CN1861782A - 富硒蛹虫草的人工培养方法及子实体的应用 - Google Patents

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一种富硒蛹虫草的人工培养方法及子实体的应用，该培养方法首先将采集到的蛹虫草菌的野生菌，进行常规纯化，纯化后的菌株制成液体菌种回接到含硒肥营养液的无菌培养基中，在适宜的培养条件下自然感染，继续培养直至长出蛹虫草子实体，或将纯化后的菌株制成液体菌种回接到含蛹虫冻干粉的无菌培养基中，在适宜的培养条件下自然感染，继续培养至培养基长满菌丝长出子实体，喷硒肥营养液，继续培养直至长出蛹虫草子实体。该方法解决了现有技术存在的菌种退化、药理活性减退的缺陷，其操作简单易行，菌种稳定，培养的子实体除具有一般蛹虫草的有效营养成分含量高的优点外，还能长期保持有机硒含量高的药理活性，食用方便、安全无毒，药用效果显著。

Description

富硒蛹虫草的人工培养方法及子实体的应用
技术领域
本发明涉及一种微生物真菌的人工培养方法，特别是一种在我国北方发现的蛹虫草菌[Cordyceps militaris(L.)Link]的富硒蛹虫草的人工培养方法及子实体的应用。
背景技术
众所周知，冬虫夏草[Cordycep ssinensis(Berk.)Sacc]在我国主要分布在西藏、青海、四川等地，是我国名贵中药材，它集扶正固本、滋阴壮阳之功能为一体，在中华医药百味中，尤以“治诸虚百损，理阴阳平衡”、“保肺益肾，补精益气，专补命门”等功效著称。在我国北方发现的蛹虫草菌Cordycepsmilitaris(L.)Link，又名北虫草，被记录在《中华大型真菌图鉴》中，其所具有的特殊功能和作用已被公认，是一种珍贵的药、食两用菌。该菌种经人工训化培育已长出与野生蛹虫草菌一样的子实体，分离得到的纯菌种已于1993年4月1日保存在北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.0193。
根据文献记载，在中国专利号为93105056.1的“北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法”、专利号为94110061.8的“蛹虫草优良品种的选育及高产栽培方法”、专利号为97105853.0的“蛹虫草高产栽培方法”等专利文献中，公开了上述蛹虫草的人工栽培方法。尽管利用该方法得到的蛹虫草具有很高的营养价值和药用成分，其蛋白质含量和多种维生素、虫草酸、微量元素硒等的含量都能超过天然蛹虫草。但因其培养基质单一，脱离原生态环境，供应的营养状况已不能满足子实体生长的需要。久而久之，菌种就要退化，会出现药理活性逐渐减退的问题，有效营养成分含量也会越来越低。
硒是人体必需的微量元素，硒缺乏会严重影响人体健康。1917年瑞典学者BERGELIUS发现的1957年被首次确认为是机体的保护性因子，首先硒是体内谷胱甘肽过氧化物酶(SEGSH-PX)的重要组成成分，每个酶分子含有四个硒原子，是脂类抗氧化剂。具有抑制过氧化反应，分解过氧化物，清除自由基，修复分子损伤，保护生物膜的作用，硒酶是人体的清道夫。医学地理学研究证实：肿瘤发病率与硒的地理分布息息相关，流行病学研究表明：许多癌症都与硒的摄入不足有关。硒分布在网状内皮细胞内，中性粒细胞和淋巴细胞内，当硒缺乏时，表现出体液免疫与细胞免疫下降。由此看出硒对各器官，生化指标影响是明显的，它的降解自由基的高度专一性和抗衰老、抗氧化的作用是不可替代的。
我国是严重的缺硒地区，专家指出，适当补硒是必要的，它能增强人体免疫功能。补硒最好的途径是食补，最佳硒类是天然有机硒。然而日前市场已开发的富硒产品多数都是无机硒，这种硒不易被人体吸收，食入过量会引起中毒。我国营养学会1988年公布的每日膳食中硒的供给量为：婴儿15μg、1-3岁儿童20μg、4-6岁儿童40μg、成人50μg。
发明内容
本发明的目的是提供一种富硒蛹虫草的人工培养方法及子实体的应用，该方法解决了现有技术存在的菌种退化、药理活性减退的缺陷，其操作简单易行，菌种稳定，培养的子实体除具有一般蛹虫草的有效营养成分含量高的优点外，还能提高蛹虫草本身的营养和抗癌、抗衰老的药用价值，长期保持有机硒含量高的药理活性，其食用方便、安全无毒，药用效果显著。
本发明的目的是这样实现的：该富硒蛹虫草的人工培养方法首先将采集到的蛹虫草菌Cordyceps militaris(L.)Link的野生菌，进行常规纯化，纯化后的菌株制成液体菌种回接到无菌培养基中，在适宜的培养条件下自然感染，继续培养直至长出蛹虫草子实体；
所使用的培养基为含硒肥营养液的混配培养基，每百重量份混配培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份，大米65-75份，高粱米23-34份，硒肥营养液为上述原料总重的0.1-0.2倍，加水为上述原料总重的1.9-2倍，混配培养基灭菌后接入液体菌种，适温培养条件下自然感染，给予散射光照射、通风，直至长出蛹虫草子实体；
所使用的培养基为含蛹虫冻干粉的混配培养基，每百重量份混配培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份，大麦98-99份，加水为上述原料总重的1.9-2倍，混配培养基灭菌后接入液体菌种，适温培养条件下自然感染，给予散射光照射、通风，直至长出蛹虫草子实体，然后喷硒肥营养液，所用喷硒肥营养液为上述原料总重的0.1-0.2倍，继续培养直到采收子实体。
所述液体菌种是将纯化后的菌株接种到液体培养基中，每百重量份液体培养基中含蛹虫冻干粉1-2份、葡萄糖1-2份，马铃薯10-15份，蛋白冻0.3-0.5份，磷酸二氢钾0.2-0.5份，硫酸镁0.1-0.2份，VB10.001-0.002份，余量为水。
所述硒肥营养液每百重量份中各组份分别是；桑叶提取物2-5份，硒肥0.02-0.04份，VB10.1-0.2份，KH2PO40.1-0.2份，K2HPO40.1-0.2份，余量为水。
由于本发明采用将纯化后的菌株制成液体菌种，回接到含硒肥营养液的无菌混配培养基，或回接到采用含蛹虫冻干粉的无菌混配培养基中长出蛹虫草子实体后喷硒肥营养液，适温培养直到采收子实体，所以既能保持培养基质多样化，丰富虫草生长的原生态环境，使其提供的营养状况完全满足子实体生长的需要，与现有蛹虫草的其它培养方法相比，可以有效地防止出现菌种退化、药理活性减退的现象，又能将无机硒加入到培养基中或直接喷洒在子实体上，经过菌丝的生物转化吸收变成有机硒，同时硒还能明显地增加蛹虫草子实体中主要营养、活性成分的含量。因此，该人工培养方法可以进一步提高蛹虫草本身的营养和抗癌、抗衰老的药用价值。富硒后的蛹虫草，是一种安全有效的营养食品，它能促进人体合理吸收有机硒，以利于营养均衡、补充人体硒水平。这对于提高亚健康人群的人体免疫力和抗氧化能力，从而防治多种免疫低下疾病具有重要的现实意义。本发明原料来源广泛，可大规模培养生产，为大众健康提供优质的营养和药用资源。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
本发明的人工培养方法主要操作步骤如下：
步骤1：制备液体菌种
首先将采集到的新鲜野生蛹虫草子实体，进行常规的单孢子或单菌落纯化。纯化后的菌种10mg接种在100ml液体培养基中制成液体菌种备用。其每百重量份液体培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份，葡萄糖1-2份，马铃薯10-15份，蛋白冻0.3-0.5份，磷酸二氢钾0.2-0.5份，硫酸镁0.1-0.2份，VB10.001-0.002份，余量为水。
步骤2：制备子实体培养基
所使用的子实体培养基可以根据实际需要选择表面消毒的无菌条件下饲养的体内注入硒肥营养液的活体蛹虫，或选择含硒肥营养液的混配培养基或选择含蛹虫冻干粉的混配培养基。本实施例着重描述制备含硒肥营养液的混配培养基和含蛹虫冻干粉的混配培养基。配制的混配培养基Ph值均为7.5-8。
其中每百重量份含硒肥营养液的混配培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份，大米65-75份，高粱米23-34份，硒肥营养液为上述原料总重的0.1-0.2倍，加水为上述原料总重的1.9-2倍，即制成含硒肥营养液的混配培养基备用。
其中每百重量份含蛹虫冻干粉的混配培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份，大麦98-99份，加水为上述原料总重的1.9-2倍，即制成含蛹虫冻干粉的混配培养基备用。
步骤3：制备硒肥营养液
每百重量份硒肥营养液中各组份分别是：桑叶提取物2-5份，硒肥0.02-0.04份，VB10.01-0.02份，KH2PO40.1-0.2份，K2HPO40.1-0.2份，余量为水。该硒肥营养液中的硒肥采用市售专利产品，即专利号为99112816.8的“一种植物生长剂”，每kg硒肥营养液中含硒0.6-1.2mg。
实施方法一
选用各组份分别是：蛹虫冻干粉1份，大米65份，高粱米34份，硒肥营养液为10份，加水200份的含硒肥营养液的混配培养基，灭菌后接入所制备的液体菌种，适温20-24℃下自然感染，避光，待菌丝布满培养基表面向下延伸时给予散射光照射，瓶封口膜扎孔进行通风，门窗错开，每天3～4次，每次20～30分钟，室内湿度75～80％，直至长出蛹虫草子实体，50～60天即可采收子实体。
实施方法二
选用各组份分别是：蛹虫冻干粉1.5份，大米70份，高粱米28.5份，硒肥营养液为15份，加水195份的含硒肥营养液的混配培养基，灭菌后接入所制备的液体菌种，其余操作步骤同实施方法一。
实施方法三
选用各组份分别是；蛹虫冻干粉2份，大米75份，高粱米23份，硒肥营养液为20份，加水190份的含硒肥营养液的混配培养基，灭菌后接入所制备的液体菌种，其余操作步骤同实施方法一。
实施方法四
选用各组份分别是：蛹虫冻干粉1份，大麦99份，加水为200份的含蛹虫冻干粉的混配培养基，灭菌后接入所制备的液体菌种，适温20-24℃下自然感染，避光，待菌丝布满培养基表面向下延伸时给予散射光照射，瓶封口膜扎孔进行通风，门窗错开，每天3～4次，每次20～30分钟，室内湿度75～80％，直至蛹虫草子实体长至3-5cm后，喷硒肥营养液，所用喷硒肥营养液为10份，继续培养10-15天，采收蛹虫草子实体。
实施方法五
选用各组份分别是：蛹虫冻干粉1.5份，大麦98.5份，加水为195份的含蛹虫冻干粉的混配培养基，灭菌后接入所制备的液体菌种，适温20-24℃下自然感染，避光，待菌丝布满培养基表面向下延伸时给予散射光照射，瓶封口膜扎孔进行通风，门窗错开，每天3～4次，每次20～30分钟，室内湿度75～80％，直至蛹虫草子实体长至3-5cm后，喷硒肥营养液，所用喷硒肥营养液为15份，继续培养10-15天，采收蛹虫草子实体。
实施方法六：
选用各组份分别是；蛹虫冻干粉2份，大麦98份，加水为190份的含蛹虫冻干粉的混配培养基，灭菌后接入所制备的液体菌种，按实施方法四培养子实体生长至3-5cm后，喷硒肥营养液，所用喷硒肥营养液为20份，继续培养生长至10-15天，采收蛹虫草子实体。
实施方法七：将鲜富硒蛹虫草子实体进行真空冷冻干燥后，封装成盒，制成富硒蛹虫草活性干品。
实施方法八：将富硒蛹虫草活性干品浸泡在35-65度白酒中，每1000ml白酒中加入10-20g富硒蛹虫草活性干品，常温下按预定时间封存，即制成富硒蛹虫草酒。
本发明方法制得的富硒蛹虫草与普通蛹虫草抗癌功效比较：
食物中的强化微量元素主要是无机盐，不仅吸收利用率低，而且有一定的毒性。研究结果表明：人体对微量元素有机形式的吸收利用率远高于无机形式，且无毒性。药理实验证实，经生物转化的富硒活性虫草，对普通蛹虫草所具有的抗癌、提高免疫等多种生理活性起到增效作用。
实验方法：用昆明种小鼠实体瘤的模型观察，普通蛹虫草与富硒蛹虫草对体内肿瘤的影响。在小鼠接种瘤细胞后，随机分为对照组、普通蛹虫草组、富硒蛹虫草组，每组小鼠10只。后两组给药前1天在右侧腋部皮下接种2×106S180瘤细胞，连续9天给药，对照组用生理盐水0.5ml灌胃，普通蛹虫草组和富硒蛹虫草组用300mg.kg-1.d灌胃，第10天脱颈椎处死小鼠，分别称取瘤重，计算抑瘤率。见下表：
    组别   N   瘤重     抑瘤％     P
    对照组   10   1.95
    普通蛹虫草组   10   1.53     20.8     ＜0.05
    富硒蛹虫草组   10   1.33     30.7     ＜0.01
结论：普通蛹虫草对荷瘤小鼠体内肿瘤生长的抑制作用远小于富硒蛹虫草。以上实验结果显示，富硒蛹虫草可明显提高抑瘤率，增强抗癌活性。
富硒活性蛹虫草为经真空冷冻干燥后的富硒蛹虫草活化干品，与一般自然干燥的蛹虫草相比，除保留鲜品中过氧化物酶的活性外，还具有口感鲜美酥脆的特点，可直接口服。经中科院沈阳生态研究所检测有效成份如下表：
有效成份含量     必须氨基酸总量mg/100g     虫草酸mg/g     虫草多糖mg/g     SOD酶活μ/g
自然干燥蛹虫草     5181     117.3     130     91.3
富硒活性蛹虫草     5679     171.1     168     128.7
提高百分率     9.6     45.9     29.2     40.96
富硒活性蛹虫草的有效成份、功能效果与天然干燥蛹虫草相比，更显出明显的优势，故其用量少，服用方便，药用效果显著。
此外，富硒活性虫草中还含有丰富的蛋白质，维生素，微量元素，营养均衡，适用于亚健康人群、体弱多病患者、老年人常期服用，安全可靠。

Claims (5)

1、一种富硒蛹虫草的人工培养方法，其特征在于：首先将采集到的蛹虫草菌Cordyceps militaris(L.)Link的野生菌，进行常规纯化，纯化后的菌株制成液体菌种回接到无菌培养基中，在适宜的培养条件下自然感染，继续培养直至长出蛹虫草子实体；
所使用的培养基为含硒肥营养液的混配培养基，每百重量份混配培养基中各组份分别是；蛹虫冻干粉1-2份、大米65-75份、高粱米23-34份，硒肥营养液为上述原料总重的0.1-0.2倍，加水为上述原料总重的1.9-2倍，混配培养基灭菌后接入液体菌种，适温培养条件下自然感染，给予散射光照射、通风，直至长出蛹虫草子实体；
所使用的培养基为含蛹虫冻干粉的混配培养基，每百重量份混配培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份、大麦98-99份，加水为上述原料总重的1.9-2倍，混配培养基灭菌后接入液体菌种，适温培养条件下自然感染，给予散射光照射、通风，直至长出蛹虫草子实体，然后喷硒肥营养液，所用喷硒肥营养液为上述原料总重的0.1-0.2倍，继续培养直到采收子实体。
2、根据权利要求1所述的富硒蛹虫草的人工培养方法，其特征在于：所述液体菌种是将纯化后的菌株接种到液体培养基中，每百重量份液体培养基中各组份分别是：蛹虫冻干粉1-2份，葡萄糖1-2份，马铃薯10-15份，蛋白冻0.3-0.5份，磷酸二氢钾0.2-0.5份，硫酸镁0.1-0.2份，VB10.001～0.002份，余量为水。
3、根据权利要求1所述的富硒蛹虫草的人工培养方法，其特征在于：所述每百重量份硒肥营养液中各组份分别是：桑叶提取物2～5份，硒肥0.02-0.04份，VB10.01-0.02份，KH2PO40.1-0.2份，K2HPO40.1-0.2份，余量为水。
4、根据权利要求1所述的人工培养方法制得的富硒蛹虫草子实体的应用，其特征在于：将鲜富硒蛹虫草子实体进行真空冷冻干燥后，封装成盒，制成富硒蛹虫草活性干品。
5、根据权利要求1所述的的人工培养方法制得的富硒蛹虫草子实体的应用，其特征在于：将富硒蛹虫草活性干品浸泡在35-65度白酒中，每1000ml白酒中加入10-20g富硒蛹虫草活性干品，常温下按预定时间封存，即制成富硒蛹虫草酒。
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