CN111990159A - 一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，包括以下步骤：S1、黑皮鸡枞菌预处理：从黑皮鸡枞头茬菇中选取基部直径1.5厘米以上头茬成熟子实体，然后切去柄部，并用酒精棉球擦拭表面，对其表面进行消毒。涉及黑皮鸡枞菌种植技术领域。该黑皮鸡枞菌种的复壮方法，通过主要是通过孢子分离和组织分离相结合的方式获得黑皮鸡枞的复壮母种，在培养时可以进行多孢混合杂交，其弹射出的孢子基数较大，接种在一起时进行优胜劣汰，并取尖端生长旺盛的混合菌丝，将长势较弱的单核菌丝和带病毒菌丝淘汰掉，进而避免菌种出现连年退化，易感染病毒，且抗性衰退的问题，大大提高了获得优质双核菌丝的效率，最终获得的即为稳定性和纯度较高的复壮母种。
Description
技术领域
本发明涉及黑皮鸡枞种植技术领域，具体为一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法。
背景技术
黑皮鸡枞菌是属担子亚门菌，层菌纲，伞菌目，白蘑科，又名长根菇，该菌具有食用和药用价值，也是传统的药用真菌之一，因其鲜嫩醇香，肉质细嫩、洁白如玉、口感独特、生熟皆可食、食药两用、营养丰富而备受人们的关注，不仅含有丰富的氨基酸、维生素和醇类物质及多种生物酶，还含有多酚、多糖、黄酮等多种生物活性成分，这些活性成分常被用在镇痛消炎、提高免疫力、修复损伤器官及调节身体机能等方面。
在现有技术中，黑皮鸡枞菌一般是通过人工种植的菌种种植出来的，而传统的黑皮鸡枞菌种的培养方法，一般是单纯的进行组织分离及菌丝尖端分离，得到的母种会带有一定的单核菌丝和带病毒菌丝，会使得菌种连年退化，易感染病毒，且抗性衰退，使得黑皮鸡枞菌培育的成功率以及后代稳定性降低，并不能使黑皮鸡枞菌种达到复壮的效果。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，解决了现有的黑皮鸡枞菌种培养方法得到的菌种连年退化，易感染病毒，且抗性衰退，并不能达到复壮的效果的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，包括以下步骤：
S1、黑皮鸡枞菌预处理：从黑皮鸡枞头茬菇中选取基部直径1.5厘米以上头茬成熟子实体，然后切去柄部，并用酒精棉球擦拭表面，对其表面进行消毒；
S2、孢子培养：用无菌镊子和手术刀切取S1中处理好的成熟子实体菌盖边缘，再用无菌的镊子撕去表皮，之后将剩余的菌褶部分，放入灭菌的空试管中，然后将试管固定在试管夹具上，并置于散射光下培养使其弹射孢子，最终形成孢子印；
S3、孢子菌丝培养：将S2中完成弹射孢子的菌褶组织取出，然后用接种针蘸取孢子粉并转接到加入30微克每毫升链霉素的PDA试管培养基的底部，进行孢子菌丝培养，最终得到单核菌丝双核菌丝共存的混合菌丝；
S4、母种菌丝培养：当S3中的混合菌丝生长至3厘米左右时，选择菌丝尖端整齐旺盛的部分，并取1毫米的菌丝转接至新的PDA试管，然后重复同样的办法继续转接2次，待菌丝长满试管后，便可得到作为母种的混合菌丝；
S5、母种出菇培养：取一支S4中得到的混合菌丝母种，并将其分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中，待母种在容器中长满，便可以得到茬菇；
S6、复壮母种选取：在S5茬菇中取3-5个优质的子实体并进行组织分离，然后将分离后的子实体分别放入试管中，再对试管分别进行编号，经过纯化后获得多个编号的母种，之后从中挑选1-2个优质的母种，作为黑皮鸡枞的复壮母种。
进一步地，所述S1中选用浓度为75％酒精进行擦拭，能够有效的对子实体表面进行消毒，擦拭时间为10-20s，保证将子实体表面杂质擦拭干净即可。
进一步地，所述S2中进行散光培养时，需在室温条件下25℃进行，并保证散光均匀照射在试管内部的菌褶部分。
进一步地，所述S3中孢子在萌发后会形成单核菌丝互相杂交，而形成的单核菌丝又会产生双核菌丝，从而得到单核菌丝和双核菌丝共存的混合菌丝。
进一步地，所述S4中由于单核菌丝和带病毒菌丝通常长势较弱，因此尖端菌丝通常为生长旺盛的双核无毒混合菌丝，因此选取尖端部分作为母种菌丝最佳。
进一步地，所述S5中将混合菌丝分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中培养，是为了培养出适应不同生长环境的茬菇，以便找到最合适的母种。
进一步地，所述S6中选取母种的菌丝需满足生长旺盛、洁白、浓密以及尖端整齐，保证后期生长出来的母种能够达到复壮效果。
进一步地，用于S2中孢子培养时，将试管固定在试管夹具上，所述试管夹具包括底座和放置板，所述底座顶部的两侧均固定连接有支撑杆，所述放置板底部的左右两侧分别与两个支撑杆的顶端固定连接，所述放置板的顶部开设有凹槽，所述凹槽的内部设置有两个固定夹板，所述固定夹板外部的一侧固定连接有固定杆，所述固定杆的外表面套接有弹性件，所述固定夹板的内侧设置有防护层。
(三)有益效果
本发明具有以下有益效果：
该黑皮鸡枞菌种的复壮方法，通过主要是通过孢子分离和组织分离相结合的方式获得黑皮鸡枞的复壮母种，在培养时可以进行多孢混合杂交，其弹射出的孢子基数较大，接种在一起时进行优胜劣汰，并取尖端生长旺盛的混合菌丝，将长势较弱的单核菌丝和带病毒菌丝淘汰掉，进而避免菌种出现连年退化，易感染病毒，且抗性衰退的问题，大大提高了获得优质双核菌丝的效率，同时利用双核菌丝进行出菇试验，取优质黑皮鸡枞子实体进行组织分离，可将之前的混合菌丝进行分离纯化，最终获得的即为稳定性和纯度较高的复壮母种，使得黑皮鸡枞菌培育的成功率以及后代稳定性得到进一步提升。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
图1为本发明提供的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法第二实施例的结构示意图；
图2为图1中放置板顶部的结构示意图；
图3为图1所示的A部放大示意图。
图中，1-底座、2-放置板、3-支撑杆、4-凹槽、5-固定夹板、6-固定杆、 7-弹性件、8-防护层、9-试管。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“开孔”、“上”、“下”、“厚度”、“顶”、“中”、“长度”、“内”、“四周”等指示方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的组件或元件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
本发明实施例提供一种技术方案：一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，包括以下步骤：
S1、黑皮鸡枞菌预处理：从黑皮鸡枞头茬菇中选取基部直径1.5厘米以上头茬成熟子实体，然后切去柄部，并用酒精棉球擦拭表面，对其表面进行消毒；
S2、孢子培养：用无菌镊子和手术刀切取S1中处理好的成熟子实体菌盖边缘，再用无菌的镊子撕去表皮，之后将剩余的菌褶部分，放入灭菌的空试管中，然后将试管固定在试管夹具上，并置于散射光下培养使其弹射孢子，最终形成孢子印；
S3、孢子菌丝培养：将S2中完成弹射孢子的菌褶组织取出，然后用接种针蘸取孢子粉并转接到加入30微克每毫升链霉素的PDA试管培养基的底部，进行孢子菌丝培养，最终得到单核菌丝双核菌丝共存的混合菌丝；
S4、母种菌丝培养：当S3中的混合菌丝生长至3厘米左右时，选择菌丝尖端整齐旺盛的部分，并取1毫米的菌丝转接至新的PDA试管，然后重复同样的办法继续转接2次，待菌丝长满试管后，便可得到作为母种的混合菌丝；
S5、母种出菇培养：取一支S4中得到的混合菌丝母种，并将其分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中，待母种在容器中长满，便可以得到茬菇；
S6、复壮母种选取：在S5茬菇中取3-5个优质的子实体并进行组织分离，然后将分离后的子实体分别放入试管中，再对试管分别进行编号，经过纯化后获得多个编号的母种，之后从中挑选1-2个优质的母种，作为黑皮鸡枞的复壮母种。
该黑皮鸡枞菌种的复壮方法，通过主要是通过孢子分离和组织分离相结合的方式获得黑皮鸡枞的复壮母种，在培养时可以进行多孢混合杂交，其弹射出的孢子基数较大，接种在一起时进行优胜劣汰，并取尖端生长旺盛的混合菌丝，将长势较弱的单核菌丝和带病毒菌丝淘汰掉，进而避免菌种出现连年退化，易感染病毒，且抗性衰退的问题，大大提高了获得优质双核菌丝的效率，同时利用双核菌丝进行出菇试验，取优质黑皮鸡枞子实体进行组织分离，可将之前的混合菌丝进行分离纯化，最终获得的即为稳定性和纯度较高的复壮母种，使得黑皮鸡枞菌培育的成功率以及后代稳定性得到进一步提升。
所述S1中选用浓度为75％酒精进行擦拭，能够有效的对子实体表面进行消毒，擦拭时间为10-20s，保证将子实体表面杂质擦拭干净即可。
所述S2中进行散光培养时，需在室温条件下25℃进行，并保证散光均匀照射在试管内部的菌褶部分。
所述S3中孢子在萌发后会形成单核菌丝互相杂交，而形成的单核菌丝又会产生双核菌丝，从而得到单核菌丝和双核菌丝共存的混合菌丝。
所述S4中由于单核菌丝和带病毒菌丝通常长势较弱，因此尖端菌丝通常为生长旺盛的双核无毒混合菌丝，因此选取尖端部分作为母种菌丝最佳。
所述S5中将混合菌丝分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中培养，是为了培养出适应不同生长环境的茬菇，以便找到最合适的母种。
所述S6中选取母种的菌丝需满足生长旺盛、洁白、浓密以及尖端整齐，保证后期生长出来的母种能够达到复壮效果。
用于S2中孢子培养时，将试管固定在试管夹具上，所述试管夹具包括底座1和放置板2，所述底座1顶部的两侧均固定连接有支撑杆3，所述放置板 2底部的左右两侧分别与两个支撑杆3的顶端固定连接，所述放置板2的顶部开设有凹槽4，所述凹槽4的内部设置有两个固定夹板5，所述固定夹板5外部的一侧固定连接有固定杆6，所述固定杆6的外表面套接有弹性件7，所述固定夹板5的内侧设置有防护层8。
工作原理：
S1、黑皮鸡枞菌预处理：从黑皮鸡枞头茬菇中选取基部直径1.5厘米以上头茬成熟子实体，然后切去柄部，并用浓度为75％酒精棉球擦拭表面，擦拭时间为10-20s，保证将子实体表面杂质擦拭干净，对其表面进行消毒；
S2、孢子培养：用无菌镊子和手术刀切取S1中处理好的成熟子实体菌盖边缘，再用无菌的镊子撕去表皮，之后将剩余的菌褶部分，放入灭菌的空试管中，然后将试管固定在试管夹具上，并置于散射光下培养使其弹射孢子，在室温条件下25℃进行，并保证散光均匀照射在试管内部的菌褶部分，最终形成孢子印；
S3、孢子菌丝培养：将S2中完成弹射孢子的菌褶组织取出，然后用接种针蘸取孢子粉并转接到加入30微克每毫升链霉素的PDA试管培养基的底部，进行孢子菌丝培养，孢子在萌发后会形成单核菌丝互相杂交，而形成的单核菌丝又会产生双核菌丝，从而得到单核菌丝和双核菌丝共存的混合菌丝，最终得到单核菌丝双核菌丝共存的混合菌丝；
S4、母种菌丝培养：当S3中的混合菌丝生长至3厘米左右时，选择菌丝尖端整齐旺盛的部分，并取1毫米的菌丝转接至新的PDA试管，然后重复同样的办法继续转接2次，待菌丝长满试管后，便可得到作为母种的混合菌丝，由于单核菌丝和带病毒菌丝通常长势较弱，因此尖端菌丝通常为生长旺盛的双核无毒混合菌丝，因此选取尖端部分作为母种菌丝最佳；
S5、母种出菇培养：取一支S4中得到的混合菌丝母种，并将其分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中，待母种在容器中长满，便可以得到茬菇，将混合菌丝分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中培养，是为了培养出适应不同生长环境的茬菇，以便找到最合适的母种；
S6、复壮母种选取：在S5茬菇中取3-5个优质的子实体并进行组织分离，然后将分离后的子实体分别放入试管中，再对试管分别进行编号，经过纯化后获得多个编号的母种，之后从中挑选1-2个优质的母种，作为黑皮鸡枞的复壮母种，选取母种的菌丝需满足生长旺盛、洁白、浓密以及尖端整齐，保证后期生长出来的母种能够达到复壮效果。
第二实施例
请结合参阅图1-3，基于本发明的第一实施例一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，本发明的第二实施例提供另一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其中，第二实施例并不会妨碍第一实施例的技术方案的独立实施。
具体的，本发明的提供另一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法不同之处在于：
用于S2中孢子培养时，将试管固定在试管夹具上，所述试管夹具包括底座1和放置板2，所述底座1顶部的两侧均固定连接有支撑杆3，所述放置板 2底部的左右两侧分别与两个支撑杆3的顶端固定连接，所述放置板2的顶部开设有凹槽4，所述凹槽4的内部设置有两个固定夹板5，所述固定夹板5外部的一侧固定连接有固定杆6，所述固定杆6的外表面套接有弹性件7，所述固定夹板5的内侧设置有防护层8。
放置板2与底座1保持水平平行，通过两个支撑杆3将放置板2以及底座1固定在一起，凹槽4共设置有四个，均匀分布在放置板2顶部，整体为圆形设置，固定夹板5为半圆形设置，可以在凹槽4内部活动，固定杆6共设置有三个，均匀分布在固定夹板5外表面上，在凹槽4内表面上开设有与固定杆6适配的活动槽，使得固定杆6可以向活动槽内部延伸，弹性件7的位于固定夹板5与凹槽4内标相对的一侧之间，其两端分别与固定夹板5以及凹槽4固定连接，通过固定杆6可以对固定夹板5起到限位作用，使得固定夹板5可以在凹槽4内部保持稳定活动，通过设置该试管夹具，可以同时固定多个试管，在进行孢子培养时，可同时将多个试管置于同一相同光照条件下，进而保证孢子正常形成，相较于传统的单一试管夹具，使用起来更加灵活，其中通过固定夹板5、弹性件7以及固定杆6配合设置，使得该夹具能够同时适应不同大小的试管，进而增加了夹具的实用性，能够很好的满足使用需求。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (8)
1.一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、黑皮鸡枞菌预处理：从黑皮鸡枞头茬菇中选取基部直径1.5厘米以上头茬成熟子实体，然后切去柄部，并用酒精棉球擦拭表面，对其表面进行消毒；
S2、孢子培养：用无菌镊子和手术刀切取S1中处理好的成熟子实体菌盖边缘，再用无菌的镊子撕去表皮，之后将剩余的菌褶部分，放入灭菌的空试管中，然后将试管固定在试管夹具上，并置于散射光下培养使其弹射孢子，最终形成孢子印；
S3、孢子菌丝培养：将S2中完成弹射孢子的菌褶组织取出，然后用接种针蘸取孢子粉并转接到加入30微克每毫升链霉素的PDA试管培养基的底部，进行孢子菌丝培养，最终得到单核菌丝双核菌丝共存的混合菌丝；
S4、母种菌丝培养：当S3中的混合菌丝生长至3厘米左右时，选择菌丝尖端整齐旺盛的部分，并取1毫米的菌丝转接至新的PDA试管，然后重复同样的办法继续转接2次，待菌丝长满试管后，便可得到作为母种的混合菌丝；
S5、母种出菇培养：取一支S4中得到的混合菌丝母种，并将其分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中，待母种在容器中长满，便可以得到茬菇；
S6、复壮母种选取：在S5茬菇中取3-5个优质的子实体并进行组织分离，然后将分离后的子实体分别放入试管中，再对试管分别进行编号，经过纯化后获得多个编号的母种，之后从中挑选1-2个优质的母种，作为黑皮鸡枞的复壮母种。
2.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：所述S1中选用浓度为75％酒精进行擦拭，能够有效的对子实体表面进行消毒，擦拭时间为10-20s，保证将子实体表面杂质擦拭干净即可。
3.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：所述S2中进行散光培养时，需在室温条件下25℃进行，并保证散光均匀照射在试管内部的菌褶部分。
4.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：所述S3中孢子在萌发后会形成单核菌丝互相杂交，而形成的单核菌丝又会产生双核菌丝，从而得到单核菌丝和双核菌丝共存的混合菌丝。
5.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：所述S4中由于单核菌丝和带病毒菌丝通常长势较弱，因此尖端菌丝通常为生长旺盛的双核无毒混合菌丝，因此选取尖端部分作为母种菌丝最佳。
6.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：所述S5中将混合菌丝分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中培养，是为了培养出适应不同生长环境的茬菇，以便找到最合适的母种。
7.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：所述S6中选取母种的菌丝需满足生长旺盛、洁白、浓密以及尖端整齐，保证后期生长出来的母种能够达到复壮效果。
8.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，用于S2中孢子培养时，将试管固定在试管夹具上，其特征在于，所述试管夹具包括底座(1)和放置板(2)，所述底座(1)顶部的两侧均固定连接有支撑杆(3)，所述放置板(2)底部的左右两侧分别与两个支撑杆(3)的顶端固定连接，所述放置板(2)的顶部开设有凹槽(4)，所述凹槽(4)的内部设置有两个固定夹板(5)，所述固定夹板(5)外部的一侧固定连接有固定杆(6)，所述固定杆(6)的外表面套接有弹性件(7)，所述固定夹板(5)的内侧设置有防护层(8)。
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