CN112189512A - 一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法及其应用 - Google Patents

一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开的是一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法及其应用，取适量桑叶粉、玉米渣中加入水，文火煮、冷却、沉淀、过滤，取滤液；取桑叶玉米提取液，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，高压灭菌、冷却待用；接种活虫草菌体，液体菌种，避光静置培养24h，蛹虫草菌丝体的培养方法培养的菌丝体在制备食物、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用，蛹虫草菌丝体的培养方法培养得到的菌液在制备食物、饮料、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用，能提蛹虫草菌丝体中虫草素和腺苷的含量，培养出的虫草菌丝体虫草素、腺苷含量高，配方简单，易于推广。

Description

一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法及其 应用
技术领域
本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法及其应用。
技术背景
蛹虫草，属真菌门(Fungi)、子囊菌纲(Ascomycota)、肉座菌目(Hypocreales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps)。因含有虫草素、虫草酸、腺苷及多糖等活性成分而具有抗肿癌，抗炎，抗病毒，增强机体免疫力等功效，是一种具有滋补作用的药食两用真菌，有很高的药用价值和营养价值，被越来越多的消费者所接受，需求量也逐年攀升。
人工生产出的蛹虫草菌丝体其成分和药效也与天然虫草相似，虫草菌丝体中含有多种活性成分，如虫草素、核苷、虫草多糖、胆甾醇、真菌甾醇、麦角甾醇、腺嘌呤、尿嘧啶、蛋白质、多种氨基酸、硬脂酸、软脂酸、D-甘露醇、维生素、有机酸和微量元素，既可有效保护虫草这一珍贵资源，又不受气候、地理环境和虫草寄生条件严格的限制，适合于工业化大规模生产。
然而，蛹虫草菌丝体中虫草素和腺苷等活性成分的含量要远远低于蛹虫草子实体。在CN102630490中，将菌丝体中虫草素含量由原来的0.6mg/g提高到2.31mg/g，但忽视了冬虫夏草质量指标腺苷的含量，并且培养基配方复杂，培养方法繁琐，发酵过程中添加营养物质也溶液造成污染。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法及其应用，该方法培养出的虫草菌丝体虫草素、腺苷含量高，配方简单，易于推广，并且可以满足人们提高菌丝体中活性组分含量的需求。
为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，包括以下步骤：
A配制培养基
1)取适量桑叶粉、玉米渣中加入水，文火煮10-60min，冷却、沉淀后用纱布过滤，取滤液，即桑叶玉米提取液；
2)取桑叶玉米提取液，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，121摄氏度、1.1Mpa下高压灭菌20-30mi冷却待用；
B菌丝体培养
接种活虫草菌体(菌种为Cordyceps militaris(L)Link)，液体菌种，在温度22℃条件下避光静置培养24h，然后22℃、170rpm继续避光培养60-90h。
作为优选蛹虫草菌丝体的培养方法，在菌丝体培养48-72h时，光照2-8h后继续避光培养24-48h。
作为优选所述的蛹虫草菌丝体的培养方法，光照强度为50-150lx。
作为优选所述的蛹虫草菌丝体的培养方法，所述桑叶粉和玉米渣是将桑叶和玉米烘干至含水量10％以下后粉碎获得。
作为优选所述的蛹虫草蛹虫草菌丝体的培养方法，配制培养基各组分的浓度为：葡萄糖5-20g/L、桑叶玉米提取液、20-200(桑叶玉米提取液对应的桑叶粉和玉米渣的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L/、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、硫酸镁1g/L。
作为优选所述的蛹虫草菌丝体的培养方法，各组分的浓度为：葡萄糖5-15g/L、桑叶玉米提取液30-150(桑叶玉米提取液对应的桑叶粉和玉米渣的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸二氢钠1g/L、硫酸镁1g/L。
作为优选所述的蛹虫草菌丝体的培养方法，所述的水为蒸馏水或去离子水。
作为优选所述的蛹虫草菌丝体的培养方法，所述桑叶玉米提取液中桑叶和玉米的质量比为1:1-5。
一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法培养的菌丝体在制备食物、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法培养得到的菌液在制备食物、饮料、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
益效果是：可有效高提蛹虫草菌丝体中虫草素和腺苷的含量，尤其是作为冬虫夏草活性成分唯一质量标准的腺苷的含量；培养出的虫草菌丝体虫草素、腺苷含量高，配方简单，易于推广，并且可以满足人们提高菌丝体中活性组分含量的需求；本发明提供的培养方法整个过程中环保无污染，且经过提取后的桑叶玉米残渣、培养后的菌液、菌丝体均可以应用于食物、动物饲料以及食品添加剂，每个组分可以充分利用，整个培养过程，无浪费；本发明所述的菌丝体培养方法，培养时间短，工艺简单，大大节省人力物力成本。
附图说明
图1是本发明实施例3HPLC图谱。
图中：1号峰为腺苷，2号峰为虫草素。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，包括以下步骤：
A配制培养基
1)取适量桑叶粉、玉米渣中加入水，文火煮10-60min，冷却、沉淀后用纱布过滤，取滤液，即桑叶玉米提取液；
2)取桑叶玉米提取液，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，121摄氏度、1.1Mpa下高压灭菌20-30mi冷却待用；
B菌丝体培养
接种活虫草菌体(菌种为Cordyceps militaris(L)Link)，液体菌种，在温度22℃条件下避光静置培养24h，然后22℃、170rpm继续避光培养60-96h。
本发明所述的菌丝体培养方法是在48-72h时，光照2-8h后继续避光培养24-48h。所述的光照强度为50-150lx。
本发明所述桑叶粉和玉米渣是将桑叶和玉米烘干至含水量10％以下后粉碎获得。
本发明配制培养基各组分的浓度为：葡萄糖5-20g/L、桑叶玉米提取液20-200(桑叶玉米提取液对应的桑叶粉和玉米渣的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、硫酸镁1g/L。作为优选各组分的浓度为：葡萄糖5-15g/L、桑叶玉米提取液30-150(桑叶玉米提取液对应的桑叶粉和玉米渣的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸二氢钠1g/L、硫酸镁1g/L。
本发明所述的水为蒸馏水或去离子水。
本发明所述桑叶玉米提取液中桑叶和玉米的质量比为1:1-5。
一种蛹虫草菌丝体的培养方法培养的菌丝体在制备食物、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
一种蛹虫草菌丝体的培养方法培养得到的菌液在制备食物、饮料、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
实施例1
一种蛹虫草液体培养基及其制备方法，包括如下步骤：
1、桑叶玉米提取液的配制
分别将桑叶玉米烘干至含水分10％以下，粉碎备用；
称取10-50g/L桑叶粉、10-150g/L玉米渣，加入水中搅拌均匀，文火煮10-60min(优选30min)，冷却后用8-16层纱布过滤(优选8层)，收集滤渣，取滤液，将滤液补水至初始加入水的体积，混匀备用。
2、培养基配制
称(量)取培养基各组分，培养基的组成成分为：葡萄糖5-15g/L、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、桑叶玉米提取液20-200(桑叶玉米提取液对应的桑叶粉玉米渣的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、硫酸镁1g/L。按下文中表1的比例称取以上各固体成分，加入对应比例的桑叶玉米提取液，然后加入水混匀，定容到所需体积，分装，121摄氏度、1.1Mpa下高压灭菌20-30min，冷却待用。本实施例具体获得如表1所示的9种不同培养基各3瓶，每瓶100ml。
表1不同培养基所含各组分浓度(单位g/L)
Figure BDA0002727598620000051
Figure BDA0002727598620000061
1.可有效高提蛹虫草菌丝体中虫草素和腺苷的含量，尤其是作为冬虫夏草活性成分唯一质量标准的腺苷的含量。
1.培养过程中用到的玉米、桑叶来源广泛，我国是农业和蚕业大国，玉米和桑叶产量高，容易获得，成本低廉。
2.本发明提供的培养方法整个过程中环保无污染，且经过提取后的桑叶玉米残渣、培养后的菌液、菌丝体均可以应用于食物、动物饲料以及食品添加剂，每个组分可以充分利用，整个培养过程，无浪费。
3.本发明所述的培养基配方简单，操作方便，易于推广。
4.本发明所述的菌丝体培养方法，培养时间短，工艺简单，大大节省人力物力成本。
实施例2
虫草菌丝体培养
在超净台中或无菌状态下接种活虫草菌体(菌种为Cordyceps militaris(L)Link)，液体菌种，密度控制在3-5个菌球/mL，按体积比1:100接种，每种培养基做三个重复。在温度22℃条件下避光静置培养24h，然后22℃、170rpm继续避光培养48-72h(优选72h)。经光照(光照度控制在100～150Lx)培养2-10小时后(优选4h)，继续避光培养24-48h(优选36h)。
实施例3
虫草素和腺苷的测定
收集菌液，煮沸10min，冷却，8000r/min离心10min，沉淀烘干称重，采用HPLC的方法测量上清液中虫草素和腺苷的含量，结果如表2所示。
表2各组分培养基培养菌丝体重量以及活性成分含量(平均值)
Figure BDA0002727598620000071
通过从实验结果可以总结出，本发明提供的液体培养基培养菌丝体，可有效提高虫草素和腺苷两种活性物质的含量。其中，虫草素含量普遍高于0.281％，最高可达到0.329％。腺苷的含量最高可以达到0.3％以上，有的甚至高于虫草素的含量。尤其是培养基中桑叶粉含量在10-25g/L，玉米渣含量在50g/L时，效果最好。
实施例4
本发明提供的蛹虫草菌丝体培养方法培养的菌丝体在制备食物、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
本发明提供的蛹虫草菌丝体培养方法培养得到的菌液在制备食物、饮料、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于,包括配制培养基、菌丝体培养，其中配制培养基包括如步骤：
1)取适量桑叶粉、玉米渣中加入水，文火煮10-60min，冷却、沉淀后用纱布过滤，取滤液，即桑叶玉米提取液；
2)取桑叶玉米提取液，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，121摄氏度、1.1Mpa下高压灭菌20-30mi冷却待用；
菌丝体培养包括如步骤：
接种活虫草菌体，液体菌种，在温度22℃条件下避光静置培养24h，然后22℃、170rpm继续避光培养60-120h。
2.如权利要求1所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：在菌丝体培养48-72h时，光照2-8h后继续避光培养。
3.如权利要求2所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：光照强度为50-150lx。
4.如权利要求1所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：所述桑叶粉和玉米渣是将桑叶和玉米烘干至含水量10％以下后粉碎获得。
5.如权利要求1所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：配制培养基各组分的浓度为：葡萄糖5-20g/L、桑叶玉米提取液20-200g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、硫酸镁1g/L。
6.如权利要求1所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：配制培养基各组分的浓度为：葡萄糖5-15g/L，桑叶玉米提取液30-150g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸二氢钠1g/L、硫酸镁1g/L。
7.如权利要求1所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：所述的水为蒸馏水或去离子水。
8.如权利要求1-7任一项所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于：所述桑叶玉米提取液中桑叶和玉米的质量比为1:1-5。
9.一种权利要求1-7中任一项所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于，所述菌丝体培养方法培养的菌丝体在制备食物、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
10.一种权利要求1-7中任一项所述的一种提高虫草素、腺苷含量的蛹虫草菌丝体的培养方法，其特征在于，所述菌丝体培养方法得到的菌液在制备食物、饮料、保健品、动物饲料以及添加剂中的应用。
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