CN103283481B - 一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法，属于人工外生菌根菌侵染育苗应用技术领域。具体方法主要涉及人工外生菌根菌侵染育苗，步骤包括：采集分离培养鸡油菌菌株、人工培养鸡油菌菌丝体及其扩大种、马尾松苗预处理、土地平整、鸡油菌菌丝体扩大种对马尾松幼苗的浸染及其幼苗的移栽、补植管护喷施菌根促进剂PG。在马尾松育苗过程中，采用鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋(氮、磷、钾及腐殖土等)同时育苗，可提高鸡油菌对马尾松苗木的浸染率，苗木侵染率达80％以上，大面积人工栽培已浸染上鸡油菌外生菌根菌的马尾松，优质苗率高，苗木长势良好，可实现菌根化，达到林速生、菌增效。该法操作简便，易于推广。

Description

一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法

技术领域

本发明涉及一种鸡油菌(Cantharlles cibarius)对马尾松(Pinus massoniana)幼苗的浸染方法，属于人工外生菌根菌侵染育苗应用技术领域。

背景技术

鸡油菌是世界著名的食用菌之一，子实体肉质，喇叭形，杏黄色至蛋黄色，菌肉蛋黄色，香气浓郁，具有杏仁味，质嫩而细腻，味鲜美，又名鸡蛋黄、杏菌。菌盖直径3～9cm，最初扁平后下凹，边缘波状，常裂开内卷，菌柄内实，表面光滑，长2～6cm，直径0.5～1.8cm。鸡油菌含有丰富的胡萝卜素、维生素c、蛋白质、钙、磷、铁等营养成分，性味甘、寒，具有清目、利肺、益肠胃等功效。常食用鸡油菌可预防视力下降、眼炎、皮肤干燥等疾病。据国外临床验证，鸡油菌具有一定的抗癌活性，对癌细胞的增长和扩散具有一定的抑制作用。

综上所述，鸡油菌具有较高营养价值和药用价值，深受人们喜爱。随着人们生活水平的提高，鸡油菌目前在国内市场供不应求。鸡油菌与林木树根存在着典型的共生关系，鸡油菌在马尾松育苗过程中对马尾松的生长起到促进作用，可使马尾松根系发达、生长旺盛，从而加快苗木的生长速度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法，可缓解目前国内市场上鸡油菌供不应求的现象，同时提高鸡油菌对马尾松苗木的浸染率，苗木侵染率达80％以上；大面积人工栽培已浸染上鸡油菌外生菌根菌的马尾松，优质苗率高，苗木长势良好，可实现菌根化，达到林速生、菌增效的效果。

实现上述目的本发明采用的技术方案

本发明采用人工外生菌根菌侵染育苗，在马尾松育苗过程中，采用鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋(如氮、磷、钾及腐殖土等)同时育苗，可提高鸡油菌对马尾松苗木的浸染率，苗木侵染率达80％以上；主要包括如下6个步骤：

1)采集、分离、培养鸡油菌菌株

野外采集鸡油菌，分离、培养鸡油菌菌株；

2)人工培养鸡油菌菌丝体及其扩大种

将步骤1)野外采集鸡油菌，分离、培养所得的鸡油菌菌株接种到特制的培养基上，25℃连续培养30d，获得鸡油菌菌丝体，再通过常规扩大培养，25℃连续培养45d，获得鸡油菌菌丝体扩大种；

3)马尾松苗预处理

马尾松为1年生幼苗，苗高15cm以上，地径0.3cm以上；马尾松苗根移栽前用93％甲基托布津原粉制备成1‰溶液浸泡10～15min作消毒预处理；

4)土地平整

带状整地，带宽不小于70～100cm，栽植穴底径不小于30cm，深度不小于25cm；整地要求表土翻向下，挖穴要求土壤回填，表土归心；3750～4500株/hm²，株行距(1.0×1.5)m～(1.7×1.7)m；

5)鸡油菌菌丝体扩大种对马尾松幼苗的浸染及其幼苗的移栽

将步骤2)所得的鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋——如氮、磷、钾及腐殖土等同时育苗；每营养袋加制备鸡油菌菌丝体扩大种20g，直接施于穴底中；然后移栽通过步骤3)处理的马尾松苗，一般在春季移栽；

6)补植、管护、喷施菌根促进剂PG

通过步骤5)移栽马尾松苗后，按常规浇水与除草管理，喷施菌根促进剂PG，及时补植未成活马尾松苗，不再另行施肥。

所述步骤2)的特制培养基最佳ph值为6.0，最适活性炭添加量为0.03％；

所述步骤2)的具体操作如下：

A.野外采集鸡油菌，松针为野生的，马铃薯、葡萄糖、琼脂为市场所购买；

B.鸡油菌菌丝体培养基制备配方：去皮马铃薯200g，松针200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml；

C.培养基具体制备过程

将松针洗净，马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min，用纱布滤去松针、马铃薯残渣，将滤液放回锅中，加热溶化，再加入葡萄糖，葡萄糖溶解后加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml，在定容过程中用酸、碱溶液调节ph值至6.0，同时加入活性碳0.3g，将配制好的培养基分装于三角瓶内，每瓶20ml，然后以0.103MPa、121℃高压蒸汽灭菌后置于37℃恒温箱中备用；

D.鸡油菌菌丝体培养

鸡油菌菌株接种到上述特制的培养基上，25℃连续培养30d，可获得鸡油菌菌丝体；

E.鸡油菌菌丝体扩大种常规培养基制备配方：马尾松木屑55％，玉米芯粉或草粉35％，米糠或麦麸10％，葡萄糖1％，石膏1％，高温灭菌后冷却备用；

F.鸡油菌菌丝体扩大种培养

将培养获得的鸡油菌菌丝体再转接到扩大种常规培养基上，25℃连续培养45d，可获得鸡油菌菌丝体扩大种。

本发明的有益效果

本发明采用鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋(氮、磷、钾及腐殖土等)同时育苗，可提高鸡油菌对马尾松幼苗的浸染率，在种植优良鸡油菌的同时可促进马尾松苗木的生长，达到林速生，菌增效；在充分利用有限土地资源的基础上，既能获得更多长势良好的苗木，又能获得高价值的鸡油菌，使马尾松苗根形成大量的菌根菌，且繁殖率高，优质苗率高，苗木侵染率达80％以上，且通过对野生鸡油菌分离以及菌丝体的培养，为人工进一步栽培鸡油菌奠定了基础，该法操作简便，易于推广。

具体实施方式

实施例1

鸡油菌菌丝体及其扩大种培养：通过反复研究与实践，筛选出培养鸡油菌菌丝体培养基最佳配方，培养基ph值和活性碳添加量是培养鸡油菌菌丝体的重要影响因子。由于逆境抗性的影响，培养基过酸、过碱都会抑制菌丝体的生长，该培养基最适ph值为6.0；在鸡油菌分离与菌丝体培养过程中，由于容易受到杂菌与伴生细菌的干扰，鸡油菌担孢子的萌发率极低，难以分离成活，活性碳作为一种强吸附剂，可有效吸附制约菌丝体生长发育的物质，培养基最适活性碳添加量为0.03％。野外采集鸡油菌，配制ph值为6.0、活性碳添加量为0.03％的培养基对其进行培养，25℃连续培养30d，可获得鸡油菌菌丝体；再通过常规扩大培养，25℃连续培养45d，可获得鸡油菌菌丝体扩大种；具体操作如下：

1)野外采集鸡油菌：从贵州省龙里林场、贵州省林业科学研究院林场野外采集鸡油菌，松针为野生采集，马铃薯、葡萄糖、琼脂购自市场；

2)鸡油菌菌丝体培养基制备配方：去皮马铃薯200g，松针200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml。

培养基具体制备过程如下：

将松针洗净，马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min，用纱布滤去松针、马铃薯残渣，将滤液放回锅中，加热溶化，再加入葡萄糖，葡萄糖溶解后加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml，在定容过程中用酸、碱溶液调节ph值至6.0，同时加入活性碳0.3g，将配制好的培养基分装于三角瓶内，每瓶20ml，然后以0.103MPa、121℃高压蒸汽灭菌后置于37℃恒温箱中备用；

3)鸡油菌菌丝体培养：野外采集所得的鸡油菌经无菌处理、分离接种在上述菌丝体培养基后置于25℃恒温培养箱中培养30d，即可获得鸡油菌菌丝体；

4)鸡油菌菌丝体扩大种常规培养基制备配方：马尾松木屑55％，玉米芯粉或草粉35％，米糠或麦麸10％，葡萄糖1％，石膏1％，高温灭菌后冷却备用；

5)鸡油菌菌丝体扩大种培养：将培养获得的鸡油菌菌丝体再转接到扩大种常规培养基上，25℃连续培养45d，可获得鸡油菌菌丝体扩大种。

实施例2

鸡油菌对马尾松幼苗的浸染：采用非灭菌接种法进行鸡油菌对马尾松幼苗的浸染，具体操作如下：

1)鸡油菌菌丝体及其扩大种培养：按实施例1进行；

2)马尾松苗预处理：马尾松苗由贵州省龙里林场苗圃提供，为1年生幼苗，苗高15cm以上，地径0.3cm以上；马尾松苗根移栽前用93％甲基托布津原粉制备成1‰溶液浸泡10～15min作消毒预处理；

3)土地平整：带状整地，带宽不小于70～100cm，栽植穴底径不小于30cm，深度不小于25cm。整地要求表土翻向下面，挖穴要求土壤回填，表土归心；3750～4500株/hm²，株行距(1.0×1.5)m～(1.7×1.7)m；

4)鸡油菌菌丝体扩大种对马尾松幼苗的浸染及其幼苗的移栽：鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋(氮、磷、钾及腐殖土等)同时育苗；具体每营养袋加制备鸡油菌菌丝体扩大种20g，直接施于穴底中；然后移栽已处理马尾松苗(一般在春季移栽)；

5)补植、管护、喷施菌根促进剂PG：移苗后按常规浇水与除草管理，喷施菌根促进剂PG，及时补植未成活马尾松苗，不再另外施肥。

Claims (2)

1.一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法，其特征在于：该方法采用人工外生菌根菌侵染育苗，在马尾松育苗过程中，采用鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋同时育苗，可提高鸡油菌对马尾松苗木的浸染率，苗木侵染率达80％以上；主要包括如下6个步骤：

1)采集、分离、培养鸡油菌菌株野外采集鸡油菌，分离、培养鸡油菌菌株；

2)人工培养鸡油菌菌丝体及其扩大种将步骤1)野外采集鸡油菌，分离、培养所得的鸡油菌菌株接种到特制的培养基上，25℃连续培养30d，获得鸡油菌菌丝体，再通过常规扩大培养，25℃连续培养45d，获得鸡油菌菌丝体扩大种；

3)马尾松苗预处理

马尾松为1年生幼苗，苗高15cm以上，地径0.3cm以上；马尾松苗根移栽前用93％甲基托布津原粉制备成1‰溶液浸泡10～15min作消毒预处理；

4)土地平整

带状整地，带宽70～100cm，栽植穴底径30cm，深度25cm；整地要求表土翻向下，挖穴要求土壤回填，表土归心；3750～4500株/hm²，株行距1.0m×1.5m～1.7m×1.7m；

5)鸡油菌菌丝体扩大种对马尾松幼苗的浸染及其幼苗的移栽将步骤2)所得的鸡油菌菌丝体扩大种与营养袋同时育苗；

每营养袋加制备鸡油菌菌丝体扩大种20g，直接施于穴底中；然后移栽通过步骤3)处理的马尾松苗，在春季移栽；

6)补植、管护、喷施菌根促进剂PG通过步骤5)移栽马尾松苗后，按常规浇水与除草管理，喷施菌根促进剂PG，及时补植未成活马尾松苗，不再另行施肥。

2.根据权利要求1所述一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法，其特征在于：所述步骤2)的特制培养基ph值为6.0，活性炭添加量为0.03％；所述步骤2)的具体操作如下：

A.野外采集鸡油菌，松针为野生的，马铃薯、葡萄糖、琼脂为市场所购买；

B.鸡油菌菌丝体培养基制备配方：去皮马铃薯200g，松针200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml；

C.培养基具体制备过程

将松针洗净，马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min，用纱布滤去松针、马铃薯残渣，将滤液放回锅中，加热溶化，再加入葡萄糖，葡萄糖溶解后加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml，在定容过程中用酸、碱溶液调节ph值至6.0，同时加入活性碳0.3g，将配制好的培养基分装于三角瓶内，每瓶20ml，然后以0.103MPa、121℃高压蒸汽灭菌后置于37℃恒温箱中备用；

D.鸡油菌菌丝体培养

鸡油菌菌株接种到上述特制的培养基上，25℃连续培养30d，可获得鸡油菌菌丝体；

E.鸡油菌菌丝体扩大种常规培养基制备配方：马尾松木屑55％，玉米芯粉或草粉35％，米糠或麦麸10％，葡萄糖1％，石膏1％，高温灭菌后冷却备用；

F.鸡油菌菌丝体扩大种培养

将培养获得的鸡油菌菌丝体再转接到扩大种常规培养基上，25℃连续培养45d，可获得鸡油菌菌丝体扩大种。