CN109548649A - 一种疏花水柏枝组织培养诱导基质及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及疏花水柏枝的快繁基质及其使用方法，属于无性繁殖技术领域。其包括45%—58%的wpm基质和42%—55%的本发明基质；本发明基质为：核桃提取物1.2mg—2.5mg/L、油菜花提取物1.6mg—3.0mg/L、牛筋草根提取物1.2mg—2.5mg/L、土豆提取物1.8mg—2.8mg/L、三磷酸腺苷2.8mg—3.8 mg/L、辅酶A200—500国际单位/L、细胞色素C 0.2mg—1.0mg/L、维生素C 5mg—10mg/L、苏氨酸1.2g—1.8g/L、葡萄糖50 g—80g/L、琼脂粉10g—20g/L，仙人掌汁加至100%，PH值6.5—7.0。

Description

一种疏花水柏枝组织培养诱导基质及其使用方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养繁殖技术领域，具体涉及以疏花水柏枝幼嫩茎尖、叶片、花瓣、花茎等植物器官作为组织培养的外植体为外植体，进行植物组织培养，特指一种疏花水柏枝组织培养诱导基质及其使用方法。

背景技术

疏花水柏枝为柽柳科、水柏枝属直立灌木。其耐水生存能力超常，具有抵抗洪水冲击和忍耐水淹的能力，在一年中长达5个月的水淹情况下仍能茂盛生长，也能够耐干旱、高温等极端天气。但因三峡工程建设而导致生境丧失，已被列为珍稀濒危种。疏花水柏枝对修复水域消涨带具有十分重要的意义，所以无论是从珍稀濒危物种抢救性保护和实际应用来说，采取必要措施对其进行有效保护迫在眉睫，而至今并没有一种快速、高效的方法对其进行优良性状的保护和繁殖。对于在保护地中仅存的濒危种，特别是在寒冷季节，生长也极其缓慢，甚至生长停滞并处于休眠状态，所以对疏花水柏枝的保护也不容乐观。

发明内容

本发明攻克了一直以来木本植物难以组织培养的技术难关，用一种特制的培养基，通过植物组织培养技术，达到植株在短时间内大量增殖的目的。且该培养基配方简化、取材容易、成本低。

本发明可以很好地控制生长环境条件，繁殖系数大，培养周期短。管理方便，并能够保持植物的快速生长及其优良的生物特性。

本发明诱导基质包括45%—58%的wpm基质和42%—55%的本发明基质；本发明基质为：核桃提取物1.2mg—2.5mg /L、油菜花提取物1.6mg—3.0 mg /L、牛筋草根提取物1.2mg—2.5mg /L、土豆提取物1.8mg—2.8 mg /L、三磷酸腺苷2.8mg—3.8 mg /L、辅酶A200—500国际单位/L、细胞色素C 0.2mg—1.0mg /L、维生素C 5mg—10mg/L、苏氨酸1.2g—1.8g/L、葡萄糖50 g—80g /L、琼脂粉10 g—20g /L，仙人掌汁加至100%，PH值调整至6.5—7.0。

其配制方法为：

（1）取油菜花和牛筋草靠根尖处的1/2到1/3捣碎、绞榨成汁后备用；

（2）核桃剥壳取核桃仁粉碎成细末、土豆切片加10倍—20倍于的水煮沸10—15分钟后用滤纸过滤后备用；

（3）将全部原料注入自动搅拌加热分装机内加热分装到培养瓶中；

（4）基质瓶放入高压灭菌锅内，在温度保持120-126℃，压力1.1 KG/CM 2 ，消毒20—30分钟冷却后取出，放置8-24小时后备用。

本发明的有益效果为：本发明培养基采用核桃提取物、油菜花提取物等天然有机提取物，辅以微量元素、氨基酸、植物生长激素类物质合成，在植物组织培养中对组培苗的诱导分化及生长发育具有巨大的促进作用。结合其获得容易、配制简单的特点，得到高效的适合疏花水柏枝外植体生长发育的组合配方，对简化培养基、提高生产效率、降低生产成本有着重要的意义。

三磷酸腺苷是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源，被誉为细胞内能量的“分子通货”，储存和传递化学能，参与蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成，可促使机体各种细胞的修复和再生，增强细胞代谢活性，有效的补充和平衡组培苗体内的能量代谢。

辅酶A能激活体内的物质代谢，加强物质在体内的氧化并供给能量,解决了培养过程中缺氧的问题。

细胞色素C可进入细胞内起到矫正细胞呼吸与促进物质代谢的作用，有效改善组培苗的呼吸与代谢。

维生素C是一种抗氧化剂，作为一种高活性物质，参与新陈代谢过程，能帮助组培苗抵抗臭氧和紫外线，保护植物免受光合作用中有害副作用的侵害。

具体实施方法：

1、诱导培养基的配方： 1L本诱导培养基中含45%—58%的wpm基质，按照常规方法称量、配制；含42%—55%的本发明基质，按照如下方法配制：取核桃提取液1.2mg—2.5mg /L、油菜花提取物1.6mg—3.0 mg /L、牛筋草根提取物1.2mg—2.5mg /L、土豆提取物1.8mg—2.8mg /L、三磷酸腺苷2.8mg—3.8 mg /L、辅酶A200—500国际单位/L、细胞色素C 0.2mg—1.0mg /L、维生素C 5mg—10mg/L、苏氨酸1.2g—1.8g/L、葡萄糖50 g—80g /L、琼脂粉10g—20g /L，仙人掌汁加至100%，PH值调整至6.5—7.0。

2、本发明基质的配制方法为：

（1）取油菜花和牛筋草靠根尖处的1/2到1/3捣碎、绞榨成汁后备用；

（2）核桃剥壳取核桃仁粉碎成细末、土豆切片加10倍—20倍的水煮沸10—15分钟后用滤纸过滤后备用；

（3）将全部原料注入自动搅拌加热分装机内加热分装到培养瓶中；

（4） 基质瓶放入高压灭菌锅内，在温度保持120-126℃，压力1.1 KG/CM 2 ，消毒20—30分钟冷却后取出，放置8-24小时后备用。

3、疏花水柏枝组织培养诱导培养基的配制及使用方法：

（1）无菌外植体的获取：采用生长旺盛且无病虫害的健壮疏花水柏枝外围中上部幼嫩茎尖、叶片、花瓣、花茎等植物器官作为组织培养的外植体，幼嫩茎尖切成带1-3个腋芽的小段，叶片、花瓣、花茎切成5mm—15mm见方的小块，放置在烧杯中，用适量ph值7-7.5的中性洗涤液浸洗5-10min，洗静外植体表面污垢，再经流水冲洗10—30min，移至超净工作台进行无菌操作，添加0.05-0.2%的升汞消毒2-8min，用无菌水冲洗2-8次，然后用无菌吸水纸吸干表面水分，剪成1-2cm带3-5个腋芽的茎段，获得无菌外植体。

（2）将所述（1）中得到的无菌外植体接种到该诱导培养基中，在培养温度为20-28℃，光照强度为1200—6000 lux，光照时间10h-20h/d的条件下培养25-25d，诱导不定芽萌发，得到无菌苗。

以上所述为本发明的优选实施方式，对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，固凡依本发明专利申请范围所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均包含于本发明专利申请范围内。

Claims (4)

1.一种疏花水柏枝组织培养诱导基质及其使用方法，包括以下步骤：

1、诱导培养基的配方： 1L本诱导培养基中含45%—58%的wpm基质，按照常规方法称量、配制；含42%—55%的本发明基质，按照如下方法配制：取核桃提取液1.2mg—2.5mg /L、油菜花提取物1.6mg—3.0 mg /L、牛筋草根提取物1.2mg—2.5mg /L、土豆提取物1.8mg—2.8mg /L、三磷酸腺苷2.8mg—3.8 mg /L、辅酶A200—500国际单位/L、细胞色素C 0.2mg—1.0mg /L、维生素C 5mg—10mg/L、苏氨酸1.2g—1.8g/L、葡萄糖50 g—80g /L、琼脂粉10g—20g /L，仙人掌汁加至100%，PH值调整至6.5—7.0。

2.根据权利要求1所述的疏花水柏枝组织培养诱导基质的配制方法为：

（1）取油菜花和牛筋草靠根尖处的1/2到1/3捣碎、绞榨成汁后备用；

（2）核桃剥壳取核桃仁粉碎成细末、土豆切片加10倍—20倍于的水煮沸10—15分钟后用滤纸过滤后备用；

（3）将全部原料注入自动搅拌加热分装机内加热分装到培养瓶中；

（4） 基质瓶放入高压灭菌锅内，在温度保持120-126℃，压力1.1 KG/CM 2 ，消毒20—30分钟冷却后取出，放置8-24小时后备用。

3.疏花水柏枝组织培养诱导培养基的配制及使用方法：

（1）无菌外植体的获取：采用生长旺盛且无病虫害的健壮疏花水柏枝外围中上部幼嫩茎尖、叶片、花瓣、花茎等植物器官作为组织培养的外植体，幼嫩茎尖切成带1-3个腋芽的小段，叶片、花瓣、花茎切成5mm—15mm见方的小块，放置在烧杯中，用适量ph值7-7.5的中性洗涤液浸洗5-10min，洗静外植体表面污垢，再经流水冲洗10-30min，移至超净工作台进行无菌操作，添加0.05-0.2%的升汞消毒2-8min，用无菌水冲洗2-8次，然后用无菌吸水纸吸干表面水分，剪成1-2cm带3-5个腋芽的茎段，获得无菌外植体。

4.（2）将所述（1）中得到的无菌外植体接种到该诱导培养基中，在培养温度为20-28℃，光照强度为1200—6000 lux，光照时间10h-20h/d的条件下培养25-25d，诱导不定芽萌发，得到无菌苗。