CN101933899A - 一种依达拉奉注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种依达拉奉注射液及其制备方法，其该注射液中含有活性物质依达拉奉、抗氧剂焦亚硫酸钠和助溶剂丙二醇。本发明在依达拉奉注射液生产过程中，采用增加抗氧剂焦亚硫酸钠，并在药液灌封前后向安瓿瓶中填充高纯氮气，保证安瓿中药液上方空气中的残留氧气小于3％，从而保证依达拉奉始终处于一个低氧的环境中。本发明提高了依达拉奉注射液的稳定性，延长其有效期，确保依达拉奉注射液在临床上使用的安全有效。

Description

一种依达拉奉注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种稳定的依达拉奉注射液制剂及制备工艺。

背景技术

依达拉奉注射液(Edaravone Injection)是由日本三菱东京制药株式会社研制用于治疗急性脑梗塞病人的脑神经保护剂。南京先声东元制药有限公司于2003年12月在我国首先研发上市，商品名为必

，该药用于治疗缺血性脑血管疾病的新型自由基清除剂和神经保护药物，在治疗心脑血管疾病尤其是急性缺血性中风方面具有明确的临床疗效。

依达拉奉的化学名称为：3-甲基-1苯基-2-吡唑啉-5-酮(3-Methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one)，其结构式为：

分子式：C₁₀H₁₀N₂O    分子量：174.20

依达拉奉是强效自由基清除剂，在脑缺血、缺氧后可抑制再灌注引起的大量自由基和脂质过氧化物的产生，从而保护脑组织，减轻脑神经症状，促进神经功能恢复。

依达拉奉是一种新发展的羟基自由基清除作用的抗氧剂。脑缺血尤其是再灌注后脑缺血患者水肿与组织损伤的一个主要原因是花生四烯酸过氧代谢的作用，这种过氧代谢产生了毒性氧自由基导致过氧化神经损害和生成白三烯。依达拉奉对花生四烯酸过氧代谢的疗效在沙土鼠栓塞模型上进行了临床前评价。依达拉奉在60分钟内显著抑制缺血30分钟后再循环的皮质水肿的恶化。另外，沙土鼠缺血后给予1.0～3.0mg/kg依达拉奉静注治疗，一般在缺血30分钟后再循环15分钟观察到抑制了脑部白三烯的合成。因此，依达拉奉的作用点与花生四烯酸的过氧代谢有紧密的关系。

其它研究也表明依达拉奉能防止由15-HPETE(花生四烯酸的代谢中间体脂质过氧化物)引起的过氧化性细胞损伤。在培养的牛内皮细胞上研究了依达拉奉对花生四烯酸新陈代谢和由15-HPETE引起的细胞损害的作用，在30uM浓度下，依达拉奉促进了完整内皮细胞前列环素产生，而对磷脂酶A2没有影响。当内皮细胞匀浆作为酶源时，依达拉奉促进花生四烯酸转化成类似于苯酚的前列环素，这可以在PGG2转化为PDH2进程中通过俘获OH自由基产生。依达拉奉能显著防止15-HPETE导致的细胞死亡。60％的细胞群在依达拉奉浓度为30μM时得到保护，完全得到保护需经预防治疗或使依达拉奉浓度同时增加到30μM。

依达拉奉抗缺血活性和可能的作用机理在大鼠全脑缺血模型上进行了研究。用依达拉奉3mg/kg静注预防缺血治疗，促进了ECG活性恢复，延长了生存时间。依达拉奉(1～3mg/kgiv.)还能减轻血-脑屏障机能障碍和因大脑半球栓塞而导致的能量供应不足。脑缺血后用依达拉奉治疗减轻了因局部栓塞引起的大脑栓塞。依达拉奉表现出了对由OH自由基和离子产生的脂质过氧化物的显著的抗氧剂作用，二者均意味着脑缺血损害。这些结果表明依达拉奉对潜在的抗脑缺血活性和有效的抗氧作用有关。在试验中发现依达拉奉的阴离子形态比非离子形态对含氮引发剂产生的过氧化自由基活性更高，这基于观察到随pH增加对依达拉奉的氧化率提高，依达拉奉的抗氧化作用和维生素C一样有效，在抑制由水溶性引发剂引起的大豆卵磷脂脂质膜的氧化方面几乎和维生素E一样有效，进一步支持其具有令人鼓舞的抗氧化活性。

在正常与脑缺血大鼠上进行了依达拉奉对单氨代谢物作用的研究。在防止脑栓塞剂量下，依达拉奉对多巴胺、去甲肾上腺素、5-HT和它们在脑内代谢物的浓度无影响。依达拉奉(3mg/kg，静注)能减轻缺血引起的脑内单氨代谢的变化，极可能是由于其自由基俘获活性，而对正常动物无明显影响。在大鼠缺血模型中，依达拉奉对防止脑缺血和缺血后脑栓塞表现出显著疗效，它减少了脂肪氧化酶代谢物的产生，包括自由基和脂质过氧化物。

不但依达拉奉对脑缺血的疗效最终得到肯定，而且依达拉奉潜在用于与心脏再灌注损伤的研究也在进行。依达拉奉在延长缺血的分离灌注的大鼠心脏上表现出能减小再灌注损伤，它的疗效对减轻心脏损害比对保持冠脉循环更有相关性。

依达拉奉对心脏的保护作用在临床前模型上得到了评价。在大鼠心肌缺血再灌注模型中，给予依达拉奉(3mg/kg，iv)显著减少了来自左心室心肌素酶活性损失。依达拉奉可能在治疗心肌缺血再灌注损伤方面具有潜在应用。在犬心肺旁路缺血再灌注模型中，在再灌注前或缺血后给予依达拉奉(3mg/kg，溶于生理盐水)在保护心脏损伤方面很有效。

急性脑梗塞临床试验表明，在双盲对照试验中，发病后72小时内的脑梗塞患者给予依达拉奉治疗，与空白对照组相比，依达拉奉组在神经症状、日常活动障碍方面有改善，最终全面改善率为32.8％，两组有显著性差异。出现症状后24小时就开始给药的患者，最终全面改善率为48.2％。治疗三个月后，对病例进行评价，依达拉奉组疗效显著好于对照组，两组有显著性差异，所有症状消失的比率，依达拉奉组为22.3％(27/121)，对照组为10.0％(12/120)；出现症状后24小时内给药的患者，依达拉奉组为34.1％(14/41)，对照组为2.9％(1/15)。给予患者30mg药物，出现症状后72小时内给药者，改善率为69.5％，发病24小时内给药者，改善率为70.3％。

由于依达拉奉主环是五元环的酮，羰基与N相邻，2号位的N连着不饱和键，很容易氧化，因此这个分子结构很不稳定，遇到氧就会氧化成没有活性的物质，且易产生高分子杂质，对人体造成伤害。此外，这个分子有个苯基、结构中没有羟基、羧基等亲水基团，难以溶于水。甲基与笨基难溶于水，调pH值能增加它的溶解度，但同时也会加剧其氧化造成不稳定性。2005年后，中国又陆续批了五个企业可以生产依达拉奉注射液，但在抗氧化方面均关注太少，有的(专利公开号CN 1440749A)采用亚硫酸氢钠作抗氧剂，较难解决本品的易氧化、不稳定的难题，这些企业的有效期均为一年半。

发明内容

本发明的目的是为了克服依达拉奉在水溶液中稳定差、容易氧化的缺点，提供一种依达拉奉注射液。本发明通过在溶液中增加适当的抗氧剂，并排除药液及环境中的游离氧，保证药品在工艺过程及储存期间的稳定。

本发明的另一目的是提供一种上述依达拉奉注射液的制备方法。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种依达拉奉注射液，该注射液中含有活性物质依达拉奉、抗氧剂焦亚硫酸钠和助溶剂丙二醇。

其中抗氧剂焦亚硫酸钠的用量优选为1～1.5mg/ml，助溶剂丙二醇的用量优选为0.01～0.1ml/ml，依达拉奉的含量优选为0.4～10mg/ml。

该注射液的pH值为3.8～4.2。该注射液采用充氮灌封，封装后的注射液中含氧量低于3％。

本发明的依达拉奉注射液的制备方法，包括如下步骤：

(1)取丙二醇并加热至60～70℃，加入依达拉奉，溶解；(溶解过程中优选搅拌)

(2)另称取焦亚硫酸钠中，加注射用水溶解；

(3)在依达拉奉丙二醇溶液中缓缓加入焦亚硫酸钠的水溶液，然后加入注射用水；(依达拉奉丙二醇溶液与焦亚硫酸钠的水溶液混合时，以及加入注射用水时，均需缓缓加入且边搅拌边加入；注射用水可加至总体积的1/4)

(4)再加入针用活性炭(0.1％)，搅拌，静置，抽滤，除炭；

(5)加入剩余的注射用水；

(6)采用盐酸(0.1mol/L)调节pH值至3.8～4.2；

(7)用微孔滤膜(0.22μm)滤至澄明；

(8)充氮灌封于安瓿中，使安瓿中的含氧量低于3％；

(9)热压灭菌(110～120℃)。

以下将本发明与现有技术对比，进而说明本发明的技术方案与性能。

(1)抗氧剂种类的选择

参考日本三菱东京制药公司依达拉奉注射液的配方，加入了亚硫酸氢钠和盐酸半胱氨酸做抗氧剂，由于原配方pH值偏酸性，我们单独筛选了酸性环境下常用的抗氧化剂亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠。共筛选了三个配方，分别以亚硫酸氢钠0.1％及盐酸半胱氨酸0.05％，亚硫酸氢钠0.1％，焦亚硫酸钠0.1％为抗氧剂。见表1。

表1配方中抗氧化剂的筛选

说明：R₁：加入盐酸半胱氨酸和亚硫酸氢钠为抗氧化剂的配方

      R₂：仅加入亚硫酸氢钠为抗氧化剂的配方

      R₃：仅加入焦亚硫酸钠为抗氧化剂的配方

制备工艺如下：取丙二醇热水浴加热至60～70℃，加入依达拉奉，搅拌至完全溶解。另称取抗氧化剂倒入烧杯中，加注射用水搅拌至完全溶解。在依达拉奉丙二醇溶液中边搅拌边缓缓加入预溶的含抗氧剂的溶液，然后边搅拌边缓缓加入注射用水至总体积的1/4。再加入针用活性炭(0.1％)，温热搅拌15分钟，静置，抽滤，除炭。加入剩余的注射用水。0.1mol/L盐酸调节pH至3.8～4.2，中间体检查，再以0.22μm微孔滤膜精滤至澄明，灌封于安瓿中，115℃热压灭菌30分钟。

将制得的各配方进行检验，见表2。

表2配方中抗氧化剂的筛选结果

由表2可知，单用亚硫酸氢钠作抗氧剂的配方澄明度合格率较，原日本三菱东京制药公司配方采用亚硫酸氢钠与盐酸半胱氨酸联合作为抗氧剂与单用焦亚硫酸钠的效果相当，但在中国不提倡使用生物制品的盐酸半胱氨酸用作注射液的辅料，故决定采用焦亚硫酸钠作为抗氧剂，并进一步筛选焦亚硫酸钠的用量。

(2)焦亚硫酸钠用量的筛选

抗氧化剂焦亚硫酸钠浓度按0.05％(即0.0005g/ml)、0.1％(即0.001g/ml)、0.15％(即0.0015g/ml)三个水平进行试验。将所有配方按上述配方工艺制备，按照60℃恒温的考察条件，将所有样品在第5天，第10天考察性状、pH值、含量及有关物质。结果见表3。

表3配方中焦亚硫酸钠用量的筛选

说明：R₄：不加入焦亚硫酸钠的配方

      R₅：加入焦亚硫酸钠0.05％的配方

      R₆：加入焦亚硫酸钠0.10％的配方

      R₇：加入焦亚硫酸钠0.15％的配方

将制得的各配方进行检验，见表4。

表4焦亚硫酸钠剂量的筛选结果

由表4可知，加焦亚硫酸钠0.1％和0.15％的配方相对较稳定，与不加焦亚硫酸钠和加0.05％焦亚硫酸钠的配方相比，含量、有关物质、pH的变化均较小。故选择含焦亚硫酸钠0.1％～0.15％作为抗氧剂。

(3)充氮的保护

为了更好的防止依达拉奉在水溶液中氧化分解，因而在灌封时充氮，并比较充氮与否对依达拉奉稳定性的影响，结果如表5所示

表5灌封充氮与否的比较研究

考察：本品为注射液，主要通过考察pH值、颜色，有关物质及含量来筛选配方。见表6。

表6各配方所得制剂性质考察结果

根据表6可以看出，各配方的pH值，颜色，有关物质及含量检查均无显著性差异。这是由于灌封后立即检测的结果，为了考察真实的影响，采用低温试验

(4)低温加速试验

对样品进行低温试验，每次循环应在2～8℃两天，然后在40℃加速条件下两天，考察性状、pH值、含量及有关物质，循环三次。见表7。检查结果如下：

表7两种配方低温试验结果

由表7可知，样品经过三次低温实验，R₈的含量、有关物质变化比较明显，相对而言，R₁₀R₁₁R₁₂增加较少。且R₈R₉的pH值变化明显，而R₁₀R₁₁R₁₂的pH值无明显变化，因此可以说明充氮使含氧里低于4.5％后有助于提高本品的稳定性，且尤以充氮后含氧量低于3％有助于提高本品的稳定性，故优选充氮至含氧量低于3％。

(5)本发明的制备工艺为

取丙二醇热水浴加热至60～70℃，加入依达拉奉，搅拌至完全溶解。另称取焦亚硫酸钠(0.1％～0.15％)倒入烧杯中，加注射用水搅拌至完全溶解。在依达拉奉丙二醇溶液中边搅拌边缓缓加入预溶的含抗氧剂的溶液，然后边搅拌边缓缓加入注射用水至总体积的1/4。再加入针用活性炭(0.1％)，温热搅拌15分钟，静置，抽滤，除炭。加入剩余的注射用水。0.1mol/L盐酸调节pH至3.8～4.2，中间体检查，再以0.22μm微孔滤膜精滤至澄明，充氮灌封于安瓿中，115℃热压灭菌30分钟。

(6)稳定性考察

按以上工艺，制成样品0.1％的样品D051129和0.15％的样品D051130，分别置于(25±2)℃，RH60％±10％条件下，分别在试验初始(0月)和3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、36个月末取样测定。

稳定性试验结果如下，可以看出批样品在本试验的各项考察结果均无显著变化，可见含焦亚硫酸钠0.1％～0.15％的配方经115℃30min热压灭菌后，在室温条件下3年是稳定的。

表8依达拉奉注射液长期稳定性考察结果

(规格：5ml：10mg；115℃，30min热压灭菌)

本发明在依达拉奉注射液生产过程中，采用增加抗氧剂焦亚硫酸钠(0.1％～0.15％)，并在药液灌封前后向安瓿瓶中填充高纯氮气，保证安瓿中药液上方空气中的残留氧气小于3％。从而保证依达拉奉始终处于一个低氧的环境中。本发明提高了依达拉奉注射液的稳定性，延长其有效期，确保依达拉奉注射液在临床上使用的安全有效。

具体实施方式

本发明的目的在于通过增加抗氧剂和灌封时充氮提高依达拉奉注射液的稳定性，延长有效期，下面一些具体实施例进一步描述了本发明，但并不仅限于以下实施例。

实施例1：规格：5ml:10mg

配方：

取丙二醇热水浴加热至60～70℃，加入依达拉奉，搅拌至完全溶解。另称取焦亚硫酸钠(0.1％)倒入烧杯中，加注射用水搅拌至完全溶解。在依达拉奉丙二醇溶液中边搅拌边缓缓加入预溶的含抗氧剂的溶液，然后边搅拌边缓缓加入注射用水至总体积的1/4。再加入针用活性炭(0.1％)，温热搅拌15分钟，静置，抽滤，除炭。加入剩余的注射用水。0.1mol/L盐酸调节pH至4.0，中间体检查，再以0.22μm微孔滤膜精滤至澄明，充氮灌封于安瓿中，115℃热压灭菌30分钟。三年后各项检查均符合标准，说明有效期可以达到3年。

实施例2：规格：5ml:10mg

配方：

取丙二醇热水浴加热至60～70℃，加入依达拉奉，搅拌至完全溶解。另称取焦亚硫酸钠(0.15％)倒入烧杯中，加注射用水搅拌至完全溶解。在依达拉奉丙二醇溶液中边搅拌边缓缓加入预溶的含抗氧剂的溶液，然后边搅拌边缓缓加入注射用水至总体积的1/4。再加入针用活性炭(0.1％)，温热搅拌15分钟，静置，抽滤，除炭。加入剩余的注射用水。0.1mol/L盐酸调节pH至4.2，中间体检查，再以0.22μm微孔滤膜精滤至澄明，充氮灌封于安瓿中，115℃热压灭菌30分钟。三年后各项检查均符合标准，说明有效期可以达到3年。

实施例3：规格：20ml:30mg

配方：

取丙二醇热水浴加热至60～70℃，加入依达拉奉，搅拌至完全溶解。另称取焦亚硫酸钠(0.1％)倒入烧杯中，加注射用水搅拌至完全溶解。在依达拉奉丙二醇溶液中边搅拌边缓缓加入预溶的含抗氧剂的溶液，然后边搅拌边缓缓加入注射用水至总体积的1/4。再加入针用活性炭(0.1％)，温热搅拌15分钟，静置，抽滤，除炭。加入剩余的注射用水。0.1mol/L盐酸调节pH至3.9，中间体检查，再以0.22μm微孔滤膜精滤至澄明，充氮灌封于安瓿中，115℃热压灭菌30分钟。三年后各项检查均符合标准，说明有效期可以达到3年。

实施例4：规格：20ml:30mg

配方：

取丙二醇热水浴加热至60～70℃，加入依达拉奉，搅拌至完全溶解。另称取焦亚硫酸钠(0.15％)倒入烧杯中，加注射用水搅拌至完全溶解。在依达拉奉丙二醇溶液中边搅拌边缓缓加入预溶的含抗氧剂的溶液，然后边搅拌边缓缓加入注射用水至总体积的1/4。再加入针用活性炭(0.1％)，温热搅拌15分钟，静置，抽滤，除炭。加入剩余的注射用水。0.1mol/L盐酸调节pH至4.0，中间体检查，再以0.22μm微孔滤膜精滤至澄明，充氮灌封于安瓿中，115℃热压灭菌30分钟。三年后各项检查均符合标准，说明有效期可以达到3年。

Claims (7)

1.一种依达拉奉注射液，其特征在于该注射液中含有活性物质依达拉奉、抗氧剂焦亚硫酸钠和助溶剂丙二醇。

2.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液，其特征在于所述抗氧剂焦亚硫酸钠的用量为1～1.5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液，其特征在于所述助溶剂丙二醇的用量为0.01～0.1ml/ml。

4.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液，其特征在于该注射液采用充氮灌封，封装后的注射液中含氧量低于3％。

5.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液，其特征在于该注射液的pH值为3.8～4.2。

6.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液，其特征在于所述注射液中依达拉奉的含量为0.4～10mg/ml。

7.权利要求1所述的依达拉奉注射液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)取丙二醇并加热至60～70℃，加入依达拉奉，溶解；

(2)另称取焦亚硫酸钠中，加注射用水溶解；

(3)在依达拉奉丙二醇溶液中缓缓加入焦亚硫酸钠的水溶液，然后加入注射用水；

(4)再加入针用活性炭，搅拌，静置，抽滤，除炭；

(5)加入剩余的注射用水；

(6)采用盐酸调节pH值至3.8～4.2；

(7)用微孔滤膜滤至澄明；

(8)充氮灌封于安瓿中，使安瓿中的含氧量低于3％；

(9)热压灭菌。