CN101998952A - 丙型肝炎病毒抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及(4，4′-二咪唑基)联苯类组合物和用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法。还公开了含有这样的化合物的药物组合物和使用这些化合物治疗HCV感染的方法。

Description

丙型肝炎病毒抑制剂
本公开总的来讲涉及抗病毒化合物，更准确地讲涉及可以抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS5A蛋白功能的化合物、包含这类化合物的组合物和用于抑制NS5A蛋白功能的方法。
HCV是主要的人类病原体，估计感染全球1.7亿人--大约为人免疫缺陷病毒1型感染人数的5倍。这些HCV感染个体当中的相当一部分会发展成严重的进行性肝病，包括肝硬化和肝细胞癌。
目前，最有效的HCV疗法采用α-干扰素和利巴韦林的组合，在40％患者中产生持续功效。最新临床结果表明，作为单一疗法时聚乙二醇化α-干扰素优于未修饰的α-干扰素。然而，即使是使用包括聚乙二醇化α-干扰素和利巴韦林组合的实验性治疗方案，相当一部分患者的病毒负荷未有持续降低。因此存在开发用于治疗HCV感染的有效治疗药的明显和长期的需求。
HCV是正链RNA病毒。根据对推导出的氨基酸序列和5’非翻译区广泛相似性的比较，HCV被归类到黄病毒科(Flaviviridae family)单独的一个属内。黄病毒科的所有成员都是含有正链RNA基因组的有包膜病毒粒子，该基因组通过单个不间断可读框的翻译，编码所有已知的病毒特异性蛋白。
在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列内发现相当多的异质性。已经鉴定出至少6个主要的基因型，并且描述了50个以上的亚型。HCV的主要基因型在全球的分布不同，虽然进行了基因型对发病机制和疗法的可能作用的大量研究，但仍不清楚HCV遗传异质性的临床意义。
单链HCV RNA基因组的长度约为9500个核苷酸并具有一个编码约3000个氨基酸的单一大的多聚蛋白的单一可读框(ORF)。在感染细胞中，该多聚蛋白在多个位点上被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶切割，产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV而言，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的生成是通过两种病毒蛋白酶实现的。一般认为，第一种是金属蛋白酶，在NS2-NS3接点进行切割；第二种是包含在NS3(本文中亦称NS3蛋白酶)N末端区内的丝氨酸蛋白酶并且介导NS3下游所有的后续切割，在NS3-NS4A切割位点为顺式，这两者在其余NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点则为反式。NS4A蛋白似乎有多种功能，起NS3蛋白酶辅因子的作用，并可能协助NS3和其它病毒复制酶组分进行膜定位。NS3蛋白与NS4A复合物的形成似乎是加工事件、在所有位点上提高蛋白水解效率所必需的。NS3蛋白还显示出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B(本文中亦称HCV聚合酶)是参与HCV复制的依赖于RNA的RNA聚合酶。
需要用于治疗HCV感染患者的化合物，该化合物选择性地抑制HCV病毒的复制。具体地说，需要有效抑制NS5A蛋白功能的化合物。HCV NS5A蛋白描述于例如Tan，S.-L.，Katzel，M.G.Virology 2001，284，1-12；及Park，K.-J.；Choi，S.-H，J.Biological Chemistry 2003中。
本公开的第一个方面提供式(I)化合物
Figure BPA00001245294300021
或其药学上可接受的盐，其中
u和v独立地为0、1、2或3；
A和B独立选自苯基和含有1、2或3个氮原子的6元杂芳环；
每个R1和每个R2独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、甲酰基、卤代、卤代烷基、羟基、羟基烷基、-NRaRb、(NRaRb)烷基和(NRaRb)羰基；
R3和R4各自独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、卤代烷基、(NRaRb)羰基和三烷基甲硅烷基烷氧基烷基；
R5和R6各自独立选自氢、烯基、烷氧基烷基、烷基、卤代烷基和(NRaRb)烷基；或，
R5和R6，与它们所连接的碳原子一起，形成5元或6元饱和环，该环任选含有1个或2个选自NRz、O和S的杂原子；其中Rz选自氢和烷基；
R7选自氢、R9-C(O)-和R9-C(S)-；
R8选自氢和烷基；
R9独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳氧基烷基、环烷基、(环烷基)烯基、(环烷基)烷基、环烷基氧基烷基、卤代烷基、杂环基、杂环基烯基、杂环基烷氧基、杂环基烷基、杂环基氧基烷基、羟基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基；
R10选自
Figure BPA00001245294300031
其中
R11和R12各自独立选自氢、烯基、烷氧基烷基、烷基、卤代烷基和(NRaRb)烷基；或，
R11和R12，与它们所连接的碳原子一起，形成5元或6元饱和环，该环任选含有1个或2个选自NRz、O和S的杂原子；其中Rz选自氢和烷基；
R13选自氢和烷基；
R14选自氢、R15-C(O)-和R15-C(S)-；
R15独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳氧基烷基、环烷基、(环烷基)烯基、(环烷基)烷基、环烷基氧基烷基、卤代烷基、杂环基、杂环基烯基、杂环基烷氧基、杂环基烷基、杂环基氧基烷基、羟基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基；
m为0、1或2；
n为0、1、2、3或4；
X选自O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR16和C(R16)2；
前提是当m为0时，X选自CH2、CHR16和C(R16)2；
每个R16独立选自烷氧基、烷基、芳基、卤代、卤代烷基、羟基和-NRaRb，其中烷基可任选与相邻的碳原子形成稠合的3-6元环，其中所述3-6元环被一个或两个烷基任选取代。
在第一个方面的第一个实施方案中，m为0。
在第一个方面的第二个实施方案中，u和v各自独立地为0或1；且每个R1和每个R2独立选自烷基和卤代。
在第一个方面的第三个实施方案中，u和v各自为0。
在第一个方面的第四个实施方案中，X选自CH2和CHR16。在第一个方面的第五个实施方案中，X为CH2。
在第一个方面的第六个实施方案中，R3和R4各自独立选自氢、卤代烷基和三烷基甲硅烷基烷氧基烷基。在第七个实施方案中，R3和R4各自独立选自氢和卤代烷基。
在第一个方面的第八个实施方案中，n为0、1或2；并且当存在时，每个R16为卤代。在第九个实施方案中，n为0。
在第一个方面的第十个实施方案中，R5和R6独立选自氢和烷基。
在第一个方面的第十一个实施方案中，R11和R12独立选自氢和烷基。
在第一个方面的第十二个实施方案中，R7和R14中的至少一个为氢。
在第一个方面的第十三个实施方案中，R7为R9-C(O)-；且R14为R15-C(O)-。在第十四个实施方案中，R9和R15各自独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳氧基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、环烷基氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、羟基烷基、-NRcRd、(NRcRd)烯基、(NRcRd)烷基和(NRcRd)羰基。在第十五个实施方案中，R9和R15各自独立选自烷氧基、芳基烷氧基、芳基烷基和(NRcRd)烷基。
本公开的第二个方面提供式(II)化合物
Figure BPA00001245294300051
或其药学上可接受的盐，其中
A和B独立选自苯基和含有1、2或3个氮原子的6元杂芳环；
R3和R4各自独立选自氢、卤代烷基和三烷基甲硅烷基烷氧基烷基；
R5和R6各自独立选自氢和烷基；
R7选自氢和R9-C(O)-；
R8选自氢和烷基；
R9独立选自烷氧基、芳基烷氧基、芳基烷基和(NRcRd)烷基；
R10选自
Figure BPA00001245294300052
其中
R11和R12各自独立选自氢和烷基；
R13选自氢和烷基；
R14选自氢和R15-C(O)-；和
R15独立选自烷氧基、芳基烷氧基、芳基烷基和(NRcRd)烷基。
本公开的第三个方面提供一种组合物，所述组合物包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。在第三个方面的第一个实施方案中，所述组合物包含一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。在第三个方面的第二个实施方案中，至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。在第三个方面的第三个实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙-二醇化干扰素α、复合α干扰素(consensusinterferon)、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ(tau)。
在第三个方面的第四个实施方案中，本公开提供一种组合物，所述组合物包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体及一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第三个方面的第五个实施方案中，本公开提供一种组合物，所述组合物包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体及一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV脱出(HCV egress)、、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
本公开的第四个方面提供一种治疗患者的HCV感染的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在第四个方面的第一个实施方案中，该方法还包括在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。在第四个方面的第二个实施方案中，至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。在第四个方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
在第四个方面的第四个实施方案中，本公开提供一种治疗患者的HCV感染的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐并且在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第四个方面的第五个实施方案中，本公开提供一种治疗患者的HCV感染的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐并且在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV脱出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
本公开的其它实施方案可包含本文公开的两个或更多个实施方案和/或方面的适当组合。
根据下面提供的描述，本公开的又一些其它实施方案和方面将是显而易见的。
本公开的化合物还以互变异构体存在；因此，本公开还包括所有的互变异构形式。
本公开在本文中的描述应当解释为与化学成键的定律和原则一致。在某些情况下，为了在任何给定位置容纳取代基，可能必需去掉氢原子。例如，以下所示结构中：
R8可与咪唑环上的任一碳原子连接，或者，R8可代替氮环上的氢原子以形成N-取代的咪唑。
应该理解，本公开所包括的化合物为用作药物时适当稳定的化合物。
意欲使在分子特定位置上的任何取代基或变量(例如R1、R2、R5、R6等)的定义独立于该分子在其它位置上的定义。例如，当u为2时，两个R1基团的每一个可以相同或者不同。
本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献都通过引用其全部结合到本文中。在不一致的情况下，以本公开(包括定义)为准。
本说明书中所用的下述术语具有规定的含义：
本文所用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数范围，除非文中另有明确说明。
除非另有说明，否则本公开的所有芳基、环烷基和杂环基基团可以如其各自相应定义中所述一样被取代。例如，芳基烷基中的芳基部分可以如术语“芳基”定义中所述一样被取代。
本文所用的术语“烯基”是指含有至少一个碳-碳双键的2-6个碳原子的直链或支链基团。
本文所用的术语“烯氧基”是指烯基通过氧原子与母体分子部分连接。
本文所用的术语“烯氧基羰基”是指烯氧基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基。
本文所用的术语“烷氧基烷基”是指被1、2或3个烷氧基取代的烷基。
本文所用的术语“烷氧基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基烷基。
本文所用的术语“烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基。
本文所用的术语“烷氧基羰基烷基”是指被1、2或3个烷氧基羰基取代的烷基。
本文所用的术语“烷基”是指衍生自含有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。在本公开的化合物中，当m和/或n为1或2，X和/或Y分别为CHR5和/或CHR6，且R5和/或R6为烷基时，每个烷基可任选与相邻的碳原子形成稠合的3-6元环，得到以下所示结构之一：
Figure BPA00001245294300091
其中z为1、2、3或4，w为0、1或2，且R50为烷基。当w为2时，两个R50烷基可以相同或不同。
本文所用的术语“烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷基。
本文所用的术语“烷基羰基烷基”是指被1、2或3个烷基羰基取代的烷基。
本文所用的术语“烷基羰基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基羰基。
本文所用的术语“烷基硫基”是指通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。
本文所用的术语“烷基磺酰基”是指烷基通过磺酰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳基”是指苯基或双环稠合环系，其中环的一个或两个为苯基。双环稠合环系由与4-6元芳族或非芳族碳环稠合的苯基组成。本公开的芳基可以通过基团中任何可被取代的碳原子与母体分子部分连接。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本公开的芳基任选被1、2、3、4或5个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二个芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基、氧代和-P(O)OR2，其中每个R独立选自氢和烷基；其中芳基烷基和杂环基烷基中的烷基部分是未取代的，且其中第二个芳基、芳基烷基中的芳基部分、芳基羰基中的芳基部分、杂环基及杂环基烷基和杂环基羰基中的杂环基部分任选被1、2或3个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用的术语“芳基烯基”是指烯基被1、2或3个芳基取代。
本文所用的术语“芳基烷氧基”是指芳基通过烷氧基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳基烷氧基烷基”是指烷基被1、2或3个芳基烷氧基取代。
本文所用的术语“芳基烷氧基烷基羰基”是指芳基烷氧基烷基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳基烷氧基羰基”是指芳基烷氧基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳基烷基”是指烷基被1、2或3个芳基取代。芳基烷基中的烷基部分任选被一个或两个另外的独立选自以下的基团进一步取代：烷氧基、烷基羰基氧基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和-NRcRd，其中杂环基任选被一个或两个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRxRy。
本文所用的术语“芳基烷基羰基”是指芳基烷基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳基羰基”是指芳基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳氧基”是指芳基通过氧原子与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳氧基烷基”是指烷基被1、2或3个芳氧基取代。
本文所用的术语“芳氧基羰基”是指芳氧基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“芳基磺酰基”是指芳基通过磺酰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“Cap”和“cap”是指位于末端含氮环(即化合物1e的吡咯烷环)的氮原子上的基团。应该理解，“Cap”或“cap”可以指用于将基团附加在末端含氮环或最终产物中的某个部分上的试剂，即“Cap-51”或“存在于LS-19上的Cap-51部分(fragment)”。
本文所用的术语“羰基”是指-C(O)-。
本文所用的术语“羧基”是指-CO2H。
本文所用的术语“氰基”是指-CN。
本文所用的术语“环烷基”是指具有3-7个碳原子和0个杂原子的饱和单环烃环系。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环戊基和环己基。本公开的环烷基任选被1、2、3、4或5个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和-NRxRy，其中芳基和杂环基任选被1、2或3个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和硝基。
本文所用的术语“(环烷基)烯基”是指烯基被1、2或3个环烷基取代。
本文所用的术语“(环烷基)烷基”是指烷基被1、2或3个环烷基取代。(环烷基)烷基中的烷基部分任选被一个或两个独立选自以下的基团进一步取代：羟基和-NRcRd。
本文所用的术语“环烷基氧基”是指环烷基通过氧原子与母体分子部分连接。
本文所用的术语“环烷基氧基烷基”是指烷基被1、2或3个环烷基氧基取代。
本文所用的术语“环烷基磺酰基”是指环烷基通过磺酰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“甲酰基”是指-CHO。
本文所用的术语“卤代”和“卤素”是指F、Cl、Br或I。
本文所用的术语“卤代烷氧基”是指卤代烷基通过氧原子与母体分子部分连接。
本文所用的术语“卤代烷氧基羰基”是指卤代烷氧基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“卤代烷基”是指烷基被1、2、3或4个卤原子取代。
本文所用的术语“杂环基”是指含有1、2、3或4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4、5、6或7元环。4元环无双键，5元环有0-2个双键，6元环和7元环有0-3个双键。术语“杂环基”还包括双环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基基团或4-6元芳族或非芳族碳环稠合；以及桥接双环基团，例如7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基和2-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基。本公开的杂环基可通过基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分连接。杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异
Figure BPA00001245294300121
唑基、吗啉基、
Figure BPA00001245294300122
唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基、硫代吗啉基、7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基和2-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基。本公开的杂环基任选被1、2、3、4或5个独立选自以下的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、第二个杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基和氧代，其中芳基烷基和杂环基烷基中的烷基部分是未取代的，且其中芳基、芳基烷基中的芳基部分、芳基羰基中的芳基部分、第二个杂环基及杂环基烷基和杂环基羰基中的杂环基部分任选被1、2或3个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用的术语“杂环基烯基”是指烯基被1、2或3个杂环基取代。
本文所用的术语“杂环基烷氧基”是指杂环基通过烷氧基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“杂环基烷氧基羰基”是指杂环基烷氧基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“杂环基烷基”是指烷基被1、2或3个杂环基取代。杂环基烷基中的烷基部分任选被一个或两个另外的独立选自以下的基团进一步取代：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRcRd，其中芳基任选被一个或两个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRxRy。
本文所用的术语“杂环基烷基羰基”是指杂环基烷基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“杂环基羰基”是指杂环基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“杂环基氧基”是指杂环基通过氧原子与母体分子部分连接。
本文所用的术语“杂环基氧基烷基”是指烷基被1、2或3个杂环基氧基取代。
本文所用的术语“杂环基氧基羰基”是指杂环基氧基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“羟基”是指-OH。
本文所用的术语“羟基烷基”是指烷基被1、2或3个羟基取代。
本文所用的术语“羟基烷基羰基”是指羟基烷基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“硝基”是指-NO2。
本文所用的术语“-NRaRb”是指Ra和Rb两个基团通过氮原子与母体分子部分连接。Ra和Rb独立选自氢、烯基和烷基。
本文所用的术语“(NRaRb)烷基”是指烷基被1、2或3个-NRaRb基团取代。
本文所用的术语“(NRaRb)羰基”是指-NRaRb基团通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“-NRcRd”是指Rc和Rd两个基团通过氮原子与母体分子部分连接。Rc和Rd独立选自氢、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR’和-C(NCN)NRxRy，其中R’选自烷基和未取代苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分任选被一个-NReRf基团进一步取代；且其中芳基，芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分，杂环基，和杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分任选被1、2或3个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用的术语“(NRcRd)烯基”是指烯基被1、2或3个-NRcRd基团取代。
本文所用的术语“(NRcRd)烷基”是指烷基被1、2或3个-NRcRd基团取代。(NRcRd)烷基中的烷基部分任选被一个或两个另外选自以下的基团进一步取代：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫基、芳基烷氧基烷基羰基、羧基、杂环基、杂环基羰基、羟基和(NeRf)羰基；其中杂环基任选被1、2、3、4或5个独立选自以下的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用的术语“(NRcRd)羰基”是指-NRcRd基团通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“-NReRf”是指Re和Rf两个基团通过氮原子与母体分子部分连接。Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基。
本文所用的术语“(NReRf)烷基”是指烷基被1、2或3个-NReRf基团取代。
本文所用的术语“(NReRf)烷基羰基”是指(NReRf)烷基通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“(NReRf)羰基”是指-NReRf基团通过羰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“(NReRf)磺酰基”是指-NReRf基团通过磺酰基与母体分子部分连接。
本文所用的术语“-NRxRy”是指Rx和Ry两个基团通过氮原子与母体分子部分连接。Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’和Ry’独立选自氢和烷基。
本文所用的术语“(NRxRy)烷基”是指烷基被1、2或3个-NRxRy基团取代。
本文所用的术语“氧代”是指＝O。
本文所用的术语“磺酰基”是指-SO2-。
本文所用的术语“三烷基甲硅烷基”是指-SiR3，其中R为烷基。各R基团可以相同或不同。
本文所用的术语“三烷基甲硅烷基烷基”是指烷基被1、2或3个三烷基甲硅烷基取代。
本文所用的术语“三烷基甲硅烷基烷氧基”是指三烷基甲硅烷基烷基通过氧原子与母体分子部分连接。
本文所用的术语“三烷基甲硅烷基烷氧基烷基”是指烷基被1、2或3个三烷基甲硅烷基烷氧基取代。
在本公开的化合物中存在不对称中心。这些中心用符号“R”或“S”标注，这取决于手性碳原子周围取代基的构型。应该理解，本公开包括具有抑制NS5A的能力的所有立体化学异构体或其混合物。化合物的各个立体异构体可通过以下方法合成地制备：由含有手性中心的市售原料合成；或者通过制备对映体产物的混合物后，再通过例如转化成非对映体的混合物的分离后，再通过分离或重结晶、色谱技术；或者从手性色谱柱上直接分离出对映体。特定立体化学结构的起始化合物是市售可获得的的，或者可以通过本领域已知技术制备和拆分。
本公开的某些化合物还可以不同的稳定构象形式存在，这类构象形式是可分离的。由于不对称单键周围阻碍旋转(例如因空间位阻或环张力)所致的扭转不对称性，可以使不同的构象异构体分离开来。本公开包括这些化合物的每一种构象异构体及其混合物。
术语“本公开的化合物”和等同表述意指包括式(I)化合物和药学上可接受的对映体、非对映体及其盐。同样，提及中间体时意指包括本文允许的中间体的盐。
本公开的化合物可作为药学上可接受的盐存在。本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示本公开的化合物的盐或两性离子形式，它们是水溶性或油溶性的，或是可分散的，它们在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或者其它问题或并发症，此与合理的利益/风险比相称，并有效用于其既定用途。可在化合物最终的分离和纯化期间制备其盐，或者可单独使合适的氮原子与合适的酸反应来制备化合物的盐。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基苯磺酸盐(mesitylenesulfonate)、甲磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑姆酸盐(palmoate)、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸及有机酸，无机酸有例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，有机酸有例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。
可以在化合物最终的分离和纯化期间通过使羧基与合适的碱(例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)反应或者与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备碱加成盐。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒的季铵阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N，N-二苄基苯乙胺和N，N’-二苄基乙二胺。用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当可用于治疗时，治疗有效量的式(I)化合物及其药学上可接受的盐可作为未加工的化学药品给予，还可作为药物组合物的活性成分提供。因此，本公开还提供药物组合物，该药物组合物包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本文所用的术语“治疗有效量”是指足以显示出有意义的患者益处(例如病毒负荷减少)的各活性组分的总量。当用于单独的活性成分单独给药时，该术语仅指该成分。当组合应用时，该术语则是指不论依次或同时联合给药时，都引起治疗效果的活性成分的合并量。式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂在其与制剂其它成分相容以及对其接受者无害的意义上来讲，必需是可接受的。根据本公开的另一个方面，还提供用于制备药物制剂的方法，该方法包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。本文所用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或其它问题和并发症，此与合理的利益/风险比相称，并有效用于其既定用途。
药物制剂可呈单位剂型，每个单位剂量含有预定量的活性成分。本公开的化合物的剂量水平介于约0.01-约250毫克/千克(“mg/kg”)体重/天之间，优选介于约0.05-约100mg/kg体重/天之间，常常以单一疗法用于预防或治疗HCV介导的疾病。本公开的药物组合物通常将按每天约1次至约5次或者作为连续输注给予。这类给药法可用作长期或短期疗法。可与载体材料混合以制备单一剂型的活性成分的量将根据待治疗的疾病、病情的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、疗程和患者年龄、性别、体重和身体状况而改变。优选的单位剂型制剂是含有本文上述活性成分的日剂量或分剂量或其适宜分数的单位剂型制剂。治疗可用明显低于化合物最佳剂量的小剂量开始。此后，以较小的增量来加大剂量直到在这类情况下达到最佳效果。一般而言，最理想地给予化合物的浓度水平是通常可在抗病毒方面提供有效结果而又不致于引起任何有害或有毒的副作用。
当本公开的组合物包含本公开的化合物及一种或多种其它治疗药或预防药的组合时，化合物和另外的药物二者的剂量水平通常在单一疗法方案中，占正常给药剂量的约10-150％，更优选占正常给药剂量的约10％至80％之间。
药物制剂可适合于通过任何合适的途径给药，例如通过口服(包括口颊或舌下含服)、直肠、鼻、局部(包括口颊、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内(intralesional)、静脉内或者真皮内注射或输注)途径。这类制剂可按药剂学领域的任何已知方法制备，例如通过将活性成分与载体或赋形剂混合。优选口服给药或注射给药。
适合于口服给药的药物制剂可按独立的单位提供，例如胶囊剂或片剂；散剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫制剂或起泡制剂(whips)；或水包油乳液剂或油包水乳液剂。
举例来说，对于以片剂或胶囊剂形式的口服给药，活性药物组分可与药学上可接受的口服无毒惰性载体(例如乙醇、甘油、水等)相混合。通过将化合物粉碎成合适的微细尺寸，并与被同样粉碎的药用载体(例如淀粉或甘露醇等可食用的碳水化合物)混匀来制备散剂。还可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
通过制备如上所述的粉状混合物，并装填到成形的明胶壳内，来制备胶囊剂。在装填操作之前，可将助流剂和润滑剂(例如胶态二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固态聚乙二醇)加到粉状混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂(例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)以改善胶囊剂摄入后的药物利用度。
此外，需要或必需时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯树胶、西黄蓍胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。例如，通过制成粉状混合物，制粒或预压片(slugging)，添加润滑剂和崩解剂，压制成片，从而制成片剂。将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基料，并任选与粘合剂(例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液阻滞剂(例如石蜡)、吸收加速剂(例如季盐)和/或吸收剂(例如皂土、高岭土或磷酸二钙)混合，来制备粉状混合物。可用粘合剂(例如糖浆、淀粉浆、阿拉伯胶浆(acadia mucilage)或者纤维素材料或聚合材料溶液)润湿后加压过筛，将粉状混合物制粒。制粒的一个替代方法是，可将粉状混合物通过压片机，结果是将成形不佳的团块再击碎制成颗粒。可通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油使颗粒润滑以防止粘到片剂成形冲模上。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本公开的化合物还可与自由流动的惰性载体混合，无需通过制粒或预压片步骤便可直接压制成片剂。可提供透明或不透明的由虫胶密封衣、糖衣或聚合材料衣和蜡质抛光衣(polish coating of wax)组成的保护性包衣材料。可将染料加到这些包衣材料中以区别不同的单位剂量。
口服液体例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以剂量单位形式制备，从以使定量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于适当调味的含水溶液中来制备，而酏剂可通过使用无毒溶媒制备。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂)等。
如果适当的话，可将用于口服给药的剂量单位制剂微胶囊化。也可将制剂制成延时或持续释放，例如通过将微粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡等中。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐还可以脂质体递药系统给予，例如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体。脂质体可由多种磷脂(例如胆固醇、十八烷基胺或磷脂酰胆碱)构成。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可通过使用单克隆抗体作为单独的载体(化合物分子与之偶联)递药。化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，化合物可与一类生物可降解的聚合物偶联，用于达到药物的控释，这类聚合物为例如聚乳酸、聚ε-己内酯(polepsilon caprolactone)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联共聚物或两亲性嵌段共聚物。
适于经皮给药的药物制剂可作为离散的贴剂(discrete patches)存在，以在长时间段内保持与接受者表皮密切接触。例如，活性成分可由贴剂通过离子电渗疗法传递，一般如在PharmaceuticalResearch 1986，3(6)，318中所述。
适合于局部给药的药物制剂可制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
适合于直肠给药的药物制剂可作为栓剂或作为灌肠剂提供。
适合于经鼻给药的药物制剂(其中载体为固体)包括粒径为例如20-500微米范围的粗粉剂，其通过以鼻吸入方式给药，即通过从接近鼻子的粉剂容器中通过鼻通道快速吸入。适合于作为鼻腔喷雾剂或滴鼻剂给药的合适制剂(其中载体为液体)包括活性成分的水性溶液剂或油性溶液剂。
适合于通过吸入给药的药物制剂包括微细粒子粉剂(dusts)或细雾剂(mists)，其可用不同类型计量的剂量压缩气溶胶、雾化吸入器或吹入器制备。
适合于阴道给药的药物制剂可以阴道栓、阴道塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂提供。
适于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂及水性和非水性无菌混悬剂，水性和非水性无菌注射溶液剂可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂，并使制剂与待接受者血液等渗的溶质；水性和非水性无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。制剂可以单位剂量或多剂量容器提供，例如密封的安瓿和小瓶，并可保存在冷冻-干燥(冻干)条件下，只需在临用前即刻加入无菌液体载体例如注射用水。临用时配制的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉针剂、颗粒剂和片剂制备。
应该理解，除了以上特别提到的成分以外，制剂还可包括与所述制剂类型有关的本领域常用的其它成分，例如适合于口服给药的这类制剂可包括矫味剂。
术语“患者”包括人和其它动物两者。
术语“治疗”是指：(i)在可易患疾病、障碍和/或病症但尚未被确诊患有疾病、障碍和/或病症的患者中防止疾病、障碍或病症的发生；(ii)抑制疾病、障碍或病症，即阻止其发展；和(iii)缓解疾病、障碍或病症，即使疾病、障碍和/或病症消退。
本公开的化合物还可与环孢菌素(例如环孢菌素A)一起给药。已表明，环孢菌素A在临床试验中具有抗HCV活性(Hepatology 2003，38，1282；Biochem.Biophys.Res.Commun.2004，313，42；J.Gastroenterol.2003，38，567)。
下表1中列出了一些可与本公开的化合物一起给药的示例性化合物的实例。在联合疗法中，本公开的化合物可与其它抗HCV活性化合物共同或分开给药，或者将化合物掺到组合物中。
表1
Figure BPA00001245294300221
Figure BPA00001245294300231
Figure BPA00001245294300241
Figure BPA00001245294300261
本公开的化合物还可用作实验室试剂。化合物可在为设计病毒复制实验、验证动物实验系统和结构生物学研究提供研究工具方面发挥作用，以进一步加深对HCV疾病机制的认识。此外，本公开的化合物可用于通过例如竞争性抑制来建立或确定其它抗病毒化合物的结合位点。
本公开的化合物还可用来处理或防止病毒污染材料，从而降低接触这类材料的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险，所述材料为例如血液、组织、手术器械和衣物、实验室仪器和衣物及采血或输血设备和材料。
当通过合成方法制备，或者通过代谢过程(包括发生在人或动物身体内(体内)的那些过程)或者体外发生过程产生时，本公开意欲包括具有式(I)的化合物。
用于本申请的缩写，包括特别在下列示例性流程和实施例中的缩写为本领域技术人员所熟知。所使用的一些缩写如下：HATU表示六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲
Figure BPA00001245294300271
Boc或BOC表示叔丁氧基羰基；NBS表示N-溴丁二酰亚胺；tBu或t-Bu表示叔丁基；SEM表示-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基；DMSO表示二甲亚砜；MeOH表示甲醇；TFA表示三氟乙酸；RT表示室温或保留时间(文中将作出规定)；tR表示保留时间；EDCI表示1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；DMAP表示4-二甲氨基吡啶；THF表示四氢呋喃；DBU表示1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；t-Bu；DEA表示二乙胺；HMDS表示六甲基二硅氮烷；DMF表示N，N-二甲基甲酰胺；Bzl表示苄基；EtOH表示乙醇；iPrOH或i-PrOH表示异丙醇；Me2S表示二甲基硫醚；Et3N或TEA表示三乙胺；Ph表示苯基；OAc表示乙酸根(acetate)；EtOAc表示乙酸乙酯；dppf表示1，1′-双(二苯膦基)二茂铁；iPr2EtN或DIPEA表示二异丙基乙胺；Cbz表示苄氧羰基(carbobenzyloxy)；n-BuLi表示正丁基锂；ACN表示乙腈；h或hr表示小时；m或min表示分钟；s表示秒钟；LiHMDS表示六甲基二甲硅烷基氨基锂；DIBAL表示二异丁基氢化铝；TBDMSCl表示叔丁基二甲基氯硅烷；Me表示甲基；ca.表示大约；OAc表示乙酸根(acetate)；iPr表示异丙基；Et表示乙基；Bn表示苄基；和HOAT表示1-羟基-7-氮杂苯并三唑。
结合下面通过举例说明可制备本公开的化合物的方法的合成流程，将更好地理解本公开的化合物和方法。原料可获自商业来源，或者通过本领域普通技术人员已知的大量记载的文献方法制备。对于本领域普通技术人员显而易见的是，可通过替换下文所示合成法中合适的反应物和试剂，来合成上文中定义的化合物。也对于本领域技术人员显而易见的是，可按不同顺序进行选择性的保护和脱保护步骤以及步骤本身的顺序，这取决于成功完成下列合成的变量性质。所述变量如上定义，除非下文中另有说明。
流程1：对称或不对称联苯类
芳基卤1和硼酸酯2可采用标准Suzuki-Miayura偶合条件(AngewChem.Int.Ed.Engl 2001，40，4544)进行偶合以得到联芳3。应当注意的是，2的硼酸类似物可用来替换该酯。当R12和R13不同时，可实现吡咯烷部分的单脱保护(Mono-deprotection)。当R12＝苄基，且R13＝叔丁基时，氢解条件(hydrogenolytic conditions)处理得到4。例如，在碱(例如碳酸钾)存在下，可使用Pd/C催化剂。4的酰基化可在标准酰基化条件下完成。偶合试剂(例如HATU)与胺碱(例如Hunig碱)的组合可用于这个方面。或者，4可与异氰酸酯或氨基甲酰氯反应，得到其中R9为胺的式5化合物。可通过用强酸(例如HCl或三氟乙酸)处理完成5的进一步脱保护。可采用类似于将4转化为5所用的那些标准条件由6制备7。在另一个实施方案中，当R12＝R13＝t-Bu时，可通过用强酸(例如HCl或三氟乙酸)对3进行处理以直接转化成8。按由4制备5或者由6制备7所用方法的类似方式完成8至7的转化。然而在这种情况下，7的端基(caps)将是相同的。
流程2：不对称封端的(Capped)联苯类
可采用标准酰胺偶合条件(例如HATU与胺碱(例如Hunig碱))实现6(得自流程1)转化成10。可用强酸(例如HCl或三氟乙酸)完成脱保护得到11。然后分别用酰氯、异氰酸酯或氨基甲酰氯或者氯甲酸酯，可将化合物11转化成12、13或14。
Figure BPA00001245294300301
流程3：带复杂性对称端基的联苯类
可通过用强酸(例如HCl或三氟乙酸)处理，使其中每个R9都为-CH(NHBoc)R18)的化合物15(15＝7(流程1))转化成16。可分别用合适的氯甲酸酯、异氰酸酯或氨基甲酰氯或者酰氯对16进行处理，由16制备化合物17、18和19。
流程4：对称联苯类
对称的联苯类似物(其中分子的两半是相等的式7化合物)可由溴酮20开始合成。用亲核试剂(例如叠氮化物、邻苯二甲酰亚胺或优选二甲酰基氨化钠(sodium diformylamide)(Yinglin和Hongwen，Synthesis 1990，122))置换的胺化作用后脱保护，得到21。在标准胺化条件(例如HATU和Hunig碱)下与适当保护的氨基酸缩合，得到22。在加热或微波条件下与乙酸铵一起加热，导致形成3，3可用强酸(例如HCl或三氟乙酸)(R12＝R13＝t-Bu)脱保护，或者用氢气和过渡金属催化剂(例如Pd/C)(R12＝R13＝苄基)氢解。羧酸(R9CO2H)可按类似于21转化至22的方式对酰基化产生影响。可通过用合适的异氰酸酯(R9＝R24R25N；R25＝H)或氨基甲酰氯(R9＝R24R25N；R25不是氢)处理，来完成脲的形成。
Figure BPA00001245294300321
流程5：起始原料25和2
流程5描述了流程1-4中所示合成顺序所需的一些原料的制备。通过在加热或微波条件下与乙酸铵一起加热，由酮-酰胺24或酮-酯27制备关键中间体25(类似于流程1中的1)。可在标准酰胺形成条件下通过与合适的环状或非环状氨基酸缩合，由23制备酮-酰胺24。溴化物26用亲核试剂(例如叠氮化物、邻苯二甲酰亚胺或二甲酰基氨化钠(Synthesis 1990，122))处理后脱保护，可得到23。也可在碱(例如碳酸钾或碳酸氢钠)存在下，通过溴化物26与合适的环状或非环状N-被保护的氨基酸反应，使溴化物26转化成27。28与溴
Figure BPA00001245294300322
离子(bromonium ion)源(例如溴、NBS或CBr4)的溴化作用导致形成26。可按照文献所述方法(Journal of Organic Chemistry 1995，60，7508)或其变通方法，在钯催化条件下，用二硼酸二频哪醇酯(bis-pinacalotodiboron)处理，使溴化物25转化成硼酸酯2。
Figure BPA00001245294300331
流程6：起始原料31a
在另一个实施方案中，可在Suzuki型偶合条件下，通过使溴咪唑衍生物31与各种氯取代的芳基硼酸反应来制备原料例如31a(类似于流程5中的25和流程1中的1)，所述氯取代的芳基硼酸可通过标准方法制备(参见，例如Organic Letters 2006，8，305和其中引用的参考文献)或者购自商业供应商。可用溴离子源(例如溴、CBr4或N-溴丁二酰亚胺)使咪唑30溴化，得到溴咪唑31。可在氢氧化铵的甲醇溶液中，由适当取代的N-被保护的氨基酸与乙二醛反应制备咪唑30。
流程7：杂芳基化合物
本公开的又一个实施方案中，可使芳基卤32在Suzuki-Miyaura钯催化条件下进行偶合，形成杂芳基衍生物34。通过在氢解条件下，用氢气和过渡金属催化剂(例如披钯碳)(R13＝苄基)处理，将化合物34精制成35。35的酰基化可在以下条件下完成：可在碱(例如三乙胺)存在下，用合适的酰氯(R9COCl)；在标准偶合试剂(例如HATU)存在下，用适当取代的羧酸(R9CO2H)；或者用异氰酸酯(R27NCO，其中R9＝R27R28N-；R28＝H)或氨基甲酰氯(R27R28NCOCl，其中R9＝R27R28N-)。可通过用强酸(例如HCl或三氟乙酸)处理，由36(R12＝t-Bu)制备化合物37。可如35转化成36一样，完成37中所得胺的酰基化，得到38。在其中R12＝R13的情况下，可通过用强酸(例如HCl或三氟乙酸)(R12＝R13＝t-Bu)处理或者通过采用氢解条件，用氢气和过渡金属催化剂(例如披钯碳)(R12＝R13＝苄基)，使34直接转化成39。可按35转化成36中所述的类似方式完成39的酰基化。
Figure BPA00001245294300341
流程8
可在高温下，在四(二甲氨基)乙烯存在下，通过用钯源(例如二氯双(苯甲腈)钯)处理，使杂芳基氯化物29转化成对称类似物40。可通过用强酸(例如HCl或三氟乙酸)处理，在一个步骤中完成40中存在的SEM醚和Boc氨基甲酸酯的脱去，得到41。按流程7中使38转化成39所用条件的类似方式，来完成向42的转化。
Figure BPA00001245294300351
流程9：带对称端基的取代的杂芳基化合物
可通过流程3中所述方法的同样方法，将化合物43(类似于42，其中R23＝-CH(NHBoc)R24)精制成45、46和47。在其中R20＝烷氧基甲基(即SEM)的情况下，可在用强酸(例如HCl或三氟乙酸)脱去Boc氨基甲酸酯(参见43至44)的同时脱去SEM。
Figure BPA00001245294300352
流程10：原料29
可在钯源(例如二氯双(三苯基膦)合钯(II))存在下，使杂芳基溴化物54与乙烯基锡烷(例如三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡)反应，得到55，可通过用溴离子源(例如N-溴丁二酰亚胺、CBr4或溴)处理，随即使55转化成溴酮51。或者，可通过用溴
Figure BPA00001245294300362
离子源(例如溴、CBr4或N-溴丁二酰亚胺)处理，使酮基取代的杂芳基溴化物53直接转化成51。可通过加入叠氮化钠、邻苯二甲酰亚胺钾或二甲酰基氨化钠(Synthesis1990122)之后脱保护，使溴化物51转化成氨基酮48。然后，可在标准酰胺形成条件(即偶合试剂，例如HATU，在弱碱如Hunig碱存在下)下，使氨基酮48与适当取代的氨基酸偶合，得到49。随后可在加热或微波条件下，通过与乙酸铵反应，使化合物49进一步转化成咪唑50。或者，可在碱(例如碳酸氢钠或碳酸钾)存在下，使51直接与适当取代的氨基酸反应，得到52，52进而可在加热或微波条件下与乙酸铵反应，得到50。首先通过用强碱(例如氢化钠)脱质子化后，再用合适的烷氧基甲基卤化物(例如2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯)处理，可用烷氧基甲基将咪唑50保护起来。
Figure BPA00001245294300363
流程11：取代的苯基甘氨酸衍生物
取代的苯基甘氨酸衍生物可通过下文所述的多种方法制备。可在酸性介质中，用合适的醛和还原剂(例如氰基硼氢化钠)使苯基甘氨酸叔丁酯还原性烷基化(途径A)。叔丁酯的水解可用强酸(例如HCl或三氟乙酸)完成。或者，可用烷基卤化物(例如乙基碘)和碱(例如碳酸氢钠或碳酸钾)使苯基甘氨酸烷基化(途径B)。途径C表示在还原剂和酸存在下，如途径A一样，苯基甘氨酸还原性烷基化后用其它醛(例如甲醛)进行第二次还原性烷基化。途径D表示通过相应的扁桃酸类似物来合成取代的苯基甘氨酸。仲醇向可离去基团(competent leaving group)的转化可用对甲苯磺酰氯来实现。可用合适的胺替换甲苯磺酸基后经还原性脱去苄酯，得到取代的苯基甘氨酸衍生物。在途径E中，外消旋取代的苯基甘氨酸衍生物通过用对映体纯的手性助剂(例如但不限于(+)-1-苯基乙醇、(-)-1-苯基乙醇、Evan’s
Figure BPA00001245294300371
唑烷酮或对映体纯的泛酸内酯(pantolactone))酯化来拆分。非对映体的分离通过色谱法(硅胶、HPLC、结晶法等)后除去手性助剂来完成，得到对映体纯的苯基甘氨酸衍生物。途径H表示与途径E交叉的合成顺序，其中前述手性助剂在加胺前就已安装。或者，芳基乙酸的酯可用溴离子源(例如溴、N-溴丁二酰亚胺或CBr4)进行溴化。所得苄基溴化物可在叔胺碱(例如三乙胺)或Hunig’s碱存在下，用各种单取代或二取代的胺类置换。在低温下用氢氧化锂处理或在高温下用6N HCl处理使甲基酯水解，得到取代的苯基甘氨酸衍生物。另一种方法见途径G。在钯源(0)(例如双(三丁基膦))合钯和碱(例如磷酸钾)存在下，甘氨酸类似物可用各种芳基卤衍生化。然后，可用碱或酸处理，使所得酯水解。应该理解，本领域存在其它众所周知的苯基甘氨酸衍生物的制备方法，在本说明书中可对其加以修改，得到所需要的化合物。还要了解的是，可通过制备型HPLC，将最终的苯基甘氨酸衍生物纯化到98％对映体过量(ee)以上的对映体纯度。
Figure BPA00001245294300381
流程12：酰化氨基酸衍生物
在本公开的另一个实施方案中，酰化的苯基甘氨酸衍生物可按照下述方法制备。其中羧酸被保护成为容易脱去的酯的苯基甘氨酸衍生物，可在碱(例如三乙胺)存在下用酰氯进行酰化，得到相应的酰胺(途径A)。途径B表示用合适的氯甲酸酯使起始苯基甘氨酸衍生物酰基化，而途径C表示与合适的异氰酸酯或氨基甲酰氯的反应。途径A-C所示3种中间体的每一种都可通过本领域技术人员已知的方法脱保护(即叔丁酯用强碱例如HCl或三氟乙酸处理)。
Figure BPA00001245294300391
流程13
可用过量的胺处理氯甲基苯基乙酸来制备氨基取代的苯基乙酸。
Figure BPA00001245294300392
化合物分析条件
将Shimadzu LC系统与Waters Micromass ZQ MS系统联用，进行纯度评价和低分辨质谱分析。应当注意的是，保留时间在不同机器之间略有不同。测定保留时间(RT)所采用的LC条件是：
条件1
柱＝Phenomenex-Luna 3.0 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件2
柱＝Phenomenex-Luna 4.6 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝5mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件3
柱＝HPLC XTERRA C183.0 x 50mm S7
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
停止时间＝4min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件M1
柱：Luna 4.6 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
停止时间＝4min
流速＝4mL/min
溶剂A：＝95％H2O：5％CH3CN，10mm乙酸铵
溶剂B：＝5％H2O：95％CH3CN；10mm乙酸铵
通用端基(Caps)的合成
Figure BPA00001245294300411
将10％Pd/C(2.0g)的甲醇(10mL)悬浮液加到(R)-2-苯基甘氨酸(10g，66.2mmol)、甲醛(33mL 37％重量的水溶液)、1N HCl(30mL)和甲醇(30mL)的混合物中，并暴露在H2(60psi)中达3小时。反应混合物通过硅藻土过滤后，真空浓缩滤液。所得粗产物用异丙醇重结晶，得到Cap-1的HCl盐(4.0g，白色针状物)。旋光性：-117.1°[c＝9.95mg/mL，H2O中；λ＝589nm]。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)：δ7.43-7.34(m，5H)，4.14(s，1H)，2.43(s，6H)；LC(条件1)：RT＝0.25；LC/MS：对于[M+H]+C10H14NO2分析计算值：180.10；实测值：180.17；HRMS：对于[M+H]+C10H14NO2分析计算值：180.1025；实测值：180.1017。
在几分钟内，将NaBH3CN(6.22g，94mmol)分批加到冷却(冰/水)的(R)-2-苯基甘氨酸(6.02g，39.8mmol)和MeOH(100mL)的混合物中，并搅拌5分钟。在10分钟内滴加乙醛(10mL)，在相同的冷却温度下继续搅拌45分钟后，在环境温度搅拌～6.5小时。反应混合物再用冰水浴回冷，用水(3mL)处理后，在～45分钟内滴加浓HCl猝灭，直到混合物的pH为～1.5-2.0。移开冷却浴后，在加入浓HCl以保持混合物约pH 1.5-2.0的同时继续搅拌。将反应混合物搅拌过夜，过滤除去白色悬浮物后，真空浓缩滤液。粗产物用乙醇重结晶，得到Cap-2的HCl盐，两种产物均为光亮的白色固体(产物-1：4.16g；产物-2：2.19g)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：10.44(1.00，br s，1H)，7.66(m，2H)，7.51(m，3H)，5.30(s，1H)，3.15(br m，2H)，2.98(br m，2H)，1.20(表观br s，6H)。产物-1：[α]25-102.21°(c＝0.357，H2O)；产物-2：[α]25-99.7°(c＝0.357，H2O)。LC(条件1)：RT＝0.43min；LC/MS：对于[M+H]+C12H18NO2分析计算值：208.13；实测值：208.26。
Figure BPA00001245294300421
将乙醛(5.0mL，89.1mmol)和10％Pd/C(720mg)与甲醇/H2O(4mL/1mL)的悬浮液依次加到冷却(～15℃)的(R)-2-苯基甘氨酸(3.096g，20.48mmol)、1N HCl(30mL)和甲醇(40mL)的混合物中。移开冷却浴后，将反应混合物在H2气囊(balloon)下搅拌17小时。再加入乙醛(10mL，178.2mmol)后，在H2气氛下继续搅拌24小时[注意：在整个反应中按需要补充H2供应]。反应混合物通过硅藻土
Figure BPA00001245294300422
过滤后，真空浓缩滤液。所得粗产物用异丙醇重结晶，得到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的HCl盐(2.846g，光亮的白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ14.15(br s，1H)，9.55(br s，2H)，7.55-7.48(m，5H)，2.88(br m，1H)，2.73(br m，1H)，1.20(表观t，J＝7.2，3H)。LC(条件1)：RT＝0.39min；均一性指数(homogeneity index)＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C10H14NO2分析计算值：180.10；实测值：180.18。
将10％Pd/C(536mg)的甲醇/H2O(3mL/1mL)悬浮液加到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸/HCl(1.492g，6.918mmol)、甲醛(20mL37％重量的水溶液)、1N HCl(20mL)和甲醇(23mL)的混合物中。将反应混合物在H2气囊下搅拌～72小时，需要时补充H2供应。反应混合物通过硅藻土过滤后，真空浓缩滤液。所得粗产物用异丙醇(50mL)重结晶，得到Cap-3的HCl盐(985mg，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ10.48(br s，1H)，7.59-7.51(m，5H)，5.26(s，1H)，3.08(表观br s，2H)，2.65(br s，3H)，1.24(br m，3H)。LC(条件1)：RT＝0.39min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C11H16NO2分析计算值：194.12；实测值：194.18；HRMS：对于[M+H]+C11H16NO2分析计算值：194.1180；实测值：194.1181。
Figure BPA00001245294300432
在6分钟内，将ClCO2Me(3.2mL，41.4mmol)滴加到冷却(冰/水)的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯/HCl(9.877g，40.52mmol)和二异丙基乙胺(14.2mL，81.52mmol)的THF(410mL)半溶液(semi-solution)中，并在同样的温度下搅拌5.5小时。真空除去挥发性成分后，使残余物在水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)之间分配。有机层用1N HCl(25mL)和饱和NaHCO3溶液(30mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得无色油状物用己烷研磨，过滤后用己烷(100mL)洗涤，得到(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸叔丁酯(7.7g，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：7.98(d，J＝8.0，1H)，7.37-7.29(m，5H)，5.09(d，J＝8，1H)，3.56(s，3H)，1.33(s，9H)。LC(条件1)：RT＝1.53min；均一性指数为～90％；LC/MS：对于[M+Na]+C14H19NNaO4分析计算值：288.12；实测值：288.15。
在7分钟内，将TFA(16mL)滴加到上述产物的冷却(冰/水)的CH2Cl2(160mL)溶液中，移开冷却浴后将反应混合物搅拌20小时。由于脱保护反应仍未完成，因此再加入TFA(1.0mL)，再继续搅拌2小时。真空除去挥发性成分后，所得油性残余物用乙醚(15mL)和己烷(12mL)处理，得到沉淀物。沉淀物经过滤后，用乙醚/己烷(比率～1∶3；30mL)洗涤后，真空干燥，得到Cap-4(5.57g，绒毛状白色固体)。旋光性：-176.9°[c＝3.7mg/mL，H2O中；λ＝589nm]。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.84(br s，1H)，7.96(d，J＝8.3，1H)，7.41-7.29(m，5H)，5.14(d，J＝8.3，1H)，3.55(s，3H)。LC(条件1)：RT＝1.01min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C10H12NO4分析计算值：210.08；实测值：210.17；HRMS：对于[M+H]+C10H12NO4分析计算值：210.0766；实测值：210.0756。
将(R)-2-苯基甘氨酸(1.0g，6.62mmol)、1，4-二溴丁烷(1.57g，7.27mmol)和Na2CO3(2.10g，19.8mmol)在乙醇(40mL)中的混合物在100℃下加热21小时。使反应混合物冷却至环境温度，过滤后真空浓缩滤液。将残余物溶于乙醇，用1N HCl酸化至pH 3-4后，真空除去挥发性成分。所得粗产物用反相HPLC纯化(水/甲醇/TFA)，得到Cap-5的TFA盐(1.0g，半粘性白色泡沫状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ10.68(br s，1H)，7.51(m，5H)，5.23(s，1H)，3.34(表观br s，2H)，3.05(表观br s，2H)，1.95(表观br s，4H)；RT＝0.30min(条件1)；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C12H16NO2分析计算值：206.12；实测值：206.25。
Figure BPA00001245294300451
采用Cap-5的制备方法，由(R)-2-苯基甘氨酸和1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷合成Cap-6的TFA盐。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ12.20(br s，1H)，7.50(m，5H)，4.92(s，1H)，3.78(表观br s，4H)，3.08(表观br s，2H)，2.81(表观br s，2H)；RT＝0.32min(条件1)；＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C12H16NO3分析计算值：222.11；实测值：222.20；HRMS：对于[M+H]+C12H16NO3分析计算值：222.1130；实测值：222.1121。
Figure BPA00001245294300452
将对甲苯磺酰氯(8.65g，45.4mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液滴加到(S)-2-羟基-2-苯基乙酸苄酯(10.0g，41.3mmol)、三乙胺(5.75mL，41.3mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.504g，4.13mmol)的冷却(-5℃)CH2Cl2(200mL)溶液中，同时保持温度在-5℃和0℃之间。将反应物在0℃下搅拌9小时后，在冰箱(-25℃)内保存14小时。将其融化到环境温度后，用水(200mL)、1N HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到2-苯基-2-(甲苯磺酰氧基)乙酸苄酯(16.5g，粘性油状物，静置时固化)。未检查该产物的手性完整性(chiralintegrty)，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ7.78(d，J＝8.6，2H)，7.43-7.29(m，10H)，7.20(m，2H)，6.12(s，1H)，5.16(d，J＝12.5，1H)，5.10(d，J＝12.5，1H)，2.39(s，3H)。RT＝3.00(条件3)；均一性指数＞90％；LC/MS：对于[M+H]+C22H20NaO5S分析计算值：419.09；实测值：419.04。
将2-苯基-2-(甲苯磺酰氧基)乙酸苄酯(6.0g，15.1mmol)、1-甲基哌嗪(3.36mL，30.3mmol)和N，N-二异丙基乙胺(13.2mL，75.8mmol)的THF(75mL)溶液在65℃下加热7小时。使反应物冷却至环境温度后，真空除去挥发性成分。使残余物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用快速色谱法纯化(硅胶，乙酸乙酯)，得到2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苄酯(4.56g，粘性橙褐色油状物)。手性HPLC分析(Chiralcel OD-H)表明该样品为对映体混合物，比率38.2∶58.7。对映体的分离如下进行：将产物溶于120mL乙醇/庚烷(1∶1)后注入(5mL/注射)手性HPLC柱(Chiracel OJ，5cm ID x 50cm L，20μm)上，用85∶15庚烷/乙醇按75mL/min洗脱，并于220nm监测。回收得到对映体-1(1.474g)和对映体-2(2.2149g)，为粘性油状物。1H NMR(CDCl3，δ＝7.26，500MHz)7.44-7.40(m，2H)，7.33-7.24(m，6H)，7.21-7.16(m，2H)，5.13(d，J＝12.5，1H)，5.08(d，J＝12.5，1H)，4.02(s，1H)，2.65-2.38(表观br s，8H)，2.25(s，3H)。RT＝2.10(条件3)；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C20H25N2O2分析计算值：325.19；实测值：325.20。
将2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苄酯(1.0g，3.1mmol)对映体任一种的甲醇(10mL)溶液加到10％Pd/C(120mg)的甲醇(5.0mL)悬浮液中。在严密监视下，将反应混合物在50分钟以内暴露于氢气囊。反应一经完成，便通过硅藻土
Figure BPA00001245294300461
过滤催化剂后，真空浓缩滤液，得到被苯基乙酸污染的Cap-7(867.6mg；质量超出理论产率，黄褐色泡沫状物)。产物无需纯化便可用于下一步骤。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ7.44-7.37(m，2H)，7.37-7.24(m，3H)，3.92(s，1H)，2.63-2.48(表观bs，2H)，2.48-2.32(m，6H)，2.19(s，3H)；RT＝0.31(条件2)；均一性指数＞90％；LC/MS：对于[M+H]+C13H19N2O2分析计算值：235.14；实测值：235.15；HRMS：对于[M+H]+C13H19N2O2分析计算值：235.1447；实测值：235.1440。
按照Cap-7合成法，采用合适的胺置换SN2的步骤(即对于Cap-8为4-羟基哌啶，对于Cap-9为(S)-3-氟吡咯烷)和如下所述的用于分离相应立体异构体中间体的改进条件，进行Cap-8和Cap-9的合成。
Figure BPA00001245294300471
中间体2-(4-羟基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸苄酯的对映体分离采用以下条件进行：将化合物(500mg)溶于乙醇/庚烷(5mL/45mL)。将所得溶液注入(5mL/注射)手性HPLC柱(Chiracel OJ，2cm ID x 25cm L，10μm)上，用80∶20庚烷/乙醇按10mL/min洗脱，并于220nm监测，得到186.3mg对映体-1和209.1mg对映体-2，为粘性浅黄色油状物。这些苄酯按照Cap-7的制备法氢解，得到Cap-8：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)7.40(d，J＝7，2H)，7.28-7.20(m，3H)，3.78(s 1H)，3.46(m，1H)，2.93(m，1H)，2.62(m，1H)，2.20(m，2H)，1.70(m，2H)，1.42(m，2H)。RT＝0.28(条件2)；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C13H18NO3分析计算值：236.13；实测值：236.07；HRMS：对于[M+H]+C13H18NO3计算值：236.1287；实测值：236.1283。
Figure BPA00001245294300472
中间体2-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酸苄酯的非对映体分离采用以下条件进行：在手性HPLC柱(Chiracel OJ-H，0.46cm ID x 25cmL，5μm)上分离酯(220mg)，在压力10巴、流速70mL/min和35℃温度下，用95％CO2/5％甲醇(含有0.1％TFA)洗脱。相应立体异构体的HPLC流出物经浓缩后，将残余物溶于CH2Cl2(20mL)，用含水介质(10mL水+1mL饱和NaHCO3溶液)洗涤。有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到92.5mg流分-1和59.6mg流分-2。按照Cap-7的制备法，使这些苄酯氢解，得到Cap-9a和Cap-9b。Cap-9a(非对映体-1；样品是用反相HPLC纯化后得到的TFA盐，使用H2O/甲醇/TFA溶剂)：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，400MHz)7.55-7.48(m，5H)，5.38(m的d，J＝53.7，1H)，5.09(br s，1H)，3.84-2.82(br m，4H)，2.31-2.09(m，2H)。RT＝0.42(条件1)；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C12H15FNO2分析计算值：224.11；实测值：224.14；Cap-9b(非对映体-2)：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，400MHz)7.43-7.21(m，5H)，5.19(m的d，J＝55.9，1H)，3.97(s，1H)，2.95-2.43(m，4H)，2.19-1.78(m，2H)。RT＝0.44(条件1)；LC/MS：对于[M+H]+C12H15FNO2分析计算值：224.11；实测值：224.14。
Figure BPA00001245294300481
向D-脯氨酸(2.0g，17mmol)和甲醛(2.0mL 37％重量的H2O溶液)的甲醇(15mL)溶液中加入10％Pd/C(500mg)的甲醇(5mL)悬浮液。将混合物在氢气囊下搅拌23小时。反应混合物通过硅藻土过滤后真空浓缩，得到Cap-10(2.15g，灰白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)3.42(m，1H)，3.37(dd，J＝9.4，6.1，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.66(s，3H)，2.21-2.13(m，1H)，1.93-1.84(m，2H)，1.75-1.66(m，1H)。RT＝0.28(条件2)；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C6H12NO2分析计算值：130.09；实测值：129.96。
Figure BPA00001245294300491
将(2S，4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酸(0.50g，3.8mmol)、甲醛(0.5mL 37％重量的H2O溶液)、12N HCl(0.25mL)和10％Pd/C(50mg)在甲醇(20mL)中的混合物在氢气囊下搅拌19小时。反应混合物通过硅藻土
Figure BPA00001245294300492
过滤后，真空浓缩滤液。残余物用异丙醇重结晶，得到Cap-11的HCl盐(337.7mg，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)5.39(d m，J＝53.7，1H)，4.30(m，1H)，3.90(ddd，J＝31.5，13.5，4.5，1H)，3.33(dd，J＝25.6，13.4，1H)，2.85(s，3H)，2.60-2.51(m，1H)，2.39-2.26(m，1H)。RT＝0.28(条件2)；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C6H11FNO2分析计算值：148.08；实测值：148.06。
将L-丙氨酸(2.0g，22.5mmol)溶于10％碳酸钠水溶液(50mL)，再向其中加入氯甲酸甲酯(4.0mL)的THF(50mL)溶液。将反应混合物在环境条件下搅拌4.5小时后，真空浓缩。将所得白色固体溶于水后，用1N HCl酸化至pH～2-3。所得溶液用乙酸乙酯(3 x 100mL)萃取，将合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到无色油状物(2.58g)。该产物中的500mg用反相HPLC纯化(H2O/甲醇/TFA)，得到150mg Cap-12，为无色油状物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)7.44(d，J＝7.3，0.8H)，7.10(br s，0.2H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J＝7.3，3H)。
将L-丙氨酸(2.5g，28mmol)、甲醛(8.4g，37％重量)、1N HCl(30mL)和10％Pd/C(500mg)在甲醇(30mL)中的混合物在氢气氛(50psi)下搅拌5小时。反应混合物通过硅藻土
Figure BPA00001245294300501
过滤后，真空浓缩滤液，得到Cap-13的HCl盐(4.4g；质量超过理论收率，为油状物，真空下静置时固化)。产物无需进一步纯化便可使用。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5，500MHz)δ12.1(br s，1H)，4.06(q，J＝7.4，1H)，2.76(s，6H)，1.46(d，J＝7.3，3H)。
Figure BPA00001245294300502
步骤1：在0℃下，将(R)-(-)-D-苯基甘氨酸叔丁酯(3.00g，12.3mmol)、NaBH3CN(0.773g，12.3mmol)、KOH(0.690g，12.3mmol)和乙酸(0.352mL，6.15mmol)的混合物在甲醇中搅拌。在5分钟内，向该混合物中滴加戊二醛(2.23mL，12.3mmol)。在使反应混合物升温至环境温度的同时进行搅拌，在相同温度下继续搅拌16小时。随后除去溶剂，残余物用10％NaOH水溶液和乙酸乙酯进行分配。有机相经分离，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至干，得到透明油状物。该产物用反相制备型HPLC纯化(Primesphere C-18，30 x 100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)，得到中间体酯(2.70g，56％)，为透明油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.44(m，3H)，7.40-7.37(m，2H)，3.87(d，J＝10.9Hz，1H)，3.59(d，J＝10.9Hz，1H)，2.99(t，J＝11.2Hz，1H)，2.59(t，J＝11.4Hz，1H)，2.07-2.02(m，2H)，1.82(d，J＝1.82Hz，3H)，1.40(s，9H)。LC/MS：对于C17H25NO2分析计算值：275；实测值：276(M+H)+。
步骤2：向中间体酯(1.12g，2.88mmol)与二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中加入TFA(3mL)。将反应混合物在环境温度下搅拌4小时后，浓缩至干，得到浅黄色油状物。油状物用反相制备型HPLC纯化(Primesphere C-18，30 x 100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)。合并合适的流分后，真空浓缩至干。然后将残余物溶于最少量的甲醇中，并加到MCXLP萃取柱体(2 x 6g)上。柱体用甲醇(40mL)冲洗后，所需化合物用2M氨的甲醇溶液(50mL)洗脱。合并含有产物的流分后，浓缩并将残余物溶于水。使该溶液冻干后，得到标题化合物(0.492g，78％)，为浅黄色固体。1HNMR(DMSO-d6)δ7.50(s，5H)，5.13(s，1H)，3.09(brs，2H)，2.92-2.89(m，2H)，1.74(m，4H)，1.48(br s，2H)。LC/MS：对于C13H17NO2分析计算值：219；实测值：220(M+H)+。
Figure BPA00001245294300511
步骤1：2-溴-2-苯基乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：向α-溴苯基乙酸(10.75g，0.050mol)、(S)-(-)-1-苯基乙醇(7.94g，0.065mol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)在无水二氯甲烷(100mL)中的混合物中一次性加入固体EDCI(12.46g，0.065mol)。将所得溶液在氩气氛、室温下搅拌18小时后，用乙酸乙酯稀释，洗涤(H2O x 2，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后浓缩，得到浅黄色油状物。该油状物进行快速色谱(SiO2/己烷-乙酸乙酯，4∶1)，得到标题化合物(11.64g，73％)，为白色固体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.17(m，10H)，5.95(q，J＝6.6Hz，0.5H)，5.94(q，J＝6.6Hz，0.5H)，5.41(s，0.5H)，5.39(s，0.5H)，1.58(d，J＝6.6Hz，1.5H)，1.51(d，J＝6.6Hz，1.5H)。
步骤2：(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：向2-溴-2-苯基乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.464g，1.45mmol)的THF(8mL)溶液中依次加入三乙胺(0.61mL，4.35mmol)和四丁基碘化铵(0.215g，0.58mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟后，加入4-甲基-4-羟基哌啶(0.251g，2.18mmol)的THF(2mL)溶液。将混合物在室温下搅拌1小时后，加热至55-60℃(油浴温度)达4小时。然后经冷却的反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，洗涤(H2O x2，盐水)，干燥(MgSO4)，过滤后浓缩。残余物用硅胶色谱法纯化(0-60％乙酸乙酯-己烷)，先得到标题化合物的(S，R)-异构体(0.306g，60％)，为白色固体，然后得到相应的(S，S)-异构体(0.120g，23％)，也为白色固体。(S，R)-异构体：1HNMR(CD3OD)δ7.51-7.45(m，2H)，7.41-7.25(m，8H)，5.85(q，J＝6.6Hz，1H)，4.05(s，1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.41-2.29(m，2H)，1.71-1.49(m，4H)，1.38(d，J＝6.6Hz，3H)，1.18(s，3H)。LCMS：对于C22H27NO3分析计算值：353；实测值：354(M+H)+。(S，S)-异构体：1HNMR(CD3OD)δ7.41-7.30(m，5H)，7.20-7.14(m，3H)，7.06-7.00(m，2H)，5.85(q，J＝6.6Hz，1H)，4.06(s，1H)，2.70-2.60(m，1H)，2.51(dt，J＝6.6，3.3Hz，1H)，2.44-2.31(m，2H)，1.75-1.65(m，1H)，1.65-1.54(m，3H)，1.50(d，J＝6.8Hz，3H)，1.20(s，3H)。LCMS：对于C22H27NO3分析计算值：353；实测值：354(M+H)+。
步骤3：(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.185g，0.52mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。随后真空除去挥发物，残余物用反相制备型HPLC纯化(Primesphere C-18，20 x 100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)，得到标题化合物(为TFA盐)(0.128g，98％)，为浅蓝色固体。LCMS：对于C14H19NO3分析计算值：249；实测值：250(M+H)+。
Figure BPA00001245294300521
步骤1：2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：将2-氟苯基乙酸(5.45g，35.4mmol)、(S)-1-苯基乙醇(5.62g，46.0mmol)、EDCI(8.82g，46.0mmol)和DMAP(0.561g，4.60mmol)在CH2Cl2(100mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。将溶剂浓缩后，残余物用H2O-乙酸乙酯进行分配。分离各相，水层用乙酸乙酯反萃取(2次)。合并的有机相经洗涤(H2O，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-20％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(8.38g，92％，无色油状物)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.32-7.23(m，7H)，7.10-7.04(m，2)，5.85(q，J＝6.5Hz，1H)，3.71(s，2H)，1.48(d，J＝6.5Hz，3H)。
步骤2：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：在0℃下，向2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙基酯(5.00g，19.4mmol)的THF(1200mL)溶液中加入DBU(6.19g，40.7mmol)，在使溶液升温至室温的同时搅拌30分钟。然后使溶液冷却至-78℃后，加入CBr4(13.5g，40.7mmol)的THF(100mL)溶液，使混合物升温至-10℃，并在该温度下搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液猝灭后，分离各层。水层用乙酸乙酯反萃取(2次)，合并的有机相经洗涤(H2O，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。向残余物中加入哌啶(5.73mL，58.1mmol)，将溶液在室温下搅拌24小时。然后真空浓缩挥发物，残余物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-30％乙醚-己烷)，得到纯的非对映体混合物(根据1H NMR判断，其比率为2∶1)(2.07g，31％，黄色油状物)以及未反应的原料(2.53g，51％)。非对映体混合物进一步经色谱法纯化(Biotage/0-10％乙醚-甲苯)，得到标题化合物(0.737g，11％，无色油状物)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.52(ddd，J＝9.4，7.6，1.8Hz，1H)，7.33-7.40(m，1)，7.23-7.23(m，4H)，7.02-7.23(m，4H)，5.86(q，J＝6.6Hz，1H)，4.45(s，1H)，2.39-2.45(m，4H)，1.52-1.58(m，4H)，1.40-1.42(m，1H)，1.38(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS：对于C21H24FNO2分析计算值：341；实测值：342(M+H)+。
步骤3：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸：将(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.737g，2.16mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.070g)在乙醇(30mL)中的混合物在室温和大气压(H2气囊)下氢化2小时。溶液然后用氩气吹扫，通过硅藻土
Figure BPA00001245294300541
过滤后，真空浓缩。这可得到标题化合物(0.503g，98％，无色固体)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.65(ddd，J＝9.1，7.6，1.5Hz，1H)，7.47-7.53(m，1H)，7.21-7.30(m，2H)，3.07-3.13(m，4H)，1.84(br s，4H)，1.62(br s，2H)。LCMS：对于C13H16FNO2分析计算值：237；实测值：238(M+H)+。
Figure BPA00001245294300542
步骤1：(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯：向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙基酯(1.50g，4.70mmol)的THF(25mL)溶液中依次加入三乙胺(1.31mL，9.42mmol)和四丁基碘化铵(0.347g，0.94mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟后，加入4-苯基-4-羟基哌啶(1.00g，5.64mmol)的THF(5mL)溶液。将混合物搅拌16小时后，用乙酸乙酯(100mL)稀释，洗涤(H2O x 2，盐水)，干燥(MgSO4)，过滤后浓缩。残余物在硅胶柱上进行纯化(0-60％乙酸乙酯-己烷)，得到非对映体的约2∶1混合物，用1H NMR判断。这些异构体用超临界流体色谱法进行分离(Chiralcel OJ-H，30 x 250mm；20％乙醇，在CO2、35℃下)，先得到标题化合物的(R)-异构体(0.534g，27％，黄色油状物)，然后得到相应的(S)-异构体(0.271g，14％，同样为黄色油状物)。(S，R)-异构体：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.55-7.47(m，4H)，7.44-7.25(m，10H)，7.25-7.17(m，1H)，5.88(q，J＝6.6Hz，1H)，4.12(s，1H)，2.82-2.72(m，1H)，2.64(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.58-2.52(m，1H)，2.40(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.20(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，2.10(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，1.72-1.57(m，2H)，1.53(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS：对于C27H29NO3分析计算值：415；实测值：416(M+H)+；(S，S)-异构体：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.55-7.48(m，2H)，7.45-7.39(m，2H)，7.38-7.30(m，5H)，7.25-7.13(m，4H)，7.08-7.00(m，2H)，5.88(q，J＝6.6Hz，1H)，4.12(s，1H)，2.95-2.85(m，1H)，2.68(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.42(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.25(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，2.12(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，1.73(dd，J＝13.6，3.0Hz，1H)，1.64(dd，J＝13.6，3.0Hz，1H)，1.40(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS：对于C27H29NO3分析计算值：415；实测值：416(M+H)+。
下列酯采用Cap-17合成中的步骤1的类似方式制备。
Figure BPA00001245294300561
用于测定中间体17b-17d的保留时间的手性SFC条件
条件1
柱：Chiralpak AD-H柱，4.6 X 250mm，5μm
溶剂：90％CO2-10％甲醇(含有0.1％DEA)
温度：35℃
压力：150巴
流速：2.0mL/min.
220nm下UV监测
注射：1.0mg/3mL甲醇
条件2
柱：Chiralcel OD-H柱，4.6 X 250mm，5μm
溶剂：90％CO2-10％甲醇(含有0.1％DEA)
温度：35℃
压力：150巴
流速：2.0mL/min.
220nm下UV监测
注射：1.0mg/mL甲醇
Cap-17，步骤2：(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.350g，0.84mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。随后真空除去挥发物，残余物用反相制备型HPLC纯化(Primesphere C-18，20 x 100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)，得到标题化合物(为TFA盐)(0.230g，88％，白色固体)。LCMS：对于C19H21NO3分析计算值：311；实测值：312(M+H)+。
下列羧酸按同样方式制备：
Figure BPA00001245294300571
Figure BPA00001245294300581
用于测定Cap-17a至Cap-17d的保留时间的LCMS条件
条件1
柱：Phenomenex-Luna 4.6 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝4min
流速＝4mL/min
波长＝220
溶剂A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA
溶剂B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA
条件2
柱：Waters-Sunfire 4.6 X 50mm S5
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
流速＝4mL/min
波长＝220
溶剂A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA
溶剂B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA
条件3
柱：Phenomenex 10μ3.0 X 50mm
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
流速＝4mL/min
波长＝220
溶剂A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA
溶剂B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA
Figure BPA00001245294300591
步骤1：(R，S)-2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸乙酯：在氩气氛、0℃下，向4-吡啶基乙酸乙酯(1.00g，6.05mmol)的无水THF(150mL)溶液中加入DBU(0.99mL，6.66mmol)。使反应混合物在30分钟内升温至室温后，冷却至-78℃。向该混合物中加入CBr4(2.21g，6.66mmol)，在-78℃下继续搅拌2小时。然后反应混合物用NH4Cl饱和水溶液猝灭，分离各相。有机相经洗涤(盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。所得黄色油状物立即用快速色谱法纯化(SiO2/己烷-乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物(1.40g，95％，略微不稳定的黄色油状物)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.62(dd，J＝4.6，1.8Hz，2H)，7.45(dd，J＝4.6，1.8Hz，2H)，5.24(s，1H)，4.21-4.29(m，2H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H)。LCMS：对于C9H10BrNO2分析计算值：242，244；实测值：243，245(M+H)+。
步骤2：(R，S)-2-(4-吡啶基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸乙酯：在室温下，向(R，S)-2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸乙酯(1.40g，8.48mmol)的DMF(10mL)溶液中加入二甲胺(2M的THF溶液，8.5mL，17.0mmol)。反应完成后(用TLC判断)，真空除去挥发物，残余物用快速色谱法纯化(Biotage，40+M SiO2柱；50％-100％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(0.539g，31％，浅黄色油状物)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.58(d，J＝6.0Hz，2H)，7.36(d，J＝6.0Hz，2H)，4.17(m，2H)，3.92(s，1H)，2.27(s，6H)，1.22(t，J＝7.0Hz)。LCMS：对于C11H16N2O2分析计算值：208；实测值：209(M+H)+。
步骤3：(R，S)-2-(4-吡啶基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸：在室温下，向(R，S)-2-(4-吡啶基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.200g，0.960mmol)在THF-甲醇-H2O(1∶1∶1，6mL)中混合物的溶液中加入LiOH粉(0.120g，4.99mmol)。将溶液搅拌3小时后，用1N HCl酸化至pH 6。水相用乙酸乙酯洗涤后，冻干得到标题化合物的二盐酸盐，为黄色固体(含有LiCl)。产物照原样用于后续步骤。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.49(d，J＝5.7Hz，2H)，7.34(d，J＝5.7Hz，2H)，3.56(s，1H)，2.21(s，6H)。
采用上述方法的类似方式制备下列实施例：
Figure BPA00001245294300611
Figure BPA00001245294300621
Figure BPA00001245294300622
步骤1：(R，S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)-乙酸乙酯：用氩气泡流鼓泡使N，N-二甲基氨基乙酸乙酯(0.462g，3.54mmol)、K3PO4(1.90g，8.95mmol)、Pd(t-Bu3P)2(0.090g，0.176mmol)和甲苯(10mL)的混合物脱气15分钟。然后将反应混合物在100℃下加热12小时，之后冷却至室温后倒入H2O中。混合物用乙酸乙酯萃取(2次)，合并的有机相经洗涤(H2O，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。残余物先用反相制备型HPLC纯化(Primesphere C-18，30 x 100mm；CH3CN-H2O-5mM NH4OAc)，然后用快速色谱法纯化(SiO2/己烷-乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物(0.128g，17％，橙色油状物)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(d，J＝2.0Hz，1H)，8.32(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03-8.01(m，2H)，7.77(ddd，J＝8.3，6.8，1.5Hz，1H)，7.62(ddd，J＝8.3，6.8，1.5Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.13(m，2H)，2.22(s，6H)，1.15(t，J＝7.0Hz，3H)。LCMS：对于C15H18N2O2分析计算值：258；实测值：259(M+H)+。
步骤2：(R，S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸：将(R，S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.122g，0.472mmol)和6M HCl(3mL)的混合物在100℃下加热12小时。真空除去溶剂后，得到标题化合物的二盐酸盐(0.169g，＞100％，浅黄色泡沫状物)。该含杂质的产物无需进一步纯化便可用于后续步骤。LCMS：对于C13H14N2O2分析计算值：230；实测值：231(M+H)+。
Figure BPA00001245294300631
步骤1：(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯乙基)酯和(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯乙基)酯：向(RS)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(2.60g，13.19mmol)、DMAP(0.209g，1.71mmol)和(S)-1-苯基乙醇(2.09g，17.15mmol)在CH2Cl2(40mL)中的混合物中加入EDCI(3.29g，17.15mmol)，将混合物在室温下搅拌12小时。然后真空除去溶剂，残余物用乙酸乙酯-H2O进行分配。分离各层后，水层用乙酸乙酯反萃取(2次)，合并的有机相经洗涤(H2O，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-50％乙醚-己烷)。然后，所得纯的非对映体混合物用反相制备型HPLC分离(Primesphere C-18，30 x 100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)，先得到(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯乙基酯(0.501g，13％)，然后得到(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)-乙酸(S)-1-苯乙基酯(0.727g，18％)，均为其TFA盐。(S，R)-异构体：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.65-7.70(m，1H)，7.55-7.60(ddd，J＝9.4，8.1，1.5Hz，1H)，7.36-7.41(m，2H)，7.28-7.34(m，5H)，6.04(q，J＝6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.84(s，6H)，1.43(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS：对于C18H20FNO2分析计算值：301；实测值：302(M+H)+；(S，S)-异构体：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.58-7.63(m，1H)，7.18-7.31(m，6H)，7.00(dd，J＝8.5，1.5Hz，2H)，6.02(q，J＝6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.88(s，6H)，1.54(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS：对于C18H20FNO2分析计算值：301；实测值：302(M+H)+。
步骤2：(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸：在大气压(H2气囊)、室温下，使(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯乙基)酯的TFA盐(1.25g，3.01mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.125g)在乙醇(30mL)中的混合物氢化4小时。溶液然后用氩气吹扫，通过硅藻土
Figure BPA00001245294300641
过滤后，真空浓缩。这便得到标题化合物(0.503g，98％，无色固体)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.53-7.63(m，2H)，7.33-7.38(m，2H)，5.36(s，1H)，2.86(s，6H)。LCMS：对于C10H12FNO2分析计算值：197；实测值：198(M+H)+。
S-异构体可按类似方式由(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯乙基)酯的TFA盐获得。
Figure BPA00001245294300642
在大气压(H2气囊)、室温下，使(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(0.300g，1.62mmol)、甲醛(35％水溶液，0.80mL，3.23mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.050g)的混合物氢化4小时。溶液然后用氩气吹扫，通过硅藻土
Figure BPA00001245294300643
过滤后，真空浓缩。残余物用反相制备型HPLC纯化(Primesphere C-18，30 x 100mm；CH3CN-H2O-0.1％TFA)，得到标题化合物(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸的TFA盐(0.290g，55％，无色油状物)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.59-7.65(m，2H)，7.45-7.53(m，2H)，5.40(s，1H)，2.87(s，6H)。LCMS：对于C10H12ClNO2分析计算值：213，215；实测值：214，216(M+H)+。
Figure BPA00001245294300651
向冰冷的(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(1.00g，5.38mmol)和NaOH(0.862g，21.6mmol)在H2O(5.5mL)的溶液中滴加氯甲酸甲酯(1.00mL，13.5mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时后，加入浓HCl(2.5mL)将其酸化。混合物用乙酸乙酯萃取(2次)，合并的有机相经洗涤(H2O，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到标题化合物(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸(1.31g，96％，橙黄色泡沫状物)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.39-7.43(m，2H)，7.29-7.31(m，2H)，5.69(s，1H)，3.65(s，3H)。LCMS：对于C10H10ClNO4分析计算值：243，245；实测值：244，246(M+H)+。
Figure BPA00001245294300652
向2-(2-(氯甲基)苯基)乙酸(2.00g，10.8mmol)的THF(20mL)悬浮液中加入吗啉(1.89g，21.7mmol)，将溶液在室温下搅拌3小时。然后反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O萃取(2次)。将水相冻干后，残余物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-10％甲醇-CH2Cl2)，得到标题化合物2-(2-(吗啉代甲基)苯基)乙酸(2.22g，87％，无色固体)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.37-7.44(m，3H)，7.29-7.33(m，1H)，4.24(s，2H)，3.83(br s，4H)，3.68(s，2H)，3.14(br s，4H)。LCMS：对于C13H17NO3分析计算值：235；实测值：236(M+H)+。
同样采用Cap-41中所述方法制备下列Caps：
Figure BPA00001245294300662
将HMDS(1.85mL，8.77mmol)加到(R)-2-氨基-2-苯基乙酸对甲苯磺酸盐(2.83g，8.77mmol)的CH2Cl2(10mL)的悬浮液中，将混合物在室温下搅拌30分钟。一次性加入异氰酸甲酯(0.5g，8.77mmol)，继续搅拌30分钟。反应物通过加入H2O(5mL)猝灭，将所得沉淀物过滤，用H2O和正己烷洗涤后，真空干燥。回收得到(R)-2-(3-甲基脲基)-2-苯基乙酸(1.5g；82％)，为白色固体，无需进一步纯化便可使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 2.54(d，J＝4.88Hz，3H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)5.95(q，J＝4.48Hz，1H)6.66(d，J＝7.93Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.67(s，1H)。LCMS：对于C10H12N2O3分析计算值：208.08；实测值：209.121(M+H)+；HPLC Phenomenex C-183.0×46mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.38min，均一性指数90％。
Figure BPA00001245294300671
所需的产物按照对Cap-45中所述方法制备。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.96(t，J＝7.17Hz，3H)2.94-3.05(m，2H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)6.05(t，J＝5.19Hz，1H)6.60(d，J＝7.63Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.68(s，1H)。LCMS：对于C11H14N2O3分析计算值：222.10；实测值：209.121(M+H)+。
HPLC XTERRA C-183.0×506mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H3PO4，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H3PO4，RT＝0.87min，均一性指数90％。
Figure BPA00001245294300681
步骤1：(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯：在10分钟内，向(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯(1.0g，4.10mmol)和Hunig碱(1.79mL，10.25mmol)的DMF(40mL)的搅拌溶液中滴加二甲氨基甲酰氯(0.38mL，4.18mmol)。在室温下搅拌3小时后，减压浓缩反应物，将所得残余物溶于乙酸乙酯。有机层用H2O、1N HCl水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后减压浓缩。得到(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86g；75％，白色固体)，无需进一步纯化便可使用。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.33(s，9H)2.82(s，6H)5.17(d，J＝7.63Hz，1H)6.55(d，J＝7.32Hz，1H)7.24-7.41(m，5H)。LCMS：对于C15H22N2O3分析计算值：278.16；实测值：279.23(M+H)+；HPLCPhenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％B，4分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.26min，均一性指数97％。
步骤2：(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸：向((R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86g，3.10mmol)的CH2Cl2(250mL)的搅拌溶液中滴加TFA(15mL)，将所得溶液在室温下搅拌3小时。然后用EtOAC∶己烷(5∶20)的混合物从溶液中析出所需要的化合物，滤出后减压干燥。分离出(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸(0.59g，86％，白色固体)，无需进一步纯化便可使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 2.82(s，6H)5.22(d，J＝7.32Hz，1H)6.58(d，J＝7.32Hz，1H)7.28(t，J＝7.17Hz，1H)7.33(t，J＝7.32Hz，2H)7.38-7.43(m，2H)12.65(s，1H)。LCMS：对于C11H14N2O3分析计算值：222.24；实测值：223.21(M+H)+。HPLC XTERRA C-183.0×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H3PO4，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H3PO4，RT＝0.75min，均一性指数93％。
步骤1：(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯：在10分钟内，向(R)-2-氨基-2-苯基乙酸盐酸盐(1.0g，4.10mmol)和Hunig碱(1.0mL，6.15mmol)的DMF(15mL)的搅拌溶液中滴加异氰酸环戊酯(0.46mL，4.10mmol)，在室温下搅拌3小时后，减压浓缩反应物，将所得残余物溶于乙酸乙酯。有机层用H2O和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后减压浓缩，得到(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.32g；100％，不透明油状物)，无需进一步纯化便可使用。1H NMR(500MHz，CD3Cl-D)δppm 1.50-1.57(m，2H)1.58-1.66(m，2H)1.87-1.97(m，2H)3.89-3.98(m，1H)5.37(s，1H)7.26-7.38(m，5H)。LCMS：对于C18H26N2O3分析计算值：318.19；实测值：319.21(M+H)+；HPLCXTERRA C-183.0×50mm，0-100％B，4分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.82min，均一性指数96％。
步骤2：(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.31g，4.10mmol)的CH2Cl2(25mL)的搅拌溶液中滴加TFA(4mL)和三乙基硅烷(1.64mL；10.3mmol)，将所得溶液在室温下搅拌6小时。减压除去挥发性成分后，粗产物在乙酸乙酯/戊烷中重结晶，得到(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸(0.69g，64％，白色固体)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.17-1.35(m，2H)1.42-1.52(m，2H)1.53-1.64(m，2H)1.67-1.80(m，2H)3.75-3.89(m，1H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)6.12(d，J＝7.32Hz，1H)6.48(d，J＝7.93Hz，1H)7.24-7.40(m，5H)12.73(s，1H)。LCMS：对于C14H18N2O3分析计算值：262.31；实测值：263.15(M+H)+。HPLCXTERRA C-183.0×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H3PO4，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H3PO4，RT＝1.24min，均一性指数100％。
向2-(苄基氨基)乙酸(2.0g，12.1mmol)的甲酸(91mL)的搅拌溶液中加入甲醛(6.94mL，93.2mmol)。在70℃下经过5小时后，将反应混合物减压浓缩至20mL后，白色固体析出。过滤后，收集母液，再次减压浓缩，得到粗产物。用反相制备型HPLC纯化(Xterra 30 X 100mm，在220nm下检测，流速35mL/min，0-35％B，8分钟内；A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA)，得到标题化合物2-(苄基(甲基)-氨基)乙酸的TFA盐(723mg，33％，无色蜡状物)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 2.75(s，3H)4.04(s，2H)4.34(s，2H)7.29-7.68(m，5H)。LCMS：对于C10H13NO2分析计算值：179.22；实测值：180.20(M+H)+。
Figure BPA00001245294300702
向3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸(0.50g，3.81mmol)与水(30mL)的搅拌溶液中加入K2CO3(2.63g，19.1mmol)和苄基氯(1.32g，11.4mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，水层经减压浓缩后，得到粗产物，将其用反相制备型HPLC纯化(Xterra 30 x 100mm，在220nm下检测，流速40mL/min，20-80％B，6分钟内；A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA)，得到2-(苄基(甲基)氨基)-3-甲基丁酸的TFA盐(126mg，19％，无色蜡状物)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.98(d，3H)1.07(d，3H)2.33-2.48(m，1H)2.54-2.78(m，3H)3.69(s，1H)4.24(s，2H)7.29-7.65(m，5H)。LCMS：对于C13H19NO2分析计算值：221.30；实测值：222.28(M+H)+。
Figure BPA00001245294300711
将Na2CO3(1.83g，17.2mmol)加到L-缬氨酸(3.9g，33.29mmol)的NaOH(33mL 1M/H2O，33mmol)溶液中，所得溶液用冰水浴冷却。在15分钟内滴加氯甲酸甲酯(2.8mL，36.1mmol)，移开冷却浴后，将反应混合物在环境温度下搅拌3.25小时。反应混合物用乙醚(50mL，3x)洗涤，水相用冰水浴冷却，用浓HCl酸化至pH 1-2的范围后，用CH2Cl2(50mL，3x)萃取。有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到Cap-51(6g，白色固体)。主要旋转异构体的1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)：12.54(s，1H)，7.33(d，J＝8.6，1H)，3.84(dd，J＝8.4，6.0，1H)，3.54(s，3H)，2.03(m，1H)，0.87(m，6H)。HRMS：对于[M+H]+C7H14NO4分析计算值：176.0923；实测值：176.0922
Figure BPA00001245294300712
按照所述用于合成Cap-51的方法由L-丙氨酸合成Cap-52。出于表征目的，一部分粗产物用反相HPLC纯化(H2O/MeOH/TFA)，得到Cap-52，为粘性无色油状物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)：12.49(br s，1H)，7.43(d，J＝7.3，0.88H)，7.09(表观br s，0.12H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J＝7.3，3H)。
按照用于合成Cap-51所述的方法，由合适的原料制备Cap-53至Cap-64，若有任何改变就会注明。
Figure BPA00001245294300721
Figure BPA00001245294300731
Figure BPA00001245294300741
Figure BPA00001245294300742
在5分钟内，将氯甲酸甲酯(0.65mL，8.39mmol)滴加到冷却(冰-水)的Na2CO3(0.449g，4.23mmol)、NaOH(8.2mL 1M/H2O，8.2mmol)和(S)-3-羟基-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(1.04g，7.81mmol)的混合物中。搅拌反应混合物45分钟后，移开冷却浴，再继续搅拌3.75小时。反应混合物用CH2Cl2洗涤，水相用冰水浴冷却后，用浓HCl酸化至pH 1-2的范围。真空除去挥发性成分，将残余物溶于2∶1MeOH/CH2Cl2的混合物(15mL)，过滤并使滤液旋转蒸发，得到Cap-65(1.236g，半粘性白色泡沫状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ6.94(d，J＝8.5，0.9H)，6.53(br s，0.1H)，3.89(d，J＝8.8，1H)，2.94(s，3H)，1.15(s，3H)，1.13(s，3H)。
采用合成Cap-65的所述方法，由合适的可市售获得的原料制备Cap-66和Cap-67。
Figure BPA00001245294300751
1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.58(br s，1H)，7.07(d，J＝8.3，0.13H)，6.81(d，J＝8.8，0.67H)，4.10-4.02(m，1.15H)，3.91(dd，J＝9.1，3.5，0.85H)，3.56(s，3H)，1.09(d，J＝6.2，3H)。[注意：仅记录NH的主要信号]。
Figure BPA00001245294300752
1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：12.51(br s，1H)，7.25(d，J＝8.4，0.75H)，7.12(br d，J＝0.4，0.05H)，6.86(br s，0.08H)，3.95-3.85(m，2H)，3.54(s，3H)，1.08(d，J＝6.3，3H)。[注意：仅记录NH的主要信号]。
Cap-68
Figure BPA00001245294300761
将氯甲酸甲酯(0.38mL，4.9mmol)滴加到1N NaOH(水溶液)(9.0mL，9.0mmol)、1M NaHCO3(水溶液)(9.0mL，9.0mol)、L-天冬氨酸β-苄酯(1.0g，4.5mmol)和二烷(9mL)的混合物中。将反应混合物在环境条件下搅拌3小时后，用乙酸乙酯(50mL，3x)洗涤。水层用12NHCl酸化至pH～1-2后，用乙酸乙酯(3 x 50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到Cap-68(1.37g；浅黄色油状物，质量超过理论收率，产物无需进一步纯化便可使用)。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)：δ12.88(br s，1H)，7.55(d，J＝8.5，1H)，7.40-7.32(m，5H)，5.13(d，J＝12.8，1H)，5.10(d，J＝12.9，1H)，4.42-4.38(m，1H)，3.55(s，3H)，2.87(dd，J＝16.2，5.5，1H)，2.71(dd，J＝16.2，8.3，1H)。LC(条件2)：RT＝1.90min；LC/MS：对于[M+H]+C13H16NO6分析计算值：282.10；实测值：282.12。
Figure BPA00001245294300763
将NaCNBH3(2.416g，36.5mmol)分批加入冰冷(～15℃)的丙氨酸(1.338g，15.0mmol)的水(17mL)/MeOH(10mL)溶液中。几分钟后，在4分钟内滴加乙醛(4.0mL，71.3mmol)，移开冷却浴，将反应混合物在环境条件下搅拌6小时。再次加入乙醛(4.0mL)后，搅拌反应物2小时。将浓HCl慢慢加到反应混合物中，直到pH达到～1.5后，将所得混合物在40℃下加热1小时。真空除去大部分挥发性成分，残余物用
Figure BPA00001245294300764
50WX8-100离子交换树脂纯化(柱用水洗涤，化合物用由18mL NH4OH和282mL水混合而制得的稀NH4OH洗脱)，得到Cap-69(2.0g，灰白色吸湿性软固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ3.44(q，J＝7.1，1H)，2.99-2.90(m，2H)，2.89-2.80(m，2H)，1.23(d，J＝7.1，3H)，1.13(t，J＝7.3，6H)。
按照所述用于合成Cap-69的方法，采用合适的原料制备Cap-70至Cap-74x。
Figure BPA00001245294300781
Figure BPA00001245294300782
将NaBH3CN(1.6g，25.5mmol)加入到冷却(冰/水浴)的H-D-Ser-OBzl HCl(2.0g，8.6mmol)的水(25mL)/甲醇(15mL)溶液中。在5分钟内滴加乙醛(1.5mL，12.5mmol)后，移开冷却浴，将反应混合物在环境条件下搅拌2小时。小心地用12N HCl猝灭反应物后，真空浓缩。将残余物溶于水，用反相HPLC纯化(MeOH/H2O/TFA)，得到(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸苄酯的TFA盐(1.9g，粘性无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，500MHz)：δ9.73(br s，1H)，7.52-7.36(m，5H)，5.32(d，J＝12.2，1H)，5.27(d，J＝12.5，1H)，4.54-4.32(m，1H)，4.05-3.97(m，2H)，3.43-3.21(m，4H)，1.23(t，J＝7.2，6H)。LC/MS(条件2)：RT＝1.38min；LC/MS：对于[M+H]+C14H22NO3分析计算值：252.16；实测值：252.19.
Cap-75
将NaH(0.0727g，1.82mmol，60％)加到冷却(冰-水)的上文制备的(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸苄酯的TFA盐(0.3019g，0.8264mmol)的THF(3.0mL)溶液中，将混合物搅拌15分钟。加入甲基碘(56μL，0.90mmol)，在冰水浴中融化至环境条件的同时，继续搅拌18小时。反应物用水猝灭后，加到MeOH预处理的MCX(6g)柱体上，用甲醇洗涤后，化合物用2N NH3/甲醇洗脱。真空除去挥发性成分，得到Cap-75(100mg，被(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸污染，黄色半固体)。产物照原样使用无需进一步纯化。
Figure BPA00001245294300791
将NaCNBH3(1.60g，24.2mmol)分批加到冰冷(～15℃)的(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(2.17g，9.94mmol)的水/MeOH(各为12mL)溶液中。几分钟后，在2分钟内滴加乙醛(2.7mL，48.1mmol)，移开冷却浴，将反应混合物在环境条件下搅拌3.5小时。再次加入乙醛(2.7mL，48.1mmol)后，搅拌反应物20.5小时。真空除去大部分MeOH成分，残余混合物用浓HCl处理，直到其pH达到～1.0后，在40℃下加热2小时。真空除去挥发性成分，残余物用4M HCl/二烷(20mL)处理，并在环境条件下搅拌7.5小时。真空除去挥发性成分，残余物用
Figure BPA00001245294300793
50WX8-100离子交换树脂纯化(柱用水洗涤，化合物用由18mL NH4OH和282mL水制备的稀NH4OH洗脱)，得到中间体(S)-2-氨基-4-(二乙基氨基)丁酸(1.73g，灰白色固体)。
在11分钟内，将氯甲酸甲酯(0.36mL，4.65mmol)滴加到冷却(冰-水)的Na2CO3(0.243g，2.29mmol)、NaOH(4.6mL 1M/H2O，4.6mmol)和上述产物(802.4mg)的混合物中。搅拌反应混合物55分钟后，移开冷却浴，再继续搅拌5.25小时。反应混合物用等体积水稀释，用CH2Cl2(30mL，2x)洗涤，水相用冰水浴冷却，用浓HCl酸化至pH 2的范围。然后真空除去挥发性成分，粗产物用MCX树脂进行游离碱化(free-based)(6.0g；柱用水洗涤，样品用2.0M NH3/MeOH洗脱)，得到含杂质的Cap-76(704mg，灰白色固体)。1H NMR(MeOH-d4，δ＝3.29ppm，400MHz)：δ3.99(dd，J＝7.5，4.7，1H)，3.62(s，3H)，3.25-3.06(m，6H)，2.18-2.09(m，1H)，2.04-1.96(m，1H)，1.28(t，J＝7.3，6H)。LC/MS：对于[M+H]+C10H21N2O4分析计算值：233.15；实测值：233.24。
Figure BPA00001245294300801
如下进行Cap-77的合成：按对照Cap-7所述方法，采用7-氮杂双环[2.2.1]庚烷用于替换SN2步骤，并且通过采用下列条件，对中间体2-(7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基)-2-苯基乙酸苄酯进行对映体分离：将中间体(303.7mg)溶于乙醇，将所得溶液注入手性HPLC柱(ChiracelAD-H柱，30 x 250mm，5μm)上，在35℃温度下，用90％CO2-10％EtOH按70mL/min洗脱，得到124.5mg对映体-1和133.8mg对映体-2。这些苄酯按照Cap-7的制备法进行氢解，得到Cap-77：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.55(m，2H)，7.38-7.30(m，3H)，4.16(s，1H)，3.54(表观br s，2H)，2.08-1.88(m，4H)，1.57-1.46(m，4H)。LC(条件1)：RT＝0.67min；LC/MS：对于[M+H]+C14H18BrNO2分析计算值：232.13；实测值：232.18。HRMS：对于[M+H]+C14H18BrNO2分析计算值：232.1338；实测值：232.1340。
Figure BPA00001245294300802
将NaCNBH3(0.5828g，9.27mmol)加到(R)-2-(乙氨基)-2-苯基乙酸HCl盐(Cap-3合成中的中间体；0.9923mg，4.60mmol)和(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(1.640g，9.40mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中，半不均匀混合物用油浴在50℃下加热20小时。再次加入(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(150mg，0.86mmol)和NaCNBH3(52mg，0.827mmol)，再加热反应混合物3.5小时。然后将其冷却至环境温度，用浓HCl酸化至约pH 2的范围后，将混合物过滤后进行旋转蒸发。将所得粗产物溶于i-PrOH(6mL)并加热进行溶解，滤出不溶解部分后，真空浓缩滤液。约1/3的所得粗产物用反相HPLC纯化(H2O/MeOH/TFA)，得到Cap-78的TFA盐(353mg，粘性无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz；在D2O交换之后)：δ7.56-7.49(m，5H)，5.35(S，1H)，3.35(m，1H)，3.06(表观br s，1H)，2.66(m，1H)，1.26(t，J＝7.3，3H)，0.92(m，1H)，0.83-0.44(m，3H)。LC(条件1)：RT＝0.64min；LC/MS：对于[M+H]+C13H18NO2分析计算值：220.13；实测值：220.21。HRMS：对于[M+H]+C13H18NO2分析计算值：220.1338；实测值：220.1343。
Figure BPA00001245294300811
将臭氧鼓泡通入冷却(-78℃)的Cap-55(369mg，2.13mmol)的CH2Cl2(5.0mL)溶液中约50分钟，直到反应混合物出现浅蓝色。加入Me2S(移液管10滴)，搅拌反应混合物35分钟。-78℃浴用-10℃浴代之，再继续搅拌30分钟后，真空除去挥发性成分，得到粘性无色油状物。
将NaBH3CN(149mg，2.25mmol)加到上述粗产物和吗啉(500μL，5.72mmol)的MeOH(5.0mL)溶液中，将混合物在环境条件下搅拌4小时。冷却至冰水温度，用浓HCl处理至其pH至～2.0后，搅拌2.5小时。真空除去挥发性成分，残余物用MCX树脂(MeOH洗涤；2.0N NH3/MeOH洗脱)结合反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)进行纯化，得到Cap-79，其中含有含量不明的吗啉。
为了消耗掉吗啉污染物，将上述产物溶于CH2Cl2(1.5mL)，依次用Et3N(0.27mL，1.94mmol)和乙酸酐(0.10mL，1.06mmol)处理，并在环境条件下搅拌18小时。加入THF(1.0mL)和H2O(0.5mL)，继续搅拌1.5小时。真空除去挥发性成分后，使所得残余物通过MCX树脂(MeOH洗涤；2.0N NH3/MeOH洗脱)，得到含杂质的Cap-79，为粘性褐色油状物，无需进一步纯化便可用于下一步骤。
Figure BPA00001245294300821
在15分钟内，将SOCl2(6.60mL，90.5mmol)滴加到冷却(冰-水)的(S)-3-氨基-4-(苄氧基)-4-氧代丁酸(10.04g，44.98mmol)和MeOH(300mL)的混合物中，移开冷却浴后，将反应混合物在环境条件下搅拌29小时。真空除去大部分挥发性成分，小心地使残余物在EtOAc(150mL)和饱和NaHCO3溶液之间分配。水相用EtOAc(150mL，2x)萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到(S)-2-氨基琥珀酸1-苄酯4-甲酯(9.706g，无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.40-7.32(m，5H)，5.11(s，2H)，3.72(表观t，J＝6.6，1H)，3.55(s，3H)，2.68(dd，J＝15.9，6.3，1H)，2.58(dd，J＝15.9，6.8，1H)，1.96(s，2H)。LC(条件1)：RT＝0.90min；LC/MS：对于[M+H]+C12H16NO4分析计算值：238.11；实测值：238.22。
在1分钟内，将Pb(NO3)2(6.06g，18.3mmol)加到(S)-2-氨基琥珀酸1-苄酯4-甲酯(4.50g，19.0mmol)、9-溴-9-苯基-9H-芴(6.44g，20.0mmol)和Et3N(3.0mL，21.5mmol)的CH2Cl2(80mL)溶液中，将不均匀混合物在环境条件下搅拌48小时。将混合物过滤，滤液用MgSO4处理后再次过滤，浓缩最终的滤液。将所得粗产物进行Biotage纯化(350g硅胶，CH2Cl2洗脱)，得到(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-苄酯4-甲酯(7.93g，十分粘稠的无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.82(m，2H)，7.39-7.13(m，16H)，4.71(d，J＝12.4，1H)，4.51(d，J＝12.6，1H)，3.78(d，J＝9.1，NH)，3.50(s，3H)，2.99(m，1H)，2.50-2.41(m，2H，与溶剂有部分重叠)。LC(条件1)：RT＝2.16min；LC/MS：对于[M+H]+C31H28NO4分析计算值：478.20；实测值：478.19。
在10分钟内，将LiHMDS(9.2mL 1.0M/THF，9.2mmol)滴加到冷却(-78℃)的(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-苄酯4-甲酯(3.907g，8.18mmol)的THF(50mL)溶液中，并搅拌～1小时。在8分钟内将MeI(0.57mL，9.2mmol)滴加到混合物中，然后在使冷却浴融化至室温的同时继续搅拌16.5小时。用饱和NH4Cl溶液(5mL)猝灭后，真空除去大部分有机成分，使残余物在CH2Cl2(100mL)和水(40mL)之间分配。有机层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，所得粗产物用Biotage纯化(350g硅胶；25％EtOAc/己烷)，得到3.65g 3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-苄酯4-甲酯的2S/3S和2S/3R非对映体混合物，比率～1.0∶0.65(1H NMR)。此时未确定主要异构体的立体化学结构，混合物无需分离便可进行下一步骤。部分1H NMR数据(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：主要非对映体，δ4.39(d，J＝12.3，CH2的1H)，3.33(s，3H，与H2O信号重叠)，3.50(d，J＝10.9，NH)，1.13(d，J＝7.1，3H)；次要非对映体，δ4.27(d，J＝12.3，CH2的1H)，3.76(d，J＝10.9，NH)，3.64(s，3H)，0.77(d，J＝7.0，3H)。LC(条件1)：RT＝2.19min；LC/MS：对于[M+H]+C32H30NO4分析计算值：492.22；实测值：492.15。
在10分钟内，将二异丁基氢化铝(20.57mL 1.0M的己烷溶液，20.57mmol)滴加到冷却(-78℃)的上述制备的(2S)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸1-苄酯4-甲酯(3.37g，6.86mmol)的THF(120mL)溶液中，在-78℃下搅拌20小时。反应混合物从冷却浴取出后，快速倒入搅拌下的～1M H3PO4/H2O(250mL)中，混合物用乙醚(100mL，2x)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。制备粗产物的硅胶筛目(mesh)，并进行色谱法处理(25％EtOAc/己烷；重力洗脱)，得到1.1g(2S，3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯(被苯甲醇污染，粘性无色油状物)，以及(2S，3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯，含有(2S，3R)立体异构体杂质。后一样品用相同柱色谱法纯化条件再进行纯化，得到750mg纯产物，为白色泡沫状物。[注意：在上述条件下，(2S，3S)异构体先于(2S，3R)异构体洗脱出来]。(2S，3S)异构体：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：7.81(m，2H)，7.39-7.08(m，16H)，4.67(d，J＝12.3，1H)，4.43(d，J＝12.4，1H)，4.21(表观t，J＝5.2，OH)，3.22(d，J＝10.1，NH)，3.17(m，1H)，3.08(m，1H)，～2.5(m，1H，与溶剂信号重叠)，1.58(m，1H)，0.88(d，J＝6.8，3H)。LC(条件1)：RT＝2.00min；LC/MS：对于[M+H]+C31H30NO3分析计算值：464.45；实测值：464.22。(2S，3R)异构体：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：7.81(d，J＝7.5，2H)，7.39-7.10(m，16H)，4.63(d，J＝12.1，1H)，4.50(表观t，J＝4.9，1H)，4.32(d，J＝12.1，1H)，3.59-3.53(m，2H)，3.23(m，1H)，2.44(dd，J＝9.0，8.3，1H)，1.70(m，1H)，0.57(d，J＝6.8，3H)。LC(条件1)：RT＝1.92min；LC/MS：对于[M+H]+C31H30NO3分析计算值：464.45；实测值：464.52。
DIBAL还原产物的相对立体化学排布是根据NOE研究做出的，该研究采用以下方案，用由每个异构体制备的内酯衍生物进行：将LiHMDS(50μl 1.0M/THF，0.05mmol)加到冷却(冰-水)的(2S，3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯(62.7mg，0.135mmol)的THF(2.0mL)溶液中，将反应混合物在同样的温度下大约搅拌2小时。真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2(30mL)、水(20mL)和饱和NH4Cl水溶液(1mL)之间分配。有机层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，所得粗产物进行Biotage纯化(40g硅胶；10-15％EtOAc/己烷)，得到(3S，4S)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮(28.1mg，无色固体膜状物)。将(2S，3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯按同样方法精制成(3S，4R)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮。(3S，4S)-内酯异构体：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.83(d，J＝7.5，2H)，7.46-7.17(m，11H)，4.14(表观t，J＝8.3，1H)，3.60(d，J＝5.8，NH)，3.45(表观t，J＝9.2，1H)，～2.47(m，1H，与溶剂信号有部分重叠)，2.16(m，1H)，0.27(d，J＝6.6，3H)。LC(条件1)：RT＝1.98min；LC/MS：对于[M+Na]+C24H21NNaO2分析计算值：378.15；实测值：378.42。(3S，4R)-内酯异构体：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.89(d，J＝7.6，1H)，7.85(d，J＝7.3，1H)，7.46-7.20(m，11H)，3.95(dd，J＝9.1，4.8，1H)，3.76(d，J＝8.8，1H)，2.96(d，J＝3.0，NH)，2.92(dd，J＝6.8，3，NCH)，1.55(m，1H)，0.97(d，J＝7.0，3H)。LC(条件1)：RT＝2.03min；LC/MS：对于[M+Na]+C24H21NNaO2分析计算值：378.15；实测值：378.49。
依次将TBDMS-Cl(48mg，0.312mmol)和咪唑(28.8mg，0.423mmol)加到(2S，3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯(119.5mg，0.258mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中，将混合物在环境条件下搅拌14.25小时。然后反应混合物用CH2Cl2(30mL)稀释后，用水(15mL)洗涤，有机层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用Biotage纯化(40g硅胶；5％EtOAc/己烷)，得到(2S，3S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯(124.4mg，被TBDMS基杂质污染，粘性无色油状物)。将(2S，3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯按同样方法精制成(2S，3R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯。(2S，3S)-甲硅烷基醚异构体：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.82(d，J＝4.1，1H)，7.80(d，J＝4.0，1H)，7.38-7.07(m，16H)，4.70(d，J＝12.4，1H)，4.42(d，J＝12.3，1H)，3.28-3.19(m，3H)，2.56(dd，J＝10.1，5.5，1H)，1.61(m，1H)，0.90(d，J＝6.8，3H)，0.70(s，9H)，-0.13(s，3H)，-0.16(s，3H)。LC(条件1，其中过柱时间延长至4分钟)：RT＝3.26min；LC/MS：对于[M+H]+C37H44NO3Si分析计算值：578.31；实测值：578.40。(2S，3R)-甲硅烷基醚异构体：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.82(d，J＝3.0，1H)，7.80(d，J＝3.1，1H)，7.39-7.10(m，16H)，4.66(d，J＝12.4，1H)，4.39(d，J＝12.4，1H)，3.61(dd，J＝9.9，5.6，1H)，3.45(d，J＝9.5，1H)，3.41(dd，J＝10，6.2，1H)，2.55(dd，J＝9.5，7.3，1H)，1.74(m，1H)，0.77(s，9H)，0.61(d，J＝7.1，3H)，-0.06(s，3H)，-0.08(s，3H)。
将氢气囊与(2S，3S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯(836mg，1.447mmol)和10％Pd/C(213mg)在EtOAc(16mL)中的混合物连通，将混合物在室温下搅拌～21小时，需要时气囊再充入H2。反应混合物用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤，硅藻土垫用EtOAc(200mL)、EtOAc/MeOH(1∶1混合物，200mL)和MeOH(750mL)洗涤。将合并的有机相浓缩后，由所得粗产物制备硅胶筛目，进行快速色谱法处理(8∶2∶1EtOAc/i-PrOH/H2O的混合物)，得到(2S，3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(325mg，白色绒毛状固体)。将(2S，3R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苄酯按同样方法精制成(2S，3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸。(2S，3S)-氨基酸异构体：1H NMR(甲醇-d4，δ＝3.29ppm，400MHz)，3.76(dd，J＝10.5，5.2，1H)，3.73(d，J＝3.0，1H)，3.67(dd，J＝10.5，7.0，1H)，2.37(m，1H)，0.97(d，J＝7.0，3H)，0.92(s，9H)，0.10(s，6H)。LC/MS：对于[M+H]+C11H26NO3Si分析计算值：248.17；实测值：248.44。(2S，3R)-氨基酸异构体：1H NMR(甲醇-d4，δ＝3.29ppm，400MHz)，3.76-3.75(m，2H)，3.60(d，J＝4.1，1H)，2.16(m，1H)，1.06(d，J＝7.3，3H)，0.91(s，9H)，0.09(s，6H)。对于[M+H]+C11H26NO3Si分析计算值：248.17；实测值：248.44。
将水(1mL)和NaOH(0.18mL 1.0M/H2O，0.18mmol)加到(2S，3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(41.9mg，0.169mmol)和Na2CO3(11.9mg，0.112mmol)的混合物中，超声处理约1分钟以使反应物溶解。然后混合物用冰水浴冷却，在30秒内加入氯甲酸甲酯(0.02mL，0.259mmol)，在同样温度下继续剧烈搅拌40分钟后，再在环境温度下搅拌2.7小时。反应混合物用水(5mL)稀释，用冰水浴冷却后，逐滴加入1.0N HCl水溶液(～0.23mL)进行处理。混合物再用水(10mL)稀释，用CH2Cl2(15mL，2x)萃取。合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到Cap-80a，为灰白色固体。将(2S，3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸按同样方法精制成Cap-80b。Cap-80a：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)，12.57(br s，1H)，7.64(d，J＝8.3，0.3H)，7.19(d，J＝8.8，0.7H)，4.44(dd，J＝8.1，4.6，0.3H)，4.23(dd，J＝8.7，4.4，0.7H)，3.56/3.53(两个单峰，3H)，3.48-3.40(m，2H)，2.22-2.10(m，1H)，0.85(s，9H)，～0.84(d，0.9H，与t-Bu信号重叠)，0.79(d，J＝7，2.1H)，0.02/0.01/0.00(三个重叠单峰，6H)。LC/MS：对于[M+Na]+C13H27NNaO5Si分析计算值：328.16；实测值：328.46。Cap-80b：1H NMR(CDCl3，δ＝7.24ppm，400MHz)，6.00(br d，J＝6.8，1H)，4.36(dd，J＝7.1，3.1，1H)，3.87(dd，J＝10.5，3.0，1H)，3.67(s，3H)，3.58(dd，J＝10.6，4.8，1H)，2.35(m，1H)，1.03(d，J＝7.1，3H)，0.90(s，9H)，0.08(s，6H)。LC/MS：对于[M+Na]+C13H27NNaO5Si分析计算值：328.16；实测值：328.53。粗产物无需进一步纯化便可使用。
Figure BPA00001245294300871
按照Falb等所述方案制备(Falb等，Synthetic Communications 1993，23，2839)。
Cap-82至Cap-85
按照Cap-51中所述方法，由合适的原料合成Cap-82至Cap-85。样品的光谱特征与其对映体(即分别为Cap-4、Cap-13、Cap-51和Cap-52)的光谱特征相似。
Figure BPA00001245294300881
在0℃下，向O-甲基-L-苏氨酸(3.0g，22.55mmol)、NaOH(0.902g，22.55mmol)在H2O(15mL)中的混合物中滴加ClCO2Me(1.74mL，22.55mmol)。将混合物搅拌12小时后，用1N HCl酸化至pH 1。水相用EtOAc(2x250mL)和10％MeOH的CH2Cl2溶液(250mL)萃取，合并的有机相经真空浓缩后，得到无色油状物(4.18g，97％)，其纯度足以用于后续步骤。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.19(s，1H)，3.92-3.97(m，1H)，3.66(s，3H)，1.17(d，J＝7.7Hz，3H)。LCMS：对于C7H13NO5分析计算值：191；实测值：190(M-H)-。
Figure BPA00001245294300882
在0℃下，向L-高丝氨酸(2.0g，9.79mmol)、Na2CO3(2.08g，19.59mmol)在H2O(15mL)中的混合物中滴加ClCO2Me(0.76mL，9.79mmol)。将混合物搅拌48小时后，用1N HCl酸化至pH 1。水相用EtOAc(2X250mL)萃取，合并的有机相经真空浓缩后，得到无色固体(0.719g，28％)，其纯度足以用于后续步骤。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.23(dd，J＝4.5，9.1Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.43-3.49(m，2H)，2.08-2.14(m，1H)，1.82-1.89(m，1H)。LCMS：对于C7H13NO5分析计算值：191；实测值：192(M+H)+。
Figure BPA00001245294300891
将L-缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、3-溴吡啶(1.8mL，18.7mmol)、K2CO3(2.45g，17.7mmol)和CuI(169mg，0.887mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃下加热12小时。使反应混合物冷却至室温后，倒入H2O(约150mL)中，用EtOAc洗涤(2次)。有机层用少量H2O萃取，合并的水相用6N HCl酸化至约pH 2。体积减至大约1/3时，加入20g阳离子交换树脂(Strata)。使浆状物静置20分钟后，加到阳离子交换树脂垫(Strata)(约25g)上。该垫依次用H2O(200mL)、MeOH(200mL)和NH3(3M的MeOH溶液，2X200mL)洗涤。合适的流分经真空浓缩，将残余物(约1.1g)溶于H2O，冷冻并冻干。得到标题化合物(1.02g，62％，泡沫状物)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(s，br，1H)，7.68-7.71(m，1H)，7.01(s，br，1H)，6.88(d，J＝7.5Hz，1H)，5.75(s，br，1H)，3.54(s，1H)，2.04-2.06(m，1H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS：对于C10H14N2O2分析计算值：194；实测值：195(M+H)+。
Figure BPA00001245294300892
将L-缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、5-溴嘧啶(4.03g，17.0mmol)、K2CO3(2.40g，17.4mmol)和CuI(179mg，0.94mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃下加热12小时。使反应混合物冷却至室温后，倒入H2O(约150mL)中，并用EtOAc洗涤(2次)。有机层用少量H2O萃取，合并的水相用6N HCl酸化至约pH 2。体积减至大约1/3时，加入20g阳离子交换树脂(Strata)。将浆状物静置20分钟后，加到阳离子交换树脂垫(Strata)(约25g)上。该垫依次用H2O(200mL)、MeOH(200mL)和NH3(3M的MeOH溶液，2x200mL)洗涤。合适的流分经真空浓缩后，将残余物(约1.1g)溶于H2O，冷冻并冻干。得到标题化合物(1.02g，62％，泡沫状物)。1H NMR(400MHz，CD3OD)显示混合物含有缬氨酸，因而无法估计其纯度。该产物照原样用于后续反应。LCMS：对于C9H13N3O2分析计算值：195；实测值：196(M+H)+。
Figure BPA00001245294300901
按照Cap-1制备中所述方法制备Cap-90。粗产物照原样用于后续步骤。LCMS：对于C11H15NO2分析计算值：193；实测值：192(M-H)-。
按照Cap-51的方法制备下列端基(Cap)：
Figure BPA00001245294300902
Figure BPA00001245294300921
Figure BPA00001245294300931
Figure BPA00001245294300941
Cap-117至Cap-123
对于端基Cap-117至Cap-123的制备，Boc氨基酸是市售的，用25％TFA的CH2Cl2溶液处理便可脱去保护。通过LCMS判断反应完成后，真空除去溶剂，按照用于Cap-51的方法，氨基酸的相应TFA盐用氯甲酸甲酯进行氨基甲酰基化。
Figure BPA00001245294300942
Cap-124.(4S，5R)-5-甲基-2-氧代
Figure BPA00001245294300961
唑烷-4-甲酸的制备
Figure BPA00001245294300962
按照用于Cap-51的方法，使L-苏氨酸叔丁酯的盐酸盐进行氨基甲酰基化。粗制反应混合物用1N HCl酸化至pH～1，混合物用EtOAc(2X50mL)萃取。合并的有机相经真空浓缩后，得到静置时固化的无色产物。真空浓缩水层，所得产物和无机盐的混合物用EtOAc-CH2Cl2-MeOH(1∶1∶0.1)研磨，然后真空浓缩有机相，得到无色油状物，用LCMS显示为所需要的产物。合并两次产物，得到0.52g固体。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ4.60(m，1H)，4.04(d，J＝5.0Hz，1H)，1.49(d，J＝6.3Hz，3H)。LCMS：对于C5H7NO4分析计算值：145；实测值：146(M+H)+。
Cap-125.(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(二甲基氨基)丁酸的制备。
Figure BPA00001245294300963
按照用于Cap-1的制备方法制备Cap-125。粗产物照原样用于后续反应。LCMS：对于C11H22N2O4分析计算值：246；实测值：247(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)丙酸(Cap-126)的制备。
Figure BPA00001245294300964
本方法是用于制备Cap-51的改进方法。在0℃下，向(S)-2-氨基-3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)丙酸(0.80g，4.70mmol)在THF(10mL)和H2O(10mL)的悬浮液中加入NaHCO3(0.88g，10.5mmol)。所得混合物用ClCO2Me(0.40mL，5.20mmol)处理，将混合物在0℃下搅拌。搅拌约2小时后，LCMS显示无原料残留。用6N HCl使反应物酸化至pH 2。
真空除去溶剂后，将残余物悬浮于20mL 20％MeOH的CH2Cl2溶液中。将混合物过滤，浓缩，得到浅黄色泡沫状物(1.21g)。LCMS和1H NMR显示该产物为9∶1甲酯和所需产物的混合物。将该产物溶于THF(10mL)和H2O(10mL)中，冷却至0℃后，加入LiOH(249.1mg，10.4mmol)。搅拌约1小时后，LCMS显示无酯残留。因此混合物用6N HCl酸化后，真空除去溶剂。LCMS和1H NMR证实不存在酯。得到标题化合物，为其HCl盐(1.91g，＞100％，被无机盐污染)。该化合物无需进一步纯化便可照原样用于后续步骤。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.84，(s，1H)，7.35(s，1H)，4.52(dd，J＝5.0，9.1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(dd，J＝4.5，15.6Hz，1H，部分被溶剂掩蔽)，3.12(dd，J＝9.0，15.6Hz，1H)。
LCMS：对于C17H15NO2分析计算值：392；实测值：393(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(Cap-127)的制备。
Figure BPA00001245294300971
按照上述用于Cap-126的方法，由(S)-2-氨基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(1.11g，6.56mmol)、NaHCO3(1.21g，14.4mmol)和ClCO2Me(0.56mL，7.28mmol)开始制备Cap-127。得到标题化合物，为其HCl盐(1.79g，＞100％，被无机盐污染)。LCMS和1H NMR显示存在大约5％的甲酯。该粗制混合物无需进一步纯化便可照原样使用。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.90(s，1H)，7.35(s，1H)，4.48(dd，J＝5.0，8.6Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(m，1H)，3.08(m，1H)。
LCMS：对于C17H15NO2分析计算值：392；实测值：393(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)的制备。
Figure BPA00001245294300981
步骤1：(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸苄酯(cj-27b)的制备。
Figure BPA00001245294300982
在0℃下，向cj-27a(1.01g，4.74mmol)、DMAP(58mg，0.475mmol)和iPr2NEt(1.7mL，9.8mmol)在CH2Cl2(100mL)中的溶液中加入Cbz-Cl(0.68mL，4.83mmol)。将溶液在0℃下搅拌4小时，洗涤(1NKHSO4，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。残余物用快速柱色谱法纯化(TLC 6∶1己烷∶EtOAc)，得到标题化合物(1.30g，91％，无色油状物)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.35(s，5H)，5.35(d，br，J＝8.1Hz，1H)，5.23(d，J＝12.2Hz，1H)，5.17(d，J＝12.2Hz，1H)，4.48-4.53(m，1H)，2.68-2.81(m，2H)，2.00(t，J＝2.5Hz，1H)，1.44(s，9H)。LCMS：对于C17H21NO4分析计算值：303；实测值：304(M+H)+。
步骤2：(S)-3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸苄酯(cj-28)的制备。
Figure BPA00001245294300991
在室温下，向(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸苄酯(0.50g，1.65mmol)、抗坏血酸钠(0.036g，0.18mmol)、CuSO4-5H2O(0.022g，0.09mmol)和NaN3(0.13g，2.1mmol)在DMF-H2O(5mL，4∶1)中的混合物中加入BnBr(0.24mL，2.02mmol)，使混合物升温至65℃。5小时后，LCMS显示转化较慢。再加入一份NaN3(100mg)，继续加热12小时。将反应物倒入EtOAc和H2O中，然后振荡。分离各层，水层用EtOAc萃取3次，合并的有机相经洗涤(H2O x 3，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后浓缩。残余物经快速纯化(Biotage，40+M 0-5％MeOH/CH2Cl2；TLC3％MeOH/CH2Cl2)，得到静置时固化的浅黄色油状物(748.3mg，104％)。NMR与所需产物一致，但表明存在DMF。产物无需进一步纯化便可照原样使用。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84(s，1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.07(s，2H)，4.25(m，1H)，3.16(dd，J＝1.0，5.3Hz，1H)，3.06(dd，J＝5.3，14.7Hz)，2.96(dd，J＝9.1，14.7Hz，1H)，1.31(s，9H)。
LCMS：对于C24H28N4O4分析计算值：436；实测值：437(M+H)+。
步骤2：(S)-3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸苄酯(cj-29)的制备。
Figure BPA00001245294300992
向(S)-3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸苄酯(0.52g，1.15mmol)的CH2Cl2溶液中加入TFA(4mL)。将混合物在室温下搅拌2小时。混合物经真空浓缩后，得到静置时固化的无色油状物。将该产物溶于THF-H2O后冷却至0℃。依次加入固体NaHCO3(0.25g，3.00mmol)和ClCO2Me(0.25mL，3.25mmol)。搅拌1.5小时后，混合物用6N HCl酸化至pH～2后倒入H2O-EtOAc中。分离各层，水相用EtOAc萃取2次。合并的有机层经洗涤(H2O，盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到无色油状物(505.8mg，111％，NMR表明存在不确定杂质)，在泵中静置时固化。产物无需进一步纯化便可照原样使用。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.87(s，1H)，7.70(d，J＝8.1Hz，1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.10(d，J＝12.7Hz，1H)，5.06(d，J＝12.7Hz，1H)，4.32-4.37(m，1H)，3.49(s，3H)，3.09(dd，J＝5.6，14.7Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.6，14.7Hz，1H)。LCMS：对于C21H22N4O4分析计算值：394；实测值：395(M+H)+。
步骤3：(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)的制备。
Figure BPA00001245294301001
使(S)-3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸苄酯(502mg，1.11mmol)在Pd-C(82mg)的MeOH(5mL)溶液存在下、在大气压下氢化12小时。混合物通过硅藻土
Figure BPA00001245294301002
过滤后，真空浓缩。得到(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸(266mg，111％，无色胶状物)，被约10％的甲酯污染。产物无需进一步纯化便可照原样使用。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.78(s，br，1H)，7.599s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，1H)，4.19-4.24(m，1H)，3.49(s，3H)，3.12(dd，J＝4.8Hz，14.9Hz，1H)，2.96(dd，J＝9.9，15.0Hz，1H)。LCMS：对于C7H10N4O4分析计算值：214；实测值：215(M+H)+。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)的制备。
Figure BPA00001245294301011
步骤1：(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(cj-31)的制备。
Figure BPA00001245294301012
将(S)-2-氧代氧杂环丁烷-3-基氨基甲酸苄酯(0.67g，3.03mmol)和吡唑(0.22g，3.29mmol)在CH3CN(12mL)中的悬浮液在50℃下加热24小时。将混合物冷却至室温过夜后，将固体过滤，得到(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(330.1mg)。真空浓缩滤液后，用少量CH3CN(约4mL)研磨，得到第二产物(43.5mg)。总产量370.4mg(44％)。
熔点165.5-168℃。文献熔点168.5-169.5℃(Vederas等，J.Am.Chem.Soc.1985，107，7105)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.51(d，J＝2.0，1H)，7.48(s，J＝1.5Hz，1H)，7.24-7.34(m，5H)，6.23m，1H)，5.05(d，12.7H，1H)，5.03(d，J＝12.7Hz，1H)，4.59-4.66(m，2H)，4.42-4.49(m，1H)。LCMS：对于C14H15N3O4分析计算值：289；实测值：290(M+H)+。
步骤2：(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)的制备。
Figure BPA00001245294301021
使(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20g，0.70mmol)在Pd-C(45mg)的MeOH(5mL)溶液存在下、在大气压下氢化2小时。产物显示不溶于MeOH，因此将反应混合物用5mL H2O和几滴6N HCl稀释。均匀溶液通过硅藻土
Figure BPA00001245294301022
过滤，真空除去MeOH。剩下的溶液经冷冻并冻干，得到黄色泡沫状物(188.9mg)。将该产物悬浮于THF-H2O(1∶1，10mL)中，然后冷却至0℃。小心地向冷的混合物中加入NaHCO3(146.0mg，1.74mmol)(放出CO2)。停止放出气体后(约15分钟)，滴加ClCO2Me(0.06mL，0.78mmol)。搅拌混合物2小时后，用6N HCl酸化至pH～2后倒入EtOAc中。分离各层，水相用EtOAC萃取(5次)。合并的有机层经洗涤(盐水)，干燥(Na2SO4)，过滤后浓缩，得到标题化合物(117.8mg，79％，无色固体)。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.04(s，1H)，7.63(d，J＝2.6Hz，1H)，7.48(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(d，J＝1.5Hz，1H)，6.19(表观t，J＝2.0Hz，1H)，4.47(dd，J＝3.0，12.9Hz，1H)，4.29-4.41(m，2H)，3.48(s，3H)。LCMS：对于C8H11N3O4分析计算值：213；实测值：214(M+H)+。
Cap-130.N-乙酰基-(R)-苯基甘氨酸
按类似于文献给出的方法(Calmes，M.；Daunis，J.；Jacquier，R.；Verducci，J.Tetrahedron，1987，43(10)，2285)，使市售(R)-苯基甘氨酸酰基化来制备Cap-130。
实施例
现在结合某些实施方案，对本公开进行描述，所述实施方案并不限制本公开的范围。相反，本公开涵盖所有可包括在权利要求书范围内的替代、修改和等同内容。因此，下列实施例，包括具体实施方案，将说明本公开的一种实践，要了解的是，实施例的目的是用于说明某些实施方案，并相信是以最有用和最易理解的方式对其方法和构思方面进行描述。
溶液百分数表示重量与体积关系，溶液比表示体积与体积关系，除非另有说明。核磁共振(NMR)谱用Bruker 300、400或500MHz分光计记录；化学位移(δ)用百万分之几报告。按照Still快速色谱技术(J.Org.Chem.1978，43，2923)，在硅胶(SiO2)上进行快速色谱法。
将Shimadzu LC系统与Waters Micromass ZQ MS系统联用，进行纯度评价和低分辨质谱分析。应当注意的是，保留时间在不同机器之间略有不同。测定保留时间(RT)所采用的LC条件是：
条件1
柱＝Phenomenex-Luna 3.0 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件2
柱＝Phenomenex-Luna 4.6 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝5mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件3
柱＝HPLC XTERRA C183.0 x 50mm S7
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
停止时间＝4min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
方法A：LCMS-Xterra MS C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，30.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵。
方法B：HPLC-X-Terra C-184.6 x 50mm，梯度0-100％B，10.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA
方法C：HPLC-YMC C-184.6 x 50mm，梯度0-100％B，10.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.2％H3PO4，B＝90％甲醇10％水0.2％H3PO4。
方法D：HPLC-Phenomenex C-184.6 x 150mm，梯度0-100％B，10.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.2％H3PO4，B＝90％甲醇10％水0.2％H3PO4。
方法E：LCMS-Gemini C-184.6 x 50mm，梯度0-100％B，10.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵。
方法F：LCMS-Luna C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，7.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵。
实施例1
(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
Figure BPA00001245294301051
在15分钟内，将N，N-二异丙基乙胺(18mL，103.3mmol)滴加到N-Boc-L-脯氨酸(7.139g，33.17mmol)、HATU(13.324g，35.04mmol)、2-氨基-1-(4-溴苯基)乙酮的HCl盐(8.127g，32.44mmol)和DMF(105mL)的不均匀混合物中，并在环境条件下搅拌55分钟。真空除去大部分挥发性成分后，使所得残余物在乙酸乙酯(300mL)和水(200mL)之间分配。有机层用水(200mL)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。由残余物制备硅胶筛目，并进行快速色谱法处理(硅胶；50-60％乙酸乙酯/己烷)，得到酮酰胺1a(12.8g，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ8.25-8.14(m，1H)，7.92(br d，J＝8.0，2H)，7.75(br d，J＝8.6，2H)，4.61(dd，J＝18.3，5.7，1H)，4.53(dd，J＝18.1，5.6，1H)，4.22-4.12(m，1H)，3.43-3.35(m，1H)，3.30-3.23(m，1H)，2.18-2.20(m，1H)，1.90-1.70(m，3H)，1.40/1.34(两个表观br s，9H)。LC(条件1)：RT＝1.70min；LC/MS：对于[M+Na]+C18H23BrN2NaO4分析计算值：433.07；实测值：433.09。
中间体1-1a至1-5a等类似化合物可通过掺入适当取代的氨基酸和芳基溴化物异构体来制备。
Figure BPA00001245294301061
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.35/1.40(两个br s，9H)，2.27-2.42(m，1H)，2.73-2.95(m，1H)，3.62-3.89(m，2H)，4.36-4.50(m，1H)，4.51-4.60(m，1H)，4.62-4.73(m，1H)，7.75(d，J＝8.24Hz，2H)，7.92(d，J＝7.63Hz，2H)，8.31-8.49(m，1H)。HPLC XTERRA C-184.6×30mm，0-100％B，4分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H3PO4，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H3PO4，RT＝1.59分钟，均一性指数99％。LCMS：对于C18H21BrF2N2O4分析计算值：446.06；实测值：445.43(M-H)-。
Figure BPA00001245294301062
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm(8.251H，s)，7.91(2H，d，J＝8.24Hz)，7.75(2H，d，J＝8.24Hz)，4.98(1H，s)，4.59-4.63(1H，m)，4.46-4.52(1H，m)，4.23(1H，m)，3.37(1H，s)，3.23-3.28(1H，m)，2.06(1H，m)，1.88(1H，s)，1.38(3H，s)，1.33(6H，s)。LCMS-PhenomenexC-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA流动相，RT＝3.34分钟，对于C18H23BrN2O5分析计算值：427.30；实测值：428.08(M+H)+。
Figure BPA00001245294301071
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 8.30(1H，s)7.93-7.96(2H，m)7.76(2H d，J＝8.24Hz)5.13(1H，s)4.66-4.71(1H，m)4.52-4.55(1H，m)4.17(1H，m)3.51(1H，s)3.16-3.19(1H，m)2.36(1H，m)1.78(1H，s)1.40(s，3H)，1.34(s，6H)。LCMS-Phenomenex C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA，RT＝3.69分钟，对于C18H23BrN2O5分析计算值：427.30；实测值：428.16(M+H)+。
Figure BPA00001245294301072
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.29-1.47(m，9H)，1.67-1.90(m，3H)，2.00-2.20(m，1H)，3.23-3.30(m，1H)，3.34-3.44(m，1H)，4.16(dd，1H)，4.57(q，2H)，7.51(t，J＝7.78Hz，1H)，7.86(dd，J＝7.93，1.22Hz，1H)，7.98(d，J＝7.63Hz，1H)，8.11(s，1H)，8.15-8.29(m，1H)。LC/MS(M+Na)+＝433.12/435.12。
Figure BPA00001245294301081
LCMS条件：Phenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。RT＝1.93min；LRMS：对于C19H18BrN2O4分析计算值：418.05；实测值：419.07(M+H)+。
实施例1，步骤b
Figure BPA00001245294301082
将酮酰胺1a(12.8g，31.12mmol)和NH4OAc(12.0g，155.7mmol)在二甲苯(155mL)中的混合物在密封管中于140℃加热2小时。真空除去挥发性成分后，小心地使残余物在乙酸乙酯和水之间分配，振荡两相系统后，通过加入足够的饱和NaHCO3溶液，使得水相pH呈微碱性。分离各层后，水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得产物用乙酸乙酯/己烷重结晶，得到咪唑1b的两批产物，为浅黄色密实固体，重量5.85g。将母液真空浓缩，并进行快速色谱法处理(硅胶；30％乙酸乙酯/己烷)，再得到2.23g咪唑1b。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.17/11.92/11.86(m，1H)，7.72-7.46/7.28(m，5H)，4.86-4.70(m，1H)，3.52(表观br s，1H)，3.36(m，1H)，2.30-1.75(m，4H)，1.40/1.15(表观br s，9H)。LC(条件1)：RT＝1.71min；均＝性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C18H23BrN3O2分析计算值：392.10；实测值：391.96；HRMS：对于[M+H]+C18H23BrN3O2分析计算值：392.0974；实测值：392.0959。
用下述手性HPLC条件对于1b的两个样品的光学纯度进行了评价(合并产物的对映体过量(ee)＞99％；快速色谱法样品的对映体过量(ee)＝96.7％)：
柱：Chiralpak AD，10um，4.6 x 50mm
溶剂：2％乙醇/庚烷(等度洗脱)
流速：1mL/min
波长：或者220nm或者254nm
相对保留时间：2.83分钟(R)，5.34分钟(S)
类似化合物如中间体1-1b至1-4b可通过掺入合适的酮酰胺来制备。
Figure BPA00001245294301091
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.17/1.40(两个br s，9H)，2.50-2.74(m，J＝25.64Hz，1H)，2.84-3.07(m，1H)，3.88(d，J＝10.07Hz，2H)，5.03(s，1H)，7.50(d，J＝8.55Hz，2H)，7.60(s，1H)，7.70(d，J＝8.55Hz，2H)，12.10(s，1H)。HPLC XTERRA C-184.6×30mm，0-100％B，4分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H3PO4，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H3PO4，RT＝1.59分钟，均一性指数99％；LCMS：对于C18H20BrF2N3O2分析计算值：428.27；实测值：428.02(M)+。
Figure BPA00001245294301092
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 11.89-11.99(1H，m)，7.68(2H，d，J＝8.54Hz)，7.52-7.59(1H，m)，7.48(2H，d，J＝8.54Hz)，4.80(1H，m)，4.33(1H，s)，3.51-3.60(1H，m)，3.34(1H，d，J＝10.99Hz)，2.14(1H，s)，1.97-2.05(1H，m)，1.37(3H，s)，1.10(6H，s)；LCMS-PhenomenexC-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA，(RT＝3.23min)；对于C18H22BrN3O3分析计算值：408.30；实测值：409.12(M+H)+。
Figure BPA00001245294301101
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.06-12.24(1H，m)，7.58-7.69(5H，m)，4.84-4.95(1H，m)，4.34(1H，s)，3.61(1H，s)，3.34-3.40(1H，m)，2.52(1H，s)，1.92-2.20(1H，m)，1.43(3H，s)，1.22(6H，s)；LCMS-Phenomenex C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA，(RT＝3.41min)；对于C18H22BrN3O3分析计算值：408.30；实测值：409.15(M+H)+。
Figure BPA00001245294301102
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.98-1.51(m，9H)，1.82-2.12(m，3H)，2.31-2.48(m，1H)，3.30-3.51(m，1H)，3.52-3.66(m，1H)，4.88-5.16(m，1H)，7.47(t，J＝7.93Hz，1H)，7.61(d，J＝7.93Hz，1H)，7.81(d，J＝7.93Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.12(d，J＝28.38Hz，1H)，14.65(s，1H)。LC/MS(M+H)+＝391.96/393.96。
其它咪唑类似物按照类似于上述的那些方法步骤来制备。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301111
实施例1，步骤c
Figure BPA00001245294301112
将Pd(Ph3P)4(469mg，0.406mmol)加到装有溴化物1b(4.008g，10.22mmol)、二硼酸二频哪醇酯(5.422g，21.35mmol)、乙酸钾(2.573g，26.21mmol)和1，4-二
Figure BPA00001245294301113
烷(80mL)的混合物的压力管中。反应瓶用氮气吹扫后，盖上盖子，用油浴在80℃下加热16.5小时。反应混合物经过滤后，真空浓缩滤液。小心地使粗产物在CH2Cl2(150mL)和含水介质(50mL水+10mL饱和NaHCO3溶液)之间分配。水层用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得产物用快速色谱法纯化(样品与洗脱溶剂一起加样；20-35％乙酸乙酯/CH2Cl2)，得到硼酸酯1c，其被频哪醇污染，为灰白色密实固体；1c与频哪醇的相对摩尔比约为10∶1(1H NMR)。高真空暴露～2.5天后，样品重量为3.925g。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：12.22/11.94/11.87(m，1H)，7.79-7.50/7.34-7.27(m，5H)，4.86-4.70(m，1H)，3.52(表观br s，1H)，3.36(m，1H)，2.27-1.77(m，4H)，1.45-1.10(m，21H)。LC(条件1)：RT＝1.64分钟；LC/MS：对于[M+H]+C24H35BN3O4分析计算值：440.27；实测值：440.23。
类似化合物如中间体1-1c至1-4c可通过掺入合适的芳基溴化物来制备。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.16(s，8H)，1.29(s，13H)，2.51-2.72(m，1H)，2.84-3.03(m，1H)，3.79-4.00(m，2H)，4.88-5.21(m，1H)，7.62(d，J＝7.93Hz，2H)，7.67(s，1H)，7.76(d，J＝7.93Hz，2H)，12.11/12.40(两个br s，1H)。HPLC GEMINI C-184.6×50mm，0-100％B，4分钟内，1分钟停留时间，A＝95％水，5％乙腈，0.1％NH4OAc，B＝5％水，95％乙腈，0.1％NH4OAc，RT＝1.62分钟，均一性指数99％。LCMS：对于C34H32BF2N3O4分析计算值：475.34；实测值：474.78(M-H)-。
Figure BPA00001245294301122
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 11.97(1H，m)，7.62-7.75(5H，m)，5.05(1H d，J＝3.36Hz)，4.82(m，1H)，4.35(m，1H)，3.58(1H，m)，2.389(1H，s)，2.17(1H，m)，1.38(3H，s)，1.30(12H，s)，1.1(6H，s)；LCMS-Phenomenex C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵，RT＝3.63分钟，对于C24H34BN3O5分析计算值：455.30；实测值：456.31(M+H)+。
Figure BPA00001245294301131
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.05-12.24(1H，m)，7.61-7.73(5H，m)，4.83-5.01(1H，m)，4.33(1H，s)，3.54-3.63(1H，m)，3.39-3.80(1H，m)，2.38-2.49(1H，m)，1.98-2.01(1H，m)，1.42(3H，s)，1.34(12H，s)，1.21(6H，s)；LCMS-Phenomenex C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA，RT＝3.64分钟，对于C24H34BN3O5分析计算值：455.30；实测值：456.30(M+H)+。
Figure BPA00001245294301132
1H NMR (500MHz，DMSO-d6)δppm 1.02-1.54(m，21H)，1.75-2.07(m，3H)，2.09-2.33(m，1H)，3.32-3.44(m，1H)，3.55(s，1H)，4.69-4.94(m，1H)，7.33(t，J＝7.32Hz，1H)，7.41-7.57(m，2H)，7.84(d，J＝7.32Hz，1H)，8.08(s，1H)，11.62-12.07(m，1H)。LC/MS(M+H)+＝440.32.
其它硼酸酯：1-5c至1-10c的条件
LCMS条件：条件1：Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301141
Figure BPA00001245294301151
实施例1，步骤d
(2S，2′S)-2，2′-(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-5，2-二基))二(1-吡咯烷甲酸叔丁酯)
Figure BPA00001245294301152
将Pd(Ph3P)4(59.9mg，0.0518mmol)加到溴化物1b(576.1mg，1.469mmol)、硼酸酯1c(621.8mg，1.415mmol)、NaHCO3(400.4mg，4.766mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(12mL)和水(4mL)中的混合物中。反应混合物用氮气吹扫，用油浴在80℃下加热5.75小时后，真空除去挥发性成分。使残余物在20％甲醇/CHCl3(60mL)和水(30mL)之间分配，水相用20％甲醇/CHCl3(30mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。由所得粗产物制备硅胶筛目并进行快速色谱法处理(乙酸乙酯)，得到二聚体1d(563mg，被Ph3PO污染，灰白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.21-12-16/11.95-11.78(m，2H)，7.85-7.48/7.32-7.25(m，10H)，4.90-4.71(m，2H)，3.60-3.32(m，4H)，2.30-1.79(m，8H)，1.46-1.10(m，18H)。LC(条件1b)：RT＝1.77min；LC/MS：对于[M+H]+C36H45BN6O4分析计算值：625.35；实测值：625.48。
其它联苯类似物按照同样的方法制备。
实施例1-5d至实施例1-7d的LC条件：条件1：Phenomenex LUNAC-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301171
实施例1，步骤e
5，5′-(4，4′-联苯二基)双(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑)
Figure BPA00001245294301172
将氨基甲酸酯1d(560mg)和25％TFA/CH2Cl2(9.0mL)的混合物在环境条件下搅拌3.2小时。真空除去挥发性成分后，所得产物用MCX柱进行游离碱化(甲醇洗涤；2.0M NH3/甲醇洗脱)，得到吡咯烷1e(340mg，暗黄色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ11.83(br s，2H)，7.80(d，J＝8.1，4H)，7.66(d，J＝8.3，4H)，7.46(br s，2H)，4.16(表观t，J＝7.2，2H)，2.99-2.69(m，6H)，2.09-2.00(m，2H)，1.94-1.66(m，6H)。LC(条件1)：RT＝1.27min；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C26H29N6分析计算值：425.25；实测值：425.25；HRMS：对于[M+H]+C26H29N6分析计算值：425.2454；实测值：425.2448。
其它类似物按照同样的方法制备：
Figure BPA00001245294301173
Figure BPA00001245294301181
1-5e至1-7e的LC条件：Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301182
实施例1
(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基))双N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
将HATU(44.6mg，0.117mmol)加到吡咯烷1e(22.9mg，0.054mmol)、二异丙基乙胺(45μL，0.259mmol)和Cap-1(28.1mg，0.13mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中，将所得混合物在环境温度下搅拌90分钟。真空除去挥发性成分后，残余物先用MCX(甲醇洗涤；2.0MNH3/甲醇洗脱)纯化，然后用反相HPLC系统(H2O/甲醇/TFA)纯化，得到实施例1的TFA盐(44.1mg，灰白色泡沫状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ10.25(br s，2H)，8.20-7.10(m，20H)，5.79-5.12(m，4H)，4.05-2.98(m，4H)，2.98-2.62(m，6H)，2.50-1.70(m，14H)，[注意：咪唑NH的信号太宽以致无法确定化学位移]；LC(条件1)：RT＝1.40min；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C46H51N8O2分析计算值：747.41；实测值：747.58。
Figure BPA00001245294301191
Figure BPA00001245294301201
Figure BPA00001245294301211
124-18-1至24-18-5的LC条件：Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
实施例28
((1R)-2-氧代-1-苯基-2-((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301212
实施例28，步骤a
Figure BPA00001245294301213
将HATU(19.868g，52.25mmol)加到N-Cbz-L-脯氨酸(12.436g，49.89mmol)和2-氨基-1-(4-溴苯基)乙酮的HCl盐(12.157g，48.53mmol)在DMF(156mL)中的不均匀混合物中。使混合物在冰水浴中降温后，随即在13分钟内向其中滴加N，N-二异丙基乙胺(27mL，155mmol)。加完碱后，移开冷却浴，再将反应混合物搅拌50分钟。真空除去挥发性成分；将水(125mL)加到所得粗制固体中并搅拌约1小时。将灰白色固体过滤后，用大量的水洗涤，然后真空干燥，得到酮酰胺28a(20.68g，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ8.30(m，1H)，7.91(m，2H)，7.75(d，J＝8.5，2H)，7.38-7.25(m，5H)，5.11-5.03(m，2H)，4.57-4.48(m，2H)，4.33-4.26(m，1H)，3.53-3.36(m，2H)，2.23-2.05(m，1H)，1.94-1.78(m，3H)；LC(条件1)：RT＝1.65min；均一性指数98％；LC/MS：对于[M+H]+C21H22BrN2O4分析计算值：445.08；实测值：445.31。
实施例28，步骤b
Figure BPA00001245294301221
按照合成氨基甲酸酯1b中所述的方法，将酮酰胺28a(10.723g，24.08mmol)转化成28b，只是粗产物用快速色谱法纯化(样品与洗脱溶剂一起加样；50％乙酸乙酯/己烷)。回收得到溴化物28b(7.622g，灰白色泡沫状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.23/12.04/11.97(m，1H)，7.73-6.96(m，10H)，5.11-4.85(m，3H)，3.61(m，1H)，3.45(m，1H)，2.33-184(m，4H)。LC(条件1)：RT＝1.42min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C21H21BrN3O2分析计算值：426.08；实测值：426.31；HRMS：对于[M+H]+C21H21BrN3O2分析计算值：426.0817；实测值：426.0829。用下列手性HPLC方法对28b的光学纯度进行了评价，观察到对映体过量为99％。
柱：Chiralpak AD，10um，4.6 x 50mm
溶剂：20％乙醇/庚烷(等度洗脱)
流速：1mL/min
波长：254nm
相对保留时间：1.82分钟(R)，5.23分钟(S)
实施例28，步骤c
(2S，2′S)-(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-5，2-二基))-2-(1-吡咯烷甲酸苄酯)-2′-(1-吡咯烷甲酸叔丁酯)
Figure BPA00001245294301231
将Pd(Ph3P)4(711.4mg，0.616mmol)加到硼酸酯1c(7.582g，～17mmol)、溴化物28b(7.62g，17.87mmol)、NaHCO3(4.779g，56.89mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(144mL)和水(48mL)中的混合物中。反应混合物用N2吹扫，用油浴在80℃下加热15.5小时后，真空除去挥发性成分。使残余物在CH2Cl2和水之间分配，水层用CH2Cl2萃取。合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得产物进行快速色谱法处理(样品按硅胶筛目加样；用乙酸乙酯作为洗脱液)，得到联苯28c(7.5g，灰白色泡沫状物，含有Ph3PO杂质)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.24-12.19(m，0.36H)，12.00-11.82(m，1.64H)，7.85-6.98(15H)，5.12-4.74(4H)，3.68-3.34(4H)，2.34-1.79(8H)，1.41/1.17(两个brs，9H)；LC(条件1)：RT＝1.41分钟；LC/MS：对于[M+H]+C39H43N6O4分析计算值：659.34；实测值：659.52；HRMS：对于[M+H]+C39H43N6O4分析计算值：659.3346；实测值：659.3374。
实施例28，步骤d
(2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294301232
将K2CO3(187.8mg，1.36mmol)加到催化剂(10％Pd/C；205.3mg)、氨基甲酸酯28c(1.018g，～1.5mmol)、甲醇(20mL)和移液管3滴水的混合物中。连通H2气囊后，将混合物搅拌6小时。然后，再加入催化剂(10％Pd/C，100.8mg)和K2CO3(101.8mg，0.738mmol)，继续搅拌3.5小时。在氢化过程中，每隔一段时间更换H2气囊三次。反应混合物通过硅藻土(
Figure BPA00001245294301241
521)垫过滤，真空除去滤液。所得粗产物用短柱进行快速色谱法处理(样品按硅胶筛目加样；用0-20％甲醇/CH2Cl2作为洗脱液)，得到28d(605.6mg，浅黄色泡沫状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.18/11.89/11.82(三个br s，2H)，7.83-7.29(m，10H)，4.89-4.73(m，1H)，4.19(表观t，J＝7.2，1H)，3.55(表观br s，1H)，3.40-3.35(m，1H)，3.02-2.96(m，1H)，2.91-2.84(m，1H)，2.30-1.69(m，8H)，1.41/1.16(两个br s，9H)。注意：吡咯烷NH的信号显示似乎与3.6-3.2ppm区中的信号重叠；LC(条件1)：RT＝1.21min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C31H37N6O2分析计算值：525.30；实测值：525.40。
实施例28，步骤e-f
实施例28步骤e
(2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
实施例28步骤f
((1R)-2-氧代-1-苯基-2-((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301242
步骤e：将HATU(316.6mg，0.833mmol)加到吡咯烷28d(427mg，0.813mmol)、Cap-4(177.6mg，0.849mmol)和二异丙基乙胺(0.32mL，1.84mmol)的DMF(7.0mL)溶液中，并将反应混合物搅拌45分钟。真空除去挥发性成分后，使残余物在CH2Cl2(50mL)和含水介质(20mL H2O+1mL饱和NaHCO3溶液)之间分配。水相用CH2Cl2反萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得黄色油状物用快速色谱法纯化(硅胶；乙酸乙酯)，得到28e(336mg，黄色泡沫状物)。LC(条件1)：RT＝1.68min；均一性指数91％；LC/MS：对于[M+H]+C41H46N7O5分析计算值：716.35；实测值：716.53。
步骤f：采用所述将1d转化为1e的方法，将氨基甲酸酯28e精制成胺28f。LC(条件1)：RT＝1.49min；均一性指数＞98％。LC/MS：对于[M+H]+C36H38N7O3分析计算值：616.30；实测值：616.37；HRMS：对于[M+H]+C36H38N7O3分析计算值：616.3036；实测值：616.3046。
实施例28
((1R)-2-氧代-1-苯基-2-((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)乙基)氨基甲酸甲酯
采用合成实施例1的最后步骤，使胺28f转化成实施例28的TFA盐。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ8.21-7.03(m，21H)，5.78-5.14(3H)，3.98-3.13(m，9H；包括OCH3在3.54和3.53的信号)，2.45-1.72(m，8H)。LC(条件1)：RT＝1.66分钟，均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C44H44N7O4分析计算值：734.35；实测值：734.48；HRMS：对于[M+H]+C44H44N7O4分析计算值：734.3455；734.3455。
实施例121
(1R，1′R)-2，2′-((2，2′-二甲基-4，4′-联苯二基)双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
Figure BPA00001245294301261
实施例121，步骤a-b
Figure BPA00001245294301262
将PdCl2(Ph3P)2(257mg，0.367mmol)加到1-溴-4-碘-2-甲基苯(3.01g，10.13mmol)和三正丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(3.826g，10.59mmol)的二烷(45mL)溶液中，在80℃下加热～17小时。反应混合物用水(15mL)处理，冷却至～0℃(冰/水)，然后在7分钟内分批加入NBS(1.839g，10.3mmol)。搅拌约25分钟后，真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配。水层用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用重力色谱法纯化(硅胶；4％乙酸乙酯/己烷)，得到溴化物121a(2.699g，带褐色的黄色固体)；该样品不纯，其中含有锡烷衍生的杂质。1HNMR(CDCl3，δ＝7.24，400MHz)：7.83(s，1H)，7.63(s，2H)，4.30(s，2H)，2.46(s，3H)。
将121a(2.69g，＜9.21mmol)的CH3CN(15mL)溶液在3分钟内滴加到(S)-Boc-脯氨酸(2.215g，10.3mmol)和三乙胺(1.40mL，10.04mmol)的CH3CN(30mL)溶液中并搅拌90分钟。真空除去挥发性成分后，使残余物在水和CH2Cl2之间分配，有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；15-20％乙酸乙酯/己烷)，得到121b(2.74g，粘性无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：δ7.98(m，1H)，7.78(d，J＝8.3，1H)，7.72-7.69(m，1H)，5.61-5.41(m，2H)，4.35-4.30(m，1H)，3.41-3.30(m，2H)，2.43(s，3H)，2.33-2.08(m，2H)，1.93-1.83(m，2H)，1.40/1.36(s，9H)；LC(条件1)：RT＝1.91min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+Na]+C19H24BrNNaO5分析计算值：448.07；实测值：448.10。
其它酮酸酯可按类似方式制备。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301271
实施例121，步骤c
将酮酸酯121b(1.445g，3.39mmol)和NH4OAc(2.93g，38.0mmol)在二甲苯(18mL)中的混合物在140℃下用微波加热80分钟。真空除去挥发性成分后，小心地使残余物在CH2Cl2和水之间分配，向其中加入足够的饱和NaHCO3溶液以中和含水介质。水相用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。粗产物用快速色谱法纯化(硅胶，40％乙酸乙酯/己烷)，得到咪唑121c(1.087g，灰白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：12.15/11.91/11.84(brs，1H)，7.72-7.24(m，4H)，4.78(m，1H)，3.52(m，1H)，3.38-3.32(m，1H)，2.35(s，3H)，2.28-1.77(m，4H)，1.40/1.14(s，9H)；LC(条件1)：RT＝1.91min；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C19H25BrN3O2分析计算值：405.96；实测值：406.11。
实施例121，步骤d
Figure BPA00001245294301281
将PdCl2dppf·CH2Cl2(50.1mg，0.061mmol)加到装有溴化物121c(538.3mg，1.325mmol)、二硼酸二频哪醇酯(666.6mg，2.625mmol)、乙酸钾(365.8mg，3.727mmol)和DMF(10mL)的混合物的压力管中。反应混合物用N2吹扫，在80℃下加热24.5小时。真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配，向其中加入足够的饱和NaHCO3溶液以使含水介质的pH呈中性。水相用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得产物用Biotage系统纯化(硅胶，40-50％乙酸乙酯/己烷)，得到硼酸酯121d(580mg，白色泡沫状物)。根据1H NMR，该样品含有残留频哪醇，产物/频哪醇的比率为～3。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：δ12.16/11.91/11.83(br s，1H)，7.63-7.25(m，4H)，4.78(m，1H)，3.53(m，1H)，3.39-3.32(m，1H)，2.48/2.47(s，3H)，2.28-1.78(m，4H)，1.40/1.14/1.12(br s，9H)，1.30(s，12H)；LC(条件1)：RT＝1.62min；LC/MS：对于[M+H]+C25H37BN3O4分析计算值：454.29；实测值：454.15。
实施例121，步骤e
和
实施例121，步骤f
Figure BPA00001245294301291
按照二聚体1d的制备法，由溴化物121c和硼酸酯121d制备氨基甲酸酯121e；LC(条件1)：RT＝1.43min；LC/MS：对于[M+H]+C38H49N6O4分析计算值：653.38；实测值：653.65。
按照吡咯烷1e的制备法，使氨基甲酸酯121e脱保护，得到121f，为灰白色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：11.79(br s，2H)，7.66(s，2H)，7.57(d，J＝7.8，2H)，7.41(br s，2H)，7.02(d，J＝7.8，2H)，4.15(表观t，J＝7.2，2H)，3.00-2.94(m，2H)，2.88-2.82(m，2H)，2.09-2.01(m，2H)，2.04(s，6H)，1.93-1.85(m，2H)，1.82-1.66(m，4H)。注意：虽然对应于吡咯烷NH的宽峰信号出现在2.8-3.2ppm区，但无法测得其化学位移的实际范围。LC(条件1)：RT＝1.03min；LC/MS：对于[M+H]+C28H33N6分析计算值：453.28；实测值：453.53。
Figure BPA00001245294301292
实施例121
(1R，1′R)-2，2′-((2，2′-二甲基-4，4′-联苯二基)双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
按照由1e制备实施例1的方法，由121f合成实施例121(TFA盐)；J＝LC(条件1)：RT＝1.14min；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C48H55N8O2分析计算值：775.45；775.75；HRMS：对于[M+H]+C48H55N8O2分析计算值：775.4448；实测值：775.4473。
实施例126-128
Figure BPA00001245294301301
采用实施例28中由步骤c开始的所述方法，由溴化物28b和硼酸酯121d开始制备实施例126-128。
Figure BPA00001245294301302
Figure BPA00001245294301311
实施例130
(1R，1′R)-2，2′-((2-(三氟甲基)-4，4′-联苯二基)双(1H-咪唑-5，2-基(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
Figure BPA00001245294301312
实施例130，步骤a
Figure BPA00001245294301313
在11分钟内，将乙二醛(2.0mL 40％的水溶液)滴加到NH4OH(32mL)和(S)-Boc-脯氨醛(8.564g，42.98mmol)的甲醇溶液中并在环境温度下搅拌19小时。真空除去挥发性成分，残余物用快速色谱法纯化(硅胶，乙酸乙酯)，再进行重结晶(乙酸乙酯，室温)，得到咪唑130a(4.43g，白色绒毛状固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：11.68/11.59(br s，1H)，6.94(s，1H)，6.76(s，1H)，4.76(m，1H)，3.48(m，1H)，3.35-3.29(m，1H)，2.23-1.73(m，4H)，1.39/1.15(s，9H)。LC(条件1)：RT＝0.87min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C12H20N3O2分析计算值：238.16；实测值：238.22。当在下述手性HPLC条件下进行分析时，咪唑130a的对映体过量为98.9％。
柱：Chiralpak AD，10um，4.6 x 50mm
溶剂：1.7％乙醇/庚烷(等度洗脱)
流速：1mL/min
波长：或者220nm或者256nm相对保留时间：3.25分钟(R)，5.78分钟(S)
实施例130，步骤b
Figure BPA00001245294301321
在15分钟内，将N-溴丁二酰亚胺(838.4mg，4.71mmol)分批加到咪唑130a(1.0689g，4.504mmol)的冷却(冰/水)CH2Cl2(20mL)溶液中并在同样的温度下搅拌75分钟。真空除去挥发性成分。粗产物用反相HPLC系统纯化(H2O/甲醇/TFA)，将溴化物130b与其二溴类似物和未消耗掉的原料分离开来。HPLC流出物用过量的NH3/甲醇中和后，真空除去挥发性成分。使残余物在CH2Cl2和水之间分配，水层用水萃取。合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到130b(374mg，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：12.12(brs，1H)，7.10(m，1H)，4.70(m，1H)，3.31(m，1H；与水信号重叠)、2.25-1.73(m，4H)，1.39/1.17(s，3.8H+5.2H)。LC(条件1)：RT＝1.10min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C12H19BrN3O2分析计算值：316.07；实测值：316.10。
实施例130，步骤c
Figure BPA00001245294301322
将Pd(Ph3P)4(78.5mg，0.0679mmol)加到溴化物130b(545mg，1.724mmol)、2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(542.8mg，1.771mmol)(可市售获得的)、NaHCO3(477mg，5.678mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(12.5mL)和水(4.2mL)中的混合物中。反应混合物用氮气吹扫，用油浴在80℃下加热27小时后，真空除去挥发性成分。使残余物在CH2Cl2和水之间分配，有机层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物依次用Biotage系统(硅胶，40-50％乙酸乙酯/己烷)和反相HPLC(水/甲醇/TFA)纯化。HPLC流出物用过量的NH3/甲醇处理后浓缩。使残余物在水和CH2Cl2之间分配，有机层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到130c(317.4mg，白色泡沫状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：12.36/12.09/12.03(br s，1H)，8.15(d，J＝1.8，0.93H)，8.09(br s，0.07H)，8.01(dd，J＝8.3/1.3，0.93H)，7.93(m，0.07H)，7.74(m，1H)，7.66(d，J＝8.3，0.93H)，7.46(m，0.07H)，4.80(m，1H)，3.53(m，1H)，3.36(m，1H)，2.30-1.77(m，4h)，1.40/1.15(s，3.8H+5.2H)。LC(条件1)：RT＝1.52min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C19H22ClF3N3O2分析计算值：416.14；实测值：416.17。
实施例130，步骤d-e
Figure BPA00001245294301331
将Pd[P(t-Bu)3]2(48mg，0.094mmol)加到氯化物130c(245mg，0.589mmol)、硼酸酯1c(277.1mg，0.631mmol)、KF(106.7mg，1.836mmol)在DMF(6mL)中的混合物中，在110℃下加热～30小时。真空除去挥发性成分后，使残余物在CH2Cl2(50mL)、水(20mL)和饱和NaHCO3(1mL)之间分配。水层用CH2Cl2萃取(2次)，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得产物用Biotage系统纯化(硅胶，乙酸乙酯)，得到氨基甲酸酯130d(297mg，灰白色泡沫状物)。LC(条件1)：RT＝1.44min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C37H44F3N6O4分析计算值：693.34；实测值：693.34。
按照吡咯烷1e的制备法使130d脱保护，得到130e，为浅黄色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：11.88(br s，2H)，8.16(d，J＝1.5，1H)，8.02(d，J＝7.8，1H)，7.78(d，J＝8.1，2H)，7.66(brs，1H)，7.48(br s，1H)，7.37(d，J＝8.1，1H)，7.28(d，J＝8.3，2H)，4.18(m，2H)，2.99-2.93(m，2H)，2.89-2.83(m，2H)，2.11-2.01(m，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.82-1.67(m，4H)。注意：虽然对应于吡咯烷NH的宽峰信号出现在2.8-3.2ppm区，但无法测得其化学位移的实际范围。LC(条件1)：RT＝1.12min；均一性指数＞95％；LC/MS：对于[M+H]+C27H28F3N6分析计算值：493.23；实测值：493.14。
实施例130
(1R，1′R)-2，2′-((2-(三氟甲基)-4，4′-联苯二基)双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
Figure BPA00001245294301341
按照由吡咯烷1e制备实施例1的方法，由130e和Cap-1制备实施例130(TFA盐)。LC(条件1)：RT＝1.17min；均一性指数＞98％；LC/MS：对于[M+H]+C47H50F3N8O2分析计算值：815.40；实测值：815.44；HRMS：对于[M+H]+C47H50F3N8O2分析计算值：815.4009；实测值：815.4013。
实施例131.1-1至实施例131.1-2
Figure BPA00001245294301342
在附加Cap-4后，通过中间体1-6e的中间性，按照实施例28的类似方式制备实施例131.1-1至实施例131.1-2。
实施例131.1-1
((1R)-2-(((1S)-1-(5-(4′-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
用Pd/C/H2由1-6e脱去CBz氨基甲酸酯后，附加上Cap-1。
LCMS条件：Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。tR＝1.42min。
LRMS：对于C45H49N8O4分析计算值：765.39；实测值：765.38(M+H)+。
HRMS：对于C45H49N8O4分析计算值：765.3877；实测值：765.3905(M+H)+。
实施例131.1-2
((1R)-2-(甲基((1S)-1-(5-(4′-(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301352
用Pd/C/H2由1-6e脱去CBz氨基甲酸酯后，附加上Cap-14。
LCMS条件：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。tR＝1.45min(＞95％)。
LRMS：对于C48H52N8O4分析计算值：805.42；实测值：805.41(M+H)+。
HRMS：对于C48H52N8O4分析计算值：805.4190；实测值：805.4214(M+H)+。
实施例131.2
(2R)-2-(二甲基氨基)-N-甲基-2-苯基-N-((1S)-1-(5-(4′-(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)乙酰胺
Figure BPA00001245294301361
在附加上Cap-1后，通过中间体1-6e的中间性，按照实施例131.1-1和实施例131.1-2的类似方式制备实施例131.2。
用Pd/C/H2脱去CBz氨基甲酸酯后，附加上Cap-14。
LCMS条件：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。tR＝1.28min
LRMS：对于C48H54N8O2分析计算值：775.44；实测值：775.45(M+H)+。
HRMS：对于C48H54N8O2分析计算值：775.4448；实测值：775.4460(M+H)+。
实施例132
(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
Figure BPA00001245294301371
实施例132，步骤a-b
Figure BPA00001245294301372
在5分钟内，将Br2(7.63g，47.74mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液滴加到1-(6-溴吡啶-3-基)乙酮(9.496g，47.47mmol)和48％HBr(0.4mL)的冷却(冰/水)CH2Cl2(105mL)溶液中。40分钟后移开冷却浴，在环境温度下继续搅拌约66小时。滤出所形成的固体饼，用CH2Cl2洗涤后真空干燥，得到杂质132a(15.94g，灰白色固体)。
将Boc-L-脯氨酸(9.70g，45.06mmol)一次性加到粗产物132a(15.4g)和CH3CN(150mL)的不均匀混合物中，随即在6分钟内滴加Et3N(13.0mL，93.2mmol)。将反应混合物搅拌50分钟，真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配。CH2Cl2层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，所得产物用快速色谱法纯化(硅胶；样品与洗脱溶剂一起加样；25％EtOAc/己烷)，得到132b(11.44g，高粘稠的黄色油状物)。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：8.95(m，1H)，8.25-8.21(m，1H)，7.88(d，J＝8.3，1H)，5.65-5.46(m，2H)，4.36-4.31(m，1H)，3.41-3.29(m，2H)，2.36-2.22(m，1H)，2.14-2.07(m，1H)，1.93-1.83(m，2H)，1.40和1.36(两个s，9H)。
LC(条件1)：RT＝2.01min；均一性指数＞90％。
LC/MS：对于[M+Na]+C17H21NaBrN2O5分析计算值：435.05；实测值：435.15。
HRMS：对于[M+H]+C17H22BrN2O5分析计算值：413.0712；实测值：413.0717。
实施例132，步骤c
Figure BPA00001245294301381
将酮酸酯132b(1.318g，3.19mmol)和NH4OAc(2.729g，35.4mmol)在二甲苯(18mL)中的混合物在140℃下用微波加热90分钟。真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配，向其中加入足够的饱和NaHCO3溶液以中和含水介质。水相用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用Biotage系统纯化(硅胶；50％EtOAc/己烷)，得到咪唑132c(1.025g，灰白色泡沫状物)。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm，400MHz)：12.33/12.09/12.02(brm，1H)，8.74(d，J＝2.3，0.93H)，8.70(表观br s，0.07H)，8.03/7.98(第一峰的dd，J＝8.3，1H)，7.69/7.67(br m，1H)，7.58/7.43(第一峰的d，J＝8.3，1H)，4.80(m，1H)，3.53(m，1H)，3.36(m，1H)，2.33-2.11(m，1H)，2.04-1.79(m，3H)，1.39/1.15(表观br s，3.9H+5.1H)。
LC(条件1)：RT＝1.52min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C17H22BrN4O2分析计算值：393.09；实测值：393.19。
HRMS：对于[M+H]+C17H22BrN4O2分析计算值：393.0926；实测值：393.0909。
实施例132，步骤d-e
Figure BPA00001245294301382
将Pd(Ph3P)4(115.1mg，0.10mmol)加到溴化物132c(992mg，2.52mmol)、硼酸酯1c(1.207g，2.747mmol)、NaHCO3(698.8mg，8.318mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(18mL)和水(4mL)中的混合物中。反应混合物用氮气吹扫，用油浴在90℃下加热37小时后，冷却至环境温度。将所形成的悬浮液过滤，依次用水和1，2-二甲氧基乙烷洗涤，真空干燥。由粗产物固体制备硅胶筛目，并进行快速色谱法处理(硅胶；EtOAc)，得到氨基甲酸酯132d，为白色固体，在环境条件下静置时略为变黄(1.124g)。1H NMR表明该样品含有残留MeOH，产物/MeOH的摩尔比为1.3。
LC(条件1)：RT＝1.71min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C35H44N7O4分析计算值：626.35；实测值：626.64。
HRMS：对于[M+H]+C35H44N7O4分析计算值：626.3455；626.3479。
氨基甲酸酯132d(217mg)用25％TFA/CH2Cl2(3.6mL)处理，并在环境条件下搅拌6小时。真空除去挥发性成分后，所得产物用MCX柱进行游离碱化(MeOH洗涤；2.0M NH3/MeOH洗脱)，得到132e，为暗黄色泡沫状物，静置时逐渐固化(150.5mg；质量超过理论收率)。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：11.89(very broad，2H)，9.01(d，J＝1.8，1H)，8.13(dd，J＝8.3，2.2，1H)，8.07(d，J＝8.6，2H)，7.92(d，J＝8.3，1H)，7.83(d，J＝8.5，2H)，7.61(br s，1H)，7.50(br s，1H)，4.18(m，2H)，3.00-2.93(m，2H)，2.90-2.82(m，2H)，2.11-2.02(m，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.83-1.67(m，4H)。[注意：未观察到可交换的吡咯烷氢]。
LC(条件1)：RT＝1.21min，均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C25H28N7分析计算值：426.24；实测值：426.40。
HRMS：对于[M+H]+C25H28N7分析计算值：426.2406；实测值：426.2425。
实施例132
(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
Figure BPA00001245294301401
将HATU(41.4mg，0.109mmol)加到吡咯烷132e(23.1mg，0.054mmol)、(i-Pr)2EtN(40μL，0.23mmol)和Cap-1(25.3mg，0.117mmol)与DMF(1.5mL)的混合物中，并将混合物在环境温度下搅拌1小时。真空除去挥发性成分后，残余物先用MCX(MeOH洗涤；2.0MNH3/MeOH洗脱)纯化，然后用反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)纯化，得到实施例132的TFA盐(39.2mg，黄色泡沫状物)。
LC(条件1)：RT＝1.37min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C45H50N9O2分析计算值：748.41；实测值：748.53。
HRMS：对于[M+H]+C45H50N9O2分析计算值：748.4087；实测值：748.4090。
采用制备实施例132的相同方法和合适试剂，由132e制备实施例133-135的TFA盐。
实施例133-135
Figure BPA00001245294301402
Figure BPA00001245294301403
Figure BPA00001245294301411
实施例136
(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-甲基苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
实施例136，步骤a和b
Figure BPA00001245294301413
将PdCl2(Ph3P)2(257mg，0.367mmol)加到1-溴-4-碘-2-甲基苯(3.01g，10.13mmol)和三正丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(3.826g，10.59mmol)的二烷(45mL)溶液中，在80℃下加热～17小时。反应混合物用水(15mL)处理，冷却至～0℃(冰/水)，然后在7分钟内分批加入NBS(1.839g，10.3mmol)。搅拌约25分钟后，真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配。水层用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用重力色谱法纯化(硅胶；4％EtOAc/己烷)，得到溴化物136a(2.699g，带褐色的黄色固体)；该样品不纯，其中含有锡烷衍生的杂质。1H NMR(CDCl3，δ＝7.24，400MHz)：7.83(s，1H)，7.63(s，2H)，4.30(s，2H)，2.46(s，3H)。
在3分钟内，将136a(2.69g，＜9.21mmol)的CH3CN(15mL)溶液滴加到(S)-Boc-脯氨酸(2.215g，10.3mmol)和Et3N(1.40mL，10.04mmol)的CH3CN(30mL)溶液中并搅拌90分钟。真空除去挥发性成分后，使残余物在水和CH2Cl2之间分配，有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；15-20％EtOAc/己烷)，得到136b(2.74g，粘性无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：7.98(m，1H)，7.78(d，J＝8.3，1H)，7.72-7.69(m，1H)，5.61-5.41(m，2H)，4.35-4.30(m，1H)，3.41-3.30(m，2H)，2.43(s，3H)，2.33-2.08(m，2H)，1.93-1.83(m，2H)，1.40/1.36(s，9H)。
LC(条件1)：RT＝1.91min；均一性指数＞95％。
LC/MS：对于[M+Na]+C19H24BrNNaO5分析计算值：448.07；实测值：448.10。
实施例136，步骤c
Figure BPA00001245294301422
将酮酸酯136b(1.445g，3.39mmol)和NH4OAc(2.93g，38.0mmol)在二甲苯(18mL)中的混合物在140℃下用微波加热80分钟。真空除去挥发性成分后，小心地使残余物在CH2Cl2和水之间分配，向其中加入足够的饱和NaHCO3溶液以中和含水介质。水相用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。粗产物用快速色谱法纯化(硅胶，40％EtOAc/己烷)，得到咪唑136c(1.087g，灰白色固体)。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：12.15/11.91/11.84(br s，1H)，7.72-7.24(m，4H)，4.78(m，1H)，3.52(m，1H)，3.38-3.32(m，1H)，2.35(s，3H)，2.28-1.77(m，4H)，1.40/1.14(s，9H)。
LC(条件1)：RT＝1.91min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C19H25BrN3O2分析计算值：405.96；实测值：406.11。
实施例136，步骤d
Figure BPA00001245294301431
将PdCl2dppf.CH2Cl2(50.1mg，0.061mmol)加到装有溴化物136c(538.3mg，1.325mmol)、二硼酸二频哪醇酯(666.6mg，2.625mmol)、KOAc(365.8mg，3.727mmol)和DMF(10mL)的混合物的压力管中。反应混合物用N2吹扫，在80℃下加热24.5小时。真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配，向其中加入足够的饱和NaHCO3溶液以使含水介质的pH呈中性。水相用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得产物用Biotage系统纯化(硅胶，40-50％EtOAc/己烷)，得到硼酸酯136d(580mg，白色泡沫状物)。根据1H NMR，该样品含有残留频哪醇，产物/频哪醇的比率为～3。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：12.16/11.91/11.83(br s，1H)，7.63-7.25(m，4H)，4.78(m，1H)，3.53(m，1H)，3.39-3.32(m，1H)，2.48/2.47(s，3H)，2.28-1.78(m，4H)，1.40/1.14/1.12(br s，9H)，1.30(s，12H)。
LC (条件1)：RT＝1.62min。
LC/MS：对于[M+H]+C25H37BN3O4分析计算值：454.29；实测值：454.15。
实施例136，步骤e-f
Figure BPA00001245294301441
按照联芳132d制备中所述的偶合条件，由溴化物132c和硼酸酯136d制备联芳136e。
LC(条件1a)：RT＝1.32min；均一性指数＞90％。
LC/MS：对于[M+H]+C36H45N7O4分析计算值：640.36；实测值：640.66。
按照吡咯烷132e的制备法，对联芳136e进行脱保护，得到136f，为浅黄色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.50，400MHz)：11.88(br s，2H)，9.02(d，J＝2，1H)，8.12(dd，J＝8.4，2.3，1H)，7.67(s，1H)，7.64-7.62(m，2H)，7.50(d，J＝8.3，1H)，7.46(br s，1H)，7.40(d，J＝7.8，1H)，4.21-4.14(m，2H)，3.00-2.93(m，2H)，2.90-2.82(m，2H)，2.40(s，3H)，2.11-2.01(m，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.82-1.66(m，4H)。[注意：吡咯烷NH的信号出现在3.22-2.80区，且太宽以致无法确定化学位移]。
LC(条件1)：RT＝0.84min。
LC/MS：对于[M+H]+C26H30N7分析计算值：440.26；实测值：440.50。
实施例136
(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-甲基苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
Figure BPA00001245294301451
按照由132e制备实施例132的方法，由136f合成实施例136(TFA盐)。
1.05min(条件1)；＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C46H52N9O2分析计算值：762.42，实测值：762.77。
HRMS：对于[M+H]+C46H52N9O2分析计算值：762.4244；实测值：762.4243。
实施例138
((1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧基羰基)氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-甲基苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301452
实施例138同样由吡咯烷136f和Cap-4制备。
1.60min(条件1)；＞98％
LC/MS：对于[M+H]+C46H48N9O6分析计算值：822.37；实测值：822.74。
HRMS：对于[M+H]+C46H48N9O6分析计算值：822.3728；实测值：822.3760。
实施例139
N-((1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-乙酰氨基-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)乙酰胺
Figure BPA00001245294301461
实施例139，步骤a
Figure BPA00001245294301462
将HATU(99.8mg，0.262mmol)加到132e(54.1mg，0.127mmol)、(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸(98.5mg，0.392mmol)和i-Pr2EtN(100μL，0.574mol)的混合物中，并将反应混合物搅拌70分钟。真空除去挥发性成分后，残余物用反相HPLC纯化(H2O/MeOH/TFA)，其中HPLC流出物用过量的2.0N NH3/MeOH处理后，真空除去挥发性成分。使所得产物在CH2Cl2和水之间分配，水相用CH2Cl2萃取(2次)。合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到氨基甲酸酯139a(82.3mg，白色泡沫膜状物)。
LC(条件1)：RT＝1.97min；均一性指数＞95％。
LC/MS：对于[M+H]+C51H58N9O6分析计算值：892.45；实测值：892.72。
实施例139b，步骤b
Figure BPA00001245294301463
采用由132d制备吡咯烷132e所述方法，使氨基甲酸酯139a脱保护得到胺139b。
LC(条件1)：RT＝1.37min；均一性指数＞95％。
LC/MS：对于[M+H]+C41H42N9O2分析计算值：692.35；实测值：692.32。
实施例139
N-((1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-乙酰氨基-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-3-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)乙酰胺
Figure BPA00001245294301471
将乙酸酐(20μL，0.212mmol)加到139b(31.2mg，0.045mmol)的DMF(1.5mL)溶液中，并将反应混合物搅拌1小时。将NH3/MeOH(1.0mL 2N溶液)加到反应混合物中并继续搅拌100分钟。真空除去挥发性成分，所得粗产物用反相HPLC纯化(H2O/MeOH/TFA)，得到实施例139的TFA盐(24.1mg，浅黄色固体)。
LC(条件1)：RT＝1.53min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C45H46N9O4分析计算值：776.37；实测值：776.38。
HRMS：对于[M+H]+C45H46N9O4分析计算值：776.3673；实测值：776.3680。
实施例140
((1R)-2-((2S)-2-(5-(4-(5-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-吡啶基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
实施例140，步骤a
Figure BPA00001245294301482
将HATU(19.868g，52.25mmol)加到N-Cbz-L-脯氨酸(12.436g，49.89mmol)和2-氨基-1-(4-溴苯基)乙酮的HCl盐(12.157g，48.53mmol)在DMF(156mL)中的不均匀混合物中。使混合物在冰水浴中降温后，随即在13分钟内向其中滴加N，N-二异丙基乙胺(27mL，155mmol)。加完碱后，移开冷却浴，再将反应混合物搅拌50分钟。真空除去挥发性成分；将水(125mL)加到所得粗产物固体中，并搅拌约1小时。将灰白色固体过滤，用大量水洗涤后，真空干燥，得到酮酰胺140a(20.68g，白色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：8.30(m，1H)，7.91(m，2H)，7.75(d，J＝8.5，2H)，7.38-7.25(m，5H)，5.11-5.03(m，2H)，4.57-4.48(m，2H)，4.33-4.26(m，1H)，3.53-3.36(m，2H)，2.23-2.05(m，1H)，1.94-1.78(m，3H)。
LC(条件1)：RT＝1.65min；均一性指数98％。
LC/MS：对于[M+H]+C21H22BrN2O4分析计算值：445.08；实测值：445.31。
实施例140，步骤b
按照合成氨基甲酸酯132c中所述的方法，使酮酰胺140a(10.723g，24.08mmol)转化成140b，只是粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；50％EtOAc/己烷)。回收得到溴化物140b(7.622g，灰白色泡沫状物)。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：12.23/12.04/11.97(m，1H)，7.73-6.96(m，10H)，5.11-4.85(m，3H)，3.61(m，1H)，3.45(m，1H)，2.33-184(m，4H)。
LC(条件1)：RT＝1.42min；均一性指数＞95％。
LC/MS：对于[M+H]+C21H21BrN3O2分析计算值：426.08；实测值：426.31。
HRMS：对于[M+H]+C21H21BrN3O2分析计算值：426.0817；实测值：426.0829。
采用下列手性HPLC方法评价140b的光学纯度，观察到对映体过量为99％。
柱：Chiralpak AD，10um，4.6 x 50mm
溶剂：20％乙醇/庚烷(等度洗脱)
流速：1mL/min
波长：254nm
相对保留时间：1.82min(R)，5.23min(S)
实施例140，步骤c
Figure BPA00001245294301491
将Pd(Ph3P)4(208mg，0.180mmol)加到装有溴化物140b(1.80g，4.22mmol)、二硼酸二频哪醇酯(2.146g，8.45mmol)、KOAc(1.8g，11.0mmol)和1，4-二
Figure BPA00001245294301492
烷(34mL)的混合物的压力管中。反应瓶用氮气吹扫后，盖上盖子，用油浴在80℃下加热23小时。真空除去挥发性成分后，小心地使残余物在CH2Cl2(70mL)和含水介质(22mL水+5mL饱和NaHCO3溶液)之间分配。水层用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。油性残余物从EtOAc/己烷中结晶出来，得到两批硼酸酯140c(1.52g，黄色固体)。使母液真空蒸发后，所得产物用快速色谱法纯化(硅胶；20-35％EtOAc/CH2Cl2)，得到另一批140c，为灰白色固体，含有残留频哪醇(772mg)。
LC(条件1)：RT＝1.95min。
LC/MS：对于[M+H]+C27H33BN3O4分析计算值：474.26；实测值：474.31。
实施例140，步骤d-e
Figure BPA00001245294301501
通过采用合成联芳132d中所述相同方法，将芳基溴化物132c与硼酸酯140c偶合，得到140d。该样品含有132c的脱溴形式，为杂质。无需进一步纯化便可进行下一步骤。
LC(条件1)：RT＝1.72min；均一性指数～85％。
LC/MS：对于[M+H]+C38H42N7O4分析计算值：660.33；实测值：660.30。
将10％Pd/C(226mg)、联芳140d(1.25g)和MeOH(15mL)的混合物在氢气囊下搅拌～160小时，其中如有需要，定时补充氢气供应。将反应混合物通过硅藻土
Figure BPA00001245294301502
垫过滤，真空蒸发滤液，得到粗产物140e(911mg，带黄色的褐色泡沫状物)。无需进一步纯化便可进行下一步骤。
LC(条件1)：RT＝1.53min。
LC/MS：对于[M+H]+C30H36N7O2分析计算值：526.29；实测值：526.23。
实施例140，步骤f-g
Figure BPA00001245294301511
依次采用用于合成实施例132的酰胺形成和Boc脱保护方案，通过氨基甲酸酯140f的中间性，由140e和Cap-4制备吡咯烷140g。
LC(条件1)：RT＝1.09min；均一性指数～94％。
LC/MS：对于[M+H]+C35H37N8O3分析计算值：617.30；实测值：617.38。
实施例140
((1R)-2-((2S)-2-(5-(4-(5-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-吡啶基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301512
采用由中间体132e制备实施例132中所述的方法，由吡咯烷140g和Cap-1合成实施例140的TFA盐。
1.15min(条件1)；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C45H40N7O4分析计算值：778.38；实测值：778.48。
HRMS：对于[M+H]+C45H40N7O4分析计算值：778.3829；实测值：778.3849。
实施例141-143的TFA盐按类似方式由中间体140g和合适试剂合成。
实施例141-143
Figure BPA00001245294301521
Figure BPA00001245294301531
实施例144
((1R)-2-((2S)-2-(5-(4-(5-(2-((2S)-1-(4-吗啉基羰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-吡啶基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301532
将吗啉-4-甲酰氯(8.5mg，0.057mmol)的DMF(1.5mL)溶液加到i-Pr2EtN(20μL，0.115mmol)和140g(27.3mg，0.044mmol)的混合物中并搅拌100分钟。真空除去挥发性成分，残余物用反相HPLC纯化(H2O/MeOH/TFA)，得到实施例144的TFA盐(34.6mg，黄色泡沫状物)。
1.17min(条件1)；＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C40H44N9O5分析计算值：730.35；实测值：730.42。
HRMS：对于[M+H]+C40H44N9O5分析计算值：730.3465；实测值：730.3477。
实施例145
(2，2′-联吡啶-5，5′-二基双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2，1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
实施例145，步骤a-b
Figure BPA00001245294301542
将Pd(Ph3P)4(9.6mg，0.008mmol)和LiCl(28mg，0.67mmol)加到芳基溴化物132c(98.7mg，0.251mmol)和六甲基二锡(51.6mg，0.158mmol)的混合物中，在80℃下加热～3天。真空除去挥发性成分，所得粗产物依次用快速色谱法(硅胶；0-10％MeOH/EtOAc)和反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)纯化。HPLC流出物用过量的2.0N NH3/MeOH中和，真空除去挥发性成分。使残余物在CH2Cl2和水之间分配，水相用CH2Cl2洗涤(2次)。合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到氨基甲酸酯145a(8.7mg，油薄膜状物)。
LC(条件1)：RT＝1.68min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C34H43N8O4分析计算值：627.34；实测值：627.47。
按照由132d制备132e的方法，将氨基甲酸酯145a精制成吡咯烷145b。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：12.02(br信号，2H)，9.04(d，J＝1.6，2H)，8.34(d，J＝8.3，2H)，8.20(dd，J＝8.3，2.3，2H)，7.67(br s，1H)，4.21(m，2H)，3.00-2.85(m，4H)，2.12-2.04(m，2H)，1.95-1.68(m，6H)。[注意：未观察到吡咯烷-NH信号]。
LC(条件1)：RT＝1.17min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C24H27N8分析计算值：427.24；实测值：427.13。
实施例145
(2，2′-联吡啶-5，5′-二基双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2，1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
Figure BPA00001245294301551
按照由132e制备实施例132的方法，由145b合成实施例145(TFA盐)。
LC(条件1)：RT＝1.63min；均一性指数98％。
LC/MS：对于[M+H]+C44H45N10O6分析计算值：809.35；实测值：809.40。
实施例146
(1R)-2-((2S)-2-(5-(5-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
Figure BPA00001245294301552
实施例146，步骤a
在15分钟内，将n-BuLi(12.0mL 2.5M/己烷，30mmol)滴加到2，5-二溴吡啶(6.040g，25.5mmol)的冷却(-78℃)甲苯(300mL)半溶液中并搅拌2.5小时。在7分钟内分批加入2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯(2.809g，12.87mmol)并在-78℃下继续搅拌1.5小时。用-60℃浴替换-78℃浴，使其在2.5小时内升温至-15℃。反应物用饱和NH4Cl溶液(20mL)猝灭，让混合物解冻至环境温度，分离有机层后，真空蒸发。所得粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；15％EtOAc/己烷)，得到红褐色半固体，再用己烷洗涤，以除去有色残余物。回收得到吡啶146a(842mg，灰色固体)。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：8.89(d，J＝2.3，1H)，8.30(dd，J＝8.4，2.4，1H)，7.90(d，J＝8.3，1H)，7.03(br t，J＝5.7；0.88H)，6.63(表观br s，0.12H)，4.55(d，J＝5.8，2H)，1.40/1.28(两个表观s，7.83H+1.17H)。
LC(条件1)：RT＝2.00min；均一性指数＞95％。
LC/MS：对于[M+Na]+C12H15BrNaN2O3分析计算值：337.02；实测值：337.13。
实施例146，步骤b
Figure BPA00001245294301561
在3分钟内，将48％HBr(1.0mL)滴加到氨基甲酸酯146a(840mg，2.66mmol)的二
Figure BPA00001245294301562
烷(5.0mL)溶液中，将反应混合物在环境温度下搅拌17.5小时。将沉淀物过滤，用二
Figure BPA00001245294301563
烷洗涤后真空干燥，得到胺146b的HBr盐(672.4mg；灰白色固体，未测出HBr盐的准确摩尔当量)。1HNMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：8.95(d，J＝2.3，1H)，8.37(dd，J＝8.4，2.3，1H)，8.2(br s，3H)，8.00(d，J＝8.3，1H)，4.61(s，2H)。
LC(条件1)：RT＝0.53min。
LC/MS：对于[M+H]+C7H8BrN2O分析计算值：214.98；实测值：215.00。
实施例146，步骤c
Figure BPA00001245294301571
在15分钟内，将i-Pr2EtN(2.3mL，13.2mmol)滴加到胺146b(1.365g)、(S)-Boc-脯氨酸(0.957g，4.44mmol)和HATU(1.70g，4.47mmol)在DMF(13.5mL)中的不均匀混合物中并在环境温度下搅拌1小时。真空除去挥发性成分，使残余物在EtOAc(40mL)和含水介质(20mL水+1mL饱和NaHCO3溶液)之间分配。水层用EtOAc(20mL)洗涤，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；40-50％EtOAc/己烷)，得到酮酰胺146c(1.465g，暗黄色泡沫状物)。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：8.90(d，J＝2.3，1H)，8.30(dd，J＝8.5，2.4，1H)，8.01-8.07(m，1H)，7.90(d，J＝8.3，1H)，4.6(m，1H)，4.64(dd，J＝19.1，5.5，1H)；4.19(m，1H)，3.39(m，1H)，3.32-3.26(m，1H)，2.20-2.01(m，1H)，1.95-1.70(m，3H)，1.40/1.35(两个表观s，9H)。
LC(条件1)：RT＝1.91min。
LC/MS：对于[M+Na]+C17H22BrN3NaO4分析计算值：434.07；实测值：433.96。
实施例146，步骤d
Figure BPA00001245294301572
将酮酰胺146c(782.2mg，1.897mmol)和NH4OAc(800mg，10.4mmol)在二甲苯中的混合物用微波(140℃)加热90分钟。真空除去挥发性成分，小心地使残余物在CH2Cl2和水之间分配，向其中加入足够的饱和NaHCO3溶液以使之中和。水相用CH2Cl2萃取(2次)，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；50％CH2Cl2/EtOAc)，得到咪唑146d(552.8mg，灰白色固体)。1H NMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：12.49/12.39/12.15/12.06(br s，1H)，8.62(表观br s，0.2H)，8.56(d，J＝2，0.8H)，8.02(br d，J＝8.5，0.2H)，7.97(br d，J＝7.8，0.8H)，7.77(d，J＝8.6，0.8H)，7.72(d，J＝8.6，0.2H)，7.61-7.49(m，1H)，4.93-4.72(m，1H)，3.53(m，1H)，3.41-3.32(m，1H)，2.33-1.77(m，4H)，1.39/1.14(表观br s，3.7H+5.3H)。
LC(条件1)：RT＝1.67min；均一性指数＞95％。
LC/MS：对于[M+Na]+C17H21BrN4NaO2分析计算值：415.08；实测值：415.12。
实施例146，步骤e
146e(R1＝H，R2＝SEM)或(R1＝SEM，R2＝H)
将NaH(60％；11.6mg，0.29mmol)一次性加到咪唑146d(80mg，0.203mmol)和DMF(1.5mL)的不均匀混合物中，并在环境条件下搅拌30分钟。在2分钟内将SEM-Cl(40μL，0.226mmol)滴加到上述反应混合物中，并继续搅拌14小时。真空除去挥发性成分，使残余物在水和CH2Cl2之间分配。水层用CH2Cl2萃取，合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。粗产物用快速色谱法纯化(硅胶；20％EtOAc/己烷)，得到146e(87.5mg，粘性无色油状物)。未测出146e的准确区域化学结构(regiochemistry)。1HNMR(CDCl3，δ＝7.4ppm；400MHz)：8.53(d，J＝2.2，1H)，7.90-7.72(m，2H)，7.52(s，1H)，5.87(m，0.46H)，5.41(m，0.54H)，5.16(d，J＝10.8，1H)，5.03-4.85(m，1H)，3.76-3.42(m，4H)，2.54-1.84(m，4H)，1.38/1.19(br s，4.3H+4.7H)，0.97-0.81(m，2H)，-0.03(s，9H)。
LC(条件1)：RT＝2.1min。
LC/MS：对于[M+H]+C23H36BrN4O3Si分析计算值：523.17；实测值：523.24。
实施例146，步骤f
Figure BPA00001245294301591
146f：(R1＝H，R2＝SEM)或(R1＝SEM，R2＝H)
将Pd(Ph3P)4(24.4mg，0.021mmol)加到咪唑146e(280mg，0.535mmol)、1c(241.5mg，0.55mmol)和NaHCO3(148.6mg，1.769mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(4.8mL)和水(1.6mL)中的混合物中。反应混合物用氮气吹扫，用油浴在80℃下加热～24小时，然后真空除去挥发性成分。使残余物在CH2Cl2和水之间分配，有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。粗产物依次用Biotage系统(硅胶；75-100％EtOAc/己烷)和反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)纯化。HPLC流出物用2M NH3/MeOH中和后真空蒸发，使残余物在水和CH2Cl2之间分配。有机层经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到146f(162mg，白色泡沫状物)。
LC(条件1)：RT＝2.1min。
LC/MS：对于[M+H]+C41H58N7O5Si分析计算值：756.43；实测值：756.55。
实施例146，步骤g
Figure BPA00001245294301592
氨基甲酸酯146f(208mg，0.275mmol)用25％TFA/CH2Cl2(4.0mL)处理并在环境温度下搅拌10小时。真空除去挥发性成分，残余物先用MCX进行游离碱化(MeOH洗涤；2.0M NH3/MeOH洗脱)，然后用反相HPLC纯化(H2O/MeOH/TFA)，所得产物再次进行游离碱化(MCX)，得到吡咯烷146g(53.7mg，油薄膜状物)。1HNMR(DMSO，δ＝2.5ppm；400MHz)：1.88(表观br s，2H)，8.83(d，J＝2.1，1H)，8.07(dd，J＝8.3/2.3，1H0，7.87(d，J＝8.5，1H)，7.84(d，J＝8.3，2H)，7.71(d，J＝8.3，2H)，7.55(s，1H)，7.50(br s，1H)，4.18(m，2H)，3.00-2.94(m，2H)，2.89-2.83(m，2H)，2.11-2.02(m，2H)，1.95-1.86(m，2H)，1.83-1.67(m，4H)。
LC(条件1)：RT＝0.95min；均一性指数＞98％。
LC/MS：对于[M+H]+C25H28N7分析计算值：426.24；实测值：426.27。
实施例146
(1R)-2-((2S)-2-(5-(5-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
Figure BPA00001245294301601
按照由中间体132e制备实施例132的方法，由吡咯烷146g合成实施例146(TFA盐)。
LC(条件1)：RT＝1.42min；均一性指数96.5％。
LC/MS：对于[M+H]+C45H50N9O2分析计算值：748.41；实测值：748.57。
HRMS：对于[M+H]+C45H50N9O2分析计算值：748.4087；实测值：748.4100。
实施例147
((1R)-2-((2S)-2-(5-(5-(4-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧基羰基)氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294301611
采用Cap-4，同样由中间体146g制备实施例147的TFA盐。
LC(条件1)：RT＝1.66min；均一性指数95％。
LC/MS：对于[M+H]+C45H46N9O6分析计算值：808.36；实测值：808.55。
实施例148
(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-5，2-二基(4R)-1，3-噻唑烷-4，3-二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
实施例148，步骤a
在50℃下，将溴(1.3mL，25.0mmol)的15mL冰乙酸溶液滴加到4-4’-二乙酰基联苯(3.0g，12.5mmol)的40mL乙酸溶液中。完成加液后，将混合物在室温下搅拌过夜。将析出的产物滤出，再次用氯仿结晶，得到1，1’-(联苯-4，4’-二基)双(2-溴乙酮)(3.84g，77.5％)，为白色固体。
1H NMR(500MHz，氯仿-D)δppm 8.09(4H，d，J＝7.93Hz)7.75(4H，d，J＝8.24Hz)4.47(4H，s)。
标称/LRMS-对于分析计算值：369.07；实测值：(M+H)+-397.33，(M-H)--395.14。
实施例148，步骤b
Figure BPA00001245294301621
将二甲酰基氨化钠(Sodium diformylamide)(3.66g，38.5mmol)加到1，1′-(联苯-4，4’-二基)双(2-溴乙酮)(6.1g，15.4mmol)的85mL乙腈悬浮液中。将混合物回流加热4小时并减压浓缩。将残余物悬浮于300mL 5％HCl的乙醇溶液中，回流加热3.5小时。使反应物冷却至室温，在冰箱内放置1小时。收集析出的固体，依次用200mL 1∶1乙醇/乙醚和200mL戊烷洗涤，真空干燥，得到1，1′-(联苯-4，4′-二基)双(2-氨基乙酮)二盐酸盐(4.85g，92％)。无需进一步骤纯化而进行。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 8.47-8.55(4H，m)8.11-8.17(4H，m)8.00(4H，d，J＝8.42Hz)4.59-4.67(4H，m)。
LCMS-Phenomenex C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA，tR＝0.44分钟，对于C16H16N2O2分析计算值：268.31；实测值：269.09(M+H)+。
实施例148，步骤c
Figure BPA00001245294301622
在5分钟内，向1，1′-(联苯-4，4′-二基)双(2-氨基乙酮)二盐酸盐(0.7g，2.1mmol)、N-(叔丁氧基羰基)-L-硫代脯氨酸(0.96g，4.2mmol)和HATU(1.68g，4.4mmol)在14mL DMF的搅拌溶液中滴加二异丙基乙胺(1.5mL，8.4mmol)。将所得透明黄色溶液在室温下搅拌过夜(14小时)后减压浓缩。使残余物在20％甲醇/氯仿和水之间分配。水相用20％甲醇/氯仿洗涤一次。合并的有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后减压浓缩。粗产物用硅胶色谱法处理(用10-50％乙酸乙酯/CH2Cl2梯度洗脱)，得到(4S，4′S)-4，4′-(2，2′-(联苯-4，4′-二基)双(2-氧代乙烷-2，1-二基))双(氮烷二基)双(氧代亚甲基)二噻唑烷-3-甲酸叔丁酯(0.39g，27％)，为橙色泡沫状物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.38(2H，s)8.12(4H，d，J＝8.56Hz)7.94(4H，d，J＝8.56Hz)4.60-4.68(4H，m)4.33-4.38(2H，m)3.58-3.68(2H，m)3.38(2H，s)3.08-3.18(2H，m)1.40(18H，s)。
LCMS-Water-Sunfire C-184.6 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝10％甲醇90％水0.1％TFA，B＝90％甲醇10％水0.1％TFA，tR＝3.69min.，对于C34H42N4O8S2分析计算值：698.85；实测值：699.12(M+H)+。
实施例148，步骤d
Figure BPA00001245294301631
将(4S，4′S)-4，4′-(5，5′-(联苯-4，4′-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))二噻唑烷-3-甲酸叔丁酯(0.39g，0.56mmol)和乙酸铵(0.43g，5.6mmol)在微波反应容器中悬浮于8mL邻二甲苯中。将混合物在标准微波条件下于140℃加热70分钟后，减压浓缩。将残余物溶于30mL 20％甲醇/氯仿中，用10％NaHCO3(水溶液)洗涤。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后减压浓缩。粗产物用硅胶色谱法处理(用1-6％甲醇/CH2Cl2梯度洗脱)，得到(4S，4′S)-4，4′-(5，5′-(联苯-4，4′-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))二噻唑烷-3-甲酸叔丁酯(0.15g，41％)，为黄色固体。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.02(2H，s)7.70-7.88(10H，m)5.28-5.37(2H，m)4.68(2H，d，J＝9.16Hz)4.47-4.55(2H，m)3.46(2H，s)3.23(2H，s)1.26-1.43(18H，m)。
LCMS-Luna C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，3.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵，tR＝1.96min.，对于C34H40N6O4S2分析计算值：660.85；实测值：661.30(M+H)+，659.34(M-H)-。
实施例148，步骤e
Figure BPA00001245294301641
向(4S，4′S)-4，4′-(5，5′-(联苯-4，4′-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))二噻唑烷-3-甲酸叔丁酯的1mL二烷溶液中加入0.3mL 4.0M HCl的二
Figure BPA00001245294301643
烷溶液。将反应物在室温下搅拌3小时后，减压浓缩。所得黄褐色固体经真空干燥，得到4，4′-双(2-((S)-噻唑烷-4-基)-1H-咪唑-5-基)联苯四盐酸盐(0.12g，100％)，为黄色固体。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 8.09(2H，s)8.01(4H，d，J＝8.55Hz)7.90(4H，d，J＝8.55Hz)5.08(2H，t，J＝6.10Hz)4.38(2H，d，J＝9.16Hz)4.23(2H，d，J＝9.46Hz)3.48-3.54(2H，m，)3.35-3.41(2H，m)。
LCMS-Luna C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，4.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵，tR＝1.70min.，对于C24H24N6S2分析计算值：460.62；实测值：461.16(M+H)+，459.31(M-H)-。
实施例148
(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-5，2-二基(4R)-1，3-噻唑烷-4，3-二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
Figure BPA00001245294301651
向(4，4′-双(2-((S)-噻唑烷-4-基)-1H-咪唑-5-基)联苯四盐酸盐(0.028g，0.046mmol)、(R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酸(Cap-1，0.017g，0.0.10mmol)和HATU(0.039g，0.10mmol)在2mL DMF中的搅拌溶液中加入二异丙基乙胺(0.05mL，0.28mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜(16小时)并减压浓缩。粗产物用反相制备型HPLC纯化，得到(2R，2′R)-1，1′-((4S，4′S)-4，4′-(5，5′-(联苯-4，4′-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(噻唑烷-4，3-二基))双(2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酮)，为TFA盐(0.012g，21％)
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.59-7.91(20H，m)5.62(2H，dd，J＝6.56，2.59Hz)4.99(2H，d，J＝8.85Hz)4.82/4.35(2H，s)4.22(2H，s)3.42(2H，s)3.25(2H，s)2.35-2.61(12H，m)。
LCMS-Luna C-183.0 x 50mm，梯度0-100％B，7.0分钟内，1分钟停留时间，A＝5％乙腈，95％水，10mm乙酸铵，B＝95％乙腈，5％水，10mm乙酸铵流动相tR＝3.128min。
标称/LRMS-对于C44H46N8O2S2计算值：783.03；实测值：783.28(M+H)+。
准确/HRMS-对于C44H47N8O2S2计算值：783.3263；783.3246(M+H)+。
实施例151
(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双((1-甲基-1H-咪唑-4，2-二基)(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)
Figure BPA00001245294301661
实施例151，步骤a
Figure BPA00001245294301662
向1d即(2S，2′S)-2，2′-(4，4′-(联苯-4，4′-二基)双(1H-咪唑-4，2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)和碘甲烷(40μL，0.16mmol)在CH2Cl2(2mL)中的搅拌溶液中加入氢化钠(40％)(21.2mg，0.352mmol)。在环境温度下5小时后，将该溶液减压浓缩。粗制反应产物151a，即(2S，2′S)-2，2′-(4，4′-(联苯-4，4′-二基)双(1-甲基-1H-咪唑-4，2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(～90mg)无需进一步纯化便可用于下一步骤(纯度～85％)LCMS：对于C38H48N6O4分析计算值：652.83；实测值：653.51(M+H)+。应该理解，该反应可能有多种甲基化异构体，未尝试确定这些异构体。
实施例151，步骤b
Figure BPA00001245294301663
151a，即(2S，2′S)-2，2′-(4，4′-(联苯-4，4’-二基)双(1-甲基-1H-咪唑-4，2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.153mmol)用4M HCl/二烷(20mL)处理。在环境温度下3小时后，将该溶液减压浓缩。粗制反应产物，即4，4′-双(1-甲基-2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)联苯(～110mg，HCl盐)无需进一步纯化便可用于下一步骤(纯度～85％)LCMS：对于C28H32N6分析计算值：452.59；实测值：453.38(M+H)+。存在多种咪唑异构体并可继续向前进行。
实施例151
将HATU(58.9mg，0.150mmol)加到151b，即4，4′-双(1-甲基-2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)联苯(45.0mg，0.075mmol)、(i-Pr)2EtN(78μL，0.451mmol)和Cap-1，即(R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酸(0.026mg0.150mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物中。在环境温度下搅拌所得混合物，直到通过LC/MS分析确定偶合完成。用反相制备型HPLC完成纯化(Waters-Sunfire 30 X 100mm S5，在220nm下检测，流速30mL/min，0-90％B，14分钟内；A＝90％水，10％ACN，0.1％TFA，B＝10％水，90％ACN，0.1％TFA)，得到151，即(2R，2′R)-1，1′-((2S，2′S)-2，2′-(4，4′-(联苯-4，4’-二基)双(1-甲基-1H-咪唑-4，2-二基))双(吡咯烷-2，1-二基))双(2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酮)的两种异构体，均为TFA盐。
异构体1：(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双((1-甲基-1H-咪唑-4，2-二基)(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)(8mg，8.6％，无色蜡状物)。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.84-2.25(m，8H)2.32-2.90(m，12H)3.67-3.92(m，8H)4.07(s，2H)5.23(s，2H)5.51(s，2H)7.51-7.91(m，20H)。
HPLC Xterra 4.6 X 50mm，0-100％B，10分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％磷酸，B＝10％水，90％甲醇，0.2％磷酸，RT＝2.74min，98％。
LCMS：对于C48H54N8O2分析计算值：775.02；实测值：775.50(M+H)+。
异构体2：(1R，1′R)-2，2′-(4，4′-联苯二基双((1-甲基-1H-咪唑-4，2-二基)(2S)-2，1-吡咯烷二基))双(N，N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺)(10.2mg，11％，无色蜡状物).
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.83-2.26(m，8H)2.30-2.92(m，12H)3.68-3.94(m，8H)4.06(s，2H)5.25(d，J＝2.14Hz，2H)5.50(s，2H)7.52-7.91(m，20H)。
HPLC Xterra 4.6 X 50mm，0-100％B，10分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％磷酸，B＝10％水，90％甲醇，0.2％磷酸，RT＝2.75min，90％。
LCMS：对于C48H54N8O2分析计算值：775.02；实测值：775.52(M+H)+。
实施例152
Figure BPA00001245294301681
实施例152a-1，步骤a.
2-氯-5-(1-乙氧基乙烯基)嘧啶
Figure BPA00001245294301682
在氮气氛下，向5-溴-2-氯嘧啶(12.5g，64.62mmol)的无水DMF(175mL)溶液中加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(21.8mL，64.62mmol)和二氯双(三苯基膦)合钯(II)(2.27g，3.23mmol)。将混合物在100℃下加热3小时后，将其在室温下搅拌16小时。然后混合物用乙醚(200mL)稀释，并用KF水溶液(55g氟化钾/33mL水)处理。将两相混合物在室温下剧烈搅拌1小时后，通过硅藻土过滤。滤液用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤后干燥(Na2SO4)。最初的水相用乙醚萃取(2次)，有机相如上处理。用13.5g 5-溴-2-氯嘧啶重复进行，合并的萃取物用BiotageTM硅胶快速色谱法纯化(用3.0L 3％乙酸乙酯/己烷至25％乙酸乙酯/己烷，于65M柱上梯度洗脱)，得到标题化合物(18.2g，73％，白色结晶固体)。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.97(s，2H)，5.08(d，J＝3.7Hz，1H)，4.56(d，J＝3.4Hz，1H)，3.94(q，J＝7.0Hz，2H)，1.35(t，J＝7.0Hz，3H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.53min，均一性指数98.8％。
LCMS：对于C8H10ClN2O分析计算值：185.05；实测值：185.04(M+H)+。
HRMS：对于C8H10ClN2O分析计算值：185.0482；实测值：185.0490(M+H)+。
采用相同方法制备实施例152a-2和实施例152a-3：
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301692
Figure BPA00001245294301701
实施例152b-1，步骤b.
(S)-2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯或(S)-2-[5-(2-氯-嘧啶-5-基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294301702
在氮气氛、0℃下，将NBS(16.1g，90.7mmol)一次性加到2-氯-5-(1-乙氧基乙烯基)嘧啶(152a-1，18.2g，98.6mmol)在THF(267mL)和H2O(88mL)的搅拌溶液中。将混合物在0℃下搅拌1小时，再用更多的H2O稀释后，用乙酸乙酯萃取(2次)。合并的萃取物用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤后，干燥(Na2SO4)，过滤后蒸发溶剂。LCMSPhenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.52min(不对称峰)。LCMS：对于C6H14BrClN2O分析计算值：235.92；实测值：236.85(M+H)+。
实施例152c-1，步骤c.
将一半粗制残余物(2-溴-1-(2-氯嘧啶-5-基)乙酮，～14.5g)溶于无水乙腈(150mL)，直接用N-Boc-L-脯氨酸(9.76g，45.35mmol)和二异丙基乙胺(7.9mL，45.35mmol)处理。搅拌3小时后，真空除去溶剂，使残余物分配到乙酸乙酯和水中。有机相用0.1N盐酸、饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤后，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。LCMS PhenomenexLUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.66min。
采用相同方法制备实施例152c-2至实施例152c-6。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301721
实施例152d-1，步骤d.
将该残余物(S)-吡咯烷-1-甲酸1-叔丁酯2-甲酸2-(2-(2-氯嘧啶-5-基)-2-氧代乙基)酯溶于二甲苯(200mL)，用NH4OAc(17.5g，0.23mol)。处理。将厚壁、有螺旋盖的烧瓶中的混合物在140℃下加热2小时后，使之冷却至环境温度后吸滤。然后浓缩滤液，分配到乙酸乙酯和饱和NaHCO3溶液中，用盐水洗涤后，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，使最初的析出物分配到NaHCO3水溶液和乙酸乙酯中，超声处理2分钟后吸滤。滤液用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干。合并的残余物用BiotageTM硅胶快速色谱法纯化(65M柱，用900mL 2％B预平衡后，用450mL 2％B至2％B梯度洗脱，再用3000mL 2％B至40％B梯度洗脱，其中B＝甲醇，A＝二氯甲烷)，得到标题化合物(7.0g，收率44％，2个步骤，纯流分)，为黄橙色泡沫状物。混合流分经第二次BiotageTM硅胶色谱法纯化(40M柱，用600mL 1％B预平衡后，依次用150mL 1％B至1％B和1500mL 1％B至10％B梯度洗脱，其中B＝MeOH，A＝CH2Cl2)，再得到标题化合物(2.8g，18％)，为橙褐色泡沫状物。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.24-12.16(m，1H)，9.05(s，2H)，7.84-7.73(m，1H)，4.90-4.73(m，1H)，3.59-3.46(m，1H)，3.41-3.31(m，1H)，2.32-2.12(m，1H)，2.03-1.77(m，3H)，1.39和1.15(2s，9H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.92min，均一性指数94.7％。
LRMS：对于C16H21ClN5O2分析计算值：350.14；实测值：350.23(M+H)+。
HRMS：对于C16H21ClN5O2分析计算值：350.1384；实测值：350.1398(M+H)+。
采用相同方法制备实施例152d-2至实施例152d-6。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301731
Figure BPA00001245294301741
实施例152e-1，步骤e.
实施例152e-1：(S)-2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基-甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294301742
在氮气氛、环境温度下，将氢化钠(60％的矿物油分散体，0.23g，5.72mmol)一次性加到(S)-2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(152d-1，2.0g，5.72mmol)在无水DMF(45mL)中的搅拌溶液中。将混合物搅拌5分钟。以约0.1mL的增量加入SEM氯化物(1.01mL，5.72mmol)。将混合物搅拌3小时后，用饱和Nh4Cl溶液猝灭，并用乙酸乙酯稀释。有机相用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。最初的水相再萃取多两次，合并的残余物用BiotageTM快速色谱法纯化(40M柱，50mL/min，用750mL 5％B预平衡后，依次用150mL 5％B至5％B、1500mL 5％B至75％B和750mL 75％B至100％B进行分步梯度洗脱，其中溶剂B为乙酸乙酯，溶剂A为己烷)。浓缩洗脱液后，得到标题化合物(2.35g，85％，浅黄色泡沫状物).
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.04(s，2H)，7.98-7.95(m，1H)，5.70-5.31(3m，2H)，5.02-4.91(m，1H)，3.59-3.49(m，3H)，3.45-3.35(m，1H)，2.30-2.08(m，2H)，1.99-1.83(m，2H)，1.36和1.12(2s，9H)，0.93-0.82(m，2H)，-0.02(s，9H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，2分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.38min，均一性指数95％。
LRMS：对于C22H35ClN5O3Si分析计算值：480.22；实测值：480.23(M+H)+。
HRMS：对于C22H35ClN5O3Si分析计算值：480.2198；实测值：480.2194(M+H)+。
采用相同方法制备152e-2至152e-4。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301751
Figure BPA00001245294301761
实施例152f-1至实施例152f-2
实施例152f-1
(S)-1-(2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-(吡啶-3-基)乙酮
Figure BPA00001245294301762
用注射器将冷(0℃)的4N HCl/二
Figure BPA00001245294301763
烷溶液(5mL)加到装在100mL梨形烧瓶中的(S)-2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(152d-1，0.50g，1.43mmol)中，然后加入MeOH(1.0mL)。将悬浮液在室温下搅拌4小时后，将其浓缩至干，并置于高真空下1小时。分离得到中间体(S)-2-氯-5-(2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶三盐酸盐，为浅黄色固体(带一点橙色)，无需进一步纯化便可使用。
在环境温度下，将HATU(0.60g，1.57mmol)一次性加到中间体(S)-2-氯-5-(2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶三盐酸盐(0.46g，1.43mmol，理论量)、2-(吡啶-3-基)乙酸(0.25g，1.43mmol)和DIEA(1.0mL，5.72mmol)与无水DMF(10mL)的搅拌溶液中。将混合物在室温下搅拌2小时后，真空除去DMF。将残余物溶于CH2Cl2后，进行BiotageTM硅胶快速色谱法处理(40M柱，用600mL 0％B预平衡后，依次用150mL 0％B至0％B、1500mL 0％B至15％B和999mL 15％B至25％B进行分步梯度洗脱，其中B＝MeOH和A＝CH2Cl2)。分离得到标题化合物(0.131g，25％，2个步骤)，为黄色固体。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.10-9.08(2s，2H)，8.72-8.55(系列m，2H)，8.21-8.20和8.11-8.10(2m，1H)，8.00和7.93(2s，1H)，7.84-7.77(系列m，1H)，5.43-5.41和5.17-5.15(2m，1H)，4.02-3.94(3m，2H)，3.90-3.58(3m，2H)，2.37-2.26(m，1H)，2.16-1.85(2m，3H)。
LCRMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝0.92min，均一性指数95.1％。
LRMS：对于C18H18ClN6O分析计算值：369.12；实测值：369.11(M+H)+。
HRMS：对于C18H18ClN6O分析计算值：369.1231；实测值：369.1246(M+H)+。
实施例152g-1至实施例152g-17
实施例152g-1得自1c和152e-1。(S)-2-[5-(2-{4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑-4-基]-苯基}-嘧啶-5-基)-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294301771
在氮气氛、室温下，将Pd(Ph3)4(0.12g，0.103mmol)一次性加到(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1c，1.00g，2.27mmol)、(S)-2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(152c-1，0.99g，2.06mmol)和NaHCO3(0.87g，10.3mmol)在DME(20mL)和H2O(6mL)的溶液中的搅拌悬浮液中。将反应容器密封后，将混合物置于预热(80℃)的油浴中，并在80℃下搅拌16小时后，再加入催化剂(0.12g)。再将混合物在80℃下加热12小时后，使混合物冷却至环境温度，用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，并浓缩溶剂。残余物用BiotageTM硅胶快速色谱法纯化(采用40M柱，用40％B预平衡后，依次用150mL40％B至40％B、1500mL 40％B至100％B和1000mL 100％B至100％B进行分步梯度洗脱，其中B＝乙酸乙酯，A＝己烷)，得到标题化合物(1.533g，98％，黄色泡沫状物)。少量黄色泡沫状物用制备型HPLC进一步纯化用于表征目的(Phenomenex GEMINI，30×100mm，S10，10-100％B，13分钟内，3分钟停留时间，40mL/min，A＝95％水，5％乙腈，10mM NH4OAc，B＝10％水，90％乙腈，10mMNH4OAc)，得到95％纯的标题化合物，为白色固体。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.30-11.88(3m，1H)，9.17-9.16(m，2H)，8.43-8.31(m，2H)，7.99-7.35(系列m，4H)，5.72-5.30(3m，2H)，5.03-4.76(2m，2H)，3.64-3.50(m，4H)，3.48-3.31(m，2H)，2.36-2.07(m，2H)，2.05-1.80(m，4H)，1.46-1.08(2m，18H)，0.95-0.84(m，2H)，-0.01(s，9H)。
HPLC Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.91min，均一性指数95％。
LRMS：对于C40H57N8O5Si分析计算值：757.42；实测值：757.42(M+H)+。
HRMS：对于C40H57N8O5Si分析计算值：757.4221；实测值：757.4191(M+H)+。
采用相同方法制备实施例152g-2至实施例152g-17：
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301791
Figure BPA00001245294301811
Figure BPA00001245294301821
实施例152h-1-152h-7
实施例152h-1得自152g-1。5-((S)-2-吡咯烷-2-基-3H-咪唑-4-基)-2-[4-((S)-2-吡咯烷-2-基-3H-咪唑-4-基)-苯基]-嘧啶
Figure BPA00001245294301832
在室温下，将TFA(8mL)一次性加到(S)-2-[5-(2-{4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑-4-基]-苯基}-嘧啶-5-基)-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.50g，1.98mmol)在无水CH2Cl2(30mL)中的搅拌溶液中。将烧瓶密封，将混合物在室温下搅拌16小时后，真空除去溶剂。将残余物溶于甲醇，通过PVDF注射器过滤器(13mm x 0.45μm)过滤，分到8支pHPLC小管中，用HPLC进行色谱法处理(在13分钟内，由10％B至100％B梯度洗脱，Phenomenex C18柱，30 x 100mm，10μm，其中A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA)。选定的试管通过快速真空蒸发浓缩后，将产物溶于甲醇，使溶液通过UCTCHQAX 110M75阴离子交换柱体进行中和。洗脱液经浓缩，分离得到标题化合物(306.7mg，收率36％，黄芥末色固体)。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)μ12.50-11.80(br m，2H)，9.18(s，2H)，8.36(d，J＝8.5Hz，2H)，7.89(d，J＝8.2Hz，2H)，7.77(s，1H)，7.61(s，1H)，4.34-4.24(m，2H)，3.09-2.89(m，4H)，2.18-2.07(m，2H)，2.02-1.89(m，2H)，1.88-1.72(m，4H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.33min，均一性指数＞95％。
LRMS：对于C24H27N8分析计算值：427.24；实测值：427.01(M+H)+。
HRMS：对于C24H27N8分析计算值：427.2359；实测值：427.2363(M+H)+。
采用相同条件制备实施例152h-2至实施例152h-14。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301851
Figure BPA00001245294301861
Figure BPA00001245294301871
Figure BPA00001245294301881
实施例152i-1至152i-3
实施例152i-1得自152g-8。(S)-2-(5-{2-[4-((S)-2-吡咯烷-2-基-3H-咪唑-4-基)-苯基]-嘧啶-5-基}-1H-咪唑-2-基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294301882
在氮气氛、室温下，将(S)-2-[5-(2-{4-[2-((S)-1-苄氧基羰基-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑-4-基]-苯基}-嘧啶-5-基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(317.1mg，0.48mmol)的MeOH(1mL)溶液加到10％披钯碳(60mg)和K2CO3(70mg)在MeOH(5mL)和H2O(0.1mL)的溶液中的搅拌悬浮液中。向烧瓶中重复充入氢气后抽真空3次，在大气压下搅拌3小时。然后再加入催化剂(20mg)，将反应混合物再搅拌3小时后，通过硅藻土
Figure BPA00001245294301883
吸滤后浓缩。残余物用MeOH稀释，通过PVDF注射器过滤器(13mm x 0.45μm)过滤，分到4支pHPLC小管后进行色谱法处理(20％B至100％B梯度洗脱，10分钟内，Phenomenex-GeminiC18柱(30 x 100mm，10μm)，其中A＝95％水，5％乙腈，10mMNH4OAc，B＝10％水，90％乙腈，10mM NH4OAc)。选定的试管通过快速真空蒸发后浓缩，分离得到标题化合物(142.5mg，收率56％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.35-12.09(br m，1H)，9.17(s，2H)，8.35(d，J＝8.3Hz，2H)，7.87(d，J＝8.3Hz，2H)，7.80-7.72(m，1H)，7.56(s，1H)，4.92-4.77(m，1H)，4.21-4.13(m，1H)，3.61-3.05(2m，4H)，3.02-2.80(2m，2H)，2.37-1.67(系列m，6H)，1.41和1.17(2s，9H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.77min，均一性指数＞95％。
LRMS：对于C29H35N8O2分析计算值：527.29；实测值：527.34(M+H)+。
HRMS：对于C29H35N8O2分析计算值：527.2883；实测值：527.2874(M+H)+。
采用相同方法制备实施例152i-2至实施例152i-3。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301891
Figure BPA00001245294301901
实施例152j-1至实施例152j-28
采用使实施例148e转化为实施例148的方法，分离出所制备实施例152j的TFA盐或AcOH盐。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294301911
Figure BPA00001245294301921
Figure BPA00001245294301931
Figure BPA00001245294301951
Figure BPA00001245294301961
Figure BPA00001245294301971
Figure BPA00001245294301981
Figure BPA00001245294301991
Figure BPA00001245294302001
Figure BPA00001245294302011
Figure BPA00001245294302021
实施例152k-1至实施例152k-
实施例152k-1得自152j-27。{(R)-2-氧代-1-苯基-2-[(S)-2-(5-{4-[5-((S)-2-吡咯烷-2-基-3H-咪唑-4-基)-嘧啶-2-基]-苯基}-1H-咪唑-2-基)-吡咯烷-1-基]-乙基}-氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294302022
通过注射器将冷(0℃)的4NHCl/二
Figure BPA00001245294302023
烷溶液(4mL)加到100mL梨形烧瓶中的(S)-2-{5-[2-(4-{2-[(S)-1-((R)-2-甲氧基羰基氨基-2-苯基-乙酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-苯基)-嘧啶-5-基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(104.6mg，0.146mmol)中，然后加入MeOH(0.5mL)。将均匀混合物在室温下搅拌15分钟后，观察到析出物。再搅拌1.75小时后，悬浮液用乙醚和己烷稀释。对少部分悬浮液进行吸滤后，得到标题化合物，为黄色固体，其用于表征目的。将剩余的悬浮液浓缩至干后，置于高真空下16小时。同样分离得到其余的标题化合物(137.7mg，123％，黄色固体)，无需进一步纯化便可使用。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ15.20和14.66(2m，1H)，10，29(brs，0.7H)，9.38-9.36(m，2H)，8.55-8.00(系列m，4H)，7.42-7.28(2m，3H)，5.53-4.00(系列m，7H)，3.99-3.13(系列m，4H)，3.57和3.52(2s，3H)，2.50-1.84(系列m，8H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.79min，均一性指数＞95％。
LRMS：对于C34H36N9O3分析计算值：618.29；实测值：618.42(M+H)+。
HRMS：对于C34H36N9O3分析计算值：618.2921；实测值：618.2958(M+H)+。
采用相同方法制备实施例152k-2至实施例152k-3。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294302031
Figure BPA00001245294302041
实施例152l-1至实施例152l-3
采用使实施例148e转化为实施例148的相同方法，分离出所制备实施例1521-1至实施例1521-3的TFA盐或AcOH盐。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294302042
Figure BPA00001245294302051
Figure BPA00001245294302061
实施例153a-1至实施例153a-4.
实施例153a-1由152e-1制备。(S)-2-[5-{5′-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-2-基)-3-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-基]-[2，2′]联嘧啶-5-基}-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294302062
在氩气氛、室温下，向(S)-2-(5-(2-氯嘧啶-5-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.08mmol)和二氯双(苯甲腈)合钯(40mg，0.104mmol)在无水DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入纯净的四(二甲氨基)乙烯(1.0mL，4.16mmol)。将混合物在60℃加热15小时，然后用乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土
Figure BPA00001245294302063
吸滤。滤液用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，并蒸发溶剂。残余物用BiotageTM硅胶快速色谱法纯化(依次用150mL 15％B至15％B、1500mL 15％B至75％B、1000mL 75％B至100％B和1000mL 100％B至100％B进行分步梯度洗脱(其中B＝乙酸乙酯和A＝己烷)，再用700mL 10％B至100％B进行第二次梯度洗脱，其中B＝甲醇和A＝乙酸乙酯)，得到标题化合物(487.8mg，收率26％，粘性焦糖色油状物)。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.27(s，4H)，8.09-8.06(m，2H)，5.73-5.66和5.50-5.44(2m，2H)，5.06-4.93(m，2H)，3.60-3.39(2m，8H)，2.32-2.08(3m，4H)，2.00-1.85(m，4H)，1.37和1.14(2s，18H)，0.95-0.84(m，4H)，-0.01(s，18H)。
LCMS Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝3.37min，均一性指数＞95％。
LRMS：对于C44H69N10O6Si2分析计算值：889.49；实测值：889.57(M+H)+。
HRMS：对于C44H69N10O6Si2分析计算值：889.4940；实测值：889.4920(M+H)+。
采用相同方法制备实施例153a-2至实施例153a-4。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294302071
实施例153b-1-153b-3
按照上文实施例152h进行水解反应。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294302082
Figure BPA00001245294302091
实施例153c-1至实施例153c-7
采用使实施例148e转化成实施例148的方法，分离出实施例153c-1至实施例153c-7的TFA盐或AcOH盐。
LC条件：条件1：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
条件2：Phenomenex LUNA  C-18 4.6×50mm，0-100％B，2分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，220nm，5μL注射体积。
Figure BPA00001245294302101
Figure BPA00001245294302111
Figure BPA00001245294302121
F部分用于测定保留时间的LC条件
条件7
柱：Phenomenex C18  10u  4.6 X 30mm
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
流速＝4mL/min
波长＝220
溶剂A＝10％甲醇-90％H2O-0.1％TFA
溶剂B＝90％甲醇-10％H2O-0.1％TFA
Figure BPA00001245294302131
按下述文献方法制备化合物F70：Anna Helms等，J.Am.Chem.Soc.1992114(15)，第6227-6238页。
按用于合成实施例1所述方法的类似方式制备化合物F71。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.69-0.95(m，12H)1.92(s，12H)1.97-2.27(m，8H)2.40(s，2H)3.55(s，6H)3.73-3.97(m，4H)4.12(t，J＝7.78Hz，2H)5.14(t，J＝7.02Hz，2H)7.34(d，J＝8.24Hz，2H)7.49-7.70(m，4H)8.04(s，2H)14.59(s，2H)。
RT＝2.523分钟(条件7，96％)；LRMS：对于C44H58N8O6分析计算值：794.45；实测值：795.48(M+H)+。
cj部分：氨基甲酸酯置换的合成法
实施例cj-2和实施例cj-3
Figure BPA00001245294302132
(S)-2-(5-(4′(2-((S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-2)的制备
向(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-1)(1.00g，1.91mmol)、iPr2NEt(1.60mL，9.19mmol)和N-Z-缬氨酸(0.62g，2.47mmol)的DMF(10mL)的溶液中加入HATU(0.92g，2.42mmol)。将溶液在室温下搅拌1小时，然后将其倒入冰水(约250mL)中，并让其静置20分钟。将混合物过滤，固体用水洗涤后，真空干燥过夜，得到无色固体(1.78g)，其可用于下一步骤。LCMS：对于C44H51N7O5分析计算值：757；实测值：758(M+H)+。
将该产物(1.70g)和10％Pd-C(0.37g)在MeOH(100mL)中的混合物氢化(气囊压力)12小时。将混合物过滤后，真空除去溶剂。残余物用硅胶色谱法纯化(Biotage系统/0-10％MeOH-CH2Cl2)，得到标题化合物(0.90g，76％，浅黄色泡沫状物)。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.18(s，0.35H)，11.73(s，0.65H)，11.89(s，0.65H)，11.82(s，0.35H)，7.77-7.81(m，3H)，7.57-7.71(m，5H)，7.50-7.52(m，2H)，5.17(dd，J＝3.6，6.5Hz，0.3H)，5.08(dd，J＝3.6，6.5Hz，0.7H)，4.84(m，0.3H)，4.76(m，0.7H)，3.67-3.69(m，1H)，3.50-3.62(m，1H)，3.34-3.47(m，2H)，2.22-2.28(m，2H)，2.10-2.17(m，2H)，1.74-2.05(m，6H)，1.40(s，4H)，1.15(s，5H)，0.85-0.91(m，4H)，0.79(d，J＝6.5Hz，2H)。
LCMS：对于C36H45N7O3分析计算值：623；实测值：624(M+H)+。
(S)-2-(5-(4′-(2-((R)-1-((R)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-3)的制备
Figure BPA00001245294302141
采用用于制备cj-2的相同方法，制备(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((R)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-3)，得到无色泡沫状物(1.15g，76％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.17(s，0.35H)，12.04(s，0.65H)，11.89(s，0.65H)，11.81(s，0.35H)，7.78-7.83(m，3H)，7.60-7.71(m，5H)，7.43-7.52(m，2H)，5.22-5.25(m，0.4H)，5.05-5.07(m，0.6H)，4.83-4.86(m，0.5H)，4.72-4.78(m，0.5H)，3.78-3.84(m，1H)，3.49-3.64(m，2H)，3.35-3.43(m，2H)，2.19-2.32(m，1H)，2.04-2.17(m，3H)，1.95-2.04(m，2H)，1.76-1.90(m，3H)，1.40(s，4H)，1.15(s，5H)，0.85-0.91(m，4H)，0.67(d，J＝6.5Hz，1H)，0.35(d，J＝6.5Hz，1H)。LCMS：对于C36H45N7O3分析计算值：623；实测值：624(M+H)+。
实施例cj-4和cj-5
Figure BPA00001245294302151
(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-3-甲基-2-(嘧啶-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-4)的制备
Figure BPA00001245294302152
将(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-2)(0.45g，0.72mmol)、2-溴嘧啶(0.37g，2.34mmol)和iPr2NEt(0.20mL，1.18mmol)在甲苯-DMSO(4∶1，5mL)中的混合物在90℃下加热过夜。真空除去挥发物，残余物用制备型HPLC纯化(YMC Pack C-18，30X100mm/MeCN-H2O-TFA)，得到标题化合物的TFA盐(0.56g，74％)，为橙黄色玻璃状物。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.56(br s，2H)，8.28(d，J＝5.0Hz，1H)，8.12-8.20(m，2H)，7.94-7.97(m，3H)，7.83-7.91(m，5H)，7.06(d，J＝8.1Hz，1H)，6.62(表观t，J＝5.0Hz，1H)，4.99-5.10(m，2H)，4.50(表观t，J＝7.7Hz，1H)，4.07-4.12(m，2H)，3.83-3.87(m，1H)，3.56-3.62(m，1H)，3.40-3.47(m，2H)，2.36-2.41(m，1H)，1.94-2.22(m，6H)，1.40(s，4H)，1.17(s，5H)，0.88(表观t，J＝6.5Hz，6H)。
LCMS：对于C40H47N9O3分析计算值：701；实测值：702(M+H)+。
(S)-2-(5-(4′-(2-((R)-1-((R)-3-甲基-2-(嘧啶-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-5)的制备
Figure BPA00001245294302161
按照用于制备cj-4的相同方法制备标题化合物的TFA盐，得到浅黄色固体(0.375g，59％)。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.67(br s，2H)，8.30(d，J＝4.3Hz，1H)，8.04-8.19(m，2H)，7.84-7.96(m，8H)，6.88(d，J＝8.6Hz，1H)，6.61(表观t，J＝4.5Hz，1H)，5.17(dd，J＝4.4，8.0Hz，1H)，5.00-5.07(m，1H)，4.67(dd，J＝7.3，8.1Hz，1H)，3.91-3.96(m，1H)，3.70-3.75(m，1H)，3.56-3.62(m，1H)，3.42-3.45(m，1H)，2.39-2.43(m，2H)，2.04-2.16(m，5H)，1.94-1.97(m，2H)，1.40(s，4H)，1.17(s，5H)，0.95(d，J＝6.6Hz，2.5H)，0.91(d，J＝6.6Hz，2.5H)，0.86(d，J＝6.6Hz，0.5H)，0.81(d，J＝6.6Hz，0.5H)。
LCMS：对于C40H47N9O3分析计算值：701；实测值：702(M+H)+。
实施例cj-6和实施例cj-7
Figure BPA00001245294302171
1-甲基-2-(甲硫基)-4，5-二氢-1H-咪唑氢碘酸盐的制备
Figure BPA00001245294302172
按照下述文献方法制备标题化合物：Kister，J.；Assef，G.；Dou，H.J.-M.；Metzger，J.Tetrahedron 1976，32，1395。因此，将N-甲基乙二胺(10.8g，146mmol)的EtOH-H2O(1∶1，90mL)溶液预热至60℃后，滴加CS2(9.0mL，150mmol)。将所得混合物在60℃下加热3小时，再慢慢加入浓HCl (4.7mL)。将温度升至90℃，并继续搅拌6小时。将冷却的混合物保存在-20℃下后，过滤，将所得固体真空干燥，得到1-甲基咪唑烷-2-硫酮(8.43g，50％)，为米色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.15(s，br，1H)，3.67-3.70(m，2H)，3.53-3.58(m，2H)，3.11(s，3H)。
向1-甲基咪唑烷-2-硫酮(5.17g，44.5mmol)的丙酮(50mL)悬浮液中加入MeI(2.9mL，46.6mmol)。将溶液在室温下搅拌4小时，所得固体进行快速过滤后，真空干燥，得到1-甲基-2-(甲硫基)-4，5-二氢-1H-咪唑氢碘酸盐(8.79g，77％)，为米色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(s，br，1H)，3.99-4.12(m，4H)，3.10(s，3H)，2.99(s，3H)。
(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-3-甲基-2-(1-甲基-4-5-二氢咪唑-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-6)的制备
Figure BPA00001245294302181
将(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-2)(0.280g，0.448mmol)和1-甲基-2-(甲硫基)-4，5-二氢-1H-咪唑氢碘酸盐(cj-3a)(0.121g，0.468mmol)在CH3CN(5mL)中的混合物在90℃下加热12小时。再加入0.030g 1-甲基-2-(甲硫基)-4，5-二氢-1H-咪唑氢碘酸盐(cj-3a)，再继续加热12小时。粗制反应混合物直接用制备型HPLC纯化(Luna C-18/MeCN-H2O-TFA)，得到标题化合物的TFA盐(0.089g)，为浅黄色固体，其本身可用于后续步骤。
LCMS：对于C40H51N9O3分析计算值：705；实测值：706(M+H)+。(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((R)-3-甲基-2-(1-甲基-4-5-二氢咪唑-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-7)的制备
Figure BPA00001245294302182
按照用于合成cj-6中所述的方法，由cj-3制备标题化合物，只是反应混合物最初用制备型HPLC(YMC-Pack 25 X 250mm/MeCN-H2O-NH4OAc)纯化后，再用制备型HPLC(Luna苯基-己基/MeCN-H2O-NH4OAc)纯化。这得到所需产物(0.005g)，为泡沫状物，其本身可用于后续步骤。
LCMS：对于C40H51N9O3分析计算值：705；实测值：706(M+H)+。
实施例cj-8和cj-9
Figure BPA00001245294302191
(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-3-甲基-2-(3，4-二氢咪唑-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-8)的制备
将(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-2)(0.298g，0.480mmol)、4，5-二氢-1H-咪唑-2-磺酸(AstaTech)(0.090g，0.60mmol)和iPr2NEt(0.083mL，0.48mmol)在EtOH(4mL)中的混合物在100℃下加热12小时。将冷却的混合物蒸发至干，残余物用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-TFA，x2)，得到标题化合物的TFA盐(0.390g，73％)，为浅黄色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.66(br s，2H)，8.51(br s，1H)，8.20(d，J＝10.1Hz，2H)，8.10(br s，1H)，7.82-7.91(m，7H)，7.30(brs，1H)，5.12(t，J＝7.1Hz，1H)，4.97-5.05(m，2H)，4.37(dd，J＝4.3，10.1Hz，2H)，3.82-3.86(m，2H)，3.73-3.77(m，2H)，3.59(s，4H)，3.39-3.48(m，2H)，2.15-2.25(m，2H)，1.93-2.07(m，5H)，1.40(s，4H)，1.17(s，5H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.69(br s，3H)。
LCMS：对于C39H49N9O3分析计算值：691；实测值：692(M+H)+。
(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((R)-3-甲基-2-(3，4-二氢咪唑-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-9)的制备
Figure BPA00001245294302201
按照用于制备cj-8的相同方法，由cj-3制备标题化合物，得到TFA盐(0.199g，57％)，为黄色玻璃状物。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.58(br s，4H)，8.23(d，J＝9.6Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.87-7.89(m，6H)，7.25(br s，1H)，5.17-5.20(m，1H)，4.96-5.04(m，1H)，4.37(dd，J＝5.5，9.6Hz，1H)，3.91-3.95(m，2H)，3.37-3.46(m，部分被H2O掩蔽，4H)，2.39-2.42(m，部分被溶剂掩蔽，2H)，2.01-2.09(m，4H)，1.94-1.98(m，2H)，1.40(s，3H)，1.17(s，6H)，0.95(d，J＝6.5Hz，2.5H)，0.85(d，J＝6.5Hz，2.5H)，0.66(d，J＝7.0Hz，0.5H)，0.54(d，J＝6.5Hz，0.5H)。
LCMS：对于C39H49N9O3分析计算值：691；实测值：692(M+H)+。
实施例cj-11
Figure BPA00001245294302211
(S)-3-甲基-2-(嘧啶-2-基氨基)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁烷-1-酮(cj-10a)的制备
Figure BPA00001245294302212
步骤1：将(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-3-甲基-2-(嘧啶-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cj-4)的TFA盐(0.208g，0.199mmol)在CH2Cl2(4mL)和TFA(3mL)混合物中的溶液在室温下搅拌1.5小时。然后真空除去溶剂，残余物用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-TFA)，得到标题化合物的TFA盐(0.391g)，为橙色胶状物。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.53(br s，3H)，9.52-9.57(m，2H)，8.98-9.04(m，2H)，8.28(d，J＝4.6Hz，2H)，8.13(br s，1H)，7.79-7.91(m，7H)，7.07(d，J＝8.1Hz，1H)，6.62(表观t，J＝4.8Hz，1H)，5.07(t，J＝7.1Hz，1H)，4.72-4.78(m，2H)，4.48-4.51(m，1H)，4.08-4.12(m，2H)，3.28-3.36(m，2H)，2.37-2.42(m，2H)，1.97-2.22(m，6H)，0.88(表观t，J＝4.5Hz，6H)。
LCMS：对于C35H39N9O分析计算值：601；实测值：602(M+H)+。
同样，下列实施例按照上述代表性方法制备：
Figure BPA00001245294302221
((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(N-2-嘧啶基-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯(cj-11)的制备
Figure BPA00001245294302222
((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(N-2-嘧啶基-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
步骤2：向(S)-3-甲基-2-(嘧啶-2-基氨基)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁烷-1-酮(cj-10)的TFA盐(0.208g，0.197mmol)的DMF(4mL)溶液中加入iPr2NEt(0.20mL，1.15mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.049g，0.28mmol)和HATU(0.105g，0.276mmol)。将该溶液在室温下搅拌1.5小时，用MeOH(2mL)稀释后，直接用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-NH4OAc)。该产物用快速色谱法再纯化(SiO2/2-10％MeOH-CH2Cl2)，得到固体，将其从CH3CN-H2O中冻干，得到标题化合物(48.6mg，32％)，为无色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.78(br s，1H)，8.28(d，J＝4.5Hz，1H)，7.76-7.79(m，4H)，7.66-7.69(m，4H)，7.48-7.51(m，2H)，7.29(d，J＝8.6Hz，1H)，6.93(d，J＝8.1Hz，1H)，6.60(表观t，J＝4.5Hz，1H)，5.03-5.09(m，2H)，4.48(t。J＝8.1Hz，1H)，3.99-4.08(m，2H)，3.78-3.85(m，2H)3.53(s，3H)，2.12-2.21(m，4H)，1.87-2.05(m，7H)，0.83-0.97(m，12H)。
LCMS：对于C42H50N10O4分析计算值：758；实测值：759(M+H)+。
实施例-cj-13
(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-13)的制备
向(S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-12)(1.16g，1.99mmol)、Z-Val-OH(0.712g，2.83mmol)和iPr2NEt(0.70mL，5.42mmol)的DMF(40mL)溶液中分批加入HATU(1.10g，2.89mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时后，倒入冰-水(400mL)，让其静置20分钟。将混合物过滤，固体用冷水洗涤，让其风干过夜，得到z-被保护的中间体。LCMS：对于C46H54N8O6分析计算值：814；实测值：815(M+H)+。
将所得固体将溶于MeOH(80mL)中，加入10％Pd-C(1.0g)，将混合物在室温和大气压下氢化3小时。然后将混合物过滤，真空浓缩滤液。所得残余物用快速色谱法纯化(SiO2/5-20％MeOH-CH2Cl2)，得到标题化合物(1.05g，77％)，为无色泡沫状物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，7.75-7.79(m，3H)，7.61-7.67(m，5H)，7.49(s，1H)，7.26-7.28(m，1H)，5.05-5.09(m，2H)，4.03-4.09(m，2H)，3.77-3.80(m，1H)，3.66-3.70(m，1H)，3.52(s，3H)，3.40-3.47(m，2H)，2.21-2.26(m，1H)，2.10-2.17(m，3H)，1.81-2.02(m，6H)，0.77-0.92(m，12H)。
LCMS：对于C38H48N8O4分析计算值：680；实测值：681(M+H)+。
实施例cj-15
Figure BPA00001245294302241
(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-((Z/E)-(氰基亚氨基)(苯氧基)甲基氨基)-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-14)的制备
Figure BPA00001245294302242
将(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-13)(0.329g，0.527mmol)和氰基碳亚胺酸二苯酯(0.128g，0.537mmol)在iPrOH(10mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。将所得固体过滤后风干，得到标题化合物(0.187g，43％)，为乳白色固体。该产物本身无需进一步纯化便可用于下一步骤。
LCMS：对于C46H52N10O5分析计算值：824；实测值：825(M+H)+。
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(N-(5-氨基-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(cj-15a，R＝H)的制备
Figure BPA00001245294302251
将(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-((Z/E)-(氰基亚氨基)(苯氧基)甲基氨基)-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-14)(0.074g，0.090mmol)和水合肼(0.05mL，0.88mmol)的iPrOH(2mL)溶液在75℃下加热7小时。然后真空除去溶剂，残余物用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-NH4OAc)，得到泡沫状物，将其从CH3CN-H2O中冻干，得到标题化合物(0.032g，46％)，为无色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.17(s，1H)，11.75(m，2H)，10.66-10.84(m，2H)，7.76-7.79(m，3H)，7.62-7.74(m，4H)，7.49-7.51(m，1H)，7.24-7.29(m，2H)，5.28-5.32(m，1H)，5.05-5.08(m，2H)，4.04-4.09(m，3H)，3.87-3.94(m，2H)，3.72-3.81(m，2H)，3.53(s，3H)，2.09-2.17(m，2H)，1.90-2.02(m，6H)，0.81-0.99(m，12H)。
LCMS：对于C40H50N12O4分析计算值：762；实测值：763(M+H)+。
(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-(5-氨基-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-3-基氨基)-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-15b，R＝Me)的制备
Figure BPA00001245294302252
(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-((Z/E)-(氰基亚氨基)(苯氧基)甲基氨基)-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-14)(0.105g，0.128mmol)和N-甲基肼(0.010mL，0.188mmol)的iPrOH(2mL)溶液在75℃下加热3小时。加入第二份N-甲基肼(0.010mL，0.188mmol)，继续加热7小时。然后真空除去挥发物，残余物用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-NH4OAc)，得到泡沫状物，将其用快速色谱法进一步纯化(SiO2/0-20％MeOH-CH2Cl2)。将所得产物从CH3CN-H2O中冻干，得到标题化合物(0.029g，29％)，为无色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.79(s，0.4H)，12.19(s，1H)，11.76(m，1.6H)，7.77-7.85(m，4H)，7.62-7.71(m，4H)，7.49-7.51(m，1H)，7.24-7.29(m，1H)，6.31(d，J＝9.1Hz，0.5H)，6.09(d，J＝9.1Hz，1.5H)，5.87(s，1H)，5.34-5.36(m，1H)，5.04-5.08(m，2H)，4.89(s，1H)，4.75(s，2H)，3.53(s，3H)，2.10-2.17(s，3H)，1.94-2.02(m，6H)，0.81-0.98(m，12H)。
LCMS：对于C41H52N12O4分析计算值：776；实测值：777(M+H)+。
HRMS：对于C41H52N12O4分析计算值：776.4234；实测值：777.4305(M+H)+。
实施例cj-16和cj-17
Figure BPA00001245294302261
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(N-(5-氨基-1，2，4-
Figure BPA00001245294302262
二唑-3-基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(cj-16)的制备
Figure BPA00001245294302271
将(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-((Z/E)-(氰基亚氨基)(苯氧基)甲基氨基)-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-14)(0.120g，0.205mmol)和盐酸羟胺(0.0213g，0.307mmol)的iPrOH(5mL)溶液在75℃下加热3小时。加入第二份盐酸羟胺(0.0213g，0.307mmol)，继续加热7小时。然后真空除去挥发物，残余物用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-NH4OAc)，得到泡沫状物，将其用快速色谱法进一步纯化(SiO2/5％MeOH-CH2Cl2)。将所得无色蜡状物从CH3CN-H2O中冻干，得到标题化合物(0.0344g，22％)，为无色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.18-12.22(m，1H)，11.80(s，1H)，11.75(s，1h)，8.03-8.06(m，1H)，7.77(表观d，J＝8.1Hz，2H)，7.62-7.73(m，4H)，7.50(dd，J＝2.0，5.5Hz，1H)，7.24-7.29(m，2H)，5.69(s，1H)，5.06-5.11(m，2H)，4.14(t，J＝8.6Hz，1H)，4.06(未分辨的dd，J＝8.0，8.6Hz，1H)，3.78-3.90(m，3H)，3.53(s，3H)，3.01(br s，2H)，2.10-2.19(m，3H)，1.90-2.04(m，5H)，0.81-0.96(m，12H)。
LCMS：对于C40H49N11O5分析计算值：763；实测值：764(M+H)+。
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4′-(2-((2S)-1-(N-(氰基(二甲基)甲亚氨酰基(carbamimidoyl))-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(cj-17)的制备
Figure BPA00001245294302281
将(S)-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-((Z/E)-(氰基亚氨基)(苯氧基)甲基氨基)-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-14)(0.115g，0.198mmol)和二甲胺盐酸盐(0.0257g，0.315mmol)的iPrOH(5mL)溶液在90℃下加热12小时。加入第二份二甲胺盐酸盐(0.0257g，0.315mmol)，继续加热48小时。然后真空除去挥发物，残余物用制备型HPLC纯化(Luna 5u C18/MeCN-H2O-NH4OAc)后，用快速色谱法再纯化(SiO2/5％MeOH-CH2Cl2)。将所得无色蜡状物从CH3CN-H2O中冻干，得到标题化合物(0.0318g，21％)，为无色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.22(m，0.6H)，11.81(s，1H)，11.75(s，1H)，12.17-12.22(m，0.5H)，11.99-12.04(m，0.5H)，11.75-11.81(m，1H)，7.76-7.79(m，3H)，7.62-7.73(m，5H)，7.50(t，J＝2.0Hz，1H)，7.23-7.29(m，1H)，6.64(d，J＝8.1Hz，1H)，5.06-5.08(m，2H)，4.47(t，J＝8.1Hz，2H)，4.06(未分辨的dd，J＝8.0，8.6Hz，1H)，3.84-3.90(m，2H)，3.76-3.82(m，3H)，3.53(s，3H)，3.00(s，6H)，2.11-2.20(m，3H)，1.90-2.04(m，5H)，0.97(d，J＝6.5Hz，3H)，0.89-0.91(m，6H)，0.84(d，J＝6.5Hz，3H)。
LCMS：对于C42H53N11O4分析计算值：775；实测值：776(M+H)+
(S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-2-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁-2-基氨基甲酸甲酯(cj-12)的制备
Figure BPA00001245294302282
按照实施例28e由中间体-28d和Cap-51合成，随后用TFA/CH2Cl2脱去Boc，用MCX树脂形成游离碱。
1HNMR(400MHz，MeOH-d4)δ7.79-7.82(m，3H)，7.65-7.75(m，5H)，7.48(s，1H)，7.32(s，1H)，5.19(dd，J＝5.5，5.7Hz，1H)，4.75(t，J＝7.8Hz，1H)，4.25(d，J＝7.3Hz，1H)，3.88-4.04(m，2H)，3.67(s，3H)，3.35-3.51(m，3H)，2.43-2.51(m，1H)，2.02-2.38(m，7H)，0.97(d，J＝6.5Hz，3H)，0.92(d，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS：对于C33H39N7O3分析计算值：581；实测值：582(M+H)+。
OL部分的LC条件：
条件1：溶剂A：5％乙腈/95％水/10mmol乙酸铵；溶剂B：95％乙腈/5％水/10mmol乙酸铵；柱：Phenomenex GEMINI 5u C18 4.6 x5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，3分钟内，用1分钟停留时间。
条件2：溶剂A：5％乙腈/95％水/10mmol乙酸铵；溶剂B：95％乙腈/5％水/10mmol乙酸铵；柱：Phenomenex GEMINI 5u C18 4.6 x5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，2分钟内，用1分钟停留时间。
条件3：溶剂A：5％乙腈/95％水/10mmol乙酸铵；溶剂B：95％乙腈/5％水/10mmol乙酸铵；柱：Phenomenex GEMINI 5u C18 4.6 x5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，4分钟内，用1分钟停留时间。
条件4：溶剂A：10％MeOH/90％水/0.1％TFA；溶剂B：90％MeOH/10％水/0.1％TFA；柱：Phenomenex 10u C18 3.0 x 5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，4分钟内，用1分钟停留时间。
条件5：溶剂A：5％乙腈/95％水/10mmol乙酸铵；溶剂B：95％乙腈/5％水/10mmol乙酸铵；柱：Phenomenex GEMINI 5u C18 4.6 x5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，9分钟内，用1分钟停留时间。
条件6：溶剂A：10％MeOH/90％水/0.2％H3PO4；溶剂B：90％MeOH/10％水/0.2％H3PO4；柱：Phenomenex 5u C-18 4.6 x 50mm；波长：220nm；流速：1.5mL/min；0％B至100％B，14分钟内，用3分钟停留时间。
条件7：溶剂A：10％MeOH/90％水/0.1％TFA；溶剂B：90％MeOH/10％水/0.1％TFA；柱：Phenomenex 10u C18 3.0 x 5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，3分钟内，用1分钟停留时间。
条件8：溶剂A：10％MeOH/90％水/0.1％TFA；溶剂B：90％MeOH/10％水/0.1％TFA；柱：Phenomenex 10u C18 3.0 x 5.0mm；波长：220nm；流速：4mL/min；0％B至100％B，2分钟内，用1分钟停留时间。
实验部分Caps：
Figure BPA00001245294302301
步骤a：将二甲基氨基甲酰氯(0.92mL，10mmol)慢慢加到(S)-2-氨基-3-甲基丁酸苄酯盐酸盐(2.44g；10mmol)和Hunig碱(3.67mL，21mmol)的THF(50mL)溶液中。将所得白色悬浮液在室温下搅拌过夜(16小时)并减压浓缩。使残余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤后减压浓缩。所得黄色油状物用快速色谱法纯化(用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱)。收集的流分经真空浓缩后，得到2.35g(85％)中间体Cap OL-1，为透明油状物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 0.84(d，J＝6.95Hz，3H)0.89(d，J＝6.59Hz，3H)1.98-2.15(m，1H)2.80(s，6H)5.01-5.09(m，J＝12.44Hz，1H)5.13(d，J＝12.44Hz，1H)6.22(d，J＝8.05Hz，1H)7.26-7.42(m，5H)。LC(条件1)：RT＝1.76min；MS：对于[M+H]+C16H22N2O3分析计算值：279.17；实测值：279.03。
步骤b：向中间体Cap OL-1(2.35g；8.45mmol)的50mL MeOH溶液中加入Pd/C(10％；200mg)，所得黑色悬浮液用N2吹扫(3次)并放置在1大气压的H2下。将混合物在室温下搅拌过夜，通过微纤维滤器(microfiber filter)过滤除去催化剂。然后所得透明溶液经减压浓缩，得到1.43g(89％)Cap OL-2，为白色泡沫状物，无需进一步纯化便可使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.87(d，J＝4.27Hz，3H)0.88(d，J＝3.97Hz，3H)1.93-2.11(m，1H)2.80(s，6H)3.90(dd，J＝8.39，6.87Hz，1H)5.93(d，J＝8.54Hz，1H)12.36(s，1H).)。LC(条件1)：RT＝0.33min；MS：对于[M+H]+C8H17N2O3分析计算值：1898.12；实测值：189.04。
Figure BPA00001245294302311
按照对Cap OL-2所述的方法，由(S)-2-氨基丙酸苄酯盐酸盐制备Cap OL-3。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.27(d，J＝7.32Hz，3H)2.80(s，6H)4.06(qt，1H)6.36(d，J＝7.32Hz，1H)12.27(s，1H)。LC(条件1)：RT＝0.15min；MS：对于[M+H]+C6H13N2O3分析计算值：161.09；实测值：161.00。
Figure BPA00001245294302321
按照地Cap-47所述的方法，由(S)-2-氨基-3-甲基丁酸叔丁酯盐酸盐和氯甲酸2-氟乙酯制备CapOL-4。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.87(t，J＝6.71Hz，6H)1.97-2.10(m，1H)3.83(dd，J＝8.39，5.95Hz，1H)4.14-4.18(m，1H)4.20-4.25(m，1H)4.50-4.54(m，1H)4.59-4.65(m，1H)7.51(d，J＝8.54Hz，1H)12.54(s，1H)。
Figure BPA00001245294302322
按照对Cap-51所述的方法，由(S)-二乙基丙氨酸和氯甲酸甲酯制备Cap OL-5。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.72-0.89(m，6H)1.15-1.38(m，4H)1.54-1.66(m，1H)3.46-3.63(m，3H)4.09(dd，J＝8.85，5.19Hz，1H)7.24(d，J＝8.85Hz，1H)12.55(s，1H)。LC(条件2)：RT＝0.66min；MS：对于[M+H]+C9H18NO4分析计算值：204.12；实测值：204.02。
Figure BPA00001245294302323
Figure BPA00001245294302331
Figure BPA00001245294302341
Figure BPA00001245294302351
Figure BPA00001245294302361
J部分
Figure BPA00001245294302362
Figure BPA00001245294302371
Figure BPA00001245294302391
Figure BPA00001245294302401
Figure BPA00001245294302411
Figure BPA00001245294302421
Figure BPA00001245294302431
条件1：LCMS条件：Phenomenex-Luna 4.6 x 50mm S10，0-100％B，3分钟内，4分钟停止时间，4mL/min，220nm，A：10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA；B：90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA。
条件2：LCMS条件：Phenomenex-Luna 4.6 x 50mm S10，0-100％B，2分钟内，3分钟停止时间，4mL/min，220nm，A：10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA；B：90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA。
实施例J2.
吡咯烷-1-甲酸叔丁酯2-甲酸(2S)-2-(1-(4-溴苯基)-3-乙氧基-1，3-二氧代丙-2-基酯)
Figure BPA00001245294302441
将3-(4-溴苯基)-3-氧代丙酸乙酯(15g，55mmol)溶于CH2Cl2(600mL)，加入新鲜重结晶的NBS(9.8g，55mmol)，搅拌溶液18小时。反应混合物用NaHCO3溶液、盐水洗涤后干燥(MgSO4)，过滤和浓缩，得到残余物，无需纯化。将2-溴-3-(4-溴苯基)-3-氧代丙酸乙酯(16.5g，48mmol)和N-Boc-L-脯氨酸(10g，48mmol)溶于乙腈(450mL)，加入Hunig碱(16mL，95mmol)并搅拌溶液18小时。通过旋转蒸发除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯，用0.1N HCl和盐水洗涤。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.95(d，J＝8.4Hz，2H)，7.79(d，J＝8.4Hz，2H)，6.68-6.65(m，1H)，4.39-4.30(m，1H)，4.21-4.12(m，2H)，2.27-2.21(m，1H)，2.0-1.95(m，1H)，1.90-1.76(m，2H)，1.39(s，2H)，1.31(s，9H)，1.11(t，J＝7.3Hz，3H)。
LRMS：对于C21H26BrNO7分析计算值：484.09；实测值：410.08(M+H)+。
实施例J5.
(S)-5-(4-溴苯基)-2-(1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
Figure BPA00001245294302451
向1L压力瓶中装入吡咯烷-1-甲酸叔丁酯2-甲酸(2S)-2-(1-(4-溴苯基)-3-乙氧基-1，3-二氧代丙-2-基酯)J2(7g，35mmol)和11g NH4OAc的125mL二甲苯溶液，将反应物在140℃下加热3.5小时。冷却后，使溶液在乙酸乙酯和水之间分配。浓缩有机层，将所得残余物加到Biotage 40m硅胶柱体中，用梯度20-100％的乙酸乙酯/己烷洗脱，得到3g(45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ12.75(br。s，7.82)，(br。s，2H)，7.50(d，J＝8.4Hz，2H)，4.96-4.92(m，1H)，4.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.68-3.50(m，1H)，3.40-3.32(m，1H)，2.19-2.15(m，1H)，1.99-1.89(m，3H)，1.48/1.13(s，9H)，1.23(t，J＝7.3Hz，3H)。LRMS：对于C21H26BrN3O4分析计算值：464.12；实测值：464.15和466.15(M+H)+。
实施例J7.
(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-(甲基氨基甲酰基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294302452
将(S)-5-(4-溴苯基)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(1g，2.1mmol)溶于2M甲胺的MeOH溶液(35mL)中，在压力容器中于70℃加热48小时。反应混合物经浓缩后，将残余物加到Biotage 25m硅胶柱体中，用梯度10-100％的乙酸乙酯/己烷洗脱，得到556mg(57％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.5(br.s，1H)，7.86-7.82(m，1H)，7.77(d，J＝8.4Hz，2H)，7.61(d，J＝8.7Hz，2H)，4.83-4.70(m，1H)，3.69-3.52(br.s，1H)，3.42-3.32(m，1H)，2.71(d，4.8Hz，3H)，2.30-1.78(m，4H)，1.19-1.14(m，9H)。
LRMS：对于C20H26BrN4O3分析计算值：449.12；实测值：449.15和451.14(M+H)+。
实施例J32.a.
(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将3-(4-溴苯基)-3-(2，2-二甲基亚肼基)-1，1，1-三氟丙-2-酮(2.0g，6.2mmol)悬浮于5N硫酸(60mL)中，在45℃下加热6小时。将温度升至85℃达2小时，冷却时形成沉淀物。该物质经过滤分离，得到1-(4-溴苯基)-3，3，3-三氟丙烷-1，2-二酮1.6g(92％)，为黄色固体。将该二酮(1.6g，5.7mmol)溶于甲醇(30mL)，加入N-(叔丁氧基羰基)-L-脯氨醛(1g，5.0mmol)后，再加入28％氢氧化铵溶液(10mL)。将反应物在室温下搅拌18小时，倒在二氯甲烷(200mL)上，用水洗涤后再用MgSO4干燥。过滤，浓缩，再加到40M Biotage柱体上，用5％-30％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到J32.a 1.3g(50％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.88(br.s，1H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，4.84-4.70(m，1H)，3.57-3.49(m，1H)，3.39-3.29(m，1H)，2.31-2.20(m，1H)，1.98-1.78(m，3H)，1.39/1.13(m，9H)。LRMS：对于C19H20BrF3N3O2分析计算值：458.07；实测值：458.06和460.06(M-H)-。HRMS：对于C19H22BrF3N3O2分析计算值：460.0847；实测值：460.0866和462.0840(M+H)+。
D部分
Figure BPA00001245294302462
Figure BPA00001245294302471
Figure BPA00001245294302481
Figure BPA00001245294302511
**LCMS条件：Phenomenex-Luna 4.6 x 50mm S10，0-100％B，3分钟内，4分钟停止时间，4mL/min，220nm，A：10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA；B：90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA。
实施例D5.
(S)-2-(5-(4-溴-2-氟苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294302512
将溴(0.54mL，10.6mmol)滴加到4-溴-2-氟苯乙酮(2.30g，10.6mmol)在二
Figure BPA00001245294302513
烷(80mL)和四氢呋喃(80mL)中的冷(0℃)溶液中。将混合物在0℃下搅拌1小时后，升温至室温达15小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3溶液、5％硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤后，干燥(Na2SO4)。分离出2-溴-1-(4-溴-2-氟苯基)乙酮(D1)，呈无色膜状物，其在高真空下进一步浓缩时固化。将该固体溶于无水乙腈(50mL)，用N-Boc-L-脯氨酸(2.28g，10.6mmol)和二异丙基乙胺(1.85mL，10.6mmol)处理。在室温下搅拌3小时后，真空除去溶剂，使残余物分配到乙酸乙酯和水中。有机相用0.1N盐酸、饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤后，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。将该残余物溶于二甲苯(50mL)，并用固体NH4OAc(4.1g，53.0mmol)处理。将混合物在厚壁、有螺旋盖的烧瓶中于140℃加热2小时后，使之冷却至环境温度，用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤后，干燥(Na2SO4)并浓缩。残余物用BiotageTM硅胶快速色谱法纯化(65M柱，用1800mL16％B预平衡，接着依次用450mL 16％B至16％B、2199mL 16％B至50％B和2199mL 50％B至100％B进行梯度洗脱)，得到标题化合物(D5)(3.61g，83％)，为褐色/焦糖色油状物。一小部分(40mg)标题化合物用制备型HPLC进一步纯化(20％B至100％B，14分钟内，其中B为10mM NH4OAc(溶于10∶90H2O/CAN)，A为10mM NH4OAc(溶于95∶5H2O/CAN)，采用Phenomenex-Gemini 30 x 100mm S10柱，流速40mL/min)，得到纯的标题化合物(31.8mg)，为白色固体。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.13-11.95(m，1H)，7.94(brs，1H)，7.54(d，J＝10.7Hz，1H)，7.42(d，J＝7.9Hz，1H)，7.36-7.34(m，1H)，4.86-4.77(2m，1H)，3.54(m，1H)，3.38-3.32(m，1H)，2.28-2.14(2m，1H)，2.05-1.78(2m，3H)，1.39和1.14(2s，9H)。
HPLC Phenomenex LUNA C-18 4.6×50mm，0-100％B，3分钟内，1分钟停留时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.27min，均一性指数95％。
LRMS：对于C18H22BrFN3O2分析计算值：410.09和412.09；实测值：410.08和412.08(M+H)+。
HRMS：对于C18H22BrFN3O2分析计算值：410.0879；实测值：410.0893(M+H)+。
M部分：LC条件如下：
条件1
柱＝Phenomenex-Luna 3.0 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件2
柱＝Phenomenex-Luna 4.6 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝2min
停止时间＝3min
流速＝5mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件3
柱＝HPLC XTERRA C18 3.0 x 50mm S7
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
停止时间＝4min
流速＝4mL/min
波长＝220nm
溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H2O
溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H2O
条件M1
柱：Luna 4.6 X 50mm S10
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
停止时间＝4min
流速＝4mL/min
溶剂A：＝95％H2O：5％CH3CN，10mm乙酸铵
溶剂B：＝5％H2O：95％CH3CN；10mm乙酸铵
实施例M114
4，4′-双(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-联苯甲酸
Figure BPA00001245294302541
实施例M114，步骤a
Figure BPA00001245294302542
将DMF(20mL)加到KHCO3(1.84g，18.4mmol)和2-溴-5-碘苯甲酸(4.99g，15.3mmol)的混合物中，将所得混合物搅拌15分钟。在5分钟内滴加苄基溴(2.4mL，20.2mmol)，在环境条件下继续搅拌～20小时。真空除去大部分挥发性成分后，使残余物在CH2Cl2(50mL)和水(50mL)之间分配，有机层用水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。所得粗产物用快速色谱法纯化(7％EtOAc/己烷)，得到酯M114a(6.01g，粘性无色油状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ8.07(d，J＝2.0，1H)，7.81(dd，J＝8.4，2.1，1H)，7.53(d，J＝8.4，1H)，7.48(m，2H)，7.43-7.34(m，3H)，5.34(s，2H)。LC(条件1)：RT＝2.1min；LC/MS：对于[M+Na]+C14H10BrINaO2分析计算值：438.88；实测值：438.83。
实施例M114，步骤b-d
Figure BPA00001245294302551
采用用于由1-溴-4-碘-2-甲基苯合成溴化物121c的三步骤方案，将酯M114a精制成酯M114d。M114d：1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.04/11.97(br s，1H)，8.12(d，J＝2.0，0.92H)，7.99(表观br s，0.08H)，7.81(dd，J＝8.3，2.0，0.92H)，7.74-7.62(m，2.08H)，7.50(表观br d，J＝7.0，2H)，7.44-7.35(m，3H)，5.38(s，2H)，4.79(m，1H)，3.52(表观br s，1H)，3.36(m，1H)，2.24-1.79(m，4H)，1.39/5.11(两个s，9H)。LC(条件1)：RT＝1.66min；LC/MS：对于[M+H]+C26H29BrN3O4分析计算值：526.13；实测值：526.16。
实施例M114，步骤e
Figure BPA00001245294302552
按照二聚体1d的制备法，由溴化物M114d和硼酸酯1c制备酯M114e。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.18/12.00/11.91/11.83(四个br s，2H)，8.11-7.03(m，14H)，5.10(s，2H)，4.85-4.78(m，2H)，3.55(表观br s，2H)，3.37(m，2H)，2.29-1.80(m，8H)，1.41/1.16(两个s，18H)。LC(条件1)：RT＝1.54min；LC/MS：对于[M+H]+C44H51N6O6分析计算值：759.39；实测值：759.63。
实施例M114，步骤f
Figure BPA00001245294302561
将苄酯M114e(1.005g，1.325mmol)和10％Pd/C(236mg)与MeOH(20mL)的混合物在H2气囊下搅拌5小时。反应混合物然后用1∶1的MeOH和CH2Cl2混合物处理，通过硅藻土(
Figure BPA00001245294302562
-521)垫过滤，滤液经旋转蒸发后，得到酸M114f(840mg)，它被Suzuki偶合步骤的携带成分Ph3PO污染。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.17/11.98/11.89/11.81(四个表观br s，2H)，8.04-7.31(m，9H)，4.85-4.78(m，2H)，3.55(表观br s，2H)，～3.37(m，2H，与水信号重叠)2.27-1.84(m，8H)，1.41/1.16(两个s，18H)。LC(条件1)：RT＝1.37min；LC/MS：对于[M+H]+C37H45N6O6分析计算值：669.34；实测值：669.53。
实施例M114，步骤g
Figure BPA00001245294302563
依次将4N HCl/二
Figure BPA00001245294302564
烷(8.0mL)和CH2Cl2(2.0mL)加到氨基甲酸酯M114f(417mg，0.623mmol)中，将混合物剧烈搅拌5.5小时后，真空除去挥发性成分，得到吡咯烷M114g的HCl(.4x)盐(487mg)，它被Ph3PO杂质污染。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)在D2O交换后：δ8.23(d，J＝1.7，1H)，8.09-8.04(m，3H)，7.92(d，J＝8.3，2H)，7.53(d，J＝8.1，1H)，7.48(d，J＝8.3，2H)，5.00(表观br t，J＝8.3，1H)，4.90(表观br t，J＝8.4，1H)，3.6-3.3(m，4H)，2.5-1.99(m，8H)。LC(条件1)：RT＝0.92min；LC/MS：对于[M+H]+C27H29N6O2分析计算值：469.24；实测值：469.31。
实施例M114
将HATU(79.9mg，0.21mmol)加到吡咯烷M114g.4HCl(80mg，0.13mmol)、Cap-51(92.4mg，0.527mmol)和i-Pr2EtN(160μL，0.919mmol)的DMF(3.0mL)溶液中，将反应混合物在环境条件下搅拌2小时。真空除去挥发性成分后，残余物用MCX(MeOH洗涤；2.0MNH3/MeOH洗脱)并结合反相HPLC(CH3CN/H2O/NH4OAc)进行纯化，得到实施例M114的乙酸盐。LC(条件1)：RT＝1.20min；均一性指数＞98。LC/MS：对于[M+H]+C41H51N8O8分析计算值：783.38；实测值：783.34。HRMS对于[M+H]+C41H51N8O8计算值：783.3830；实测值：783.3793。
实施例M118
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(2′-氨基甲酰基-4′-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294302571
实施例M118，步骤a
将Et3N(300μL，2.15mmol)加到酸M114f(198.3mg，0.297mmol)、HOBt(94.2mg，0.697mmol)、EDCI(0.66mmol)、NH4Cl(101mg，1.89mmol)与DMF(8.0mL)的混合物中，在环境条件下搅拌17小时。反应混合物通过0.45μm滤器过滤后，真空除去挥发性成分，使残余物在CH2Cl2和水之间分配。浓缩有机层，所得粗产物用反相HPLC纯化(MeOH/H2O/TFA)。
上述产物用25％TFA/CH2Cl2(4.0mL)处理，将反应混合物在环境条件下搅拌2.5小时。真空除去挥发性成分，残余物进行游离碱化(MCX；MeOH洗涤；2.0M NH3/MeOH洗脱)，得到酰胺M118a(67.2mg)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ11.83(br s，2H)，7.81-7.80(m，2H)，7.73(d，J＝8.3，2H)，7.65(br s，1H)，7.52(br S，1H)，7.44(brs，1H)，7.41(d，J＝8.3，2H)，7.36(d，J＝8.3，1H)，7.31(br s，1H)，4.16(表观t，J＝7.2，2H)，3.00-2.94(m，2H)，2.88-2.82(m，2H)，2.10-2.01(m，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.83-1.66(m，4H)。LC(条件1)：RT＝0.89min；均一性指数＞95。LC/MS：对于[M+H]+C27H30N7分析计算值O：468.25；实测值：468.24。
实施例M118
按照实施例1中所述的方法，由中间体M118a和Cap-51制备实施例M118的TFA盐。LC(条件1)：RT＝1.16min；均一性指数97％。LC/MS：对于[M+H]+C41H52N9O7分析计算值：782.40；实测值：782.40。HRMS：对于[M+H]+C41H52N9O7分析计算值：782.3990；实测值：782.3979。
实施例M119
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(2-(羟基甲基)-4′-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294302591
实施例M119，步骤a
Figure BPA00001245294302592
将DIBAL-H(8.0mL 1.0M/CH2Cl2，8.0mmol)滴加到苄酯M114e(1.216g，1.60mmol)的冰-水冷却的CH2Cl2(20mL)溶液中，将反应混合物搅拌1小时后，再加入DIBAL-H(0.5mL 1.0M/CH2Cl2，0.5mmol)，并继续搅拌～2.5小时。反应物用过量的饱和NH4Cl溶液猝灭，混合物用水稀释后，用CH2Cl2萃取(3次)。合并的有机相经干燥(MgSO4)，过滤后真空浓缩。所得粗产物用Biotage纯化(100g硅胶；2-6％MeOH/EtOAc)，得到醇M119a(610mg，灰白色泡沫状物)。1HNMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.23(br s，0.19H)，12.17(br s，0.19H)，11.89(br s，0.81H)，11.82(br s，0.81H)，7.97(s，0.81H)，7.84(s，0.19H)，7.78(d，J＝8.1，1.62H)，7.69-7.20(m，6.38H)，5.21-5.15(m，1H)，4.86-4.78(m，2H)，4.49-4.45(m，2H)，～3.54(m，2H)，3.40-3.34(m，2H)，2.30-1.80(m，8H)，1.41/1.17(两个s，18H)。LC(条件1)：RT＝1.36min。LC/MS：对于[M+H]+C37H47N6O5分析计算值：655.36；实测值：655.34。
实施例M119，步骤b
Figure BPA00001245294302601
将25％TFA/CH2Cl2(3.0mL)加到氨基甲酸酯M119a(105mg，0.160mmol)中，将混合物在环境条件下搅拌4.5小时。真空除去挥发性成分后，残余物进行游离碱化(MCX；MeOH洗涤；2.0M NH3/MeOH洗脱)，得到吡咯烷M119b，它被其未知区域化学结构的三氟乙酰化衍生物污染。将该样品溶于MeOH(1.5mL)，用1.0M NaOH/H2O(300μL，0.3mmol)处理后，将混合物搅拌2.75小时，然后将其进行MCX纯化(MeOH洗涤；2.0M NH3/MeOH洗脱)，得到M119b(63.8mg，白色固体的膜状物)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ11.82(br s，2H)，7.96(s，1H)，7.77(d，J＝8.0，2H)，7.66(d，J＝.0，1H)，7.46(br s，1H)，7.42(br s，1H)，7.36(d，J＝8.0，2H)，7.21(d，J＝8.0，1H)，5.16(表观br s，1H)，4.46(s，2H)，4.16(表观t，J＝7.1，2H)，3.00-2.82(两个m，4H；在未包括在积分内的吡咯烷NH这一区域有一宽的基线信号)，2.10-2.01(m，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.83-1.67(m，4H)。LC(条件1)：RT＝0.78min。LC/MS：对于[M+H]+C27H31N6O分析计算值：455.26；实测值：455.27。
实施例M119
按照实施例1中所述的方法，由M119b和Cap-51制备实施例M119，只是纯化步骤使用具有ACN/H2O/NH4OAC溶剂系统的反相HPLC。LC(条件1)：RT＝1.15min；均一性指数98％。LC/MS：对于[M+H]+C41H53N8O7分析计算值：769.40；实测值：769.40。HRMS：对于[M+H]+C41H53N8O7分析计算值：769.4037；实测值：769.4023。
实施例M120
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(2-((二甲基氨基)甲基)-4′-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294302611
实施例M120，步骤a
Figure BPA00001245294302612
将CH2Cl2(6.0mL)加到醇M119a(501mg，0.765mmol)、TPAP(29.1，0.083mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(135.8mg，1.159mmol)的混合物中，将所得不均匀混合物在环境条件下剧烈搅拌14.5小时。再加入TPAP(11.0mg，0.031mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(39mg，0.33mmol)，再继续搅拌24小时。混合物通过硅藻土
Figure BPA00001245294302613
过滤，滤液经旋转蒸发后，所得粗产物用Biotage纯化(2％MeOH/EtOAc)，得到醛M120a(195.6mg，粘性黄色油状物)。LC(条件1)：RT＝1.37min。LC/MS：对于[M+H]+C37H45N6O5分析计算值：653.35；实测值：653.40。
实施例M120，步骤b
Figure BPA00001245294302614
将NaCNBH3(33mg，0.50mmol)一次性加到醛M120a(195.6mg，0.30mmol)和Me2NH(200μL 40％的H2O溶液)的MeOH(3.0mL)溶液中，将反应混合物搅拌4小时。真空除去挥发性成分，残余物用快速色谱法纯化(样品按硅胶筛目加样；3-15％MeOH/CH2Cl2)，得到胺M120b(120mg，灰白色泡沫状物)。LC(条件1)：RT＝1.32min。LC/MS：对于[M+H]+C39H52N7O4分析计算值：682.41；实测值：682.42。
实施例M120，步骤c
Figure BPA00001245294302621
采用由1d制备1e中所述的方案，使氨基甲酸酯M120b转化成M120c。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ11.82(br s，2H)，7.87(s，1H)，7.77(d，J＝8.0，2H)，7.65(d，J＝7.8，1H)，7.45/7.43(重叠的两个br s，2H)，7.37(d，J＝7.8，2H)，7.21(d，J＝7.8，1H)，4.87(m，0.1H)，4.17(m，1.90H)，～3.3(Me2NCH2的信号与水的信号重叠)，3.01-2.94(m，2H)，2.89-2.83(m，2H)，2.10(s，6H)，2.10-2.01(m，2H)，1.94-1.85(m，2H)，1.81-1.67(m，4H)。LC(条件1)：RT＝0.79min。LC/MS：对于[M+H]+C29H36N7分析计算值：482.30；实测值：482.35。
实施例M120
按照实施例1中所述的方法，由吡咯烷M120c和Cap-51制备实施例M120的TFA盐。LC(条件1)：RT＝1.06min；均一性指数96％。LC/MS：对于[M+H]+C43H58N9O6分析计算值：796.45；实测值：796.48。HRMS：对于[M+H]+C43H58N9O6分析计算值：796.4510；实测值：796.4515。
实施例M121
((2-((二甲基氨基)甲基)-，4′-联苯二基)双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2，1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
Figure BPA00001245294302631
按照对实施例1所述的方法，由M120c和Cap-4制备实施例M121的TFA盐。LC(条件1)：RT＝1.15min；均一性指数＞98％。LC/MS：对于[M+H]+C49H54N9O6分析计算值：796.45；实测值：864.46。HRMS：对于[M+H]+C49H54N9O6分析计算值：864.4197；实测值：864.4222。
实施例M122
((1S)-1-(((1S，3S，5S)-3-(5-(4′-(2-((1S，3S，5S)-2-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
Figure BPA00001245294302632
实施例M122，步骤a
Figure BPA00001245294302633
将二异丙基乙胺(1.81mL，10.4mmol)慢慢加到(1S，3S，5S)-2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.36g，10.4mmol)和(2-(4′-(2-溴乙酰基)联苯-4-基)-2-氧代乙基)溴(2.0g，5.05mmol)的乙腈(20mL)溶液中，将反应混合物在环境条件下搅拌16小时。溶剂经蒸发后，使残余物在乙酸乙酯和水(1∶1，各40mL)之间分配。有机层用饱和NaHCO3(2 x 10mL)、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到酮酸酯M122a(3.58g)，为粘性琥珀色油状物，在冰箱中保存时固化。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ8.20(m，4H)，7.97(d，J＝8.5，4H)，5.71-5.48(m，4H)，4.69(m，2H)，3.44(m，2H)，3.3(m，2H)，2.76-2.67(m，2H)，2.27(m，2H)，1.60(m，2H)，1.44/1.38(两个s，18H)，0.78(m，2H)，0.70(m，2H)。LC(条件1)：RT＝1.70min；LC/MS：未获得该分子的离子。
实施例M122，步骤b
Figure BPA00001245294302642
将乙酸铵(2.89g，37.5mmol)加到酮酸酯M122a(2.58g，3.75mmol)的甲苯(20mL)溶液中，将所得混合物在120℃下加热4.5小时，同时与Dean-Stark装置形成的水共沸。使反应混合物冷却至室温后，真空除去挥发性成分。将饱和NaHCO3溶液(10mL)加到固体中，将混合物搅拌30分钟后，固体经过滤，真空干燥后，进行Biotage纯化(28-100％EtOAc/己烷)，得到咪唑M122b(0.6g，浅黄色固体)。LC(条件1)：RT＝1.52min；LC/MS：对于[M+H]+C38H45N6O4分析计算值：649.35；实测值：649.78。
实施例M122，步骤c
Figure BPA00001245294302651
将4N HCl的二
Figure BPA00001245294302652
烷溶液(5mL)加到氨基甲酸酯M122b(0.8g，1.2mmol)的冰-水冷却的二烷(16mL)溶液中，移开冰水浴后，将混合物在环境条件下搅拌4小时。在反应期间形成的大块固体用刮勺压碎。真空除去挥发性成分后，得到吡咯烷M122c(.4HCl)(0.73g，黄色固体)。1H NMR(DMSO-d6，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.90(d，J＝8.3，4H)，7.84(br s，2H)，7.79(d，J＝8.3，4H)，5.24(m，2H)，3.38(m，2H)，2.71(m，2H)，～2.50(2H，与溶剂信号重叠)，1.93(m，2H)，1.38(m，2H)，0.96(m，2H)。LC(条件1)：RT＝1.03min；LC/MS：对于[M+H]+C28H29N6分析计算值：449.25；实测值：449.59。
实施例M122
按照实施例1中所述的方法，由M122c和Cap-51制备实施例M122的TFA盐。LC(条件1)：RT＝1.34min；LC/MS：对于[M+H]+C42H51N8O6分析计算值：763.39；实测值：763.73。
R部分
流程1
Figure BPA00001245294302661
实施例R1.(1S，1′S)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4’-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙烷-1，1-二基)二氨基甲酸叔丁酯(3)。
Figure BPA00001245294302662
1，1′-(联苯-4，4’-二基)双(2-溴乙酮)(1)(5.14g，18.4mmol)和N-Boc-L-缬氨酸(8.00g，36.8mmol)的无水CH3CN(40mL)溶液用iPr2NEt(7.05mL，40.5mmol)处理，将溶液在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，使所得浆状物在EtOAc和H2O之间分配。分离各层，水相用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤后真空浓缩。将残余物悬浮于甲苯(100mL)，加入NH4OAc(14.2g，184.2mmol)。将混合物回流加热16小时共沸除去H2O(Dean-Stark)。混合物冷却至室温后真空浓缩至干。残余物用柱色谱法纯化(biotage)(用0-40％CH3CN/CH2Cl2洗脱，然后用10％MeOH/CH2Cl2洗脱)，得到标题化合物(5.77g，50％)，为黄色泡沫状物。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.77-11.93(m，2H)，7.80(s，br，4H)，7.66-7.68(m，4H)，7.53(s，br，2H)，6.89(d，J＝7.7Hz，2H)，4.43(表观t，J＝8.2Hz，2H)，2.05-2.11(m，2H)，1.38(s，18H)，0.90(d，J＝6.6Hz，6H)，0.78(d，J＝6.6Hz，6H)。LCMS：对于C36H48N6O4分析计算值：628；实测值：629(M+H)+。
实施例R2.(1R，1′R)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4’-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙烷-1，1-二基)二氨基甲酸叔丁酯。
Figure BPA00001245294302671
按照实施例R1中的方法，用1，1′-(联苯-4，4’-二基)双(2-溴乙酮)(1)和N-Boc-D-缬氨酸开始，制备标题化合物。LCMS：对于C36H48N6O4分析计算值：628；实测值：629(M+H)+。
实施例R3.(1S，1′S)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4’-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙-1-胺)。
Figure BPA00001245294302672
将(1R，1′R)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4′-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙烷-1，1-二基)二氨基甲酸叔丁酯(1.00g，1.59mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中加入TFA(20mL)，将溶液在室温下搅拌5小时。真空除去溶剂，将残余物溶于CH2Cl2∶MeOH(1∶1)(约10mL)后吸附到MCX阳离子交换柱体(Oasis)上。该树脂用MeOH洗涤，所需产物通过用NH3的MeOH溶液(2M)洗脱而释放出来。真空除去溶剂，得到标题化合物(0.622g，91％)，为黄色泡沫状物，对用于后续步骤，其已足够纯。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ7.76(表观d，J＝8.4Hz，4H)，7.68(表观d，J＝8.4Hz，4H)，7.38(s，2H)，3.77(d，J＝7.3Hz，2H)，2.07(七重峰，J＝7.0Hz，2H)，1.03(d，J＝7.0Hz，6H)，0.88(d，J＝7.0Hz，6H)。LCMS：对于C26H32N6分析计算值：428；实测值：429(M+H)+。
实施例R4.(1R，1′R)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4’-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙-1-胺)。
Figure BPA00001245294302681
根据实施例R3中给出的方法，用(1R，1′R)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4’-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙烷-1，1-二基)二氨基甲酸叔丁酯开始制备标题化合物。LCMS：对于C26H32N6分析计算值：428；实测值：429(M+H)+。
实施例R5：(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-1-氧代-1，2-丙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
(1S，1′S)-1，1′-(5，5′-(联苯-4，4’-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基))双(2-甲基丙-1-胺)(120mg，0.280mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸(124mg，0.840mmol)和iPr2NEt(0.489mL，2.80mmol)的DMF(5mL)溶液用HATU(426mg，1.12mmol)处理，将反应混合物在室温下搅拌2小时。使反应混合物在H2O和EtOAc之间分配，分离各层。水相用EtOAc萃取。合并的有机层进行真空浓缩并用柱色谱法纯化(Biotage，25S，用0-40％CH3CN/CH2Cl2洗脱，然后用10％MeOH/CH2Cl2洗脱)。合适的流分经真空浓缩，残余物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-TFA)。用制备型HPLC(CH3CN-H2O-NH4OAc)进行两次后续纯化，最终用制备型HPLC(CH3CN-H2O-TFA)纯化后，得到标题化合物的TFA盐(4.9mg，2％)，为无色固体。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ7.89(s，2H)，7.86(s，8H)，4.87(d，J＝8.5Hz，2H)，4.19(q，J＝7.0Hz，2H)，3.65(s，6H)，1.33(d，J＝7.0Hz，6H)，1.14(d，J＝7.0Hz，6H)，0.96(d，J＝7.0Hz，6H)。LCMS：对于C36H46N8O6分析计算值：686；实测值：687(M+H)+。
表1A.用合适的胺和取代氨基酸开始同样制备下列实施例化合物。
Figure BPA00001245294302691
Figure BPA00001245294302701
Figure BPA00001245294302711
流程2
Figure BPA00001245294302712
实施例R15.(S)-1-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
Figure BPA00001245294302721
2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(6.23g，22.3mmol)和N-Boc-L-缬氨酸(5.00g，23.0mmol)的无水CH3CN(30mL)溶液用iPr2NEt(4.40mL，25.3mmol)处理，将溶液在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，使所得浆状物在EtOAc和H2O之间分配。分离各层，水相用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤后真空浓缩，得到黄色油状物。LCMS：对于C18H24BrNO5分析计算值：413，415；实测值：412，414(M-H)-。将残余物悬浮于甲苯(60mL)中，加入NH4OAc(8.61g，111.7mmol)。将混合物回流加热16小时以共沸除去H2O(Dean-Stark)。混合物冷却至室温后真空浓缩至干。残余物用柱色谱法纯化(biotage)(用10％MeOH/CH2Cl2洗脱)，得到标题化合物(8.55g，94％)，为黄色泡沫状物。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ7.84(s，1H)，7.66(表观d，J＝8.9Hz，2H)，7.64(表观d，J＝8.9Hz，2H)，4.65(d，J＝7.7Hz，1H)，2.23-2.27(m，1H)，1.42(s，9H)，1.07(d，J＝6.5Hz，3H)，0.93(d，J＝6.5Hz，3H)。LCMS：对于C18H24BrN3O2分析计算值：393，395；实测值：394，396(M+H)+。
实施例R16.(R)-1-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
采用实施例15中给出的方法，由2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮和N-Boc-D-缬氨酸开始制备标题化合物。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ7.83(s，1H)，7.68(表观d，J＝8.7Hz，2H)，7.64(表观d，J＝8.7Hz，2H)，4.65(d，J＝7.3Hz，1H)，2.22-2.26(m，1H)，1.42(s，9H)，1.08(d，J＝6.7Hz，3H)，0.93(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS：对于C18H24BrN3O2分析计算值：393，395；实测值：394，396(M+H)+。
实施例R17.(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294302731
(S)-1-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(2.00g，5.07mmol)、(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.23g，5.07mmol)和NaHCO3(1.49g，17.8mmol)在DME(50mL)和水(15mL)中的溶液通过抽空和回填N2进行脱气。
加入四(三苯基膦)合钯(0)(0.293g，0.254mmol)，反应混合物在100℃下加热过夜。使混合物冷却至室温，真空除去DME。使残余物在H2O和EtOAc之间分配，分离各层。水相用EtOAc萃取，合并的有机层真空浓缩至干，用柱色谱法纯化(Biotage)，用0-40％CH3CN/CH2Cl2，然后0-10％MeOH/CH2Cl2的梯度进行洗脱。得到标题化合物(2.05g，收率65％)，为褐色泡沫状物。该产物照原样用于后续步骤。LCMS：对于C36H46N6O4分析计算值：626；实测值：627(M+H)+。
实施例R17A.(S)-2-甲基-1-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)丙-1-胺。
Figure BPA00001245294302732
向(S)-2-(5-(4′-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.05g，3.27mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液中加入TFA(5mL，64.9mmol)，将溶液搅拌2小时。真空除去溶剂，将残余物溶于CH2Cl2∶MeOH(1∶1)(约10mL)后吸附到MCX阳离子交换柱体(Oasis)上。该树脂用MeOH洗涤，所需产物通过用NH3/MeOH(2M)洗脱而释放出来。真空除去溶剂，得到标题化合物(0.622g，91％)，为黄色泡沫状物，对用于后续步骤，其已足够纯。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ7.85-7.88(m，4H)，7.75(m，表观d，J＝8.2Hz，4H)，7.70(表观d，J＝5.8Hz，2H)，4.96(t，J＝8.2Hz，1H)，4.30(d，J＝8.5Hz，1H)，3.54-3.57(m，1H)，3.47-3.52(m，1H)，2.55-2.62(m，1H)，2.38-2.46(m，1H)，2.28-2.36(m，1H)，2.15-2.24(m，1H)，1.17(d，J＝6.7Hz，3H)，0.94(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS：对于C26H30N6分析计算值：426；实测值：427(M+H)+。
实施例R18.N2-(甲氧基羰基)-N-((1S)-1-(4-(4′-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)-L-缬氨酰胺(valinamide)
Figure BPA00001245294302741
在配备有磁力搅拌器的单颈50mL烧瓶中装入(S)-2-甲基-1-(5-(4′-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)丙-1-胺(80mg，0.188mmol)和(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(99mg，0.563mmol)的DMF(5mL)溶液，再加入DIEA(0.328mL，1.875mmol)。向该溶液中加入HATU(285mg，0.750mmol)，将反应物在室温下搅拌4小时。使反应混合物在H2O和EtOAc之间分配，分离各层，水相用EtOAc萃取。合并的有机层经真空浓缩并用柱色谱法纯化(Biotage，25S)，用0-40％CH3CN/CH2Cl2洗脱，然后用10％MeOH/CH2Cl2洗脱。合适的流分经真空浓缩，残余物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-TFA)，然后用制备型HPLC(CH3CN-H2O-NH4OAc)进行后续纯化，得到标题化合物(31.8mg，23％)，为无色固体。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ7.71(m，4H)，7.64-7.67(m，4H)，7.35(s，1H)，7.32(s，1H)，5.33-5.34(m，0.2H)，5.17(dd，J＝7.6，5.5Hz，0.8H)，4.77(d，J＝9.2Hz，1H)，4.22和4.10(d，J＝7.6Hz，1H，旋转异构体的比率为4∶1)，3.97-4.01(m，1H)，3.94(d，J＝7.0Hz，1H)，3.84-3.89(m，1H)，3.64(s，6H)，2.28-2.35(m，1H)，2.18-2.27(m，3H)，1.98-2.08(m，3H)，1.05(d，J＝6.7Hz，3H)，0.98和0.94(d，J＝6.7Hz，3H)，0.90(d，J＝6.7Hz，6H)，0.88(d，J＝6.7Hz，3H)，0.86(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS：对于C40H52N8O6分析计算值：740；实测值：741(M+H)+。
表2A.用合适的胺和取代氨基酸开始同样制备下列实施例化合物。
Figure BPA00001245294302751
Figure BPA00001245294302761
Figure BPA00001245294302771
Figure BPA00001245294302782
Figure BPA00001245294302791
Figure BPA00001245294302801
实施例R29.
Figure BPA00001245294302802
在配备有磁力搅拌器的单颈50mL烧瓶中装入得自实施例E的化合物(150mg，180mmol)的甲醇(5mL)溶液。向该溶液中加入钯/碳10％(100mg)的甲醇(2mL)浆液。混合物用60psi氢气吹扫。混合物在Parr上室温下振荡过夜。反应器中的内容物用LC-MS进行分析，显示完成了20％。加入氢氧化钯/碳20％(100mg)的乙酸(2mL)浆液。混合物用氢气吹扫，在Parr振荡器上与60psi氢气一起振荡过周末。反应物通过硅藻土(Celite)垫过滤，滤液进行真空蒸发。残余物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-TFA)，得到化合物(实施例29)32mg，收率23％，为白色固体。LCMS：对于C39H50N8O7分析计算值：742；实测值：743(M+H)+。
流程3
Figure BPA00001245294302812
实施例R30.N-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)乙酰胺。
Figure BPA00001245294302821
将2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(2.00g，7.20mmol)和乙酰基胍(2.18g，21.6mmol)在DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌48小时。真空浓缩溶液至干，对用于下一步骤，所得褐色固体具有足够纯度。LCMS：对于C11H10BrN3O分析计算值：279，281；实测值：280，282(M+H)+。
实施例R31.(S)-2-(5-(4′-(2-乙酰氨基-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BPA00001245294302822
N-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)乙酰胺(0.604g，2.16mmol)、(S)-2-(5-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.950g，2.16mmol)、NaHCO3(0.636g，7.57mmol)在DME(20mL)和H2O(5mL)中的混合物通过抽空和回填N2进行脱气(X3)。向该溶液中加入Pd(PPh3)4(0.125g，0.11mmol)，悬浮液在125℃下加热24小时。混合物真空蒸发至干，残余物用柱色谱纯化(Biotage)，用0-10％MeOH/CH2Cl2的梯度洗脱。然后，产物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-NH4OAc)，得到标题化合物，为无色固体。7.76(表观dd，J＝8.4，2.2Hz，4H)，7.69(表观d，J＝8.4Hz，2H)，7.66(表观d，J＝8.4Hz，2H)，7.45(s，1H)，7.23(s，1H)，3.66-3.72(m，1H)，3.48-3.53(s，1H)，2.34-2.46(m，1H)，2.18(s，3H)，1.96-2.10(m，3H)，1.46，1.25(s，9H，旋转异构体，比率为1∶2)。LCMS：对于C29H32N6O3分析计算值：512；实测值：513，282(M+H)+。
实施例R32.(S)-5-(4′-(2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-胺。
Figure BPA00001245294302831
步骤1：将(S)-2-(5-(4′-(2-乙酰氨基-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(55.0mg，0.11mmol)在CH2Cl2(5mL)和TFA(1mL)中的溶液在室温下搅拌3小时。反应混合物真空浓缩后，得到标题化合物的TFA盐(55.0mg)，其可直接进行下一步骤。LCMS：对于C24H24N6O分析计算值：412；实测值：413(M+H)+。
步骤2：将得自步骤1的褐色油状物悬浮于25％浓HCl的MeOH(10mL)中，回流加热3小时。减压除去挥发物，残余物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-TFA)，得到标题化合物的TFA盐(20mg，42％)。LCMS：对于C22H22N6分析计算值：370；实测值：371(M+H)+。
实施例R33.(S)-2-甲氧基羰基氨基-N-(5-(4′-(2-((S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)-3-甲基丁酰胺
Figure BPA00001245294302832
向(S)-5-(4′-(2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-胺三氟乙酸盐(20mg，0.04mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(25mg，0.14mmol)和iPr2NEt(0.09mL，0.53mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(54mg，0.14mmol)。将溶液搅拌3小时，然后倒入H2O中。将混合物真空浓缩至干，残余物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-TFA)，得到标题化合物并回收起始原料。所回收的起始原料再次施加反应条件并如上纯化。然后，将两批产物用制备型HPLC纯化(CH3CN-H2O-NH4OAc)，得到标题化合物(18mg，76％，黄褐色固体)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.80-7.88(m，9H)，7.56(s，1H)，5.24(表观t，J＝7.6Hz，1H)，4.23(d，J＝7.1Hz，1H)，4.18(d，J＝6.6Hz，1H)，4.08-4.13(m，1H)，3.83-3.90(m，1H)，3.68(s，3H)，3.65(s，3H)，2.54-2.63(m，1H)，2.17-2.30(m，4H)，2.01-2.09(m，1H)。LCMS：对于C36H44N8O6分析计算值：684；实测值：685(M+H)+。
利用合适的起始原料，如上述实施例所述，制备下列实施例。
Figure BPA00001245294302841
实施例R34
实施例R35
Figure BPA00001245294302843
实施例R36
实施例R37
生物学活性
本公开中采用了HCV复制子实验，并按共同所有的PCT/US2006/022197和在O’Boyle等，Antimicrob Agents Chemother.2005年4月；49(4)：1346-53中所述的方法进行了准备、实施和验证。
用HCV 1b-377-neo复制子细胞来测试本文所述的化合物系列以及由于NS5A中的Y2065H突变所致对化合物A有抗性的细胞(参见申请PCTT/S2006/022197)。经测定，被测化合物对化合物A抗性细胞的抑制活性比野生型细胞的低10倍以上，表明这两种化合物系列之间相关的作用机制。因此，本公开的化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白的功能，而且我们认为本公开的化合物与在先申请PCT/US2006/022197和共同所有的WO/O4014852中的所述化合物在联合用药方面同样有效。此外，本公开的化合物可有效地针对HCV 1b基因型。应该理解，本公开的化合物可以抑制HCV的多种基因型。表2显示本公开的代表性化合物针对HCV 1b基因型的EC50值。在一个实施方案中，本公开的化合物针对基因型1a、1b、2a、2b、3a、4a和5a具有活性。针对HCV 1b的EC50范围如下：A＝1-10μM；B＝100-999nM；C＝1-99nM；和D＝10-999pM。
本公开的化合物可通过除NS5A抑制以外或不同于NS5A抑制的机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本公开的化合物抑制HCV复制子，在另一个实施方案中，本公开的化合物抑制NS5A。
表2
Figure BPA00001245294302861
Figure BPA00001245294302871
Figure BPA00001245294302881
Figure BPA00001245294302891
Figure BPA00001245294302901
Figure BPA00001245294302911
Figure BPA00001245294302921
对于本领域技术人员显而易见的是，本公开并不限于前述说明性实施例，而且可以体现在其它具体形式中而又不偏离其实质特性。因此，预期各实施例在所有方面都被视作说明性的且非限制性的，应参照所附权利要求书，而不是前述实施例，因此，在所附权利要求书等同内容的含义和范围内的所有变化都意欲包括在本文中。
本公开的化合物可通过除NS5A抑制以外或不同于NS5A抑制的机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本公开的化合物抑制HCV复制子，而在另一个实施方案中，本公开的化合物抑制NS5A。本公开的化合物可抑制HCV的多种基因型。

Claims (26)

1.一种化合物，所述化合物选自：
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-1-氧代-1，2-丙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S，3R)-3-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-4-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-1-氧代-1，2-丙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-4-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S，3R)-3-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2R)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2R)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
N2-(甲氧基羰基)-N-((1S)-1-(4-(4′-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)-L-缬氨酰胺；
((1S，2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1S)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1S)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4′-(2-((1S)-1-((N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯；
N2-(甲氧基羰基)-N-((1R)-1-(4-(4′-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)-L-缬氨酰胺；
((1S，2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1R)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1R)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4′-(2-((1R)-1-((N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-1-氧代-1，2-丙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S，3R)-3-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-4-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-1-氧代-1，2-丙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S)-4-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2S，3R)-3-甲氧基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1R)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2R)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
(4，4′-联苯二基双(1H-咪唑-4，2-二基((1S)-2-甲基-1，1-丙烷二基)亚氨基((2R)-3-甲基-1-氧代-1，2-丁烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
N2-(甲氧基羰基)-N-((1S)-1-(4-(4′-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)-L-缬氨酰胺；
((1S，2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1S)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1S)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4′-(2-((1S)-1-((N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯；
N2-(甲氧基羰基)-N-((1R)-1-(4-(4′-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)-L-缬氨酰胺；
((1S，2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1R)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；
((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(4-(4′-(2-((1R)-1-((N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯；和
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4′-(2-((1R)-1-((N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯；
或其药学上可接受的盐。
2.一种化合物，选自：
Figure FPA00001245294200051
或其药学上可接受的盐。
3.一种组合物，所述组合物包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
4.权利要求3的组合物，所述组合物还包含一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。
5.权利要求4的组合物，其中至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。
6.权利要求5的组合物，其中干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
7.权利要求4的组合物，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
8.权利要求4的组合物，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV脱出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
9.一种组合物，所述组合物包含权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
10.权利要求9的组合物，所述组合物还包含一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。
11.权利要求10的组合物，其中至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。
12.权利要求11的组合物，其中干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
13.权利要求10的组合物，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
14.权利要求10的组合物，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV脱出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
15.一种治疗患者的HCV感染的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
16.权利要求15的方法，该方法还包括在给予权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。
17.权利要求16的方法，其中至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。
18.权利要求17的方法，其中干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
19.权利要求16的方法，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
20.权利要求16的方法，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV脱出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
21.一种治疗患者的HCV感染的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐。
22.权利要求21的方法，该方法还包括在给予权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予给予一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。
23.权利要求22的方法，其中至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。
24.权利要求23的方法，其中干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
25.权利要求22的方法，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进产生1型辅助性T细胞应答的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
26.权利要求22的方法，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV脱出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
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