CN107950303A - 一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法 - Google Patents

Abstract

一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，包括以下步骤：步骤1）：无菌条件下对黑皮鸡枞菌的子实体做组织分离，分离得子实体菌丝体；步骤2）：对黑皮鸡枞菌的假根做组织分离，分离得假根菌丝体；步骤3）：将子实体菌丝体转接到装有培养基的试管内培养，待菌丝长至1.3‑1.8cm时接入假根菌丝体，继续培养得成熟母种；或者将子实体菌丝体转接到装有培养基的三角瓶中振荡培养，待液体中悬浮有少量菌丝球时接入假根菌丝体，继续培养，待液体中悬浮着大量小菌丝球既得液体母种；两种培养方式择一。本发明的培养方法培养的母种菌丝生物量为2.3g/100ml以上，且菌丝浓密粗壮，色泽微带琥珀色。

Description

一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法

技术领域

本发明属于食用菌类培养技术领域，具体涉及一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法。

背景技术

鸡枞菌具有很高的食用和药用价值，也是我国传统的药用真菌之一。因其鲜嫩醇香，肉质细嫩、洁白如玉、口感独特、生熟皆可食、食药两用、营养丰富而备受人们的青睐，是著名的野生食用菌。现在医学研究发现，鸡枞菌中含有麦角甾醇类物质及治疗糖尿病的有效成份，对降低血糖有明显效果，并有抑制人体癌细胞生长的作用。因此，从古至今鸡枞菌都是市场上的畅销品种，并且以黑皮鸡枞菌最受人们青睐。

虽然黑皮鸡枞菌深受国内外消费者的喜好，但近年来由于生态破坏，过度的采挖已难以满足巨大的市场需求，人们开始尝试人工培养，但由于黑皮鸡枞菌与白蚁之间复杂的营养关系和生态背景，黑皮鸡枞菌的子实体仅能在白蚁巢上生长，人们对于并且对于黑皮鸡枞菌生长发育过程中环境的湿度高低、酸性的种类与浓度、金属离子种类及浓度、菌圃共生细菌等还缺乏了解，因此导致黑皮鸡纵菌培养过程中母种菌丝生长速度慢、品质差，人工培养难以攻克，至今还没有大规模培养成功的先例。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种能够促进菌丝生长、提高菌丝品质的黑皮鸡枞母种的培养方法，以解决现有技术中黑皮鸡枞菌人工培养过程中菌丝生长速度慢、产量低、品质差的问题。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，包括以下步骤：

步骤1)：无菌条件下对黑皮鸡枞菌的子实体做组织分离，分离得子实体菌丝体；

步骤2)：对黑皮鸡枞菌的假根做组织分离，分离得假根菌丝体；

步骤3)：将子实体菌丝体转接到装有培养基的试管内，22-25℃下培养，待菌丝长至1.3-1.8cm时接入假根菌丝体，继续培养5-8日即得成熟母种；或者将子实体菌丝体转接到装有培养基的三角瓶中振荡20-23℃培养，待液体中悬浮有少量菌丝球时接入假根菌丝体，继续培养，待液体中悬浮着大量小菌丝球既得液体母种；两种培养方式择一。

进一步的，所述培养基成分为：土豆汁1000ml、琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐3-5g、共生菌液15-30ml。

进一步的，所述培养基的制备方法为：将土豆100g放入1000ml水中加热，煮沸后继续加热20-30分钟，趁热过滤，滤液中加水补足1000ml后，并加入琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐3-5g，待完全溶化后，高压灭菌，灭菌后加入15-30ml共生菌液，分装试管既得母种培养基。

进一步的，所述共生菌液的制备方法为：将从野外挖巢获得的黑翅土白蚁菌圃用工具碾碎，然后按照菌圃：无菌水＝1：9的质量比混合，搅拌均匀，静置2小时，取上清液即为共生菌液。

本发明的黑皮鸡枞菌母种培养方法中，对子实体菌丝体和假根菌丝体组合培养，能够有效促进菌丝生长。在母种培养的培养基中除土豆汁、葡萄糖等必须的营养物质外，还加入有机酸盐或由多种菌圃共生构成的共生细菌液，有机酸盐能够调节培养基至酸性，从而为黑皮鸡枞菌菌丝的生长提供了良好的酸性环境，并且这样的酸性环境也能够限制其它菌类的生长；共生菌液一方面抑制了母种培养过程中其他杂菌的生长，另一方面共生细菌在生长发育过程中消耗了黑皮鸡枞菌菌丝生长发育过程中产生的对其本身生长发育有害的次生化合物，使黑皮鸡枞菌母种能正常生长和发育。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

本发明通过对子实体菌丝体和假根菌丝体组合培养，有效促进菌丝生长，且能够提高母种品质，并且为鸡枞菌的培养或其他菌类的培养提供了新的思路；本发明母种培养基中除土豆汁、葡萄糖等必须的营养物质外，还加入有机酸盐和由多种菌圃共生构成的共生细菌液，有机酸盐能够为黑皮鸡枞菌菌丝的生长提供了良好的酸性环境，促进其生长；共生细菌液能够抑制其他杂菌生长，同时能够消耗菌丝生长过程中产生的有害的次生化合物，从而提高了母种的品质。通过本发明的培养方法培养的母种，菌丝生物量为2.3g/100ml以上，且菌丝粗壮，色泽微带琥珀色。

具体实施方式

参照以下具体实施例对本发明的黑皮鸡枞菌的培养方法作详细地说明，但不作为对本发明的限定。

实施例1

一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，包括以下步骤：

步骤1)：无菌条件下对黑皮鸡枞菌的子实体做组织分离，分离得子实体菌丝体；

步骤2)：对黑皮鸡枞菌的假根做组织分离，分离得假根菌丝体；

步骤3)：将子实体菌丝体转接到装有培养基的试管内，23℃下培养，待菌丝长至1.3-1.8cm时接入假根菌丝体，继续培养6日得到成熟母种；

所述培养基成分为：土豆汁1000ml、琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐3g、共生菌液20ml。

所述培养基的制备方法为：将土豆100g放入1000ml水中加热，煮沸后继续加热25分钟，趁热过滤，滤液中加水补足1000ml后，并加入琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐3g，待完全溶化后，高压灭菌，灭菌后加入20ml共生菌液，分装试管既得母种培养基。

所述共生菌液的制备方法为：将从野外挖巢获得的黑翅土白蚁菌圃用工具碾碎，然后按照菌圃：无菌水＝1：9的质量比混合，搅拌均匀，静置2小时，取上清液即为共生菌液。

实施例2

一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，包括以下步骤：

步骤1)：无菌条件下对黑皮鸡枞菌的子实体做组织分离，分离得子实体菌丝体；

步骤2)：对黑皮鸡枞菌的假根做组织分离，分离得假根菌丝体；

步骤3)：将子实体菌丝体转接到装有培养基的试管内，25℃下培养，待菌丝长至1.3-1.8cm时接入假根菌丝体，继续培养5日即得成熟母种；

所述培养基成分为：土豆汁1000ml、琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐5g、共生菌液25ml。

所述培养基的制备方法为：将土豆100g放入1000ml水中加热，煮沸后继续加热30分钟，趁热过滤，滤液中加水补足1000ml后，并加入琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐5g，待完全溶化后，高压灭菌，灭菌后加入25ml共生菌液，分装试管既得母种培养基。

所述共生菌液的制备方法为：将从野外挖巢获得的黑翅土白蚁菌圃用工具碾碎，然后按照菌圃：无菌水＝1：9的质量比混合，搅拌均匀，静置2小时，取上清液即为共生菌液。

实施例3

一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，包括以下步骤：

步骤1)：无菌条件下对黑皮鸡枞菌的子实体做组织分离，分离得子实体菌丝体；

步骤2)：对黑皮鸡枞菌的假根做组织分离，分离得假根菌丝体；

步骤3)：将子实体菌丝体转接到装有培养基的三角瓶中在23℃的温度下振荡培养，待液体中悬浮有少量菌丝球时接入假根菌丝体，继续培养5天后，液体中悬浮着大量小菌丝球得到液体母种。

所述培养基成分为：土豆汁1000ml、琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐4g、共生菌液15ml。

所述培养基的制备方法为：将土豆100g放入1000ml水中加热，煮沸后继续加热28分钟，趁热过滤，滤液中加水补足1000ml后，并加入琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐4g，待完全溶化后，高压灭菌，灭菌后加入15ml共生菌液，分装试管既得母种培养基。

所述共生菌液的制备方法为：将从野外挖巢获得的黑翅土白蚁菌圃用工具碾碎，然后按照菌圃：无菌水＝1：9的质量比混合，搅拌均匀，静置2小时，取上清液即为共生菌液。

对比组1：以黑皮鸡纵菌子实体菌丝体转接到装有培养基的试管内，25℃下培养，待菌丝长至1.3-1.8cm时接入假根菌丝体，继续培养5日即得成熟母种；

其中培养基的组成成分与制备方法与实施例3相同。

对比组2：除培养基组成成分外培养方法与实施例3相同，其中培养基成分土豆汁1000ml、琼脂20g、葡萄糖20g。

对实施例1-3及对比组1、2培养的母种生长情况进行测试，测试结果如下表1所示。

表1

	菌丝生物量(g/100ml)	菌丝密度	菌丝形态
				实施例1	2.4	++++	菌丝整齐且粗壮
实施例2	2.5	++++	菌丝整齐且粗壮
				实施例3	2.6	++++	菌丝整齐且粗壮
对比组1	2.0	+++	菌丝不齐且细弱
				对比组2	1.8	++	菌丝不齐且细弱

注:“++++”表示菌丝浓密，“+++”表示菌丝较密，“++”表示菌丝稀疏，“+”表示菌丝极稀。

由上表1可见，本发明实施例1-3制得的黑皮鸡纵菌母种的菌丝生物量均明显高于对比组1和对比组2，且培养基菌丝密度、整齐度及粗壮度均优于对比组1和对比组2，证明通过本发明的黑皮鸡纵菌母种的培养方法得到的母种生长速度快、质量高，解决了现有技术中黑皮鸡纵菌菌丝生长速度慢、产量低、品质差的问题。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，包括以下步骤：

步骤1）：无菌条件下对黑皮鸡枞菌的子实体做组织分离，分离得子实体菌丝体；

步骤2）：对黑皮鸡枞菌的假根做组织分离，分离得假根菌丝体；

步骤3）：将子实体菌丝体转接到装有培养基的试管内，22-25℃下培养，待菌丝长至1.3-1.8cm 时接入假根菌丝体，继续培养5-8 日即得成熟母种；或者将子实体菌丝体转接到装有培养基的三角瓶中振荡20-23℃培养，待液体中悬浮有少量菌丝球时接入假根菌丝体，继续培养，待液体中悬浮着大量小菌丝球既得液体母种；两种培养方式择一。

2.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，其特征在于，所述培养基成分为：土豆汁1000ml、琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐3-5g、共生菌液15-30ml。

3.根据权利要求2所述的一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，其特征在于，所述培养基的制备方法为：将土豆100g 放入1000ml 水中加热，煮沸后继续加热20-30 分钟，趁热过滤，滤液中加水补足1000ml 后，并加入琼脂20g、葡萄糖20g、有机酸盐3-5g，待完全溶化后，高压灭菌，灭菌后加入15-30ml共生菌液，分装试管既得母种培养基。

4.根据权利要求2或3所述的一种黑皮鸡枞菌母种的培养方法，其特征在于，所述共生菌液的制备方法为：将从野外挖巢获得的黑翅土白蚁菌圃用工具碾碎，然后按照菌圃：无菌水=1 ：9 的质量比混合，搅拌均匀，静置2 小时，取上清液即为共生菌液。