CN112262709A

CN112262709A - 一种蛹虫草液体培养基及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN112262709A
Application number: CN202011107548.8A
Authority: CN
Inventors: 陈剑清; 盖其静; 虞淼; 许志良
Original assignee: Zhejiang Qingdi Biotechnology Co ltd; Zhejiang University Of Science And Technology Shaoxing Biomedical Research Institute Co ltd; Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang Qingdi Biotechnology Co ltd; Zhejiang University Of Science And Technology Shaoxing Biomedical Research Institute Co ltd; Zhejiang University of Technology ZJUT; Zhejiang Sci Tech University ZSTU; Zhejiang University of Science and Technology ZUST
Priority date: 2020-10-16
Filing date: 2020-10-16
Publication date: 2021-01-26

Abstract

本发明公开的是一种蛹虫草液体培养基及其制备方法和应用，包括桑叶玉米提取物、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁和水，制备方法的步骤：在蚕蛹粉中加入水，文火煮10‑60min，冷却、沉淀后用纱布过滤，取滤液；取桑叶玉米提取液，加入糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，121摄氏度1.1Mpa下高压灭菌20‑30min，冷却待用,蛹虫草液体培养基在人工培养蛹虫草中的应用,本发明所述液体培养基培养出的虫草菌丝体虫草素、腺苷含量高，并且可以满足人们提高菌丝体中活性成分含量的需求。

Description

一种蛹虫草液体培养基及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种蛹虫草液体培养基及其制备方法和应用。

技术背景

蛹虫草，属真菌门(Fungi)、子囊菌纲(Ascomycota)、肉座菌目(Hypocreales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps)。因含有虫草素、虫草酸、腺苷及多糖等活性成分而具有抗肿癌，抗炎，抗病毒，增强机体免疫力等功效，是一种具有滋补作用的药食两用真菌，有很高的药用价值和营养价值，被越来越多的消费者所接受，需求量也逐年攀升。

虫草素(cordycepin)又名3｀一脱氧腺苷，是Cuningham于1951年分离得到的一种腺苷类活性物质，分子式为C₁₀H₁₃N₅0₃。虫草素是蛹虫草中主要的有效成份之一，具有抗菌抗病毒、抗肿瘤、以及抗疲劳、抗衰老、抗炎提高人体免疫能力，抑制单胺氧化酶活性，具有较高的药用价值和广泛的药理作用。

腺苷(Adenosine)是核苷的一种，由核糖(呋喃核糖)与腺嘌呤的一部分组成，中间由β-N9-配糖键(β-N9-glycosidic bond)连结。腺苷在生物化学上扮演重要角色，包括以腺苷三磷酸(ATP)或腺苷双磷酸(ADP)形式转移能量，或是以环状腺苷单磷酸(cAMP)进行信号传递等。此外腺苷也是一种抑制性神经传导物(inhibitory neurotransmitter)，可能会促进睡眠。在冬虫夏草中腺苷含量高于虫草素，腺苷也是冬虫夏草的质量标准(《中国药典》)。

由于冬虫夏草特殊苛刻的生长环境以及资源的匮乏，人们对冬虫夏草最优替代品蛹虫草的需求也在逐步扩大。对能提高蛹虫草子实体产量及其虫草素含量的培养基、培养方法的研究也越来越多。但子实体生产周期长，培养复杂，不能满足人们的需求。采用人工培育蛹虫草菌丝体的技术方法，能在短时间内获得有药用价值的虫草培养物，大大降低人们服用蛹虫草的成本，但这些研究大多注重蛹虫草菌体的产量或者只注重单一活性成分虫草素含量，而忽略了作为冬虫夏草质量标准的腺苷含量。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种蛹虫草液体培养基及其制备方法和应用，该液体培养基培养出的虫草菌丝体虫草素、腺苷含量高，配方简单，易于推广，并且可以满足人们提高菌丝体中活性组分含量的需求。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种蛹虫草液体培养基，包括葡萄糖、桑叶玉米提取液、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁和水。

作为优选，所述桑叶玉米提取液通过以下方法获得：将桑叶和玉米烘干至含水量10％以下后粉碎，在水中加入10-80g/L桑叶粉、10-150g/L玉米渣，文火煮后冷却，沉淀后上清用纱布过滤，分别收集残渣和滤液，滤液离心后取上清，即桑叶玉米提取液。

作为优选，各组分的浓度为：葡萄糖5-20g/L、桑叶玉米提取液20-200(桑叶玉米提取液对应的桑叶玉米的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、硫酸镁1g/L。

作为优选，各组分的浓度为：葡萄糖5-15g/L、桑叶玉米提取液30-200(桑叶玉米提取液对应的桑叶玉米的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸二氢钠1g/L、硫酸镁1g/L。

作为优选，所述所述的水为蒸馏水或去离子水。

作为优选，所述桑叶玉米提取液中桑叶和玉米的质量比为1:1-8。

一种蛹虫草液体培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)在蚕蛹粉中加入水，文火煮10-60min，冷却、沉淀后用纱布过滤，取滤液；

2)取桑叶玉米提取液，加入糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，121摄氏度1.1Mpa下高压灭菌20-30min，冷却待用。

一种蛹虫草液体培养基在人工培养蛹虫草中的应用。

一种蛹虫草液体培养基制备所得残渣在制备食物、动物饲料以及食品添加剂中的应用。

本发明的有益效果是：液体培养基培养出的虫草菌丝体虫草素、腺苷含量高，配方简单，易于推广，并且可以满足人们提高菌丝体中活性组分含量的需求。

附图说明

图1为本发明实施例2中活性物质检测HPLC图谱

图中1号峰为腺苷，2号峰为虫草素。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种蛹虫草液体培养基及其制备方法，包括如下步骤：

1、桑叶玉米提取液的配制

分别将桑叶玉米烘干至含水分10％以下，粉碎备用；

称取10-50g/L桑叶粉、10-150g/L玉米渣，加入水中搅拌均匀，文火煮10-60min(优选30min)，冷却后用8-16层纱布过滤(优选8层)，收集滤渣，取滤液，将滤液补水至初始加入水的体积，混匀备用。

2、培养基配制

称(量)取培养基各组分，培养基的组成成分为：葡萄糖5-15g/L、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、桑叶玉米提取液20-200(桑叶玉米提取液对应的桑叶粉玉米渣的总重量)g/L、蛋白胨5-20g/L、硫酸镁1g/L。按下文中表1的比例称取以上各固体成分，加入对应比例的蚕蛹提取液，然后加入水混匀，定容到所需体积。分装，121摄氏度、1.1Mpa下高压灭菌20-30min，冷却待用。本实施例具体获得如表1所示的9种不同培养基各3瓶，每瓶100ml。参照专利CN 104973909实施例1中6号培养基配方配置对比培养基。

表1不同培养基所含各组分浓度(单位g/L)

编号	桑叶粉	玉米渣	葡萄糖	磷酸二氢钾	磷酸二氢钠	硫酸镁	蛋白胨
								1	10	20	15	1.5	1	1	20
2	10	50	10	1.5	1	1	15
								3	15	30	15	1.5	1	1	10
4	15	100	15	1.5	1	1	10
								5	20	50	10	1.5	1	1	15
6	20	80	10	1.5	1	1	15
								7	25	50	15	1.5	1	1	15
8	50	100	5	1.5	1	1	10
								9	50	150	5	1.5	1	1	5

1.桑叶古代誉为神仙草，含多种有机酸、黄酮、生物碱、维生素、氨基酸、锌、钙、铁等多种微量元素；玉米中除了含蛋白质，脂肪，糖外还含有钙、铁、磷、维生素B1B2、维生素E，维生素A(胡萝卜素)等多种微量元素。由桑叶玉米提取的营养液可以丰富蛹虫草生长以及合成虫草素腺苷的营养物质，有利于提高虫草菌丝体中虫草素和腺苷的含量，尤其可以显著提高腺苷的含量。

2.我国是农业和蚕业大国，玉米和桑叶产量高，容易获得，成本低廉。

3.本发明提供的培养基制备过程中环保无污染，且经过提取后的桑叶玉米残渣还可以应用于食物、动物饲料以及食品添加剂。培养基各组分可以充分利用，无浪费。

4.本发明所述的培养基配方简单，操作方便，易于推广。

5.本发明所述的培养基培养虫草菌丝体，发酵时间短，工艺简单，大大节省人力物力成本。

实施例2

一种蛹虫草液体培养基的应用

1、虫草菌丝体培养

在超净台中或无菌状态下接种活虫草菌体(菌种为Cordyceps militaris(L)Link)，液体菌种，密度控制在3-5个菌球/mL，按体积比1:100接种，每种培养基做三个重复。在温度22℃条件下避光静置培养24h，然后22℃、170rpm继续避光培养60-72h(优选72h)。经光照(光照度控制在100～150Lx)培养3小时后，继续避光培养24-48h(优选36h)。

2、虫草素和腺苷的测定

收集菌液，煮沸10min，冷却，8000r/min离心10min，沉淀烘干称重，采用HPLC的方法测量上清液中虫草素和腺苷的含量，结果如表2所示。

表2各组分培养基培养菌丝体重量以及活性成分含量(平均值)

通过从实验结果可以总结出，本发明提供的液体培养基培养菌丝体，可有效提高虫草素和腺苷两种活性物质的含量。其中，虫草素含量普遍高于0.3％，最高可达到0.39％。腺苷的含量也可以达到0.3％以上，有的甚至高于虫草素的含量。尤其是培养基中桑叶粉含量在10-50g/L，玉米渣含量在30-100g/L时，效果最好。

实施例3

本发明提供的在制备桑叶玉米提取物过程中所得的残渣还可用于食品、保健食品、动物饲料和添加剂的制备。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种蛹虫草液体培养基，其特征在于：所述蛹虫草液体培养基包括：葡萄糖、桑叶玉米提取液、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁和水。

2.如权利要求1所述的一种蛹虫草液体培养基，其特征在于：所述桑叶玉米提取液通过以下方法获得：将桑叶和玉米烘干至含水量10％以下后粉碎，在水中加入10-80g/L桑叶粉、10-150g/L玉米渣，文火煮后冷却，沉淀后上清用纱布过滤，分别收集残渣和滤液，滤液离心后取上清，即桑叶玉米提取液。

3.如权利要求1所述的一种蛹虫草液体培养基，其特征在于：各组分的浓度为：葡萄糖5-20g/L、桑叶玉米提取液20-200g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.2-1.5g/L、磷酸二氢钠0.8-1.2g/L、硫酸镁1g/L。

4.如权利要求1所述的一种蛹虫草液体培养基，其特征在于：各组分的浓度为：葡萄糖5-15g/L、桑叶玉米提取液30-200g/L、蛋白胨5-20g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸二氢钠1g/L、硫酸镁1g/L。

5.如权利要求1所述的一种蛹虫草液体培养基，其特征在于：所述的水为蒸馏水或去离子水。

6.如权利要求1-5任一项所述的一种蛹虫草液体培养基，其特征在于：所述桑叶玉米提取液中桑叶和玉米的质量比为1:1-8。

7.一种如权利要求1-5任一项所述的一种蛹虫草液体培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取适量桑叶粉、玉米渣中加入水，文火煮10-60min，冷却、沉淀后用纱布过滤，取滤液；

2)取桑叶玉米提取液，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和硫酸镁，搅拌溶解，加入水定容至所需体积，分装，121摄氏度、1.1Mpa下高压灭菌20-30min，冷却待用。

8.一种如权利要求1-5中任一项所述的一种蛹虫草液体培养基在蛹虫草培养中的应用。

9.一种如权利要求1-5中任一项所述的一种蛹虫草液体培养基，其特征在于所述液体培养基在制备过程中所得残渣在制备食物、动物饲料以及添加剂中的应用。