CN101876649A - 一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法 - Google Patents

一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其主要步骤为：对样品采用盐酸溶液加热回流萃取，用C18固相萃取小柱净化，再采用氢氧化钠溶液洗脱得到样品溶液，然后利用高效液相色谱采用外标法测定样品中马来酰肼的残留量。本发明的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，采用液相萃取和固相萃取相结合的样品前处理方法，既缩短了样品的前处理时间，又提高了测定的准确性，使本发明的测定方法具有灵敏度高、重复性好及检测范围广的优点，平均回收率为99%，检测的范围为0.1-80μg/ml；而且本法的方法操作简单、快捷，自动化程度高，易于推广应用。

Description

一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，属于痕量分析技术领域。
背景技术
烟草作为吸食品，其农药残留量问题已成为吸烟安全性问题中的重要组成部分，烟草及烟草制品农药残留量指标是各国在烟草制品质量控制中的重要内容，已成为国际市场烟叶评价和选购的重要因素，也是烟草国际贸易中进行商品检验的重要内容。农药马来酰肼是烟草农残检测的重要指标，国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）农用化学品委员会（ACAC）在2008年提出了烟草及烟草制品中马来酰肼在内的136种农药的推荐性农残限量。
GB/T19611-2004【中华人民共和国国家标准GB/T19611-2004烟草及烟草制品抑芽丹残留量的测定紫外分光光度法】规定了烟草及烟草制品中马来酰肼的测定方法，为该农药残留量的检测提供了分析依据，但该法采用水蒸汽蒸馏法提取烟草中的农药残留，以分光光度法测定，操作步骤比较繁杂，对实验人员的操作水平要求较高。裴明黎等人在分析测试学报2009年05期发表了一篇文章：“马铃薯中马来酰肼的高效液相色谱法测定”，其对马铃薯样品经酸化甲醇提取，高速离心沉淀分离，以甲醇-去离子水（体积比1：9，pH2.7）为流动相，采用ZORBAXSBC18柱（250mm×4.6mm×5μm）分离，在UV205nm检测以外标法定量分析，最终测定结果表明，马来酰肼提取液的线性范围0.2-16.0mg/L，回收率82-94%。A.I.DIAS等人在PotatoResearch期刊1999年3月发表了2篇文章：“Therecoveryofmaleichydrazidefromprocessedpotatoproducts”及“Residuesoffreeandboundmaleichydrazideinpotatotubers”，均采用了高效液相色谱法分析了马铃薯中的马来酰肼。由于马铃薯样品和烟草样品基质不同，而且烟草样品的提取物更为复杂，净化方式也有很大的不同，因此此两篇文献报导的测定方法很难在烟草及烟草制品中应用，需要开发新的烟草及烟草制品中马来酰肼的检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种测定烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的方法，提高测定的准确性和抗干扰性。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，包括如下步骤：
a、样品前处理：准确称取烟草或烟草制，加入盐酸溶液加热回流萃取；萃取后过滤并将滤液加入C18固相萃取小柱净化，然后采用氢氧化钠溶液洗脱，洗脱液再经滤膜过滤，制得样品溶液；
b、标准工作溶液配制：准确称取马来酰肼标准品于容量瓶中，定容并稀释于0.1-80.0μg/ml范围内配制至少三个浓度梯度的系列浓度标准工作溶液；
c、高效液相色谱测定：以0.1M的醋酸水溶液为流动相分别对步骤b中的各浓度梯度的系列浓度标准工作溶液进行高效液相色谱测定，以检测到的马来酰肼色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线及其回归方程；然后以相同方法对步骤a中的样品溶液进行测定，将样品色谱峰面积带入标准曲线的回归方程中得到样品溶液中的马来酰肼的浓度，从而计算得到烟草或烟草制品中马来酰肼的残留量。
所述步骤a中萃取的温度为180℃，萃取时间为1小时。
所述步骤a中洗脱液过滤采用的是0.45μm滤膜。
所述高效液相色谱条件为：VarianMicrosorb-MV100-5C18色谱柱，流速0.7mL/min，紫外检测波长313nm，柱温30℃。
所述流动相采用醋酸铵调节pH为4.8。
所述高效液相色谱的检测器为VWD检测器。
步骤a所述盐酸溶液的浓度为1-4mol/L。
步骤a所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L。
本发明的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，采用液相萃取和固相萃取相结合的样品前处理方法，既缩短了样品的前处理时间，又提高了测定的准确性，使本发明的测定方法具有灵敏度高、重复性好及检测范围广的优点，平均回收率为99%，检测的范围为0.1-80μg/ml；而且本法的方法操作简单、快捷，自动化程度高，易于推广应用。
另外，本发明的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，针对马来酰肼及烟草或烟草制品的特点，对前处理及高效液相色谱的条件进行了优化，降低了杂质对马来酰肼测定的影响，进一步的提高了测定的准确性。
附图说明
图1为标准溶液的标准曲线图；
图2为标准溶液的色谱图；
图3为实施例1中样品溶液的色谱图；
图4为图3的局部放大图；
图5为实施例2中样品溶液的色谱图；
图6为图5的局部放大图；
图7为实施例3中样品溶液的色谱图；
图8为图7的局部放大图；
图9为实施例4中样品溶液的色谱图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作详细的说明：
实施例1
一、仪器与试剂
马来酰肼标准品(德国Augsburg公司)；HPLC级冰乙酸（TEDIA,美国）；醋酸铵（TEDIA,美国）；PPt级超纯水；
Agilent1200高效液相色谱，配置VWD紫外检测器；纯水仪（MILLIPORE,美国）；PHS-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）；ZNHW电加热套(河南豫华仪器有限公司),VarianMicrosorb-MV100-5C18(250*4.6mm)色谱柱；SUPLCOC18固相萃取小柱。
二、测定步骤：
1）样品前处理：
称取烟末样品A3.0-5.0g，置于250mL磨口圆底烧瓶中，加入50.00mL1mol/L的盐酸，加热至180℃回流1小时，取下冷却至室温，用双层滤纸过滤，取2.00mL滤液加入C18固相萃取小柱净化，然后用2mL-4mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液洗脱，收集洗脱液经0.45μm滤膜过滤后待HPLC分析；
2）准备标准工作溶液：称取0.0100g马来酰肼标准品到100mL容量瓶中，精确至0.0001g，用超纯水稀释定容，配制成浓度约为100μg/mL的马来酰肼标准储备液；分别移取一定体积的标准储备液于10mL容量瓶中，用超纯水稀释定容，即配制成不同浓度的马来酰肼标准工作溶液，标准序列：0.1μg/mL，0.2μg/mL，0.5μg/mL，1.0μg/mL，5.0μg/mL，10.0μg/mL，40.0μg/mL和80.0μg/mL；
3）高效液相色谱测定：
将配制好的标准溶液进行高效液相色谱测定，标准溶液的色谱图如图1所示，液相色谱条件为：VarianMicrosorb-MV100-5C18色谱柱，柱长250mm，粒径4.6mm；流动相为0.1M的醋酸水溶液（用醋酸铵调节PH=4.8），流速0.7mL/min；紫外检测波长313nm；柱温30℃；进样量，10μL；
将各浓度标准溶液的色谱峰对应其浓度进行回归分析（如表1所示），得到马来酰肼标准曲线，如图1所示，从而计算得到该标准曲线的回归方程，如表1、2所示，
表1 马来酰肼标准溶液浓度和对应色谱峰面积表
 
Figure 176033DEST_PATH_IMAGE001
 表2 马来酰肼标准曲线
Figure 868046DEST_PATH_IMAGE002
 采用相同的色谱条件对步骤1）处理后的样品进行高效液相色谱测定，将样品测得的马来酰肼色谱峰面积带入马来酰肼标准曲线的回归方程中，得到样品中马来酰肼的浓度，根据样品的处理过程中的稀释倍数，从而计算得出烟草或烟草制品中马来酰肼的含量。
样品溶液的色谱图如图3所示，从图3中可以看出本发明所采用的测定方法，样品中的马来酰肼色谱峰与杂质色谱峰分离效果较好。本实施例的样品中马来酰肼的含量为84.92μg/g。以3倍信噪比（S/N=3）计算，本发明的测定方法的检测限为0.33μg/g。
实施例2
本实施例的测定方法与实施例1基本相同，区别在于：萃取的温度为200℃，萃取时间为1.5小时，萃取采用的盐酸溶液浓度为2mol/L，洗脱时氢氧化钠溶液的浓度为0.15mol/L；流动相采用醋酸铵调节pH为5.2，流速为0.8mL/min。选择另一种烟叶样品B，测得样品B中马来酰肼残留量为11.7μg/g。
实施例3
本实施例的测定方法与实施例1基本相同，区别在于：萃取的温度为190℃，萃取时间为2小时，萃取采用的盐酸溶液浓度为3mol/L，洗脱时氢氧化钠溶液的浓度为0.2mol/L；流动相采用醋酸铵调节pH为5.4，流速为0.9mL/min。选择另一种烟叶样品C，测得样品C中马来酰肼残留量为140.4μg/g。
实施例4
本实施例的测定方法与实施例1基本相同，区别在于：萃取的温度为180℃，萃取时间为2小时，萃取采用的盐酸溶液浓度为4mol/L，洗脱时氢氧化钠溶液的浓度为0.17mol/L；流动相采用醋酸铵调节pH为5.8，流速为1.0mL/min。选择另一种烟叶样品D，测得样品D中马来酰肼残留量为56.3μg/g。
本发明测定方法的回收率及重复性（n=6）检测：在烟草样品中加入马来酰肼农药的标准溶液，然后分别进行前处理和HPLC分析，并按照加标量和测定值计算其回收率，结果见表3。
表3 马来酰肼的回收率及重复性（n=6）
 
Figure 605057DEST_PATH_IMAGE003
从表2的数据可以看出，马来酰肼在不同浓度的回收率在96%-103.2%之间，平均回收率为99%；相对标准偏差（RSD）在5.16%-9.35%之间，平均相对标准偏差为6.67％，表明本发明测定方法的回收率高，重复性好。

Claims (8)

1.一种烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：
a、样品前处理：准确称取烟草或烟草制品，加入盐酸溶液加热回流萃取；萃取后过滤并将滤液加入C18固相萃取小柱净化，然后采用氢氧化钠溶液洗脱，洗脱液再经滤膜过滤，制得样品溶液；
b、标准工作溶液配制：准确称取马来酰肼标准品于容量瓶中，定容并稀释于0.1-80.0μg/ml范围内配制至少三个浓度梯度的系列浓度标准工作溶液；
c、高效液相色谱测定：以0.1M的醋酸水溶液为流动相分别对步骤b中的各浓度梯度的系列浓度标准工作溶液进行高效液相色谱测定，以检测到的马来酰肼色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线及其回归方程；然后以相同方法对步骤a中的样品溶液进行测定，将样品色谱峰面积带入标准曲线的回归方程中得到样品溶液中的马来酰肼的浓度，从而计算得到烟草或烟草制品中马来酰肼的残留量。
2.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：所述步骤a中萃取的温度为180℃-200℃，萃取时间为1-2小时。
3.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：所述步骤a中洗脱液过滤采用的是0.45μm滤膜。
4.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：所述高效液相色谱条件为：VarianMicrosorb-MV100-5C18色谱柱，流速0.7-1.0mL/min，紫外检测波长313nm，柱温30℃。
5.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：所述流动相采用醋酸铵调节pH为4.8-5.8。
6.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：所述高效液相色谱的检测器为VWD检测器。
7.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：步骤a所述盐酸溶液的浓度为1-4mol/L。
8.根据权利要求1所述的烟草或烟草制品中马来酰肼残留量的测定方法，其特征在于：步骤a所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1-0.2mol/L。
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