KR100361165B1 - 장수풍뎅이 유충을 기주로 한 동충하초 및 그 생산방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간의 질병에 좋은 효과가 있는동충하초에 관한 것으로, 본 발명의 동충하초는 장수풍뎅이 유충을 기주로 하는 새로운 동충하초이며, 이러한 새로운 동충하초는 장수풍뎅이 유충을 특수한 처리제로 전처리한 후에 동충하초 균주를 접종하여 배양하는 것에 의해 제조할 수 있으며, 기주로 하는 장수풍뎅이 유충이 인간의 질병에 좋은 효과가 있고, 동충하초는 그 영양원이 살아 있는 곤충의 구성 성분이 전환된 것이므로 곤충에서 나오는 여러 생리활성물질은 인간의 각종 질병치료에 이용되어질 수 있는 가능성이 높으므로 본 동충하초의 우수한 약리적 성질이 기대된다.

Description

장수풍뎅이 유충을 기주로 한 동충하초 및 그 생산방법 {New Cordyceps sp. using Xylotrupes dichotomus larva as host and production thereof}

본 발명은 동충하초에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 장수풍뎅이 유충(상용명 '굼벵이')을 기주로 한 새로운 동충하초 및 그 생산방법에 관한 것이다.

동충하초 (Cordyceps sp.)는 곤충의 몸에 침입하므로서 기주의 양분을 이용하여 자좌(stroma)를 형성시키는 약용버섯으로 분류학상의 위치는 자낭균운(Ascomycota) 핵균강(Pyrenomycetes) 맥각균목(Clavicipitales) 맥각균과(Claviciptaceae) 동충하초속(Cordyceps)에 해당되며, 한국, 중국, 일본 등 세계적으로 널리 분포하고 있다. 특히 중국에서는 인삼, 녹용과 함께 3대 한약재로 취급되어 왔으며, 최근에는 각종 성인병 치료와 특히 항암 및 제암효과의 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

동충하초란 곤충에 기생하며, 그의 단백질을 영양원으로 성장하며 겨울에는 벌레 상태로 있다가 여름이 되면 기주를 뚫고 나와서 버섯으로 되지만, 일반 버섯류는 그 영양분을 죽은 식물에서 얻어 발생 성장하므로 사물기생균이라 한다. 따라서 성분도 식물의 구성물질이나 그 물질이 대사를 통하여 버섯의 성분으로 전환된 것이다. 그러나 동충하초는 그 영양원이 살아 있는 곤충의 구성 성분이 전환된 것이다. 이것은 동물성 단백질을 영양으로 하기 때문에 여기에서 나오는 여러 생리활성물질은 인간의 각종 질병치료에 이용되어질 수 있는 가능성이 높으리라 생각된다. 이러한 동충하초는 예로부터 그 약리효과가 인정되어 왔으며, 최근 국내에서도 대량배양에 성공하여 성분이 분석되고, 약리효과가 인정되고 있을 뿐만아니라 코디세핀이라는 항암제도 개발되었다. 동충하초 효능의 분석을 보면 충초 다당류, 스테로이드류, 효소류 등 산업적으로 이용 가능한 물질을 다량 함유하고 있으며, 미생물 살충제로서도 개발 가능성이 매우 높다. 약리효과에서도 면역중강력, 제암력, 항균력, 염증억제, 항피로효과, 마약중독치유력이 있어 기능성 식품으로서도 고부가가치가 있다.

대부분의 식용 및 약용버섯들이 항암효과와 다른 약효를 함께 가지고 있으며, 특히 항암작용에 대하여 국내외에서 많이 연구되고 있다. 목질진흙버섯, 송이, 맛버섯, 팽나무버섯, 표고, 구름버섯등이 높은 종양저지율을 나타내고 있다.최근 발표에 의하면 신령버섯, 저령, 목질진흙버섯, 말똥진흙버섯, 송이, 표고, 구름버섯, 느타리등이 전치율이나 종양저지율이 높은 것으로 나타내고 있다. 현재까지 일본이나 한국에서 버섯 약품은 주로 항암제와 간염에 국한된다. 버섯 항암제는 치료효과보다 면역효과가 더욱 높은 것으로 알려져 있기 때문에 암 환자의 예방제로 보다 알맞을 것으로 생각된다. 특히 다른 항암제에 비하여 부작용이 거의 없는 것으로 알려져 있다.

버섯은 필수 아미노산, 비타민, 무기염류 등을 골고루 함유하며 열량이 낮기 때문에 이들의 특성을 이용할 수 있다. 특히 현대인의 성인병 예방에 효과가 크며, 식이 섬유성 음료로도 충분히 이용될 수 있다. 약용버섯에는 다양한 약효를 가진 버섯이 있다. 예로서 불로초버섯(영지), 구름버섯, 신령버섯이 있는데 이를 이용한건강음료는 현재 100가지 제품 이상이 개발되어 시판되고 있다. 따라서 이러한 것을 식품으로 이용할 수 있도록 하는 것이 필요하며, 개발이 가능할 것이다.

버섯 속에 여러 가지 인체에 유용한 생리활성 물질(예: 항암성분, 성인병예방 성분) 있다는 것이 알려지면서 자연산이 멸종단계에 이르자 버섯 자체 또는 균사를 대량으로 키운 균사체나 버섯을 재배한 배양에서 대규모로 인체 유용물질을 생산하기에 이르렀다. 그러므로 동충하초를 대량 인공배양을 통하여 농가 보급형 재배 기술을 확립한다면 모든 국민이 쉽게 이용할수 있으며, 궁극적으로 여러 질환에 대한 예방제와 치료제로서 전 국민의 건강에 이바지할 수 있을 것이다.

자연환경에서 서식하는 동충하초는 인공배양이 어려워 널리 이용되지 못하였으나 최근에 기주로서 누에(가잠) 또는 누에 번데기를 이용하여 인공재배하는 방법이 발표된 바 있다(한국특허공개 제98-23907호 및 98-23908호 공보 참조). 한국특허공개 제98-23907호 공보에는 동충하초의 일종인 페실로마이세스 자포니카균 포자를 분무기를 이용하여 가잠의 4∼5령기 유충 또는 번데기 표피에 경피접종한 후, 균사체를 형성한 번데기에서 자실체를 형성시키는 방법이 기술되어 있고, 한국특허공개 제98-23908호 공보에는 페실로마이세스속 균주 J300의 포자를 분무기를 이용하여 가잠의 5령기 유충 표피에 경피접종한 후, 균사체를 형성한 번데기에서 자실체를 형성시키는 방법이 기술되어 있다.

그러나 이 방법은 인공재배 방법이 어려워 대량생산을 통한 농가소득 증대에는 어려움이 있다.

따라서 본 발명은 우수한 품질의 새로운 동충하초와, 이러한 동충하초를 농가에서 손쉽게 생산할 수 있는 방법을 제공하여 농가소득을 증대시키는 것을 목적으로 한다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명자는 다양한 실험을 거듭한 결과 성인병 예방과 치료에 탁월한 효능이 있는 것으로 알려진 장수풍뎅이 유충을 특수하게 처리하면 이를 기주로 하여 우수한 품질의 새로운 동충하초를 손 쉽게 생산할 수 있음을 알게되어 본 발명을 안출하게 된 것이다.

도 1은 병재배에서 본 발명에 따라 기주인 장수풍뎅이 유충에서 동충하초가 착상된 상태를 보여주는 사진들로, 도 1a는 유충의 머리쪽(중앙의 검정부분) 정면에서 촬영한 사진이고, 도 1b는 도 1a의 동충하초가 착상된 장수풍뎅이 유충을 절개한 후 내부상태를 촬영한 사진이며, 도 1c은 도 1b의 절개외부상태를 촬영한 사진이다.

도 2는 병재배에서 완전히 자란 장수풍뎅이 유충 동충하초를 4분하여 촬영한 사진들로, 도 2a, 도 2b, 도 2c의 순으로 점점 크게 확대한 사진들이다 (왼쪽 하단에 유충의 머리가 보이며, 유충의 몸체에 완전하게 균핵이 착상되고 웃자람도 양호한 상태, 분해되지 않은 현미도 보임).

도 3a 내지 도 3c는 병재배에서 완전히 자란 굼벵이 동충하초의 형태를 보여주는 사진들로 동충하초가 완전하고 빽빽한 성장으로 하고 웃자람과 둘레자람 상태가 매우 양호한 상태임을 볼 수 있다.

도 4는 본 발명의 바람직한 실시예에 따라 동충하초를 인공재배하는 공정을 개략적으로 나타낸 플로우챠트이다.

그러므로 본 발명에 의하면 장수풍뎅이 유충을 기주로 한 새로운 동충하초 가 제공된다.

또한 본 발명에 의하면 장수풍뎅이 유충을 기주로 하여 동충하초 균주를 접종하여 배양하는 것을 특징으로 하는 동충하초의 생산방법이 제공된다.

이하 본 발명의 바림직한 구현방법을 예로 들어 보다 상세하게 설명하기로 한다.

장수풍뎅이[Allomyrina dichotoma(Linne)]는 분류학상 곤충강 (Insecta) 딱정벌레목(Coleoptera) 장수풍뎅이과 (Dynastidae)에 속하며 1년에 한 번 생활사를 완결하는 1화생 곤충으로 3번의 탈피를 하여 번데기가 된 후 6-7월경에 성충으로 우화한다. 성충을 지낸 후 8월말에서 9월에 걸쳐 교미를 하고 산란을 하며, 약 2주후에 1령 유충으로 부화한다. 장수풍뎅이 유충은 딱정벌레류의 유충을 말하며, 흔히 민간 요법으로 이용되어온 것은 장수풍뎅이 유충이며, 간경화, 간암 등의 간 질환에 효능이 있는 것으로 알려져 있고, 이외에도 허약체질의 보양효과와 각종 성인병 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서 이용하기에 적합한 동충하초 균주로는 번데기 동충하초(Cordyceps milltris)와 눈꽃 동충하초(Cordyceps japonlca)이나, 본 발명은 이에 한정되지 않는다. 본 방법은 장수풍뎅이 유충을 갈거나 쪼개지 않고 완전한 애벌레의 상태에서 제조한다.

본 발명에 따라 기주인 장수풍뎅이 유충에서 동충하초를 재배하는 데에는 기주에 동충하초 균주를 접종하기 전에 조효소 용액을 기주에 살포하여 기주내로 동충하초 균사의 침투가 용이한 상태로 만드는 것이 바람직하다.

장수풍뎅이 유충 동충하초는 자연상태에서 장수풍뎅이 유충 동충하초종이 없어 재배병내에 순수한 장수풍뎅이 유충만을 넣고 눈꽃 동충하초 (Cordyceps japonica)와 번데기 동충하초(Cordyceps militaris)를 장수풍뎅이 유충에 접종하여 제조를 시도한 결과, 동충하초가 기주내로 침투하지 못하고, 설사 침투하였을 경우도 기주내에 완전하게 균핵을 착상시키지 못할 뿐만아니라 자좌의 웃자람과 둘레자람도 불량하여 기주내로의 균사의 침투가 용이하도록 처리하는 것이 필요하다.

일반적으로 균류는 세포외로 여러 가지 효소를 분비하는 것으로 알려져 있으며, 동충하초는 여러 곤충의 외피를 뚫고 들어가 기주내에 균핵을 만들어 기주를 영양분으로 이용하여 성장하는 특징을 가지므로 특정 기질에 의한 외분비 복합효소체계를 가지고 있어 다당류 분해효소, 단백질 분해효소, 지방 분해효소 등을 분비효소계로 가지고 있다.

한편 장수풍뎅이 유충은 그 주된 구성성분이 단백질, 지질 그리고 키틴이므로 기질의 선정은 특정 효소를 유도하는 단독기질보다 복합기질이 유용하다.

따라서 본 발명의 바람직한 구현에 의하면 장수풍뎅이 유충 내로 동충하초 균사의 침투가 용이하도록 하기 위해서 복합기질에서 유도한 동충하초의 외분비 조효소로 장수풍뎅이 유충을 전처리한다.

바람직하게 이러한 조효소는 동충하초 포자현탁액에 동충하초 균을 접종하여 접종액을 얻고, 밀기울과 키틴을 함유하는 액체 유도배지에 상기 접종액을 넣어 진탕배양하고, 배양된 균으로 균사체를 생장시킨 후 균사체는 버리고 배양여액을 원심분리하여 상등액을 수집하는 것에 의해 제조할 수 있다. 이때 상등액이 조효소 용액이 된다.

조효소 용액을 제조하는 방법을 바람직한 예시의 방법으로 보다 상세하게 설명하면, 우선 동충하초를 계대배양하고 종균배양하여 포자가 형성되면 멸균세정제를 넣고 보텍싱(vortexing)한 다음, 현탁상태의 상층액을 수집하여 포자수를 산출하고, 포자수가 산출된 현탁액을 동일한 용액으로 희석한 후 균을 접종한다.

이와는 별도로 밀기율과 콜로이드상 키틴 용액을 함유하는 복합기질에 최소 무기염류 용액을 첨가하여 증류수로 최종부피가 되도록 첨가하여 제조한 후, 멸균처리하여 복합기질 액체 유도배지를 제조한다.

전자의 균이 접종된 포자현탁액을 후자의 복합기질 액체 유도 배지에 넣고진탕배양한다. 진탕배양은 특정 물질의 유도를 위한 액체배양에 반드시 필요하며, 이러한 조효소 유도를 위한 배양법을 일반적으로 기아법(Starvation method)이라 한다. 즉, 기질로 첨가된 물질은 동충하초 균이 직접 이용하기 힘든 고분자 물질로써 균이 이들 물질을 인식한 후에 해당되는 효소를 분비하여 이용 가능한 저분자 단위 물질로 전환시킨다. 따라서 기타의 물리적 조건은 균의 생육에 적절하여야 하므로 최적의 조건으로 배양하여야 한다. 또한 액체배지에서는 포자가 발아한 후 1차 영양균사가 형성하고 정치배양의 경우에 영양균사가 공기와 접촉하게 되면 2차 균사인 기증균사를 형성하게 되어 영양분의 이용이 일어나 자좌를 형성하게 된다. 따라서 조효소 용액의 제조시 액체 배양은 교반하에 수행하여 기질과 접촉 면적이 최대가 될 수 있도록 하는 것이 바람직하다.

균사체의 생육은 내부의 배양용기 내의 수분조건, 영양조건, 산소조건, 교반 조건 등에 영향을 받지만 최소의 조건 이전까지는 균사체 덩어리는 계속해서 생장한다. 따라서 멸균된 거어즈에 배양한 균을 부어 균사체를 수확한 다음, 균사체는 버리고, 나머지 배양여액을 이용한다.

배양여액에 남아있는 균사 조각이나 찌꺼기, 분자량이 작은 이물질 등의 제거를 위하여 원심분리하여 상등액만을 취한다.

위에서 얻은 상등액 자체가 동충하초균이 외부로 분비한 효소용액의 혼합물로 키티나제(chitinase), 프로테아제(protease), 리파제(lipase) 등의 효소가 함유되어 있으므로 조효소 용액이라고 한다. 조효소 용액은 상온에 너무 오래 방치하면 효소활성을 상실할 수 있으므로 바로 멸균된 병에 담아서 사용 직전까지 저온에서보관한다.

이와 같이 하여 제조한 조효소액을 멸균된 재배병 내의 장수풍뎅이 유충에 무균적으로 살포하고 일정 온도에서 일정시간 방치하여 장수풍뎅이 유충의 구성분인 단백질, 지질, 그리고 간질을 형성하고 있는 키틴에 키티나제, 프로테아제, 리파제 등의 효소 반응이 효과적으로 일어날 수 있도록 각 효소의 최적 활성을 위한 평균조건을 맞춘다.

곡립류가 동충하초 성장에 미치는 영향은 일반적으로 에너지원으로서 작용, 수분 조절제로서의 작용 그리고 복합 유도 기질로서의 작용이 있는 것으로 생각된다. 따라서, 현미, 폐당밀, 폐맥아 등과 같은 곡립의 첨가량이 중요하며, 현미 첨가량에 따른 동충하초균의 성장 과정을 조사한 결과 현미의 양이 많을 경우에는 왕성한 자좌의 형성이 이루어지지 않으며, 이용되지 않은 현미가 부패될 확률이 높다. 또한, 현미의 양이 적을 경우에는 기주에 완전하게 균핵이 착상되지 않고 자좌의 상태로 불량하게 된다. 2 내지 3 마리의 장수풍뎅이 유충을 병에 넣고 동충하초를 재비시에 효과적으로 균핵이 착상되기 위한 재배병 바닥에 넣는 현미의 량은 대략 200g 정도가 적당하다.

다음, 장수풍뎅이 유충에 동충하초 균을 접종하고 배양한다. 균의 접종으로부터 40 내지 50일이 경과하면 완전히 성장한 동충하초를 얻을 수 있게 된다. 완전히 성장한 동충하초는 동결 진공 건조하여 보관하는 것이 적당하다.

특정 효소가 아닌 복합효소로부터 얻은 조효소로 전처리를 행하는 이러한 방법은 기존의 동충하초의 생산에는 사용되지 않은 새로운 방법이다. 이와 같이 조효소로 전처리하면 동충하초 균주가 기주에 침투가 용이하게 된다. 이 상태에서 기주에 동충하초 균을 접종하는 것 보다는 현미 등과 같은 곡립류를 첨가하여 수분을 조절하고 에너지원을 보강하는 것이 바람직하다.

동충하초의 생산에 있어 첨가제의 이용은 누에 동충하초의 경우 기주에 균핵 착상에 도움을 주기 위해서 포도당을 첨가한 예가 있으며, 이는 포도당이 생체 대사활성의 기질이 되어 에너지원이 되기 때문에 첨가한 것으로 보인다. 기타 많은 버섯류에서도 첨가제를 사용한 예가 있다. 이러한 첨가제들도 본 발명에 이용할 수 있다.

상술한 바와 같이 기주내로의 균사의 침투가 용이하도록 하기 위하여 조효소 용액을 제조하여 처리하고, 곡립을 적정량 첨가하여 에너지원 및 수분을 조절하면 기주침투에 큰 효과를 보여 완전한 균핵의 착상과 더불어 자좌의 성장(웃자람 및 둘레자람)도 매우 양호한 동충하초를 얻을 수 있었다. 또한 본 방법은 기주의 대량사육이 가능하면 동충하초의 대량생산을 가능하게 한다.

상기한 바와 같은 본 발명의 특징 및 기타의 장점은 후술되는 실시예로부터 보다 명백하게 될 것이다.

[실시예]

도 4에 나타낸 바와 같은 단계를 거쳐 병속에서 동충하초를 재배하였다. 그 구체적인 조건들은 다음과 같다.

1. 기주의 준비

(1) 병재배를 위한 기주의 준비 : 미리 사육하여 3령기까지 성장한 장수풍뎅이 유충을 병재배를 위한 배양병에 2-3마리씩 넣은 다음 멸균기에서 멸균처리 한다.

(2) 눈꽃 동충하초(Cordyceps japonica)와 번데기 동충하초(Cordyceps mllltarls)의 배양

① 계대배양 : 눈꽃 동충하초의 계대배양은 감자 포도당 한천(Potato dextrose agar: PDA) (Difco Co.) 평판배지와 사면배지에 접종하여 24℃ 일주일 간격으로 계대배양한다.

② 포자 수득을 위한 종균배양 : 맥아 사면 한천(Malt slant agar) 또는 감자 배지에 30℃에서 10일간 배양한후 청색광을 2시간 조사하여 상온에 이틀간 방치한 다음 포자현탁액 조제에 이용한다.

2. 복합기질 액체 유도배지의 제조

(1) 복합 기질 (Comblned substrate) : 밀기울(wheat bran)과 콜로이드상 키틴(colloidal chitin) 용액을 각각 1% 로 첨가한 복합기질을 사용하였다.

(2) 최소 무기 염류 용액 (Mlnimal salt stock solution) : 조효소 용액의 유도를 위한 배지의 조건은 영양분의 조건이 최소화하여야 하므로 최소액체 배지의 첨가제로 최소 무기염류 용액을 제조한다. 사용된 최소 무기염류 용액의 조성은 표 1 과 같다.

최소 무기염류 용액
조 성 성 분	함 량
NaNO3	76g
MgSO4·7H2O	13g
KH2PO4	76g
KCl	13g
(NH4)2NO7O4	2g
ZnCl2	0.2g
MnCl2·4H2O	4㎎
CuSO4·5H2O	19㎎
FeCl2·6H2O	64.8㎎
증류수	500㎖

(3) 액체 유도배지의 제조 : 액체 유도 배지는 각각 1%의 밀기율과 colloidal chitin 용액에 2%의 최소 무기염류 용액을 첨가하여 증류수로 최종부피가 되도록 첨가하여 제조한 후, 습윤 고압 멸균법으로 멸균처리하여 준비한다.

3. 균의 접종(포자 현탁액)

(1) 포자 현탁액의 제조 : 위의 눈꽃 동충하초가 엷은 노란색을 띨때까지 성장한 맥아 사면 한천에 멸균 세정제인 0.02% 트윈(Tween) 80 용액을 3ml 넣고 배지면이 부숴지지 않도록 최대 속도로 3분간 vortexing 한 다음, 상충액을 멸균된 새 튜브에 담아 혈구 계수기를 이용하여 포자수를 산출한다.

(2)균의 접종 : 포자수가 산출된 현탁액을 동일한 용액으로 5×10⁵spotrs/ml 이 되도록 희석한 후에 무균 접종실에서 자동 접종기를 이용하여 접종한다.

4. 진탕배양

균이접종된 포자현탁액을 복합기질 액체 유도배지에 넣고 기아법으로 130 rpm의 교반하에 24℃로 7일간 진탕배양한다.

5. 균사체의 수확

(1) 거즈(gauze)에 의한 균사체 수확 : 멸균된 거어즈에 배양한 균을 부어 균사체를 수확한 다음, 균사체는 버리고, 나머지 배양여액을 이용한다.

(2)원심분리에 의한 상등액 분리 : 2,500×g에서 15분동안 원심분리하여균사 조각이나 찌꺼기, 분자량이 작은 이물질 등의 제거하고 상등액만을 취한다.

6. 조효소 용액의 제조

얻은 상등액을 바로 멸균된 병에 담아서 사용 직전까지 4℃ 에서 보관한다.

7. 기주 (장수풍뎅이 유충) 의 전처리

멸균된 재배병 내의 굼베이에 무균적으로 조효소액을 살포하고 50℃ 에서 3시간 방치하여 장수풍뎅이 유충의 구성분인 단백질, 지질, 그리고 간질을 형성하고 있는 chitin에 chitinase, protease, lipase 등의 효소 반응이 효과적으로 일어날 수 있도록 각 효소의 최적 활성을 위한 평균조건을 맞춘다.

8. 현미의 첨가

현미 200g을 전처리된 장수풍뎅이 유충 2 내지 3개 넣은 재배병 바닥에 깐다.

9. 균의 접종

(1) 액체 종균 접종액의 제조 : 균의 접종은 포자 현탁액을 5×10⁵spores/ml 만큼 PD broth 에 접종하여 24℃에서 7일간 배양한 다음 균사체를 수확하여 homogenizer 를 이용하여 균사체를 절편화하고 여과하여 다시 새로운 배지로 동일한 온도에서 2일간 배양한 액체 종균 접종액을 사용한다.

(2) 균의 접종 : 액체 종균 접종액을 접종실에서 무균 접종기를 이용하여 접종한다.

10. 배양(배양사)

균이 접종된 동충하초의 배양시 배양사는 항균 헤파(hepa) 필터가 장착된 무균적 배양사에서 배양하며, 배양 초기부터 10일 째까지는 70% 습도로 24℃에서 배양하며, 부피생장을 유도하기 위해서 동일 습도에서 30℃로 하룻동안 온도 쇼크를 준 후 배양한다.

11. 생산

위의 제조법에 따라 균을 접종하고 40-50일 후에 완전히 성장한 동충하초를 얻었다.

이에 의하면 완전한 균핵의 착상과 더불어 자좌의 성장도 매우 양호한 동충하초를 재배할 수 있으며, 기주로 하는 장수풍뎅이 유충이 인간의 질병에 좋은 효과가 있고, 동충하초는 그 영양원이 살아 있는 곤충의 구성 성분이 전환된 것이므로 곤충에서 나오는 여러 생리활성물질은 인간의 각종 질병치료에 이용되어질 수 있는 가능성이 높으므로 장수풍뎅이 유충에서 재배되는 동충하초의 우수한 약리적 성질이 기대된다.

Claims (6)

1. 삭제
2. 동충하초의 생산방법에 있어서,

   장수풍뎅이 유충을 기주로 하고, 상기 기주에 동충하초의 외분비 조효소로 전처리한 후 동충하초 균주를 접종하여 배양하는 것을 포함하며;

   상기 조효소는 동충하초 포자현탁액에 동충하초 균을 접종하여 접종액을 얻고, 밀기울과 키틴을 함유하는 액체 유도배지에 상기 접종액을 넣어 진탕배양하고, 배양된 균으로 균사체를 생장시킨 후 균사체는 버리고 배양여액을 원심분리하여 얻은 조효소 용액이고,

   상기 액체 유도배지는 밀기울과 콜로이드상 키틴용액을 함유하는 복합기질에 최소무기염류용액을 첨가하고 멸균처리한 복합기질 유도배지인 것을 특징으로 하는 동충하초의 생산방법.
3. 삭제
4. 삭제
5. 제2항에 있어서, 기주에 조효소를 살포하고 일정시간 경과한 후에 곡립류를 첨가하고 나서 동충하초 균주를 접종하는 것을 특징으로 하는 동충하초의 생산방법.
6. 삭제