CN109906076A

CN109906076A - 硫辛酸胆碱酯组合物和稳定为药学上相关的药物产品的方法

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Publication number: CN109906076A
Application number: CN201780058684.2A
Authority: CN
Inventors: S·P·巴曼; K·巴曼; W·伯恩斯; K·克劳福德; A-M·克罗姆威克; K·沃德
Original assignee: Encore Visual Co
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2016-09-23
Filing date: 2017-09-22
Publication date: 2019-06-18
Also published as: CO2019002663A2; RU2019111885A; AU2017331591B2; CL2019000766A1; ECSP19020167A; RU2019111885A3; WO2018055572A1; US20230135366A1; BR112019005426A2; MY194044A; JOP20190057A1; JP7091318B2; RU2761519C2; MX2019003365A; IL265480B; PE20191130A1; AU2017331591A1; JP2019534864A; EP3515410A1; CR20190148A

Abstract

本发明描述了眼用硫辛酸胆碱酯组合物和生产适用于眼睛的所述组合物的生物相容性制剂的具体方法。

Description

硫辛酸胆碱酯组合物和稳定为药学上相关的药物产品的方法

技术领域

本发明总体上涉及包含硫辛酸胆碱酯的药学上顺应性的组合物，以及当作为滴眼剂施用时稳定组合物并最小化对眼组织的刺激的具体组合物和方法。本文的组合物被认为是用于(但不限于)眼部障碍，例如老花眼、干眼症、白内障和年龄相关性黄斑变性的疗法。

背景技术

硫辛酸胆碱酯(LACE)是R-α-硫辛酸的化学合成衍生物。

硫辛酸(Lipoic acid)，也称为硫辛酸(thioctic acid)，是具有二硫键的八碳脂肪酸，所述二硫键连接碳6和8以形成1,2-二硫戊环的环。所述酸形成光学异构体，其中异构体R-α-硫辛酸是最具生物活性的。

设计硫辛酸胆碱酯(LACE，化学结构，参见图1)以通过掺入阳离子胆碱头基渗透生物膜。虽然硫辛酸不渗透角膜，但硫辛酸的胆碱酯衍生物渗透角膜，被角膜酯酶水解并转化为生物活性硫辛酸。LACE已配制成眼用溶液，每日两次作为滴眼剂施用以治疗老花眼。

LACE是由硫辛酸和胆碱组成的前药，是治疗老花眼的独特分子。硫辛酸(LA)是活性成分，胆碱头基用于帮助渗透到眼睛中。在给予滴眼剂后，LA和胆碱之间的键被泪膜和角膜中的酯酶水解。游离的硫辛酸进入眼睛并最终到达晶状体。在那里它被内源性氧化还原酶还原成二氢硫辛酸，然后引起表面细长的晶状体细胞内的胞质蛋白的水解。这种蛋白质裂解允许细胞溶质的自由流动和涉及年龄相关性晶状体硬化的氧化过程的逆转。预计从LACE制备的眼用溶液将使具有老花眼、年龄相关性适应损失人群能够适应和改善近视力聚焦。

老花眼是一种与年龄相关的无法聚焦近物体；这种病况是由晶状体微观结构的生理变化引起的，该生理变化导致晶状体的焦距和弯曲以使视觉对象处于聚焦下的自动调节失去灵活性。通过矫正晶状体矫正这种病况。据报道，硫辛酸胆碱酯(“LACE”)(参见例如美国专利号8,410,462)可以恢复近视力。

支持该要求的是离体研究，其证明可以使用蛋白质二硫化物还原剂二硫苏糖醇(DTT)在人供体晶状体中和用硫辛酸在小鼠晶状体中药理学诱导晶状体软化。

这种作用机制允许考虑治疗多种眼部疾病和病症。这些病症包括但不限于老花眼、年龄相关性黄斑变性、白内障和干眼症。

使LACE制剂有疑问的问题是通过二硫戊环键开环形成损害分子活性的氧化物种而导致不稳定的倾向。在室温下，LACE迅速降解成氧化物种(参见“具有降解产物的LACE眼用溶液的HPLC色谱图”，参见图2)。甚至当在冷藏温度下储存时，早在1周时就会在储存中发生快速氧化，包括该分子作为药物产品的使用。为了使LACE眼用溶液(也称为EV06眼用溶液)充分发挥作为药物产品的作用，水性制剂在储存和使用过程中稳定是至关重要的。

挫败LACE眼用溶液的药物开发的另一个问题是在兔刺激模型中体内观察到的眼表刺激的发生率。本发明详述了导致或引起眼部刺激的预料不到的参数以及消除或最小化这些参数的过程。这些参数与药物物质的制剂组成或性质无关，是通常与眼部刺激相关或归因于眼部刺激的因素。

其中描述的组合物和方法描述了长期稳定眼用LACE制剂的制剂和方法。

还描述了关于在某些工艺条件下配制的LACE制剂的刺激原因的未预料到的发现。刺激原因与水中LACE盐分子的聚集有关，该聚焦作为与周围水分子的疏水相互作用以及与抗衡阴离子(氯离子或碘离子)的离子相互作用的一部分。关键工艺参数被确定为生成最终令人舒服的LACE氯化物眼用溶液(EV06眼用溶液)的关键因素。对于氯化物盐，最终的工艺条件使降解物种的形成最小化并且使得归因于眼部刺激的物种的形成最小化。

使用LACE-碘化物时简单的工艺优化不会产生令人舒服的溶液。当盐形式为碘化物时，LACE的聚集物不能分散，因为较大的碘离子使聚集物种稳定。

一旦溶解在水溶液中，对于LACE-碘化物盐而言，一旦形成就不能分散聚集，沉降出热力学稳定的聚集物种，其约为LACE-碘化物峰的39-41％。对缔合物种和眼部刺激进行了相关性研究。本发明的第二方面是通过在环糊精中产生包合络合物来稳定LACE碘化物药物产品。

发明内容

所提出的发明实现了两个主要目标：(a)产生LACE的眼用溶液，其在2-5℃的冷藏温度下稳定至少一年，和(b)产生对眼睛无刺激性的制剂(LACE-氯化物和LACE-碘化物二者)。

LACE的化学结构决定了两个降解点。一个是二硫戊环的开环，另一个是氧化和水解降解。如前所述，LACE与氧相互作用以快速产生氧化物种。在水中，LACE也易发生酯键水解而产生硫辛酸和胆碱。水解发生的速率与温度有关；在较低温度和pH下水解较少。

对LACE眼用溶液衍生物(也称为EV06眼用溶液)进行研究，所述LACE眼用溶液衍生物储存在可透气的可渗透LDPE滴眼瓶中。本文描述了本发明人开发的使配混的LACE溶液在储存期间的氧化最小化的方法。

另外，赋形剂混合物与LACE的广泛相容性研究确定了某些赋形剂作为稳定因子的关键性，pH在稳定LACE在水中的水解中的作用，以及渗透压调节剂如氯化钠和甘油的作用。最重要的是，与柠檬酸盐、磷酸盐和硼酸盐相对，在所提出的发明中已经描述了丙氨酸对LACE的稳定作用。

在寻找刺激原因时，发现当溶解在水中时，LACE形成胶束和胶束聚集体，这是本质上两亲性的化合物常见的。作为定义，胶束形成化合物的实例是磷脂酰胆碱、聚乙二醇化磷脂酰胆碱、PEG-硬脂酸酯、山梨糖醇等。虽然LACE的胶束形成现象由于分子的两亲性质而不出乎意料，但这些聚集体在较低温度下形成是出人意料的。通过内部开发的RP-HPLC方法测量聚集体的存在。可以用HPLC-UV和HPLC-ELSD进行测量。LACE的氯化物和碘化物盐在水溶液中形成胶束聚集体，尽管由于碘离子抗衡离子和阳离子LACE分子的相互作用更强，LACE碘化物在水中形成更稳定的聚集体。LACE碘化物聚集体的平衡浓度为API峰的39-41％。相比之下，在搅动式搅拌分散后，LACE氯化物的平衡浓度<1％。

A.在水溶液中的LACE氯化物

LACE氯化物水溶液在冷藏温度(2-5℃)下形成凝胶状结构。还预期这些胶束组件的数量和聚集随着胶束形成药物浓度的增加而增加。发明人已经将LACE的胶束聚集程度与眼表刺激相关联，这是不可预料和出人意料的结果，因为胶束媒介物通常被认为是不溶性化合物的药物递送系统。因此，这是与胶束聚集体相关的刺激的首次报道记录。一旦发现，这种现象需要通过配混方法最小化以符合舒适性。

胶束聚集体的形成似乎与配混温度相关(图4)。自组装的形成是热力学现象，与有效降低表面自由能以实现最小化的能量状态相关。当在较低温度(5℃)下在水中配混LACE时，形成具有凝胶状稠度的聚集体。在冷藏温度下配制的组合物对眼睛极度刺激。可以通过RP-HPLC方法定量聚集状态(参见图12A-12B中所示的色谱图)。当通过广泛的尺寸排阻色谱法(SEC)测量时，一系列研究实验证明不存在聚合物或低聚物。其他研究测试了眼部刺激作为在环境空气存在下或在氮气存在下进行的过程的函数。刺激与空气或氮气没有相关性。当在室温下配制时，两者同样令人舒服，尽管在空气存在下降解产物更高。当在室温下配混LACE时，通过HPLC方法定量的胶束聚集较低。在室温下配混的LACE产生令人舒服且无刺激性的溶液。

同样不可预料的是胶束聚集体的“解缠结”。溶液在室温下在台式上平衡时，LACE水性组合物中形成的聚集体可以“解缠结”，如通过HPLC所测量的。另外的实验表明，剧烈混合实现了解聚。因此，证明这些物种不是具有共价连接的永久物种，而是LACE聚集体的自组装，其与5℃相比在室温下似乎具有较低的浓度。LACE水溶液冷冻后形成粘稠的稠度。当达到室温并在此温度下储存时，这些溶液再次看起来像均匀的溶液，进一步证实了自组装的温度依赖性的概念。

然而，一旦配混，LACE的无聚集体溶液可以储存在冷藏条件下以最小化氧化和水解降解。通过稳定性研究确定LACE的理想储存温度为2-5℃，以最小化降解事件。

确定理想的配混条件是在室温(22-25℃)下以产生最少刺激性溶液，并且确定理想的储存条件是在2-5℃以获得用于老花眼的稳定舒适的LACE眼用溶液。

为了进一步帮助稳定由LACE制备的眼用溶液，将氧清除剂包放入具有LDPE眼用瓶的聚酯薄膜不可渗透袋中以防止氧化诱导的降解。广泛的稳定性研究表明EV06眼用溶液实现了一年的稳定性。

在该提出的发明中还描述了稳定LACE的各种组合物的实施例，包括为了稳定药物的主要目的而配混的其他类型的水性制品，包括脂质体、乳剂。

B.在水溶液中的LACE碘化物

LACE碘化物在水溶液中形成对眼部组织造成刺激的胶束聚集体(如LACE氯化物一样)。以下实验描述了一些破坏胶束化的配制方法。

在将氯化钠加入到现有LACE-碘化物制剂中或使用含有氯化钠的溶液来溶解LACE-碘化物API的实验中，“缔合物种”峰没有显著降低。

在加入水性媒介物之前使用共溶剂如乙醇或丙二醇悬浮API的实验中，缔合物种的百分比非常显著地降低。向现有制剂中加入有机溶剂也以较小程度使缔合物种峰降低。

这些结果指出了可以干扰LACE分子之间疏水相互作用作为控制缔合物种的手段的配制策略。

附图说明

图1说明了硫辛酸胆碱酯(LACE)的化学结构。

图2说明在将制剂KW-LACE-01-86-2混合1、3和4小时时在8.1分钟的LACE胶束物种的图。

图3说明在将制剂KW-LACE-01-86-2混合6、8和24小时时在8.1分钟的LACE胶束物种的图。

图4是说明当在冷藏温度下混合时胶束LACE物种最高的图。

图5是说明高胶束LACE浓度(在HPLC迹线上由7.9和8.5分钟之间的大峰表示)与结块的LACE氯化物相关的图。

图5B是说明较低胶束LACE浓度与非结块LACE氯化物相关的图。

图6是说明丙氨酸作为pH的函数的作用的图。

图7是说明不含BAC和不含甘油的制剂的稳定性的图。

图8是说明不含BAC和含亚硫酸盐的制剂的稳定性的图。

图9是说明不含BAC的LACE组合物的稳定性的图。

图10是说明不含甘油的LACE组合物的稳定性的图。

图11是说明缓冲组合物对LACE稳定性的作用的图。

图12A是说明刺激评分(在兔刺激模型中)与通过HPLC-UV测量的％LACE胶束物种的相关性的图。

图12B是说明刺激评分(在兔刺激模型中)与通过HPLC-ELSD测量的％LACE胶束物种的相关性的图。

图12C是甘油标准曲线。

图13A是加入了1.8％NaCl(T＝0小时)的FK-LACE-02-15,1.92％LACE-碘化物(批号092309)的HPLC图。

图13B是加入了1.8％NaCl(T＝4小时)的FK-LACE-02-15,1.92％LACE-碘化物(批号092309)的HPLC图。

图13C是溶解在pH 4.5的缓冲液中且含有1.8％NaCl的LACE-碘化物(批号011510)的HPLC图。

图14是溶解在78％乙醇中的LACE-碘化物(批号011510)的HPLC图。

图15是溶解在10％丙二醇中的LACE-碘化物(批号011510)的HPLC图。

图16是在磺丁基醚环糊精中配制的LACE碘化物的HPLC图。

图17是用聚丙二醇配制的LACE碘化物破坏胶束化的HPLC图。

图18是说明HP-B-CD对LACE碘化物氧化的作用的图。

图19是说明HP-B-CD对LACE碘化物总杂质的作用的图。

图20是比较LACE-氯化物原始制剂和LACE-碘化物HP-B-CD的图。

图21是氧化物种形成的活化能的计算(LACE-碘化物/HP-B-CD对LACE-氯化物非HP-B-CD制剂)。

图22是硫辛酸形成的活化能的计算(LACE-碘化物/HP-B-CD对LACE-氯化物非HP-B-CD制剂)。

图23是用于角膜渗透性研究的Franz池。

图24是研究1中硫辛酸的渗透(角膜1-3：1.92％LACE-1，含有7.4％HP-B-CD；角膜4-6：1.5％LACE-Cl，无HP-B-CD)。

图25是显示研究1中LACE渗透的图。

图26是显示研究2中LACE渗透的图。

图27是说明在研究2中从角膜提取的硫辛酸的图(角膜1-3：3.0％LACE-碘化物制剂；角膜4-6：4.5％LACE-碘化物制剂)。

图28是显示研究3中LACE渗透的图。

图29是说明在研究3中从角膜提取的硫辛酸的图(角膜1-3：3.0％LACE-碘化物/HP-B-CD制剂；角膜4-6：4.5％LACE-碘化物/无HP-B-CD制剂)。

图30是显示研究4中LACE渗透的图。

图31是说明在研究4中从角膜提取的硫辛酸的图(角膜1-3：1.92％LACE-碘化物/HP-B-CD制剂；角膜4-6：1.92％LACE-碘化物/无HP-B-CD制剂)。

图32是说明作为制剂中HP-B-CD量[表示为相对于1摩尔LACE的摩尔当量(M.E)]的函数的缔合物种的面积百分比随时间的变化的图。

具体实施方式

A.术语定义

术语“EV06”、“LACE”或“硫辛酸胆碱酯”应理解为具有如图1所示的以下化学结构。

如本文所用，LACE制剂是指硫辛酸胆碱酯制剂。例如，LACE-氯化物1.5％制剂是指具有以制剂的重量计1.5％硫辛酸胆碱酯氯化物的制剂。作为替代方案，EV06眼用溶液，1.5％是指由1.5％硫辛酸胆碱酯氯化物盐构成的制剂。LACE-碘化物3％是指由以制剂的重量计3％LACE-碘化物构成的溶液。

如本文所用，硫辛酸胆碱酯的“衍生物”应理解为由硫辛酸胆碱酯与非水性药物赋形剂反应形成的除硫辛酸和胆碱外的任何化合物或化合物的混合物。

如本文所用，术语“自组装”表示分子的热力学组装以实现最稳定的能量状态。自组装的实例是在水中形成的胶束，通常由具有疏水组分和亲水组分的分子形成。分子的亲水组分位于胶束表面，而内部含有疏水部分；对于LACE，胆碱头基位于胶束表面。

除非特别说明或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“赋形剂”是指药学上可接受的赋形剂。

术语“治疗”是指以有效改善与疾病或病症相关的病况、症状或参数的量、方式或模式给予治疗。

术语“预防”是指以统计学上显著的程度或本领域技术人员可检测的程度阻止患者患上病症，使患者在较长时段内没有病症，或者使病症进展停止。

术语“治疗有效量”是指活性成分(例如，LACE或其衍生物)的量，其导致预防或延迟受试者的眼部疾病或病症(例如，老花眼)的症状的发作或改善，或者达到期望的生物学结果，例如改善的调节幅度或指示疾病状态的另一合适参数。

如本文所用，术语“贮存稳定性”或“贮存稳定的”应理解为组合物或活性成分(例如LACE或其衍生物)的特征或表征组合物或活性成分(例如LACE或其衍生物)，其在储存时基本上不变。测定这种贮存稳定性的方法是已知的，例如，可以通过HPLC测量贮存稳定性，以测定在储存制剂某个时段后在制剂中保留或已经降解的组合物或活性成分(例如，硫辛酸胆碱酯)的百分比。例如，贮存稳定的药物组合物可以指组合物，其按照药物标准(ICH)储存后具有在组合物中存在的至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％)的活性成分(例如，硫辛酸胆碱酯)，如通过HPLC所测量的。

如本文所用，化合物的术语“相对保留时间”或“RRT”可使用等式“RRT＝(t₂–t₀)/(t₁–t₀)”计算，其中t₀＝空隙时间，t₁＝硫辛酸胆碱酯的保留时间，和t₂＝化合物的保留时间，如通过HPLC所测量的。

如本文所用，术语“受试者”通常是指动物(例如宠物)或人，包括健康人或患有某些疾病或病症(例如，老花眼)的患者。

LACE组合物和实施例

如本文所述，所提出的发明提供了药物组合物的实施例，其包含治疗有效量的硫辛酸胆碱酯、相容的赋形剂、缓冲剂和条件以及产生适合作为眼用滴眼剂的生物相容性(无刺激性)和稳定溶液的方法和工艺。

药物组合物中硫辛酸胆碱酯或其衍生物的浓度可以是0.01-0.1％、0.1％-10％(例如，0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或基于这些指定数值的任何范围)的任何浓度，以组合物的重量计。在一些实施例中，药物组合物中硫辛酸胆碱酯的浓度为1％。在一些实施例中，药物组合物中硫辛酸胆碱酯的浓度为3％。在一些实施例中，药物组合物中硫辛酸胆碱酯的浓度为4％。组合物中LACE的优选范围是1-3％。在此范围内，优选的组成范围为1.5-5％。LACE的盐形式可以是碘化物或氯化物。

在另一个实施例中，所提出的发明中的有效组合物是含有LACE(氯化物或碘化物)和丙氨酸的水性制剂，其中丙氨酸的浓度为0.1-0.5％、0.5％-1％、1％-1.5％、1.5％-3％、1.5-5％。在此范围内，优选的组合物是0.5％丙氨酸和1.5％LACE。另一个优选的实施例是0.5％丙氨酸和1.5-4％LACE-碘化物或LACE氯化物。

在一个优选的实施例中，含有有效LACE盐形式和丙氨酸的组合物含有作为防腐剂的苯扎氯铵，浓度为30-150ppm。

在另一个实施例中，含有有效LACE盐形式和丙氨酸的药物产品组合物不含防腐剂。

在另一个实施例中，其他防腐剂如聚季铵盐(polyquartenium)、聚六亚甲基双胍(PHMB)、sofZia以FDA批准供人使用的浓度作为防腐剂包括在LACE水性制剂中。其他防腐剂可以是2-苯基乙醇、硼酸、乙二胺四乙酸二钠。

由于以高浓度溶解在水中的LACE盐的自组装胶束溶液可能表现出一些刺激性，因此提供生物相容性溶液的方法可以是在脂质体中的包封。在这种情况下，LACE将包含在脂质体的内部。脂质体通常与眼表生物相容。在另一个实例中，LACE盐通过与环糊精(例如磺丁基醚环糊精或羟丙基β环糊精)络合而包封。

在另一个实施例中，药物组合物具有浓度为0.1％-10％的甘油。在优选的实施例中，药物组合物具有0.1％-5％的甘油浓度。

在一些实施例中，防腐剂是苯扎氯铵，并且生物化学能量源是丙氨酸。在一些实施例中，硫辛酸胆碱酯具有抗衡离子，其选自由以下组成的组：氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、甲磺酸根、硝酸根、马来酸根、乙酸根、柠檬酸根、富马酸根、富马酸氢根、酒石酸根(例如，(+)-酒石酸根、(-)-酒石酸根或其混合物)、酒石酸氢根、琥珀酸根、苯甲酸根和氨基酸如谷氨酸的阴离子。

合适的缓冲剂可以是本领域已知的可以达到药物组合物期望pH(例如，本文所述)的那些缓冲剂中的任一种。非限制性实例包括磷酸盐缓冲液(例如，磷酸二氢钠一水合物、无水磷酸氢二钠)、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和HBSS(Hank’s平衡盐溶液)。可以基于期望pH容易地计算缓冲剂的合适量。在本文所述的任何实施例中，缓冲剂的量是作为眼用产品可接受的量。然而，在一些实施例中，药物组合物不包含缓冲剂。在一些实施例中，用酸(例如盐酸)或碱(例如氢氧化钠)将水溶液或最终药物组合物的pH调节至期望的pH范围(例如，如本文所述)。

在其他实施例中，缓冲系统可选自硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、钙缓冲液及其组合和混合物。在优选的实施例中，缓冲液是氨基酸缓冲液。在另一个优选的实施例中，氨基酸缓冲液包含丙氨酸。

在一些实施例中，硫辛酸胆碱酯具有抗衡离子，其选自由以下组成的组：氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、甲磺酸根、硝酸根、马来酸根、乙酸根、柠檬酸根、富马酸根、富马酸氢根、酒石酸根(例如，(+)-酒石酸根、(-)-酒石酸根或其混合物)、琥珀酸根、苯甲酸根和氨基酸如谷氨酸的阴离子。其他抗衡离子是硬脂酸根、丙酸根和糠酸根。

在一些实施例中，眼用制剂的pH为4至8。在一些实施例中，眼用制剂的pH为4.5。在一些实施例中，眼用制剂包含至少一种选自由生物化学上可接受的能量源、防腐剂、缓冲剂、张度剂、表面活性剂、粘度调节剂和抗氧化剂组成的组的成分。

在一些实施例中，药物组合物含有抗氧化剂。在一些优选的实施例中，抗氧化剂包含抗坏血酸盐。在另一个优选的实施例中，抗氧化剂含有谷胱甘肽。合适的抗氧化剂可以是本领域已知的那些抗氧化剂中的任一种。非限制性实例包括抗坏血酸、L-抗坏血酸硬脂酸酯、α-硫代甘油、乙二胺四乙酸、异抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、N-乙酰半胱氨酸、L-肉碱、柠檬酸、生育酚乙酸酯、二氯异氰尿酸钾、二丁基羟基甲苯、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、大豆卵磷脂、巯基乙酸钠、硫代苹果酸钠、天然维生素E、生育酚、棕榈酸抗坏血酸酯(ascorbylpasthyminate)、焦亚硫酸钠、丁基羟基茴香醚、1,3-丁二醇、四[3-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)]丙酸季戊四醇酯、没食子酸丙酯，2-巯基苯并咪唑和硫酸羟喹啉。抗氧化剂的适当量可以在0.1％至5％的范围内(例如，0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在本文所述的任何实施例中，抗氧化剂的量是眼用可接受的量。

在一些实施例中，药物组合物通过在惰性环境如高纯氮气或氩气下配混来制备。在优选的实施例中，药物组合物在含少于2ppm的氧气的氮气环境下配混。

在一些实施例中，药物组合物通过在20-25℃的温度下配混来制备。

在优选的实施例中，将固体LACE分子研磨成细粉。优选地，将固体LACE分子研磨成没有团块的粉末。在实施例中，粒径可以小于500微米。在另一个优选的实施例中，粒径可以小于100微米。

在优选的实施例中，药物组合物通过首先将保持在室温(20-25℃)的水溶液脱气，然后将赋形剂溶解在溶液中，接着在氮气缓慢喷射下在剧烈溶解下按份缓慢加入固体LACE来制备。

在一个实施例中，将药物组合物剧烈搅拌4小时至24小时。在优选的实施例中，将药物组合物剧烈搅拌4小时至8小时。在另一优选的实施例中，将药物组合物剧烈搅拌8小时。

通过任一种方法制备的药物组合物可具有至少3个月(例如，3个月、6个月、9个月、1年或超过1年)的贮存稳定性。

在5℃下储存某一时段后，药物组合物还可具有药物相关降解物(例如，总药物相关杂质或特定药物相关杂质的量)的有利特征。用于测量制剂中药物相关降解物的量的分析工具(例如，HPLC)是已知的。

合适的生物化学上可接受的能量源可以是本领域已知的那些中的任一种。例如，生物化学可接受的能量源可以是可通过参与作为能量代谢途径(特别是葡萄糖代谢途径)的中间体，而促进还原的那些中的任一种。合适的生物化学上可接受的能量源的非限制性实例包括氨基酸或其衍生物(例如，丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、2-氧代戊二酸、谷氨酸和谷氨酰胺等)，糖或其代谢物(例如，葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸(G6P)、丙酮酸酯(例如，丙酮酸乙酯)、乳糖、乳酸盐或其衍生物)，脂质(例如，脂肪酸或其衍生物，例如单-、二-和三-甘油酯和磷脂)等(例如，NADH)。生物化学上可接受的能量源的适当量可以在0.01％至5％的范围内(例如，0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在一些实施例中，生物化学能量源是丙酮酸乙酯。在一些实施例中，生物化学能量源是丙氨酸。在一些实施例中，丙酮酸乙酯或丙氨酸的量在0.05％至5％的范围内(例如，0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在一些实施例中，丙氨酸的量为0.5％，以组合物的重量计。在本文所述的任何实施例中，生物化学上可接受的能量源的量是眼用可接受的量。

合适的防腐剂可以是本领域已知的那些防腐剂中的任一种。非限制性实例包括苯扎氯铵(BAC)、十六烷基三甲铵(cetrimonium)、氯丁醇、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、聚季铵盐-1聚六亚甲基双胍(PHMB)、稳定的氧氯络合物过硼酸钠和药物组合物中防腐剂的适当量可以在0.005％至0.1％的范围内(例如，0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在一些实施例中，防腐剂是苯扎氯铵。在一些实施例中，苯扎氯铵的量为0.003％至0.1％(例如，0.003％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在一些实施例中，苯扎氯铵的量为0.01％，以组合物的重量计。在本文所述的任何实施例中，防腐剂的量是眼用可接受的量。在一些实施例中，药物组合物不含防腐剂。

合适的张度剂可以是本领域已知的那些中的任一种。非限制性实例包括氯化钠、氯化钾、甘露醇、右旋糖、甘油、丙二醇及其混合物。药物组合物中张度剂的适当量是可以达到200-460mOsm(例如260-360mOsm，或260-320mOsm)的渗透压的任何量。在一些实施例中，药物组合物是等张组合物。在一些实施例中，张度剂(例如氯化钠)的量为0.1％至5％(例如，0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在本文所述的任何实施例中，张度剂的量是眼用可接受的量。

合适的表面活性剂可以是本领域已知的那些中的任一种，包括离子表面活性剂和非离子表面活性剂。有用的非离子表面活性剂的非限制性实例包括聚氧乙烯脂肪酯(例如，聚山梨醇酯80[聚(氧乙烯)脱水山梨糖醇单油酸酯]、聚山梨醇酯60[聚(氧乙烯)脱水山梨糖醇单硬脂酸酯]、聚山梨醇酯40[聚(氧乙烯)脱水山梨糖醇单棕榈酸酯]、聚(氧乙烯)脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚(氧乙烯)脱水山梨糖醇三油酸酯或聚山梨醇酯65[聚(氧乙烯)脱水山梨糖醇三硬脂酸酯])、聚氧乙烯氢化蓖麻油(如聚氧乙烯氢化蓖麻油10、聚氧乙烯氢化蓖麻油40、聚氧乙烯氢化蓖麻油50或聚氧乙烯氢化蓖麻油60)、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇(如聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)二醇[Pluronic F681]、聚氧乙烯(42)聚氧丙烯(67)二醇[Pluronic P123]、聚氧乙烯(54)聚氧丙烯(39)二醇[Pluronic P85]、聚氧乙烯(196)聚氧丙烯(67)二醇[Pluronic F1271]或聚氧乙烯(20)聚氧丙烯(20)二醇[Pluronic L-441])、聚氧乙烯40硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯及其组合。在一些实施例中，表面活性剂是聚山梨醇酯80。药物组合物中表面活性剂的适当量可以在0.01％至5％的范围内(例如，0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在一些实施例中，表面活性剂是聚山梨醇酯80，并且聚山梨醇酯80的量在0.05％至5％的范围内(例如，0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围，以组合物的重量计。在一些实施例中，聚山梨醇酯80的量为0.5％，以组合物的重量计。在本文所述的任何实施例中，表面活性剂的量是眼用可接受的量。然而，在一些实施例中，药物组合物不含表面活性剂。

合适的粘度调节剂可以是本领域已知的那些中的任一种。非限制性实例包括卡伯波凝胶、纤维素剂(例如羟丙基甲基纤维素)、聚卡波非、聚乙烯醇、葡聚糖、明胶甘油、聚乙二醇、泊洛沙姆407、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。粘度调节剂的适当量可以在0.1％至5％的范围内(例如，0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％，或基于这些指定数值的任何范围)，以组合物的重量计。在本文所述的任何实施例中，粘度调节剂的量是眼用可接受的量。在一些实施例中，药物组合物不含粘度调节剂(例如，聚合物粘度调节剂，如羟丙基甲基纤维素)。

在一些实施例中，药物组合物的特征在于以下的一种或多种：

(a)硫辛酸胆碱酯盐的浓度为0.1％至10％(例如，0.1％、1.0％、1.5％、3％、4％、5％，或指定数值之间的任何范围)，以组合物的重量计；

(b)防腐剂(例如苯扎氯铵)的浓度为0.003％至0.1％(例如，0.01％)，以组合物的重量计；

(c)生物化学能量源(例如丙氨酸)的浓度为0.1％至5％(例如，0.5％)，以组合物的重量计；以及

(d)甘油的浓度为0.5％至5％(例如，2.7％)，以组合物的重量计。

e)羟丙基β环糊精的浓度为1％至20％，以组合物的重量计。

f)羟丙基甲基纤维素(HPMC)的浓度为0.1％至0.5％，以组合物的重量计。

在一些实施例中，药物组合物基本上由1-3％重量的甘油，0.5％重量的丙氨酸，0.005-0.01％重量的苯扎氯铵，1-3％重量的硫辛酸胆碱酯和水组成，其中药物组合物的pH为4.3至4.7。

在一些实施例中，药物组合物基本上由1-3％重量的甘油，0.5％重量的丙氨酸，1-30％的羟丙基β环糊精，0.005-0.01％重量的苯扎氯铵，1-3％重量的硫辛酸胆碱酯的药用盐和水组成，其中药物组合物的pH为4.3-4.7。

在另一个实施例中，硫辛酸胆碱酯的药用盐形式是氯化物。

在另一个实施例中，硫辛酸胆碱酯的药用盐形式是碘化物。

在另一个实施例中，硫辛酸胆碱酯的药用盐形式属于以下组，但不限于氯化物、溴化物、碘化物、甲磺酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、硬脂酸盐、甲磺酸盐。

在另一个实施例中，粘度增强剂是甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮。

在优选的实施例中，优选的粘度增强剂是浓度为0.1-0.5％的羟丙基甲基纤维素。

在另一个实施例中，加入抗氧化剂以稳定LACE。

合适的抗氧化剂可以是抗坏血酸盐、谷胱甘肽、组氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸。

在另一个实施例中，组合物的pH为4至5。

在一个实施例中，眼用组合物每日一次、每日两次、每日三次和每日四次给予受试者的每只眼睛。

在一些实施例中，本发明还提供了用于储存包含在水溶液中的活性成分的药物组合物的系统，其中活性成分(例如，硫辛酸胆碱酯或其衍生物)易于在水溶液中水解。在优选的实施例中，将药物组合物储存在LDPE眼用滴眼瓶中，在填充过程中用氮气覆盖，加盖，然后包装在含有氧吸附剂的二次聚酯薄膜不透气袋中。

在另一个实施例中，滴眼瓶或单元是聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)。在另一个实施例中，滴眼瓶由具有低透气性的材料构成的。

在另一个实施例中，滴眼瓶或单元是玻璃眼用瓶，其具有用于分配到眼睛中的聚丙烯滴管尖端。

在另一个实施例中，滴眼瓶可以由具有低透气性的任何材料构成。在另一个实施例中，滴眼瓶可以是通过吹填密封(blow fill seal)技术填充的单位剂量。

在一个实施例中，将药物组合物在2-5℃下储存3个月至2年的时段。

治疗方法

包含硫辛酸胆碱酯或其衍生物(例如，如本文所述)的药物组合物可用于治疗或预防与氧化损伤相关的疾病或病症的方法中。已知与氧化损伤相关的疾病或病症。

在一些实施例中，本发明提供治疗有需要的受试者的眼部疾病的方法，其包括向受试者的眼睛施用治疗有效量的本文所述的任何药物组合物。

在一些实施例中，眼部疾病是老花眼、干眼症、白内障、黄斑变性(包括年龄相关性黄斑变性)、视网膜病(包括糖尿病性视网膜病)、青光眼或眼部炎症。在一些实施例中，眼部疾病是老花眼。

用于治疗或预防本文眼部疾病的方法的药物组合物的适当量可以是任何治疗有效量。在一些实施例中，该方法包括向受试者的眼睛施用一定量的药物组合物，所述量有效地将晶状体的调节幅度增加至少0.1屈光度(D)(例如，0.1、0.2、0.5、1、1.2、1.5、1.8、2、2.5、3或5屈光度)。在一些实施例中，该方法包括向受试者的眼睛施用1-5滴(每滴约40uL)的药物组合物。在一些实施例中，用药物组合物治疗受试者的眼睛，每天1、2、3、4、5或多于5次，每次1-5滴(每滴约40μL)。在一些实施例中，用药物组合物治疗受试者的晶状体或眼睛，每次1、2、3、4、5或多于5滴。在一些实施例中，用本文的药物组合物治疗受试者的眼睛，每天两次或三次，每次1滴或2滴(每滴约40μL)。

所述方法包括可对任何年龄的患者进行的预防性方法。该方法还包括可以对任何年龄的患者进行的治疗方法，特别是20-75岁的患者。

以下实例是说明性的并且不限制所要求保护的实施例的范围。

实例

实例1

硫辛酸胆碱酯氯化物(LACE)的化学结构和一般性质

表1：

硫辛酸胆碱酯氯化物(LACE)的一般性质

实例2

与LACE氯化物工艺溶液混合的持续时间相关的胶束物种的动力学

本节中描述的实验表明，在25℃下，LACE氯化物胶束物种在延长的混合时间内稳定和减少。结果表明，这些物种的可逆性质是自组装系统的特征，如胶束和胶束聚集体。

通过分子的自发自组装形成的胶束物种由该平衡系统的总自由能驱动。该实验证明了实现具有较长混合持续时间的该平衡状态的动力学。

目的：

ο通过确定增长的胶束物种是否已经稳定来建立工艺时间范围。

ο建立“保持时间”

程序：

ο在用鼓泡的氮气对媒介物进行脱氧后，在25℃下制备两批200g的1.5％LACE氯化物。在LACE溶解过程中氮气不断鼓泡。

ο使用GMP Batch#2(G2-14LAC)原样制备一批，其具有显著的团块，使用G2-14LAC样品制备另一批，使用研钵和研杵将所述G2-14LAC样品研磨成细粉。

ο在LACE溶解和pH调节后，将所述批次在恒定的氮气覆盖下搅拌24小时，使溶解氧保持在约1.6ppm(相对于8.2ppm的饱和溶解度)。在1小时、3小时、4小时、6小时、8小时、9小时和24小时的时间点，通过注射器取出约5-15ml，并无菌过滤到滴眼瓶(5ml/瓶)中，所述滴眼瓶中没有氮气覆盖(装置用于散装批次)。

ο将所有时间点的样品稀释至10mg/g，然后注射，以用于在从散装溶液中取出后30分钟内用ELSD检测进行RP-HPLC分析。

ο在24小时的时间点之后，将散装溶液无菌过滤，并将每个分成两个约50mL的部分，一个保持在5℃，另一个50mL部分保持在25℃。用吹入容器的氮气覆盖所有部分。

ο在额外的24小时保持时间结束时，将每个部分装入滴眼瓶中，所述瓶中有氮气覆盖物。

溶解观察

ο将结块的G2-14LAC部分在约5分钟内加入制剂KW-LACE-01-86-1中，并且一些团块需要另外20分钟溶解。

ο将粉末状的G2-14LAC在约15分钟内加入制剂KW-LACE-01-86-2中，因为每个刮刀充分聚集成漂浮在表面上的薄筏材料，其不会立即分散。因此，直到先前的部分被吸入涡流中才添加另一部分。任何一部分溶解的估计时间约为10分钟，并且整个过程大约需要25分钟。

结果

ο从采用的第一个时间点开始，在两种制剂中，RT＝8分钟的峰(与胶束物种相关)是明显的。

ο在8分钟峰(胶束物种)的％面积方面，两批之间没有一致的差异，虽然用粉状LACE氯化物制成的第二批，在某些时间点具有更高水平的胶束物种。

ο8分钟峰的％面积在24小时显著降低，如下表所示。

ο两个批次最终的pH均为4.54。

表2：

广泛混合LACE氯化物的LACE胶束物种的形成和解聚的动力学

结果表明，8.1分钟的LACE氯化物胶束物种随着混合时间的延长而最小化。随着更长的混合时间，8.1分钟的峰急剧减少。

还测量了每种溶液中硫辛酸胆碱酯的降解物。如前所述，LACE的降解机制是氧化和水解，产生氧化和水解物种。

表3：

作为混合函数的EV06眼用溶液的杂质(相关物质)分析

数据显示LACE的降解产物随着混合时间的延长而增加。因此，配混EV06眼用溶液的最终工艺条件涉及最多8小时，以获得具有最小化降解物的无刺激性溶液。

用LACE碘化物进行的类似混合实验不会产生具有最小聚集的溶液。实际上，在LACE碘化物的情况下，在混合8小时结束时，聚集的物种高达API的39％。

实例3

混合温度与胶束LACE氯化物物种存在的相关性

图4中所示的数据是在氩气和冷藏条件下配制的LACE氯化物溶液的数据。所述溶液对眼表极度刺激。胶束物种百分比是主要LACEAPI峰(由箭头表示的胶束物种，保留时间为7.9-8.1分钟)的8-10％，这是在室温下混合的溶液中通常观察不到的浓度。

实例4

团块与胶束LACE物种形成的相关性

图5A是由具有固体“团块”的LACE氯化物批次制备的EV06眼用溶液的RP-HPLC色谱图。由大量API(活性药物成分，固体LACE药物物质)制备的溶液显示出比由粉末状的大量API制备的溶液更高百分比(10-15％)的胶束LACE物种(用箭头显示)(图5B)。

因此，虽然两种溶液看起来完全溶解，但由非结块API配制的溶液具有较低浓度的胶束LACE物种(参见图5B)。当与眼部刺激相关时，图5A中所示的溶液在兔模型中具有更高的刺激评分。这导致在配混之前引入去结块程序以得到粉末材料。

实例5

赋形剂与LACE的相容性研究

概述

这些实验的目的是通过制剂组成和微环境(例如pH)的系统变化来梳理制剂中可能的不稳定变量。硫辛酸和硫辛酸的任何衍生物将在热、光和氧气中发生降解和聚合，导致二硫戊环开环。因此，可以诱导氧化自由基断裂的赋形剂的存在可能是不稳定因素。制剂表格1和2系统地研究了已经存在于制剂中的赋形剂作为可能的不稳定因素的作用。

在这些实验中LACE的制剂组合物含有在纯净水中的药物物质、丙氨酸、甘油、苯扎氯铵，加入1N氢氧化钠或1N盐酸以达到4.4-4.6的pH和290-300mOsm/kg的渗透压。本文件中描述的实验是用于鉴定可以稳定LACE眼用溶液的赋形剂的相容性研究。

制剂表格#1测试了(a)-(e)中给出的以下变量。在氮气冲洗的手套箱中制备制剂并无菌过滤。在加速条件下在57℃下测试所有制剂，并在T＝0、3.5天和7天通过HPLC测试测定和杂质。在表格#1中测试了总共19种制剂。

(a)pH的作用：在pH 3.5、4和5下制备制剂，并与pH 4.5的对照制剂比较。如图6所示，LACE的降解速率在3.5-5范围内的所有pH水平下是相等的。

(b)丙氨酸的作用：通过比较降解速率与原始制剂(对照)，推断出丙氨酸在制剂中的作用。如图6所示，丙氨酸的缺乏似乎加速了LACE的降解速率。因此，丙氨酸是EV06眼用制剂中的关键赋形剂。

(c)苯扎氯铵和甘油的作用：假设甘油中含有的过氧化物可以催化氧化；类似地，假设由于自由基断裂和随后的氧化，BAK可能使药物物质不稳定。如图7所示，不含苯扎氯铵的制剂比对照显著更稳定。不含甘油的原型(Prototype)也比对照更稳定。此外，添加到制剂中的氯化钠(代替甘油以调节渗透压)似乎具有去稳定作用(也显示在图7中)。在具有甘油、氯化钠、亚硫酸盐和pH的各种组合且所有变化都不含苯扎氯铵的另一个实验中，显著的是所有不含苯扎氯铵的制剂比对照更稳定(图5)。图7和9中的实验证明，在LACE中消除苯扎氯铵可以是稳定制剂的方法。对于EV06眼科组合物，将苯扎氯铵含量最小化至50ppm可具有主要的稳定因素。氯化钠显示出去稳定作用，因此认为甘油更适合作为最终EV06组合物中的张度剂。

(d)亚硫酸盐的作用：用亚硫酸盐进行各种实验(图8)，其具有各种水平的亚硫酸盐的组合。在各种pH水平(4、4.5)和浓度下，将亚硫酸盐作为抗氧化剂加入到制剂中(图8)。亚硫酸盐的存在似乎不会显著改善LACE的稳定性。不清楚是否存在有害作用，因为制剂中的0.1％亚硫酸盐与对照等效。

(e)甘油的作用：通过系统消除甘油，在各种制剂组合中研究甘油的作用。如图7和10所示，不含甘油的组合似乎比对照更稳定。然而，由于氯化钠的高去稳定作用，选择甘油作为张度调节的关键赋形剂。

(f)缓冲剂的作用：测试各种缓冲的组合物。乙酸盐缓冲液和乙酸盐+硼酸似乎稳定了制剂。

实验

a)HPLC方法设置：HPLC测定由50分钟流动相梯度组成，该梯度由(A)0.05M磷酸二氢钠，0.005M 1-庚烷磺酸钠盐，0.2％v/v三乙胺，用磷酸调节至pH 4.5：和(B)乙腈构成。使用的分析柱是YMC Pack ODS AQ(4.6x250mm，5μm，)，P/N AQ125052546WT；分析检测波长为225nm。

b)制剂

制备制剂时要特别小心，以确保LACE API不暴露于氧或热。将API在手套袋内的惰性N₂氛下等分到干净的玻璃小瓶中，并在-20℃冰箱中用锡箔包裹储存直至使用。用高纯度赋形剂和无菌玻璃器皿制备制剂。所有赋形剂均在储备溶液中预先制备并在加入API和最终pH调节之前混合在一起。制剂列于附录A。

II.结果和讨论

图6是在57℃下％API与时间的图(在T＝0、3.5天和7天)，其系统地比较了在pH3.5、4、4.5(原始)、5制备的制剂和不含丙氨酸的对照。即使在T＝0时，没有丙氨酸的制剂的API含量也显著降低。如图6所示，制剂在这些条件下在pH 3.5-5下是等效的。

图7是比较以下变量的制剂的图：(a)对照(原始)对比对照+0.25％氯化钠，对照+0.25％氯化钠且不含甘油，(b)对照(原始)对比不含苯扎氯铵的对照，(c)对照(原始)对比不含甘油的原始制剂。

如图7所示，向原始制剂中加入氯化钠不能稳定制剂。

图8显示了在57℃下亚硫酸盐对LACE稳定性的作用。含有亚硫酸盐的制剂在0.05％亚硫酸盐和0.1％亚硫酸盐的浓度下在pH 4和4.5下制备。亚硫酸盐的添加不能稳定原始制剂。

图9进一步探讨了消除苯扎氯铵的潜在稳定作用。没有苯扎氯铵的制剂变化优于对照原始制剂(pH 4.5)。制剂变化是在pH 4、4.5下不含BAC的组合物，无甘油/无BAC+0.9％氯化钠，无BAC+0.05％亚硫酸盐(在pH 4和4.5下)。

图7和10比较了甘油在各种组合物中作为pH、亚硫酸盐和氯化钠函数的作用。在氯化钠和亚硫酸盐存在下的无甘油、无BAC制剂和具有BAC的无甘油制剂优于原始制剂。

图11探讨了各种缓冲组合物在LACE稳定性中的用途。将原始制剂(pH4.5)与乙酸盐缓冲液组合物和在pH7.5下的硼酸盐进行比较。作为抗氧化剂加入的乙二胺四乙酸钠不能稳定制剂。乙酸盐缓冲液和乙酸盐缓冲液加硼酸似乎优于对照制剂。

总之，消除苯扎氯铵似乎始终如一地提高稳定性。消除甘油也可能是积极的一步。已知甘油具有残留存在的甲醛，偶尔会导致API的降解。有趣地是，添加乙二胺四乙酸盐或亚硫酸盐没有积极效果。另一种抗氧化剂如抗坏血酸钠可能具有积极作用。

表4：

相容性实验制剂

实例6：

眼部刺激与胶束LACE物种百分比的相关性

图12A和12B一般提供了在配混的多个批次中对胶束LACE物种的刺激相关性的简况。

实例7

用甘油调节渗透压的方法

ο含药物制剂和安慰剂所需的渗透压范围为280-320mOsm/kg。优选地，所有LACE制剂需要在290-310mOsm/Kg之内。

ο由于LACE对渗透压有贡献，因此每种制剂将具有不同浓度的甘油以达到所需的渗透压。

I.概述：最终调整的组合物

表4：

具有调整的甘油浓度的EV06眼用溶液的最终组合物

II.实验细节：

A.含甘油的安慰剂

制备一系列安慰剂。所有安慰剂和随后制备的含LACE溶液含有以下物质以及不同量的甘油：

·0.5％(5mg/g)丙氨酸

·0.005％(0.05mg/g)苯扎氯铵

·少量1N氢氧化钠，1N盐酸，以调节pH至4.5

·吸入用水(加至最终重量)

表5：

含甘油的安慰剂(甘油浓度的作用)

甘油百分比	渗透压(mOsm/kg)
		0.5％	114
1.0％	172
		1.5％	233
2.0％	292
		2.5％	354

B.含LACE的制剂

基于图12C中所示的标准曲线和来自每1％LACE显示额外44-55mOsm/kg(平均48mOsm/kg)的制剂的数据，制备一系列溶液以确认LACE的实际渗透性贡献。总渗透压的目标是300mOsm/kg。

表6：

EV06组合物的甘油浓度

这些数据表明，LACE对渗透压的作用略大于预期，每1％约为57-60mOsm/kg。因此，制备了一个完整系列的溶液，其中对于没有LACE的溶液具有略微改变的目标渗透压，因此具有不同的目标甘油含量。使用与安慰剂中使用的相同的丙氨酸/苯扎氯铵，pH 4.5储备溶液制备所有溶液，使得最终组合物始终如一地为：

ο0.5％(5mg/g)丙氨酸

ο0.005％(0.05mg/g)苯扎氯铵

ο少量1N氢氧化钠，1N盐酸，以调节pH至4.5

ο吸入用水(加至5.0g/制剂的最终重量)

表7：

EV06组合物的渗透压的调整

C.无菌制品

基于这些实验结果，使用以下目标组合物制备无菌过滤的10.0g批次的每种制剂，并包装到无菌滴眼瓶(每瓶2mL)中：

表8：

EV06组合物的最终组合物表格

LACE浓度	甘油(％)	丙氨酸(％)	苯扎氯铵(％)
				0％	2.07％	0.5％	0.005％
1％	1.56％	0.5％	0.005％
				2％	1.07％	0.5％	0.005％
2.5％	0.80％	0.5％	0.005％
				3.0％	0.53％	0.5％	0.005％

实例8

制备LACE氯化物药物组合物的方法

制备LACE药物组合物的方法如下：

ο在室温下，将注射用水(WFI)以批重量的80％加入到玻璃配混容器中。用氮气净化水以达到：S10ppm氧气。

ο逐步加入丙氨酸、甘油和BAK，并混合直至溶解。

ο用HCl或NaOH将pH调节至4.4-4.6。

ο将LACE在研钵和研杵中在氮气下研磨以去结块，并在混合时缓慢加入。

ο添加注射用脱氧水以达到最终批次目标重量。

ο将批次混合总共8小时以确保完全分散和溶解。

ο如果需要，用NaOH或HCl将pH调节至4.4-4.6。

ο如果需要，可以用甘油将渗透压调节至290-310。

ο混合8小时后，通过胶囊SHC 0.5/0.2μm无菌过滤器将EV06散装药产品溶液无菌过滤到保持袋中。

ο通过冷藏或冰浴将保持袋中的散装产品溶液保持在5℃。

ο执行过滤器起泡点测试以确保过滤器的完整性。

ο将无菌过滤的散装溶液无菌转移至100级室并装入预先灭菌的瓶中。

ο在氮气覆盖下将无菌尖端和盖子施加到瓶上。

ο将密封瓶转移到托盘中，将所述托盘在氮气净化下装袋并立即转移到5℃储存。

实例9

LACE氯化物制剂的稳定性研究

早期制剂原型含有乙二胺四乙酸钠和0.01％苯扎氯铵。使用和不使用这些赋形剂的稳定性研究表明乙二胺四乙酸钠不能稳定LACE。过量苯扎氯铵的存在稍微使药物不稳定。因此，最终制剂不含乙二胺四乙酸钠和0.005％苯扎氯铵。通过微生物测试，显示当前制剂组合物中的0.004％苯扎氯铵作为药物产品中的防腐剂是有效的。

为了进一步稳定药物制剂，用瓶装EV06眼用溶液，在有和没有包含在不可渗透蒸气的自封箔袋中的氧清除包的情况下，对中等规模的R&D批次进行系统稳定性研究(5℃、25℃和40℃)。在密封在可再密封的箔袋中的氧清除包存在下在5℃下储存的产品瓶表现出在12个月的稳定性。

在整个开发过程中实施了额外的预防措施，以稳定最终制剂，使其免于因暴露于环境氧气和非冷藏条件而导致的降解。在氮气下(排除氧气和最小化水分)处理药物物质并在氮气覆盖层下配混，以最小化暴露于氧气。配混后，将产品装入不可渗透蒸汽的保持袋中，并在冷藏条件下储存，直至接着装瓶。使包含散装溶液的保持袋在填充期间保持冷却。在每个瓶子中的药物溶液上放置氮气覆盖层，以最小化氧气暴露。

表9：

支持稳定性-批次ECV-12JUN14-120-04

相关化合物：LA＝<-R-硫辛酸(USP标准)

实例10

用于破坏LACE碘化物胶束化的制剂研究

实验概述

背景

我们通过RP-HPLC观察到的“缔合物种”代表了使用LACE-碘化物制备的各种配制批次中的大百分比的API，其已被假设为胶束聚集体。这部分地基于LACE分子的表面活性剂样结构，以及在LACE-氯化物的情况下通过稀释或额外搅拌来消散该物种的能力。

在文献中，氯化钠是已知的胶束破坏剂。因此，进行了一系列实验以测试这种“缔合物种”是否可以通过添加氯化钠或预期通过其他机制(例如疏水相互作用)破坏缔合物种的其他成分来消散。

结果

作为该假设的第一个测试，将已知表现出大“缔合物种”峰的现有制剂(批次FK-LACE-02-15)与含有各种水平的氯化钠(NaCl)的溶液混合。最终稀释的LACE浓度的目标是适合RP-HPLC分析的水平(12.8mg/mL LACE-碘化物)。

表10显示了这组实验的关键结果，即使在盐(NaCl)水平远高于眼睛可接受的水平(由于非常高的渗透压)的情况下，也没有表明缔合物种的水平随时间发生任何显著变化。

用乙腈将制剂稀释至相同的最终LACE-碘化物浓度，总体上产生约33％的乙腈，导致缔合物种水平的适度降低，即在4小时内从36-40％范围内降至26％。

表10：

向批次FK-LACE-02-15中添加盐或有机溶剂

在下一组实验中，以各种方式溶解LACE-碘化物API以确定这些条件是否可以阻止缔合物种的初始形成，并因此消除允许该物种随时间进一步生长的种子。测试条件为：

在含有1.8％NaCl的pH 4.5缓冲液(0.5％丙氨酸，0.005％BAK)中溶解。

在乙醇中溶解API不溶于纯乙醇，形成悬浮液。加入约22体积％的pH4.5缓冲水溶液，在37℃下稍微加热，导致API几乎完全溶解。

在丙二醇中溶解/悬浮，然后溶解在pH4.5缓冲水溶液中。首先加入丙二醇，并代表10％，以最终溶液的重量计。

在含有0.6％NaCl和1.5％丙二醇(PG)的pH 4.5缓冲液中溶解。这旨在使用在渗透压方面合理的各浓度测试电荷-电荷相互作用(通过NaCl进行)和疏水相互作用(通过PG进行)的破坏是否具有协同效应。

如表10所示，相对于其他溶解实验，乙醇和丙二醇实验成功地消除或显著减少了在T＝0时存在的缔合物种。注意，将溶液添加到API粉末中，而不是将API添加到溶液中的配制实践，这可以解释为什么在这些情况中的某些中T＝0高，除了在制备配制批次的那天之外。

表10：

LACE-碘化物API直接溶解实验(批号011510)

溶解方法	在T0的％缔合物种：
		含1.8％NaCl的缓冲液	34.7％
乙醇(最终78％)，然后缓冲液(22％)	0.0％
		丙二醇(10％)，然后缓冲液(90％)	11.7％
含0.6％NaCl、1.5％PG的缓冲液	40.9％

实例11

环糊精破坏LACE碘化物胶束化的制剂研究

假设

通过包含干扰LACE分子之间疏水相互作用的赋形剂可以减少缔合物种。

制备含有聚丙二醇、Dexolve-7(磺基丁醚-β-环糊精)或羟丙基-β-环糊精的制剂，并分析其缔合物种和相关物质。

表11：

用于防止LACE碘化物在溶液中的胶束化的制剂研究

％oxo-LACE物种显示在T＝0。

实例12

HP-B-CD/Lace-碘化物制剂中的稳定性增强

这些实验表明，与非HP-B-CD/Lace-碘化物制剂相比，HP-B-CD/Lace-碘化物制剂实现了稳定性的增强。

实验#1

制备包含3％LACE-碘化物的制剂，所述制剂含有10g规模的(16.1％HPBCD)或不含羟丙基-B-环糊精(HP-B-CD)。两种制剂含有0.5％丙氨酸，pH 4.5，50ppm苯扎氯铵和用于调节渗透压的甘油，并且所有溶液均在pH 4.2-4.5。在含有HP-B-CD的制剂中，环糊精相对于LACE浓度以1.5：1的摩尔比存在。将制剂通过0.2-μm PVDF膜过滤，并将5mL每种制剂装入10-mL LDPE滴眼瓶中，并且然后在插入滴管尖端并盖上瓶盖之前用氮气覆盖。在填充时，滴眼瓶没有阻挡袋。

将具有两种制剂的滴管瓶在25℃下在温度控制的培养箱中储存，并且在每个时间点取样0.5mL(约10滴)用于分析相关物质(通过HPLC)。氮气覆盖层没有补充，因此每次取样都会有一些空气进入瓶中。这个实验是对室温(25±0.1℃)下稳定性的早期研究，继续采样时没有避氧。

图18显示了在重复采样下，在25℃下20天内LACE氧化物种增加的时间过程(方形：LACE-I，3％制剂，16.1％HP-B-CD；钻石形：LACE-I，3％制剂，无HP-B-CD)。采样时间点为T-0、1天、2天、8天、12天和17天。

这些数据(图18和19)证明环糊精最初保护LACE免于氧化，导致在制备过程中较低量的氧化API，以及在存在氧气量增加的加速应力条件下保护LACE免于氧化。在这些条件下，具有HP-B-CD的制剂在17天内保持在≤2.0％总杂质的规格内(不包括硫辛酸)。在20天结束时，硫辛酸浓度为约0.20％。

实例13

比较LACE-氯化物临床制剂与LACE-碘化物HP-B-CD的稳定性

对于临床LACE-氯化物和原型LACE-碘化物制剂(HP-B-CD与LACE的摩尔比为1:1)的稳定性研究，将制剂过滤，装入LDPE滴眼瓶中，用氮气覆盖，并且然后放入带有氧清除剂的阻隔箔袋内。开始袋中可能仍有一些氧气存在。然而，在T＝0之后的第一个时间点之后，即使在升高的温度下，氧化的LACE物种的增加也会停止，这可能是由于剩余氧气的消耗(图20)。LACE-氯化物的氧化物种的增加速率在25℃时略高于5℃，但不显著。

开始时含有HP-B-CD的原型LACE-碘化物制剂显示较低水平的氧化LACE(LACE-碘化物为约0.11％，而LACE-氯化物为0.3％)，尽管在API溶解过程中没有任何氮气覆盖层。对于临床LACE-氯化物制剂，将溶液脱氧并在溶解期间保持氮气覆盖层。

此外，在用氮气覆盖并放入袋内后，原型LACE-碘化物制剂在平稳之前显示出总氧化LACE百分比的小得多的上升。初始上升的程度取决于两种制剂的温度。这允许通过阿累尼乌斯(Arrhenius)建模估计每种制剂的活化能。对于具有HP-B-CD的原型LACE-碘化物制剂，活化能是原始LACE-Cl制剂的超过三倍(图21)，进一步表明HP-B-CD抗氧化稳定LACE。

<u>制剂</u>	<u>活化能</u>
		临床LACE-Cl	9.9kJ/mol
原型LACE-I w/HPbCD	33.2kJ/mol

导致硫辛酸生长的LACE降解的水解机制的活化能也由稳定性数据计算(图22)。与氧化机理相反，LACE-Cl制剂和LACE-I剂的水解活化能相似(分别为65.6J/mol和69.4kJ/mol)(图21)，表明环糊精对水解没有显著影响。

实例14

LACE-氯化物和LACE-碘化物的角膜渗透性研究

一个关键问题是用羟丙基β环糊精(HP-B-CD)配制的药物是否能充分渗透角膜组织并且可以接近角膜酯酶以释放活性药物硫辛酸。如前所述，硫辛酸是这种适应症：老花眼的活性药物。

以下实验测试：(a)硫辛酸胆碱酯(LACE)经由含有不同浓度的羟丙基-β-环糊精(HP-B-CD)的LACE-碘化物制剂通过小牛角膜的渗透性，和(b)LACE-氯化物与LACE-碘化物的比较渗透性。使用图23中所示的Franz扩散池装置进行实验。

LACE以两种盐：LACE-氯化物和LACE-碘化物之一的形式从这些制剂衍生。LACE是前药，通过角膜屏障行进，然后通过眼部酯酶的作用，并通过在生理条件下药物化合物的被动水解水解成活性药物硫辛酸。因此，在每个时间点测定LACE和硫辛酸浓度以评估渗透性。

用于角膜渗透性的组合物，研究#

程序：

a.在无菌层流净化罩中解剖6只牛眼球。

b.从眼球中提取角膜，在无菌双蒸水中简单冲洗，并浸没在无菌培养皿中的3mL谷胱甘肽缓冲液(0.1％谷胱甘肽，氧化，6mM磷酸钠，pH7，无菌过滤)中。

c.将角膜保持在5℃并在切除后24小时内使用。

d.用蒸馏水和异丙醇清洗六个5mL Franz垂直扩散池，并在安装前在层流柜中风干。

e.将小搅拌棒放置在受体流体室内。将受体流体瓶(含有0.1％吐温20的5mM磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4，无菌过滤)在分析天平上称皮重，并将其4.5mL加入每个Franz池中。记录起始受体流体的确切重量。

f.用谷胱甘肽缓冲液的受体流体轻轻冲洗角膜，并将其置于供体基座上。将供体室置于角膜顶部，并用金属夹将整个组件固定在基座上。此时，通过采样臂添加0.5mL额外的受体流体，直到液体水平达到用黑线表示在臂上的点。还记录了该添加的重量。

g.将Franz扩散装置连接到加热器单元，并且将温度升高到37℃。当达到该温度时，将制剂(“供体溶液”)加入供体室中。

h.加入0.2mL供体溶液。当不使用时，供体室和采样臂都被封口膜覆盖，以防止蒸发。

i.采样通过德拉蒙德(Drummond)移液管完成，并且仅通过采样臂完成。在每个时间点从每个池取样200-300μL受体流体。

j.将样品加入到具有0.3mL玻璃插入物的琥珀色玻璃HPLC小瓶中，并称重。用新鲜的受体流体替换从采样臂取出的体积。

k.当采样时，流体水平从未允许落在采样臂的起始点以下，使得气泡被引入到受体室中。如果流体在两个时间点之间显著蒸发，则添加并记录预采样替换，并且正常进行采样。

l.将样品储存在5℃，直至HPLC分析测定。

m.用珠磨机均质化提取角膜。

研究1：本研究的目的是比较含有1.92％LACE-碘化物的AC-LACE-03-33与ECV-23April 15-1 12-08,Demo#6(正面，1.5％LACE-氯化物)的渗透性，以评估HP-B-CD对LACE通过角膜的作用。鉴于LACE-1和LACE-Cl之间的分子量差异，这些是LACE的等效浓度。因此，1.5％LACE-氯化物相当于1.92％LACE-碘化物制剂。在实验中没有使用酯酶抑制剂。

研究1(图24和25)的结果表明，渗透的大部分药物产品是硫辛酸，其在通过角膜期间，或在时间点收集之前在受体溶液中从LACE水解。对于LACE-碘化物制剂，渗透物种几乎完全是硫辛酸，LACE-氯化物制剂渗透稍微更完整的LACE。这在一定程度上是预期的，因为与LACE-氯化物分子相比，LACE-碘化物分子的离子尺寸和分子量较大，可能导致在角膜中更长的停留时间和更高程度的水解成硫辛酸。在每个采样点后收集后立即分析渗透物。含LACE-I和LACE-Cl的制剂之间渗透药物的总百分比相似，为5-7％(不包括LACE-I的一个高渗透异常值)。

研究2：本研究的目的是评估具有不同浓度LACE-I的两种LACE-I制剂的渗透性：AC-LACE-03-36(3％LACE-碘化物/10.7％HP-B-CD)和AC-LACE-03-39(4.5％Lace-碘化物/16.1％HP-B-CD)(图26和27)。

研究2的结果显示，大多数渗透药物以其硫辛酸形式存在于受体流体中，但与之前的研究相比浓度较低。尽管药物浓度较高，但很大一部分药物包含在角膜组织内，因为一堆较厚的小牛角膜(研究2中为约1.5-1.8mm，研究1中为约0.6-0.8mm)可用于本研究。从角膜组织中提取的硫辛酸总量范围为1-5％，从暴露于AC-LACE-03-36(3.0％LACE-I/10.7％HP-B-CD)的角膜中提取的平均值为3.4％和从用于AC-LACE-03-39(4.5％LACE-I/16.1％BP-B-CD)的角膜中提取的平均值为2.5％。

研究3：该研究调查了含有HP-B-CD的LACE-碘化物制剂和不含HP-B-CD的LACE-氯化物制剂之间的渗透性。本研究的目的是建立在研究2中获得的先前数据上，通过检查AC-LACE-03-39(4.5％LACE-I/16.1％HP-B-CD)和ECV-23Aprill5-112-08(1.5％LACE-C1，无HP-B-CD)之间LACE角膜渗透性的差异来进一步确定LACE浓度是否阻碍其渗透穿过角膜层。

通过珠磨机均质化从角膜接触部分提取LACE/LA，并且揭示出在研究结束时，在暴露于AC-LACE-03-39(4.5％LACE-I/16.1％HP-B-CD)的角膜组织中发现更高质量的硫辛酸，尽管角膜内浓度的增加显著小于递送的API浓度的增加(图28和29)。因此，4.5％LACE-I的最高剂量可能无法在渗透药物方面提供显著优势。

研究4：该研究比较了羟丙基β环糊精对渗透性的作用，同时保持LACE盐形式恒定。在这项研究中，两个组都是LACE-碘化物。

制剂为FK-LACE-02-32(1.92％LACE-I，无HP-B-CD)和AC-LACE-05-21B(1.92％LACE-I，1摩尔当量HP-B-CD(7.4％))。这项研究的目的是双重的。第一个目标是直接比较两种相同浓度的LACE-I溶液，以便直接检测HP-B-CD对渗透的影响。第二个目标是检查HP-B-CD对角膜组织内药物产品保留的影响。

该研究的数据表明，HP-B-CD对药物的角膜保留没有影响，对于两种制剂，平均从角膜切片中提取7％的总LA(硫辛酸)(图30和31)。

就渗透穿过角膜层而言，FK-LACE-02-32的所有3个角膜在4-6小时后显示出渗透，而AC-LACE-05-21B仅有1个角膜在4小时时间点时显示出开始渗透。然而，28小时时的平均渗透药物产品相似，FK-LACE-02-32的总LA为12.67±5.62％，AC-LACE-5-21B的总LA为11.27±9.78％。提取的角膜浓度的相似性以及28小时时相似的平均渗透表明HP-B-CD不是使LACE-I进入角膜组织的障碍。

一起评估的所有数据表明，由于其较大的分子大小和递送系统(HP-B-CD)，LACE-碘化物可以施用于眼表而没有运输障碍。另外，研究结果证明在所研究的所有浓度下LACE通过角膜的有效转运。此外，在LACE-碘化物/HP-B-CD浓度的受体流体中产生的高硫辛酸浓度证明了角膜酯酶将LACE转化为硫辛酸。相反，LACE-氯化物显示更多的硫辛酸和LACE的混合物，可能是由于其较低的分子量。

实例15

作为LACE-I摩尔比函数的缔合物种：HP-B-CD

先前的实验证明，羟丙基β环糊精(HP-B-CD)可破坏LACE-I在水溶液中的胶束化。这些实验确定了产生热力学稳定的包合络合物所需的LACE-碘化物与羟丙基β环糊精(HP-B-CD)的摩尔比。

该方法是在HP-B-CD中产生LACE-碘化物的完全包合络合物，从而防止任何LACE分子聚集的机会。使用不同摩尔比的LACE-碘化物与HP-B-CD制备几批制剂，并随时间评估聚集物种的生长。将制剂储存在5℃。然后将通过反相HPLC测量的缔合物种的形成报告为相对于主要LACE峰面积的面积百分比。

结果表明，当LACE-I和HP-B-CD浓度之间的摩尔当量为至少一比一时，可以防止缔合物种的形成(如图32所示)。

实例16

聚集物种与体内眼部刺激之间的相关性

实例16建立了在体内模型(兔Draize模型)中的缔合物种浓度与眼部刺激之间的相关性。数据显示，当LACE-碘化物：HP-B-CD的摩尔当量比为1:1或1:1.5时，可以获得0-0.5的平均刺激评分。

表12

缔合物种与眼部刺激之间的相关性

*通过将LACE-I浓度乘以缔合物种的面积％来计算

实例18

LACE-碘化物/HPBCD的稳定性研究概述

表13-1：

FK-LACE-02-32：1.92％LACE-碘化物批号011510，标准制剂(无环糊精)

*可能需要从储存在5℃的第二个小瓶中重复，这个小瓶也未经采样。

**在用于缔合物种测定的RP-HPLC法中从RRT 1.17峰面积％估算的硫辛酸。

·由于重复采样和/或储存条件(缺少带有氧吸附剂的箔袋)，该制剂显示出一些氧化降解。

·随着缔合物种的增加(1个月，5℃)，渗透压降低

表13-2：

FK-LACE-02-37：1.92％LACE-碘化物批号011510，制剂含5％HP-JJ-CD(HPBCD：LACE摩尔比约0.75:1)

**以前报道的21.3mg/g。由于HPLC上的泵问题导致保留时间的变化，因此早期测定中使用的标准曲线现在受到质疑。此处报告的结果基于应用于2016年4月22日组的当前标准曲线。

***可能需要从储存在5℃的第二个小瓶中重复，这个小瓶也未经采样。

·尽管反复处理，但该批中的相关物质并未显著增加。

·这与FK-LACE-02-32批次(不含环糊精)相比有利，其在相同的储存条件下同时具有稳定性，并且在5℃和25℃下均显示出氧化的LACE杂质的较大增加。

·该比较表明环糊精可以部分保护LACE分子免于氧化。

表14：

羟丙基β环糊精对LACE-碘化物的稳定

表15-1：

(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-21
		描述	3％LACE-I/HPBCD
API：HPbCD的摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	5℃

表15-2：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HP-B-CD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-21
		描述	3％LACE-I/HPBCD
API：HPbCD的摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	25℃

表15-3：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-21
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	40℃

表15-4：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-21B
		描述	1.92％LACE-I/HPBCD
API：HPbCD的摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	5℃

表15-5：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-21B
		描述	1.92％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	25℃

表15-6：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-21B
		描述	1.92％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	40℃

表15-7：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-23
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1.5
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	5℃

表15-8：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-23
		描述	1.92％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1.5
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	25℃

表15-9：(研究#0205)

LACE-I浓度和不同LACE-碘化物/HPBCD摩尔比的作用

批号	AC-LACE-05-23
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1.5
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	40℃

表16-1：(研究#0214)

HPBCD中LACE-碘化物的“无氮”处理：对稳定性的作用

批号	AC-LACE-05-39
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	5℃

表16-2：(研究#0214)

HPBCD中LACE-碘化物的“无氮”处理：对稳定性的作用

批号	AC-LACE-05-39
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	25℃

表16-3：(研究#0214)

HPBCD中LACE-碘化物的“无氮”处理：对稳定性的作用

批号	AC-LACE-05-39
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	40℃

表17-1：(研究#0225)

Cavitron HPBCD中的LACE-碘化物制剂和0.23％HPMC对稳定性的作

用

批号	AC-LACE-07-01
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	5℃

表17-2：(研究#0225)

Cavitron HPBCD中的LACE-碘化物制剂和0.23％HPMC对稳定性的作

用

批号	AC-LACE-07-01
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	25℃

表17-3：(研究#0225)

Cavitron HPBCD中的LACE-碘化物制剂和0.23％HPMC对稳定性的作用

批号	AC-LACE-07-01
		描述	3％LACE-I/HPBCD
摩尔当量	1:1
		API批号
容器封闭	LDPE，袋装，氧清除剂，N<sub>2</sub>覆盖
		条件	40℃

表18-1：(研究#0226)

摩尔比为1:1的Cavitron HPBCD中的LACE-碘化物制剂(无氧气保护下储存(没有O2清除剂，没有N2覆盖，没有袋))对稳定性的作用

表18-2：(研究#0226)

摩尔比为1:1的Cavitron HPBCD中的LACE-碘化物制剂(无氧气保护下储存(没有O2清除剂，没有N2覆盖，没有袋))

对稳定性的作用(5<,25<)

实例19

LACE-碘化物药物产品溶液的配制方法

一般工艺顺序

LACE-I/HPbCD(无HPMC)

1.以下列顺序向烧杯中加入：WFI，丙氨酸，甘油，HP-B-CD和苯扎氯铵溶液(WFI中BAK0.005g/mL)。

2.将烧杯放在磁力搅拌器上以组合赋形剂。

3.使用1N HCl调节pH，目标pH 4.5

4.将烧杯放入带夹套的容器中，该容器连接到设定为25℃的加热/冷却循环器(将蒸馏水加入带夹套的容器中以用于导热性)。将Scilogix搅拌桨浸入并以约500RPM搅拌。

5.在搅拌的同时以小增量添加API。完成API的添加后，将制剂搅拌45-60分钟以确保完全溶解。

6.从混合装置中取出烧杯并称重。添加WFI以解决由于蒸发造成的任何损失。

7.过滤制剂(0.2uM PVDF)。

含0.23％HPMC的LACE-I(两种溶液工艺)

A.溶液1-在WFI中的1.16％(w/w)羟丙甲纤维素2910溶液

1.将WFI加入烧饼中。

2.将烧杯放入带夹套的容器中，该容器连接到设定为90℃的加热/冷却循环器(将蒸馏水加入带夹套的容器中以用于导热性)。将Sciolgex搅拌桨浸入并以约400RPM搅拌。

3.一旦WFI为2：70℃，开始加入羟丙甲纤维素2910进行分散。

将混合速度提高到650RPM。

4.一旦已添加所有HPMC，就将加热/冷却水循环器的温度降至10℃并继续混合。

5.当溶液冷却并变得透明和粘稠时，从混合装置中取出烧杯并称重。

添加WFI以解决由于蒸发造成的任何损失。

B.溶液2-不含HPMC的LACE制剂

1.以下列顺序向烧杯中加入：WFI，丙氨酸，甘油，HP-B-CD

2.将烧杯放入带夹套的容器中，该容器连接到设定为25℃的加热/冷却循环器(将蒸馏水加入带夹套的容器中以用于导热性)。将Sciolgex搅拌桨浸入并以约500RPM搅拌。

3.使用1N HCl调节pH至4.18

4.在搅拌的同时以小增量添加API。完成API的添加后，将制剂搅拌45-60分钟以确保完全溶解。

5.加入BAK溶液(在WFI中的BAK 0.005g/mL)。

7.测量pH并根据需要进行调整。

C.合并溶液1和2

1.将溶液1的指定部分称入烧杯。

2.将烧杯放入带夹套的容器中，该容器连接到设定为25℃的加热/冷却循环器(将蒸馏水加入带夹套的容器中以用于导热性)。将Sciolgex搅拌桨浸入并以约130RPM搅拌。

3.在混合的同时将溶液2加入溶液1中。

4.从混合装置中取出烧杯。

5.使用0.2μM PVDF过滤器进行无菌过滤。

Claims

1.一种用于治疗老花眼的稳定且生物相容的物质组合物，包含0.1-10％的硫辛酸胆碱酯的药用盐、1-30％的环糊精、0.1-2％的张度调节剂，0.1-0.5％的粘度增强剂、0.003-0.010％的防腐剂、0.05％至约1.0％的生物化学能量源和注射用水。

2.根据权利要求1所述的组合物，还包含浓度范围为0.1-0.5％的羟丙基β环糊精。

3.根据权利要求2所述的组合物，还包含作为所述张度调节剂的甘油。

4.根据权利要求3所述的组合物，还包含作为所述张度剂的氯化钠。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，还包含稳定剂，其选自由蛋氨酸、半胱氨酸和组氨酸组成的组。

6.根据权利要求5所述的组合物，还包含作为所述防腐剂的苯扎氯铵。

7.根据权利要求6所述的组合物，还包含作为所述生物化学能量源的丙氨酸。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述硫辛酸胆碱酯的药用盐是氯化物或碘化物。

9.根据权利要求1中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含防腐剂。

10.一种生产根据权利要求1所述的稳定且生物相容的药物组合物的方法，包括：

A.精细研磨所述硫辛酸胆碱酯，

B.将所述组分加入到用惰性气体脱氧至小于5ppm的水中

C.在室温下剧烈混合所述组分混合物

D.用所述混合组分填充眼用瓶

E.将所述填充且封盖的眼用瓶包装在不透气的聚酯薄膜箔袋中，所述袋含有氧清除剂和惰性气体，

F.在2-8℃储存所述包装。

11.根据权利要求10所述的方法，其中将所述组分混合物的pH调节至4-5的pH范围。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述混合在氮气覆盖层下进行。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述混合在环境空气下进行。

14.根据权利要求10所述的方法，其中所述最终包装还包含氮气覆盖物。

15.根据权利要求10所述的方法，其中将所述硫辛酸胆碱酯研磨成平均尺寸为5mm或更小的微细粉末。

16.根据权利要求10所述的方法，其中所述脱氧水平优选为2ppm。

17.根据权利要求10所述的方法，其中混合温度为在20-25℃之间。

18.根据权利要求10所述的方法，其中将所述组分混合8小时。

19.根据权利要求10所述的方法，其中所述惰性气体为氮气。

20.根据权利要求10所述的方法，其中所述眼用瓶选自但不限于1类药用玻璃、HDPE、PP、LDPE、PET和PTFE的组。

21.根据权利要求10所述的方法，其中所述眼用瓶是吹填密封单元。

22.根据权利要求10所述的方法，其中所述眼用瓶是多剂量单元。

23.根据权利要求10所述的方法，其中所述箔袋是另一种不透气材料的箔袋。

24.根据权利要求10所述的方法，其中所述氧清除剂是Oxy-Guard^TM或StabilOx^TM。