CN104255495B - 一种香榧组培苗的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种香榧组培苗的培养方法，步骤如下：(1)组培苗转接至生根诱导培养基，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA 0.5～1.0mg/L+LaCl320～40mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂5～6g/L；(2)暗培养处理：在温度为30～35℃，黑暗的条件下培养7～15天，诱导形成根原基；(3)生根培养：在红光、蓝光或红蓝光下培养，光周期为8～16h/天，光照强度为1500～2000lx，培养温度25～28℃，培养期为40天，即得生根的香榧组培苗。本发明的培养方法，可成功得到生根组培苗，生根率高，稳定性好，且易操作，不受外界条件的限制，可快速建立香榧的离体快繁体系。

Description

一种香榧组培苗的培养方法
技术领域
本发明涉及一种香榧组培苗的培养方法，具体涉及一种促进香榧组培苗生根的培养方法。
背景技术
香榧(Torreya grandis)属红豆杉科香榧属，是我国特有的珍稀经济林树种。它集果用、油用、药用、材用和绿化观赏为一体，经济价值非常高。香榧种子胚乳含有营养丰富的油脂、碳水化合物、蛋白质和氨基酸，是我国著名的干果和食用油原料之一。种仁炒熟后松脆可口，营养丰富，香味独特。种仁可入药，有化痰、止咳、润肺、明目、杀虫、杀菌的功效。香榧油可预防血管硬化、冠心病。另外，香榧与其它红豆杉树木一样，也含有具有抗癌活性的生理活性物质——紫杉醇。
香榧为雌雄异株，自然条件下，种子萌发缓慢，繁殖周期长，现有的繁殖方式如实生播种、嫁接、扦插法，成苗比较困难，成活率低，难以满足生产上的要求。加之由于长期的无性繁育、随意采穗和不同的栽培环境和管理，品种内已发生较大的分化，在结果习性与产量品质等方面产生较大差异。长期来又忽视香榧品种的改良，至今没有建立良种采穗圃和规模较大的良种壮苗繁育基地，良种化建设工作相对滞后，较大地影响了香榧生产的高质量发展。
香榧的快速繁殖特别是对选育的香榧优良株系，可以利用茎段等微小器官培育成苗，既保证优良种性和纯度，又可在较短时间内培育出大量苗木，这对香榧的产业化发展优良品种、品系的繁育推广和提高香榧的品质具有很大的开发应用价值。由于香榧属植物组培一直存在生根难、生根率低的问题，现有的香榧组织培养技术还难以满足生产需求。因此，本发明致力于研究香榧的组织培养技术，以有效解决香榧组培苗的生根问题，为进一步建立香榧离体再生系统和快繁体系打下了基础，为种质改良和遗传转化提供了科学依据和技术支撑，更好地促进了香榧的产业化发展。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种可提高生根率的香榧组培苗的培养方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种香榧组培苗的培养方法，步骤如下：
(1)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗(无根苗)，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA 0.5～1.0mg/L+LaCl320～40mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂5～6g/L(该表述方式为所属领域技术人员惯用的表述方式；所述LS培养基为现有技术中常用的培养基)；
(2)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为30～35℃，黑暗的条件下培养7～15天，诱导形成根原基；
(3)生根培养：上述暗培养处理后，在红光、蓝光或红蓝光下培养，光周期为8～16h/天，光照强度为1500～2000lx，培养温度25～28℃，培养期为40天，即得生根的组培苗。
所述组培苗是通过以下方法得到的：从香榧植株上选择健壮无病虫害的嫩梢作为外植体，经过流水冲洗2min后，在超净工作台上用75％乙醇溶液(体积百分数)表面灭菌1min，无菌水冲洗3次，0.1％HgCl2溶液(质量百分数)灭菌8 min，无菌水冲洗4次，用手术刀切成1cm左右的小段，接种于诱导丛生芽培养基中，每瓶接5个，培养9～11天后，形成丛生芽；然后转接入继代培养基，继续培养20天左右，得无根的组培继代苗。
所述诱导丛生芽培养基的组成成分为：1/2B5培养基+KT 0.1mg/L+IBA 0.8mg/L(所述B5培养基为现有技术中常用的培养基)。
所述继代培养基的组成成分为：B5培养基+BA 0.1mg/L+NAA 2.0mg/L。
优选的，所述生根诱导培养基的组成为：LS+IBA 0.8mg/L+LaCl320mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L。
优选的，所述步骤(3)中的培养条件为：在红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx。
本发明的香榧组培苗的培养方法，可成功得到生根组培苗，生根率高，稳定性好，且易操作，不受外界条件的限制，四季皆可进行，可以快速建立香榧的离体快繁体系。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实验和实施例所用组培苗是通过以下方法得到的：从香榧植株(本发明所选用香榧品种为优株4号)上选择健壮无病虫害的嫩梢作为外植体，经过流水冲洗2min后，在超净工作台上用75％乙醇溶液(体积百分数)表面灭菌1min，无菌水冲洗3次，0.1％HgCl2溶液(质量百分数)灭菌8min，无菌水冲洗4次，用手术刀切成1cm左右的小段，接种于诱导丛生芽培养基中，每瓶接5个，培养9～11天后，形成丛生芽；然后转接入继代培养基，继续培养20天，得无根的组培继代苗。
所述诱导丛生芽培养基的组成成分为：1/2B5培养基+KT 0.1mg/L+IBA 0.8mg/L。
所述继代培养基的组成成分为：B5培养基+BA 0.1mg/L+NAA 2.0mg/L。
实验1生根培养基的筛选
对无根组培苗进行如下处理：
(1)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗(无根苗)，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA+LaCl3+蔗糖+琼脂5g/L；
(2)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为32℃，黑暗的条件下培养10天，诱导形成根原基；
(3)生根培养：上述暗培养处理后，在红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx，培养温度26℃，培养期为40天，得生根的组培苗(未生根的组培苗大多褐化死亡)，统计生根数，并计算生根率。
对生根诱导培养基中的IBA、LaCl3、蔗糖三者的浓度进行三因素三水平的考察，实验设计及结果如表2所示。
表1
由表1可知，最佳的生根诱导培养基组成为：LS+IBA 0.8 mg/L+LaCl320mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L。
实验2光照条件的筛选
对无根组培苗进行如下处理：
(1)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗(无根苗)，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为LS+IBA 1.0 mg/L+LaCl330mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L；
(2)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为32℃，黑暗的条件下培养10天，诱导形成根原基；
(3)生根培养：上述暗培养处理后，在不同光质不同光周期下进行生根培养，得生根的组培苗(未生根的组培苗大多褐化死亡)，统计生根数，并计算生根率(生根率＝生根的组培苗株数/接种的茎段个数)，考察红光、蓝光、红蓝光对生根的影响。
从光质(红光、蓝光、红蓝光)、光照强度、光照周期三个方面进行三因素三水平考察，试验设计及结果如表1所示。
表2
由表2可知，最佳的条件为：红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx。
实施例1生根组培苗的培养
步骤如下：
(1)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗(无根苗)，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA 0.8mg/L+LaCl320mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L；
(2)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为32℃，黑暗的条件下培养10天，诱导形成根原基；
(3)生根培养：上述暗培养处理后，在红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx，培养温度26℃，培养期为40天，得生根的组培苗，统计生根数，并计算生根率。结果：生根率86.5％。
实施例2生根组培苗的培养
步骤如下：
(1)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗(无根苗)，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA 0.8mg/L+LaCl320mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L；
(2)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为32℃，黑暗的条件下培养7天，诱导形成根原基；
(3)生根培养：上述暗培养处理后，在红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx，培养温度26℃，培养期为40天，得生根的组培苗，统计生根数，并计算生根率。结果：生根率82.7％。
实施例3生根组培苗的培养
步骤如下：
(1)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗(无根苗)，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA 0.8mg/L+LaCl320mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L；
(2)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为32℃，黑暗的条件下培养15天，诱导形成根原基；
(3)生根培养：上述暗培养处理后，在红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx，培养温度26℃，培养期为40天，得生根的组培苗，统计生根数，并计算生根率。结果：生根率83.4％。

Claims (3)

1.一种香榧组培苗的培养方法，其特征在于：步骤如下：
(1)通过以下方法得到组培继代苗：从香榧植株上选择健壮无病虫害的嫩梢作为外植体，经过流水冲洗2min后，在超净工作台上用体积百分数为75％的乙醇溶液表面灭菌1min，无菌水冲洗3次，质量百分数为0.1％的HgCl2溶液灭菌8min，无菌水冲洗4次，用手术刀切成1cm左右的小段，接种于诱导培养基中，每瓶接5个，培养9～11天后，形成丛生芽；然后转接入继代培养基，继续培养20天，得无根的组培继代苗；
所述诱导培养基的组成成分为：1/2B5培养基+KT0.1mg/L+IBA0.8mg/L；
所述继代培养基的组成成分为：B5培养基+BA0.1mg/L+NAA2.0mg/L；
(2)组培苗转接至生根诱导培养基：选择生长健壮的香榧组培继代苗，在无菌条件下，剪取带一个叶片或带芽的茎段，转接至生根诱导培养基中，生根诱导培养基的组成成分为：LS+IBA0.5～1.0mg/L+LaCl320～40mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂5～6g/L；
(3)暗培养处理：将上述转接至生根诱导培养基中的香榧组培苗，在温度为30～35℃，黑暗的条件下培养7～15天，诱导形成根原基；
(4)生根培养：上述暗培养处理后，分别在红光、蓝光、红蓝光下培养，光周期为8～16h/天，光照强度为1500～2000lx，培养温度25～28℃，培养期为40天，即得生根的组培苗。
2.根据权利要求1所述的香榧组培苗的培养方法，其特征在于：所述生根诱导培养基的组成为：LS+IBA0.8mg/L+LaCl320mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂5g/L。
3.根据权利要求1所述的香榧组培苗的培养方法，其特征在于，所述步骤(4)中的培养条件为：在红光下培养，光周期为12h/天，光照强度为2000lx。
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