CN1029382C - 北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法 - Google Patents
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Abstract
公开了一种北冬虫夏草菌人工栽培子实体方法，该方法采用的是C868菌种。该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC NO.0193。将菌种接种在固体或液体培养基上，或是接种在蚕蛹活体上，经过培养即可得到子实体。由本发明方法获得的北冬虫夏草菌人工栽培子实体，其营养和药用价值均超过天然的冬虫夏草。为我国开辟了一个新的营养源和药源。可用于治疗疾病和保健品及化妆品等。
Description
本发明涉及一种药用食用菌的栽培方法，尤其是北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法。
现有的冬虫夏草药材多为天然生成的。在88103453.3号专利申请中公开了一种人工栽培冬虫夏草菌的方法，该方法是将孢子接种于虫草蝙蝠蛾幼虫上，幼虫体内充满虫草菌而死亡成为僵虫，经2个月后从虫体头部抽出子座，用散射光照射后，子座成熟即为冬虫夏草。该方法培育时间长，产量低。
本发明的目的在于提供一种北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法，以弥补天然冬虫夏草的短缺。
本发明的北冬虫夏草菌Cordyceps mlitaris（L.）Link，又名蛹草，北虫草，在沈阳市郊区采集的，经人工驯化培育，长出外形与野生北冬虫夏草菌一样的子实体，分离得到的纯菌种，定名为辽宁虫草C868，无性阶段属头孢霉属Cephalosporlum，分生孢子梗和小梗细长，分生孢子无色。该菌种在试管斜面开始生长为白色绒毛状，20-25℃，6-7天长满试管斜面，在弱光下变为桔黄色，气生菌丝发达，菌丝爬壁力强。本菌种已保藏在北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC NO.0193，1993年4月1日登记入册。
本发明人工栽培所得到的北冬虫夏草菌子实体呈棒形，橙黄或橙红色，成熟时，生长成近圆锥形子囊壳，子囊壳顶部露出表面，呈乳头状突起，每个子囊内有8条线形子囊孢子。据中国科学院沈阳应用生态研究所测定，具有很高的营养价值和药用成份。其蛋白质含量和V0、VB2、VA、VB、VB3、VB12、菸酸，虫草酸，微量元素硒的含量均超过天然冬虫夏草（见附表），人工栽培的北冬虫夏草是唯一能形成虫草素的种，因此，北冬虫夏草菌的发现及人工栽培的成功，为我国开辟了一个新的营养源和药源。
本发明北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法包
括以下步骤：
a、菌种分离：将野外采集的新鲜北冬早夏草子座经消毒后或采用孢子分离法，接种在菌种培养基上，在20-25℃温度下培养一周，得到纯菌种C868;
b、菌丝接种：将上述菌种接种在经过灭菌的固体或液体子实体培养基上，配制的固体培养基pH值为7.5-8;
c、菌丝培养：菌丝培养阶段，可在黑暗条件下或每天用40瓦日光灯照射1小时，温度为18-25℃，相对湿度为60-65%，菌丝长满瓶后，松动封口膜或扎针眼通气;
d、子实体培养：在子实体培养阶段要有自然光照射，温度为18-25℃，相对湿度为80-85%;固体培养15天之后，可长出橙黄或橙红色子实体。
下面结合实施例详细说明本发明：
例1，将分离得到的北冬虫夏草菌C868接种于菌种培养基上，在20-25℃温度下培养一周，得到母种菌丝体。
培养基配方：马铃薯20%，葡萄糖1-2%，蛋白胨0.2%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，维生素B10.001%，琼脂1.7-2%。
例2，在一个500ml罐头瓶中装入30克大米或等量的小米、玉米碴、高粱粒、再加50毫升水，pH值调到7.5-8，（也可加入柞蚕、桑蚕幼虫粉碎物或5毫升鸡蛋清和蛋黄搅拌的蛋液或3%的土豆汁）用聚丙烯薄膜封瓶口，胶圈扎紧，放入高压灭菌锅中，1.5公斤/厘米2高压灭菌30分钟，凉后取出，即得到子实体培养的固体培养基。在无菌条件下，把例1中的母种菌丝一小块或是液体菌种（按常规法制作）2毫升，接种在上述固体培养基上。放在黑暗室内或每天用40瓦日光灯照1小时，室温20℃，菌丝发好后，放在自然光照下，松动封口膜或扎针眼通气，培养15-20天，便可长出橙黄或橙红色的北冬虫夏草菌子实体，当子实体成熟时即可采收。
例3，取蚕茧（柞蚕或桑蚕茧），剪去茧壳，挑选健康无病活蛹，用75%酒精棉球作表面消毒，每个罐头瓶中放入4-6个蛹，在无菌室内用毛笔沾液体菌种均匀涂抹在蛹体上，聚丙烯薄膜封闭瓶口，胶圈轧紧，放在例2相同的条件下培养，约经40天，长出子实体，待子实体长成熟后，可带蛹取出，采收或阴干保存。
例4，在各种容量规格的三角瓶中，放入容量1/4数量的液体培养基：玉米麦芽汁或大米麦芽汁均可。如500毫升的三角瓶放入125毫升的麦芽汁，用棉花塞塞瓶口，高压灭菌，方法同例1，在无菌条件下，接入母种菌丝一小块，静置培养约经50天，可长出子实体。
本发明的优点是：
该北冬虫夏草菌种具有以下优点：
1、生长周期短，在适宜的生态条件下，接种后15-20天即可出现子实体，30-40天即可采收。
2、产量高，采用一般的培养基配方、生物转化率高达90-100%。
3、品质好，营养与药用价值高。用该菌种人工栽培的北冬出夏草子实体其营养与药用成份均高于天然冬早夏草。（1）蛋白质含量高，蛋白质由19种氨基酸组成，不但种类齐全，且数量充足，比例适当。（2）含有22种微量元素，尤以硒、锗、锌、钙、锰、钼、钾、镁、磷等含量丰富，被称为“抗癌之王”的硒元素含量是冬虫夏草的3倍。锌、铜比为4.45∶1比例恰当。（3）含有9种维生素VA、VE、VD3、VB1、VB2、VB12、VB6、VC和菸酸，专家评价：“在食物成分表中任何一种食物都不可以拟，如VA的含量是猪肝的13倍，VB2的含量是猪肝的84倍，人乳的4338倍，蛹虫草（干）维生素营养价值之高可谓是惊人的发现。”（4）含有虫草多糖，收率为3.1%，其药效活性与银耳多糖很相似，能提高人体免疫力，起扶正固本作用。（5）含有SOD酶，具有抗多种疑难病症的作用。如抗红斑狼疮，类风湿，皮肌炎，防辐射，抗癌，并且有抗衰老和美容肌肤的功效。（6）含有虫草酸，可预防和治疗脑血栓，脑栓塞，血管痉挛、脑溢血等症，又可排除毒素，治疗肾功能衰竭，利尿等。（7）含有虫草素，虫草素对枯草杆菌，鸟型结核杆菌，人鼻咽癌KB细胞，人体表样疣，鼠艾氏腹水疣及Hela细胞等皆有明显拮抗或抑制作用。它的抗菌范围：链球菌、鼻疽杆菌、葡萄球菌、癣菌。（8）核苷酸类衍生物：脲嘧啶为1.08mg/100ml腺嘌呤为0.8mg/100ml，肌苷为0.405mg/100ml，麦角甾醇为15.2mg/100ml。
该北冬虫夏草菌人工栽培的子实体经毒性测定为无毒物质。因此，北冬虫夏草菌作为食品系列和药用保健品对人体健康是安全可靠的。可用于治疗疾病和做滋补品及饮料原料，还可做保健药品，化妆品。子实体采收后，培养基可做饲料添加剂等。
本发明成本低，设备简单，可以工厂化生产，以解决天然北冬虫夏草资源不足，满足市场和医药卫生事业的需要。
附表：北冬虫夏草与冬虫夏草几种主要物质含量比较（mg/g）
项目 人工栽培的 天然冬 备注
北冬虫夏草 虫夏草
蛋白质（%） 40.688 25.437 由中国
维生素VC 0.768 未测 科学院
VB21.735 未测 沈阳应
VA 0.347 0.315 用生态
VB10.13 0.05 研究所
VB60.622 0.09 测定
VB120.703 0.02
菸酸 0.427 0.082
D-甘露醇 117.96 76.81
（虫草酸）
微量元素硒 0.44 0.14
（ppm）
虫草素 10.8- -
15.2
超氧化物岐 54 0
化酶（SOD）
u/mg蛋白
Claims (9)
1、一种北冬虫夏草菌Cordyceps militaris(L.)Link，其特征在于是从沈阳市郊区采集的，经组织分离或孢子分离法得到纯菌种，定名为辽宁虫草C868，无性阶段属头孢霉属Cenhalosporlum，该菌种在试管斜面开始生长为白色绒毛状，20-25℃，6-7天长满试管斜面，在弱光下，变为桔黄色，气生菌丝发达，菌丝爬壁力强，其保藏号为CGMCC，NO.0193。
2、一种北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法，包括：
a、菌种分离：将野外采集的新鲜北冬虫夏草子座经消毒后或采用孢子分离法，接种在菌种培养基上，在20-25℃温度下培养一周，得到纯菌种C868;
b、菌丝接种：将上述菌种接种在经过灭菌的固体或液体子实体培养基上，配制的固体培养基pH值为7.5-8;
c、菌丝培养：菌丝培养阶段，可在黑暗条件下或每天用40瓦日光灯照射1小时，温度为18-25℃，相对湿度为60-65%，菌丝长满瓶后，松动封口膜或扎针眼通气;
d、子实体培养：在子实体培养阶段要有自然光照射，温度为18-25℃，相对湿度为80-85%;固体培养15天之后，可长出橙黄色或橙红色子实体。
3、如权利要求2所述的方法，其特征在于菌种培养基为：马铃薯20%，葡萄糖1-2%，蛋白胨0.2%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，维生素B10.001%，琼脂1.7-2%。
4、如权利要求2所述的方法，其特征在于固体子实体培养基为大米、小米、玉米碴或高梁粒，按1∶1.6-1∶2.0的比例加入水后，pH值调到7.5-8，经高压灭菌制得。
5、如权利要求4所述的方法，其特征在于在上述固体培养基中可加入蚕幼虫体粉碎物或鸡蛋液或土豆汁。
6、如权利要求2所述的方法，其特征在于液体子实体培养基为玉米麦芽汁或大米麦芽汁。
7、如权利要求2所述的方法，其特征在于无菌条件下用液体菌种涂抹在蚕蛹活体上，在容器中培养，温度18-25℃。
8、如权利要求2所述的方法，其特征在于接种用的菌种是一小块母种菌丝或是液体菌种。
9、如权利要求2所述的方法，其特征在于培养基接种后，最好是在恒温20℃条件下培养。
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