CN105651882A

CN105651882A - 一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法

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Publication number: CN105651882A
Application number: CN201511025286.XA
Authority: CN
Inventors: 徐海涛; 于宏晓; 岳勇; 张东海; 许锴霖; 郑轩; 张莎莎; 贺笑非; 管延渠; 陈建军
Original assignee: China Tobacco Shandong Industrial Co Ltd
Current assignee: China Tobacco Shandong Industrial Co Ltd
Priority date: 2015-12-30
Filing date: 2015-12-30
Publication date: 2016-06-08
Anticipated expiration: 2035-12-30
Also published as: CN105651882B

Abstract

本发明公开了一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法，1)配制一系列不同浓度的马来酰胺标准溶液，利用液相色谱串联质谱方法进行检测，建立标准曲线；2)将制备得到的烟草样品利用高效液相色谱串联质谱的方法进行检测；3)根据标准曲线计算得到烟草样品中马来酰胺的含量。将所述萃取液倒入烟草试样中，震荡提取5-20min，超声提取5-20min后，过滤得上清液即得烟草样品。该萃取液甲酸甲醇最佳浓度为1％。本发明中的萃取剂对烟草试样进行萃取，萃取方法简单，易于操作，大大简化了样品预处理工序；本发明的萃取剂对检测的干扰程度小，保证了烟草中马来酰胺检测的准确度。

Description

一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法

技术领域

本发明涉及烟草中农药残留检测领域，具体涉及一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法。

背景技术

烟草中的农药残留量关乎卷烟产品的安全性和内在质量，在行业中已引起高度关注。CORESTA农用化学品咨询委员会(ACAC)2003年发布了农用化学品指导性残留限量的基本原则与实施意见，对99种农药残留提出了指导性限量，2010年增加到了200多种，并将继续增加。我国目前主要参照ACAC限量作为烟草贸易评价依据。中国烟草总公司《烟草农药最大残留限量》对烟草农药残留123种进行控制，并在此基础上提出我国烟草农药残留重点关注的21种农药名单，其中，杀菌剂类9种、植物生长调节剂类3种、除草剂类2种、杀虫剂7种。

我国烟草科技工作者对烟草中农药残留的多种分析方法作了大量改进研究，采用现代的分析技术将检测方法逐步集中，在已颁布的农残检测方法标准系列中，由2007年的7个调整2011年的5个。其中，马来酰肼(即为抑芽丹)的测定由紫外分光光度法，改为《烟草及烟草制品马来酰肼农药残留的测定-高效液相色谱法》(YC/T405.5-2011)检测方法。然而该方法对样品的前处理较为繁琐，如在试样的蒸馏提取过程中，需要保持回流冷凝管冷凝充分，蒸馏瓶始终保持在约200℃状态下相对稳定，且要调整到在20min时间内收集到100mL蒸馏液的蒸馏速率。该方法费时、费力，需要专人看管蒸馏过程，不利于批量试样的农药残留检测，影响检测效率的提高，需要进一步的改进和完善。基于上述原因，研究一种更便捷、准确的测定烟草中农药残留马来酰肼含量的方法是十分必要。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的技术问题，提供一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹的方法，该方法检测限低，重复性好，适用于烟草中农药残留马来酰肼含量的检测。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

0.5-2％的甲酸甲醇溶液作为萃取液在液相串联质谱检测烟草制品中抑芽丹含量中的应用。

一种液相串联质谱检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，包括如下步骤：

1)配制一系列不同浓度的马来酰胺标准溶液，利用液相色谱串联质谱方法进行检测，建立标准曲线；

2)将0.5-2％的甲酸甲醇溶液作为萃取液制备得到的烟草样品利用高效液相色谱串联质谱的方法进行检测；

3)根据标准曲线计算得到烟草样品中马来酰胺的含量。

优选的，步骤2)中，烟草样品的制备方法，包括如下步骤：

将所述萃取液倒入烟草试样中，并加入马来酰肼-D2内标液，震荡提取5-20min，超声提取5-20min后，过滤得上清液即得烟草样品。

优选的，每克烟草试样用8-12mL萃取液萃取。

优选的，烟草样品中马来酰肼-D2内标液的浓度为1μg/mL；

或，振荡提取的转速为250-300rpm。

优选的，所述过滤使用的滤膜的孔径为0.22μm。

优选的，步骤1)中，建立标准曲线的溶液为7个不同浓度，马来酰肼的浓度分别为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL和10.0μg/mL，马来酰肼-D2内标浓度均为1μg/mL。

优选的，液相色谱的操作条件为：采用HILIC极性柱，规格为150m×3.0mm，膜厚为5μm；柱温度为室温，流速0.3mL/min；进样体积：5μL，流动相：A相为超纯水，B相为乙腈，0-3min，流动相由A相5％、B相95％变为A相27％，B相73％；3-10min，流动相由A相27％，B相73％变为A相30％，B相70％；10-13min流动相由A相30％，B相70％变为A相5％、B相95％。

优选的，质谱的检测条件为：MH：母离子111.1，子离子42.1-82.1，去簇电压为-60V，碰撞能为-40--26V；MH-D2：母离子113.0，子离子42.1-84.1，去簇电压为-55V，碰撞能为-40--25V。

所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法在检测烟草制品中抑芽丹含量中的应用。

一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法，具体包括如下步骤：

1)萃取液的配制，萃取液为1％的甲酸甲醇溶液，甲醇：HPLC级、甲酸：分析纯级；

2)标准工作曲线的建立

①分别配制浓度为400μg/mL的马来酰肼标准储备液，20μg/mL中间液I和2μg/mL中间液II，溶剂为甲醇；

②分别配制浓度为200μg/mL的氘代马来酰肼内标标准储备液和20μg/mL中间液，溶剂为甲醇；

③标准曲线溶液的配制如下表1所示，

表1标准曲线溶液的配制

分别制备7个不同浓度的马来酰肼标准工作溶液，每个浓度取1.5mL装入色谱瓶，供液相色谱串联质谱仪检测；

③将7个标准样品的马来酰肼响应值与马来酰肼的含量进行线性回归，得到标准工作曲线，线性相关系数R²>0.999；

3)待测样品的制备

称取1g(精确至0.0001g)试样于50mL离心管中，加入10mL提取溶液1％甲酸甲醇，震荡提取(275rpm)10min，超声10min后于4000rpm离心10min，取上清液过0.22μm滤膜进行上机测定；

4)液相色谱串联质谱仪操作条件；采用HILIC极性柱，规格为150m×3.0mm，膜厚为5μm；柱温度为室温，流速0.3mL/min；进样体积：5μL，流动相：A相为超纯水，B相为乙腈，设置参数如表2所示；质谱参数如表3所示；

表2流动相参数设置

时间(min)	超纯水A(％)	乙腈B(％)
			0	5	95
3.0	27	73
			10.0	30	70
13.0	5	95

表3质谱检测参数

5)分析结果的计算及分析结果的校正

读出待测样品马来酰肼的响应值，根据步骤2)所建立的马来酰肼标准曲线，计算得到样品的马来酰肼含量。

通过选择合适的萃取剂提高对目标化合物的提取率，选择合适的内标物质浓度1.0μg/mL以提高检测目标化合物的准确度，本发明能实现农药残留马来酰肼含量的检测。

本发明的有益技术效果为：

该方法与现有方法相比，样品萃取时，不需要盐酸回流，操作简单，提取效率好，杂质干扰小，可大批量操作，重现性好，非常适用于烟叶中马来酰肼残留量的检测。

本发明的标准工作曲线R²>0.999，方法定量限为2.0mg/kg，方法的回收率(2.0，10.0，80.0mg/kg三个水平)为93.4-102.2％，相对标准偏差(RSD％)为4％，具有较好的准确度和精密度，适合大批量测定的特性，能很大限度提高烟草及其制品中马来酰肼残留量的检测效率。

附图说明

图1为峰面积比与马来酰肼含量的关系图；

图2为本发明对烟草样品的检测谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

甲醇：HPLC，甲酸：分析纯，乙腈：Milli-Q50超纯水仪，美国Millipore公司；标准物质：马来酰肼(实验室编号320-4)、马来酰肼-D2(氘代马来酰肼，实验室编号320-6)，默克公司；Agilent1290-ABSciexTripleQuad高效液相色谱串联质谱仪，美国Agilent公司；液相色谱柱：HILIC极性柱，规格为150m×3.0mm，膜厚为5μm，美国Agilent公司；AG285型十万分之一天平(METTLERTOLEDO)，感量0.1mg；超声波清洗器(深圳科美达超声波设备有限公司)；0.22μm有机相滤膜，上海佐菲实验设备有限公司。

一种用液相色谱串联质谱(LC–MS/MS)检测烟草中农药残留马来酰肼(抑芽丹)含量的方法，是通过以下步骤来实现的：

1)标准储备液的配制：

①马来酰肼标准储备液(400μg/mL)：

准确称取马来酰肼标准品20mg于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混匀。标准储备液-18℃储存6个月。

②马来酰肼标准中间液I(20μg/mL)：

准确移取400μg/mL标准储备液0.5mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀。标准中间液I于-18℃储存6个月。

③马来酰肼标准中间液II(2μg/mL)：

准确移取20μg/mL马来酰肼标准中间液I0.1mL用甲醇定容至1mL，混匀。标准中间液II现用现配。

④马来酰肼-D2内标标准储备液(200μg/mL)：

准确称取马来酰肼-D2标准品5mg于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混匀。标准储备液-18℃储存6个月。

表4标准曲线溶液的配制

⑤马来酰肼-D2内标标准中间液(20μg/mL)：

准确移取200μg/mL标准储备液0.25mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀。标准中间液-18℃储存6个月。

⑥标准曲线溶液的配制见表4(烟草提取液处理同1)但不加内标)，马来酰肼标准品浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL，马来酰肼-D2内标浓度均为1μg/mL：

分别制备7个不同浓度的马来酰肼标准工作溶液，每个浓度取1.5mL装入色谱瓶，供液相色谱串联质谱检测。

⑦将7个标准样品的马来酰肼响应值与马来酰肼的含量进行线性回归，得到标准工作曲线，y＝4.20682x，其中，y为峰面积比，x为马来酰肼含量，线性相关系数R²为0.999，如图1所示；

2)待测样品的制备

称取1g(精确至0.0001g)试样于50mL离心管中，加入10mL提取溶液1％甲酸甲醇震荡提取(275rpm)10min，超声10min后于4000rpm离心10min，取上清液过0.22μm滤膜进行上机测定；

3)液相色谱串联质谱仪操作条件；HILIC极性液相色谱柱，规格为150m×3.0mm，膜厚为5μm；柱温度为室温，流速0.3mL/min；进样体积：5μL，流动相：A相为超纯水，B相为乙腈，设置参数如表5所示；质谱参数如表6所示；

表5流动相参数设置

时间(min)	超纯水A(％)	乙腈B(％)
			0	5	95
3.0	27	73
			10.0	30	70
13.0	5	95

表6质谱检测参数

4)分析结果的计算及分析结果的校正

读出待测样品马来酰肼的响应值，根据步骤1)所建立的马来酰肼标准曲线计算得到样品的马来酰肼的含量为0.17mg/kg，如图2所示，出峰时间为5.04min左右。

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围内。

Claims

1.0.5-2％的甲酸甲醇溶液作为萃取液在液相串联质谱检测烟草制品中抑芽丹含量中的应用。

2.一种液相串联质谱检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：包括如下步骤：

3)根据标准曲线计算得到烟草样品中马来酰胺的含量。

3.根据权利要求2所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：步骤2)中，烟草样品的制备方法，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：每克烟草试样用8-12mL萃取液萃取。

5.根据权利要求4所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：烟草样品中马来酰肼-D2内标液的浓度为1μg/mL；

或，振荡提取的转速为250-300rpm。

6.根据权利要求3所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：所述过滤使用的滤膜的孔径为0.22μm。

7.根据权利要求2所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：步骤1)中，建立标准曲线的溶液为7个不同浓度，马来酰肼的浓度分别为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL和10.0μg/mL，马来酰肼-D2内标浓度均为1μg/mL。

8.根据权利要求2所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：液相色谱的操作条件为：采用HILIC极性柱，规格为150m×3.0mm，膜厚为5μm；柱温度为室温，流速0.3mL/min；进样体积：5μL，流动相：A相为超纯水，B相为乙腈，0-3min，流动相由A相5％、B相95％变为A相27％，B相73％；3-10min，流动相由A相27％，B相73％变为A相30％，B相70％；10-13min流动相由A相30％，B相70％变为A相5％、B相95％。

9.根据权利要求2所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：质谱的检测条件为：MH：母离子111.1，子离子42.1-82.1，去簇电压为-60V，碰撞能为-40--26V；MH-D2：母离子113.0，子离子42.1-84.1，去簇电压为-55V，碰撞能为-46--25V。

10.权利要求2-9任一所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法在检测烟草制品中抑芽丹含量中的应用。