CN101808660B - 抗猫变态反应的疫苗肽组合 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含用于预防或治疗对猫的变态反应的肽的组合物，并且尤其涉及肽的最佳组合。

Description

抗猫变态反应的疫苗肽组合
发明领域
本发明涉及包含用于预防或治疗对猫的变态反应的肽的组合物，并且尤其涉及肽的最佳组合。 
发明背景 
T细胞抗原识别需要呈递抗原细胞(APC)以与主要组织相容性复合体(MHC)分子联合在它们的细胞表面呈递抗原片段(肽)。T细胞利用它们的抗原特异性T细胞受体(TCR)以识别由APC呈递的抗原片段。这种识别作为对免疫系统的触发产生一系列应答以清除已经被识别的抗原。 
通过生物例如人的免疫系统的外部抗原的识别在某些情况下可导致疾病，称为特应性病况。后者的实例是变应性疾病包括哮喘、特应性皮炎和变应性鼻炎。在这一组疾病中，B淋巴细胞产生结合外部来源的抗原的IgE类抗体(在人类中)，就这一点而言所述抗原被认为是变应原，因为这些分子引起变应性应答。变应原特异性IgE的产生依赖于也被变应原活化(对变应原特异)的T淋巴细胞。变应原特异性IgE抗体借助细胞例如嗜碱性粒细胞和肥大细胞的对IgE的表面受体的表达结合至这些细胞的表面。 
表面结合的IgE分子通过变应原的交联导致这些效应细胞的脱粒而引起炎性介质例如组胺、5-羟色胺和脂质介质诸如硫醚白三烯(sulphidoleukotriene)的释放。除了IgE依赖性事件，一些变应性疾病例如哮喘以非IgE依赖性事件为特征。 
变应性的IgE介导的疾病目前用提供症状的缓解或预防的剂治疗。这种剂的实例是抗组胺、β2激动剂和糖皮质激素。此外，一些IgE介导的疾病通过包括变应原成分或提取物的周期性注射的脱敏操作来治疗。脱敏治 疗可诱导与IgE竞争变应原的IgG应答，或者它们可诱导阻断抗变应原的IgE的合成的特异性抑制T细胞。这一形式的治疗并不总是有效的并且具有激起严重的副作用，尤其是一般的过敏性休克的风险。这可以是致命的，除非被立即识别并用肾上腺素治疗。降低或消除不需要的对特定变应原的变应性免疫应答而不改变对其他外来抗原的免疫反应性或不触发自身变应性应答的治疗性治疗对变应性个体来说将非常有益。 
世界上大约10％的人口是对猫(家猫)变应性的并且高达67％的哮喘患者对猫变应原敏感。由猫产生的主要变应原是糖蛋白Fel d1，其在患有猫变态反应的90-95％的患者中引起应答。治疗性或预防性治疗将因此对患有猫变态反应或具有患有猫变态反应的风险的人来说非常有益。 
发明概述 
本发明人已经公开了Fel d1蛋白的肽片段的一些组合在使个体对Feld1变应原脱敏中是尤其有用的。已经针对本发明的多肽组合与许多II类MHC的分子结合并且导致伴随最小的组胺释放的T细胞增殖的能力而对它们进行选择。本发明的组合物、产物、载体和制剂因此可被提供给个体用以通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应。 
本发明的多肽最初作为潜在的T细胞表位通过使用肽-MHC结合测定来选择。参见例如图1，其证实来自Fel d1链1和2的一系列的肽在II类MHC结合测定中与多种DR类型结合的能力。之后为了在免疫耐受作用中的可能的使用而对这些候选多肽进一步筛选。 
与以肽免疫为基础的脱敏作用的方法有关的困难在于如何选择变应原适合的大小和区域作为有待被用于免疫的肽的基础。选择的肽的大小是关键。如果肽太小，疫苗在诱导免疫应答方面将无效。如果肽太大或者将全抗原引入个体，就有引入可能致命的不良反应例如过敏反应的危险。 
本发明的多肽已经被选择为保留T细胞特异性同时在尺寸上足够小而不会具有使得它们保留整个分子的IgE结合表位的构象的显著的三级结构。本发明的多肽因此没有在细胞例如肥大细胞和嗜碱性粒细胞上诱导相 邻特异性IgE分子的显著交联并且因此不会导致显著的组胺释放。 
本发明的肽是有优势的，因为在对T细胞样品施用时它们导致T细胞增殖同时产生最少的组胺释放。这在实施例2中被证实。本发明的多肽能够在猫变应性的个体中诱导晚期应答。包含这些多肽或能够表达这些多肽的多核苷酸的本发明的组合物、产物和制剂因此在对这一变应原敏感的个体中减少对Fel d1变应原的超敏感性有用并有效。 
本发明的又一个优点是肽对广泛的靶主要组织相容性复合体(MHC)分子的结合的能力。T细胞受体(TCR)在它们的特异性上是高度可变的。可变性与抗体分子一样通过细胞中的基因重组事件而产生。TCR识别与由主要组织相容性复合体(MHC)的基因编码的分子结合的短肽形式的抗原。这些基因产物是与导致在移植中所使用的“组织类型”的分子相同的分子并且也被称为人类白细胞抗原分子(HLA)(这些术语可互换使用)。个别的MHC分子具有肽结合槽，其因为它们的形状和电荷而仅能够结合有限组的肽。被一个MHC分子结合的肽可不必然被其他MHC分子结合。 
当蛋白分子例如抗原或变应原被呈递抗原细胞例如B淋巴细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞所接受时，分子在细胞内被酶促降解。降解的过程产生分子的肽片段，如果它们具有合适的大小、电荷和形状，之后可在一些MHC分子的肽结合槽中结合并且随后被呈现在呈递抗原细胞的表面上。如果肽/MHC复合体在呈递抗原细胞表面上以足够的数目呈递，那么它们之后可活化携带适合的肽/MHC特异性T细胞受体的T细胞。 
由于MHC的多态性质，远系繁殖的群体例如人中的个体将在他们的细胞表面上表达不同的MHC分子的组合。因为不同的MHC分子可基于肽的大小、电荷和形状结合来自同一分子的不同的肽，不同的个体将呈现出结合至它们的MHC分子的不同的肽谱。一般的MHC结合肽表位的鉴定在远系繁殖群体例如人中比在近亲繁殖的动物(例如一些品系的实验室小鼠)中更困难。基于个体间不同的MHC表达和肽结合中的固有差异以及这一差异带来的呈递，鉴定在人类中具有脱敏治疗的用途的单一的肽是不可能的。 
然而本发明的肽组合通过靶向群体的MHC中的大多数来提供在人群 中的广泛覆盖效力。例如，不必将患者或个体分型以确定他或她具有哪种II类MHC分子以便决定那种肽或肽的组合将是有效的。用本发明的肽配制的疫苗将因此具有广泛的功用。 
发明人的工作已经生产了具有下列特征的肽组合： 
-组合与许多不同的II类MHC分子结合(参见图2，其显示没有与许多不同的MHC分子结合的大量组合) 
-组合产生与整个变应原相同或更少的组胺释放和/或具有与整个变应原相当的细胞因子释放概况 
-组合的肽是可溶的。 
相应地，本发明提供在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的组合物，其包含： 
a)选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的四种或更多种多肽，以及任选地 
b)具有下列特征的一种、两种或三种多肽： 
(i)包含与a)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列，并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸。 
优选地，本发明的组合物包含： 
(i)对一组HLA分子中的每个成员都表现出强结合的至少两种肽和表现出中等结合的至少一种肽；或者 
(ii)对HLA分子的所述组中每个成员都表现出强结合的至少一种肽和表现出中等结合的至少两种肽； 
其中HLA分子的组包括由在至少80％的远系繁殖的人群中具有累计频率的不同的等位基因编码的至少七种不同的HLA分子；和/或 
(iii)其中组合物能在来自猫变应性个体的样品中以一定水平诱导组胺释放，所述水平高出来自同样个体的样品中由完整的Fel d1变应原诱导的 组胺释放的不超过5％；和/或 
(iv)其中组合物在来自猫变应性个体的PBMC样品中诱导细胞因子释放概况，其与在来自同样个体的样品中由完整的Fel d1变应原诱导的细胞因子释放概况相当。 
通常，远系繁殖的人群是白种人(Caucasian)，和/或HLA分子的组包括至少HLA-DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13和DR15；并且任选地还包括HLA-DRB4和DRB5。 
附图描述 
图1-测试来源于Fel d1链1和2的肽在II类MHC结合测定中与多种DR类型结合的能力。选择显示出混杂的结合特征的肽并将其组合以产生与大量II类MHC类型结合的肽的混合物。 
图2-显示与大量II类MHC类型结合的组合的肽混合物的图示。 
图3-增殖：应答者百分比和应答的质量。图3概括了对肽和抗原的增殖应答。以黑柱显示具有可检测的增殖应答的个体的百分比。灰柱(弱)、白柱(中等)和散列柱(强)提供这些应答的质量的分析。质量主要由刺激指数(SI：抗原/肽存在时的计数除以只有培养基时的计数的比率)定义。因此对于肽1(MLA01)来说，12％的受治疗者产生增殖应答并且其中92％是弱的，没有中等的而有8％是高的。对单种肽/抗原的增殖应答是可变的(黑柱)。92％的受治疗者对阳性对照抗原PPD具有正的增殖应答。这些大部分是强应答(散列柱)。75％的受治疗者对猫的皮屑提取物应答，其中59％(即75％中的59％)的应答是弱的。对7种优选的肽(SEQ ID NO：1至7)的混合物的应答与对猫的皮屑提取物(CAT)的应答几乎一样。 
图4-经由细胞因子的应答者的百分比。图4概括经由所测量的三种细胞因子的产生具有对肽/抗原中的每一种的可检测的应答的个体的百分比。阳性对照抗原PPD在几乎所有个体中引发细胞因子产生(IFN-γ：91％，IL-13：97％和IL-10：96％)。完整的猫变应原和7种肽的混合物在约80％或更多的受治疗者中引发细胞因子应答。单种的肽引发不同频率的应答。 通常，细胞因子产生看起来是比增殖应答提供阳性细胞因子应答具有更大的个体百分比的更敏感的检测应答的方法。在大多数情况下，在最多数的受治疗者中检测到IL-10分泌而且最少检测到IFN-γ。 
图5-使用肽/抗原的细胞培养后产生IFN-γ的个体的百分比和应答强度的百分比。在26-44％的对单种肽应答的受治疗者中检测到IFN-γ应答。这些应答主要是非常低的至低的至中等的。复合体抗原诱导更频繁的应答(肽混合物80％、猫皮屑79％、PPD 91％)。这些应答是低的至中等的至高的。PPD应答尤其高(89个PPD应答在100pg/ml以上)。 
图6-使用肽/抗原的细胞培养后产生IL-13的个体的百分比和应答强度的百分比。在33-68％的对单种肽应答的受治疗者中检测到IL-13应答。这些应答主要是非常低的至低的，尽管检测到显著数目的中等应答。这可能反应了在这些受治疗者中Th2的变应性致敏特征。复合体抗原诱导更频繁的应答(肽混合物85％、猫皮屑93％、PPD 97％)。这些应答是低的至中等的至高的。 
图7-使用肽/抗原的细胞培养后产生IL-10的个体的百分比和应答强度的百分比。在46-75％的对单种肽应答的受治疗者中检测到IL-10应答。这些应答主要是非常低的至低的。复合体抗原诱导更频繁的应答(肽混合物93％、猫皮屑96％、PPD 96％)。这些应答是低的至中等的。观察到非常少的“高的”IL-10应答。 
图8-显示对本发明的肽的优选混合物的临床试验的12.0nmol小组中所有八个患者的治疗之前和之后的平均LPSR面积的代表性图。 
本文提到的序列的描述 
SEQ ID NO：1至16提供本发明的多肽序列。SEQ ID NO：1至16分别对应于实施例和图1中的肽MLA01、MLA03、MLA04、MLA05、MLA07、MLA12、MLA14、MLA02、MLA06、MLA11、MLA15、MLA16、MLA08、MLA09、MLA10和MLA13。 
发明详述 
本发明提供在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的组合物，其包含： 
a)选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的四种或更多种多肽，以及任选地 
b)具有下列特征的一种、两种或三种多肽： 
(i)包含与a)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列，并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸。 
本发明还提供包含本发明的多肽的产物和制剂以及包含能够表达在通过免疫耐受作用预防或治疗猫变态反应中使用的本发明多肽的多核苷酸的组合物、产物和载体。 
Fel d1蛋白的肽片段 
由家养的猫家猫(Felis catus)(家猫(Felis domesticus))产生的主要变应原是糖蛋白Fel d1。这一39kDa的蛋白是由两个17kDa的亚基形成的，每个亚基由两个二硫键链接的肽(Fel d1链1和链2)组成。Fel d1的氨基酸序列公开于WO 91/06571中。尽管也在唾液腺和肛腺检测到表达，但Fel d1蛋白的主要来源是皮脂腺。尽管Fel d1蛋白可能是信息素结合蛋白，但Fel d1蛋白的主要功能目前未知。 
本发明的肽来源于Fel d1。术语“肽”和“多肽”本文可交替使用。Fel d1本文也被称为“变应原”。 
本发明的组合物包含选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的四种或更多种多肽。任选地，组合物可包含一种、两种或三种另外的多肽。这些另外的多肽涉及(即通常与其同源和/或是其片段)其他的序列即不在已经选择的四种或更多种多肽中的SEQ IDNO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。一种、两种或三种另外 的多肽可与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种相同。组合物因此可包含如SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种所提供的四、五、六或七种不同的多肽。然而，任选的一种、两种或三种另外的多肽不需要与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种100％相同。它们优选地与没有被选为四种或更多种多肽的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸至少65％相同。 
也就是说，本发明提供在通过免疫耐受作用预防或治疗猫变态反应中使用的组合物，其包含：a)四种或更多种多肽，其选自下列氨基酸序列中的任一种： 
CPAVKRDVDLFLT(SEQ ID NO：1)； 
EQVAQYKALPVVLENA(SEQ ID NO：2)； 
KALPVVLENARILKNCV(SEQ ID NO：3)； 
RILKNCVDAKMTEEDKE(SEQ ID NO：4)； 
KENALSLLDKIYTSPL(SEQ ID NO：5)； 
TAMKKIQDCYVENGLI(SEQ ID NO：6)； 
SRVLDGLVMTTISSSK(SEQ ID NO：7)； 
LFLTGTPDEYVEQVAQY(SEQ ID NO：8)； 
KMTEEDKENALSLLDK(SEQ ID NO：9)； 
LTKVNATEPERTAMKK(SEQ ID NO：10)； 
ISSSKDCMGEAVQNTV(SEQ ID NO：11)； 
AVQNTVEDLKLNTLGR(SEQ ID NO：12) 
以及任选地，组合物可包含b)一种、两种或三种另外的多肽，其具有下列特征： 
(i)包含与a)中未选的上文的SEQ ID NO：1至12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序 列；并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸。 
本发明还提供产物，其包含：a)四种或更多种多肽，其选自下列氨基酸序列中的任一种： 
CPAVKRDVDLFLT(SEQ ID NO：1)； 
EQVAQYKALPVVLENA(SEQ ID NO：2)； 
KALPVVLENARILKNCV(SEQ ID NO：3)； 
RILKNCVDAKMTEEDKE(SEQ ID NO：4)； 
KENALSLLDKIYTSPL(SEQ ID NO：5)； 
TAMKKIQDCYVENGLI(SEQ ID NO：6)； 
SRVLDGLVMTTISSSK(SEQ ID NO：7)； 
LFLTGTPDEYVEQVAQY(SEQ ID NO：8)； 
KMTEEDKENALSLLDK(SEQ ID NO：9)； 
LTKVNATEPERTAMKK(SEQ ID NO：10)； 
ISSSKDCMGEAVQNTV(SEQ ID NO：11)； 
AVQNTVEDLKLNTLGR(SEQ ID NO：12) 
以及任选地，产物可包含b)一种或多种另外的多肽，其具有下列特征： 
(i)包含与a)中未选的上文的SEQ ID NO：1至12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列；并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸。 
其中每种不同的多肽用于在通过免疫耐受作用预防或治疗猫变态反应中同时、分别或顺序使用。 
因此更具体地，本发明提供用于在通过免疫耐受作用预防或治疗猫变态反应中同时、分别或顺序使用的产物，其包括： 
(a)选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的多肽； 
(b)选自上文(a)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的多肽； 
(c)选自上文(a)或(b)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的多肽； 
(d)选自上文(a)、(b)或(c)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的多肽；以及任选地 
(e)具有下列特征的多肽： 
(i)包含与上文a)、b)、c)或d)中未选的SEQ ID NO：1至12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列，并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸；以及任选地 
(f)具有下列特征的Fel d1蛋白的多肽片段： 
(i)包含与上文a)、b)、c)、d)或e)中未选的SEQ ID NO：1至12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列，并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸；以及任选地 
(g)具有下列特征的Fel d1蛋白的多肽片段： 
(i)包含与上文a)、b)、c)、d)、e)或f)中未选的SEQ ID NO：1至12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列，并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸。 
因此，本发明的组合物或产物可包含SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的变体。根据本发明的肽片段可通过截短例如通过从多肽的N和/或C端末端除去一个或多个氨基酸来得到。只要构成T细胞表位的核心的9个氨基酸基本没有被破坏，片段还可通过一 个或多个内部的缺失产生。 
例如，SEQ ID NO：1的变体可包含SEQ ID NO：1的片段即较短的序列。这可包括来自SEQ ID NO：1的N端末端或来自SEQ ID NO：1的C端末端的一个、两个、三个或四个氨基酸的缺失。这种缺失可来自SEQ ID NO：1的两个末端。SEQ ID NO：1的变体可包括延伸至SEQ ID NO：1末端之外的另外的氨基酸(例如来自猫Fel d1蛋白序列)。变体可包括上文讨论的缺失和增加的组合。例如，可在SEQ ID NO：1的一个末端缺失氨基酸，但来自全长Fel d1蛋白序列的另外的氨基酸可被添加在SEQ ID NO：1的另一末端。与上文变体的相同的讨论也适用于SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12。 
变体肽可包含来自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12或者其片段中的任一种的氨基酸序列的一个或多个氨基酸取代。变体肽可包含与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列。更优选地，适合的变体可包含与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个连续的氨基酸至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的氨基酸同一性。这一水平的氨基酸同一性可发生在肽的任何部分，尽管其优选地为核心区域。氨基酸同一性的水平超过至少9个连续的氨基酸但是取决于所对比的肽的大小，它可以是至少10、11、12、13、14、15个或至少16个或17个氨基酸。相应地上文特定的同一性水平中的任一个可以是跨越整个序列长度的。 
与氨基酸序列有关，“序列同一性”是指当使用具有以下参数的ClustalW(Thompson等人，1994，如上)评估时具有规定值的序列：双序列比对参数-方法：精确的，矩阵：PAM，空位开放罚分：10.00，空位延伸罚分：0.10；多序列比对参数：矩阵：PAM、空位开放罚分：10.00，延迟的百分比同一性：30，末端空位罚分：打开，空位间隔距离：0，负矩阵：无，空位延伸罚分：0.20，残基特异性空位罚分：打开，亲水性空位罚分：打开，亲水性残基：GPSNDQEKR。位于特定残基的序列同一性 旨在包括已经被简单衍生的相同的残基。 
变体肽可包含来自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的1、2、3、4、5或更多个或者多达10个氨基酸的取代。取代变体优选地包括用相同数目的氨基酸代替一个或多个氨基酸并形成保守的氨基酸取代。例如，氨基酸可由具有相似特性的可选择的氨基酸取代，例如，另一种碱性氨基酸、另一种酸性氨基酸、另一种中性氨基酸、另一种带电荷的氨基酸、另一种亲水性氨基酸、另一种疏水性氨基酸、另一种极性氨基酸、另一种芳香族氨基酸或另一种脂肪族氨基酸。可被用来选择适合的取代基的20种主要氨基酸的一些特性如下： 
 Ala  脂肪族、疏水、中性  Met  疏水、中性
 Cys  极性、疏水、中性  Asn  极性、亲水、中性
 Asp  极性、亲水、带(-)电荷  Pro  疏水、中性
 Glu  极性、亲水、带(-)电荷  Gln  极性、亲水、中性
 Phe  芳香族、疏水、中性  Arg  极性、亲水、带(+)电荷
 Gly  脂肪族、中性  Ser  极性、亲水、中性
 His  芳香族、极性、亲水、带(+)电荷  Thr  极性、亲水、中性
 Ile  脂肪族、疏水、中性  Val  脂肪族、疏水、中性
 Lys  极性、亲水、带(+)电荷  Trp  芳香族、疏水、中性
 Leu  脂肪族、疏水、中性  Tyr  芳香族、极性、疏水
另外的变体包括其中对出现在序列中的氨基酸的天然存在的氨基酸的取代是其结构类似物的变体。如果肽的功能没有受到显著的不良影响，那么序列中使用的氨基酸也可被修饰，例如被标记。当肽具有从SEQ IDNO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12或者其片段中的任一种的序列变化而来的序列时，取代可发生在跨越所述序列的全长，在SEQ IDNO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的序列中或在SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的序列外部。例如，本文描述的变化，例如增加、缺失、取代和修饰，可在SEQID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的序列中 发生。变体肽可包含或主要由SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的氨基酸序列组成，其中形成一个、两个、三个、四个或更多的氨基酸取代。变体肽可包含比SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种更大的Fel d1的片段。在这一实施方案中，本文描述的变化例如取代和修饰，可在SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的序列内和/或外部发生。 
本发明的变体肽在长度上为9至30个氨基酸(包括9和30个)。优选地，它们在长度上可以是从9至20个或更优选地13至17个氨基酸。肽可与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的肽序列具有相同的长度。 
肽可以化学来源于多肽变应原，例如通过蛋白水解切割，或者可以在智力意义上来源于多肽变应原，例如通过利用多肽变应原的氨基酸序列并以序列为基础合成肽。可使用本领域内熟知的方法合成肽。 
术语“肽”不仅包括其中氨基酸残基通过肽(-CO-NH-)键连接的分子也包括其中肽键是相反的分子。可使用本领域内已知的方法例如在Meziere等人(1997)J.Immunol.159，3230-3237中描述的那些制得这种逆-反式肽模拟物。这种方法包括制得含有涉及主链而不涉及侧链定向的变化的伪肽。Meziere等人(1997)显示至少对于II类MHC和T辅助细胞应答来说，这些伪肽是有用的。逆-反肽含有NH-CO键而不是CO-NH肽键，其对蛋白水解耐受得多。 
相似地，只要使用保留氨基酸残基的碳原子之间的间隔的适当的连接体部分，可完全不用肽键；如果连接体部分与肽键具有大致上相同的电荷分布和大致上相同的平面性，那么其是尤其优选的。还应理解的是肽可在其N-端或C-端被很方便地封闭以便帮助减少对外切蛋白水解(exoproteolytic)消化的敏感性。例如，肽的N-端氨基基团可通过与羧酸反应而被保护而肽的C-端羧基基团可通过与胺反应而被保护。修饰的其他实例包括糖基化和磷酸化。另一种可能的修饰是在R或K的侧链胺上的氢可被亚甲基基团代替(-NH2→-NH(Me)或-N(Me)2)。 
根据本发明的肽的类似物还可包括增加或减少肽的体内半衰期的肽 变体。根据本发明使用的能够增加肽的半衰期的类似物的实例包括肽的拟肽类似物、肽的D-氨基酸衍生物和肽-拟肽杂合体。根据本发明使用的变体多肽的另外的实施方案包括多肽的D-氨基酸形式。使用D-氨基酸而不是L-氨基酸制备多肽大大降低经由正常代谢过程的这种剂的任何不必要的断裂，除了降低其施用的频率以外，还降低需要被施用的剂的量。 
由本发明提供的肽可来源于由对编码Fel d1链的初始转录物的可选择的剪接所产生的mRNA所编码的Fel d1的剪接变体。肽也可来自氨基酸突变体、糖基化变体和至少保留变应原的MHC结合特性的Fel d1的其他共价衍生物。示例性的衍生物包括其中本发明的肽使用不是天然存在的氨基酸的部分通过取代、化学的、酶促的或其他适合的方法被共价修饰的分子。另外还包括在不同的猫中发现的Fel d1的天然存在的变体。这些变体可由等位基因变体编码或代表可选择的剪接变体。 
上文所描述的变体可在肽的合成期间或通过生产后修饰或当肽为使用了定向诱变、随机诱变或酶切割和/或核酸的连接的已知技术的重组形式时被制备。 
依照本发明，组合物可包含的另外的一种、两种或三种肽优选地是SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的功能变体。也就是说，肽优选地能够诱导免疫应答。特别地，它们能够在猫变应性个体中诱导晚期应答。这可通过肽在T细胞的样品中诱导T细胞增殖的能力来检测。检测T细胞增殖的诱导的方法是本领域内熟知的并且在实施例2中示例性说明了一种这样的方法。优选地，一种或多种另外的肽能够在至少20％的T细胞样品中导致T细胞增殖，其中每个样品都是从群体中不同的猫变应性个体获得的。本发明的组合物优选地能够在30％或更多的从一组猫变应性个体获得的T细胞样品中诱导T细胞增殖。更优选地，组合物能够在35％或更多、40％或更多、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％或更多的从一组敏化的个体获得的样品中诱导T细胞增殖。一组猫变应性个体中个体的数目可以是大于一的任何数目，例如至少2、3、5、10、15、20、30、50、80个或至少100个个体。如果肽导致T细胞增殖但不导致来自敏化个体的富集的嗜碱性粒细胞或肥 大细胞制剂的组胺的释放，那么其是优选的。可能有一些组胺释放，但是优选地，组合物不导致比包含SEQ ID NO：1至7中显示的7种不同的多肽的组合物明显更多的组胺释放。 
能够与TCR结合的适合的变体可以是经验来源的或是根据已知的标准选择的。在单一的肽中，有对MHC抗原结合槽中的结合有贡献的一些残基和与T细胞受体的超变区相互作用的其他残基(Allen等人(1987)Nature 327：713-5)。 
在对T细胞受体相互作用有贡献的残基中，已经证实了在给定的肽残基取代时与T细胞活化的依赖性有关的序位。使用已经具有用不同的氨基酸取代的一个或更多T细胞受体接触残基的肽，已经证实一些基团在T细胞活化的过程中的重要作用。Evavold&Allen(1991)Nature 252：1308-10证实T细胞增殖和细胞因子产生分离。在这一体外模型中，将对血红蛋白的64-76残基特异的T细胞克隆(在I-Ek的背景下)用其中进行了天冬氨酸对谷氨酸的保守取代的肽类似物攻击。这一取代没有显著影响类似物与I-Ek结合的能力。 
T细胞克隆用这一类似物的体外攻击之后，尽管维持了IL-4分泌但没有检测到增殖，克隆对辅助B细胞应答的能力也未检测到。在随后的研究中，相同组证实了T细胞介导的细胞溶解与细胞因子产生的分离。在这种情况下，前者保持不变而后者减少。改变的肽配体的体内效力最初在EAE(实验性变应性脑脊髓炎)的鼠模型中被McDevitt和同事们(Smilek等人(1991)Proc Natl Acad Sci USA 88：9633-9637)所证实。在这一模型中，EAE通过与MBP(髓鞘碱性蛋白)的致脑炎肽Ac1-11的免疫作用而被诱导。丙氨酸残基在位置四(赖氨酸)的取代产生与其限制性元件(AαuAβu)结合的很好的肽，但是其在易感染的PL/JxSJLF1品系中是非免疫原的，并且其还在与致脑炎肽的免疫之前或之后被施用时预防EAE的发作。因此，可在肽中鉴定影响肽诱导T细胞的不同功能的能力的残基。 
有利地，肽可被设计以有利于T细胞增殖和脱敏的诱导，Metzler和Wraith已经证实其中已经进行了增加肽-MHC亲和力的取代的肽的改进的致耐受能力(Metzler&Wraith(1993)Int Immunol～：1159-65)。 Sloan-Lancaster等人(1993)Nature 363：156-9已经证实改变的肽配体可导致克隆的T细胞中的长期并且显著的无反应性。 
本发明的组合物能够在对Fel d1变应原敏感的个体中诱导晚期应答。术语“晚期应答”包含如在Allergy and Allergic Diseases(变态反应和变应性疾病)(1997)A.B.Kay(编辑)，Blackwell Science，第1113-1130页中所解释的含义。晚期应答可以是任何晚期应答(LPR)。优选地，肽能够诱导晚期哮喘应答(LAR)或晚期鼻炎应答，或者晚期皮肤应答或晚期眼部应答。可使用本领域内熟知的方法确定特定的肽是否能够引起LPR；特别优选的方法描述于Cromwell O，Durham SR，Shaw RJ，Mackay J和Kay AB，Provocation tests and measurements of mediators from mast cells and basophilsin asthma and allergic rhinitis(来自哮喘和变应性鼻炎中的肥大细胞和嗜碱性粒细胞的介质的激发试验和测量)，在Handbook of ExperimentalImmunology(实验免疫学手册)(4)第127章，编辑：Weir DM，BlackwellScientific Publications，1986中。 
因此，优选地，本发明的个别肽能够在已经对Fel d1变应原敏化的个体中诱导LPR。可用熟知的操作例如使用变应原提取物溶液的皮肤针刺试验、皮肤LPR的诱导、临床史、变应原攻击和用于变应原特异性IgE的测量的放射变应原吸附试验(RAST)测定个体是否已经对变应原敏化。可以例如这些检测为基础由医生确定特定的个体是否有望从治疗中获益。 
使个体对Fel d1变应原脱敏或免疫耐受意味着在适当敏化的个体中抑制或阻止由Fel d1诱导的变应性组织反应。已经显示可选择性的活化T细胞，并且之后使其无应答。而且这些T细胞的无变应化或消除导致患者对特定变应原的脱敏。脱敏显示其本身在变应原或变应原来源的肽的第二次和另外的施用时，对变应原或变应原来源的肽的应答的减少或优选地这种应答的消除。第二次施用可在适当的时间段后进行以允许脱敏发生；其优选为一天和几周之间的任何时间段。约两周的间隔是优选的。 
尽管本发明的组合物能够在猫变应性个体中诱导LPR，但应当理解的是当组合物被用来治疗患者时，优选的是，使用足够低浓度的组合物以使没有可观察的LPR发生，但应答足以部分地将T细胞脱敏以使得可给予下 一个(优选地更高的)剂量等等。这样，剂量被逐步增加以产生充分的脱敏作用但通常不会在患者中再诱导LPR。但是组合物或肽能够在比所施用的浓度更高的浓度做到这些。 
本发明的组合物优选地能够在50％或更多的来自群体的一组猫变应性个体中诱导晚期应答。更优选地，组合物能够在55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多或者90％或更多的一组敏化的个体中诱导LPR。可通过本领域内熟知的方法确定组合物是否能够在一定百分比的一组受治疗者中诱导LPR。 
肽组合的特性 
MHC结合 
优选的肽的组合通常与大量不同的HLA分子结合。这是有利的，因为群体中大部分的个体将通过组合而被免疫耐受。因此优选的组合包括： 
(iii)对一组HLA分子中的每个成员都表现出强结合的至少两种肽和表现出中等结合的至少一种肽；或者 
(iv)对所述组的HLA分子中的每个成员都表现出强结合的至少一种肽和表现出中等结合的至少两种肽； 
其中HLA分子的组包括由在至少80％、或至少85％、90％、95％或99％的远系繁殖的人群中具有累计频率的不同的等位基因编码的至少七种不同的HLA分子。 
MHC结合的强度可通过任何适当的方法评估。优选的方法包括竞争性抑制测定，其中相对于参考肽测量结合。参考肽通常是已知为给定的MHC分子的强结合剂的肽。在这样的测定中，如果肽对给定的HLA分子具有比参考肽低超过100倍的IC50，那么它是给定的HLA分子的弱结合剂。对给定的HLA分子具有比参考肽低超过20倍但小于100倍的IC50的肽是中等结合剂。如果肽对给定的HLA分子具有比参考肽低小于20倍的IC50，那么它是强结合剂。 
远系繁殖的人群可以是任何群体，通常是白种人群体。HLA分子的组 通常包括至少HLA-DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13和DR15；以及任选地，还包括HLA-DRB4和DRB 5。对于这些HLA分子来说适合的参考肽是： 
DR1(DRB1*0101等位基因)：HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)； 
DR3(DRB1*0301等位基因)：MT216(AKTIAYDEEARRGLE)； 
DR4(DRB1*0401等位基因)：HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)； 
DR7(DRB1*0701等位基因)：YKL(AAYAAAKAAALAA)； 
DR11(DRB1*1101等位基因)：HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)； 
DR13(DRB1*1301等位基因)：B1 21-36(TERVRLVTRHIYNREE)； 
DR15(DRB1*1501等位基因)：A3 152-166(EAEQLRRAYLDGTGVE)； 
DRB4(DRB4*0101等位基因)：E2/E7(AGDLLAIETDKATI)；和 
DRB5(DRB5*0101等位基因)：HA 306-318(PKYVKQNTLKLAT)。 
组胺释放 
优选的肽的组合通常在来自含有嗜碱性粒细胞或肥大细胞的猫变应性个体的样品中诱导组胺释放，其比在来自相同个体或个体的群体的样品中由整个Fel d1变应原诱导的组胺释放超过不高于5％、6％、7％、8％、9％或10％。 
最优选地，组合诱导组胺释放，其比在来自相同个体或个体的群体的样品中由包含SEQ ID NO：1至7中所示的7种不同的多肽的组合物诱导的组胺释放超过不高于5％、6％、7％、8％、9％或10％。 
来自猫变应性个体的样品通常是外周血单核细胞(PBMC)样品，其可如本领域中的标准方法制备。适合的方法的实例包括从获得自受治疗者的肝素化血样品分离PBMC。通常通过密度梯度分离从这样的样品中分离PBMC。 
组胺释放可通过任何适当的方法例如ELISA测量。大量适当的测定试剂盒可由商业获得以检测来自对任何给定的组胺释放剂应答的细胞的组 胺释放水平。通常，将约5×105至5×106的PBMC的样品与给定浓度的给定的组胺释放剂孵育。在孵育结束时测量孵育培养基或孵育培养基样品中的组胺浓度。孵育通常为37℃下30分钟。 
当组胺释放剂是肽或肽的组合时，其通常以与期望体内存在的浓度范围相当的一定浓度范围内的大量不同的稀释被施用。例如进入5升血量的10mg剂量的单一的肽将产生2ng/ml(2×10-6mg/ml)的血液浓度。因此对肽或肽的组合来说适合的浓度范围通常是10mg/ml至1ng/ml。将在所述范围的每个所检测的稀释进行单一、二重或三重的测量。每次测量通常需要约5×105PBMC。还将在可由技术人员很容易地确定的适当的浓度检测适合的阳性对照。适合的阳性对照包括整个Fel d1变应原或适合的替代物例如商业可获得的完整的猫皮屑提取物。还可将未用组胺释放剂处理的细胞样品的自发的组胺释放作为阴性对照/背景组胺释放的指示剂进行测量。当肽/变应原制剂的两个或更多的稀释产生背景之上10％或更多的组胺释放时，或当在所检测的最高浓度获得背景之上10％或更多的单一值时，其通常被认为是“正的组胺释放”。 
任何样品的孵育培养基中的组胺浓度通常通过ELISA测量。适合的ELISA测定通常包括向孵育培养基的样品连同适合的缓冲液中加入组胺酰化剂。酰化的组胺比组胺更稳定并且这样处理的样品可在分析前储存的更久。分析通常包括加入轭合抗酰基组胺试剂的碱性磷酸酶，之后加入适当的生色碱性磷酸酶底物。通过测量吸收和与对已知的组胺浓度校准的标准曲线比较而确定组胺浓度。 
细胞因子释放 
优选的肽的组合通常在来自猫变应性个体的含有T细胞的样品中诱导细胞因子释放概况，其与在来自相同的个体或个体的群体的样品中由整个Fel d1变应原诱导的细胞因子释放概况相当。 
最优选地，组合在来自猫变应性个体或个体的群体的含有T细胞的样品中诱导细胞因子释放概况，其与在来自相同的个体或群体的样品中由包含SEQ ID NO：1至7中所示的7种不同的多肽的组合物诱导的细胞因子释放概况相当。 
来自猫变应性个体或群体的样品通常是外周血单核细胞(PBMC)样品，其可如本领域中的标准方法制备。可通过任何适合的方法评估细胞因子释放概况。适合的方法包括在独立的测定中测量样品中释放的一种、两种、三种或更多不同的细胞因子的水平。适合的测定包括ELISA和Luminex测定。 
当在两个样品中所产生的一些特异细胞因子的水平相似时，认为在一个样品中诱导的细胞因子释放概况与不同样品的细胞因子释放概况相当。更具体地，当一个样品中所产生的IL-10和IL-13的水平与第二个样品中产生的IL-10和IL-13的水平相差不超过5％、6％、7％、8％、9％或10％时，认为两个不同样品的细胞因子释放概况相当。 
因此优选的肽组合以与在来自相同个体或个体的群体中由整个Fel d1变应原诱导的IL-10和IL-13水平相差不超过10％的水平诱导IL-10和IL-13的产生。 
典型的细胞因子释放测定如下： 
将250μl 200μg/ml的适当抗原或肽浓度的溶液的分配至适当的例如48孔板的孔中。之后将板在加湿的5％CO2的培养箱中于37℃孵育最多4小时。之后向每个孔加入250μl 5×106细胞/ml的PBMC悬浮液并将板返回培养箱5天。之后将培养上清液的样品收集为多个等份以便在ELISA测定中使用。样品可在分析前被冷冻和储存。一个等份检测一种细胞因子的存在。通常细胞因子的存在依照本领域的实践标准通过使用ELISA测定来确定。样品中的细胞因子浓度通常通过在相同测定中生成的标准曲线的内插来确定。 
核酸和载体 
组成本发明的组合物和产物的单种的肽可被直接施用或可通过来自编码序列的表达而被间接施用。例如可提供编码本发明的肽例如上文讨论的肽中的任一种的多核苷酸。因此本发明的肽可从编码其并且能够表达其的多核苷酸产生或以编码其并且能够表达其的多核苷酸的形式递送。本文任何对本发明的肽的使用、递送或施用的引用旨在包括这种肽经由编码其的多核苷酸的表达的间接使用、递送或施用。 
相应地，本发明提供在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的含四种或更多种多核苷酸序列的组合物，所述多核苷酸序列表达时引起在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的组合物的产生，其包含： 
a)选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的四种或更多种多肽；以及任选地 
b)具有下列特征的一种、两种或三种多肽： 
(i)包含与a)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列；并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸。 
本发明还提供在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的产物，其包含： 
a)能够表达选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的不同多肽的四种或更多种多核苷酸，以及任选地 
b)能够表达具有下列特征的不同多肽的一种、两种或三种多核苷酸： 
(i)包含与a)中未选的SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65％序列同一性的序列；并且 
(ii)长度上为9至30个氨基酸， 
其中每种不同的多肽用于在人类中预防或治疗对猫的变态反应中同时、分别或顺序使用。 
术语“核酸分子”和“多核苷酸”本文可交替使用并且是指任何长度的核苷酸(脱氧核糖核酸或核糖核酸)或者其类似物的聚合物的形式。多核苷酸的非限制性实例包括基因、基因片段、信使RNA(mRNA)、cDNA、重组多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。本发明的多核苷酸可以分离或纯化的形式提供。 “编码”所选择的多肽的核酸序列是当处于适当的调节序列的控制下时在体内被转录(DNA的情况下)并翻译(mRNA的情况下)为多肽的核酸分子。编码序列的界限是由5’(氨基)端的起始密码子和3’(羧基)端的翻译终止密码子确定的。为了本发明的目的，这种氨基酸序列可包括但不限于来源于病毒、原核或真核mRNA的cDNA、来自病毒或原核DNA或RNA的基因组序列以及甚至合成的DNA序列。转录终止序列可位于编码序列的3’。 
本发明的多核苷酸可依照本领域熟知的方法被合成，如以Sambrook等人(1989，Molecular Cloning-a laboratory manual(分子克隆-实验室手册)；Cold Spring Harbor Press)中的实例所描述的。 
可以以表达盒的形式提供本发明的多核苷酸分子，所述表达盒包括可操作地连接至插入序列的控制序列，由此允许本发明的肽在靶向的受治疗者中体内表达。通常在适于用作用于核酸免疫的试剂的载体(例如，质粒或重组病毒载体)中依次提供这些表达盒。这一表达盒可被直接施用于宿主受治疗者。可选择地，包含本发明的多核苷酸的载体可被施用于宿主受治疗者。优选地，使用遗传载体制备和/或施用多核苷酸。适合的载体可以是能够携带足够量的遗传信息并且允许本发明的肽的表达的任何载体。 
本发明因此包括包含这种多核苷酸序列的表达载体。因此本发明提供用于在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的载体，其包含编码本发明的不同多肽的四种或更多种多核苷酸序列和任选地编码本文所定义的不同多肽的一种或多种其他多核苷酸序列。载体可包含编码本发明的不同多肽的4、5、6、7、8、9、10、11或12种多核苷酸序列。 
而且，可以理解的是本发明的组合物和产物可包含多肽和多核苷酸的混合物。相应地，本发明提供如本文所定义的组合物或产物，其中代替任何一种多肽的是能够表达所述多肽的多核苷酸。 
在分子生物学领域中常规构建表达载体，并且其可以例如包括质粒DNA和可能是必需的并以正确的方向放置的适当的起始密码子、启动子、增强子和其他元件例如诸如多聚腺苷化信号的使用，以便允许表达本发明的肽。其他适合的载体对本领域的技术人员来说是明显的。作为就这一点 而言另外的实例，我们引用Sambrook等人。 
因此可通过向细胞递送这样的载体并允许来自所述载体的转录的发生来提供本发明的多肽。优选地，在载体中的本发明的多核苷酸或用于本发明的多核苷酸被可操作地连接至能够通过宿主细胞提供编码序列的表达的控制序列，即载体是表达载体。 
“可操作地连接”是指元件的排列，其中所描述的组分被设置以便执行它们通常的功能。因此，当存在适当的酶时，可操作地连接至核酸序列的给定的调控序列，例如启动子，能够影响该序列的表达。只要启动子起到指导序列表达的作用，启动子无需与序列相邻。因此，例如，插入的已经转录但未翻译的序列可存在于启动子序列和核酸序列之间而启动子序列仍被认为与编码序列“可操作地连接”。 
许多表达系统已经在本领域中被描述，其每一种通常由包含可操作地连接至表达控制序列的感兴趣的基因或核苷酸序列的载体组成。这些控制序列包括转录启动子序列和转录起始和终止序列。本发明的载体可以是由复制起点、任选地用于表达所述多核苷酸的启动子和任选地启动子的调节子提供的例如质粒、病毒或噬菌体载体。“质粒”是染色体外遗传元件形式的载体。载体可包含一种或多种可选择的标志物基因，例如细菌质粒的情况下的氨苄青霉素抗性基因或用于真菌载体的抗性基因。载体可体外使用，例如用于DNA或RNA的产生或用于转染或转化宿主细胞，例如，哺乳动物宿主细胞。载体还可适于体内使用，例如允许多肽的体内表达。 
“启动子”是起始并调控编码多肽的多核苷酸的转录的核苷酸序列。启动子可包括可诱导的启动子(其中可操作地连接至启动子的多核苷酸序列的表达是由分析物、辅因子、调控蛋白等诱导的)、可抑制的启动子(其中可操作地连接至启动子的多核苷酸序列的表达被分析物、辅因子、调控蛋白等抑制)和组成型启动子。预期术语“启动子”或“控制元件”包括全长启动子区和这些区的功能(例如控制转录或翻译)片段。 
根据本发明的多核苷酸、表达盒或载体可另外包含信号肽序列。信号肽序列通常以与启动子可操作的连接的形式被插入以便信号肽被表达并促进由也与启动子可操作的连接的编码序列编码的多肽的分泌。 
通常，信号肽序列编码10至30个氨基酸例如15至20个氨基酸的肽。通常氨基酸主要是疏水的。在典型的情况下，信号肽将具有信号肽的增长的多肽链靶向表达细胞的内质网。信号肽在内质网上被切下，允许经由高尔基体的多肽的分泌。因此，本发明的肽可通过来自个体内细胞的表达和来自这些细胞的分泌而被提供给个体。 
可选择地，本发明的多核苷酸可以适当的方式被表达以允许本发明的肽通过抗原呈递细胞表面上的II类MHC分子呈递。例如，本发明的多核苷酸、表达盒或载体可被靶向呈递抗原细胞，或者编码的肽的表达可在这些细胞中优先被激发或诱导。 
可在本发明的肽的产生中体外、离体或体内使用感兴趣的多核苷酸。这种多核苷酸可被施用于或用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应。 
用于基因递送的方法是本领域已知的。参见例如美国专利第5,399,346、5,580,859和5,589,466号。核苷酸分子可被直接引入接受的受治疗者中，例如通过标准的肌肉内或皮内注射、经皮的颗粒递送、吸入、局部地或通过口服、鼻内或粘膜方式的施用。可将分子可选择地离体引入已经从受治疗者中移出的细胞中。例如，本发明的多核苷酸、表达盒或载体可被离体引入个体的APC中。包含感兴趣的核酸分子的细胞被再次引入受治疗者中以便能够产生抗由核酸分子编码的肽的免疫应答。在这种免疫作用中使用的核酸分子本文通常被称为“核酸疫苗”。 
本发明的多肽、多核苷酸、载体或细胞可以以大致上分离的形式存在。它们可与不会影响它们所期望的用途的载体或稀释剂混合并仍被认为是大致上分离的。它们还可以以大致上纯化的形式存在，在这样的情况下它们通常包含制剂的干重的至少90％，例如至少95％、98％或99％的蛋白、多核苷酸、细胞。 
呈递抗原细胞(APC) 
本发明包括产生在它们的表面上呈递本发明的肽的APC的群体的方法的体外使用，其随后可被用于治疗。这种方法可在获得自患者的细胞样品上离体进行。以这种方法产生的APC因此形成可在通过免疫耐受作用治疗或预防猫变态反应中使用的药剂。细胞应当可被个体的免疫系统接受，因为它们来自该个体。因此以这种方法产生的细胞向最初获得它们的个体的递送形成本发明的实施方案。 
制剂和组合物
可单独或以组合形式向个体提供本发明的肽、多核苷酸、载体或细胞。可以以分离的、大致上分离的、纯化的或大致上纯化的形式向个体提供本发明的每种分子或细胞。例如可向个体提供基本上不含其它肽的本发明的肽。 
虽然以未加工的形式提供根据本发明的肽、多核苷酸或组合物是可能的，但优选的是将它们作为药学制剂提供。因此，根据本发明的另外的方面，本发明提供在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的药学制剂，其含有连同一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂一起的本发明的组合物、载体或产物，以及任选的一种或多种其他治疗成分。载体必须是在与制剂的其他成分相容的意义上来说“可接受的”并且不会对其接受者有害。通常用于注射的载体和最终的制剂是灭菌并且无热原的。可使用对比较熟练的技术人员来说很容易获得的标准的药物配制化学和方法学进行包含本发明的肽、多核苷酸或细胞的组合物的配制。 
例如，含有本发明的一种或多种分子或细胞的组合物可与一种或多种药学上可接受的赋形剂或媒介物组合。辅助物质例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质以及类似物可存在于赋形剂或媒介物中。这些赋形剂、媒介物和辅助物质通常是不会在接受组合物的个体中诱导免疫应答并且可被施用而不具有过度的毒性的药剂。药学上可接受的赋形剂包括但不限于液体例如水、盐水、聚乙二醇、透明质酸、甘油和乙醇。其中还可包括药学上可接受的盐，例如无机酸盐诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及类似物；以及有机酸的盐例如醋酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸酸盐以及类似物。药学上可接受的赋形剂、媒介物和辅助物质的详尽的讨论可在Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)(Mack Pub.Co.，NJ. 1991)中获得。
可以以适于推注施用或连续施用的形式制备、包装或销售这种组合物。可以以单位剂型，例如在安瓿中或在含有防腐剂的多剂量容器中制备、包装或销售可注射的组合物。组合物包括但不限于油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液、乳液、糊剂和可植入的持续释放或可生物降解的制剂。这种组合物可另外包括一种或多种另外的成分，另外的成分包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的组合物的一个实施方案中，以在肠胃外施用重新形成的组合物之前与适合的媒介物(例如灭菌无热原水)重新形成的干燥(例如粉末或小颗粒)的形式提供活性成分。可以以无菌可注射水性或油性悬浮液或溶液的形式制备、包装或销售药物组合物。这一悬浮液或溶液可根据本领域已知的方法配制并且可包括除了活性成分之外的另外的成分，例如本文描述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。例如，这种无菌可注射的制剂可使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂例如水或1，3-丁二醇来制备。其他可接受的稀释剂或溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗的氯化钠溶液和混合的油例如合成的单甘油酯或双甘油酯。其他可肠胃外施用的有用的组合物包括含有微晶形式的、脂质体制剂中的或作为生物可降解的聚合物系统的组分的活性成分的那些。用于持续释放或植入的组合物可包括药学上可接受的聚合的或疏水的物质例如乳液、离子交换树脂、微溶聚合物或微溶的盐。 
可选择地，可用颗粒载体将本发明的肽或多核苷酸装入胶囊、吸附或结合。适合的颗粒载体包括衍生自聚甲基丙烯酸甲酯聚合物的那些，以及衍生自聚(丙交脂)和聚(丙交脂-共-乙交酯)的PLG微粒。参见Jeffery等人(1993)Pharm.Res.10：362-368。其他颗粒系统和聚合物也可被使用，例如聚合物，诸如聚赖氨酸、聚精氨酸、聚鸟氨酸、精胺、亚精胺、以及这些分子的轭合物。
本文提及的肽、多核苷酸或细胞中的任一种的制剂将取决于例如物质的性质和递送的方法的因素。任何一种这样的物质可以以多种剂型被施用。其可被口服地(例如作为片剂、含片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉末或小颗粒)、肠胃外地、皮下地、通过吸入、皮内地、静脉内地、肌肉内地、胸骨内地、经皮地、或通过输注技术施用。物质还可被作为栓剂施用。医生能够决定对于每个特定的个体来说所需要的施用途径。 
本发明的制剂的组合物将包含有效但不导致不良作用的适合的浓度的每种肽/多核苷酸/细胞。通常，组合物中每种肽的浓度将在0.03至200nmol/ml的范围内。更优选地，在0.3至200nmol/ml、3至180nmol/ml、5至75nmol/ml或10至50nmol/ml的范围内。组合物或制剂将具有高于95％或98％的纯度或至少99％的纯度。 
治疗的方法和有待治疗的个体 
本发明涉及能够使人类个体对Fel d1变应原脱敏或免疫耐受并且因此被用于预防或治疗猫变态反应的肽、多核苷酸、载体和细胞。本发明提供用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应的组合物、产物、载体和制剂。本发明还提供使猫变应性的个体免疫耐受或脱敏的方法，其包括单独或组合施用如上文所述的本发明的多肽/多核苷酸/细胞。 
有待治疗或被提供本发明的组合物或制剂的个体优选地是人类。应当理解的是有待治疗的个体可以是已知对Fel d1变态反应敏感的、处于敏感的风险中或疑为敏感的。可使用本领域中熟知的和如本文所描述的技术检测个体的敏感性。可选择地，个体可具有对猫的变态反应的家族史。检测个体对Fel d1的敏感性不是必须的，因为个体接近猫时可表现出变态反应的症状。接近意指离猫10米或更近、5米或更近、2米或更近、1米或更近或者0米。变态反应的症状可包括眼部发痒、流鼻涕、呼吸困难、皮肤红痒或发疹。 
有待治疗的个体可以是任何年龄的。然而，优选地，个体可以是1至90、5至60、10至40或更优选地18至35年龄组。可能从治疗中获益的个体的组是例如猫主人、兽医或其他猫驯化者。 
优选地，有待治疗的个体来自具有在白种人群体的代表性的频率范围内的MHC等位基因频率的群体。11个常见的DRB1等位基因家族的参考群体等位基因频率示于实施例2的表3中(数据来自HLA Facts Book(HLA概况)，Parham and Barber)。参考频率可通过分析报道频率的多种研究来 获得并且所显示的数字是平均值。因此优选地，有待治疗的个体是来自具有对于表3提到的等位基因来说(例如对于等位基因中的至少1、2、3、4、5种或全部来说)与参考群体相当的MHC等位基因频率(例如在这些数字加上或减去1％、2％、3％、5％、10％、15％或20％的范围内)的群体。 
优选地，个体来自其中下列DRB1等位基因的等位基因频率是如下的群体： 
4-至少9％ 
7-至少10％ 
11-至少8％。 
个体可已经患有对猫的变态反应至少2周、1个月、6个月、1年或5年。个体可患有由变态反应导致的发疹、鼻塞、流鼻涕和/或咳嗽。个体可以已经或可以没有被施用治疗猫变态反应的其他组合物/化合物。个体可生活在包括每人类居住者至少0.1只猫的群体中。 
诊断方法 
本发明还提供检测个体是否具有病症或处于发展病症的风险中的方法，其中病症包括对猫变应原应答的变应性症状。 
个体通常是哺乳动物，优选地是人类。在本发明的方法中待测试的个体优选地在1岁和80岁的年龄之间、更优选地在1岁和60、50、40、30或20岁的年龄之间，并且最优选地在1岁和16岁的年龄之间。 
个体可被诊断或被怀疑为患有被归类为原发性的或非变应性的病症例如原发性的或非变应性的哮喘。个体可能缺少对猫变应原应答的可检测的抗体，尤其是对猫变应原应答的IgE。适于检测IgE的测定包括PharmaciaTM CAP系统。使用这一系统，个体通常得分0或0/1。 
在缺少可确认的触发的情况下，个体可以是患有或被诊断为患有通常与变态反应有关的症状例如眼部发痒、流鼻涕、呼吸困难、皮肤红痒或发疹的患者。这些症状的第一次出现或诊断可发生在个体大于15岁的年龄时。例如当通常与变态反应相关的变态反应的症状第一次出现或诊断时， 个体可以是至少15、16、17、18、20、22、24、26、28或30岁的年龄。 
本发明的方法涉及确定个体是否具有对猫变应原，尤其是主要的猫变应原Fel d1的T细胞应答。这种T细胞应答将存在于猫变应性个体中。不希望被任何假设所束缚，发明人认为原发性的或非变应性的病症事实上也可由T细胞驱动的、IgE非依赖性的免疫应答导致。相应地，这些病症也具有变应原触发，但是其没有产生变应原特异性的IgE。在一定程度上，其产生可由T细胞增殖或细胞因子释放表征的T细胞应答。例如，所释放的细胞因子可包括IL-5，其与嗜酸性粒细胞的募集有关。相应地，T细胞应答可驱动个体中嗜酸性粒细胞的反应的诱导。 
个体是否具有对Fel d1的T细胞应答是通过测量个体是否具有对根据本发明的肽或肽的组合的T细胞应答来测定的。个体是否具有这样的应答可通过任何适合的方法来测定，适合的方法通常是可被用来检测经历变应原的T细胞的增殖或由经历变应原的T细胞释放的细胞因子的存在的方法。患者T细胞对本发明的肽或组合的正应答表明患者在对变应原的应答中具有或更可能发展变态反应样症状。负应答表明患者具有不是由猫变应原导致的变态反应样症状，或在对猫变应原的应答中至少不太可能发展变态反应样症状。 
在本发明的方法中对肽或组合应答的T细胞通常是在体内已经被对变应原预敏化的T细胞。这些经历过变应原的T细胞通常存在于个体的外周血中，即在个体中的外周血单核细胞(PBMC)的群体中。T细胞可以是CD4和/或CD8T细胞。 
在本发明的方法中，T细胞可在来自个体的样品中与本发明的肽或组合体外或体内，优选地体外接触。 
通常，在本发明的方法中被接触的T细胞取自个体血液样品中，尽管含有T细胞的其他类型的样品也可被使用。样品可被直接加至测定或可首先被处理。通常处理可包括标准技术例如梯度离心以分离T细胞，并以适当的体积重悬。可选择地，处理可包括样品的稀释，例如用水、缓冲液或介质。样品可被稀释1.5至100倍，例如2至50或5至10倍。 
处理可包括样品组分的分离。通常将单核细胞(MC)从样品中分离。MC将包含T细胞和呈递抗原细胞(APC)。因此，在本发明的方法中，在分离的MC中存在的APC可将肽呈递至T细胞。在另一个实施方案中，只有T细胞，例如只有CD4T细胞可被从样品纯化。可使用本领域已知的技术从样品分离PBMC、MC和T细胞。 
优选地，用于测定的T细胞是未处理的或稀释的样品的形式、是新鲜分离的T细胞(例如以新鲜分离的MC或PBMC的形式)(其被直接离体使用，即它们在被用于本发明的方法前未被培养)或是解冻的细胞(其之前被冷冻)。然而，T细胞可在使用前被培养，例如在变应原以及通常外源生长促进细胞因子存在的情况下。在培养期间，变应原通常被呈递在APC的，例如用于本发明的方法的APC的表面上。T细胞的预培养可导致本发明的方法的敏感性的增加。因此，T细胞可被转化为细胞系，例如短期细胞系。 
在本发明的方法中通常存在的APC可来自与T细胞相同的个体或来自不同的个体。APC可以是天然存在的APC或人工的APC。APC是能够将抗原呈递至T细胞的细胞。通常是B细胞、树突细胞或巨噬细胞。其通常可从与T细胞相同的样品分离并且通常与T细胞共纯化。因此APC可存在于MC或PBMC中。APC通常是新鲜分离的离体细胞或培养的细胞。其可以是细胞系例如短期的或永生化细胞系的形式。APC可在其表面上表达空的II类MHC分子。 
在一个实施方案中，本发明的肽或组合被直接加至含有T细胞和APC的测定中。如上文讨论的，这样的测定中的T细胞和APC可以是MC的形式。 
在一个实施方案中，在缺少T细胞的情况下对APC提供肽或肽的组合。之后APC通常在被允许在其表面上呈递变应原之后被提供给T细胞。肽或肽的组合可被接纳在APC的内部并且被呈递或简单的接纳在表面上而不进入APC的内部。 
通常105至107，优选地2.5×105至106的PBMC被加至每个测定。在其中肽或肽的组合被直接加至测定的情况下，其通常作为具有从10-1至 103μg/ml，优选地0.5至50μg/ml或1至10μg/ml的浓度的肽被加入。 
通常T细胞与肽或组合孵育的时间的长度是对于效应T细胞来说从4至24小时(优选地5至18小时)或对于中央记忆细胞来说24小时。当使用离体PBMC时，已发现5.0×106的PBMC可在10μg/ml的肽中于37℃孵育5小时。 
可通过任何适合的方法来测量孵育的T细胞的增殖。例如通过在用肽孵育之后流式细胞测量掺入的荧光化合物CFSE或通过在用肽孵育后测量掺入的放射性标记的化合物3H-胸腺嘧啶核苷。后一种方法的典型的实例如下： 
将100μl适当的肽浓缩物分配至96孔板的适当的孔中。之后将板放置在加湿的5％CO2的设置在37℃的培养箱中最多4小时。于室温将如本领域的标准所分离的PBMC在完全培养基中制备为2×106细胞/ml的浓度。之后将100μl细胞溶液分配至含有抗原/肽的96孔板的每个孔中。之后将板孵育6至8天。通过向每个孔加入10μl的氚化胸腺嘧啶核苷储液(1.85MBq/ml于无血清的RPMI培养基中)用氚化胸腺嘧啶核苷溶液使培养物产生脉冲。之后将板返回培养箱8至16小时之间。之后将培养物收集在滤垫上并且用适合的β闪烁计数器对干燥的滤垫计数。将来自含有肽的孔的计数与只含有培养基的孔进行统计比较(每组12孔)。只有培养基的孔和肽刺激的孔之间的统计学上显著的差异被认为是肽或肽的组合对PBMC的正刺激。 
如上文描述的，细胞因子释放可通过任何适合的方法例如ELISA测定来测量。这些方法是本领域中熟知的。 
组合免疫治疗 
因为许多个体是变应性的或可能需要对一些多肽抗原脱敏，本发明还提供了使对多种抗原变应性的个体脱敏的方法。在个体中诱导对第一种多肽抗原或变应原的“耐受性”可在个体中产生“致耐受性的(tolergeneic)环境”，其中对其他抗原的不适当的免疫应答可被下调以便提供对其他抗原的耐受性。 
这一发现意味着对多种变应原变应性的个体可在显著减少的时间段内被治疗，并且对某些变应原(例如花生)严重变应性但对其他变应原(例如猫皮屑)较温和地变应性的个体可从治疗中受益，其中建立了对较温和的变应原的耐受性，并且之后这一致耐受性环境被用于提供对其他更极端的变应原的耐受性。此外，另外对不相关的抗原或变应原敏感的(或不同方式免疫的)患有自身免疫病症的个体可从治疗方案中受益，其中首先建立对不相关的抗原或变应原的耐受性，而之后这一致耐受性环境被用于对与自身免疫病症相关的自身抗原提供耐受性。 
因此，提供了一种用于使猫变应性个体对Fel d1抗原和一种或多种另外的不同的多肽抗原脱敏的方法。方法需要，在第一步，对个体施用如本文描述的根据本发明的组合物/产物/制剂(第一组合物)，并且其中施用以足以产生抗Fel d1抗原的低应答状态的方式进行。一旦建立了对Fel d1抗原的低应答状态或至少发生向脱敏的转变，方法需要施用含有个体有待对其敏化的第二种不同的多肽抗原的第二组合物。第二组合物的施用以便于利用通过使用第一组合物建立的致耐受性环境的方法进行，此时建立对第二种不同的多肽抗原的耐受性是可能的。第二组合物可与第一种第一组合物或Fel d1的更大的片段共施用。“共施用”意指同时(simultaneous)或同时发生(concurrent)的施用，例如当两种存在于同一组合物中或在分离的组合物中在几乎相同的时间但是在不同的部位施用，以及在分离的组合物中在不同时间的多肽抗原的递送。例如，第二组合物可在第一组合物(或Fel d1的更大的片段)递送之前或随后在相同或不同的部位被递送。递送之间的计时可在相隔约几秒至相隔约几分钟、相隔几小时甚至相隔几天的范围内。而且，可使用不同的递送方法。 
第二多肽抗原优选地是与Fel d1变应原不同的变应原。当然可使用已知的方法获得和/或生产在本发明的方法中使用的适合的变应原。适合的变应原的种类包括但不限于花粉、除了猫皮屑的动物皮屑、草、霉菌、灰尘、抗生素、蜇刺昆虫的毒液和各种环境的(包括化学的和金属的)、药物和食物变应原。常见的树木变应原包括来自棉白杨、白杨、白蜡树、桦树、枫树、栎树、榆树、山胡桃树和美洲山核桃树的花粉；常见的植物变应原 包括来自艾属、豚草属、长叶车前草(English plantain)、酸模和藜的那些；植物接触性变应原包括来自毒栎、毒葛和荨麻的那些；常见的草变应原包括黑麦草、猫尾草、蒋森草、百慕大草、羊茅和兰草变应原；常见的变应原还可从霉菌或真菌例如链格孢属、镰刀菌属、着色芽生菌属、曲霉菌属、小多孢菌属、毛霉菌属和嗜热放线菌属获得；表皮变应原可从室内灰尘或有机灰尘(通常是真菌起源的)、从节肢动物例如屋尘螨(屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus))或从动物源例如羽毛和犬皮屑获得；常见的食物变应原包括牛奶和奶酪(乳品)、蛋、小麦、坚果(例如花生)、海鲜(例如贝类)、豌豆、豆类和麸质变应原；常见的环境变应原包括金属的(镍和金)、化学的(甲醛、三硝基苯酚和松节油)、乳胶、橡胶、纤维(棉花或木材)、粗麻布、染发剂、化妆品、洗涤剂和香料变应原；常见的药物变应原包括局部麻醉和水杨酸盐变应原；抗生素变应原包括青霉素、四环素、磺胺药物变应原；以及常见的昆虫变应原包括蜜蜂、黄蜂和蚂蚁毒液以及蟑螂萼变应原。特别良好表征的变应原包括但不限于Der p I变应原的主要和隐蔽表位(Hoyne等人，(1994)Immunology 83：190-195)、蜜蜂毒液磷脂酶A2(PLA)(Akdis等人(1996)J.Clin.Invest.98：1676-1683)、桦树花粉变应原Bet v 1(Bauer等人(1997)Clin.Exp.Immunol.107：536-541)以及多表位重组草变应原rKBG8.3(Cao等人(1997)Immunology 90：46-51)。这些和其他适合的变应原是可商业获得的和/或可按照已知技术容易地制备为提取物。 
优选地，第二多肽变应原选自下文变应原序列和数据库登录号(NCBIEntrez登录号)的列表。NCBI是美国国家生物技术信息中心并且是美国国家卫生研究院的一个部门。进入可查询的数据库的NCBI站点是www.ncbi.nlm.nih.gov/。变应原序列和数据库登录号(NCBI Entrez登录号)： 
屋尘螨
屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus) 
Der p1 
MKIVLAIASLLALSAVYARPSSIKTFEEYKKAFNKSYATFEDEEAARKNFLES 
VKYVQSNGGAINHLSDLSLDEFKNRFLMSAEAFEHLKTQFDLNAETNACSIN 
GNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLA 
EQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQR 
FGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKLDAFRHYDGRTIIQRDNGY 
QPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEE 
YPYVVIL 
Der p2 
MMYKILCLSLLVAAVARDQVDVKDCANHEIKKVLVPGCHGSEPCIIHRGKPF 
QLEAVFEANQNTKTAKIEIKASIDGLEVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYD 
IKYTWNVPKIAPKSENVVVTVKVMGDDGVLACAIATHAKIRD 
Der p3 
MIIYNILIVLLLAINTLANPILPASPNATIVGGEKALAGECPYQISLQSSSHFCGG 
TILDEYWILTAAHCVAGQTASKLSIRYNSLKHSLGGEKISVAKIFAHEKYDSY 
QIDNDIALIKLKSPMKLNQKNAKAVGLPAKGSDVKVGDQVRVSGWGYLEEG 
SYSLPSELRRVDIAVVSRKECNELYSKANAEVTDNMICGGDVANGGKDSCQ 
GDSGGPVVDVKNNQVVGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFIDWIESKRSQ 
Der p4 
KYXNPHFIGXRSVITXLME 
Der p5 
MKFIIAFFVATLAVMTVSGEDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQ 
EQINHFEEKPTKEMKDKIVAEMDTIIAMIDGVRGVLDRLMQRKDLDIFEQYN 
LEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV 
Der p6 
AIGXQPAAEAEAPFQISLMK 
Der p7 
MMKLLLIAAAAFVAVSADPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDPMKVP 
DHSDKFERHIGIIDLKEGLDMRNIQVRGLKQMKRVGDANVKSEDGVVKAHL 
LVGVHDDVVSMEYDLAYKLGDLHPNTHVISDIQDFVVELSLEVSEEGNMTLT 
SFEVRQFANVVNHIGGLSILDPIFAVLSDVLTAIFQDTVRAEMTKVLAPAFKK 
ELERNNQ 
Der p9 
IVGGSNASPGDAVYQIAL 
粉尘螨(Dermatophagoides farinae) 
Der f1 
MKFVLAIASLLVLTVYARPASIKTFEFKKAFNKNYATVEEEEVARKNFLESLK 
YVEANKGAINHLSDLSLDEFKNRYLMSAEAFEQLKTQFDLNAETSACRINSV 
NVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQ 
ELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVEERSYPYVAREQRCRRPNSQHYG 
ISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGKDLRAFQHYDGRTIIQHDNGYQP 
NYHAVNIVGYGSTQGDDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQY 
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Der f2 
MISKILCLSLLVAAVVADQVDVKDCANNEIKKVMVDGCHGSDPCIIHRGKPF 
TLEALFDANQNTKTAKIEIKASLDGLEIDVPGIDTNACHFMKCPLVKGQQYDI 
KYTWNVPKIAPKSENVVVTVKLIGDNGVLACAIATHGKIRD 
Der f3 
MMILTIVVLLAANILATPILPSSPNATIVGGVKAQAGDCPYQISLQSSSHFCGG 
SILDEYWILTAACVNGQSAKKLSIRYNTLKHASGGEKIQVAEIYQHENYDS 
MTIDNDVALIKLKTPMTLDQTNAKPVPLPAQGSDVKVGDKIRVSGWGYLQE 
GSYSLPSELQRVDIDVVSREQCDQLYSKAGADVSENMICGGDVANGGVDSC 
QGDSGGPVVDVATKQIVGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFVDWIESKRS 
Q 
Der f4 
AVGGQDADLAEAPFQISLLK 
Der f7 
MMKFLLIAAVAFVAVSADPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDPMKVPDH 
ADKFERHVGIVDFKGELAMRNIEARGLKQMKRQGDANVKGEEGIVKAHLLI 
GVHDDIVSMEYDLAYKLGDLHPTTHVISDIQDFVVALSLEISDEGNITMTSFE 
VRQFANVVNHIGGLSILDPIFGVLSDVLTAIFQDTVRKEMTKVLAPAFKRELE 
KN 
另外的螨变应原序列(NCBI entrez登录)： 
1170095；1359436；2440053；666007；487661；1545803；84702；84699；625532；404370；1091577；1460058；7413；9072；387592。 
猫
猫属序列(NCBI entrez登录)： 
539716；539715；423193；423192；423191；423190；1364213；1364212；395407；163827；163823；163825；1169665；232086；1169666。 
乳胶
三叶胶树序列： 
Hev b1 
MAEDEDNQQGQGEGLKYLGFVQDAATYAVTTFSNVYLFAKDKSGPLQPGV 
DIIEGPVKNVAVPLYNRFSYIPNGALKFVDSTVVASVTIIDRSLPPIVKDASIQV 
VSAIRAAPEAARSLASSLPGQTKILAKVFYGEN 
Hev b3 
MAEEVEEERLKYLDFVRAAGVYAVDSFSTLYLYAKDISGPLKPGVDTIENVV 
KTVVTPVYYIPLEAVKFVDKTVDVSVTSLDGVVPPVIKQVSAQTYSVAQDAP 
RIVLDVASSVFNTGVQEGAKALYANLEPKAEQYAVITWRALNKLPLVPQVA 
NVVVPTAVYFSEKYNDVVRGTTEQGYRVSSYLPLLPTEKITKVFGDEAS 
另外的三叶胶树序列(NCBI entrez登录)： 
3319923；3319921；3087805；1493836；1480457；1223884；3452147；3451147；1916805；232267；123335；2501578；3319662；3288200；1942537；2392631；2392630；1421554；1311006；494093；3183706；3172534；283243；1170248；1708278；1706547；464775；266892；231586；123337；116359；123062；2213877；542013；2144920；1070656；2129914；2129913；2129912；100135；82026；1076559；82028；82027；282933；280399；100138；1086972；108697；1086976；1086978；1086978；1086976；1086974；1086972；913758；913757；913756；234388；1092500；228691；1177405；18839；18837；18835；18833；18831；1209317；1184668；168217；168215；168213；168211；168209；348137。 
黑麦草
黑麦草属序列： 
126385 Lol p1 
MASSSSVLLVVALFAVFLGSAHGIAKVPPGPNITAEYGDKWLDAKSTWYGK 
PTGAGPKDNGGACGYKNVDKAPFNGMTGCGNTPIFKDGRGCGSCFEIKCTK 
PESCSGEAVTVTITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGSMAKKGEEQNVRSAGELEL 
QFRRVKCKYPDDTKPTFHVEKASNPNYLAILVKYVDGDGDVVAVDIKEKGK 
DKWIELKESWGAVWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKSEFEDVIPEGWKADT 
SYSAK 
126386 Lol p2a 
AAPVEFTVEKGSDEKNLALSIKYNKEGDSMAEVELKEHGSNEWLALKKNGD 
GVWEIKSDKPLKGPFNFRFVSEKGMRNVFDDVVPADFKVGTTYKPE 
126387 Lol p3 
TKVDLTVEKGSDAKTLVLNIKYTRPGDTLAEVELRQHGSEEWEPMTKKGNL 
WEVKSAKPLTGPMNFRFLSKGGMKNVFDEVIPTAFTVGKTYTPEYN 
2498581 Lol p5a 
MAVQKYFVALFLRRGPRGGPGRSYAADAGYTPAAAATPATPAATPAGGWR 
EGDDRRAEAAGGRQRLASRQPWPPLPTPLRRTSSRSSRPPSPSPPRASSPTSA 
AKAPGLIPKLDTAYDVAYKAAEAHPRGQVRRLRHCPHRSLRVIAGALEVHA 
VKPATEEVLAAKIPTGELQIVDKIDAAFKIAATAANAAPTNDKFTVFESAFNK 
ALNECTGGAMRPTSSSPPSRPRSSRPTPPPSPAAPEVKYAVFEAALTKAITAM 
TQAQKAGKPAAAAATAAATVATAAATAAAVLPPPLLVVQSLISLLIYY 
2498582 Lol p5b 
MAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATP 
ATPATPAAVPSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAVVPPADKYKTFVETF 
GTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDA 
YVATLTEALRVIAGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQLIDKVDAAYRTA 
ATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAA 
KQATAPEVKYTVSETALKKAVTAMSEAEKEATPAAAATATPTPAAATATAT 
PAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGYKV 
455288 Lol p同种型9 
MAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATP 
ATPATPAAVPSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAVVPPADKYKTFVETF 
GTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDA 
YVATLTEALRVIAGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQLIDKVDAAYRTA 
ATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAA 
KQATAPEVKYTVSETALKKAVTAMSEAEKEATPAAAATATPTPAAATATAT 
PAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGYKV 
1582249 Lol p11 
DKGPGFVVTGRVYCDPCRAGFETNVSHNVEGATVAVDCRPFDGGESKLKAE 
ATTDKDGWYKIEIDQDHQEEICEVVLAKSPDKSCSEIEEFRDRARVPLTSNXG 
IKQQGIRYANPIAFFRKEPLKECGGILQAY 
另外的黑麦草属序列(NCBI entrez登录)： 
135480；417103；687261；687259；1771355；2388662；631955；542131；542130；542129；100636；626029；542132；320616；320615；320614；100638；100634；82450；626028；100639；283345；542133；1771353；1763163；1040877；1040875；250525；551047；515377；510911；939932；439950；2718；168316；168314；485371；2388664；2832717；2828273；548867. 
橄榄树
橄榄树序列 
416610 Ole e1 
EDIPQPPVSQFHIQGQVYCDTCRAGFITELSEFIPGASLRLQCKDKENGDVTFT 
EVGYTRAEGLYSMLVERDHKNEFCEITLISSGRKDCNEIPTEGWAKPSLKFKL 
NTVNGTTRTVNPLGFFKKEALPKCAQVYNKLGMYPPNM 
墙草属
墙草属序列： 
2497750 Parj P2 
MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAEPAPAPAPGEEACGKVVQDIMPCLHFVKG 
EEKEPSKECCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVRATKGISGIKNELVAEVPK 
KCDIKTTLPPITADFDCSKIQSTIFRGYY 
1352506 Parj P5 
MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAM 
KTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRH 
GPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA 
1532056 Parj P8 
MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAELASAPAPGEGPCGKVVHHIMPCLKFVKG 
EEKEPSKSCCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVAATKGISGIKNELVAEVPK 
KCGITTTLPPITADFDCSKIESTIFRGYY 
1532058 Parj P9 
MRTVSAPSAVALVVIVAAGLAWTSLASVAPPAPAPGSEETCGTVVRALMPC 
LPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGLQRVHACECIQTAMKTYSDIDGK 
LVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPA 
HKARLERPQIRVPPPAPEKA 
2497749 Parj P9 
MRTVSARSSVALVVIVAAVLVWTSSASVAPAPAPGSEETCGTVVGALMPCL 
PFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKL 
VSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVLHYKGN 
1086003 Parj 1 
MVRALMPCLPFVQGEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAM 
KTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRH 
GPVTGPSRSRPPTKHGWRDPRLEFRPPHRKKPNPAFSTLG 
另外的墙草属序列(NCBI entrez登录)： 
543659；1836011；1836010；1311513；1311512；1311511；1311510；1311509；240971。 
猫尾草
梯牧草属序列： 
Phl p1 
MASSSSVLLVVVLFAVFLGSAYGIPKVPPGPNITATYGDKWLDAKSTWYGKP 
TGAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPE 
ACSGEPVVVHITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGAMAKKGDEQKLRSAGELELQ 
FRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKYVNGDGDVVAVDIKEKGK 
DKWIELKESWGAIWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKTEAEDVIPEGWKADT 
SYESK 
Phl p1 
MASSSSVLLVVALFAVFLGSAHGIPKVPPGPNITATYGDKWLDAKSTWYGKP 
TAAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPE 
ACSGEPVVVHITDDNEEPIAAYHFDLSGIAFGSMAKKGDEQKLRSAGEVEIQF 
RRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKFSGDGDVVAVDIKEKGKDK 
WIALKESWGAIWRIDTPEVLKGPFTVRYTTEGGTKARAKDVIPEGWKADTA 
YESK 
Phl p2 
MSMASSSSSSLLAMAVLAALFAGAWCVPKVTFTVEKGSNEKHLAVLVKYE 
GDTMAEVELREHGSDEWVAMTKGEGGVWTFDSEEPLQGPFNFRFLTEKGM 
KNVFDDVVPEKYTIGATYAPEE 
Phl p5 
ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPA 
DKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYK 
TAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIE 
KVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEA 
AVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATAT 
AAVGAATGAATAATGGYKV 
Phl p5 
ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPA 
DKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYK 
TAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIE 
KVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEA 
AVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPATEATATAT 
AAVGAATGAATAATGGYKV 
Phl p5b 
AAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDIN 
VGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVA 
YKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGE 
LQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIP 
SLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAA 
TVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5a 
ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKA 
ALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSK 
LDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEV 
KVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGA 
YESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAA 
KPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV 
Phl p5 
MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQ 
KLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLD 
AAYSVSYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGM 
AKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTY 
KCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPAT 
GAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5 
MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQ 
KLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLD 
AAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEDPAW 
PKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAY 
DTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQ 
PATGAATVAAGAATTATGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5 
ADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKF 
KTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVAS 
LTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAAT 
APADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAP 
QVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAA 
TVAAGGYKV 
Phl p5 
SVKRSNGSAEVHRGAVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKA 
TTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGL 
VPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVT 
EEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKES 
TGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEV 
QKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5 
MAVHQYTVALFLAVALVAGPAGSYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP 
AGAEPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVPPADKYRTFVATFGAAS 
NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY 
VATVSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA 
NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT 
APEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAAAAATATATAAVGAATGAATA 
ATGGYKV 
Phl p5 
ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPA 
DKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYK 
TAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIE 
KVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEA 
AVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATAT 
AAVGAATGAATAATGGYKV 
Phl p5b 
AAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDIN 
VGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVA 
YKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGE 
LQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIP 
SLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAA 
TVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5a 
ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKA 
ALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSK 
LDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEV 
KVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGA 
YESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAA 
KPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV 
Phl p5 
AVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGF 
KAAVAAAASVPAGDKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKA 
AVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQII 
DKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLE 
AAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVA 
AGAATTATGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5b 
MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVG 
FKAAVAARQRPAADKFKTFEAASPRHPRPLRQGAGLVPKLDAAYSVAYKAA 
VGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIID 
KIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEA 
AVKQAYAATVAAAAEVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAA 
GAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5 
MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP 
AEAAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS 
NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY 
VATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA 
NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT 
APEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAAAAATATATAAVGAATGAATA 
ATGGYKV 
Phl p5 
EAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALARRLQPADKYRTFVATFGPASNKAFA 
EGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLS 
EALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAAELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPA 
NDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKY 
TVFETALKKAITAMSEAQKAAKPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV 
Phl p5 
MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP 
AEAAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS 
NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY 
VATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA 
NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT 
APEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATA 
ATGGYKV 
Phl p5b 
MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVG 
FKAAVAARQRPAADKFKTFEAASPRHPRPLRQGAGLVPKLDAAYSVAYKAA 
VGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIID 
KIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEA 
AVKQAYAATVAAAAEVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAA 
GAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 
Phl p5a 
ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKA 
ALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSK 
LDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEV 
KVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGA 
YESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAA 
KPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV 
Phl p5 
MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP 
AEAAPAGKATTEEQKLIEKINAFGKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS 
NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY 
VATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA 
NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT 
APEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATA 
ATGGYKV 
Phl p6 
MAAHKFMVAMFLAVAVVLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDVNASFRAAM 
ATTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNA 
ADHAAPEDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHAVKPGA 
Phl p6 
SKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHA 
VKPGA 
Phl p6 
ADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPE 
DKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHAVKPGA 
Phl p6 
TEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVPPADKYKTLEAAFTVSSKRNLADAVSK 
APQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHAVK 
PGA 
Phl p6 
MAAHKFMVAMFLAVAVVLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDINASFRAAMA 
TTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAA 
DHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHAVKPGA 
Phl p6 
MVAMFLAVAVVLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVP 
PADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDKVYNAAYNAADHAAP 
EDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHAVKPGA 
Phl p7 
MADDMERIFKRFDTNGDGKISLSELTDALRTLGSTSADEVQRMMAEIDTDGD 
GFIDFNEFISFCNANPGLMKDVAKVF 
Phl p11 
MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIM 
KDFDEPGHLAPTGMFVAGAKYMVIQGEPGRVIRGKKGAGGITIKKTGQALV 
VGIYDEPMTPGQCNMVVERLGDYLVEQGM 
另外的梯牧草属序列(NCBI entrez登录)： 
458878；548863；2529314；2529308；2415702；2415700；2415698；542168；542167；626037；542169；541814；542171；253337；253336；453976；439960。 
黄蜂(以及相关的)
黄胡蜂属序列：
465054变应原VES V5 
MEISGLVYLIIIVTIIDLPYGKANNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKV 
VVSYGLTKQEKQDILKEHNDFRQKIARGLETRGNPGPQPPAKNMKNLVWND 
ELAYVAQVWANQCQYGHDTCRDVAKYQVGQNVALTGSTAAKYDDPVKLV 
KMWEDEVKDYNPKKKFSGNDFLKTGHYTQMVWANTKEVGCGSIKYIQEK 
WHKHYLVCNYGPSGNFMNEELYQTK 
1709545变应原VES M1 
GPKCPFNSDTVSIIIETRENRNRDLYTLQTLQNHPEFKKKTITRPVVFITHGFTS 
SASEKNFINLAKALVDKDNYMVISIDWQTAACTNEYPGLKYAYYPTAASNT 
RLVGQYIATITQKLVKDYKISMANIRLIGHSLGAHVSGFAGKRVQELKLGKYS 
EIIGLDPARPSFDSNHCSERLCETDAEYVQIIHTSNYLGTEKILGTVDFYMNNG 
KNNPGCGRFFSEVCSHTRAVIYMAECIKHECCLIGIPRSKSSQPISRCTKQECV 
CVGLNAKKYPSRGSFYVPVESTAPFCNNKGKII 
1352699变应原VES V1 
MEENMNLKYLLLFVYFVQVLNCCYGHGDPLSYELDRGPKCPFNSDTVSIIIET 
RENRNRDLYTLQTLQNHPEFKKKTITRPVVFITHGFTSSASETNFINLAKALVD 
KDNYMVISIDWQTAACTNEAAGLKYLYYPTAARNTRLVGQYIATITQKLVK 
HYKISMANIRLIGHSLGAHASGFAGKKVQELKLGKYSEIIGLDPARPSFDSNH 
CSERLCETDAEYVQIIHTSNYLGTEKTLGTVDFYMNNGKNQPGCGRFFSEVC 
SHSRAVIYMAECIKHECCLIGIPKSKSSQPISSCTKQECVCVGLNAKKYPSRGS 
FYVPVESTAPFCNNKGKII 
1346323变应原VES V2 
SERPKRVFNIYWNVPTFMCHQYDLYFDEVTNFNIKRNSKDDFQGDKIAIFYD 
PGEFPALLSLKDGKYKKRNGGVPQEGNITIHLQKFIENLDKIYPNRNFSGIGVI 
DFERWRPIFRQNWGNMKIHKNFSIDLVRNEHPTWNKKMIELEASKRFEKYA 
RFFMEETLKLAKKTRKQADWGYYGYPYCFNMSPNNLVPECDVTAMHENDK 
MSWLFNNQNVLLPSVYVRQELTPDQRIGLVQGRVKEAVRISNNLKHSPKVLS 
YWWYVYQDETNTFLTETDVKKTFQEIVINGGDGIIIWGSSSDVNSLSKCKRL 
QDYLLTVLGPIAINVTEAVN 
549194变应原VES VI 
5KVNYCKIKCLKGGVHTACKYGTSTKPNCGKMVVKAYGLTEAEKQEILKVH 
NDFRQKVAKGLETRGNPGPQPPAKNMNNLVWNDELANIAQVWASQCNYG 
HDTCKDTEKYPVGQNIAKRSTTAALFDSPGKLVKMWENEVKDFNPNIEWSK 
NNLKKTGHYTQMVWAKTKEIGCGSVKYVKDEWYTHYLVCNYGPSGNFRN 
EKLYEKK 
另外的黄胡蜂属序列(NCBI entrez登录)： 
549193；549192；549191；549190；549189；117414；126761；69576；625255；627189；627188；627187；482382；112561；627186；627185；1923233；897645；897647；745570；225764；162551。 
树木变应原序列(主要地桦树的)序列：
114922 Bet v1 
MGVFNYETETTSVIPAARLFKAFILDGDNLFPKVAPQAISSVENIEGNGGPGTI 
KKISFPEGFPFKYVKDRVDEVDHTNFKYNYSVIEGGPIGDTLEKISNEIKIVAT 
PDGGSILKISNKYHTKGDHEVKAEQVKASKEMGETLLRAVESYLLAHSDAY 
N 
130975 Bet v2 
MSWQTYVDEHLMCDIDGQASNSLASAIVGHDGSVWAQSSSFPQFKPQEITGI 
MKDFEEPGHLAPTGLHLGGIKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITIKKTGQALV 
FGIYEEPVTPGQCNMVVERLGDYLIDQGL 
1168696 Bet v3 
MPCSTEAMEKAGHGHASTPRKRSLSNSSFRLRSESLNTLRLRRIFDLFDKNSD 
GIITVDELSRALNLLGLETDLSELESTVKSFTREGNIGLQFEDFISLHQSLNDSY 
FAYGGEDEDDNEEDMRKSILSQEEADSFGGFKVFDEDGDGYISARELQMVL 
GKLGFSEGSEIDRVEKMIVSVDSNRDGRVDFFEFKDMMRSVLVRSS 
809536 Bet v4 
MADDHPQDKAERERIFKRFDANGDGKISAAELGEALKTLGSITPDEVKHMM 
AEIDTDGDGFISFQEFTDFGRANRGLLKDVAKIF 
543675 Que a I-白栎(Quercus alba)＝栎树(片段) 
GVFTXESQETSVIAPAXLFKALFL 
543509 Carb I-欧洲鹅耳枥(Carpinus betulus)＝鹅耳枥树(片段) 
GVFNYEAETPSVIPAARLFKSYVLDGDKLIPKVAPQAIXK 
543491 Aln g I-欧洲赤杨(Alnus glutinosa)＝赤杨树(片段) 
GVFNYEAETPSVIPAARLFKAFILDGDKLLPKVAPEAVSSVENI 
1204056核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶 
VQCMQVWPPLGLKKFETLSYLPPLSSEQLAKEVDYLLRKNLIPCLEFELEHGF 
VYREHNRSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCNDSSQVLKELEECKKAYPSAFIRI 
IGFDDK 
另外的树木变应原序列(NCBI entrez登录号)： 
131919；128193；585564；1942360；2554672；2392209；2414158；1321728；1321726；1321724；1321722；1321720；1321718；1321716；1321714；1321712；3015520；2935416；464576；1705843；1168701；1168710；1168709；1168708；1168707；1168706；1168705；1168704；1168703；1168702；1842188；2564228；2564226；2564224；2564222；2564220；2051993；1813891；1536889；534910；534900；534898；1340000；1339998；2149808；66207；2129477；1076249；1076247；629480；481805；81443；1361968；1361967；1361966；1361965；1361964；1361963；1361962；1361961；1361960；1361959；320546；629483；629482；629481；541804；320545；81444；541814：；629484；474911；452742；1834387；298737；298736；1584322；1584321；584320；1542873；1542871；1542869；1542867；1542865；1542863；1542861；1542859；1542857；1483232；1483230；1483228；558561；551640；488605；452746；452744；452740；452738；452736；452734；452732；452730；452728；450885；17938；17927；17925；17921；297538；510951；289331；289329；166953。 
花生
花生序列 
1168391 Ara h1 
MRGRVSPLMLLLGILVLASVSATHAKSSPYQKKTENPCAQRCLQSCQQEPDD 
LKQKACESRCTKLEYDPRCVYDPRGHTGTTNQRSPPGERTRGRQPGDYDDD 
RRQPRREEGGRWGPAGPREREREEDWRQPREDWRRPSHQQPRKIRPEGREG 
EQEWGTPGSHVREETSRNNPFYFPSRRFSTRYGNQNGRIRVLQRFDQRSRQF 
QNLQNHRIVQIEAKPNTLVLPKHADADNILVIQQGQATVTVANGNNRKSFNL 
DEGHALRIPSGFISYILNRHDNQNLRVAKISMPVNTPGQFEDFFPASSRDQSSY 
LQGFSRNTLEAAFNAEFNEIRRVLLEENAGGEQEERGQRRWSTRSSENNEGVI 
VKVSKEHVEELTKHAKSVSKKGSEEEGDITNPINLREGEPDLSNNFGKLFEVK 
PDKKNPQLQDLDMMLTCVEIKEGALMLPHFNSKAMVIVVVNKGTGNLELV 
AVRKEQQQRGRREEEEDEDEEEEGSNREVRRYTARLKEGDVFIMPAAHPVAI 
NASSELHLLGFGINAENNHRIFLAGDKDNVIDQIEKQAKDLAFPGSGEQVEKI 
IKNQKESHFVSARPQSQSQSPSSPEKESPEKEDQEEENQGGKGPLLSILKAFN 
豚草
豚草属序列 
113478 Amb a1 
MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQQILPSANETRSLTTCGTYNIIDGC 
WRGKADWAENRKALADCAQGFAKGTIGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEG 
TLRFGAAQNRPLWIIFARDMVIRLDRELAINNDKTIDGRGAKVEIINAGFAIYN 
VKNIIIHNIIMHDIVVNPGGLIKSHDGPPVPRKGSDGDAIGISGGSQIWIDHCSLS 
KAVDGLIDAKHGSTHFTVSNCLFTQHQYLLLFWDFDERGMLCTVAFNKFTD 
NVDQRMPNLRHGFVQVVNNNYERWGSYALGGSAGPTILSQGNRFLASDIKK 
EVVGRYGESAMSESINWNWRSYMDVFENGAIFVPSGVDPVLTPEQNAGMIP 
AEPGEAVLRLTSSAGVLSCQPGAPC 
113479 Amb a2 
MGIKHCCYILYFTLALVTLVQAGRLGEEVDILPSPNDTRRSLQGCEAHNIIDK 
CWRCKPDWAENRQALGNCAQGFGKATHGGKWGDIYMVTSDQDDDVVNP 
KEGTLRFGATQDRPLWIIFQRDMIIYLQQEMVVTSDKTIDGRGAKVELVYGGI 
TLMNVKNVIIHNIDIHDVRVLPGGRIKSNGGPAIPRHQSDGDAIHVTGSSDIWI 
DHCTLSKSFDGLVDVNWGSTGVTISNCKFTHHEKAVLLGASDTHFQDLKMH 
VTLAYNIFTNTVHERMPRCRFGFFQIVNNFYDRWDKYAIGGSSNPTILSQGNK 
FVAPDFIYKKNVCLRTGAQEPEWMTWNWRTQNDVLENGAIFVASGSDPVLT 
AEQNAGMMQAEPGDMVPQLTMNAGVLTCSPGAPC 
113477 Amb a1.3 
MGIKQCCYILYFTLALVALLQPVRSAEGVGEILPSVNETRSLQACEALNIIDKC 
WRGKADWENNRQALADCAQGFAKGTYGGKWGDVYTVTSNLDDDVANPK 
EGTLRFAAAQNRPLWIIFKNDMVINLNQELVVNSDKTIDGRGVKVEIINGGLT 
LMNVKNIIIHNINIHDVKVLPGGMIKSNDGPPILRQASDGDTINVAGSSQIWID 
HCSLSKSFDGLVDVTLGSTHVTISNCKFTQQSKAILLGADDTHVQDKGMLAT 
VAFNMFTDNVDQRMPRCRFGFFQVVNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILCQGNR 
FLAPDDQIKKNVLARTGTGAAESMAWNWRSDKDLLENGAIFVTSGSDPVLT 
PVQSAGMIPAEPGEAAIKLTSSAGVFSCHPGAPC 
113476 Amb a1.2 
MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDVEEFLPSANETRRSLKACEAHNIIDK 
CWRCKADWANNRQALADCAQGFAKGTYGGKHGDVYTVTSDKDDDVANP 
KEGTLRFAAAQNRPLWIIFKRNMVIHLNQELVVNSDKTIDGRGVKVNIVNAG 
LTLMNVKNIIIHNINIHDIKVCPGGMIKSNDGPpILRQQSDGDAINVAGSSQIWI 
DHCSLSKASDGLLDITLGSSHVTVSNCKFTQHQFVLLLGADDTHYQDKGML 
ATVAFNMFTDHVDQRMPRCRFGFFQVVNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILSQG 
NRFFAPDDIIKKNVLARTGTGNAESMSWNWRTDRDLLENGAIFLPSGSDPVL 
TPEQKAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCHQGAPC 
113475 Amb a1.1 
MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQEILPVNETRRLTTSGAYNIIDGCW 
RGKADWAENRKALADCAQGFGKGTVGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEGT 
LRFGAAQNRPLWIIFERDMVIRLDKEMVVNSDKTIDGRGAKVEIINAGFTLNG 
VKNVIIHNINMHDVKVNPGGLIKSNDGPAAPRAGSDGDAISISGSSQIWIDHCS 
LSKSVDGLVDAKLGTTRLTVSNSLFTQHQFVLLFGAGDENIEDRGMLATVAF 
NTFTDNVDQRMPRCRHGFFQVVNNNYDKWGSYAIGGSASPTILSQGNRFCA 
PDERSKKNVLGRHGEAAAESMKWNWRTNKDVLENGAIFVASGVDPVLTPE 
QSAGMIPAEPGESALSLTSSAGVLSCQPGAPC 
雪松序列
493634 Cryj IB前体 
MDSPCLVALLVFSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS 
STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKM 
PMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLYLYGCSTSVLGNVL 
INESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLTSTGVTISN 
NLFFNHHKVMSLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLV 
HVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCS 
NWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPHLTQNA 
GVLTCSLSKRC 
493632 Cryj IA前体 
MDSPCLVALLVLSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS 
STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLK 
MPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLHLYGCSTSVLGN 
VLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLSSTGVTI 
SNNLFFNHHKVMLLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGL 
VHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSC 
SNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPQLTKN 
AGVLTCSLSKRC 
107624 2Cryj II前体-日本扁柏(Japanese Cedar) 
MAMKLIAPMAFLAMQLIIMAAAEDQSAQIMLDSVVEKYLRSNRSLRKVEHS 
RHDAINIFNVEKYGAVGDGKHDCTEAFSTAWQAACKNPSAMLLVPGSKKFV 
VNNLFFNGPCQPHFTFKVDGIIAAYQNPASWKNNRIWLQFAKLTGFTLMGKG 
VIDGQGKQWWAGQCKWVNGREICNDRDRPTAIKFDFSTGLIIQGLKLMNSPE 
FHLVFGNCEGVKIIGISITAPRDSPNTDGIDIFASKNFHLQKNTIGTGDDCVAIG 
TGSSNIVIEDLICGPGHGISIGSLGRENSRAEVSYVHVNGAKFIDTQNGLRIKT 
WQGGSGMASHIIYENVEMINSENPILINQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYK 
NIRGTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKLSDISLKLTSGKIASCLNDNANGYFSGH 
VIPACKNLSPSAKRKESKSHKHPKTVMVENMRAYDKGNRTRILLGSRPPNCT 
NKCHGCSPCKAKLVIVHRIMPQEYYPQRWICSCHGKIYHP 
1076241 Cryj II蛋白-日本扁柏(Japanese Cedar) 
MAMKFIAPMAFVAMQLIIMAAAEDQSAQIMLDSDIEQYLRSNRSLRKVEHSR 
HDAINIFNVEKYGAVGDGKHDCTEAFSTAWQAACKKPSAMLLVPGNKKFV 
VNNLFFNGPCQPHFTFKVDGIIAAYQNPASWKNNRIWLQFAKLTGFTLMGKG 
VIDGQGKQWWAGQCKWVNGREICNDRDRPTAIKFDFSTGLIIQGLKLMNSPE 
FHLVFGNCEGVKIIGISITAPRDSPNTDGIDIFASKNFHLQKNTIGTGDDCVAIG 
TGSSNIVIEDLICGPGHGISIGSLGRENSRAEVSYVHVNGAKFIDTQNGLRIKT 
WQGGSGMASHIIYENVEMINSENPILINQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYK 
NIRGTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKLSDISLKLTSGKIASCLNDNANGYFSGH 
VIPACKNLSPSAKRKESKSHKHPKTVMVKNMGAYDKGNRTRILLGSRPPNCT 
NKCHGCSPCKAKLVIVHRIMPQEYYPQRWMCSRHGKIYHP 
541803 Cryj I前体-日本扁柏(Japanese Cedar) 
MDSPCLVALLVLSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS 
STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKM 
PMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLHLYGCSTSVLGNVL 
INESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLSSTGVTISN 
NLFFNHHKVMLLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLV 
HVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCS 
NWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPQLTKNA 
GVLTCSLSKRC 
541802 Cryj I前体-日本扁柏(Japanese Cedar) 
MDSPCLVALLVFSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS 
STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLK 
MPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLYLYGCSTSVLGN 
VLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLTSTGVTI 
SNNLFFNHHKVMSLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGL 
VHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSC 
SNWVWQSTQDVFYNGAYFVSS GKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPHLTQN 
AGVLTCSLSKRC 
犬
犬属序列 
Can f1 
MKTLLLTIGFSLLAILQAQDTPALGKDTVAVSGKWYLKAMTADQEVPEKPDS 
VTPMILKAQKGGNLEAKITMLTNGQCQNITVVLHKTSEPGKYTAYEGQRVV 
FIQPSPVRDHYILYCEGELHGRQIRMAKLLGRDPEQSQEALEDFREFSRAKGL 
NQEILELAQSETCSPGGQ 
血清白蛋白片段 
EAYKSEIAHRYNDLGEEHFRGLVL 
血清白蛋白片段 
LSSAKERFKCASLQKFGDRAFKAWSVARLSQRFPKADFAEISKVVTDLTKVH 
KECCHGDLLECADDRADLAKYMCENQDSISTKLKECCDKPVLEKSQCLAEV 
ERDELPGDLPSLAAFVEDKEVCKNYQEAKDVFLGTFLYEYSRRHPEYSVSL 
LLRLAKEYEATLEKCCATDDPPTCYAKVLDEFKPLVDEPQNLVKTNCELFEK 
LGEYGFQNALLVRYTKKAPQVSTPTLVVEVSRKLGKVGTKCCKKPESERMS 
CADDFLS 
Can f2 
MQLLLLTVGLALICGLQAQEGNHEEPQGGLEELSGRWHSVALASNKSDLIKP 
WGHFRVFIHSMSAKDGNLHGDILIPQDGQCEKVSLTAFKTATSNKFDLEYWG 
HNDLYLAEVDPKSYLILYMINQYNDDTSLVAHLMVRDLSRQQDFLPAFESVC 
EDIGLHKIDQIVVLSDDDRCQGSRD 
另外的犬变应原蛋白(NCBI entrez登录)： 
1731859 
马
马属序列 
1575778 Equ c1 
MKLLLLCLGLILVCAQQEENSDVAIRNFDISKISGEWYSIFLASDVKEKIEENG 
SMRVFVDVIRALDNSSLYAEYQTKVNGECTEFPMVFDKTEEDGVYSLNYDG 
YNVFRISEFENDEHIILYLVNFDKDRPFQLFEFYAREPDVSPEIKEEFVKIVQKR 
GIVKENIIDLTKIDRCFQLRGNGVAQA 
3121755 Equ c2 
SQXPQSETDYSQLSGEWNTIYGAASNIXK 
埋内欧螨(螨)
埋内欧螨序列 
Eur m1(变体) 
TYACSINSVSLPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVASTESAYLAYRN 
MSLDLAEQELVDCASQNGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVQEHYYPYVAREQSC 
HRPNAQRYGLKNYCQISPPDSNKIRQALTQTHTAVAVIIGIKDLNAFRHYDGR 
TIMQHDNGYQPNYHAVNIVGYGNTQGVDYWIVRNSWDTTWGDNGYGYFA 
ANINL 
Eur m1(变体) 
TYACSINSVSLPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVASTESAYLAYRN 
MSLDLAEQELVDCASQNGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVQEHYYPYVAREQSC 
HRPNAQRYGLKNYCQISPPDSNKIRQALTQTHTAVAVIIGIKDLNAFRHYDGR 
TIMQHDNGYQPNYHAVNIVGYGNTQGVDYWIVRNSWDTTWGDNGYGYFA 
ANINL 
Eur m1(变体) 
ETNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAY 
RNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQS 
CRRPNAQRFGISNYCQIYPPNANKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGR 
TIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAA 
NIDL 
Eur m1(变体) 
ETSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAY 
RNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVEERSYPYVAREQQ 
CRRPNSQHYGISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGIKDLRAFQHYDGR 
TIIQHDNGYQPNYHAVNIVGYGSTQGVDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQA 
GNNL 
早熟禾(草)序列
113562花粉变应原POA P9 
MAVQKYTVALFLVALVVGPAASYAADLSYGAPATPAAPAAGYTPAAPAGA 
APKATTDEQKMIEKINVGFKAAVAAAGGVPAANKYKTFVATFGAASNKAFA 
EALSTEPKGAAVDSSKAALTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYDDYVATLS 
EALRIIAGTLEVHGVKPAAEEVKATPAGELQVIDKVDAAFKVAATAANAAPA 
NDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQSYAATVATAPAVK 
YTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAATGTATAAVGAATGAATAAAGGY 
KV 
113561 POA P9 
MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADVGYGAPATLATPATPAAPAAGYT 
PAAPAGAAPKATTDEQKLIEKINAGFKAAVAAAAGVPAVDKYKTFVATFGT 
ASNKAFAEALSTEPKGAAAASSNAVLTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYD 
AYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAGEEVKAIPAGELQVIDKVDAAFKVAAT 
AANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQSYAATV 
ATAPAVKYTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAVTATATGAVGAATGAV 
GAATGAATAAAGGYKTGAATPTAGGYKV 
113560 POA P9 
MDKANGAYKTALKAASAVAPAEKFPVFQATFDKNLKEGLSGPDAVGFAKK 
LDAFIQTSYLSTKAAEPKEKFDLFVLSLTEVLRFMAGAVKAPPASKFPAKPAP 
KVAAYTPAAPAGAAPKATTDEQKLIEKINVGFKAAVAAAAGVPAASKYKTF 
VATFGAASNKAFAEALSTEPKGAAVASSKAVLTSKLDAAYKLAYKSAEGAT 
PEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHGVKPAAEEVKAIPAGELQVIDKVDAA 
FKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQ 
SYAATVATAPAVKYTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAVTGTATSAVG 
AATGAATAAAGGYKV 
蟑螂序列
2833325 Cr p1 
MKTALVFAAVVAFVAARFPDHKDYKQLADKQFLAKQRDVLRLFHRVHQHN 
ILNDQVEVGIPMTSKQTSATTVPPSGEAVHGVLQEGHARPRGEPFSVNYEKH 
REQAIMLYDLLYFANDYDTFYKTACWARDRVNEGMFMYSFSIAVFHRDDM 
QGVMLPPPYEVYPYLFVDHDVIHMAQKYWMKNAGSGEHHSHVIPVNFTLR 
TQDHLLAYFTSDVNLNAFNTYYRYYYPSWYNTTLYGHNIDRRGEQFYYTYK 
QIYARYFLERISNDLPDVYPFYYSKPVKSAYNPNLRYHNGEEMPVRPSNMY 
VTNFDLYYIADIKNYEKRVEDAIDFGYAFDEHMKPHSLYHDVHGMEYLADM 
IEGNMDSPNFYFYGSIYHMYHSMIGHIVDPYHKMGLAPSLEHPETVLRDPVF 
YQLWKRVDHLFQKYKNRLPRYTHDELAFEGVKVENVDVGKLYTYFEQYD 
MSLDMAVYVNNVDQISNVDVQLAVRLNHKPFTYNIEVSSDKAQDVYVAVF 
LGPKYDYLGREYDLNDRRHYFVEMDRFPYHVGAGKTVIERNSHDSNIIAPER 
DSYRTFYKKVQEAYEGKSQYYVDKGHNYCGYPENLLIPKGKKGGQAYTFY 
VIVTPYVKQDEHDFEPYNYKAFSYCGVGSERKYPDNKPLGYPFDRKIYSNDF 
YTPNMYFKDVIIFHKKYDEVGVQGH 
2231297 Cr p2 
INEIHSIIGLPPFVPPSRRHARRGVGINGLIDDVIAILPVDELKALFQEKLETSPD 
FKALYDAIRSPEFQSIISTLNAMQRSEHHQNLRDKGVDVDHFIQLIRALFGLSR 
AARNLQDDLNDFLHSLEPISPRHRHGLPRQRRRSARVSAYLHADDFHKIITTIE 
ALPEFANFYNFLKEHGLDVVDYINEIHSIIGLPPFVPPSRRHARRGVGINGLIDD 
VIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALYDAIRSPEFQSIISTLNAMPEYQELLQN 
LRDKGVDVDHFIRVDQGTLRTLSSGQRNLQDDLNDFLALIPTDQILAIAMDYL 
ANDAEVQELVAYLQSDDFHKIITTIEALPEFANFYNFLKEHGLDVVDYINEIHS 
IIGLPPFVPPSQRHARRGVGINGLIDDVIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALY 
DAIDLRSSRA 
1703445 Bla g2 
MIGLKLVTVLFAVATITHAAELQRVPLYKLVHVFINTQYAGITKIGNQNFLTV 
FDSTSCNVVVASQECVGGACVCPNLQKYEKLKPKYISDGNVQVKFFDTGSA 
VGRGIEDSLTISNLTTSQQDIVLADELSQEVCILSADVVVGIAAPGCPNALKGK 
TVLENFVEENLIAPVFSIHHARFQDGEHFGEIIFGGSDWKYVDGEFTYVPLVG 
DDSWKFRLDGVKIGDTTVAPAGTQAIIDTSKAIIVGPKAYVNPINEAIGCVVE 
KTTTRRICKLDCSKIPSLPDVTFVINGRNFNISSQYYIQQNGNLCYSGFQPCGH 
SDHFFIGDFFVDHYYSEFNWENKTMGFGRSVE 
SV 
1705483 Bla g4 
AVLALCATDTLANEDCFRHESLVPNLDYERFRGSWIIAAGTSEALTQYKCWI 
DRFSYDDALVSKYTDSQGKNRTTIRGRTKFEGNKFTIDYNDKGKAFSAPYSV 
LATDYENYAIVEGCPAAANGHVIYVQIRFSVRRFHPKLGDKEMIQHYTLDQV 
NQHKKAIEEDLKHFNLKYEDLHSTCH 
2326190 Bla g5 
YKLTYCPVKALGEPIRFLLSYGEKDFEDYRFQEGDWPNLKPSMPFGKTPVLEI 
DGKQTHQSVAISRYLGKQFGLSGKDDWENLEIDMIVDTISDFRAAIANYHYD 
ADENSKQKKWDPLKKETIPYYTKKFDEVVKANGGYLAAGKLTWADFYFVA 
ILDYLNHMAKEDLVANQPNLKALREKVLGLPAIKAWVAKRPPTDL 
另外的蟑螂序列(NCBI Entrez登录号)： 
2580504；1580797；1580794；1362590；544619；544618；1531589；1580792；1166573；1176397；2897849。 
变应原(一般的)序列：
NCBI登录号 
2739154；3719257；3703107；3687326；3643813；3087805；1864024；1493836；1480457；2598976；2598974；1575778；763532；746485；163827；163823；3080761；163825；3608493；3581965；2253610；2231297；2897849；3409499；3409498；3409497；3409496；3409495；3409494；3409493；3409492；3409491；3409490； 3409489；3409488；3409487；3409486；3409485；3409484；3409483；3409482；3409481；3409480；3409479；3409478；3409477；3409476；3409475；3409474；3409473；3409472；3409471；3409470；3409469；3409468；3409467；3409466；3409465；3409464；3409463；3409462；3409461；3409460；3409459；3409458；3409457；3409456；3318885；3396070；3367732；1916805；3337403；2851457；2851456；1351295；549187；136467；1173367；2499810；2498582；2498581；1346478；1171009；126608；114091；2506771；1706660；1169665；1169531；232086；416898；114922；2497701；1703232；1703233；1703233；1703232；3287877；3122132；3182907；3121758；3121756；3121755；3121746；3121745；3319925；3319923；3319921；3319651；3318789；3318779；3309647；3309047；3309045；3309043；3309041；3309039；3288200；3288068；2924494；3256212；3256210；3243234；3210053；3210052；3210051；3210050；3210049；3210048；3210047；3210046；3210045；3210044；3210043；3210042；3210041；3210040；3210039；3210038；3210037；3210036；3210035；3210034；3210033；3210032；3210031；3210030；3210029；3210028；3210027；3210026；3210025；3210024；3210023；3210022；3210021；3210020；3210019；3210018；3210017；3210016；3210015；3210014；3210013；3210012；3210011；3210010；3210009；3210008；3210007；3210006；3210005；3210004；3210003；3210002；3210001；3210000；3209999；3201547；2781152；2392605；2392604；2781014；1942360；2554672；2392209；3114481；3114480；2981657；3183706；3152922；3135503；3135501；3135499；3135497；2414158；1321733；1321731；1321728；1321726；1321724；1321722；1321720；1321718；1321716；1321714；1321712；3095075；3062795；3062793；3062791；2266625；2266623；2182106；3044216；2154736；3021324；3004467；3005841；3005839；3004485；3004473；3004471；3004469；3004465；2440053；1805730；2970629；2959898；2935527；2935416；809536；730091；585279；584968；2498195；2833325；2498604；2498317；2498299；2493414；2498586；2498585；2498576；2497749；2493446；2493445；1513216；729944；2498099；548449；465054；465053；465052；548671；548670；548660；548658；548657；2832430；232084；2500822；2498118；2498119；2498119；2498118；1708296；1708793；416607；416608；416608；416607；2499791；2498580；2498579；2498578；2498577；2497750；1705483；1703445；1709542；1709545；1710589； 1352699；1346568；1346323；1346322；2507248；|1352240；1352239；1352237；1352229；1351935；1350779；1346806；1346804；1346803；1170095；1168701；1352506；1171011；1171008；1171005；1171004；1171002；1171001；1168710；1168709；1168708；1168707；1168706；1168705；1168704；1168703；1168702；1168696；1168391；1168390；1168348；1173075；1173074；1173071；1169290；1168970；1168402；729764；729320；729979；729970；729315；730050；730049；730048；549194；549193；549192；549191；549190；549189；549188；549185；549184；549183；549182；549181；549180；549179；464471；585290；416731；1169666；113478；113479；113477；113476；113475；130975；119656；113562；113561；113560；416610；126387；126386；126385；132270；416611；416612；416612；416611；730035；127205；1352238；125887；549186；137395；730036；133174；114090；131112；126949；129293；124757；129501；416636；2801531；2796177；2796175；2677826；2735118；2735116；2735114；2735112；2735110；2735108；2735106；2735104；2735102；2735100；2735098；2735096；2707295；2154730；2154728；1684720；2580504；2465137；2465135；2465133；2465131；2465129；2465127；2564228；2564226；2564224；2564222；2564220；2051993；1313972；1313970；1313968；1313966；2443824；2488684；2488683；2488682；2488681；2488680；2488679；2488678；2326190；2464905；2415702；2415700；2415698；2398759；2398757；2353266；2338288；1167836；414703；2276458；1684718；2293571；1580797；1580794；2245508；2245060；1261972；2190552；1881574；511953；1532058；1532056；1532054；1359436；666007；487661；217308；1731859；217306；217304；1545803；1514943；577696；516728；506858；493634；493632；2154734；2154732；543659；1086046；1086045；2147643；2147642；1086003；1086002；1086001；543675；543623；543509；543491；1364099；2147108；2147107；1364001；1085628；631913；631912；631911；2147092；477301；543482；345521；542131；542130；542129；100636；2146809；480443；2114497；2144915；72355；71728；319828；1082946；1082945；1082944；539716；539715；423193；423192；423191；423190；1079187；627190；627189；627188；627187；482382；1362656；627186；627185；627182；482381；85299；85298；2133756；2133755；1079186；627181；321044；321043；112559；112558；1362590；2133564；1085122；1078971；627144；627143；627142；627141；280576；102835；102834； 102833；102832；84703；84702；84700；84699；84698；84696；477888；477505；102575；102572；478272；2130094；629813；629812；542172；542168；542167；481432；320620；280414；626029；542132；320615；320614；100638；100637；100635；82449；320611；320610；280409；320607；320606；539051；539050；539049；539048；322803；280407；100501；100498；100497；100496；1362137；1362136；1362135；1362134；1362133；1362132；1362131；1362130；1362129；1362128；100478；2129891；1076531；1362049；1076486；2129817；2129816；2129815；2129814；2129813；2129812；2129805；2129804；2129802；2129801；2129800；2129799；479902；479901；2129477；1076247；629480；1076242；1076241；541803；541802；280372；280371；1361968；1361967；1361966；1361965；1361964；1361963；1361962；1361961；1361960；1361959；320546；2119763；543622；541804；478825；478824；478823；421788；320545；81444；626037；626028；5390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递送方法 
一旦被配制，可使用多种已知的途径和技术将本发明的组合物体内递送至受治疗者。例如组合物可被提供为可注射的溶液、悬浮液或乳液并使用常规的针和注射器或使用液体喷射注射系统经由肠胃外的、皮下的、表皮的、皮内的、肌肉内的、动脉内的、腹膜内的、静脉内的注射被施用。组合物也可被局部地施用于皮肤或粘膜组织，例如经鼻地、经气管内地、经肠地、经直肠地或经阴道地，或者被提供为适于呼吸或肺部施用的精细分散的喷雾。施用的其他方式包括口服施用、栓剂、舌下施用和主动或被动的经皮递送技术。 
当本发明的肽被施用时，优选的将肽施用在身体中能够接触到适合的呈递抗原细胞并且它或者它们有机会接触个体的T细胞的部位。当APC 有待被施用时，优选的是将APC施用至身体中能够接触并且活化个体的适当的T细胞的部位。 
递送方案 
如上文描述的，肽/多核苷酸/细胞(例如含有多种肽的组合物)的施用可通过任何适当的方法。肽的适合的量可以是经验确定的但通常在下文给定的范围内。每种肽的单次施用可以是足以具有对患者的有益作用的，但应当理解的是，如果肽被施用超过一次，其中在这种情况下典型的施用方案可以是例如每6个月2-4周每周一次或两次，或者每四至六个月一周一天一次，它可以是有益的。应理解每种肽或多核苷酸或肽和/或多核苷酸的组合可被单独或组合施用于患者。 
施用的剂量将取决于许多因素，包括组合物的性质、施用的途径和施用方案的安排和计时。本发明的分子或分子组合的适合的剂量可为每次施用多达10μg、多达15μg、多达20μg、多达25μg、多达30μg、多达35μg、多达50μg、多达100μg、多达500μg或更多的级别。适合的剂量可小于15μg，但至少1ng、或至少2ng、或至少5ng、或至少50ng、或至少100ng、或至少500ng、或至少1μg、或至少10μg。对于本发明的一些分子或组合来说，使用的剂量可更高，例如多达1mg、多达2mg、多达3mg、多达4mg、多达5mg或更高。可以以液体制剂的形式，以允许通过所选择的途径施用的适当体积的适合的浓度提供这些剂量。应理解上文的剂量是指在分子的组合的情况下的总剂量。例如，“多达35μg”是指在含有多于一种肽的组合的组合物中总的肽浓度多达35μg。 
试剂盒 
本发明还涉及本文描述的适合用于本发明的治疗的组分的组合，其以试剂盒的形式被包装在容器中。这种试剂盒可包括一系列组分以允许本发明的治疗。例如，一种试剂盒可包含四种更多种不同的本发明的肽、多核苷酸和/或细胞，或四种或更多种本发明的肽、多核苷酸或细胞，以及适于同时施用或顺序或分别施用的一种或多种另外的治疗剂。试剂盒可任选地包含其他适当的试剂或说明书和类似物。 
通过下列实施例示例性的说明本发明。 
实施例1：用于MHC结合特征的肽混合物的筛选 
结合测定
肽 
研究下列含有Fel d1的序列的肽与九种HLA-DR分子DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13、DR15、B4和B5结合的能力。 
SEQ ID NO： 
Figure GPA00001010385300671
*评估了斜体字显示的肽的结合，但由于相对差的溶解度而在这些实验中未被进一步考虑。 
MHC结合测定的结合条件 
EBV纯合细胞系被用作人II类HLA分子的来源(表4)。使用与蛋白A琼脂糖CL 4B凝胶(Pharmacia，France)偶联的单态Mab L243(ATCC，Rockville，USA)通过亲和层析纯化HLA-DR分子。简单的说，将细胞以溶于含有1％Nonidet P40(NP40)、10mg/l抑肽酶、5mM EDTA和10mMPMSF的150mM NaCl、10mM Tris HCl pH＝8.3的缓冲液的5×108细胞/ml在冰上溶解。以100000g离心1小时后，将上清液用于琼脂糖4B和蛋白A-琼脂糖4B柱并且之后用于特异性亲和柱。将HLA-DR分子用1.1mM正十二烷基b-D-麦芽糖苷(DM)、500mM NaCl和500mM Na2CO3 pH＝11.5洗脱。立即用2M Tris HCl pH＝6.8的缓冲液将各级分中和至pH＝7，并对1 mM DM、150mM NaCl、10mM磷酸盐pH＝7的缓冲液大量透析。对于批号40之外的HLA-DR分子，用1mM NOGP代替透析缓冲液中的1mMDM。 
将HLA-DR分子稀释在含有适当的生物素化的肽和系列稀释的竞争肽的10mM磷酸盐、150mM NaCl、1mM DM、10mM柠檬酸盐、0.003％乙基汞硫代水杨酸钠缓冲液中。每种分子的结合条件详见表4。将样品(每孔100μl)在96孔聚丙烯板(Nunc，Denmark)中于37℃孵育24h至72h。用50μl 450mM Tris HCl pH＝7.5、0.003％乙基汞硫代水杨酸钠、0.3％BSA，1mM DM缓冲液中和后，将样品用于预先用10mg/ml L243 Mab包被并用100mM Tris HCl pH＝7.5、0.3％BSA、0.003％乙基汞硫代水杨酸钠缓冲液浸透的96孔maxisorp ELISA板(Nunc，Denmark)。将它们与抗体包被的板于室温结合2小时。可通过孵育链霉抗生物素-碱性磷酸酶轭合物(Amersham，U.K.)并且清洗后通过加入4-甲基伞形酮磷酸盐底物(Sigma，France)来检测结合的生物素化的肽。当在Wallac Victor2 1420多标记计数荧光计(Perkin Elmer)上在365nm处激发时，于450nm测量发射的荧光。通过将生物素化的肽与MHC II分子在缺少竞争剂的情况下孵育测定最大结合。通过加入过量非生物素化的肽评估结合特异性。背景与通过孵育不含MHC II分子的生物素化的肽获得的结合没有显著差异。数据被表示为抑制50％的标记的肽的结合的肽浓度(IC50)。之后相对已知的强结合对照(参考)肽评估结合能力。在这些实验中适合于所检测的HLA等位基因的参考肽是：DR1(DRB1*0101等位基因)：HA 306-318(PKYVKQNTLKLAT)；DR3(DRB1*0301等位基因)：MT216(AKTIAYDEEARRGLE)；DR4(DRB1*0401等位基因)：HA 306-318(PKYVKQNTLKLAT)；DR7(DRB1*0701等位基因)：YKL(AAYAAAKAAALAA)；DRB1*1101：HA 306-318(PKYVKQNTLKLAT)；DR13(DRB1*1301等位基因)：B121-36(TERVRLVTRHIYNREE)；DR15(DRB1*1501等位基因)：A3 152-166(EAEQLRRAYLDGTGVE)；DRB4(DRB4*0101等位基因)：E2/E7(AGDLLAIETDKATI)和DRB5(DRB5*0101等位基因)：HA 306-318(PKYVKQNTLKLAT)。 
结果 
如文献(Southwood等人(1998).J Immunol 160：3363；Geluk等人(1998)Proc Natl Acad Sci U S A95：10797)中通常所描述的，首先以较高的1000nM阈值为基础区分结合和非结合的肽，但是通过与参考肽的比较进行另外的评估。参考肽选自每种给定的HLA分子的最佳结合的肽中。相对于参考肽，如果对于给定的HLA分子来说，一种肽具有低于参考肽超过100倍的IC50，那么它是给定的HLA分子的弱结合剂。如果对于给定的HLA分子来说，一种肽具有低于参考肽超过20倍但小于100倍的IC50，那么它是中等结合剂。如果对于给定的HLA分子来说，一种肽具有低于参考肽小于20倍的IC50，那么它是强结合剂。 
优选的肽混合物的分析 
用于这些实验的九种HLA等位基因涵盖了高比例的白种人群体(群体中HLA等位基因的参考频率在实施例2的表3中提供)。相应地，评估肽的组合以确定哪一种将产生对不同HLA分子的最广阔的覆盖。因此混合物的目标标准被如下定义：对于给定的HLA分子，混合物必须含有2种强结合肽和1种中等结合肽，或者1种强结合肽和3种中等结合肽。优选的混合物对于所有九种测试的HLA类型来说都达到这些标准。因为发现具有相应于SEQ ID NO：13至16的序列的肽差的溶解性，因此在这一分析中只考虑具有相应于SEQ ID NO：1至12的序列的肽。有来自SEQ ID NO：1至12的超过3000种的可能肽的组合，其可能有潜力满足上文设定的目标标准。 
为了能够将这些组合形象化，对于每种HLA类型使用了双重评分系统，当肽的组合达到上文标准中的一个时，记入“1”的得分，并且当没有满足标准时，记入“0”的得分。之后将所有HLA类型的得分相加，以致对任何一种HLA类型来说都不满足标准的混合物得分0，而对所有9种HLA类型来说都满足标准的混合物得分9。每种肽组合的得分在图1A至Q中标出。下文所示的10种混合物获得了最高的九分： 
图1A点16MLA 01、02、03、04、05、12、14 
图1B点272MLA 01、03、04、05、07、12、14 
图1C点472MLA 02、03、04、05、06、12、14 
图1C点482MLA 02、03、04、05、07、12、14 
图1C点488MLA 02、03、04、05、11、12、14 
图1C点494MLA 02、03、04、05、12、14、15 
图1C点495MLA 02、03、04、05、12、14、16 
图1D点699MLA 03、04、05、07、12、14、15 
图1D点700MLA 03、04、05、07、12、14、16 
图1G点1271MLA 02、03、04、05、12、14 
因此这些混合物是在疫苗中使用的优选的肽的组合。 
实施例2：横断式筛查猫变应性受治疗者的经由来源于Fel d1的MHC表征的T细胞肽表位的T细胞应答和嗜碱性粒细胞组胺释放 
1.引言 
1.1组胺释放测定 
这一测定的目的是鉴定在治疗过程中能够活化血液嗜碱性粒细胞(作为组织肥大细胞的替代)产生能够导致变应性反应的组胺释放的单种的肽。诱导组胺释放的肽或肽的组合物常常被认为不适于被包含在肽疫苗中。 
组胺释放需要嗜碱性粒细胞的表面上邻近的特异性IgE分子的交联。被评估的肽是小的(长度上为13至17个氨基酸)，并且因此应当不具有能够使它们保留整个分子的IgE结合表位的构象的显著的三级结构。而且，溶液中的肽单体，即便它们被IgE结合，应当不能够交联邻近的IgE分子。但应当注意的是，肽中的一些包含可导致混合物中单一的肽之间以及不同的肽之间二硫键形成的半胱氨酸残基。因此，可产生可能具有IgE交联潜力的肽的二聚体。在本分析中，在肽制剂中没有使用赋形剂以阻止或减少通过二硫键的二聚体形成。 
评估了来自猫变应性个体的新鲜的外周全血的组胺释放。外周血嗜碱性粒细胞被用作对测定来说不实用的组织肥大细胞的替代。将血液与来自主要猫变应原Fel d1的序列的9种单种的肽(MLA01、03、04、05、07、12、14、15和16)体外孵育。这些肽在如实施例1中所讲解的肽-MHC结合测定后被选作可能的T细胞表位。此外，分析了对实施例1中鉴定的7种肽的混合物的优选的混合物的应答。测试的优选的7种肽的混合物由肽MLA01、03、04、05、07、12、14(SEQ ID NO：1至7)组成。对完整的猫皮屑变应原提取物的应答中的组胺释放作为阳性对照。 
1.2增殖测定 
增殖测定的目的是确定对每种单种的肽/后备肽和优选的7种肽的混合物应答的群体的百分比。 
1.3细胞因子测定 
细胞因子测定的目的是两重的，(1)确定对每种单种的肽和优选的7种肽的混合物应答的群体的百分比，以及(2)鉴定具有在用于变应性疾病的肽疫苗中所不期望的固有的诱导Th2(IL-13)特征的单种的肽，并且还鉴定具有对于用于变应性疾病的肽疫苗来说可能有益的固有的诱导IL-10特征的单种的肽。 
2.材料和方法 
2.1外周血单核细胞的分离 
将外周血单核细胞(PBMC)从获得自受治疗者的肝素化血液样品分离。通过Ficoll-Hypaque密度梯度分离来分离PBMC。一旦被分离，细胞被用于细胞增殖测定、组胺释放和ELISA测定以及细胞因子释放测定中。 
2.2组胺释放测定和组胺ELISA 
测定在PBMC(其含有嗜碱性粒细胞)上进行。在组胺释放测定中将每种肽和肽的组合与整体变应原分子相比较。通过ELISA测量组胺浓度。 
测定需要每受治疗者3×106PBMC。使用Immunotech组胺释放免疫测定试剂盒根据制造商的说明书进行测定。组胺释放测定后，通过组胺ELISA 检测酰化的样品。组胺ELISA使用由组胺释放测定产生的100μl酰化样品中的50μl。通过于-20℃冷冻来保留剩余的50μl样品直到完成ELISA数据分析部分。一旦结果被分析并以令人满意的方式进行了ELISA，就可丢弃样品。 
在5个log10范围(10μg/ml至1ng/ml)测定肽的诱导组胺释放的能力。以可在治疗期间达到的肽的理论体内剂量为基础选择测定的浓度范围。例如将10μg剂量的肽加入5升血量中将产生2ng/ml(2×10-6mg/ml)的血液浓度，在组胺释放测定剂量范围的较低端。完整的猫皮屑提取物(C.B.F.LETI)被用作稍稍较高浓度范围(100μg至10ng/ml)的释放的阳性对照。对每个稀释进行单一测量(即不是二重或三重的)。测定一个重复的血液样品的自发组胺释放，并且从所有肽/变应原结果减去这些样品的平均值。 
完成组胺ELISA之后，通过对ELISA测定中产生的标准曲线的内插确定个体组胺水平。调整来自样品的结果以顾及到样品的任何稀释。当肽/变应原制剂的两种或多种稀释引起背景之上10％或更多的组胺释放时，或当在检测的最高浓度获得高于背景10％或更多的单一值时，其被认为是“正的组胺释放”。 
2.3细胞增殖测定 
在PBMC(对于所有待测参数来说需要140×106的细胞)上进行细胞增殖测定。通过掺入放射性标记的化合物3H-胸腺嘧啶核苷来测量增殖。 
更具体地，100μl适当的抗原或肽浓缩物被分配至96孔板中适当的孔中。之后将板放置在加湿的5％CO2的设置在37℃的培养箱中最多4小时。于室温将如上文描述的分离的PBMC在完全培养基中制备为2×106细胞/ml浓度。之后将100μl细胞溶液分配至含有抗原/肽的96孔板的每个孔中。之后将板孵育6至8天。通过向每个孔加入10μl的氚化的胸腺嘧啶核苷储液(1.85MBq/ml于无血清的RPMI培养基中)用氚化的胸腺嘧啶核苷溶液使培养物产生脉冲。之后将板返回培养箱8至16小时。之后使用CanberraPackard FilterMate 196孔采集器收集培养物。用适合的β闪烁计数器将干燥的滤垫计数。 
将来自含有肽的孔的计数与只含有培养基的孔统计比较(每组12孔)。使用了非参数Mann-Whitney检验。对所有受治疗者使用相同的统计学检验。只有培养基的孔和肽刺激的孔之间的统计学上显著的差异被认为是肽对PBMC的正刺激。 
2.4细胞因子释放测定 
分析来自PBMC的对肽刺激应答的细胞因子分泌概况。使用ELISA测定检测来自细胞因子释放测定的上清液的3种细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-13的存在。 
细胞因子释放测定需要每位受治疗者40×106的PBMC。更具体的，将250μl适当的抗原或肽浓缩物的200μg/ml溶液分配至48孔板的适当的孔中。之后将板在加湿的5％CO2的设置在37℃的培养箱中孵育最多4小时。之后向每个孔加入250μl的5×106细胞/ml PBMC悬浮液，并将板返回培养箱5天。 
刺激后，将培养上清液的样品收集为3等份并冷冻直到能够进行ELISA测定。对一个等份检测一种细胞因子的存在(因此对3种细胞因子的检测需要总共3等份)。通过也是在测定中产生的标准曲线的内插来确定样品中细胞因子的水平。 
3.结果 
结果综述 
3.1组胺释放 
表1-组胺释放综述 
Figure GPA00001010385300741
*在一些受治疗者中，一些肽在2种或更多浓度导致释放而其他的仅在最高剂量导致释放。因此当两个数目代表猫皮屑提取物和肽混合物时两个数目不能简单地相加。相似地，单种的肽释放的值不能加上肽的混合物的值，因为具有对混合物的组胺释放的受治疗者中的2个也具有对单种的肽的释放。 
在对阳性对照和肽的应答中都观察到来自外周血嗜碱性粒细胞的组胺释放。表1显示其中发生组胺释放(如通过公认的标准所定义的)的个体的百分比。对一种或多种单种的肽的组胺释放常常发生，但这很少转变为来自7种优选的肽的混合物的组胺释放。然而在对肽混合物的应答中总共5％的个体显示组胺释放。引发组胺释放的肽混合物的连续剂量的剂量和数目的细节与这些结果的解释相关，并且在下文更详细的讨论。 
表2-单种的肽的组胺释放综述 
 MLA01 (与SEQ ID NO：1 相关的)  MLA03 (SEQ ID NO：2)  MLA04 (SEQ ID NO：3)  MLA05 (SEQ ID NO：4)  MLA07 (SEQ ID NO：5)  MLA12 (SEQ ID NO：6)  MLA14 (SEQ ID NO：7)  MLA15  MLA16
 4  6  6  1  6  6  2  7  11
表2显示其中在对每种单种的肽的应答中检测到组胺释放的个体的数目。MLA15和MLA16最常释放组胺。 
3.2增殖测定综述 
图3概括了对肽和抗原的增殖应答。以黑柱显示具有可检测的增殖应答的个体的百分比。灰柱(弱)、白柱(中等)和散列柱(强)提供这些应答的质量的分析。质量主要由刺激指数(SI：抗原/肽存在时的计数除以只有培养基时的计数的比率)定义。因此对于肽1(MLA01)来说，12％的受治疗者产生增殖应答，并且其中92％是弱的，没有中等的，而有8％是高的。对单种肽/抗原的增殖应答是可变的(黑柱)。92％的受治疗者对阳性对照抗原PPD具有正的增殖应答。这些大部分是强应答(散列柱)。75％的受治疗者对猫的皮屑提取物应答，其中59％(即75％的59％)的应答是弱的。对7种优选的肽(SEQ ID NO：1至7)的混合物的应答与对猫的皮屑提取物(CAT)的应答几乎一样。肽MLA15和MLA16诱导比优选的肽中的四种更频繁的应答。然而，MLA15和MLA16诱导最频繁的嗜碱性粒细胞组胺释放应答(参见3.1节)。几乎没有单种肽如所期望的诱导强的增殖应答(肽特异性前体T细胞的低前体频率)。 
3.3细胞因子测定综述 
图4概括经由所测量的三种细胞因子的产生具有对肽/抗原中的每一种的可检测的应答的个体的百分比。黑柱代表IFN-γ的产生、灰柱代表IL-13而白柱代表IL-10。阳性对照抗原PPD在几乎所有个体中引发细胞因子产生(IFN-γ：91％，IL-13：97％和IL-10：96％)。完整的猫变应原和7种肽的混合物在约80％或更多的受治疗者中引发细胞因子应答。单种的肽引发不同频率的应答。通常，细胞因子产生看起来是具有比增殖应答产生阳性细胞因子应答更大的个体百分比的更敏感的检测应答的方法。在大多 数情况下，在最大数目的受治疗者中检测到IL-10分泌，而且最少检测到IFN-γ。 
3.4组织分型 
表3 
  DRB1   1   3   4   7   8   11   12   13   14   15   16
  ％   6.4   14.7   15.7   8.8   3.4   8.3   3.9   14.7   2.9   17.6   2.5
  参考群体％   9.4   11.1   12.8   13.2   3.7   13.4   2.3   10.2   3.2   10.7   3.6
进行组织分型以便确保研究群体(主要为白种人)是代表将使用疫苗的普通白种人群体。显示了十一种常见DRB1等位基因家族。显示了102个分型的研究受治疗者中的等位基因频率，而不是表达等位基因的个体的百分比，因为每个个体具有两个DRB1等位基因，并且一些个体对特定的等位基因来说是纯合的。参考群体等位基因频率也被显示以便比较(数据来自HLA Facts Book，Parham&Barber)。参考频率通过对报道频率的多种研究的分析来获得，并且所显示的数字是平均值。在目前的分析中检测的所有频率都在参考数据报道的范围内。因此在目前的研究中检测的群体代表白种人群体。 
Figure GPA00001010385300771
Figure GPA00001010385300781
Figure GPA00001010385300791
Figure GPA00001010385300801
Figure GPA00001010385300811
Figure GPA00001010385300821
在研究期间总共完成了94个组胺释放测定。其中13个测定被排除，主要由于不可接受的高水平的自发释放。具有总组胺释放的20％或更高的自发组胺释放的测定被排除。具有10％和20％之间的自发释放的这些测定示于表4中。所有其他测定具有小于10％的自发释放值。 
大约78％的所测定的受治疗者显示对致敏的变应原的正的组胺释放。现有文献报道10-20％的变应性个体是抗变应原诱导的嗜碱性粒细胞组胺释放的。 
如果(a)肽的最高浓度单独诱导总释放值的10％或更多的释放或者(b)如果两个连续的值是总释放的10％或更多，那么组胺释放被认为是正的。大约31％(25/81)的受治疗者显示对一种或多种单种的肽的组胺释放。这些之中，6/81(7.4％)对完整的猫变应原提取物不具有阳性对照释放。 
在两个个体中，除了一些单种的肽之外，7种肽的混合物也诱导组胺释放。在两个另外的个体中，只有7种肽的混合物诱导释放。因此，4/81的个体(约5％)显示伴随肽的混合物的组胺释放。 
受治疗者044仅在肽的最高浓度(10ug/ml)显示释放(总释放的28％)。受治疗者055仅在0.1ug/ml(总释放的72％)和1ug/ml(总释放的47％)显示释放。受治疗者056在0.01ug/ml(11％)、0.1ug/ml(12％)、1.0ug/ml(17％)和10ug/ml(10ug/ml)显示释放。受治疗者103仅在肽的最高浓度(10ug/ml)显示组胺释放(33％)。 
4.2增殖测定 
对于增殖测定来说，分析了所有受治疗者和所有肽浓度的个体增殖数据。总结了100个受治疗者的整个群体的对每种肽/抗原的刺激指数。 
复合体抗原例如猫皮屑提取物和PPD在整个群体中诱导显著的增殖应答。诱导显著应答的肽是在较大百分比的群体中引起增殖应答的那些。 
当在含有肽的孔中的计数低于只含有培养基的那些时产生小于1的刺激指数。这种作用可归因于当加入在酸性溶液中制备的肽时pH上的轻微变化。之后缺少对肽的增殖应答将导致计数稍微低于仅有培养基的孔中的那些。 
4.3细胞因子释放测定 
图4至6显示对每种肽/抗原来说，产生任何可检测的量的应答(即产生可检测的IFN-γ、IL-13或IL-10)的个体的百分比。这些应答的强度之后被分为细胞因子产生的四个水平。例如，研究群体的35％可产生IFN-γ应答。这35％的个体中，一半(50％)产生非常弱的应答，20％弱应答，15％中等应答和15％强应答(给出全部100％的应答者)。每个细胞因子水平的界限以ELISA测定的检测范围为基础特意设定。因为IFN-γ和IL-10的检测范围大约是1-100pg/ml，而IL-13测定的范围大约是0.5-50pg/ml，IFN-γ/IL-10和IL-13之间界限是不同的。 
4.3.1干扰素-γ产生 
图4显示使用肽/抗原的细胞培养后产生IFN-γ的个体的百分比和应答强度的百分比。在26-44％的对单种肽应答的受治疗者中检测到IFN-γ应答。这些应答主要是非常低至低至中等的。复合体抗原诱导更频繁的应答(肽混合物80％、猫皮屑79％、PPD 91％)。这些应答是低至中等至高的。PPD应答尤其高(89个PPD应答在100pg/ml以上)。 
4.3.2IL-13产生 
图5显示使用肽/抗原的细胞培养后产生IL-13的个体的百分比和应答强度的百分比。在33-68％的对单种肽应答的受治疗者中检测到IL-13应答。这些应答主要是非常低至低的，尽管检测到显著数目的中等应答。这可能反应了在这些受治疗者中Th2类型的变应性致敏。复合体抗原诱导更频繁的应答(肽混合物85％、猫皮屑93％、PPD 97％)。这些应答是低至中等至高的。 
4.3.3IL-10产生 
图6显示使用肽/抗原的细胞培养后产生IL-10的个体的百分比和应答强度的百分比。在46-75％的对单种肽应答的受治疗者中检测到IL-10应答。这些应答主要是非常低至低的。复合体抗原诱导更频繁的应答(肽混合物93％、猫皮屑96％、PPD 96％)。这些应答是低至中等的。观察到非常少的“高的”IL-10应答。 
5.讨论 
5.1组胺释放测定 
解释组胺释放结果时，重要的是考虑与测定设计有关的几点： 
1)将在治疗期间达到的估计的肽的血液剂量位于在测定中使用的剂量应答曲线的底部。例如，进入5升血量的10ug剂量的肽将产生2ng/ml(2×106mg/ml；假定没有肽降解，但其是不可能的)的血液浓度。这一浓度仅仅在测定的较低的剂量限制(1ng/ml)之上。用于测定的肽的2种最低的浓度大约相当于5μg(1ng/ml)和50μg(10ng/ml)的注射剂量。因此，测定被设计以在用于治疗的肽的剂量或之上检测组胺释放。仅在3个实例中，组胺释放与最低的两种(10％以上的连续的值)肽浓度有关。在这些实例的两个中，值小于11％。7种肽的混合物在最低的两种肽浓度没有显示任何释放。因此，尽管对单种的肽或混合物的应答的组胺释放相对常见，但在治疗期间达到的肽的浓度，其通常并未被看到。 
2)由于费用和复杂性的问题，测定了单一的孔的肽的每种浓度。这增加了任何一个值可以是假的的风险。其尤其与为正的结果定义的第二条件相关联；仅仅肽/抗原的最高浓度显示总释放的10％或更多的释放。对单种的肽的组胺释放的几个实例仅与肽的单一的最高浓度有关并，且这对于2/4的具有由7种肽的混合物触发的组胺释放的个体来说也是真实的。 
3)在一些实例中，来自肽的组胺释放与来自猫皮屑提取物的组胺释放无关(缺少阳性对照)。 
4)之前显示具有半胱氨酸残基的肽(MLA01、MLA04、MLA05、MLA12和MLA15)能够改变同源二聚化的程度。尽管没有正式的定量，这些肽在混合时可能同样形成异源二聚体(即，在SEQ ID NO：1至7混合物中)。二聚体可足以在产生组胺释放的肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面上交联IgE分子。在这一研究中没有使用减少同源或异源肽之间的二硫键形成的赋形剂。疫苗的临床制品将包含硫代甘油以防止 二硫键形成。 
大约78％的所测定的受治疗者显示对致敏的变应原的正的组胺释放。这比表明10-20％的变应性个体是抗变应原诱导的嗜碱性粒细胞组胺释放的文献中所报道的稍低。 
30.9％的受治疗者显示对一种或多种单种的肽的组胺释放。还在5％(4/81)的受治疗者中检测到对7种肽的混合物(SEQ ID NO：1至7；可能的疫苗候选物)的组胺释放。这4个个体中的两个显示对单种的肽的释放而2个没有显示。在显示对单种的肽的组胺释放的一些受治疗者(6/81；7.4％)中，释放仅仅随肽MLA15或MLA16发生，其没有被包括在SEQ IDNO：1至7混合物中。MLA16是与组胺释放相关最频繁的肽。调整对于单种的肽的释放的值以仅将这些肽包括在优选的7种疫苗候选物中，23.5％的受治疗者显示对疫苗的单种的组分的组胺释放。 
5.2增殖测定 
测定了对具有3种浓度的单种的肽、7种肽(通过MHC结合测定选择的)的混合物和完整的猫皮屑变应原提取物的培养物应答的PBMC的增殖。还测定了作为正的回忆应答的标志物的对单一浓度的PPD的应答。 
PPD应答：92％的受治疗者具有对PPD的可检测的增殖应答。应答很大程度上取决于之前使用BCG的疫苗接种。非应答者可来自于其中BCG并不是义务性的国家(例如美国)或可因为其他原因没有接受免疫。大部分应答(92％)产生大于10的SI。这些被特意设定为“强的”应答。 
猫皮屑变应原提取物应答：75％的受治疗者具有对猫皮屑变应原提取物的可检测的增殖应答。通过强调测定活化的多种参数对确定反应性的重要性的细胞因子的测量检测到更频繁的应答。尽管观察到显著数量的中等(SI 5-10；24％)和强(SI 10+；17％)的应答，但大部分应答是弱的(SI2-5；59％)。 
肽混合物(P1-7)：与对猫皮屑变应原提取物相似，71％的受治疗者具有对肽混合物的应答。观察到相似百分比的弱(52％)、中等(34％)和强(14％)的应答。对猫皮屑变应原提取物和肽混合物的增殖应答紧密相关， 表明T细胞对猫皮屑的主要反应性可通过肽混合物中包含的表位来解释。 
单种肽的应答：对单种肽的增殖应答通常是弱至中等的。大部分肽在弱的类别中产生它们的70-80％的应答，以及中等类别中的20-30％的应答。几乎没有肽产生强的应答。比对复合体抗原或肽的混合物弱的对单种肽的应答是所期望的来自对个别的表位特异的T细胞的较低的前体频率的结果。 
对单种肽的最强的增殖应答是对来自Fel d1链2的P12(43％)，而最弱的是对来自链1的P4(6％)。然而，检测到对所有肽的细胞因子应答比增殖应答更频繁。 
5.3细胞因子测定 
细胞因子测量被证实是测量对肽的应答的最敏感的方法。通常与可测量的增殖应答相比，较高的百分比的受治疗者显示可测量的细胞因子应答。三种细胞因子中的每一种的产生随IL-10变化，IL-10通常由与IL-13和IFN-γ相比更多的比例的受治疗者产生。用IFN-γ检测应答的最低频率。这些受治疗者的特应性变应性状态可能意味着记忆T细胞对Fel d1和其表位的应答可能主要是Th2应答，其可以解释较小频率的Th1(IFN-γ)应答。高频率的IL-10应答是个意外。IL-10被认为是鼠系统中的Th2细胞因子，但在人系统中并没有充分确立。IL-10通常被认为是调控/免疫抑制的细胞因子。之前的报道已经表明一些肽序列可具有固有的IL-10诱导特性。本研究中没有观察这种肽。这种应答在其他系统中的检测可能仅仅反映了引发整个变应原的T细胞的性质，其通过记忆T细胞与肽一起的培养被恢复。因此，IL-10的产生可能是回忆应答，而不是肽的固有的IL-10诱导的特征的结果。 
没有单一的肽诱导特定的细胞因子的优先产生。因此，没有一种所筛选的肽诱导已经被认为对于被包含在肽疫苗中来说是不期望的特定的不良的Th2(IL-13)应答。 
5.4组织分型 
组织分型的结果显示在这一研究中测定了代表性的群体。 
6.结论 
6.1组胺释放测定 
单种肽在一些个体中诱导组胺释放。优选的肽SEQ ID NO：1至7的混合物在4个个体中诱导组胺释放，尽管这些释放中的两个是在单一点(最高浓度)被检测的。MLA16产生最频繁的释放但是不在SEQ ID NO：1至7中。在缺少来自完整的猫皮屑的“阳性对照释放”的情况下，用肽观察到一些正的释放。测定被设计以检测约为治疗剂量和治疗剂量以上的肽浓度的组胺释放。相当于治疗剂量的肽浓度的组胺释放是非常少见的(只有一个明显的实例)，并且仅随单种肽而不随SEQ ID NO：1至7发生。 
体外组胺释放测定的结果有可能过度表现了疫苗的组胺释放潜能，因为没有采用将肽之间的二硫键形成最小化的步骤。 
当完整的猫皮屑提取物存在的情况下，通过来自大多数个体的嗜碱性粒细胞释放组胺。在许多受治疗者中，与随肽的释放相比，组胺释放以剂量依赖的形式发生，所述随肽的释放常常在剂量范围的中间的浓度发生。在通过肽释放组胺的个体中，在提取物的较低剂量时对猫皮屑提取物的敏感度通常是明显的。 
6.2增殖测定 
如所期待的，对肽的增殖应答比对肽混合物或复合体蛋白抗原的弱。大多数单种的肽在少于20％的个体中引起增殖应答。在肽之间观察到相当大的变化，但是没有单一肽不能在至少一些受治疗者中引起增殖应答，尽管优选的7种肽中的一种即MLA04在诱导增殖方面比较差。肽MLA15和MLA16在诱导增殖方面比优选的7种肽中的几种更有潜力，但是产生最高的组胺释放。 
6.3细胞因子测定 
在本研究中对于检测对肽的应答来说，细胞因子产生是比增殖更敏感的方法。没有获得证据支持某些肽可具有诱导特定模式的细胞因子产生的固有能力的观点。没有单独的肽优选地引发Th1、Th2或Treg(IL-10)应答。IFN-γ应答往往没有IL-13和IL-10常见。细胞因子测定数据没有表明 优选的肽混合物中的任一种被取代或任何单独的肽或混合物将优选地在体内诱导Th2应答。 
实施例3：优选的组合的临床试验 
由肽MLA01、03、04、05、07、12、14(SEQ ID NO：1至7)组成的7种肽的优选的混合物已经在随机、安慰剂对照、盲法临床试验中被测试。评估了这一混合物在减少变应性症状上的功效。临床试验的研究设计依照良好的临床实践规范。 
使用在研究药物施用前6和8天之间发生的基线攻击建立所有受治疗者的对猫变应原的基线皮肤应答。将0.010HEP(组胺当量点刺)单位的商业上可获得的标准猫变应原(由Laboratories Leti，Spain提供)间隔30分钟的时间间隔两次皮内注射，分别施用至左前臂和右前臂的手掌表面。受治疗者被评估以确保它们经历对整个猫变应原的晚期皮肤应答(LPSR)以及如下记录基线反应的量： 
每次注射之后8小时，将任一晚期应答的轮廓用圆珠笔画在皮肤上。测量每个应答的最长和垂直的直径并记录，并计算每臂上的应答的面积。之后计算每个受治疗者两臂上应答的平均面积以提供基线反应。产生适当基线反应的受治疗者被设定为给药组，随机选择并进入治疗期。 
治疗期是由每个受治疗者21天的时间段组成。在这一时间段中，在第一天的治疗期第1次随访时，一组受治疗者接受一次优选混合物(每剂量每种肽0.03、0.3、3、12nmol)或稀释的安慰剂皮内注射。一小组8个受治疗者在每个剂量水平接受治疗(6个接受优选的混合物，2个接受安慰剂)。皮内组的第一小组接受混合物中的0.03nmol的每种肽，并且组中每个接着的小组接受下一个较高的剂量水平。 
向左前臂的屈肌表面进行皮内注射。对所有注射来说注射的总体积是60μL。治疗后，在第21天(±3天)的治疗期第2次随访时，重新测量受治疗者对整体变应原的皮肤应答。通过如上文所述的皮内施用0.010HEP(组胺当量点刺)单位的商业上可获得的标准猫变应原(由LaboratoriesLeti，Spain提供)之后8小时测量晚期应答来评估对猫变应原的皮肤应答。 之后如前文所描述的计算每个受治疗者的两臂的应答的平均面积。 
然后，将这一治疗后的平均LPSR面积与每个受治疗者的基线LPSR面积相比较。之后评估每小组中所有8个患者的LPSR面积上的总体变化。这一分析的结果示于下文的表中。进行这一分析而未将数据除盲化。 
  剂量(nmol)   治疗之后LPSR  面积上的减少
  0.03   +
  0.3   ++
  3.0   ++
  12.0   ++
图8是显示12.0nmol小组中所有八个患者的治疗之前和之后的平均LPSR面积的代表性图。总的来说，这些数据表明优选的肽的混合物在减少猫变应性个体中对完整的变应原的LPSR上是有效的。 

Claims (6)

1.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗个体中对猫的变态反应的组合物，其包含一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂和包含多肽作为仅有的治疗成分：
CPAVKRDVDLFLT（SEQ ID NO:1）、
EQVAQYKALPVVLENA（SEQ ID NO:2）、
KALPVVLENARILKNCV（SEQ ID NO:3）、
RILKNCVDAKMTEEDKE（SEQ ID NO:4）、
KENALSLLDKIYTSPL（SEQ ID NO:5）、
TAMKKIQDCYVENGLI（SEQ ID NO:6）和
SRVLDGLVMTTISSSK（SEQ ID NO:7）；
其中所述组合物不包含其它多肽。
2.如权利要求1所述的组合物，其中每种多肽具有0.03nmol/ml至200nmol/ml范围的浓度。
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述范围是0.3nmol/ml至200nmol/ml。
4.如权利要求2所述的组合物，其中所述范围是10nmol/ml至50nmol/ml。
5.如权利要求1所述的组合物，所述组合物被提供为可注射的溶液、悬浮液或乳液。
6.如权利要求1所述的组合物，其经配制用于肠胃外施用、皮下施用、皮内施用或经皮施用。
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