CN104255299B - 一种北虫草栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种北虫草栽培方法,通过将菌种依次在母种培养基、液体培养基、栽培种培养基中培养,得到子实体,后将得到的子实体进行活体蚕蛹复壮法,获得最佳虫草,初步探索出了一套行之有效的北虫草栽培方法,透过稳定而良好的技术大大的提高了虫草的生物转化率,为这种珍贵的天然中药的低价量产和品质提升,开创了良好的基础,解决了现有技术中存在的人工培育北虫草品质低劣的问题。
Description
技术领域
本发明属于虫草栽培技术领域,具体涉及一种北虫草栽培方法。
背景技术
北虫草俗称虫草,为中国名贵中药材。据《本草纲目》、《本草从新》、《本草纲目拾遗》等记载,北虫草具有“保肺益肾,秘精益气,止血化痰,能治诸虚百损,专补命门”之功效。几千年来虫草一直被列为滋补药物之首,并有“东方传奇式珍宝”之美誉,但由于虫草在自然界天然生长所需条件极高导致其产量极少,货源奇缺。因此其价格始终居高不下,也由此限制了其应用与推广的范围。
随着上一世纪末海内外华人经济条件的普遍好转,以及对生存质量的逐步升级,造成了全球对天然虫草“掠夺性”的开发,加之自然生态环境的日益破坏,从尔导致天然虫草资源的日益枯竭。
据权威部门统计,目前全球天然虫草的年产量已不足10吨,且还在逐年减少。而每年的市场需求远远大于其产量,需求矛盾使得虫草价格节节攀高,流通领域的假冒伪劣品充斥市场。
20世纪90年代以来,对作为药物和保健食品的北虫草的药化药理、毒理和毒性等进行了大量的分析和安全评价,证明人工栽培的虫草无毒副作用,具有明显的镇静、抗疲劳、抗肿瘤、抑制癌细胞和具有雄性激素样作用,可增强机体免疫功能等,作为药品和食品使用对人体健康是安全可靠的。2007年国家高技术研究发展计划(863计划)已将北虫草开发与规模化生产列入重点研究项目。因此开发北虫草及其活性成分资源不仅有很高的经济价值,而且有很重要的社会效益。
发明内容
本发明的目的是提供一种北虫草栽培方法,解决了现有技术中存在的人工培育北虫草品质低劣的问题。
本发明所采用的技术方案是,一种北虫草栽培方法,具体按照以下步骤实施:
步骤1,将菌种接种在母种培养基内进行栽培,第1-3天的培养温度为20-22℃,第4-6天的培养温度为19-21℃,得到试管母种;
步骤2,将步骤1得到的试管母种接种在液体培养基中进行培养,先在室温下静置23-24h,然后放入摇床中培养6-7天,控制温度为20-22℃,转速为130-180r/min,刚出现液体菌种时停止培养,得到液体菌种;
步骤3,将步骤2得到的液体菌种接种在栽培种培养基中,然后将栽培种培养基放入恒温培养箱中,第1-3天的温度为20-22℃,第4-8天的温度为19-21℃,8天后取出液体菌种放在培养架上,调节温度至17-19℃,湿度控制在75%-85%之间,光照13-15小时/天,第10-13天时调节温度至16-18℃,湿度控制在80%-85%之间,光照13-15小时/天,待子实体长至5-7cm时调节温度至15-17℃,等到子实体长至8-12cm时即可采收;
步骤4,活体蚕蛹复壮,将步骤3得到的8-12cm无损伤的子实体进行组织分离获得母种,母种培养完成后接入液体培养基中,液体培养基中培养完成后接入新鲜的活体柞蚕蛹中,形成蛹虫草子实体后再经组织分离获得最佳虫草。
本发明的特点还在于,
步骤1中的母种培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去表皮洋葱15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,酵母膏0.03%-0.08%,磷酸二氢钾0.01%-0.03%,硫酸镁0.005%-0.015%,维生素B10.005%-0.015%,琼脂0.15%-0.25%,蒸馏水70-80%,以上组分的含量百分比总和为100%。
步骤1中的母种培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去表皮洋葱15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,酵母膏0.03%-0.08%,磷酸二氢钾0.01%-0.03%,硫酸镁0.005%-0.015%,维生素B10.005%-0.015%,琼脂0.15%-0.25%,蒸馏水70-80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去表皮洋葱切片放入锅中,加入蒸馏水,去表皮洋葱与蒸馏水的质量比为1:3-4,沸水煮8-12分钟,用7-9层医用纱布过滤,得到滤液①,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液②,备用;
4)将步骤1)中称取的琼脂剪碎成条,加入蒸馏水,琼脂与蒸馏水的质量比为1:2-3,加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至琼脂溶解,得到琼脂溶液③,备用;
5)将上述滤液①、溶液②、琼脂溶液③置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至各成分充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液①、溶液②、琼脂溶液③的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
6)将步骤5)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115-125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25-35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至55-65℃时取出密闭容器,待混合溶液冷却凝固后放入温度为35-38℃的恒温培养箱中一天,确认无菌后得到母种培养基。
步骤2中的液体培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去皮土豆15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,玉米粉0.6%-1.2%,磷酸二氢钾0.5%-1.5%,硫酸镁0.2%-0.8%,蒸馏水70%-80%,以上组分的含量百分比总和为100%。
步骤2中的液体培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去皮土豆15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,玉米粉0.6%-1.2%,磷酸二氢钾0.5%-1.5%,硫酸镁0.2%-0.8%,蒸馏水70%-80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去皮土豆切成条状放入锅中,加蒸馏水,去皮土豆与蒸馏水的质量比为1:3-4,沸水煮13-16分钟,用7-9层医用纱布过滤,得到滤液④,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液⑤,备用;
4)将上述滤液④、溶液⑤置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液④、溶液⑤的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
5)将步骤4)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115-125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25-35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至40-50℃时取出密闭容器,后冷却至室温,得到液体培养基。
本发明的有益效果是,一种北虫草栽培方法,通过将菌种依次在母种培养基、液体培养基、栽培种培养基中培养,得到菌种,后将得到的菌种进行活体蚕蛹复壮法,获得最佳母种,初步探索出了一套行之有效的北虫草栽培方法,透过稳定而良好的技术大大的提高了虫草的生物转化率,为这种珍贵的天然中药的低价量产和品质提升,开创了良好的基础。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
一种北虫草栽培方法,具体按照以下步骤实施:
步骤1,将菌种接种在母种培养基内进行栽培,第1-3天的培养温度为20-22℃,第4-6天的培养温度为19-21℃,得到试管母种,其中,母种培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去表皮洋葱15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,酵母膏0.03%-0.08%,磷酸二氢钾0.01%-0.03%,硫酸镁0.005%-0.015%,维生素B10.005%-0.015%,琼脂0.15%-0.25%,蒸馏水70-80%,以上组分的含量百分比总和为100%,母种培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去表皮洋葱15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,酵母膏0.03%-0.08%,磷酸二氢钾0.01%-0.03%,硫酸镁0.005%-0.015%,维生素B10.005%-0.015%,琼脂0.15%-0.25%,蒸馏水70-80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去表皮洋葱切片放入锅中,加入蒸馏水,去表皮洋葱与蒸馏水的质量比为1:3-4,沸水煮8-12分钟,用7-9层医用纱布过滤,得到滤液①,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液②,备用;
4)将步骤1)中称取的琼脂剪碎成条,加入蒸馏水,琼脂与蒸馏水的质量比为1:2-3,加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至琼脂溶解,得到琼脂溶液③,备用;
5)将上述滤液①、溶液②、琼脂溶液③置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至各成分充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液①、溶液②、琼脂溶液③的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
6)将步骤5)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115-125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25-35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至55-65℃时取出密闭容器,待混合溶液冷却凝固后放入温度为35-38℃的恒温培养箱中一天,确认无菌后得到母种培养基。
步骤2,将步骤1得到的试管母种接种在液体培养基中进行培养,先在室温下静置23-24h,然后放入摇床中培养6-7天,控制温度为20-22℃,转速为130-180r/min,刚出现液体菌种时停止培养,得到液体菌种,其中,液体培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去皮土豆15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,玉米粉0.6%-1.2%,磷酸二氢钾0.5%-1.5%,硫酸镁0.2%-0.8%,蒸馏水70%-80%,以上组分的含量百分比总和为100%,液体培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去皮土豆15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,玉米粉0.6%-1.2%,磷酸二氢钾0.5%-1.5%,硫酸镁0.2%-0.8%,蒸馏水70%-80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去皮土豆切成条状放入锅中,加蒸馏水,去皮土豆与蒸馏水的质量比为1:3-4,沸水煮13-16分钟,用7-9层医用纱布过滤,得到滤液④,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液⑤,备用;
4)将上述滤液④、溶液⑤置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液④、溶液⑤的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
5)将步骤4)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115-125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25-35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至40-50℃时取出密闭容器,后冷却至室温,得到液体培养基。
步骤3,将步骤2得到的液体菌种接种在栽培种培养基中,然后将栽培种培养基放入恒温培养箱中,第1-3天的温度为20-22℃,第4-8天的温度为19-21℃,8天后取出液体菌种放在培养架上,调节温度至17-19℃,湿度控制在75%-85%之间,光照13-15小时/天,第10-13天时调节温度至16-18℃,湿度控制在80%-85%之间,光照13-15小时/天,待子实体长至5-7cm时调节温度至15-17℃,等到子实体长至8-12cm时即可采收;
步骤4,活体蚕蛹复壮,将步骤3得到的8-12cm无损伤的子实体进行组织分离获得母种,母种培养完成后接入液体培养基中,液体培养基中培养完成后接入新鲜的活体柞蚕蛹中,形成蛹虫草子实体后再经组织分离获得最佳虫草。
一种北虫草栽培方法,通过将菌种依次在母种培养基、液体培养基、栽培种培养基中培养,得到菌种,后将得到的菌种进行活体蚕蛹复壮法,获得最佳母种,初步探索出了一套行之有效的北虫草栽培方法,透过稳定而良好的技术大大的提高了虫草的生物转化率,为这种珍贵的天然中药的低价量产和品质提升,开创了良好的基础。
实施例1
步骤1,将菌种接种在母种培养基内进行栽培,第1-3天的培养温度为20℃,第4-6天的培养温度为19℃,得到试管母种,其中,母种培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去表皮洋葱15%,葡萄糖1.5%,酵母膏0.03%,磷酸二氢钾0.01%,硫酸镁0.015%,维生素B10.015%,琼脂0.15%%,蒸馏水80%,以上组分的含量百分比总和为100%,母种培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去表皮洋葱15%,葡萄糖1.5%,酵母膏0.03%,磷酸二氢钾0.01%,硫酸镁0.015%,维生素B10.015%,琼脂0.15%,蒸馏水80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去表皮洋葱切片放入锅中,加入蒸馏水,去表皮洋葱与蒸馏水的质量比为1:3,沸水煮8分钟,用7层医用纱布过滤,得到滤液①,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液②,备用;
4)将步骤1)中称取的琼脂剪碎成条,加入蒸馏水,琼脂与蒸馏水的质量比为1:2,加热并不断搅拌,温度控制在90℃,直至琼脂溶解,得到琼脂溶液③,备用;
5)将上述滤液①、溶液②、琼脂溶液③置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90℃,直至各成分充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液①、溶液②、琼脂溶液③的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
6)将步骤5)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至65℃时取出密闭容器,待混合溶液冷却凝固后放入温度为35℃的恒温培养箱中一天,确认无菌后得到母种培养基。
步骤2,将步骤1得到的试管母种接种在液体培养基中进行培养,先在室温下静置23h,然后放入摇床中培养6天,控制温度为22℃,转速为130r/min,刚出现液体菌种时停止培养,得到液体菌种,其中,液体培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去皮土豆15%,葡萄糖2.5%,玉米粉0.6%,磷酸二氢钾1.5%,硫酸镁0.2%,蒸馏水70%,以上组分的含量百分比总和为100%,液体培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去皮土豆15%,葡萄糖2.5%,玉米粉0.6%,磷酸二氢钾1.5%,硫酸镁0.2%,蒸馏水70%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去皮土豆切成条状放入锅中,加蒸馏水,去皮土豆与蒸馏水的质量比为1:4,沸水煮13分钟,用9层医用纱布过滤,得到滤液④,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液⑤,备用;
4)将上述滤液④、溶液⑤置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在100℃,直至充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液④、溶液⑤的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
5)将步骤4)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至50℃时取出密闭容器,后冷却至室温,得到液体培养基。
步骤3,将步骤2得到的液体菌种接种在栽培种培养基中,然后将栽培种培养基放入恒温培养箱中,第1-3天的温度为20℃,第4-8天的温度为21℃,8天后取出液体菌种放在培养架上,调节温度至19℃,湿度控制在85%之间,光照13小时/天,第10-13天时调节温度至16℃,湿度控制在85%之间,光照13小时/天,待子实体长至5cm时调节温度至15℃,等到子实体长至12cm时即可采收;
步骤4,活体蚕蛹复壮,将步骤3得到的12cm无损伤的子实体进行组织分离获得母种,母种培养完成后接入液体培养基中,液体培养基中培养完成后接入新鲜的活体柞蚕蛹中,形成蛹虫草子实体后再经组织分离获得最佳虫草。
实施例2
步骤1,将菌种接种在母种培养基内试栽培,第1-3天的培养温度为22℃,第4-6天的培养温度为19℃,得到菌丝,其中,母种培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1),称量原料,按质量百分比称取去表皮洋葱25%,葡萄糖1.5%,酵母膏0.08%,磷酸二氢钾0.01%,硫酸镁0.005%,维生素B10.015%,琼脂0.25%,蒸馏水80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2),将1)中称取的去表皮洋葱切片放入锅中,加入80%蒸馏水,沸水煮12分钟,用9层医用纱布过滤,得到滤液①,备用;
3),将1)中称取的葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1置于容器中,加入蒸馏水至充分溶解,得到溶液②,备用;
4),将1)中称取的琼脂剪碎成条,加入30%-40%蒸馏水加热溶解,得到琼脂溶液③,备用;
5),将上述滤液①、溶液②、琼脂溶液③置于容器中加热至各成分充分溶解,再次加入30-40%蒸馏水得到混合溶液;
6)将5)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至55℃时取出密闭容器,待混合溶液冷却凝固后放入温度为38℃的恒温培养箱中一天,确认无菌后得到母种培养基备用。
步骤2,将步骤1得到的菌丝接种在液体培养基中进行培养,先在室温下静置23h,然后放入摇床中培养7天,控制温度为22℃,转速为180r/min,刚出现液体菌种时停止培养,得到液体菌种,其中,液体培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1),称量原料,按质量百分比称取去皮土豆25%,葡萄糖2.5%,玉米粉1.2%,磷酸二氢钾1.5%,硫酸镁0.8%,蒸馏水80%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2),将1)中称取的去皮土豆切成条状放入锅中,加蒸馏水80%,沸水煮16分钟,用9层医用纱布过滤,得到滤液④,备用;
3),将1)中称取的葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁置于容器中,加入20%的蒸馏水至充分溶解,得到溶液⑤,备用;
4),将上述滤液④、溶液⑤置于容器中加热至充分溶解,并不断搅拌,再次加入70%蒸馏水得到混合溶液;
5)将4)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至40℃时取出密闭容器,后冷却至室温,得到母种培养基。
步骤3,将步骤2得到的液体菌种接种在栽培种培养基中,然后将栽培种培养基放入恒温培养箱中,第1-3天的温度为20℃,第4-8天的温度为19℃,8天后取出液体菌种放在培养架上,调节温度至19℃,湿度控制在75%之间,光照13小时/天,第十天时调节温度至16℃,湿度控制在85%之间,光照13小时/天,待子实体长至5cm时调节温度至15℃,等到子实体长至8cm时即可采收;
步骤4,活体蚕蛹复壮,将步骤3得到的8cm无损伤的子实体进行组织分离获得母种,母种培养完成后接入液体培养基中,液体培养基中培养完成后接入新鲜的活体柞蚕蛹中,经刺激形成蛹虫草子实体后再经组织分离获得最佳母种。
实施例3
步骤1,将菌种接种在母种培养基内进行栽培,第1-3天的培养温度为21℃,第4-6天的培养温度为20℃,得到试管母种,其中,母种培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去表皮洋葱20%,葡萄糖2.0%,酵母膏0.06%,磷酸二氢钾0.02%,硫酸镁0.01%,维生素B10.01%,琼脂0.2%,蒸馏水75%,以上组分的含量百分比总和为100%,母种培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去表皮洋葱20%,葡萄糖2.0%,酵母膏0.06%,磷酸二氢钾0.02%,硫酸镁0.01%,维生素B10.01%,琼脂0.2%,蒸馏水75%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去表皮洋葱切片放入锅中,加入蒸馏水,去表皮洋葱与蒸馏水的质量比为1:3.5,沸水煮10分钟,用8层医用纱布过滤,得到滤液①,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液②,备用;
4)将步骤1)中称取的琼脂剪碎成条,加入蒸馏水,琼脂与蒸馏水的质量比为1:2.5,加热并不断搅拌,温度控制在95℃,直至琼脂溶解,得到琼脂溶液③,备用;
5)将上述滤液①、溶液②、琼脂溶液③置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在95℃,直至各成分充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液①、溶液②、琼脂溶液③的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
6)将步骤5)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在120℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为30分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至60℃时取出密闭容器,待混合溶液冷却凝固后放入温度为36.5℃的恒温培养箱中一天,确认无菌后得到母种培养基。
步骤2,将步骤1得到的试管母种接种在液体培养基中进行培养,先在室温下静置23.5h,然后放入摇床中培养6.5天,控制温度为21℃,转速为150r/min,刚出现液体菌种时停止培养,得到液体菌种,其中,液体培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去皮土豆20%,葡萄糖2.0%,玉米粉0.8%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.6%,蒸馏水75%,以上组分的含量百分比总和为100%,液体培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去皮土豆20%,葡萄糖2.0%,玉米粉0.8%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.6%,蒸馏水75%,以上组分的含量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去皮土豆切成条状放入锅中,加蒸馏水,去皮土豆与蒸馏水的质量比为1:3.5,沸水煮14.5分钟,用8层医用纱布过滤,得到滤液④,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液⑤,备用;
4)将上述滤液④、溶液⑤置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在95℃,直至充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液④、溶液⑤的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
5)将步骤4)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在120℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为30分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至45℃时取出密闭容器,后冷却至室温,得到液体培养基。
步骤3,将步骤2得到的液体菌种接种在栽培种培养基中,然后将栽培种培养基放入恒温培养箱中,第1-3天的温度为21℃,第4-8天的温度为20℃,8天后取出液体菌种放在培养架上,调节温度至18℃,湿度控制在80%之间,光照14小时/天,第10-13天时调节温度至17℃,湿度控制在83%之间,光照14小时/天,待子实体长至6cm时调节温度至16℃,等到子实体长至10cm时即可采收;
步骤4,活体蚕蛹复壮,将步骤3得到的10cm无损伤的子实体进行组织分离获得母种,母种培养完成后接入液体培养基中,液体培养基中培养完成后接入新鲜的活体柞蚕蛹中,形成蛹虫草子实体后再经组织分离获得最佳虫草。
Claims (5)
1.一种北虫草栽培方法,其特征在于,具体按照以下步骤实施:
步骤1,将菌种接种在母种培养基内进行栽培,第1-3天的培养温度为20-22℃,第4-6天的培养温度为19-21℃,得到试管母种;
步骤2,将步骤1得到的试管母种接种在液体培养基中进行培养,先在室温下静置23-24h,然后放入摇床中培养6-7天,控制温度为20-22℃,转速为130-180r/min,刚出现液体菌种时停止培养,得到液体菌种;
步骤3,将步骤2得到的液体菌种接种在栽培种培养基中,然后将栽培种培养基放入恒温培养箱中,第1-3天的温度为20-22℃,第4-8天的温度为19-21℃,8天后取出液体菌种放在培养架上,调节温度至17-19℃,湿度控制在75%-85%之间,光照13-15小时/天,第10-13天时调节温度至16-18℃,湿度控制在80%-85%之间,光照13-15小时/天,待子实体长至5-7cm时调节温度至15-17℃,等到子实体长至8-12cm时即可采收;
步骤4,活体蚕蛹复壮,将步骤3得到的8-12cm无损伤的子实体进行组织分离获得母种,母种培养完成后接入液体培养基中,液体培养基中培养完成后接入新鲜的活体柞蚕蛹中,形成蛹虫草子实体后再经组织分离获得最佳虫草。
2.根据权利要求1所述的一种北虫草栽培方法,其特征在于,步骤1中所述母种培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去表皮洋葱15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,酵母膏0.03%-0.08%,磷酸二氢钾0.01%-0.03%,硫酸镁0.005%-0.015%,维生素B10.005%-0.015%,琼脂0.15%-0.25%,蒸馏水70-80%,以上组分的重量百分比总和为100%。
3.根据权利要求2所述的一种北虫草栽培方法,其特征在于,步骤1中所述母种培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去表皮洋葱15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,酵母膏0.03%-0.08%,磷酸二氢钾0.01%-0.03%,硫酸镁0.005%-0.015%,维生素B10.005%-0.015%,琼脂0.15%-0.25%,蒸馏水70-80%,以上组分的重量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去表皮洋葱切片放入锅中,加入蒸馏水,去表皮洋葱与蒸馏水的质量比为1:3-4,沸水煮8-12分钟,用7-9层医用纱布过滤,得到滤液①,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液②,备用;
4)将步骤1)中称取的琼脂剪碎成条,加入蒸馏水,琼脂与蒸馏水的质量比为1:2-3,加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至琼脂溶解,得到琼脂溶液③,备用;
5)将上述滤液①、溶液②、琼脂溶液③置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至各成分充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液①、溶液②、琼脂溶液③的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
6)将步骤5)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115-125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25-35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至55-65℃时取出密闭容器,待混合溶液冷却凝固后放入温度为35-38℃的恒温培养箱中一天,确认无菌后得到母种培养基。
4.根据权利要求1所述的一种北虫草栽培方法,其特征在于,步骤2中所述液体培养基,按质量百分比由以下原料的有效组分组成:
去皮土豆15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,玉米粉0.6%-1.2%,磷酸二氢钾0.5%-1.5%,硫酸镁0.2%-0.8%,蒸馏水70%-80%,以上组分的重量百分比总和为100%。
5.根据权利要求4所述的一种北虫草栽培方法,其特征在于,步骤2中所述液体培养基的制作方法,具体按照以下步骤实施:
1)称量原料,按质量百分比称取去皮土豆15%-25%,葡萄糖1.5%-2.5%,玉米粉0.6%-1.2%,磷酸二氢钾0.5%-1.5%,硫酸镁0.2%-0.8%,蒸馏水70%-80%,以上组分的重量百分比总和为100%;
2)将步骤1)中称取的去皮土豆切成条状放入锅中,加蒸馏水,去皮土豆与蒸馏水的质量比为1:3-4,沸水煮13-16分钟,用7-9层医用纱布过滤,得到滤液④,备用;
3)将步骤1)中称取的葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁置于容器中,加入蒸馏水,葡萄糖、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸镁的总和与蒸馏水的质量比为1:1,至充分溶解,得到溶液⑤,备用;
4)将上述滤液④、溶液⑤置于容器中加热并不断搅拌,温度控制在90-100℃,直至充分溶解,再次加入蒸馏水,滤液④、溶液⑤的总和与蒸馏水的体积比为1:1,得到混合溶液;
5)将步骤4)得到的混合溶液置于密闭容器中后放入高压灭菌锅中灭菌,控制温度在115-125℃,压强为0.15MPa,灭菌时间为25-35分钟,灭菌完成后待灭菌锅内温度降至40-50℃时取出密闭容器,后冷却至室温,得到液体培养基。
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