CN104365319A - 一种利用高寒植物培育大棚制备冬虫夏草菌种材料的方法 - Google Patents
一种利用高寒植物培育大棚制备冬虫夏草菌种材料的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104365319A CN104365319A CN201410541487.4A CN201410541487A CN104365319A CN 104365319 A CN104365319 A CN 104365319A CN 201410541487 A CN201410541487 A CN 201410541487A CN 104365319 A CN104365319 A CN 104365319A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- booth
- psychrophyte
- aweto
- sinensis
- cordyceps sinensis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001248610 Ophiocordyceps sinensis Species 0.000 title claims abstract description 132
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 41
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 62
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 claims abstract description 22
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims abstract description 9
- 241000330899 Hepialus Species 0.000 claims description 85
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 52
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 29
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 29
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 22
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 19
- 210000001647 gastrula Anatomy 0.000 claims description 18
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 16
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 16
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 15
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 claims description 14
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 13
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 12
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 10
- 244000309464 bull Species 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 8
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000009413 insulation Methods 0.000 claims description 7
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 claims description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 241000057407 Thitarodes Species 0.000 abstract description 5
- 238000010413 gardening Methods 0.000 abstract 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 244000228295 Polygonum viviparum Species 0.000 description 15
- 235000012804 Polygonum viviparum Nutrition 0.000 description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 244000304222 Melaleuca cajuputi Species 0.000 description 11
- 235000001167 Melaleuca cajuputi Nutrition 0.000 description 11
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 9
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 241001531051 Potentilla chinensis Species 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 241000900056 Thalictrum alpinum Species 0.000 description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241000226556 Leontopodium alpinum Species 0.000 description 6
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 description 6
- 241001531052 Potentilla multifida Species 0.000 description 6
- 241001290610 Abildgaardia Species 0.000 description 5
- 241000764065 Persicaria capitata Species 0.000 description 5
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 5
- 241001180184 Bistorta macrophylla Species 0.000 description 4
- 241001164374 Calyx Species 0.000 description 4
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 4
- 241000973167 Carex atrofusca Species 0.000 description 4
- 240000002836 Ipomoea tricolor Species 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 241000205407 Polygonum Species 0.000 description 4
- 244000292697 Polygonum aviculare Species 0.000 description 4
- 235000006386 Polygonum aviculare Nutrition 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 3
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 3
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 3
- 241001373818 Saussurea graminea Species 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 3
- 244000303286 Stachys officinalis Species 0.000 description 3
- 235000009225 Stachys officinalis Nutrition 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 3
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 3
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 2
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 2
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 2
- 241000130407 Carex alatauensis Species 0.000 description 2
- 241001166832 Carex heterostachya Species 0.000 description 2
- 241000130389 Carex parvula Species 0.000 description 2
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 2
- 244000189548 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 description 2
- 241001113271 Cremanthodium Species 0.000 description 2
- 241001340402 Cyananthus macrocalyx Species 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000721098 Epilobium Species 0.000 description 2
- 241001340400 Epilobium sikkimense Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000226555 Leontopodium Species 0.000 description 2
- 241001303775 Phlomis Species 0.000 description 2
- 244000150979 Phrynium capitatum Species 0.000 description 2
- 241001340390 Polygonum filicaule Species 0.000 description 2
- 241000210110 Potentilla argentea Species 0.000 description 2
- 241000594384 Potentilla conferta Species 0.000 description 2
- 235000006432 Primula alpicola Nutrition 0.000 description 2
- 241001085321 Primula alpicola Species 0.000 description 2
- 241000823373 Ranunculus tanguticus Species 0.000 description 2
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 2
- 241000976872 Rheum pumilum Species 0.000 description 2
- 235000009411 Rheum rhabarbarum Nutrition 0.000 description 2
- 241000797934 Rheum tibeticum Species 0.000 description 2
- 241000689297 Saussurea stella Species 0.000 description 2
- 241000330896 Thitarodes armoricanus Species 0.000 description 2
- 241000376374 Thitarodes pui Species 0.000 description 2
- 241001383357 Thitarodes sejilaensis Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 2
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 1
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589220 Acetobacter Species 0.000 description 1
- 241000131825 Androsace mollis Species 0.000 description 1
- 241000083416 Androsace umbellata Species 0.000 description 1
- 241000132092 Aster Species 0.000 description 1
- 241001340404 Aster tongolensis Species 0.000 description 1
- 241001122192 Carex breviculmis Species 0.000 description 1
- 241000646225 Carex deasyi Species 0.000 description 1
- 241000130388 Carex nudicarpa Species 0.000 description 1
- 241000337617 Carex schneideri Species 0.000 description 1
- 241000973234 Carex viridula Species 0.000 description 1
- 241000190633 Cordyceps Species 0.000 description 1
- 241001334795 Cyananthus lichiangensis Species 0.000 description 1
- 241001136120 Cyananthus lobatus Species 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 241001522995 Deschampsia cespitosa Species 0.000 description 1
- 241001113317 Farfugium Species 0.000 description 1
- 241001113926 Gelsemium Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000130660 Hepialidae Species 0.000 description 1
- 241001427424 Hepialus xiaojinensis Species 0.000 description 1
- 241000143459 Hirsutella Species 0.000 description 1
- 244000194828 Ligularia tussilaginea Species 0.000 description 1
- 241000272933 Odontotermes hainanensis Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000904496 Pachypleurum nyalamense Species 0.000 description 1
- 241001340414 Pachypleurum xizangense Species 0.000 description 1
- 241000840103 Pacris xizangensis Species 0.000 description 1
- 241001416980 Paecilomyces hepiali Species 0.000 description 1
- 241000198716 Passiflora gracillima Species 0.000 description 1
- 241001310188 Pectis multiceps Species 0.000 description 1
- 241000167859 Pedicularis Species 0.000 description 1
- 241001607294 Pedicularis roylei Species 0.000 description 1
- 241001340412 Pedicularis sherriffii Species 0.000 description 1
- 241001499733 Plantago asiatica Species 0.000 description 1
- 241000686056 Polystichum moupinense Species 0.000 description 1
- 241001167448 Potentilla cuneata Species 0.000 description 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 1
- 244000137827 Rumex acetosa Species 0.000 description 1
- 235000015807 Rumex acetosa ssp. acetosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000015447 Rumex acetosa ssp. alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000015448 Rumex acetosa ssp. ambiguus Nutrition 0.000 description 1
- 235000015437 Rumex acetosa ssp. arifolius Nutrition 0.000 description 1
- 235000015436 Rumex acetosa ssp. lapponicus Nutrition 0.000 description 1
- 235000015441 Rumex acetosa ssp. pseudoxyria Nutrition 0.000 description 1
- 235000015439 Rumex acetosa ssp. thyrsiflorus Nutrition 0.000 description 1
- 244000207707 Rumex nepalensis Species 0.000 description 1
- 244000082946 Tarchonanthus camphoratus Species 0.000 description 1
- 235000005701 Tarchonanthus camphoratus Nutrition 0.000 description 1
- 241000342067 Telegeusis nubifer Species 0.000 description 1
- 241000205578 Thalictrum Species 0.000 description 1
- 241001120396 Thalictrum uncatum Species 0.000 description 1
- 241001601821 Thermopsis yushuensis Species 0.000 description 1
- 241000330900 Thitarodes albipictus Species 0.000 description 1
- 241000330897 Thitarodes baimaensis Species 0.000 description 1
- 241000330898 Thitarodes baqingensis Species 0.000 description 1
- 241000330901 Thitarodes callinivalis Species 0.000 description 1
- 241000330902 Thitarodes cingulatus Species 0.000 description 1
- 241000330903 Thitarodes damxungensis Species 0.000 description 1
- 241000330909 Thitarodes ferrugineus Species 0.000 description 1
- 241000802118 Thitarodes gonggaensis Species 0.000 description 1
- 241001485035 Thitarodes jiachaensis Species 0.000 description 1
- 241000330910 Thitarodes jialangensis Species 0.000 description 1
- 241000330905 Thitarodes jinshaensis Species 0.000 description 1
- 241000330906 Thitarodes kangdingroides Species 0.000 description 1
- 241000330907 Thitarodes litangensis Species 0.000 description 1
- 241000330912 Thitarodes meiliensis Species 0.000 description 1
- 241000330914 Thitarodes oblifurcus Species 0.000 description 1
- 241000057408 Thitarodes renzhiensis Species 0.000 description 1
- 241000330920 Thitarodes xunhuaensis Species 0.000 description 1
- 241000330916 Thitarodes zaliensis Species 0.000 description 1
- 241001187476 Tibetia yadongensis Species 0.000 description 1
- 240000006060 Tragopogon pratensis Species 0.000 description 1
- 241000372906 Vahlodea Species 0.000 description 1
- 235000006370 Veronica chayuensis Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 244000284428 cha yu po po na Species 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000005630 leukorrhea Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 206010046901 vaginal discharge Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
- A01G18/10—Mycorrhiza; Mycorrhizal associations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种利用高寒植物培育大棚制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法。该方法利用在青藏高原建立高寒植物培育大棚,通过人工或自动化控制大棚开关及喷淋水雾来控制大棚内温湿度,应用适合高原大棚的农业园艺栽培技术获得高寒植物苗,将制备的冬虫夏草菌源喷施接种到大棚栽培的高寒植物苗上,通过营造适应的环境促进冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与活体高寒植物组织共生,增大中国被毛孢在高寒植物组织中的共生量,共生处理后的冬虫夏草菌种材料对钩蝠蛾幼虫的侵染率可达90.8~94.9%。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用高寒植物培育大棚制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法。
背景技术
冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis(Berk.)Sung,Sung,Hywel-Jones&Spatafora是一种虫生子囊真菌,寄生于鳞翅目Lepidoptera蝠蛾科Hepialidae钩蝠蛾属Thitarodes昆虫的幼虫,其无性型为中国被毛孢Hirsutella sinensis Liu,Guo,Yu&Zeng。冬虫夏草寄主钩蝠蛾属Thitarodes昆虫的一个世代包括卵、幼虫、蛹和成虫四个发育阶段,幼虫营地下隧道式穴居生活,杂食性,喜食圆穗蓼、头花蓼、小大黄和珠芽蓼等高寒植物的幼嫩根茎。
冬虫夏草分布于青藏高原高海拔区域,其生长范围局限,产量也极为有限。它是青藏高原特色名贵滋补中药材,具有重要的药用和经济价值。由于冬虫夏草的形成过程中仍有许多关键问题尚不清楚,中国被毛孢侵染钩蝠蛾昆虫的侵染活性较弱,原生态冬虫夏草道地药材的产业化迄今仍存在许多障碍难题。
冬虫夏草所生长的青藏高原高海拔高寒生境,其主要地理环境特点是冻土期长、昼夜温差大、日照强烈、氧气含量低。冬虫夏草寄主钩蝠蛾的食料高寒植物存在着有效生长期短、生长发育繁殖缓慢等问题。通过在青藏高原建造自动化控制或人工控制的高原大棚,已是现代化高原农业生产的重要手段,通过大棚技术可以有效增加高寒植物的生长期和有效积温,显著促进高寒植物的生长发育与繁殖,同时可节约大量的人力物力成本,有效提高生产力和生产效率。
目前采用常规冬虫夏草菌种侵染寄主钩蝠蛾昆虫幼虫还存在侵染率低、耗费时间长等问题。中国发明专利申请(公开号:CN102696555A)公开了一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法,中国发明专利申请(公开号:CN102405763A)公开了一种冬虫夏草的培育方法,上述2个专利申请均采用含有中国被毛孢的菌液连续喷洒寄主幼虫体表的方法进行接种侵染;中国发明专利申请(公开号:CN102696392A)公开了天然冬虫夏草的增产方法,其中采用诱集液诱集蝙蝠蛾幼虫后,向幼虫喷洒蝙蝠蛾被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉两种菌种液体种;中国发明专利申请(公开号:CN102106235A)公开了一种全人工培养冬虫夏草的方法,其中采用一端直径小于0.2mm的不锈钢实心针或空心针的针状器具,沾取中国被毛孢菌体和孢子混悬液刺伤寄主幼虫的方法进行接种侵染;中国发明专利申请(公开号:CN102792855A)公开了一种用于冬虫夏草寄主感染的菌种材料及寄主感染方法,采用冬虫夏草菌皮作为菌种材料灌注、或拌入饲料喂食、或注射、或喷淋侵染寄主幼虫。但上述方法存在侵染活性低、或损伤后存活率低、或耗费时间过长、或菌种材料产量有限等问题,是制约原生态冬虫夏草道地药材产业化的关键问题之一。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用高寒植物培育大棚制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法。该方法利用在青藏高原建立冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫食料植物的高寒植物苗培育大棚,通过构建冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与活体高寒植物组织的共生体,促进中国被毛孢与高寒植物组织共生,激活中国被毛孢的侵染活性,得到对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料,达到高效侵染寄主钩蝠蛾幼虫的目的。
发明人在通过分子探针跟踪检测研究发现,冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢在自然界中与其适生地中的多种高寒植物的根、茎、叶等组织存在共生现象。进一步的研究发现,经高寒植物组织根、茎、叶等组织共生,共生后比未共生的中国被毛孢的侵染活性高数十至数百倍,基于这一原理发明本方法。
本发明利用高寒植物培育大棚制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法包括:在青藏高原环境下建立高寒植物培育大棚,利用大棚营造合适的温湿度及光照条件,通过适合高原大棚的农业园艺栽培技术进行水肥管理,栽培并获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物苗;将冬虫夏草菌源接种到培育大棚栽培的高寒植物苗组织上,利用大棚营造适宜的温湿度及光照条件,使冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与活体高寒植物共生培育,形成菌物-植物共生体,将菌丝检测结果为中国被毛孢的菌物-植物共生体作为对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料。
本发明的具体步骤包括:
1.在海拔2800~5200米的青藏高原高寒草甸,保留原有高寒草甸植被或将草甸开垦平整,以长10~20m×宽7.5~15m大小为建设单位,用薄膜或阳光板或玻璃等透明材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚,采用通常农业园艺规划方法在大棚内进行分区建垄,垄面大小为50~90cm×450~1920cm,在垄面上方高30~100cm处铺设水肥管理管路,垄间设立宽20~30cm深5~10cm的区域便于排水和管理人员行走,培育大棚四周留下约35~50cm的空区。
2.应用适合高原大棚的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据天气空气湿度及土壤湿度条件每个月喷淋水一至六次,使15cm深度的土壤含水量保持在25~35%左右,每1至2个月在一次喷水中按体积比100∶5~100∶20浓度加入牛羊尿或人尿;每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥,施放量为干重每平方米约150~250g。
3.通过人工或自动化控制大棚四周及顶部透明材料的开关,同时通过调节棚外辅助层(遮阴网或保温被)的开关以及喷雾装置调节大棚内温度,使棚内最高气温不超过22℃,空气湿度为55~100%,利用原生态光照条件栽培大棚内保留的原有高寒植物苗,或是将冬虫夏草适生地的钩蝠蛾幼虫食料高寒植物移栽入棚,或是将高寒植物种子播入大棚中栽培,或是将快速扩繁的高寒植物组培苗移栽入大棚中,并使之旺盛生长获得高寒植物苗。
4.从青海玉树或西藏那曲等冬虫夏草主产区或培育大棚附近的冬虫夏草适生地采集新鲜冬虫夏草或其子囊孢子,采用合适嗜低温菌物的工业微生物方法进行分离纯化,经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),通过常规低温发酵法在13±5℃条件下发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子,并进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子按发酵物质量与水体积比1∶100~1∶1000稀释成的悬浮液,作为冬虫夏草菌源;或直接采用冬虫夏草的新鲜子囊孢子稀释制成每毫升含有100~1000个子囊孢子的悬浮液,作为冬虫夏草菌源;
5.选择外界气温日间温度不超过18℃,夜间温度不低于4℃的月份时段,将制备的冬虫夏草菌源喷淋接种到培育大棚栽培的高寒植物苗上,每平方米喷施100~300ml菌悬液,连续喷施2~5天,每天喷施1~3次,喷施后遮阴,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部的开关以调节大棚内温度在13±5℃,温度超过18℃时,通过喷雾装置喷水雾通风降温,空气湿度65~95%,共生培育7~30天,促进中国被毛孢与高寒植物组织共生。
6.采用显微镜检查共培养的冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝与高寒植物根、叶、茎组织缠绕形成共生体,经分子检验菌丝为中国被毛孢后,可直接作为具有高侵染活性的菌种材料;亦可是将获得的共生体组织切成5~20mm小段,制备成具有高侵染活性的菌种材料,用遮阴保水保鲜方法存放于2~4℃,保存备用。
本发明方法获得的具有高侵染活性的菌种材料可用于高效侵染钩蝠蛾幼虫。使用时,可直接冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫投置到冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与高寒植物苗形成共生体的培育区,亦可将制备的高侵染活性菌种材料投喂冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫,使寄主幼虫取食并充分接触菌种材料。在寄主钩蝠蛾幼虫取食接触菌种材料3~15天后,采用显微镜检查及分子生物方法检测钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体,经统计,钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率约为90.8~94.9%。
本发明所述的采用合适嗜低温菌物的工业微生物方法进行分离纯化所用的分离培养基可以是察氏培养基、或马铃薯培养基、或肉汤培养基、或酵母浸出粉胨葡萄糖培养基、或高氏一号培养基中的一种。所述的通常发酵方法可以是固体发酵,或是液体发酵,或是固液双相发酵。所述固体发酵可以是大麦、小麦、大米、玉米等常规农作谷物中的一种或多种作为固体培养基。所述液体发酵可以是普通肉汤、或蛋白胨水、或酵母提取物等常规底料中的一种或多种作为液体培养基。所述固液双相发酵可采用深层发酵产生菌丝或芽生孢子后,在固体培养基上再继续发酵的方法,其培养基可以是上述固体发酵培养基和液体发酵培养基中的各一种。
本发明所述的高寒植物苗可以是大棚内原有高寒草甸植被,亦可是将采集的高寒植物和/或种子移栽在大棚内;所述高寒植物的种类包括柔软点地梅(Androsace mollis)、东俄洛紫菀(Aster tongolensis)、川滇苔草(Carex schneideri)、膨囊苔草(C.lehmanii)、青绿苔草(C.breviculmis)、黑褐苔草(C.atrofusca)、一岁苔草(C.heterostachya)、萨嘎苔草(C.sagaensis)、舌叶垂头菊(Cremanthodium linguiatum)、裂叶蓝钟花(Cyananthuslobatus)、丽江蓝钟花(C.lichiangensis)、大萼蓝钟花(C.macrocalyx)、发草(Deschampsiacaespitosa)、锡金柳叶菜(Epilobium sikkimense)、高山嵩草(Kobresia pygmaea)、大花嵩草(K.macrantha)、西藏嵩草(K.Schoenoides)、矮生嵩草(K.humilis)、线叶嵩草(K.capollifolia)、林芝橐吾(Ligularia nyingchiensis)、聂拉木厚棱芹(Pachypleurumnyalamense)、西藏厚棱芹(P.xizangense)、斑唇马先蒿(Pedicularis longifora)、昌都马先蒿(P.sherriffii)、草甸马先蒿(P.roylei)、西藏糙苏(Phlomis tibetica)、长果车前(Plantago asiatica)、细茎蓼(Polygonum filicaule)、叉枝蓼(P.tortuonum)、珠芽蓼(P.viviparum)、圆穗蓼(P.macrophyllum)、狭叶圆穗蓼(P.macrophyllum)、头花蓼(P.capitatum)、穆坪耳蕨(Polystichum moupinense)、楔叶委陵菜(Potentilla cuneata)、纤细委陵菜(P.gracillima)、多头委陵菜(P.multiceps)、大萼委陵菜(P.conferta)、多裂委陵菜(P.multifida)、西藏委陵菜(P.xizangensis)、杂色钟报春(Primula alpicola)、高原毛茛(Ranunculus tanguticus)、云生毛茛(R.nephelogens)、西藏大黄(Rheumtibeticum)、小大黄(R.pumilum)、尼泊尔酸模(Rumex nepalensis)、双齿风毛菊(Saussurealavrenkoana)、禾叶风毛菊(S.graminea)、星状凤毛菊(S.stella)、卵叶风毛菊(S.ovatifolia)、钩柱唐松草(Thalictrum uncatum)、高山唐松草(T.alpinun)和长果婆婆娜(Veronica chayuensis)中的一种或多种。
本发明所述的冬虫夏草寄主钩蝠蛾包括曲线钩蝠蛾T.fusconebulosa(De Geer,1778)(Hepialus)comb.n.、赭褐钩蝠蛾T.gallicus(Lederer,1852)(Hepialus)comb.n.、白线钩蝠蛾T.nubifer(Lederer,1853)(Hepialus)comb.n.、德氏钩蝠蛾T.davidi(Poujade,1886)(Hepialus)comb.n.、虫草钩蝠蛾Thitarodes armoricanus(Oberthür,1909)(Hepialus)、斜脉钩蝠蛾T.oblifurcus(Chu et Wang,1985)(Hepialus)、樟木钩蝠蛾T.zhangmoensis(Chu etWang,1985)(Hepialus)、康姬钩蝠蛾T.kangdingroides(Chu et Wang,1985)(Hepialus)、康定钩蝠蛾T.kangdingensis(Chu et Wang,1985)(Hepialus)、德钦钩蝠蛾T.deqingensis(Liang,1988)(Hepialus)、白马钩蝠蛾T.baimaensis(Liang,1988)(Hepialus)、梅里钩蝠蛾T.meiliensis(Liang,1988)(Hepialus)、贡嘎钩蝠蛾T.gonggaensis(Fu et Huang,1991)(Hepialus)、人支钩蝠蛾T.renzhiensis(Yang,1991)(Hepialus)、芒康钩蝠蛾T.markamensis(Yang et al.,1992)(Hepialus)、草地钩蝠蛾T.pratensis(Yang et al.,1992)(Hepialus)、锈色钩蝠蛾T.ferrugineus(Yang et al.,1993)(Hepialus)、金沙钩蝠蛾T.jinshaensis(Yang,1993)(Hepialus)、白纹钩蝠蛾T.albipictus(Yang,1993)(Hepialus)、甲郎钩蝠蛾T.jialangensis(Yang,1994)(Hepialus)、察里钩蝠蛾T.zaliensis(Yang,1994)(Hepialus)、中支钩蝠蛾T.zhongzhiensis(Liang,1995)(Hepialus)、叶日钩蝠蛾T.yeriensis(Liang,1995)(Hepialus)、美丽钩蝠蛾T.callinivalis(Liang,1995)(Hepialus)、里塘钩蝠蛾T.litangensis(Liang,1995)(Hepialus)、循化钩蝠蛾T.xunhuaensis(Yang et Yang,1995)(Hepialus)、白带钩蝠蛾T.cingulatus(Yang et Zhang,1995)(Hepialus)、巴青钩蝠蛾T.baqingensis(Yang et Jiang,1995)(Hepialus)、当雄钩蝠蛾T.damxungensis(Yang,1995)(Hepialus)、玉树钩蝠蛾T.yushuensis(Wang et al.,1995)(Hepialus)、宽兜钩蝠蛾T.latitegumenus(Shen et al.,1997)(Hepialus)comb.n.、双带钩蝠蛾T.bibelteus(Shen et al.,1997)(Hepialus)comb.n.、拉脊蝠蛾T.lagii(Yan,2001)(Hepialus)comb.n.、比如钩蝠蛾T.biruens(Fu,2002)(Hepialus)comb.n.、海南钩蝠蛾T.hainanensis(Chu et Wang,2004)(Hepialus)comb.n.、纳木钩蝠蛾T.namensis(Chu et al.,2004)(Hepialus)comb.n.、日喀则钩蝠蛾T.xigazeensis(Chu etal.,2004)(Hepialus)comb.n.、永胜钩蝠蛾T.yongshengensis(Chu et al.,2004)(Hepialus)comb.n.、定结钩蝠蛾T.dinggyeensis(Chu et al.,2004)(Hepialus)comb.n.、南木林钩蝠蛾T.nanmlinensis(Chu et al.,2004)(Hepialus)comb.n.、亚东钩蝠蛾T.yadongensis(Chu etal.,2004)(Hepialus)comb.n.、蒲氏钩蝠蛾T.pui(Zhang et al.,2007)(Hepialus)comb.n.、小金钩蝠蛾T.xiaojinensis(Tu et al.,2009)(Hepialus)comb.n.、色季拉钩蝠蛾T.sejilaensis(Zou et al.,2011)、加查钩蝠蛾T.jiachaensis(Zou et al.,2011)中的一种或多种。
具体实施方式
实施例一
1.在青藏高原海拔2800米的高山灌丛草甸区,选取地势排水较好的区域,以长20m×宽10m为一个单位建设培育大棚,将大棚范围内原有草甸植被除去并将土壤平整,用农用薄膜材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚,采用通常农业园艺规划方法在大棚内进行分区建垄,建成8个90cm×1900cm的培育垄,在垄面上方高100cm处铺设水肥管理管路,垄间挖开宽、深分别为30cm×8cm的区域便于排水及管理人员行走,大棚四周分别留下约50cm的工作区。
2.应用适合高原的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据空气及土壤湿度条件每个月喷淋水三至六次,使15cm深度的土壤含水量保持在30%左右,每2个月在一次喷水中加入水:尿体积比为100∶5浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥,施放量为干重每平方米约250g。
3.在冬虫夏草适生地区域采集圆穗蓼(Polygonum macrophytum)、珠芽蓼(Polygonumviviparum)、高山唐松草(Thactriun alpinun)、矮火绒草(Leontopodium alpinum)、委陵菜(Potentilla anserine)、黑褐苔草(Carexa trofusca)等植物的种子收集后撒入培育大棚内,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部透明材料的开关,同时通过调节棚外辅助层(遮阴网或保温被)的开关以及喷雾装置调节大棚内温度,使棚内最高气温不超过22℃,空气湿度在55~100%;利用原生态光照条件栽培大棚内的高寒植物苗,并使之旺盛生长获得高寒植物苗。
4.从青海玉树地区冬虫夏草主产区采集新鲜冬虫夏草,采用常规察氏培养基分离纯化菌种,经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),经通常蛋白胨水液体培养基在13±5℃发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子,并将发酵获得的菌球用搅拌器均匀打碎,最后按发酵液与水体积比1∶100进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子稀释搅匀成的悬浮液,作为冬虫夏草菌源。
5.每年9~11月,选择日间温度不超过18℃,夜间温度不低于4℃的时段,将制备的冬虫夏草菌源,利用喷淋管路或加压喷枪均匀喷淋接种到培育大棚高寒植物苗上,每平方米喷入100ml菌悬液,连续喷施5天,每天黄昏时喷施1次,喷完后用黑色遮阴网盖在大棚顶部及四周,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部的开关以调节大棚内温度在13±5℃,湿度65~95%;温度达到18℃时,通过喷雾装置喷水雾通风降温,遮阴共生培育7天后,采用显微镜检查冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝与高寒植物根、叶、茎组织缠绕形成共生体,经分子检验菌丝为中国被毛孢后,将获得的共生体组织切成5~20mm小段,制备成具有高侵染活性的菌种材料,用遮阴保水保鲜方法存放于4℃,保存备用。
6.将制备的高侵染活性菌种材料投喂冬虫夏草寄主玉树钩蝠蛾Thitarodes yushuensi幼虫,每头幼虫投放5~10克,使寄主幼虫取食并充分接触菌种,10天后采用显微镜检查及分子生物方法检测玉树钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,玉树钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率约为92.7%。
实施例二
1.在青藏高原海拔4000米的冬虫夏草适生地区域的高寒草甸区,选取地势排水较好的区域,保留原有草甸植被,以长10m×7.5m为一个单位建设培育大棚,用阳光板材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚,培育大棚内规划建设成6个90cm×920cm的高寒植物原生态草甸培育垄区,在每个垄中间高30cm处铺设一条喷淋管及配套水泵设施,垄间挖开宽、深分别约为25cm×5cm的区域便于排水及管理人员行走,大棚四周分别留下约40cm的工作区。
2.应用适合高原的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据空气及土壤湿度情况,每个月喷淋水一至四次,使15cm深度的土壤含水量保持在33%左右,每2个月在一次喷水中加入水:尿体积比为100∶20浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥干重每平方米约150g。
3.在培育大棚附近冬虫夏草适生地区域采集珠芽蓼(Polygonum viviparum)、大萼委陵菜(Potentilla conferta)、杂色钟报春(Primula alpicola)、大萼蓝钟花(Cyananthusmacrocalyx)、舌叶垂头菊(Cremanthodium linguiatum)、锡金柳叶菜(Epilobiumsikkimense)等植物苗及种子移栽至培育大棚内,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部透明材料的开关,同时通过调节棚外辅助层(遮阴网或保温被)的开关以及喷雾装置调节大棚内温度,使棚内最高气温不超过20℃,空气湿度在55~100%;利用原生态光照条件栽培大棚内的原有植被及移栽高寒植物苗,并使之旺盛生长。
4.从培育大棚附近冬虫夏草产区采集新鲜冬虫夏草,采用常规马铃薯培养基分离纯化菌种,经分子生物学方法及形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),进一步经大麦固态培养基在13±5℃发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子,将发酵获得的菌团用搅拌器均匀打碎,并按发酵物质量与水体积比1∶400进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子或芽生孢子稀释搅匀成的悬浮液,将培养基颗粒物用孔径2mm的纱布粗过滤后,作为冬虫夏草菌源。
5.每年6~11月,选择日间温度不超过18℃,夜间温度不低于4℃的时段,将制备的冬虫夏草菌源利用灌溉管路或加压喷枪均匀喷淋接种到培育大棚高寒植物苗上,每平方米喷入200ml菌悬液,连续喷施2天,每天3次,分早中晚喷施,喷施后用黑色遮阴网盖在大棚顶部及四周,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部的开关以调节大棚内温度在13±5℃,湿度65%~95%;温度达到18℃时,通过遮阴网和喷雾装置喷水雾通风降温,遮阴共生培育15天后,采用显微镜检查共培养的冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝与高寒植物根、叶、茎组织缠绕形成大量共生体,经分子检验为中国被毛孢后,可直接作为具有高侵染活性的菌种材料。
6.每年8~10月,选择白天温度不超过18℃,夜间温度不低于0℃的时段,寄主蒲氏钩蝠蛾(Thitarodes pui)幼虫在黄昏时段投置到冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与高寒植物苗形成共生体的培育区,每平方米约控释50头,使蒲氏钩蝠蛾幼虫取食并充分接触高侵染活性的共生体菌种材料,14天后将蒲氏钩蝠蛾幼虫从土壤中挖出采用显微镜检查及分子生物方法检测蒲氏钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,蒲氏钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率约为93.6%。
实施例三
1.在青藏高原海拔4300米的冬虫夏草适生地区域的高寒草甸区,选取地势排水较好的区域,保留原有草甸植被;以20m×10m为一个单位建设培育大棚,用阳光板材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚;培育大棚内规划建设成19个75cm×920cm的高寒植物原生态草甸培育垄区,在每个垄上方高50cm处铺设一条喷淋管及配套水泵设施,用于喷施水肥管理;垄间挖开宽、深分别为27cm×10cm的区域便于排水及管理人员行走,大棚四周分别留下约45cm的工作区。
2.应用适合高原的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据空气及土壤湿度情况,每月喷淋水一至四次,使15cm深度的土壤含水量保持在25%,每2个月在一次喷水中加入水:尿体积比为100∶15浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥,施放量为干重每平方米约175g。
3.通过人工或自动化控制大棚四周及顶部阳光板的开关,同时通过调节棚外辅助层(遮阴网或保温被)的开关以及喷雾装置调节大棚内温度,使棚内最高气温不超过19℃,空气湿度在55~100%;利用原生态光照条件促进培育大棚内原有的珠芽蓼(Polygonum viviparum)、禾叶风毛菊(Saussurea graminea)、多裂委陵菜(Potentillamultifida)、高山唐松草(Thalictrum alpinum)、火绒草(Leontopodium hastioides)、头花蓼(Polygonum macrophytum)等植物旺盛生长。
4.在每年的6~8月在培育大棚附近的冬虫夏草适生地采集新鲜冬虫夏草子囊孢子,直接稀释制成菌悬液,通过显微镜计数使每毫升悬浮液中含有100个子囊孢子,作为冬虫夏草菌源。
5.每年6~8月,选择白天温度不超过18℃,晚上温度不低于4℃的时段,将制备的冬虫夏草菌源,利用灌溉管路或加压喷枪均匀喷淋接种到培育大棚高寒植物苗上,每平方米喷入300ml菌悬液,连续喷施3天,每天2次,分早中晚喷施,喷施后用黑色遮阴网盖在大棚顶部及四周,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部阳光板的开关以调节大棚内温度在13±5℃,湿度65~95%;温度达到18℃时,通过遮阴网和喷雾装置喷水雾通风降温,遮阴共生培育20天后,采用显微镜检查共培养的冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝与高寒植物根、叶、茎组织缠绕形成大量共生体,经分子检验为中国被毛孢后,可直接作为具有高侵染活性的菌种材料。
6.每年8~9月,选择白天温度不超过18℃,晚上温度不低于0℃的时段,在黄昏时段寄主虫草钩蝠蛾(Thitarodes armoricanus)幼虫投置到冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与高寒植物苗形成共生体的培育区,每平方米约控释100头,使虫草钩蝠蛾幼虫取食并充分接触高侵染活性的共生体菌种材料,15天后将虫草钩蝠蛾幼虫从土壤中挖出采用显微镜检查及分子生物方法检测虫草钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,虫草钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率约为90.8%。
实施例四
1.在青藏高原海拔3800米的冬虫夏草适生地区域的高寒草甸区,选取地势排水较好的区域,将原有草甸植被除去并平整,以长20m×宽15m为一个单位建设培育大棚,用玻璃材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚,培育大棚内规划建设成19个75cm×1920cm的垄区,在每个垄中间高80cm处铺设一条喷淋管及配套水泵设施,垄间挖开宽、深分别为27.5cm×10cm的区域便于排水及管理人员行走,培植园四周分别留下约40cm的工作区。
2.应用适合高原的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据空气及土壤湿度情况,每月喷淋水二至五次,每年5月至10月视当月降水量情况每个月喷淋水一至四次,使15cm深度的土壤含水量保持在35%左右,每2个月在一次喷水中加入水:尿体积比为100∶10浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥干重每平方米约160g。
3.在冬虫夏草适生地区域采集细茎蓼(Polygonum filicaule)、叉枝蓼(P.tortuonum)、珠芽蓼(P.viviparum)、圆穗蓼(P.macrophyllum)、狭叶圆穗蓼(P.macrophyllum)、头花蓼(P.capitatum)、西藏大黄(Rheum tibeticum)、小大黄(R.pumilum)植株或种子,经常规组织培养快速繁殖技术获得组培苗,每年6月将组培苗移栽至大棚内培植,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部玻璃的开关,同时通过调节棚外辅助层(遮阴网或保温被)的开关以及喷雾装置调节大棚内温度,使棚内最高气温不超过18℃,空气湿度在55~100%;利用原生态光照条件栽培大棚内的原有植被及移栽高寒植物苗,并使之旺盛生长。
4.在每年的6~8月在培育大棚附近的冬虫夏草适生地采集新鲜冬虫夏草子囊孢子,直接稀释制成悬浮液,通过显微镜计数使每毫升悬浮液中含有1000个子囊孢子,作为冬虫夏草菌源。
5.每年7~9月,选择日间温度不超过18℃,夜间温度不低于4℃的时段,将制备的冬虫夏草菌源,喷淋接种到高寒植物苗上,每平方米喷淋150ml,连续喷施5天,每天1次,中午喷施,喷施后用黑色遮阴网盖在喷淋管路上面,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部阳光板的开关以调节大棚内温度在13±5℃,湿度65~95%;温度达到18℃时,通过遮阴网和喷雾装置喷水雾通风降温,遮阴共生培育30天后,促进中国被毛孢与高寒植物组织共生,激活冬虫夏草菌的侵染活性;采用显微镜检查共培养的冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝与高寒植物组培组织缠绕形成大量共生体,经分子检验为中国被毛孢后,可直接作为对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的菌种材料。
6.每年8~9月,选择黄昏时段寄主色季拉钩蝠蛾(Thitarodes sejilaensis)幼虫投置到冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与高寒植物苗形成共生体的培育区,每平方米约控释100头,使色季拉钩蝠蛾幼虫取食并充分接触高侵染活性的共生体菌种材料,12天后将色季拉钩蝠蛾幼虫从土壤中挖出采用显微镜检查及分子生物方法检测色季拉钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,色季拉钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率约为91.4%。
实施例五
1.在青藏高原海拔5200米的冬虫夏草适生地区域的高寒草甸区,选取地势排水较好的区域,保留原有草甸植被,以15m×10m为一个建设单位,用透明塑料板材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚,培育大棚内规划建设2排50cm×450cm的高寒植物原生态草甸培育垄区,在每个垄中间高80cm处铺设一条喷淋管及配套水泵设施,垄间挖开宽、深分别为20cm×5cm的区域便于排水及管理人员行走。培育大棚四周及排间分别留下约35cm的工作区。
2.应用适合高原的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据空气及土壤湿度情况,每个月喷淋水一至六次,使15cm深度的土壤含水量保持在30%左右,每月在第一次喷水中加入水:尿体积比为100∶13浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥干重每平方米约200g。
3.采集培育大棚附近的圆穗蓼(Polygonum macrophytum)、珠芽蓼(Polygonumviviparum)、高山唐松草(Thactriun alpinun)、矮火绒草(Leontopodium alpinum)、委陵菜(Potentilla anserine)、高山嵩草(Kobrasiapygmaea)、黑褐苔草(Carexa trofusca)等植物的种子收集后撒入培育大棚的垄内,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部透明塑料的开关,同时通过调节棚外辅助层(遮阴网或保温被)的开关以及喷雾装置调节大棚内温度,使棚内最高气温不超过16℃,空气湿度在55~100%;利用原生态光照条件栽培大棚内的原有植被及移栽高寒植物苗,并使之旺盛生长。
4.从青海玉树地区的冬虫夏草主产区采集新鲜冬虫夏草,采用常规肉汤培养基分离纯化菌种,经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),进一步经通常普通肉汤液体培养基在13±5℃发酵7天,然后置于小麦为底物的固体培养基上再继续发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子,并将发酵获得菌团用搅拌器均匀打碎,按发酵物重量与水体积比1∶1000进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子稀释搅匀成的悬浮液,将培养基颗粒物用孔径1.5mm的纱布粗过滤后,作为冬虫夏草菌源;
5.每年7~9月,选择日间温度不超过18℃,夜间温度不低于4℃,将制备的冬虫夏草菌源利用灌溉管路均匀喷淋接种到培育大棚高寒植物苗上,每平方米喷入250ml菌悬液,喷完后用黑色遮阴网盖在喷淋管路上面,连续喷施4天,每天喷施2次,早晚各一次,喷施后用黑色遮阴网盖在大棚顶部及四周,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部的开关以调节大棚内温度在13±5℃,湿度65~95%;温度达到18℃时,通过喷雾装置喷水雾通风降温,遮阴共生培育14天后,经显微镜及分子鉴定检查共培养的冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝与高寒植物根、叶、茎组织缠绕形成大量共生体;经分子检验菌丝为中国被毛孢后,将共生体地上部分割回,将共生体组织切成5~20mm小段,制备成具有高侵染活性的菌种材料,用遮阴保水保鲜方法存放于2℃,保存备用;
6.将制备的高侵染活性菌种材料在黄昏时段投喂冬虫夏草寄主比如钩蝠蛾(Thitarodesbiruens)幼虫,每头投入5g高侵染活性菌种材料,使寄主幼虫取食并充分接触菌种,7天后将比如钩蝠蛾幼虫从饲养盒中取出,采用显微镜检查及分子生物方法检测比如钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,比如钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率约为94.9%。
实施例六(反向例)
1.在青藏高原海拔2800米的高寒草甸区,选取地势排水较好的区域,以10m×20m为一个单位建设培育大棚,将培育大棚内原有草甸植被除去并将土壤平整,在培育大棚内规划建设成8个90cm×1900cm的高寒植物原生态草甸培育垄区,在每个垄中间高75cm处铺设一条喷淋管及配套水泵设施,垄间挖开宽、深分别为30cm×8cm的区域便于排水及管理人员行走,培植大棚四周分别留下约50cm的工作区。
2.应用适合高原的农业园艺栽培技术对高寒植物苗进行水肥管理,根据空气及土壤湿度情况,每个月喷淋水一至四次,使土壤15cm深处的含水量保持在33%左右,每2个月在一次喷水中加入水:尿体积比为100∶15浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥干重每平方米约210g。
3.采集高山嵩草(Kobresia pygmaea)、一岁苔草(Carex heterostachya)、珠芽蓼(Polygonum viviparum)、禾叶风毛菊(Saussurea graminea)、多裂委陵菜(Potentillamultifida)、高山唐松草(Thalictrum alpinum)、火绒草(Leontopodium hastioides)、头花蓼(Polygonum macrophytum)等植物及种子移栽至培育大棚中,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部的开关以调节大棚内温度在13±5℃,温度达到18℃时,空气湿度在55~100%,通过喷雾装置喷水雾通风降温,并使之旺盛生长获得高寒植物苗。
4.从青海玉树地区冬虫夏草主产区采集新鲜冬虫夏草,采用常规察氏培养基分离纯化菌种,经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),经通常蛋白胨水液体培养基在13±5℃发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子,并将发酵获得的菌球用搅拌器均匀打碎,最后按发酵液与水体积比1∶100进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子稀释搅匀成的悬浮液,作为冬虫夏草菌源。
5.将获得的高寒植物苗地上及地下部分组织切成5~20mm小段作为钩蝠蛾幼虫的饲料,同时将冬虫夏草菌源喷淋到高寒植物饲料表面或喷淋到替代饲料如胡萝卜表面,直接投喂冬虫夏草寄主玉树钩蝠蛾Thitarodes yushuensi幼虫,每头幼虫投放5~10克,使寄主幼虫取食并充分接触菌种,10天后采用显微镜检查及分子生物方法检测玉树钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,玉树钩蝠蛾幼虫被中国被毛孢侵染率只有23.4%。
实施例七(反向例)
1.从西藏那曲冬虫夏草产区采集新鲜冬虫夏草,采用常规马铃薯培养基分离纯化菌种,经分子生物学方法及形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),进一步经通常的大麦固态培养基在13±5℃发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子,将发酵获得的菌球用搅拌器均匀打碎,并按发酵物重量与水体积比1∶100进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子稀释搅匀成的悬浮液,将培养基颗粒物用孔径2mm的纱布粗过滤后,作为冬虫夏草菌源。
2.将制备的冬虫夏草菌源直接喷淋到冬虫夏草寄主比如钩蝠蛾Thitarodes biruens幼虫,使寄主幼虫充分接触菌种,10天后采用显微镜检查及分子生物方法检测玉树钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,中国被毛孢侵染比如钩蝠蛾幼虫的侵染率只有18.7%。
实施例八(反向例)
1.在每年的6~8月在青海玉树的冬虫夏草产区采集新鲜冬虫夏草子囊孢子,直接稀释制成悬浮液,通过显微镜计数使每毫升悬浮液中含有1000个子囊孢子,作为冬虫夏草菌源。
2.将冬虫夏草菌源直接喷淋到冬虫夏草寄主玉树钩蝠蛾Thitarodes yushuensi幼虫,使寄主幼虫充分接触菌种,10天后采用显微镜检查及分子生物方法检测玉树钩蝠蛾幼虫血淋巴中的中国被毛孢虫菌体。经统计,玉树钩蝠蛾幼虫被冬虫夏草子囊孢子的侵染率只有10.8%。
Claims (6)
1.一种利用高寒植物培育大棚制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法,该方法包括:在青藏高原环境下建立高寒植物培育大棚,利用大棚营造合适的温湿度及光照条件,通过适合高原大棚的农业园艺栽培技术进行水肥管理,栽培并获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物苗;将冬虫夏草菌源接种到培育大棚栽培的高寒植物苗上,利用大棚营造的适合的温湿度及光照条件,使冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与活体高寒植物共生培育,形成菌物-植物共生体,将菌丝检测结果为中国被毛孢的菌物-植物共生体作为对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料。
2.按照权利要求1所述的方法,其特征是所述的高寒植物培育大棚是在海拔2800~5200米的青藏高原高寒草甸,保留原有高寒草甸植被或将草甸开垦平整,以长10~20m×宽7.5~15m大小为建设单位,用薄膜或阳光板或玻璃透明材料搭建顶棚及四周可控开关的大棚,采用通常农业园艺规划方法在大棚内进行分区建垄,垄面大小为50~90cm×450~1920cm,在垄面上方高30~100cm处铺设水肥管理管路,垄间设立宽20~30cm深5~10cm的区域便于排水和管理人员行走,培育大棚四周留下约35~50cm的空区。
3.按照权利要求1所述的方法,其特征是所述的合适高原大棚的农业园艺栽培水肥管理是:根据天气空气湿度条件每个月喷淋水一至六次,使15cm深度的土壤含水量保持在25~35%左右,每2个月在一次喷水中加入水∶尿体积比为100∶5~100∶20浓度的牛羊尿或人尿,每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥干重每平方米约150~250g。
4.按照权利要求1所述的方法,其特征是所述的利用大棚营造的温湿度及光照条件是:通过人工或自动化控制大棚四周及顶部透明材料的开关,同时通过调节棚外辅助层遮阴网或保温被的开关以及喷雾装置调节大棚内温湿度,使棚内最高气温不超过22℃;空气湿度为55~100%;利用青藏高原自然光照条件提供光照。
5.按照权利要求1所述的方法,其特征是所述的冬虫夏草菌种的制备方法是:从冬虫夏草主产区采集新鲜冬虫夏草或其子囊孢子,采用合适嗜低温菌物的工业微生物方法进行分离纯化,经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis),通过常规低温发酵法在13±5℃条件下发酵为冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子分生孢子或芽生孢子,并进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子分生孢子或芽生孢子按发酵物质量与水体积比1∶100~1∶1000稀释成的悬浮液,作为冬虫夏草菌源;或直接采用冬虫夏草的新鲜子囊孢子稀释制成每毫升含有100~1000个子囊孢子的悬浮液,作为冬虫夏草菌源。
6.按照权利要求1所述的方法,其特征是将冬虫夏草菌种接种到植物组织的方法是:选择外界气温日间温度不超过18℃,夜间温度不低于4℃的月份时段,将制备的冬虫夏草菌源喷淋接种到培育大棚栽培的高寒植物苗上,每平方米喷施100~300ml菌悬液,连续喷施2~5天,每天喷施1~3次,接种后遮阴培育,通过人工或自动化控制大棚四周及顶部的开关以调节大棚内温度在13±5℃,湿度65~95%,时间为7~30天。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410541487.4A CN104365319B (zh) | 2014-09-30 | 2014-09-30 | 一种利用高寒植物培育大棚制备冬虫夏草菌种材料的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410541487.4A CN104365319B (zh) | 2014-09-30 | 2014-09-30 | 一种利用高寒植物培育大棚制备冬虫夏草菌种材料的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104365319A true CN104365319A (zh) | 2015-02-25 |
CN104365319B CN104365319B (zh) | 2017-01-11 |
Family
ID=52544717
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410541487.4A Active CN104365319B (zh) | 2014-09-30 | 2014-09-30 | 一种利用高寒植物培育大棚制备冬虫夏草菌种材料的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104365319B (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105660172A (zh) * | 2016-01-07 | 2016-06-15 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种高寒地区可持续高产野生冬虫夏草的方法 |
CN110036984A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-07-23 | 安发(福建)生物科技有限公司 | 一种低成本规模饲养蝙蝠蛾的方法 |
US10405527B2 (en) | 2016-03-22 | 2019-09-10 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd | Method and system of cultivating cordyceps |
CN110402757A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-11-05 | 甘孜州康定贡嘎中华虫草产业有限责任公司 | 一种原生地人工培殖冬虫夏草的方法及其专用设施 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100434508C (zh) * | 2006-11-08 | 2008-11-19 | 中山大学 | 一种提高青藏高原冬虫夏草产量的方法 |
CN103371050A (zh) * | 2012-04-19 | 2013-10-30 | 薛刚 | 一种培育冬虫夏草的方法 |
CN102960183A (zh) * | 2012-10-31 | 2013-03-13 | 贵州神奇集团控股有限公司 | 一种冬虫夏草的人工培养方法及冬虫夏草产物 |
-
2014
- 2014-09-30 CN CN201410541487.4A patent/CN104365319B/zh active Active
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105660172A (zh) * | 2016-01-07 | 2016-06-15 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种高寒地区可持续高产野生冬虫夏草的方法 |
US10405527B2 (en) | 2016-03-22 | 2019-09-10 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd | Method and system of cultivating cordyceps |
CN110036984A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-07-23 | 安发(福建)生物科技有限公司 | 一种低成本规模饲养蝙蝠蛾的方法 |
CN110402757A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-11-05 | 甘孜州康定贡嘎中华虫草产业有限责任公司 | 一种原生地人工培殖冬虫夏草的方法及其专用设施 |
CN110402757B (zh) * | 2019-07-30 | 2022-07-08 | 甘孜州康定贡嘎中华虫草产业有限责任公司 | 一种原生地人工培殖冬虫夏草的方法及其专用设施 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104365319B (zh) | 2017-01-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104381011B (zh) | 一种具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的制备及侵染钩蝠蛾幼虫的方法 | |
CN103843585B (zh) | 双孢菇高产生态栽培方法 | |
CN103270918B (zh) | 稻虾共作生态养殖系统及养殖方法 | |
CN104365465B (zh) | 铁皮石斛与金线莲的套种装置及其栽培方法 | |
CN103733874A (zh) | 一种灵芝仿野生栽培方法 | |
CN108739677B (zh) | 宁夏地区蚯蚓露地养殖方法 | |
CN104823715A (zh) | 一种杉树林下仿野生灵芝栽培方法 | |
CN100434508C (zh) | 一种提高青藏高原冬虫夏草产量的方法 | |
CN105309288A (zh) | 一种铁皮石斛的种植方法 | |
CN104365319B (zh) | 一种利用高寒植物培育大棚制备冬虫夏草菌种材料的方法 | |
CN105075667A (zh) | 一种可用于低海拔地区之全人工培育冬虫夏草的方法 | |
CN103563644A (zh) | 一种大朵红灵芝的栽培方法 | |
CN107318460A (zh) | 一种灵芝的生态种植方法 | |
CN104365320B (zh) | 一种利用青藏高原高寒草甸原生态条件制备冬虫夏草菌种材料的方法 | |
CN110226454A (zh) | 一种织金竹荪仿野生栽培方法 | |
CN103804070B (zh) | 一种金线莲栽培辅助材料和返天然栽培方法 | |
CN103483038B (zh) | 一种冬虫夏草培养基的制备、培养方法及应用 | |
CN102948328A (zh) | 一种果园套种竹荪的方法 | |
CN106069200A (zh) | 一种葡萄和双孢菇的复合生态栽培方法 | |
CN103333001A (zh) | 一种用于藜蒿栽培的营养土及藜蒿栽培方法 | |
CN105103943A (zh) | 一种灰紫香蘑仿野生栽培方法 | |
CN103340091B (zh) | 人工培育雪峰虫草的方法 | |
CN105075668B (zh) | 一种促进羊肚菌菌核形成的转化袋及羊肚菌栽培方法 | |
KR20110119352A (ko) | 액체균주를 이용한 천마의 균상재배방법 | |
CN104304016B (zh) | 一种利用栽培室制备冬虫夏草菌种材料的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |