CN105145112A - 一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，该方法以大小为5×10×20cm的龙脑樟段木为基质，经水浸泡处理，高温灭菌，接种牛樟芝菌种进行培养。本发明具有产量高、周期短、功效成分与野生牛樟芝一致、原料来源丰富稳定等特点，其三萜总量不少于80mg/100g，总多糖不少于50mg/100g；实现了牛樟芝宿主范围的扩大，既有利于对资源稀少的牛樟树的保护，又促进了牛樟芝产业的发展，能带来良好的生态效应、社会效应及经济效应。

Description

一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法
技术领域
本发明涉及一种牛樟芝子实体的培育方法，尤其涉及一种以龙脑樟段木为基质培育牛樟芝子实体的方法。
背景技术
牛樟芝(Antrodiacamphorata)又名牛樟菇，为中国台湾地区特有真菌，是迄今牛樟树上发现的唯一木腐菌。其宿主专一性较强，仅生长于牛樟树上，而牛樟树为中国台湾地区特有的保育类树种，数量稀少。牛樟芝含有许多的生理活性成分，如多糖体、三萜类化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白质(含免疫蛋白)、维生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、甾醇类、纤维素、血压稳定物质等。牛樟芝的有效成分中以三萜类化合物为最特别，高达200种以上，是其他菌类无法比拟的，使牛樟芝具有显著的抗癌、保肝等功效。牛樟芝子实体气芳香味辛苦、平，有祛风行气、化淤活血、温中消结、解毒消肿、镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升机体免疫力之效；对于治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有独特功能。
目前关于牛樟芝的人工培育方法，主要有液体深层发酵法、太空包法、皿式培养法及牛樟木段木培育法。以上方法各有其缺点，液体深层发酵法虽然周期短，但是得到的是菌丝体的形式，牛樟芝特有的三萜类化合物不能合成；太空包法及皿式培养法仅有含量极低的三萜类化合物；牛樟芝段木培育法能得到与野生牛樟芝完全一致的子实体，但是需要以牛樟木为基质，存在资源稀少、成本较高的缺点。
龙脑樟树(Cirmamonuncamphora)原产于印尼苏门答腊岛，1988年湖南首次发现有分布，现在已发展龙脑樟林木超过4万亩；随后江西也发展近万亩。
迄今为止，还未有以龙脑樟段木为基质进行牛樟芝栽培的报道。
发明内容
本发明目的是针对现有技术的不足，提供一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，本发明扩大了牛樟芝宿主范围，保护了珍稀的牛樟树资源，子实体与野生牛樟芝功效成分一致，三萜总量不少于80mg/100g，总多糖不少于50mg/100g，促进了牛樟芝产业的发展。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将牛樟芝菌种接种到斜面培养基中，于20-30℃培养10-30d，制得斜面菌种；所述斜面培养基为：龙脑樟提取液10-20mL/L，蔗糖10-30g/L，MgSO4·7H2O0.5-2g/L，K2HPO4·3H2O1-5g/L，维生素B15-10mg/L，琼脂15-20g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH为6.0-7.0；其中，所述龙脑樟提取液为：龙脑樟木料粉碎，过40目筛，得龙脑樟木料粉，按照龙脑樟木料粉和水的质量比1:200加水，常压煮沸2小时，过滤得龙脑樟提取液；所述马铃薯提取液为：马铃薯100-300g去皮切块，得马铃薯块，按照马铃薯块和水的质量比1-3:10加水，常压煮沸30min，过滤得马铃薯提取液。
(2)用无菌水冲洗步骤1制得的斜面菌种的孢子，制成孢子悬液，并用无菌水将孢子悬液的OD600调整为1.5；
(3)将步骤2制成的孢子悬液按5％-10％(v/v)的比例接种到液体菌种培养基，于25-35℃、100-200r/min条件下，避光培养5-25d，制得液体菌种；所述液体菌种培养基为：龙脑樟提取液10-20mL/L，蔗糖10-30g/L，MgSO4·7H2O0.5-2g/L，K2HPO4·3H2O1-5g/L，维生素B15-10mg/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH为6.0-7.0；
(4)将龙脑樟木料分解成5×10×20cm的段木，用水浸泡12-48h，然后121℃灭菌20-60min。冷却后，将步骤3制得的液体菌种接种到龙脑樟段木上。
(5)于25-35℃、湿度70％-90％条件下，避光培养1-12个月。
(6)铲掉龙脑樟木段木表面的牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于20-40℃、湿度70％-90％，避光培养12-36个月，即可得到牛樟芝子实体。
进一步地，采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤(5)和(6)，可再收获1-2次牛樟芝子实体。
本发明的有益效果是：本发明具有产量高、周期短、功效成分与野生牛樟芝一致、原料来源丰富稳定等特点，其三萜总量不少于80mg/100g，总多糖不少于50mg/100g；实现了牛樟芝宿主范围的扩大，既有利于对资源稀少的牛樟树的保护，又促进了牛樟芝产业的发展，能带来良好的生态效应、社会效应及经济效应。
附图说明
图1为正在培养中的牛樟芝子实体的实物图；
图2为采收后的牛樟芝子实体的实物图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明进行进一步的描述，但本发明所保护的范围并不仅限于此：
实施例1：牛樟芝子实体培育
1.配制斜面培养基：龙脑樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，K2HPO4·3H2O1g/L，维生素B15mg/L，琼脂15g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH6.0。龙脑樟提取液为：龙脑樟木料粉碎，过40目筛，得龙脑樟木料粉，按照龙脑樟木料粉和水的质量比1:200加水，常压煮沸2小时，过滤得龙脑樟提取液；马铃薯提取液为：马铃薯100-300g去皮切块，得马铃薯块，按照马铃薯块和水的质量比1-3:10加水，常压煮沸30min，过滤得马铃薯提取液。
2.将牛樟芝菌种接种到斜面培养基，于20℃避光培养7-20d，制得斜面菌种。
3.用无菌水洗下斜面菌种上的孢子，用无菌水将孢子悬液的OD600调整为1.5，以5％(v/v)的接种量接入液体种子培养基，于28℃、200r/min条件下，避光培养3d。所述液体种子培养基配方：液体种子培养基：龙脑樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，K2HPO4·3H2O1g/L，维生素B15mg/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH6.0。
4.龙脑樟木料分解成大小为5×10×20cm的段木，用水浸泡8h，然后121℃高温灭菌20min。冷却后，将液体菌种接种到龙脑樟段木。
5.于20℃、湿度70％条件下，避光培养1-12个月。
6.铲掉龙脑樟木段木表面牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于20℃、湿度70％，避光培养12-36个月，可得到牛樟芝子实体。
7.采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤5和6，可再收获1-2次牛樟芝子实体。
实施例2：牛樟芝子实体培育
1.配制斜面培养基：龙脑樟提取液15mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，K2HPO4·3H2O3g/L，维生素B17mg/L，琼脂18g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH6.5。
2.将牛樟芝菌种接种到斜面培养基，于25℃避光培培养7-20d，制得斜面菌种。
3.用无菌水洗下斜面菌种上的孢子，用无菌水将孢子悬液的OD600调整为1.5，以8％(v/v)的接种量接入液体种子培养基，于28℃、200r/min条件下，避光培养5d。所述液体种子培养基配方：龙脑樟提取液15mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，K2HPO4·3H2O3g/L，维生素B17mg/L，琼脂18g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH6.5。
4.龙脑樟木料分解成大小为5×10×20cm的段木，用水浸泡12h，然后121℃高温灭菌40min。冷却后，将液体菌种接种到龙脑樟段木。
5.于25℃、湿度80％条件下，避光培养1-12个月。
6.铲掉龙脑樟木段木表面牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于25℃、湿度80％，避光培养12-36个月，可得到牛樟芝子实体。
7.采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤5和6，可再收获1-2次牛樟芝子实体。
实施例3：牛樟芝子实体培育
1.配制斜面培养基：龙脑樟提取液20mL/L，蔗糖30g/L，MgSO4·7H2O2g/L，K2HPO4·3H2O5g/L，维生素B110mg/L，琼脂20g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH7.0。
2.将牛樟芝菌种接种到斜面培养基，于28℃避光培养7-20d，制得斜面菌种。
3.用无菌水洗下斜面菌种上的孢子，用无菌水将孢子悬液的OD600调整为1.5，以10％(v/v)的接种量接入液体种子培养基，于28℃、200r/min条件下，避光培养7d。所述液体种子培养基配方：龙脑樟提取液20mL/L，蔗糖30g/L，MgSO4·7H2O2g/L，K2HPO4·3H2O5g/L，维生素B110mg/L，琼脂20g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH7.0。
4.龙脑樟木料分解成大小为5×10×20cm的段木，用水浸泡48h，然后121℃高温灭菌40min。冷却后，将液体菌种接种到龙脑樟段木。
5.于28℃、湿度90％条件下，避光培养1-12个月。
6.铲掉龙脑樟木段木表面牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于28℃、湿度90％，避光培养12-36个月，可得到牛樟芝子实体。
7.采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤5和6，可再收获1-2次牛樟芝子实体。
经检测，实施例1-3收获的牛樟芝子实体的三萜总量均不少于80mg/100g，总多糖均不少于50mg/100g。
野生牛樟芝专一寄生于几十年树龄的牛樟树上，牛樟树为台湾特有保育树种，极为稀少，禁止出口砍伐，这就造成了牛樟芝栽培原料的匮乏。龙脑樟树(Cirmamonuncamphora)原产于印尼苏门答腊岛，1988年湖南首次发现有分布，现已发展龙脑樟林木超过4万亩；随后江西也发展近万亩，资源丰富。
本发明以龙脑樟段木培育牛樟芝子实体，拓展了牛樟芝宿主范围，原料资源丰富易得、成本较低；子实体有效成分与野生完全一致，其三萜总量不少于80mg/100g，总多糖不少于50mg/100g；有利于降低牛樟芝产品价格，惠及民生；间接保护了牛樟树资源，摆脱了牛樟树资源匮乏的限制。
以上所述仅为本发较有代表性的实例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (2)

1.一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）将牛樟芝菌种接种到斜面培养基中，于20-30℃培养10-30d，制得斜面菌种；所述斜面培养基为：龙脑樟提取液10-20mL/L，蔗糖10-30g/L，MgSO4·7H2O0.5-2g/L，K2HPO4·3H2O1-5g/L，维生素B15-10mg/L，琼脂15-20g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH为6.0-7.0；其中，所述龙脑樟提取液为：龙脑樟木料粉碎，过40目筛，得龙脑樟木料粉，按照龙脑樟木料粉和水的质量比1:200加水，常压煮沸2小时，过滤得龙脑樟提取液；所述马铃薯提取液为：马铃薯100-300g去皮切块，得马铃薯块，按照马铃薯块和水的质量比1-3:10加水，常压煮沸30min，过滤得马铃薯提取液；
（2）用无菌水冲洗步骤1制得的斜面菌种的孢子，制成孢子悬液，并用无菌水将孢子悬液的OD 600调整为1.5；
（3）将步骤2制成的孢子悬液按5%-10%（v/v）的比例接种到液体菌种培养基，于25-35℃、100-200r/min条件下，避光培养5-25d，制得液体菌种；所述液体菌种培养基为：龙脑樟提取液10-20mL/L，蔗糖10-30g/L，MgSO4·7H2O0.5-2g/L，K2HPO4·3H2O1-5g/L，维生素B15-10mg/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH为6.0-7.0；
（4）将龙脑樟木料分解成5×10×20cm的段木，用水浸泡12-48h，然后121℃灭菌20-60min；
冷却后，将步骤3制得的液体菌种接种到龙脑樟段木上；
（5）于25-35℃、湿度70%-90%条件下，避光培养1-12个月；
（6）铲掉龙脑樟木段木表面的牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于20-40℃、湿度70%-90%，避光培养12-36个月，即可得到牛樟芝子实体。
2.根据权利要求1所述利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，其特征在于，采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤（5）和（6），可再收获1-2次牛樟芝子实体。
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