5％、酵母浸粉0.5％、硫酸镁0.03％、磷酸二氢钾0.15％、醋酸锌0.02％、维生素C0.04％、菊芋0.30％、叶酸0.10％、核苷类前体物0.57％(其中鸟嘌呤0.12％、尿嘧啶0.30％、腺嘌呤0.15％)、蝉花粉0.11％，其余为水。
发酵结束后，取发酵终点发酵液1000ml，过滤，收集菌丝体于105℃烘1h，称重得菌丝体的质量。
对比例
对比例1
与实施例5的区别在于各培养基中不加核苷酸前体物。
对比例2
与实施例5的区别在于不酶解玉米粉和蚕蛹粉。
对比例3
与实施例5的区别在于各培养基中不加褐藻液。
对比例4
与实施例5的区别在于各培养基中不加核苷酸前体物、褐藻液、蝉花分和植物油等成分，中国被毛孢发酵菌丝体自然发酵。
性能检测试验
一、检测发酵终点中国被毛孢菌丝体中腺苷、鸟苷、尿苷、多糖、D-甘露醇、脂肪酸、麦角甾醇和γ-氨基丁酸的含量。
二、设计正交试验，检测各添加组分对中国被毛孢菌丝体的影响。
检测方法
一、中国被毛孢菌丝体中各活性成分的含量
1.尿苷、鸟苷和腺苷含量的测定
采用高效液相色谱法测定。
取冬虫夏草粉末约0.3g，置50mL具塞三角瓶中，加入沸腾的超纯水20mL，具塞，密封，室温超声30min，摇匀，离心(12000r/min)10min，经0.45μm水系滤头滤过后即得待测样品，上机测定。
色谱条件：WelchAQ-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾(pH5.80)溶液和(0.05mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾)-甲醇＝9:1(pH5.80)溶液，梯度洗脱：用(0.05mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾)-甲醇＝9:1(pH5.80)溶液作为母液，在0％条件下洗脱0–14min，0％–25％条件下洗脱14–25min，25％–90％条件下洗脱25–35min，90％–100％条件下洗脱35–40min，100％条件下洗脱40–50min，100％–0％条件下洗脱50–70min；流速0.6mL/min；柱温25℃；进样体积5μL；检测波长260nm。
2.多糖的测定
采用硫酸一蒽酮比色法进行测定。
准确称取发酵好的冬虫夏草菌丝体3.0g，置于索式提取器中，加乙醚100m于圆底烧瓶中，回流提取至无色(一次脱色)。使虫草渣中残留的乙醚挥发干，30倍量蒸馏水，沸水浴浸提2h，提取两次，于4000r/min离心10min，合并上清夜，浓缩至15mL。浓缩液加乙醇至含醇量为80％，置于4℃冰箱中12h，离心，去除上清液，将沉淀物置于60℃烘箱中烘干，得粗多糖。将粗多糖用蒸馏水溶解，0.2％活性炭脱色(二次脱色)，然后定至100mL，摇匀。用硫酸一蒽酮比色法进行测定后，计算纯多糖的含量。
3.D-甘露醇的测定
采用《中华人民共和国药典》中收录的硫代硫酸钠滴定法测定谱法。
取本品约1g，精密称定，置150ml圆底烧瓶内，精密加入乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置碘瓶中，精密加入高碘酸钠溶液(取硫酸溶液(1→20)90ml与高碘酸钠溶液(2.3→1000)110ml混合制成)50ml。置水浴上加热15分钟，放冷，加碘化钾试液10ml，密塞，放置5分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.05mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液1ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.05mo1/L)相当于0.9109mg甘露醇(C6H4O6)。
4.脂肪酸的测定
采用气相色谱-质谱分析法测定。
称取冬虫夏草粉末约4g，转移至滤纸筒内，将滤纸筒放入脂肪抽提器的抽提筒内，加入石油醚，回流提取6h，于旋转蒸发仪处蒸干，得到一定量的粗脂肪。精密称定粗脂肪150mg，于50mL梨形瓶中，加入0.5mol/L氢氧化钾-甲醇溶液4mL，混匀，沸水回流30min后取出，加入12％的BF3-甲醇溶液5mL，混匀，沸水回流30min后取出，加入异辛烷3mL和饱和氯化钠溶液20mL，振荡15s，继续加入饱和氯化钠溶液至容器颈部，静置待分层后，用一次性注射器吸取上层溶液2mL，再加入无水硫酸钠1g去除痕量水，混匀分层后，取上层经0.22μm有机系针头过滤器过滤后待分析。
色谱条件：AgilentDB-23毛细管柱(30m×320μm，0.25μm)；进样口温度：270℃；载气：氦气；流速1mL/min；进样量1μL，分流比100:1；升温程序：初始温度130℃，保持1min，以6.5℃/min升至170℃，以1.5℃/min从170℃升至215℃，保持12min，以4℃/min升至230℃。
质谱条件：电子轰击离子源(EI)；电子能量70eV；离子源温度230℃；传输线温度280℃；四级杆温度150℃；离子扫描范围15–750m/z，全扫描方式。
5.麦角甾醇的测定
采用气相色谱-质谱分析法测定。
称取冬虫夏草粉末1.5g于50mL的离心管中，加入正己烷溶液6mL，超声1h。12000r/min离心15min，取上清液。去除溶剂，加入0.5mol/L氢氧化钾-乙醇溶液5mL，于85℃下水浴皂化30min，趁热加入乙醇5mL，摇匀。吸取溶液5mL加于氧化铝柱中，以100mL梨形瓶收集洗脱液，打开活塞，放出溶剂直到液面达氧化铝顶层。先用5mL乙醇洗涤不皂化物，再用40mL乙醚洗涤，流速大约为2mL/min。用旋转蒸发仪去除溶剂，用5mL吡啶复溶，取500μL至10mL气相瓶中，加入BSTFA500μL，于70℃下衍生30min，过0.22μm有机滤膜，取续滤液即得待测样品。
气相色谱条件：AgilentDB-5毛细管柱(60m×250μm，0.25μm)；进样口温度：330℃；载气：氦气；流速1.5mL/min；进样量1μL，分流比2:1；升温程序：初始温度80℃，保持2min，以15℃/min升至300℃，保持45min。
质谱条件：电子轰击离子源(EI)；电子能量70eV；离子源温度230℃；传输线温度280℃；四级杆温度150℃；离子扫描范围15–750m/z，全扫描方式。
6.γ-氨基丁酸的测定
样品前处理：水解样品处理时，准确称取样品200mg于试管中并加入15mL浓度为6mol/L的盐酸，混匀抽真空，10min后封管，置110℃的恒温烘箱中水解22h后冷却至室温，摇匀过滤并取滤液1mL到烧杯中并置60℃恒温水浴蒸干，稀释8倍后用滤膜过滤即可；游离样品处理时，准确取800mg样品于10mL塑料离心管中，加入5mLddH2O溶解，10000r/min离心15min，取上清加入等量10％黄基水杨酸溶液，震荡摇匀，10000r/min离心15min，取上清液1mL稀释4倍后过滤即可。
分析条件：仪器名称为日立L-8900型全自动氨基酸分析仪，一个样品分析周期为53min；分离柱的条件为：洗脱液流速0.4mL/min，柱温70℃，柱压8.627Mpa；反应柱的条件为：茚三酮及茚三酮缓冲液流0.35mL/min,柱温135℃,柱压0.892Mpa。
表1中国被毛孢菌丝体中各活性成分的含量
注：各成分添加量单位％，试验结果为中国被毛孢菌丝体中含有各活性成分的量，单位mg/g。
结合表1和对比例4可看出，在各发酵培养基中不加核苷酸前体物、褐藻液、蝉花分和植物油等成分时，最终得到的中国被毛孢发酵菌丝体中尿苷、鸟苷、腺苷、多糖、D-甘露醇、脂肪酸、麦角甾醇和γ-氨基丁酸等活性成分的含量均相对较少，而在各培养基中添加了上述成分的一种或多种成分的中国被毛孢发酵菌丝体中对应的活性成分均较少，由此说明加入上述成分能够提高冬虫夏草菌丝体中的活性成分，从而增强药效。
结合表1和对比例1可看出，在各培养基中不加核苷酸前体物，中国被毛孢发酵菌丝体中尿苷、鸟苷、腺苷的总含量明显较低，说明在各培养基中加入核苷酸前体物，能够增加中国被毛孢发酵菌丝体中尿苷、鸟苷、腺苷的总含量。
结合实施例5和对比例2并结合表1可以看出，若不预先酶解加入培养基中的玉米粉和蚕蛹粉，中国被毛孢发酵菌丝体中多糖的含量及γ-氨基丁酸的含量都较低，说明玉米粉和蚕蛹粉的酶解能够提供大量的多糖和γ-氨基丁酸，为中国被毛孢发酵菌丝体提供活性成分。
结合实施例5和对比例3并结合表1可以看出，在各培养基中不加褐藻液，发酵所得的中国被毛孢发酵菌丝体中D-甘露醇的含量明显减少，以及多糖的含量也相对较少，说明褐藻液可以为中国被毛孢发酵菌丝体提供足量的D-甘露醇和多糖。
二、各添加组分对中国被毛孢菌丝体的影响
1.设计正交试验，按照表2菊芋、维生素C、叶酸的不同添加量进行试验，其他条件与实施例5等同，研究菊芋、维生素C和叶酸对中国被毛孢菌丝体核苷类物质的影响。
表2菊芋、叶酸和维生素C添加量试验结果分析
注：各成分添加量单位％，试验结果为中国被毛孢菌丝体鸟苷、尿苷、腺苷总量，单位mg/g。
正交试验结果分析，试验参数设计满足试验要求，菊芋、叶酸、维生素C的添加量对中国被毛孢菌丝体鸟苷、尿苷和腺苷的提升有一定的影响，维生素C促进中国被毛孢菌吸收叶酸，有利于嘌呤、嘧啶的合成，提高菌丝体生物活性成分；菊芋可促进菌丝体生长增殖，调节代谢，促进矿物质吸收。菊芋、叶酸和维生素C的添加量最佳试验组合为A2B2C2，菊芋最佳添加量为0.30％，叶酸最佳添加量为0.10％，维生素C最佳添加量为0.04％，各因素影响由大到小分别为叶酸添加量影响最大，维生素C添加量和菊芋添加量相同。
2.主要前体物对中国被毛孢菌丝体的影响
设计正交试验，在培养基中同时添加维生素C、叶酸、鸟嘌呤、尿嘧啶和腺嘌呤，其他条件与实施例5等同，研究其对中国被毛孢菌丝体鸟苷、尿苷和腺苷总含量的影响。
表3主要前体物添加量试验结果分析
注：各成分添加量单位％，试验结果为中国被毛孢菌丝体鸟苷、尿苷、腺苷总量，单位mg/g。
正交试验结果分析，试验参数设计满足试验要求，鸟嘌呤、尿嘧啶、腺嘌呤的添加量对中国被毛孢菌丝体鸟苷、尿苷和腺苷总含量的提升有一定的影响，鸟嘌呤、尿嘧啶和腺嘌呤的添加量最佳试验组合为A2B2C3，鸟嘌呤最佳添加量为0.12％，尿嘧啶最佳添加量为0.30％，腺嘌呤最佳添加量为0.20％，各因素影响由大到小分别为尿嘧啶添加量＞鸟嘌呤添加量＞腺嘌呤添加量。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (7)
1.一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，所述方法包括以下步骤：S1、斜面培养：将中国被毛孢菌丝体接种到斜面培养基上恒温培养；S2、摇瓶培养：步骤S1培养好的菌种全部接入摇瓶培养基内恒温培养；S3、种子扩大培养：将步骤S2培养好的菌种按照5.0％～10.0％的接种量接入种子扩大培养基内恒温培养；S4、发酵培养：将步骤S3培养好的菌种按照9.0％～18.0％的接种量接入发酵培养基内恒温培养；S5、发酵带放再培养：将步骤S4中培养好的菌种按20.0～55.0％的接种量接入发酵带放再培养基内恒温培养，至达到放罐要求进行放罐；其特征在于，所述各培养基组成成分如下：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.4～3.6％、土豆汁1.6～4.5％、琼脂2.3～4.8％、蛋白胨0.2～2.0％、磷酸二氢钾0.04～0.35％、硫酸镁0.01～0.06％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.05～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.05～0.15％、蝉花粉0.09～0.20％、植物油0.02～0.15％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.0～4.5％、牛肉膏2.0～4.8％、土豆粉1.0～2.5％、蛋白胨0.8～2.5％、磷酸二氢钾0.03～0.28％、硫酸镁0.01～0.06％、醋酸锌0.01～0.07％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.04～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.05～0.15％、蝉花粉0.09～0.20％、植物油0.02～0.15％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.4～2.5％、酵母膏1.5～3.5％、蛋白胨0.5～2.0％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.25％、醋酸锌0.01～0.05％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.05～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.04～0.15％、蝉花粉0.08～0.20％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖0.6～2.0％、玉米粉1.0～2.5％、蚕蛹粉0.5～2.0％、酵母浸粉0.1～0.8％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.25％、醋酸锌0.01～0.06％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.05～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、褐藻液0.03～0.10％、蝉花粉0.06～0.15％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖0.5～2.0％、玉米粉1.0～2.5％、蚕蛹粉0.5～2.0％、酵母浸粉0.1～1.0％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.25％、醋酸锌0.01～0.05％、维生素C0.02～0.06％、菊芋0.15～0.45％、叶酸0.04～0.15％、核苷类前体物0.33～0.81％、蝉花粉0.06～0.15％，其余为水。
2.根据权利要求1所述的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，其特征在于，所述各培养基组成成分如下：
斜面培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.6～3.0％、土豆汁2.0～3.5％、琼脂2.0～3.8％、蛋白胨0.2～1.5％、磷酸二氢钾0.10～0.25％、硫酸镁0.01～0.04％、维生素C0.03～0.05％、菊芋0.25～0.35％、叶酸0.08～0.12％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.12～0.15％、蝉花粉0.15～0.20％、植物油0.08～0.12％，其余为水；
摇瓶培养基：以重量百分比计，葡萄糖2.5～3.5％、牛肉膏3.0～4.5％、土豆粉1.5～2.0％、蛋白胨1.2～2.0％、磷酸二氢钾0.05～0.15％、硫酸镁0.02～0.05％、醋酸锌0.03～0.06％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.08～0.10％、蝉花粉0.08～0.15％、植物油0.08～0.12％，其余为水；
种子扩大培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.8～2.1％、酵母膏2.0～3.0％、蛋白胨1.2～2.0％、硫酸镁0.02～0.05％、磷酸二氢钾0.05～0.15％、醋酸锌0.01～0.03％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.06～0.10％、蝉花粉0.08～0.15％，其余为水；
发酵培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.2～1.8％、玉米粉1.5～2.5％、蚕蛹粉1.0～2.0％、酵母浸粉0.3～0.8％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.10～0.20％、醋酸锌0.01～0.03％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、褐藻液0.08～0.10％、蝉花粉0.08～0.15％，其余为水；
发酵带放再培养基：以重量百分比计，葡萄糖1.5～2.0％、玉米粉1.5～2.5％、蚕蛹粉1.0～2.0％、酵母浸粉0.3～0.8％、硫酸镁0.01～0.05％、磷酸二氢钾0.10～0.20％、醋酸锌0.01～0.03％、维生素C0.02～0.05％、菊芋0.20～0.36％、叶酸0.08～0.15％、核苷类前体物0.45～0.71％、蝉花粉0.08～0.15％，其余为水。
3.根据权利要求1或2所述的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，其特征在于，所述核苷类前体物包括鸟嘌呤、尿嘧啶和腺嘌呤，以重量百分比计，所述鸟嘌呤占0.08～0.16％，所述尿嘧啶占0.15～0.45％，所述腺嘌呤占0.10～0.20％。
4.根据权利要求1所述的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，其特征在于，所述玉米粉和蚕蛹粉经预处理后加入培养基中，其处理过程为：将玉米粉和蚕蛹粉混合后加水配成液化料，先加入0.30～0.8％的碱性蛋白酶进行酶解；再加入0.2～1.0％的淀粉酶进行酶解，过滤，获得澄清透明料液。
5.根据权利要求1所述的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，其特征在于，所述褐藻液是由蒸馏水浸泡新鲜褐藻粒3～4h，将浸泡液过滤后所得。
6.根据权利要求5所述的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，其特征在于，所述浸泡液先用1mg/mL碳酸钠碱化至pH为9～11，过滤后浸泡液再用1:1醋酸中和至pH为6～7。
7.根据权利要求1所述的一种提高发酵冬虫夏草菌丝体质量的方法，其特征在于，所述植物油可选用大豆油或玉米油。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112795493A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-05-14 | 青海珠峰冬虫夏草原料有限公司 | 一种提高发酵冬虫夏草菌丝体产量的方法 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101058530A (zh) * | 2006-04-18 | 2007-10-24 | 中国科学院海洋研究所 | 一种提取褐藻胶、碘、甘露醇过程中浸泡液的净化方法 |
| CN101518265A (zh) * | 2009-04-08 | 2009-09-02 | 刘伟平 | 蝉拟青霉生物菌剂及制备方法以及在防治植物线虫中的应用 |
| CN101830753A (zh) * | 2010-05-06 | 2010-09-15 | 广东省微生物研究所 | 一种广东虫草子实体高产培养基 |
| TW201139662A (en) * | 2010-05-05 | 2011-11-16 | Univ Ishou | A formula of culturing medium for Cordyceps spp. |
| CN104544131A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-04-29 | 石林昇禾滇湘果业科技有限公司 | 一种人参果维生素c的提取方法 |
| CN105543104A (zh) * | 2016-01-05 | 2016-05-04 | 江苏农林职业技术学院 | 一种野生蝉花的人工驯化栽培固体培养基的优化方法 |
| CN106148198A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-11-23 | 青海珠峰冬虫夏草工程技术研究有限公司 | 一种冬虫夏草液体培养基及其制备方法 |
| CN108676730A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-10-19 | 江西国药有限责任公司 | 一种蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的发酵生产工艺 |
| CN109749941A (zh) * | 2019-02-18 | 2019-05-14 | 福建省微生物研究所 | 蝉拟青霉发酵培养基、蝉拟青霉发酵制备麦角甾醇的方法 |
| CN112795493A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-05-14 | 青海珠峰冬虫夏草原料有限公司 | 一种提高发酵冬虫夏草菌丝体产量的方法 |
-
2021
- 2021-05-24 CN CN202110564998.8A patent/CN113388567A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101058530A (zh) * | 2006-04-18 | 2007-10-24 | 中国科学院海洋研究所 | 一种提取褐藻胶、碘、甘露醇过程中浸泡液的净化方法 |
| CN101518265A (zh) * | 2009-04-08 | 2009-09-02 | 刘伟平 | 蝉拟青霉生物菌剂及制备方法以及在防治植物线虫中的应用 |
| TW201139662A (en) * | 2010-05-05 | 2011-11-16 | Univ Ishou | A formula of culturing medium for Cordyceps spp. |
| CN101830753A (zh) * | 2010-05-06 | 2010-09-15 | 广东省微生物研究所 | 一种广东虫草子实体高产培养基 |
| CN104544131A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-04-29 | 石林昇禾滇湘果业科技有限公司 | 一种人参果维生素c的提取方法 |
| CN105543104A (zh) * | 2016-01-05 | 2016-05-04 | 江苏农林职业技术学院 | 一种野生蝉花的人工驯化栽培固体培养基的优化方法 |
| CN106148198A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-11-23 | 青海珠峰冬虫夏草工程技术研究有限公司 | 一种冬虫夏草液体培养基及其制备方法 |
| CN108676730A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-10-19 | 江西国药有限责任公司 | 一种蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的发酵生产工艺 |
| CN109749941A (zh) * | 2019-02-18 | 2019-05-14 | 福建省微生物研究所 | 蝉拟青霉发酵培养基、蝉拟青霉发酵制备麦角甾醇的方法 |
| CN112795493A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-05-14 | 青海珠峰冬虫夏草原料有限公司 | 一种提高发酵冬虫夏草菌丝体产量的方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| C.-H. DONG等: "Nutritional requirements of mycelial growth of Cordyceps sinensis in submerged culture", 《JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY》 * |
| C.-H. DONG等: "Nutritional requirements of mycelial growth of Cordyceps sinensis in submerged culture", 《JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY》, vol. 99, no. 3, 12 December 2005 (2005-12-12), pages 483 - 492 * |
| 何雯雯等: "蝉花化学成分及人工培养的研究进展", 《中药材》 * |
| 何雯雯等: "蝉花化学成分及人工培养的研究进展", 《中药材》, no. 07, 18 July 2019 (2019-07-18), pages 1691 - 1696 * |
| 李扬眉等: "台湾线虫草人工培养物及其培养基质成分分析", 《安徽农业大学学报》 * |
| 李扬眉等: "台湾线虫草人工培养物及其培养基质成分分析", 《安徽农业大学学报》, no. 06, 29 October 2014 (2014-10-29), pages 988 - 993 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112795493A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-05-14 | 青海珠峰冬虫夏草原料有限公司 | 一种提高发酵冬虫夏草菌丝体产量的方法 |
| CN112795493B (zh) * | 2021-04-02 | 2023-07-07 | 青海珠峰冬虫夏草原料有限公司 | 一种提高发酵冬虫夏草菌丝体产量的方法 |
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