PT2250163E - Inibidores do vírus da hepatite c - Google Patents

Description

1 DESCRIÇÃO "INIBIDORES DO VÍRUS DA HEPATITE C" A presente divulgação é geralmente dirigida a compostos anti-virais, e mais especificamente dirigida a compostos que podem inibir a função da proteína NS5A, codificada pelo vírus da hepatite C (VHC), composições compreendendo estes compostos, e métodos para inibir a função da proteína NS5A. 0 VHC é um importante patógeno humano, infectando uma estimativa de 170 milhões de pessoas em todo o mundo, cerca de cinco vezes o número infectado pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1. Uma fracção substancial destes indivíduos infectados pelo VHC desenvolve doença hepática progressiva grave, incluindo cirrose e carcinoma hepatocelular.

Presentemente, a terapêutica contra VHC mais eficaz emprega uma combinação de interferão alfa e ribavirina, levando a uma eficácia sustentada em 40% dos pacientes. Resultados clínicos recentes demonstram que o interferão alfa peguilado é superior ao interferão alfa inalterado, como monoterapêutica. No entanto, mesmo com esquemas terapêuticos experimentais envolvendo combinações de interferão alfa peguilado e ribavirina, uma fracção substancial de pacientes não têm uma redução sustentada da carga virai. Assim, existe uma clara e há muito sentida necessidade de desenvolver terapêuticas eficazes para o tratamento da infecção pelo VHC. O VHC é um vírus de ARN de cadeia positiva. Com base numa comparação da sequência deduzida de aminoácidos, e a grande semelhança na região 5' não traduzida, o VHC foi classificado como um género separado na família Flaviviridae. Todos os membros da família Flaviviridae têm viriões encapsulados, que contêm um genoma de ARN de cadeia 2 positiva, que codifica todas as proteínas específicas do vírus conhecidas, através da tradução de uma grelha de leitura aberta, única e ininterrupta. É encontrada uma heterogeneidade considerável nos nucleotídeos e na sequência codificada de aminoácidos, por todo o genoma do VHC. Foram caracterizados pelo menos seis genótipos principais, e têm sido descritos mais de 50 subtipos. Os genótipos principais do VHC diferem na sua distribuição mundial, e o significado clínico da heterogeneidade genética do VHC permanece indefinido, apesar de numerosos estudos do possível efeito dos genótipos sobre a patogénese e terapêutica. O genoma de ARN de cadeia única do VHC tem um comprimento de aproximadamente 9500 nucleótideos, e tem uma única grelha de leitura aberta (ORF) que codifica uma única poliproteína grande, de cerca de 3000 aminoácidos. Em células infectadas, esta poliproteína é clivada em múltiplos locais por proteases celulares e virais, para produzir as proteínas estruturais e não estruturais (NS) . No caso do VHC, a geração de proteínas não estruturais maturas (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NSSA e NS5B) é efectuada por duas proteases virais. A primeira acredita-se ser uma metaloprotease e cliva na junção NS2-NS3, a segunda é uma serina protease contida na região do terminal N da NS3 (também aqui referida como protease NS3), e medeia todas as clivagens subsequentes a jusante de NS3, tanto em cis, no local de clivagem NS3-NS4A, e em trans, para os restantes locais NS4A-NS4B, NS4B-NS5A e NS5A-NS5B. A proteína NS4A parece servir múltiplas funções, agindo como um cofactor para a protease NS3, e possivelmente auxiliando na localização da membrana de NS3 e outros componentes da replicase virai. A formação do complexo da proteína NS3 com NS4A parece ser necessária para os eventos de processamento, aumentando a eficiência proteolítica em todos os locais. A proteína NS3 também exibe actividades de 3 nucleósido trifosfatase e ARN helicase. A NS5B (também aqui referida como a polimerase VHC) é uma ARN polimerase dependente de ARN, que está envolvida na replicação do VHC. São desejados compostos úteis para o tratamento de pacientes infectados pelo VHC, que inibem selectivamente a replicação virai do VHC. São desejados em particular, os compostos que são eficazes para inibir a função da proteína NS5A. A proteína NS5A do VHC é descrita, por exemplo, em Tan, S.-L., Katzel, M.G. Virology 2001, 284, 1-12, e em Park, K.-J., Choi, S.-H, J. Biological Chemistry 2003. A WO 2006/133326 descreve o inibidor do VHC.

No seu primeiro aspecto, a presente divulgação providencia um composto seleccionado de biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IS)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ( (2S)-1-oxo-l,2-propanodiilo))); biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IS)-2-met-l,1-propanodiil) imino ((2S,3R)-3-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo) ) ) ; biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IS)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ((2 S)-3-metil-l-oxo-l,2-butanodiilo))) : biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IS)-2-metil-l,1-pronanodiil) imino ((2 S)-4-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ((2S)-3-metil-l-oxo-l,2-butanodiilo))) ; biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ( (2S)-1-oxo-l,2-propanodiilo))) : biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ((2 S)-4-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil (4,4'-bifenildiilbis (1H- 4 imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-1,1-propanodiil) imino ((2S, 3R)-3-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil (4, 4’-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-1,1-propanodiil) imino ((2R)-3-metil-l-oxo-1,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil (4,4'-biofenildiilbis (1H— imidazol-4,2-diil ((IS)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ((2R)-3-metil-l-oxo-1,2-butanodiilo))); N2-(metoxicarbonil)-N-((lS)-l-(4-(4'-(2-((2 S)—1—(N— (metoxicarbonil)-L-valil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-ilo)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-2-metilpropil)-L-valinamida; carbamato de metil ((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(4-(4 ' -(2-((1S)—1—((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); carbamato de metil ((IS)-3-metoxi-l-(((2 S)-2-(4-(4'-(2-((1S)—1—((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); carbamato de metil ((IS)—2—((2S)—2—(4—(4'—(2—((IS)—1— ((N-(metoxicarbonil)-L-alanil) amino)-2-metilpropil)-1H-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetilo); N2-(metoxicarbonil)-N-((IR)—1—(4—(4'-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-valil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-ilo)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-2-metilpropil)-L-valinamida; carbamato de metil ((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(4-(4'-(2-((IR)-1-((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); carbamato de metil ((lS)-3-metoxi-l-((2S)-2-(4-(4'-(2-((IR)-1-((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2- 5 il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); e carbamato de metil ( (IS)-2-((2S)-2-(4-(4'-(2-((IR)-1-((N-(metoxicarbonil)-L-alanil) amino)-2-metilpropil)-1H-imidazol-4-il) 4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1- pirrolidinil)-1-metil-2-oxoetilo); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Num segundo aspecto, a presente divulgação providencia um composto de (II) seleccionado de

MeCKCHN

NHCO^Me NHC02Me

6

0 t ΛΛ SHCOjMe i ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Num terceiro aspecto, a presente divulgação proporciona uma composição compreendendo um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável. Numa primeira realização do terceiro aspecto, a composição compreende um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC. Numa segunda realização do terceiro aspecto, pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão ou uma ribavirina. Numa terceira realização do terceiro aspecto, o interferão é seleccionado de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão de consenso, interferão alfa 2a e interferão tau limfoblastiode.

Numa quarta realização do terceiro aspecto, a presente divulgação fornece uma composição compreendendo um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um transportador farmaceuticamente aceitável, e um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC, em que pelo menos um dos compostos adicionais é seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que aumenta o desenvolvimento de uma resposta de células T auxiliares tipo 1, ARN interferente, ARN anti-sense, Imiqimod, ribavirina, um inibidor da desidrogenase inosina 5'-monofosfato, amantadina e rimantadina. 7

Numa quinta realização do terceiro aspecto, a presente divulgação fornece uma composição compreendendo um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um transportador farmaceuticamente aceitável, e um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo seleccionado de metaloprotease VHC, serina protease VHC, polimerase VHC, helicase VHC, proteína NS4B VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, libertação de VHC, proteína NS5A VHC e IMPDH para o tratamento de uma infecção pelo VHC.

Num quarto aspecto, a presente divulgação fornece um composto da invenção para uso num método de tratamento de uma infecção pelo VHC num paciente, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Numa primeira realização do quarto aspecto, o método compreende ainda a administração de um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes, após, ou simultaneamente com o composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Numa segunda realização do quarto aspecto, pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão ou uma ribavirina. Numa terceira realização do quarto aspecto, o interferão é seleccionado de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão de consenso, interferão alfa 2A e interferão tau limfoblastiode.

Numa quarta realização do quarto aspecto, a presente divulgação fornece um composto da invenção para uso num método de tratamento de uma infecção pelo VHC num paciente, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a administração de um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes, após, ou simultaneamente com o composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que pelo menos um dos compostos adicionais é seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que aumenta o desenvolvimento de uma resposta de células T auxiliares tipo 1, ARN interferente, ARN anti-sense, Imiqimod, ribavirina, um inibidor da desidrogenase inosina 5'-monofosfato, amantadina e rimantadina.

Numa quinta realização do quarto aspecto, a presente divulgação fornece um composto da invenção para uso num método de tratamento de uma infecção pelo VHC num paciente, compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a administração de um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes, após, ou simultaneamente com o composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo seleccionado de metaloprotease VHC, serina protease VHC, polimerase VHC, helicase VHC, proteína NS4B VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, saída de VHC, proteína NS5A VHC e IMPDH para o tratamento de uma infecção pelo VHC.

Outras realizações da presente divulgação podem compreender combinações adequadas de duas ou mais realizações e/ou aspectos aqui revelados.

No entanto, outras realizações e aspectos da divulgação serão aparentes, de acordo com a descrição fornecida abaixo.

Os compostos da presente divulgação também existem como tautómeros, por conseguinte, a presente divulgação engloba também todas as formas tautoméricas. A descrição da presente divulgação aqui, deve ser interpretada em congruência com as leis e princípios da ligação química. Em alguns casos pode ser necessário 9 remover um átomo de hidrogénio, a fim de acomodar um substituinte em qualquer localização dada. Por exemplo, na estrutura mostrada abaixo

9 H

fi* R8 pode estar ligado tanto ao átomo de carbono do anel imidazol, ou em alternativa, R8 pode tomar o lugar do átomo de hidrogénio no anel de azoto para formar um imidazol N-substituído.

Deve ser entendido que os compostos abrangidos pela presente divulgação, são aqueles que são adequadamente estáveis para uso como agente farmacêutico.

Todas as patentes, pedidos de patente e referências de literatura citados na especificação, são aqui incorporados por referência na sua totalidade. No caso de inconsistências, prevalecerá a presente divulgação, incluindo definições.

Tal como utilizado na presente especificação, os termos seguintes têm os significados indicados:

Como é aqui utilizado, as formas singulares "um", "uma", e "o", "a" incluem a referência plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

Existem centros assimétricos nos compostos da presente divulgação. Estes centros são designados pelos símbolos "R" ou "S", dependendo da configuração dos substituintes em torno do átomo de carbono quiral. Deve ser entendido que a divulgação engloba todas as formas isoméricas estereoquímicas, ou suas misturas, que possuem a capacidade para inibir a NS5A. Os estereoisómeros individuais dos compostos podem ser preparados sinteticamente, de materiais de partida comercialmente disponíveis que contêm centros 10 quirais, ou por preparação de misturas de produtos enantioméricos seguida por separação, tal como conversão para uma mistura de diastereómeros seguida por separação ou recristalização, técnicas cromatográficas, ou a separação directa de enantiómeros em colunas cromatográficas quirais. Compostos de partida de estereoquímica especifica, ou estão comercialmente disponíveis, ou podem ser feitos e resolvidos por técnicas conhecidas na tecnologia.

Certos compostos da presente divulgação podem também existir em diferentes formas conformacionais estáveis, que podem ser separáveis. Assimetria de torção devido a rotação restrita sobre uma ligação simples assimétrica, por exemplo, devido a impedimento estérico ou tensão do anel, pode permitir a separação dos confórmeros diferentes. A presente divulgação inclui cada isómero conformacional destes compostos e suas misturas. 0 termo "compostos da presente divulgação", e expressões equivalentes, são destinados a abranger os compostos da invenção e seus enantiómeros, diastereómeros, e sais farmaceuticamente aceitáveis. Da mesma forma, as referências a intermediários são destinadas a abranger os sais dos mesmos, onde o contexto o permita.

Os compostos da presente divulgação podem existir como sais farmaceuticamente aceitáveis. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" tal como aqui utilizado, representa sais ou formas zwiteriónicas dos compostos da presente divulgação que são solúveis em água ou em óleo ou dispersíveis, que são, dentro do âmbito do julgamento médico, adequados para utilização em contacto com os tecidos de pacientes sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação comensurável com uma razão benefício/risco razoável, e são eficazes para a utilização pretendida. Os sais podem ser preparados durante o isolamento e purificação finais dos compostos, ou separadamente por reacção de um átomo de 11 azoto adequado com um ácido adequado. Os sais de adição de ácido representativos incluem adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, dihidrobrometo, dihidrocloreto, dihidroiodeto, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, fumarato, hidrocloreto, hidrobrometo, hidroiodeto, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, mesitilenossulfonato, metanossulfonato, naftilenossulfonato, nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tricloroacetato trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluenossulfonato e undecanoato. Exemplos de ácidos que podem ser empregues para formar sais de adição farmaceuticamente aceitáveis incluem, ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico e fosfórico, e ácidos orgânicos tais como oxálico, maleico, succínico e cítrico.

Os sais de adição básicos podem ser preparados durante o isolamento e purificação finais dos compostos, por reacção de um grupo carboxi com uma base adequada, tal como o hidróxido, o carbonato, ou bicarbonato de um catião de metal, ou com amoníaco, ou uma amina orgânica primária, secundária ou terciária. Os catióes de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio, assim como catióes de amina quaternários não tóxicos, tais como amónio, tetrametilamónio, tetraetilamónio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibenzilamina, N,N-dibenzilfenetilamina e N,N'-dibenziletilenodiamina. Outras aminas orgânicas representativas, úteis para a formação de sais de adição de 12 base incluem etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina e piperazina.

Quando é possível que para utilização em terapia, quantidades terapeuticamente eficazes de um composto da invenção, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, podem ser administrados como o produto químico em bruto, é possível apresentar o ingrediente activo como uma composição farmacêutica. Por conseguinte, a divulgação proporciona ainda composições farmacêuticas que incluam quantidades terapeuticamente eficazes de compostos da invenção, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um ou mais transportadores farmaceuticamente aceitáveis, diluentes ou excipientes. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" tal como aqui utilizado, refere-se à quantidade total de cada componente activo que é suficiente para mostrar um benefício significativo no paciente, por exemplo, uma redução na carga virai. Quando aplicado a um ingrediente activo individual, administrado sozinho, o termo refere-se a esse ingrediente sozinho. Quando aplicado a uma combinação, o termo refere-se a quantidades combinadas dos ingredientes activos que resultam no efeito terapêutico, quer administrados em combinação, em série, ou em simultâneo. Os compostos da invenção e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são como descrito acima. 0(s) transportador(es), diluente(s) ou excipiente(s) devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação, e não serem prejudiciais para o recipiente da mesma. De acordo com outro aspecto da presente divulgação, é também proporcionado um processo para a preparação de uma formulação farmacêutica, incluindo a mistura de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um ou mais transportadores farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, ou excipientes. 0 termo "farmaceuticamente aceitável" tal como aqui utilizado, 13 refere-se aos compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem, que são dentro do âmbito do julgamento médico, adequados para utilização em contacto com os tecidos de pacientes sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação comensurável com uma razão beneficio/risco razoável, e são eficazes para o seu uso pretendido.

As formulações farmacêuticas podem ser apresentadas em formas de dose unitária, contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente activo por dose unitária. Os níveis de dosagem de entre cerca de 0,01 e cerca de 250 miligramas por quilograma ("mg/kg") de peso corporal por dia, de preferência entre cerca de 0,05 e cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia, dos compostos da presente divulgação, são típicos numa monoterapia para a prevenção e tratamento de doença mediada pelo VHC. Tipicamente, as composições farmacêuticas desta divulgação serão administradas a partir de cerca de 1 a cerca de 5 vezes por dia, ou alternativamente, como uma infusão contínua. Tal administração pode ser usada como uma terapia crónica ou aguda. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais do transportador para produzir uma forma de dosagem única, irá variar dependendo da condição a ser tratada, da gravidade da condição, do tempo de administração, da via de administração, da taxa de excreção do composto empregue, da duração do tratamento, e da idade, do género, do peso e da condição do paciente. As formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dose diária ou sub-dose, tal como aqui acima citadas, ou uma fracção apropriada da mesma, de um ingrediente activo. O tratamento pode ser iniciado com pequenas dosagens, substancialmente inferiores à dose óptima do composto. Posteriormente, a dosagem é aumentada por pequenos incrementos, até que o efeito óptimo sob as circunstâncias seja atingido. Em geral, o composto é mais 14 desejavelmente administrado a um nível de concentração, que irá geralmente proporcionar resultados anti-virais eficazes, sem causar quaisquer efeitos secundários prejudiciais ou nocivos.

Quando as composições desta divulgação compreendem uma combinação de um composto da presente divulgação e um ou mais agentes terapêutico ou profiláctico adicionais, tanto o composto como o agente adicional estão geralmente presentes em níveis de dosagem de entre cerca de 10 a 150%, e mais preferencialmente entre cerca de 10 e 80%, da dosagem normalmente administrada num regime de monoterapia.

As formulações farmacêuticas podem ser adaptadas para administração por qualquer via adequada, por exemplo, pela via oral (incluindo bucal ou sublingual), rectal, nasal, tópica (incluindo bucal, sublingual, ou transdérmica), vaginal ou parentérica (incluindo injecções ou infusões subcutâneas, intracutâneas, intramusculares, intra-articulares, intra-sinoviais, intra-esternais, intratecais, intralesionais, intravenosas, ou intradérmicas). Tais formulações podem ser preparadas por qualquer método conhecido na tecnologia de farmácia, por exemplo, por colocar em associação o ingrediente activo com o(s) transportador(es) ou excipiente (s) . A administração oral ou administração por injecção são as preferidas.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração oral, podem ser apresentadas como unidades discretas tais como cápsulas ou comprimidos, pós ou grânulos, soluções ou suspensões em líquidos aquosos ou não-aquosos, espumas comestíveis ou chicotes, ou emulsões líquidas de óleo-em-água ou emulsões água-em-óleo.

Por exemplo, para administração oral sob a forma de um comprimido ou cápsula, o componente fármaco activo pode ser combinado com um transportador inerte farmaceuticamente aceitável, oral, não tóxico, tal como etanol, glicerol, água e semelhantes. Os pós são preparados por trituração do 15 composto a um tamanho fino apropriado, e misturando com um transportador farmacêutico triturado de forma semelhante, tal como um hidrato de carbono comestível, tal como por exemplo, amido ou manitol. Pode também estar presente um agente aromatizante, conservante, de dispersão e corante.

As cápsulas são feitas por preparação de uma mistura em pó, como descrito acima, e enchimento de invólucros formados de gelatina. Podem ser adicionados à mistura em pó antes da operação de enchimento, deslizantes e lubrificantes, tais como sílica coloidal, talco, estearato de magnésio, estearato de cálcio ou polietileno glicol sólido. Pode também ser adicionado um agente desintegrante ou solubilizante, tal como agár-agár, carbonato de cálcio ou carbonato de sódio, para melhorar a disponibilidade do medicamento quando a cápsula é ingerida.

Além disso, quando desejado ou necessário, podem também ser incorporados na mistura ligantes, lubrificantes, agentes desintegrantes e agentes corantes adequados. Os ligantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais tais como glucose ou beta-lactose, adoçantes de milho, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, alginato de tragacanto ou de sódio, carboximetilcelulose, polietileno glicol e semelhantes. Os lubrificantes usados nestas formas de dosagem incluem oleato de sódio, cloreto de sódio e semelhantes. Os desintegrantes incluem sem limitação amido, metilo celulose, agár, betonita, goma xantana e semelhantes. Os comprimidos são formulados, por exemplo, através da preparação de uma mistura em pó, granulação ou fluidização, adição de um lubrificante e desintegrante, e prensagem em comprimidos. Uma mistura em pó é preparada por mistura do composto, adequadamente triturado, com um diluente ou uma base, tal como descrito acima, e opcionalmente, com um ligante, tal como carboximetilcelulose, um aliginato, gelatina, ou polivinilo pirrolidona, um retardador de solução, tal como parafina, 16 um acelerador de reabsorção, tal como um sal quaternário e/ou um agente de absorção, tal como betonita, caulino, ou fosfato dicálcico. A mistura em pó pode ser granulada por humedecimento com um ligante, tal como xarope, pasta de amido, mucilagem de acádia, ou soluções de materiais celulósicos ou poliméricos, e forçando através de uma grelha. Como uma alternativa à granulação, a mistura em pó pode ser passada através da máquina de comprimidos, e o resultado é que balas formadas de modo imperfeito dividem-se em grânulos. Os grânulos podem ser lubrificados para evitar a aderência ao comprimido formando laços, por meio da adição de ácido esteárico, um sal de estearato, talco ou óleo mineral. A mistura lubrificada é então compactada em comprimidos. Os compostos da presente divulgação podem também ser combinados com um transportador inerte de fluxo livre, e compactados em comprimidos directamente, sem passar através dos passos de granulação ou fluidização. Pode ser fornecido um revestimento de protecção transparente ou opaco, consistindo de um revestimento de vedação de goma-laca, um revestimento de açúcar ou de material polimérico, e um revestimento de brilho de cera. Podem ser adicionados corantes a estes revestimentos, para distinguir diferentes dosagens unitárias.

Podem ser preparados líquidos orais, tais como solução, xaropes e elixires na forma de dosagens unitárias, de modo a que uma dada quantidade contém uma quantidade predeterminada do composto. Os xaropes podem ser preparados por dissolução do composto numa solução aquosa aromatizada adequada, enquanto que os elixires são preparados através da utilização de um veículo não-tóxico. Podem também ser adicionados solubilizantes e emulsionantes, tais como álcoois isoestearílicos etoxilados e éteres de polioxietileno sorbitol, conservantes, aromatizantes tais como óleo de hortelã-pimenta ou adoçantes naturais, ou sacarina ou outros adoçantes artificiais, e semelhantes. 17

Onde necessário, as formulações de dosagem unitárias para administração oral podem ser microencapsuladas. A formulação pode também ser preparada para prolongar ou sustentar a libertação, como por exemplo por revestimento ou incorporação do material em partículas em polímeros, cera, ou semelhantes.

Os compostos da invenção, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, também podem ser administrados sob a forma de sistemas de entrega de lipossomas, tais como pequenas vesículas unilamelares, grandes vesículas unilamelares e vesículas multilamelares. Os lipossomas podem ser formados de uma variedade de fosfolípidos, tais como colesterol, estearilamina ou fosfatidilcolinas.

Os compostos da invenção, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem também ser entregues pelo uso de anticorpos monoclonais como transportadores individuais, aos quais as moléculas dos compostos são acopladas. Os compostos podem também ser acoplados com polímeros solúveis como transportadores de fármaco segmentáveis. Tais polímeros podem incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol, polihidroxietilaspartamidafenol, ou polietilenooxidopolilisina substituída com resíduos de palitoilo. Além disso, os compostos podem ser acoplados a uma classe de polímeros biodegradáveis, úteis na obtenção de libertação controlada de um fármaco, por exemplo, ácido poliláctico, polepsilon caprolactona, ácido polihidroxi butírico, poliortoésteres, poliacetais, polidihidropirans, policianoacrilatos, e copolímeros em bloco de hidrogéis reticulados ou anfipáticos.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração transdérmica podem ser apresentadas como adesivos discretos, destinados a permanecer em contacto íntimo com a epiderme do receptor durante um período de tempo prolongado. Por exemplo, o ingrediente activo pode 18 ser entregue do adesivo por iontoforese, como genericamente descrito em Pharmaceutical Research 1986, 3(6), 318.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração tópica podem ser formuladas como unguentos, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, sprays, aerossóis, ou óleos.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração rectal, podem ser apresentadas como supositórios ou como enemas.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração nasal em que o transportador é um sólido, incluem um pó claro tendo um tamanho de partícula por exemplo na gama de 20 a 500 microns, que é administrado na forma em que o rapé é tomado, isto é, por inalação rápida através da passagem nasal, a partir de um recipiente do pó mantido perto do nariz. As formulações adequadas em que o transportador é um líquido, para administração como um pulverizador nasal ou gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente activo.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração por inalação, incluem pós ou névoas de partículas finas, que podem ser gerados por meio de vários tipos de aerossóis, nebulizadores ou insufladores calibrados, pressurizados por dose.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração vaginal, podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações para pulverização.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração parentérica, incluem soluções estéreis aquosas e não aquosas para injecção, que podem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostáticos e depósitos que tornam a formulação isotónica com o sangue do receptor pretendido, e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As 19 formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou multi-dose, por exemplo ampolas e frascos selados, e podem ser armazenadas numa condição congelada-seca (liofilizada), requerendo apenas a adição do transportador liquido estéril, por exemplo água para injecções, imediatamente antes de usar. Podem ser preparadas soluções extemporâneas para injecção e grânulos e ingredientes suspensões, a partir de pós estéreis, comprimidos.

Deve ser entendido que para além dos particularmente mencionados anteriormente, as formulações podem incluir outros agentes convencionais na tecnologia tendo em conta o tipo de formulação em questão, por exemplo as que são adequadas para administração oral podem incluir agentes aromatizantes. 0 termo "paciente" inclui tanto humanos como outros mamíferos. 0 termo "tratamento" refere-se a: (i) prevenir que uma doença, distúrbio ou condição ocorra num paciente que pode estar predisposto à doença, distúrbio e/ou condição, mas que ainda não foi diagnosticado como a tendo, (ii) inibir a doença, distúrbio ou condição, ou seja, parando o seu desenvolvimento, e (iii) alívio da doença, distúrbio ou condição, isto é, causando a regressão da doença, distúrbio e/ou condição.

Os compostos da presente divulgação também podem ser administrados com uma ciclosporina, por exemplo ciclosporina A. A ciclosporina A foi mostrada ser activa contra o VHC em ensaios clínicos (Hepatology 2003, 38, 1282; Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, 313, 42; J.

Gastroenterol. 2003, 38, 567). O quadro 1 abaixo, apresenta alguns exemplos ilustrativos de compostos que podem ser administrados com os compostos desta divulgação. Os compostos da divulgação podem ser administrados com outros compostos de actividade 20 anti-VHC em terapêutica de combinação, em conjunto ou separadamente, ou por combinação dos compostos numa composição.

Quadro 1

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor ou alvo Empresa NIM811 Inibidor ciclofilina Novartis Zadaxin Imunomodulador Sciclone Suvus Azul metileno Bioenvision Actilon (CPG10101) Agonista TLR9 Coley Batabulin (T67) Anti- cancerígeno Inibidor β-tubulina Tularik Inc., Sul de São Francisco, CA ISIS 14803 Anti-viral Anti-sense ISIS Pharmaceuticals Inc, Carlsbad, CA/Elan Pharmaceuticals Inc., Nova Iorque, NI Summetrel Anti-viral Anti-viral Endo Pharmaceuticals Holdings Inc., Chadds Ford, PA GS-9132 (ACH-806) Anti -virai Inibidor VHC Achillion/Gilead Compostos e sais de pirazolopirimidina de WO-2005047288 26 Maio 2005 Anti -virai Inibidores VHC Arrow Therapeutics Ltd. Levovirina Anti-viral Inibidor IMPDH Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA 21

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor ou alvo Empresa Merimepodib (VX-497) Anti-viral Inibidor IMPDH Vertex Pharmaceuticals Inc. , Cambridge, MA XTL-6865 (XTL-002) Anti-viral Anticorpo monoclonal XTL Biopharmaceuticals Ltd., Rehovot, Israel Telaprevir (VX-950, LY-570310) Anti-viral Inibidor da serina protease NS3 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA/Eli Lilly and Co. Inc., Indianápolis, IN HCV-796 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Wyeth/Viropharma NM-283 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Idenix/Novartis GL-59728 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Gene Labs/Novartis GL—6066 7 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Gene Labs/Novartis 2'C MEÃ Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Gilead PSI 6130 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Roche R1626 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Roche 2'C metilo adenosina Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Merck JTK-003 Anti-viral Inibidor RdRp Japan Tobacco Inc., Tóquio, Japão 22

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor ou alvo Empresa Levovirina Anti-viral Ribavirina ICN— Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA Ribavirina Anti-viral Ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Viramidina Anti-viral Pró-fármaco ribavirina Ribapharm Inc. , Costa Mesa, CA Heptazima Anti-viral Ribozima Ribozyme Pharmaceuticals Inc., Boulder, CO BILN-2061 Anti-viral Inibidor da serina protease Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemanha SCH 503034 Anti-viral Inibidor da serina protease Schering Plough Zadazim Modulador imunológico Modulador imunológico SciClone Pharmaceuticals Inc., São Mateo, CA Ceplene Imunomodulador Modulador imunológico Maxim Pharmaceuticals Inc., São Diego, CA CellCept Imunosupressor Imunosupressor IgG VHC F. Hoffmann-La Roche LTD, Basileia, Suíça Civacir Imunosupressor Imunosupressor IgG VHC Nabi Biopharmaceuticals Inc., Boca Raton, FL 23

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor ou alvo Empresa Albuferão-a Interferão IFN-a2b albumina Human Genome Sciences Inc., Rockville, MD Infergen A Interferão Alfacon-1 IFN InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA Omega IFN Interferão IFN-CO Intarcia Therapeutics IFN-β e EMZ701 Interferão IFN-β e EMZ701 Transition Therapeutics Inc., Ontário, Canadá Rebif Interferão IFN-βΐβ Serono, Genebra, Suíça Roferão A Interferão IFN-(X2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basileia, Suíça Intrão A Interferão IFN—Ct2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Intrão A e Zadaxin Interferão IFN-Ct2b/al-timosina RegeneRx Biopharmaceuticals Inc., Bethesda, MD/SciClone Pharmaceuticals Inc, São Mateo, CA Rebetrão Interferão IFN-a2b/ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Actimmune Interferão INF—γ InterMune Inc., Brisbane, CA Interferão-β Interferão Interferão-β- la Serono Multiferão Interferão IFN de longa duração Viragen/Valentis

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de iníbidor ou alvo Empresa Wellferon Interferão IFN-anl limfoblastóide GlaxoSmithKline plc, Uxbridge, UK Omniferão Interferão IFN-α natural Viragen Inc., Plantation, FL Pegasis Interferão IFN-a2a peguilado F. Hoffmann-La Roche LTD, Basileia, Suíça Pegasis e Ceplene Interferão IFN-a2a peguilado/modulador imunológico Maxim Pharmaceuticals Inc., São Diego, CA Pegasis e Ribavirina Interferão IFN-a2a peguilado/ribavirina F. Hoffmann-La Roche LTD, Basileia, Suíça Intrão-PEG Interferão IFN-CC2b peguilado Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Intrão- PEG/Ribavirina Interferão IFN-a2b peguilado/ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ IP-501 Protecção do fígado Anti-fibrótico Indevus Pharmaceuticals Inc., Lexington, MA IDN-6 556 Protecção do fígado Inibidor de caspase Idun Pharmaceuticals Inc., São Diego, CA ITMN-191 (R-7227) Anti-viral Inibidor da serina protease InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA GL-59728 Anti-viral Inibidor da replicase NS5B Genelabs 25

Nome de marca Classe fisiológica Tipo de inibidor ou alvo Empresa ANA-9 71 Anti-viral Agonista TLR-7 Anadys

Os compostos da presente divulgação podem também ser utilizados como reagentes de laboratório. Os compostos podem ser úteis no fornecimento de ferramentas de pesquisa para a concepção de ensaios de replicação virai, validação de sistemas de animais de ensaio, e estudos de biologia estrutural, para melhorar ainda mais o conhecimento dos mecanismos da doença do VHC. Além disso, os compostos da presente divulgação são úteis para estabelecer ou determinar o local de ligação de outros compostos anti-virais, por exemplo por inibição competitiva.

Os compostos desta divulgação podem também ser utilizados para tratar ou prevenir a contaminação virai de materiais, e portanto reduzir o risco de infecção virai de pessoal de laboratório ou médico, ou pacientes, que entrem em contacto com tais materiais, por exemplo, sangue, tecido, instrumentos cirúrgicos e peças de vestuário, instrumentos de laboratório e vestuário, e aparelhos e materiais de recolha ou transfusão de sangue.

Esta divulgação destina-se a englobar compostos da invenção, quando preparados por processos sintéticos ou por processos metabólicos, incluindo os que ocorrem no corpo humano ou animal (in vivo) ou processos que ocorrem in vitro.

As abreviaturas utilizadas na presente aplicação, incluindo particularmente nos esquemas ilustrativos e exemplos que se seguem, são bem conhecidas dos peritos na tecnologia. Algumas dos abreviaturas utilizadas são as seguintes: HATU para hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-ilo)-N,N,N',N'-tetrametilurónio, Boc ou BOC para terc-butoxicarbonilo, NBS para N-bromossuccinimida, tBu ou t-Bu para terc-butilo, SEM para 26 (trimetilsililo) etoximetilo, DMSO para dimetilsulfóxido, MeOH para metanol, TFA para ácido trifluoroacético, RT para temperatura ambiente ou tempo de retenção (contexto ditará), tR para tempo de retenção, EDC1 para hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropilo)-3-etilcarbodiimida, DMAP para 4-dimetilaminopiridina, THF para tetrahidrofurano, DBU para 1,8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno, t-Bu, DEA para dietilamina, HMDS para hexametildisilazida, DMF para N,N-dimetilformamida, Bzl para benzilo, EtOH para etanol, iPrOH ou i-PrOH para isopropanol, Me2S para dimetilsulfureto; Et3N ou TEA para trietilamina, Ph para fenilo, OAc para acetato, EtOAc para acetato de etilo, dppf para 1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno, iPr2EtN ou DIPEA para diisopropiletilamina, Cbz para carbobenziloxi, n-BuLi para n-butillitio, ACN para acetonitrilo, h ou hr para horas, m ou min para minutos, s para segundos, LiHMDS para hexametildisilazida de litio, DIBAL para hidreto de diisobutilo de alumínio, TBDMSC1 para cloreto de terc-butildimetilsililo, Me para metilo, ca. para cerca de, OAc para acetato, iPr para isopropilo, Et para etilo, Bn para benzilo, e HOAT para l-hidroxi-7-azabenzotriazol.

Os compostos e processos da presente divulgação, serão melhor compreendidos em ligação com os seguintes exemplos. Os materiais de partida podem ser obtidos de fontes comerciais, ou preparados por métodos bem estabelecidos na literatura, conhecidos dos peritos na tecnologia. Será facilmente aparente para um perito na tecnologia, que os compostos definidos acima, podem ser sintetizados por substituição dos reagentes e agentes apropriados nas sínteses mostradas abaixo. Também será prontamente evidente para um perito na tecnologia, que a protecção selectiva e as etapas de desprotecção, bem como a ordem das próprias etapas, podem ser realizadas em ordem variável, dependendo da natureza das variáveis, para completar com sucesso as sínteses abaixo. 27

Condições de análise dos compostos A avaliação de pureza e análise de massa de baixa resolução foram realizadas num sistema Shimadzu LC, acoplado com um sistema Waters Micromass ZQ MS. Deve notar-se que os tempos de retenção podem variar ligeiramente entre as máquinas. As condições de LC empregues na determinação do tempo de retenção (RT) foram:

Condição 1

Coluna = Phenomenex-Luna 3,0X50 mm S10 % B inicio = 0 % B final = 100

Tempo de gradiente = 2 min

Tempo de paragem = 3 min

Taxa de fluxo = 4 ml/min

Comprimento de onda = 220 nm

Solvente A = 0,1% TFA em 10% metanol/90% H20

Solvente B = 0,1% TFA em 90% metanol/10% H20

Condição 2

Coluna = Phenomenex-Luna 4,6X50 mm S 10 % B inicio = 0 % B final = 100

Tempo de gradiente = 2 min

Tempo de paragem = 3 min

Taxa de fluxo = 5 ml/min

Comprimento de onda = 220 nm

Solvente A = 0,1% TFA em 10% metanol/90% H20

Solvente B = 0,1% TFA em 90% metanol/10% H20

Condição 3

Coluna = HPLC XTERRA C18 3,0 x 50 mm S7 % B inicio = 0 % B final = 100

Tempo de gradiente = 3 min

Tempo de paragem = 4 min

Taxa de fluxo = 4 ml/min

Comprimento de onda = 220 nm 28

Solvente A = 0,1% TFA em 10% metanol/90% H20 Solvente B = 0,1% TFA em 90% metanol/10% H20 Condição Ml

Coluna = Luna 4,6X50 mm S10 % B início = 0 % B final = 100

Tempo de gradiente = 3 min

Tempo de paragem = 4 min

Taxa de fluxo = 4 ml/min

Comprimento de onda = 220 nm

Solvente A = 95% H20 : 5% CH3CN, 10 mm Acetato de amónio

Solvente B = 5% H20 : 95% CH3CN, 10 mm Acetato de amónio

Exemplo de referência 1, etapa b

Uma mistura de cetoamida la (12,8 g, 31,12 mmol) e NH4OAc (12,0 g, 155,7 mmol) em xilenos (155 ml), foi aquecida num tubo selado a 140 °C durante 2 horas. O componente volátil foi removido in vácuo, e o resíduo foi repartido cuidadosamente entre acetato de etilo e água, onde suficiente solução saturada de NaHC03 foi adicionada, de modo a tornar o pH da fase aquosa ligeiramente básico após a agitação do sistema bifásico. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo adicional. A fase orgânica combinada foi lavada com uma solução salina, seca (MgSCg) , filtrada, e concentrada in vacuo. O material resultante foi recristalizado de acetato de etilo/hexanos, para proporcionar duas colheitas 29 de imidazol lb como um sólido denso amarelo claro, pesando 5,85 g. 0 líquido mãe foi concentrado in vacuo e submetido a uma cromatografia flash (sílica gel, 30% de acetato de etilo/hexanos), para fornecer 2,23 g adicionais de imidazol lb. XH RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 12, 17/11, 92/11, 86 (m, 1H) , 7, 72-7, 46/7, 28 (m, 5H) , 4,86- 4,70 (m, 1H), 3,52 (app br s, 1H), 3,36 (m, 1H) , 2,30-1,75 (m, 4H) , 1,40/1,15 (app br s, 9H) . LC (Cond. 1): RT = 1,71 min; índice de homogeneidade > 98%; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci8H23BrN302: 392, 10; encontrado 391,96; HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci8H23BrN302: 392, 0974; encontrado 392,0959. A pureza óptica das duas amostras de lb foram avaliadas, utilizando as condições de HPLC quiral indicadas abaixo (ee > 99% para as culturas combinadas, ee = 96,7% para a amostra de cromatografia flash):

Coluna: Chiralpak AD, 10 um, 4,6 x 50 mm Solvente: 2% etanol/heptano (isocrático)

Taxa de fluxo: 1 ml/min

Comprimento de onda: ou 220 ou 254 nm

Tempo de retenção relativo: 2,83 minutos (R) , 5,34 minutos (S)

Podem ser preparados compostos análogos incorporando a cetoamida apropriada.

Exemplo de referência 1, etapa c

Foi adicionado Pd(Ph3P) 4 ( 469 mg, 0, 406 mmol) a um tubo de pressão contendo uma mistura de brometo lb (4,008 g, 10,22 mmol), bis (pinacolato) diboro (5,422 g, 21,35 mmol), acetato de potássio (2,573g, 26,21 mmol) e 1,4- 30 dioxano (80 ml). O frasco de reacção foi purgado com azoto, tapado, e aquecido com um banho de óleo a 80 °C durante 16,5 horas. A mistura de reacção foi filtrada, e o filtrado foi concentrado in vacuo. O material bruto foi repartido cuidadosamente entre CH2CI2 (150 ml) e um meio aquoso (50 ml de água + 10 ml de solução de NaHC03 saturada). A camada aquosa foi extraída com CH2C12, e a fase orgânica combinada foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada in vacuo. O material resultante foi purificado com cromatografia flash (amostra foi carregada com solvente de eluição, 20-35% acetato de etilo/CH2Cl2), para fornecer boronato lc, contaminado com pinacol, como um sólido denso esbranquiçado, a razão de mole relativa de lc para pinacol foi de cerca de 10:1 (½ RMN) . A amostra pesava 3,925 g após ~ 2,5 dias de exposição a alto vácuo. ΤΗ RMN (DMSO-d6 δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : 12,22/11, 94/11,87 (m, 1H) , 7,79-7,50/7,34-7,27 (m, 5H), 4,86-4,70 (m, 1H), 3,52 (app br s, 1H) , 3,36 (m, 1H), 2,27-1, 77 (m, 4H), 1,45-1,10 (m, 21H) . LC (Cond. 1): RT = 1,64 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C24H35BN3O4· 440,27; encontrado 440,23.

Podem ser preparados compostos análogos incorporando o brometo de arilo apropriado.

Exemplo de referência 2, etapa a~b

O

Foi adicionado PdCl2(Ph3P)2 (257 mg, 0,367 mmol) a uma solução de dioxano (45 ml) de l-bromo-4-iodo-2-metilbenzeno (3,01 g, 10,13 mmol) e estanano de tri-n-butilo (1-etoxivinilo) (3,826 g, 10,59 mmol), e aquecido a 80 °C durante ~ 17 horas. A mistura de reacção foi tratada com água (15 ml), arrefecida a -0 °C (gelo/água) , e em seguida 31 foi adicionado NBS (1,839 g, 10,3 mmol) em lotes durante 7 minutos. Após cerca de 25 minutos de agitação, o componente volátil foi removido in vacuo, e o residuo foi repartido entre CH2CI2 e água. A camada aquosa foi extraída com CH2C12, e a fase orgânica combinada foi seca (MgS04), filtrada, e concentrada in vacuo. O material bruto resultante foi purificado por uma cromatografia de gravidade (sílica gel, 4% de acetato de etilo/hexanos), para fornecer brometo 121a como um sólido acastanhado amarelo (2,699 g), a amostra está impura e contém impurezas derivadas de estanano, entre outras. ΧΗ RMN (CDC13, δ = 7,24, 400 MHz): 7,83 (s, 1H) , 7,63 (s, 2H) , 4,30 (s, 2H) , 2,46 (s, 3H).

Foi adicionada gota a gota uma solução de CH3CN (15 ml) de 121a (2,69 g, < 9,21 mmol) durante 3 minutos, a uma solução de CH3CN (30 ml) de (S) -Boc-prolina (2,215 g, 10,3 mmol) e trietilamina (1,40 ml, 10,04 mmol), e agitada durante 90 minutos. O componente volátil foi removido in vacuo, e o resíduo foi repartido entre água e CH2CI2, e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada in vacuo. O material bruto resultante foi purificado por uma cromatografia flash (sílica gel, 15-20% de acetato de etilo/hexanos), para fornecer 121b como um óleo viscoso incolor (2.74g). XH RMN (DMSO-d6, δ = 2,50, 400 MHz): δ 7,98 (m, 1H), 7,78 (d, J = 8,3, 1H) , 7,72-7,69 (m, 1H) , 5,61-5,41 (m, 2H) , 4,35-4,30 (m, 1H) , 3,41-3,30 (m, 2H) , 2,43 (s, 3H), 2,33-2,08 (m, 2H), 1,93-1,83 (m, 2H), 1,40/1,36 (s, 9H); LC (Cond. 1): RT = 1,91 min; índice de homogeneidade > 95%; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+Na]+

Ci9H24BrNNa05 448,07, encontrado 448,10.

Podem ser preparados de maneira análoga ceto-ésteres adicionais.

Condições LC: Condição 1: Phenomenex LUNA C-18 4,6 x 50 mm, 0 a 100% B durante 3 minutos, 1 minuto tempo de retenção, A = 90% água, 10% metanol, 0,1% TFA, B = 10% 32 água, 90% metanol, 0,1% TFA, 220nm, 5 μΐ volume de injecção.

Condição 2: Phenomenex LUNA C-18 4,6 x 50 mm, 0 a 100% B durante 2 minutos, 1 minuto tempo de retenção, A = 90% água, 10% metanol, 0,1% TFA, B = 10% água, 90% metanol, 0,1% TFA, 220nm, 5 μΐ volume de injecção.

Secção R

Esquema 1

Exemplo RI. dicarbamato de terc-butilo (13,1^)-1,1^(5,5^ (bifenilo-4,4'-diilo) bis (lH-imidazol-5,2-diilo) ) bis (2-metilpropano,1,1-diilo) (3).

Uma solução de 1,1(bifenilo-4,4'-diilo) bis (2-bromoetanona) (1) (5,14 g, 18,4 mmol) e N-Boc-L-Valina (8,00 g, 36,8 mmol) em CH3CN seco (40 ml), foi tratada com iPr2NEt (7,05 ml, 40,5 mmol), e a solução foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo, e a pasta resultante foi repartida entre EtOAc e H20. As camadas foram separadas, e a fase aguosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas 33 combinadas foram secas sobre MgS04, filtradas, e concentradas sob vácuo. 0 resíduo foi suspenso em tolueno (100 ml), e foi adicionado NH4OAc (14,2 g, 184,2 mmol). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 16 h com remoção azeotrópica de H2O (Dean-Stark) . A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, e concentrada até à secura sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (biotage) eluindo com 0 a 40% CH3CN em CH2C12, e em seguida 10% MeOH em CH2C12, para dar o composto do título (5,77 g, 50%) como uma espuma amarela. ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-dg) δ 11, 77-11,93 (m, 2H) , 7,80 (s, br, 4H) , 7, 66-7, 68 (m, 4H) , 7,53 (s, br, 2H), 6,89 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 4,43 (app t, J = 8,2 Hz, 2H), 2,05-2,11 (m, 2H), 1,38 (s, 18H), 0,90 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 0,78 (d, J = 6,6 Hz, 6H). LCMS: Anal. Calcd. para C36H48N604: 628, encontrado: 629 (M+H)+.

Exemplo R2. dicarbamato de terc-butilo (IR, 1'R)-1,1'-(5,5'-(bifenilo-4,4'-diilo) bis (lH-imidazol-5,2-diilo)) bis (2-metilpropano-1,1-diilo).

80CHN H i O composto do título foi preparado de acordo com o método no exemplo Rl, começando com 1,1(bifenilo-4,4'-diilo) bis (2-bromoetanona) (1) e N-Boc-D-Valina. LCMS: Anal. Calcd. para C36H48N604: 628, encontrado: 629 (M+H)+. Exemplo R3 . (IS,1' S)-1,1'-(5,5'-(bifenilo-4, 4'-diilo) bis (lH-imidazol-5,2-diilo)) bis (2-metilpropano-l-amina). 34 Η2Ν

Foi adicionada uma solução de dicarbamato de terc-butilo (1R,1'R) -1,1 '-(5,5'-(bifenilo-4,4'-diilo) bis (1H- imidazol-5,2-diilo)) bis (2-metilpropano-l,1-diilo) (1,00 g, 1,59 mmol) em CH2CI2 (30 ml) a TFA (20 ml), e a solução foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante 5 h. Os solventes foram removidos sob vácuo, o resíduo foi dissolvido em CH2Cl2:MeOH (1:1) (ca. 10 ml), e absorvido num cartucho de troca de catião MCX (Oásis) . A resina foi lavada com MeOH, e o material desejado foi libertado por eluição com NH3 em MeOH (2M). Os solventes foram removidos sob vácuo para dar o composto do título (0,622 g, 91%) como uma espuma amarela, que era suficientemente puro para utilização nas etapas subsequentes. ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,76 (app d, J = 8,4 Hz, 4H) , 7,68 (app d, J = 8,4 Hz, 4H), 7,38 (s, 2H), 3,77 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 2,07 (sept, J = 7,0 Hz, 2H), 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 6H) , 0,88 (d, J = 7,0 Hz, 6H) . LCMS: Anal. Calcd. para C26H32N6: 428, encontrado: 429 (M+H)+.

Exemplo R4 . (IR, 1 'R)-1,1'-(5,5'-(bifenilo-4,4'-diilo) bis (lH-imidazol-5,2-diilo)) bis (2-metilpropano-l-amina).

O composto do título foi preparado de acordo com o método dado no exemplo R3, começando com dicarbamato de terc-butilo (IR,1'R)-1,1'-(5,5'-(bifenilo-4,4'-diilo) bis (lH-imidazol-5,2-diilo)) bis (2-metilpropano-l,1-diilo). LCMS: Anal. Calcd. para C26H32N6: 428, encontrado: 429 (M+H)+. 35

Exemplo R5. biscarbamato de dimetilo (4, 4'-bifenildiilbis (lH-imidazol-4, 2-diilo ((IS) -2-metilo-l, 1-propanodiilo) imino ((IS) -1-oxo-l, 2-propanodiilo)))

Uma solução de (IS,1' S)-1,1'-(5,5'-(bifenilo-4,4'-diilo) bis (lH-imidazol-5,2-diilo)) bis (2-metilpropano-l-amina) (120 mg, 0,280 mmol), ácido propanóico (S)—2 — (metoxicarbonilamino) (124 mg, 0,840 mmol) e iPr2NEt (0,489 ml, 2,80 mmol) em DMF (5 ml) foi tratada com HATU (426 mg, 1,12 mmol), e a mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. A mistura de reacção foi repartida entre H20 e EtOAc, as camadas separadas, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob vácuo, e purificadas por cromatografia em coluna (Biotage, 25S eluindo com 0 a 40% CH3CN em CH2C12, e em seguida 10% MeOH em CH2C12) . As fracções apropriadas foram concentradas sob vácuo, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (CH3CN-H20-TFA). Duas purificações posteriores por HPLC preparativa (CH3CN-H20-NH40Ac), seguidas por uma HPLC preparativa final (CH3CN-H20-TFA) , produziram o sal de TFA do composto do título (4,9 mg, 2%) como um sólido incolor. 1R RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,89 (s, 2H) , 7,86 (s, 8H) , 4,87 (d, J = 8,5

Hz, 2H), 4,19 (q, J = 7,0 H2, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 1,33 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 1,14 (d, J = 7,0 Hz, 6H) , 0,96 (d, J = 7,0 Hz, 6H) LCMS: . Anal. Calcd. para C36H46N806: 686, encontrado: 687 (M+H)+. 36 36 Exemplo Nome do composto Estrutura Dados analíticos Exemplo R6 biscarbamato de dimetilo (4,4'-bifenildiilbis (lH-imidazol-4,2-diilo ((IS)-2-metilo-l,1-propanodiilo) imino ((2S,3R)-3-metoxi-l-oxo-1,2-butanodiilo))) McOyCHty if~^l LCMS: Anal. Calcd. para C40H54N8O8: 774, encontrado: 775 (M+H) + . Exemplo R7 biscarbamato de dimetilo (4,4'-bifenildiilbis (lH-imidazol-4,2-diilo ((IS)-2-metilo-l,1-propanodiilo) imino ( (2 S)-3- metilo-l-oxo-1,2-butanodiilo))) MtOjCHS NWSOjMe y^>oa>^rr LCMS: Anal. Calcd. para C44H54N8O6: 742, encontrado: 743 (M+H) + . Exemplo R8 biscarbamato de dimetilo (4,4'-bifenildiilbis (lH-imidazol-4,2-diilo ((IS)-2-metilo-l,1-propanodiilo) imino ( (2 S)-4- metoxi-l-oxo-1,2-butanodiilo))) NXCOiMt i Η H J LCMS: Anal. Calcd. para C40H54N8O8: 774, encontrado: 775 (M+H) + . Exemplo R9 biscarbamato de dimetilo (4,4'-bifenildiilbis (lH-imidazol-4,2-diilo ((IR)-2-metilo-l,1-propanodiilo) imino ( (2 S)-3- metilo-l-oxo-1,2-butanodiilo))) UeOrfCKÇ MH»** LCMS: Anal. Calcd. para C4oH54N806 : 742, encontrado: 743 (M+H) + . Exemplo RIO biscarbamato de dimetilo (4,4'-bifenildiilbis (lH-imidazol-4,2-diilo ((IR)-2-metilo-l,1-propanodiilo) imino ((2S)-1-oxo—1,2-propanodiilo))) LCMS: Anal. Calcd. para C36H46N8O6: 686, encontrado: 687 (M+H)+.

Tabela IA. Os seguintes foram preparados de forma similar, começando com a amina apropriada e aminoácido de substituição._ 37

38 Esquema 2 ú

Ft CrN MH«OAe I (otuene

.ttKBae

fsa^ipi^/NaHCOj ©MSÍHjO

NHBoe

NM/ HAnJ/iPCjWa DMF

Exemplo R15. (S)-terc-butilo 1-(5-(4-bromofenilo)-1H- imidazol-2-ilo)-2-metilpropilcarbamato.

Uma solução de etanona de 2-bromo-l-(4-bromofenilo) (6,23 g, 22,3 mmol) e N-Boc-L-Valina (5,00 g, 23,0 mmol) em CH3CN seco (30 ml), foi tratada com iPr2NEt (4,40 ml, 25,3 mmol), e a solução foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo, e a pasta resultante foi repartida entre EtOAc e H20. As camadas foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, filtradas, e concentradas sob vácuo para dar um óleo amarelo. LCMS: Anal. Calcd. para Ci8H24BrN05: 413, 415, encontrado: 412,414 (M-H)“. O resíduo foi suspenso em tolueno (60 ml) e foi adicionado NH4OAc (8,61 g, 111,7 mmol). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 39 16 h com remoção azeotrópica de H20 (Dean-Stark). A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, e concentrada até à secura sob vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (biotage), eluindo com 10% MeOH em 39

CH2C1 2, para dar o composto do título (8,55 g, 94%) como uma espuma amarela. XH RMN (500 MHz, CD3OD) δ 7,84 (s, 1H) , 7,66 (app d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,64 (app d, J = 8,9 Hz, 2H) , 4,65 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 2,23-2,27 (m, 1H) , 1,42 (s, 9H) , 1,07 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS: Anal. Calcd. para Ci8H24BrN302: 393, 395, encontrado: 394, 396 (M+H)+ .

Exemplo R16. (R)-terc-butilo l-(5-(4-bromofenilo)-lH- imidazol-2-ilo)-2-metilpropilcarbamato. O composto do título foi preparado de etanona de 2-bromo-1-(4-bromofenilo) e N-Boc-D-Valina, utilizando o método dado no exemplo R15. ΧΗ RMN (500 MHz, CD3OD) δ 7,83 (s, 1H), 7,68 (app d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,64 (app d, J = 8,7 Hz, 2H), 4,65 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 2,22-2,26 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,08 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci8H24BrN302: 393, 395, encontrado: 394, 396 (M+H)+.

Exemplo R17. (S)-terc-butilo 2-(5-(4'-(2-((S)-1-(terc- butoxicarbonilamino)-2-metilpropilo)-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-ilo) pirrolidina-1- carboxilato.

Boe u

N fl ψ

ffíF h

NHBóC v 40

Uma solução de (S)-terc-butilo 1-(5-(4-bromofenilo)-lH-imidazol-2-ilo)-2-metilpropilcarbamato (2,00 g, 5,07 mmol), (S)-terc-butilo 2-(5-(4-(4,4,5,5-tetrametilo-1,3,2-dioxaborolan-2-ilo) fenilo)-lH-imidazol-2-ilo) pirrolidina-1-carboxilato (2,23 g, 5,07 mmol) e NaHC03 (1, 49 g, 17,8 mmol) em DME (50 ml) e água (15 ml), foi desgaseifiçada por evacuação e enchimento com N2.

Foi adicionado tetraquis (trifenilfosfina) paládio (0) (0,293 g, 0,254 mmol), e a mistura de reacção foi aquecida durante a noite a 100 °C. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, e o D ME foi removido sob vácuo. O resíduo foi repartido entre H20 e EtOAc, e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura sob vácuo, e purificadas por cromatografia em coluna (Biotage) , eluindo com um gradiente de 0 a 40% CH3CN em CH2C12, e em seguida 0 a 10% MeOH em CH2C12. O composto do título (2,05 g, rendimento de 65%) foi obtido como uma espuma castanha. Este material foi utilizado tal e qual nas etapas subsequentes. LCMS: Anal. Calcd. para C36H46N604: 626, encontrado: 627 (M+H)+.

Exemplo R17A. (S)-2-metilo-1-(5-(4'-(2-((S)-pirrolidina-2-ilo)-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-ilo) propano-l-amina.

Foi adicionado a uma solução de (S)-terc-butilo 2-(5—(4'—(2—((S)—1—(terc-butoxicarbonilamino)-2-metilpropilo)-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-1H- imidazol-2-ilo) pirrolidina-l-carboxilato (2,05 g, 3,27 mmol) em CH2C12 (20 ml), TFA (5 ml, 64,9 mmol), e a solução foi deixada a agitar durante 2h. Os solventes foram removidos sob vácuo, o resíduo foi dissolvido em 41 CH2Cl2:MeOH (1:1) (ca. 10 ml), e absorvido num cartucho de troca de catião MCX (Oásis). A resina foi lavada com MeOH, e o material desejado foi libertado por eluição com NH3 em MeOH (2M). Os solventes foram removidos sob vácuo para dar o composto do titulo (0,622 g, 91%) como uma espuma amarela, que era suficientemente puro para utilização nos passos subsequentes. ΤΗ RMN (500 MHz, CD3OD) δ 7,85-7,88 (m, 4H) , 7,75 (m, app d, J = 8,2 Hz, 4H), 7,70 (app d, J = 5,8 Hz, 2H), 4,96 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 3,54-3,57 (m, 1H) , 3,47-3,52 (m, 1H) , 2,55-2, 62 (m, 1H) , 2,38-2,46 (m, 1H) , 2,28-2,36 (m, 1H) , 2,15-2,24 (m, 1H) , 1,17 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para C26H30N6: 426, encontrado: 427 (M+H)+.

Exemplo R18. N2- (metoxicarbonilo) -N- ((IS) -1-(4-(4' - (2- ( (2S) -1- (N- (metoxicarbonilo) -L-valilo) -2-pirrolidinilo) -1H-imidazol-4-ilo)-4-bifenililo)-lH-imidazol-2-ilo)-2-metilpropilo)-L-valinamida

Um frasco de 50 ml com um único gargalo equipado com um agitador magnético, foi carregado com (S)-2-metilo-l-(5-(4' — (2 —((S)-pirrolidina-2-ilo)-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-ilo) propano-l-amina (80 mg, 0,188 mmol) e ácido butanóico de (S)—2 — (metoxicarbonilamino)-3-metilo (99 mg, 0,563 mmol) em DMF (5 ml), e foi adicionado DIEA (0,328 ml, 1,875 mmol). A esta solução foi adicionado HATU (285 mg, 0,750 mmol), e a reacção foi deixada a agitar durante 4h à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi repartida entre H20 e EtOAc, as camadas separadas, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob vácuo, e purificadas por 42 cromatografia em coluna (Biotage, 25S), eluindo com 0 a 40% CH3CN em CH2CI2, e em seguida 10% MeOH em CH2CI2. As fracções apropriadas foram concentradas sob vácuo, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (CH3CN-H20-TFA) , e em seguida uma purificação subsequente por HPLC preparativa (CH3CN-H20-NH40Ac) deu o composto do título (31,8 mg, 23%) como um sólido incolor. ΤΗ RMN (500 MHz, CD3OD) δ 7,71 (m, 4H) , 7,64-7,67 (m, 4H) , 7,35 (s, 1H) , 7,32 (s, 1H), 5,33-5,34 (m, 0,2H), 5,17 (dd, J = 7,6, 5,5

Hz, 0, 8H) , 4,77 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 4,22 e 4,10 (d, J = 7.6 Hz, 1H, rotâmeros razão 4:1), 3,97-4,01 (m, 1H), 3,94 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,84-3,89 (m, 1H), 3,64 (s, 6H) , 2,28-2,35 (m, 1H), 2,18-2,27 (m, 3H) , 1, 98-2, 08 (m, 3H) , 1,05 (d, J = 6,7 Hz , 3H), 0,98 e 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 6H) , 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,86 (d, J = 6.7 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para C4oH52N806: 740, encontrado: 741 (M+H)+. 43 Tabela 2A. Os seguintes foram preparados de forma similar, começando com a amina apropriada e aminoácido de

44

45

46

Exemplo Estrutura Dados analíticos Exemplo B Br—d jt H í LCMS: Anal. Calcd. para C16H21BrN302: 366, encontrado: 367 (M+H)+. Exemplo C LCMS: Anal. Calcd. para C22H31BN304: 413, encontrado: 414 (M+H)+. Exemplo D O-W1 Λ/νο-ο ^ jTNH8ac LCMS: Anal. Calcd. para C37H40N6O4: 632, encontrado: 633 (M+H)+. Exemplo E H fy/X-O-O LCMS: Anal. Calcd. para C29H34NG02: 498, encontrado: 499 (M+H)+. Exemplo F Nw^íl >=/ 'N-^v-NH, / i Μ H | LCMS: Anal. Calcd. para C24H26N6: 398, encontrado: 399 (M+H)+. Exemplo R26 M&OjCHH * |HCOjMe Yy-^ChQ^^V LCMS: Anal. Calcd. para C38H48N806 : 712, encontrado: 713 (M+H)+. 48

49

Exemplo R29.

Um frasco de 50 ml com um único gargalo equipado com um agitador magnético, foi carregado com um composto do exemplo (150 mg, 180 mmol) em metanol (5 ml) . A esta solução foi adicionada uma suspensão de paládio sobre carbono 10% (100 mg) em metanol (2 ml) . A mistura foi purgada com 60 psi de hidrogénio. A mistura foi agitada num Parr durante a noite à temperatura ambiente. O conteúdo do reactor foi analisado por LC-MS e mostrou uma realização de 20%. Foi adicionada uma suspensão de hidróxido de paládio sobre carbono 20% (100 mg) em ácido acético (2 ml) . A mistura foi purgada com hidrogénio, e agitada num agitador Parr com 60 psi de hidrogénio, durante o fim de semana. A reacção foi filtrada através de uma almofada de celite, e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (CH3CN-H20-TFA) para dar o composto (exemplo R29) 32 mg, rendimento de 23%, como um sólido branco. LCMS: Anal. Calcd. para C39H50N8O7: 742, encontrado: 743 (M+H)+.

50

Esquema 3

Br

DMF/fl MAC JLar HjN MHj

Pd(PPh3)4 rwaHCOj OMg I HjO

51

Exemplo R30. acetamida de N-(5-(4-bromofenilo)-lH-imidazol-2-ilo).

Sr

Uma mistura de etanona de 2-bromo-l-(4-bromofenilo) (2,00 g, 7,20 mmol) e acetilguanidina (2,18 g, 21,6 mmol) em DMF (40 ml), foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. A solução foi concentrada até à secura sob vácuo, e o sólido castanho resultante era de pureza suficiente para uso na etapa seguinte. LCMS: Anal. Calcd. para CnHi0BrN3O: 279, 281, encontrado: 280, 282 (M+H)+.

Exemplo R31. (S)-terc-butilo 2-(5-(4'-(2-acetamido-lH- imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-ilo) pirrolidina-l-carboxilato

Uma mistura de acetamida de N-(5-(4-bromofenilo)-1H-imidazol-2-ilo) (0,604 g, 2,16 mmol), (S)-terc-butilo 2 —(5 —

(4-(4,4,5,5-tetrametilo-l,3,2-dioxaborolan-2-ilo) fenilo)-lH-imidazol-2-ilo) pirrolidina-l-carboxilato (0,950 g, 2,16 mmol), NaHCCb (0,636 g, 7,57 mmol) em DME (20 ml) e H20 (5 ml) foi desgaseifiçada por evacuação e enchimento com N2 (X3). Foi adicionado a esta solução Pd(PPh3)4 (0,125 g, 0,11 mmol), e a suspensão foi aquecida a 125 °C durante 24h. A mistura foi evaporada até à secura sob vácuo, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (Biotage) , eluindo com um gradiente de 0 a 10% MeOH em CH2C12. O material foi então purificado por HPLC 52 preparativa (CH3CN-H2O-NH4OAC) para dar o composto do título como um sólido incolor. 7, 76 (app dd, J II co 2,2 Hz, 4H) , 7,69 (app d, J = 8,4 Hz, 2H) , 7,66 (app d, J = 8,4 Hz, 2H) , 7,45 (s, 1H), 7,23 (s, 1H) , 3,66-3,72 (m, 1H ), 3,48- 3,53 (s, 1H) , 2,34-2,46 (m, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 1 ,96-2,10 (m, 3H) , 1,46 f 1,25 (s, 9H, rotâmeros, razão 1:2). LCMS: Anal.

Calcd. para C29H32N603: 512, encontrado: 513, 282 (M+H)+. Exemplo R32. (S)-5-(4'-(2-(pirrolidina-2-ilo)-lH-imidazol- 5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-amina.

Etapa 1. Uma solução de (S)-terc-butilo 2—(5— (4'—(2— acetamido-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-ilo) pirrolidina-l-carboxilato (55,0 mg, 0,11 mmol) em CH2C12 (5 ml) e TFA (1 ml) foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura de reacção foi concentrada sob vácuo para dar o sal de TFA do composto do título (55,0 mg), que foi levado directamente para o passo seguinte. LCMS: Anal. Calcd. para C24H24N6O: 412, encontrado: 413 (M+H)+.

Etapa 2. O óleo castanho da etapa 1 foi suspenso em HC1 concentrado a 25% em MeOH (10 ml), e aquecido a refluxo durante 3 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (CH3CN-H20-TFA) para dar o sal de TFA do composto do título (20 mg, 42%). LCMS: Anal. Calcd. para C22H22N6: 370, encontrado: 371 (M+H)+.

Exemplo R33. (S)-2-metoxicarbonilamino-N-(5-(4'-(2-((S)-1-((S)-2-metoxicarbonilamino-3-metilbutanoilo) pirrolidina-2-ilo)-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-ilo)-3-metilbutanamida

53 MeOgCHN

NHCO2M6 A uma solução de sal de ácido trifluoroacético de (S)-5—(4*—(2—(pirrolidina-2-ilo)-lH-imidazol-5-ilo) bifenilo-4-ilo)-lH-imidazol-2-amina (20 mg, 0,04 mmol), ácido butanóico de (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilo (25 mg, 0,14 mmol) e iPr2NEt (0,09 ml, 0,53 mmol) em DMF (5 ml) foi adicionado HATU (54 mg, 0,14 mmol). A solução foi deixada a agitar durante 3h, e em seguida vertida em H20. A mistura foi concentrada até à secura sob vácuo, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (CH3CN-H2O-TFA), obtendo-se o composto do título e recuperando material de partida. O material de partida recuperado foi novamente sujeito às condições de reacção, e purificado como anteriormente. Os dois lotes de produto foram então purificados por HPLC preparativa (CH3CN-H20-NH40Ac) para dar o composto do título como um sólido acastanhado (18 mg, 76%). XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7, 80-7, 88 (m, 9H) , 7,56 (s, 1H), 5,24 (app t, J = 7,6 Hz, 1H) , 4,23 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,08-4,13 (m, 1H), 3,83-3,90 (m, 1H), 3,68 (s, 3H) , 3,65 (s, 3H) , 2,54-2,63 (m, 1H) , 2,17-2,30 (m, 4H) , 2,01-2,09 (m, 1H) . LCMS: Anal. Calcd. para C36H44N806: 684, encontrado: 685 (M+H)+.

Actividade biológica

Na presente divulgação foi utilizado um ensaio Replion VHC, e foi preparado, conduzido, e validado como descrito na propriedade comum PCT/US2006/022197 e em 0'Boyle et al. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Apr; 49 (4):1346-53.

Foram utilizadas células replicão lb-377-neo VHC para testar a série de compostos actualmente descrita, bem como células resistentes ao composto A devido a uma mutação Y2065H na NS5A (descrito no pedido PCT/US2006/022197). Os compostos testados foram determinados como tendo mais de 10 54 vezes menos actividade inibitória nas células resistentes ao composto A do que células do tipo selvagem, indicando um mecanismo de acção relacionado entre as duas séries de compostos. Assim, os compostos da presente divulgação podem ser eficazes para inibir a função da proteína NS5A VHC, e são entendidos por ser tão eficazes em combinações como previamente descritos no pedido PCT/US2006/022197, e na propriedade comum WO/04014852. Além disso, os compostos da presente divulgação podem ser eficazes contra o genótipo VHC lb. Deve também ser entendido que os compostos da presente divulgação podem inibir múltiplos genótipos de VHC. 0 quadro 2 mostra os valores de EC50 de compostos representativos da presente divulgação contra o genótipo VHC lb. Numa realização, os compostos da presente divulgação são activos contra os genótipos la, lb, 2a, 2b, 3a, 4a e 5a. As gamas EC50 contra VHC lb são como se segue: A = 1-10 μΜ, B = 100-999 nM, C = 1-99 nM, e D = 1-999 pM.

Os compostos da presente divulgação podem inibir VHC por mecanismos além de, ou outro além da inibição NS5A. Numa realização os compostos da presente divulgação inibem o replicão VHC, e noutra realização os compostos da presente divulgação inibem NS5A.

Quadro 2

Gama de exemplo R2 6 D R2 7 D R2 8 D R3 4 D R3 5 B R2 9 D R3 6 D R2 0 D R3 7 D R33 C 55

Será evidente para um perito na tecnologia, que a presente divulgação não se limita aos exemplos ilustrativos precedentes, e que pode ser realizada noutras formas especificas, sem se afastar dos atributos essenciais da mesma. É por conseguinte desejável, que os exemplos sejam considerados em todos os aspectos como ilustrativos e não restritivos, sendo feita referência às reivindicações anexas, em vez de aos exemplos precedentes, e todas as alterações que estejam dentro do significado e gama de equivalência das reivindicações, são portanto destinadas a ser abarcadas nas mesmas.

Os compostos da presente divulgação podem inibir VHC por mecanismos além de, ou outro além da inibição NS5A. Numa realização os compostos da presente divulgação inibem o replicão VHC, e noutra realização os compostos da presente divulgação inibem NS5A. Os compostos da presente divulgação podem inibir múltiplos genótipos de VHC. 56

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • WO 2006133326 A [0007] • WO 2005047288 A [0052] • US 2006022197 W [0100] [0101] • WO 04014852 A [0101]

Literatura não relacionada com patentes referida na descrição • Hepatology, 2003, vol. 38, 1282 [0051] • Biochem. Biophys. Res. Commun., 2004, vol. 313, 42 [0051] • J. Gastroenterol., 2003, vol. 38, 567 [0051] • 0'Boyle et al. Antimicrob Agents Chemother., April 2005, vol. 49 (4), 1346-53 [0100] • Tan, S.-L. ; Katzel, M.G. Virology, 2001, vol. 284, 1- 12 [0007] • Park, K.-J ; Choi, S.-H. J. Biological Chemistry, 2003 [0007] • Pharmaceutical Research, 1986, vol. 3 (6), 318 [0041]

Claims (14)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto seleccionado de biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis(1H- imidazol-4,2-diil((IS)-2-metil-1,1-propanodiil)imino((2 S) — 1-oxo-l,2-propanodiilo))); biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis(1H- imidazol-4,2-diil((IS)-2-metil-l,1-propanodiil)imino ((2S,3R)-3-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil((IS)-2-metil-l,1-propanodiil) imino

((2 S)-3-metil-l-oxo-1,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil ((IS)-2-metil-l,1-pronanodiil) imino ((2 S)-4-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil((IR)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ((2S)-3-metil-l-oxo-1,2-butanodiilo))) ; biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-1,1-propanodiil) imino ( (2S)-1-oxo-l,2-propanodiilo))); biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-1,1-propanodiil) imino ((2 S)-4-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil(4,4'-bifenildiilbis (1H- imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-1,1-propanodiil) imino ((2 S,3R)-3-metoxi-l-oxo-l,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetilo (4,4'-bifenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IR)-2-metil-1,1-propanodiil) imino ((2R)-3-metil-l-oxo-1,2-butanodiilo))); biscarbamato de dimetil (4,4'-biofenildiilbis (1H-imidazol-4,2-diil ((IS)-2-metil-l,1-propanodiil) imino ((2R)-3-metil-l-oxo-1,2-butanodiilo))) ; N2-(metoxicarbonil)-N-((lS)-l-(4-(4'-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-valil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4- 2 il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-2-metilpropil)-L-valinamida; carbamato de metil((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(4-(4'-(2-((1S)—1—((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); carbamato de metil ((IS)-3-metoxi-l-(((2S)-2-(4-(4'-(2-((1S)—1—((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); carbamato de metil ((IS)-2-((2S)-2-(4-(4'-(2-((IS)-1-((N-(metoxicarbonil)-L-alanil) amino)-2-metilpropil)-1H-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-1-metil-2-oxoetilo); N1-(metoxicarbonil)-N-((lR)-l-(4-(4'-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-valil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-2-metilpropil)-L-valinamida; carbamato de metil((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(4-(4'-(2-((IR)-1-((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); carbamato de metil ((IS)-3-metoxi-l-((2S)-2-(4-(4'-(2-((IR)-1-((N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril) amino)-2-metilpropil)-lH-imidazol-4-il)-4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil) propilo); e carbamato de metil ((IS)-2-((2S)-2-(4-(4'-(2-((IR)-1-((N-(metoxicarbonil)-L-alanil) amino)-2-metilpropil)-1H-imidazol-4-il) 4-bifenilil)-lH-imidazol-2-il)-1- pirrolidinil)-1-metil-2-oxoetilo); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. 1 Um composto seleccionado de 3

MeOjCHN Η ^HCOíMe 4 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Uma composição compreendendo um composto das reivindicações 1 ou 2, ou um sal f armaceuticamente aceitável do mesmo, e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

4. A composição da reivindicação 3, compreendendo ainda um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC.

5. A composição da reivindicação 4, em que pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão ou uma ribavirina.

6. A composição da reivindicação 5, em que o interferão é seleccionado de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão de consenso, interferão alfa 2A e interferão tau linfoblastóide.

7. A composição da reivindicação 4, em que pelo menos um dos compostos adicionais é seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que aumenta o desenvolvimento de uma resposta de células T auxiliares tipo 1, ARN interferente, ARN anti-sense, Imiqimod, ribavirina, um inibidor da inosina 5'-monofosfato desidrogenase, amantadina e rimantadina.

8. A composição da reivindicação 4, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo seleccionado de metaloprotease de VHC, serina protease de VHC, polimerase de VHC, helicase de VHC, proteína NS4B de VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, libertação de VHC, proteína NS5A de VHC e IMPDH para o tratamento de uma infecção pelo VHC. 5

9. Um composto das reivindicações 1 ou 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de uma infecção pelo VHC num paciente.

10. O composto para utilização de acordo com a reivindicação 9, que compreende ainda a utilização de um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes, após, ou simultaneamente com o composto das reivindicações 1 ou 2, ou um sal f armaceuticamente aceitável do mesmo.

11. 0 composto para utilização de acordo com a reivindicação 10, em que pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão ou uma ribavirina.

12. 0 composto para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que o interferão é seleccionado de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão de consenso, interferão alfa 2A e interferão tau linfoblastóide.

13. 0 composto para utilização de acordo com a reivindicação 10, em que pelo menos um dos compostos adicionais é seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que aumenta o desenvolvimento de uma resposta de células T auxiliares tipo 1, ARN interferente, ARN anti-sense, Imiqimod, ribavirina, um inibidor da desidrogenase inosina 5'-monofosfato, amantadina e rimantadina.

14. 0 composto para utilização de acordo com a reivindicação 10, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo seleccionado de metaloprotease de VHC, serina protease de VHC, polimerase de VHC, helicase de VHC, proteina NS4B de 6 VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, libertação de VHC, proteína NS5A de VHC e IMPDH para o tratamento de uma infecção pelo VHC.