CN101605770A

CN101605770A - 盐668

Info

Publication number: CN101605770A
Application number: CNA2008800046169A
Authority: CN
Inventors: 罗伯特·惠托克; 简·威思内尔
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2007-02-08
Filing date: 2008-02-06
Publication date: 2009-12-16
Also published as: US20080249145A1; KR20090107054A; TW200845970A; AR065278A1; RU2009133254A; UY30903A1; AU2008212714A1; IL199913A0; JP2010518057A; CL2008000399A1; US8058294B2; CA2675994A1; US20100093813A1; ECSP099580A; PE20090646A1; EP2118084A1; GB0702458D0; CO6241151A2; MX2009008371A; BRPI0807727A2

Abstract

本发明披露了N－[2－(二乙基氨基)乙基]－N－(2－{[2－(4－羟基－2－氧代－2，3－二氢－1，3－苯并噻唑－7－基)乙基]氨基}乙基)－3－[2－(萘－1－基)乙氧基]丙酰胺的药用盐，前提是其不是二氢溴酸盐或二盐酸盐；以及披露了所述化合物作为药物的用途，例如，用于治疗呼吸系统病症，例如哮喘或COPD中。

Description

盐668

技术领域

本发明涉及N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的新的盐形式，含有所述新的盐形式的组合物，制备所述盐形式的方法和所述盐形式在治疗病症(例如，呼吸系统病症(respiratory disease states)，例如哮喘或COPD)中的用途。

背景技术

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺游离碱及其二氢溴酸盐和二盐酸盐为β2肾上腺素受体激动剂，并披露在PCT/SE2006/000927(公开号WO 2007/018461，参见实施例7、15和16)中。这些化合物对β2肾上腺素受体的选择性是对肾上腺素能α1D、肾上腺素能β1和多巴胺D2的至少10倍。

发明内容

本发明提供了N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的药用盐，前提是所述盐不是二氢溴酸盐或二盐酸盐。

药用盐包括例如三氟乙酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、硫酸氢盐、苯磺酸盐、乙磺酸盐、丙二酸盐、昔萘甲酸盐(xinafoate)、抗坏血酸盐、油酸盐、烟酸盐、糖精酸盐(saccharinate)、己二酸盐、甲酸盐、羟乙酸盐、L-乳酸盐、D-乳酸盐、天冬氨酸盐、苹果酸盐、L-酒石酸盐、D-酒石酸盐、硬脂酸盐、2-糠酸盐、3-糠酸盐、萘二磺酸盐(萘-1，5-二磺酸盐或萘-1-(磺酸)-5-磺酸盐)、乙二磺酸盐(乙烷-1，2-二磺酸盐或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸盐)、羟乙磺酸盐(2-羟基乙基磺酸盐)、均三甲苯-2-磺酸盐或萘-2-磺酸盐。合适的盐也可是D-扁桃酸盐或L-扁桃酸盐。

本发明的盐可作为溶剂化物(例如水合物)存在，本发明涵盖所有这样的溶剂化物。

在一个具体方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的药用盐，所述盐为柠檬酸盐、二甲苯磺酸盐(ditosylate)、磷酸盐、二昔萘甲酸盐、硫酸盐、单苯甲酸盐、富马酸盐或苯磺酸盐。

在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的单-柠檬酸盐。

在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的柠檬酸盐，所述盐的X-射线粉末衍射(XRPD)图具有下述的特征峰：4.4(±0.1°)，7.2(±0.1°)，13.7(±0.1°)，17.4(±0.1°)，18.7(±0.1°)和21.4(±0.1°)2θ。

可通过如下方式制备柠檬酸盐：将柠檬酸加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺于合适脂肪族醇(例如，甲醇)中的溶液中，使所有物质溶解(如有必要，在升高的温度(elevated temperature))，使溶液冷却，柠檬酸盐随之从溶液中沉淀并可将其收集。

在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的二昔萘甲酸盐。

又在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的二昔萘甲酸盐，其为二水合物(di-hydrate)，其X-射线粉末衍射图具有下述的特征峰：4.8(±0.1°)、7.7(±0.1°)、9.1(±0.1°)、12.2(±0.1°)、16.1(±0.1°)和21.3(±0.1°)2θ。

在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的二昔萘甲酸盐，其为二-半-水合物(Di-Hemi-Hydrate)，其X-射线粉末衍射图具有下述的特征峰：8.5(±0.1°)、9.4(±0.1°)、11.6(±0.1°)、11.9(±0.1°)、16.6(±0.1°)、17.7(±0.1°)和22.4(±0.1°)2θ。

可通过如下方式制备昔萘甲酸盐：将1-羟基-萘-2-甲酸加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺于合适脂肪族醇(例如，甲醇)中的溶液中，在升高的温度(例如，回流温度)混合，并使其冷却，随之可收集昔萘甲酸盐。

在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的磷酸盐。

又在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的磷酸盐，其为二-半-水合物，其X-射线粉末衍射图具有下述的特征峰：5.5(±0.1°)、8.4(±0.1°)、9.04(±0.1°)、11.8(±0.1°)、16.3(±0.1°)和20.6(±0.1°)2θ。

可通过如下方式制备磷酸盐：将磷酸加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺于合适脂肪族醇(例如，甲醇)的溶液中，在升高的温度(例如，回流温度)混合，并使其冷却，随之可收集磷酸盐。

在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的单苯甲酸盐。

又在另一个方面，本发明提供N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的单苯甲酸盐的结晶形式，其X-射线粉末衍射图具有下述的特征峰：5.6(±0.1°)、8.3(±0.1°)、9.5(±0.1°)、14.8(±0.1°)、20.1(±0.1°)和22.5(±0.1°)2θ。

可通过如下方式制备苯甲酸盐：将苯甲酸加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺于合适脂肪族醇(例如，甲醇)中的溶液中，混合(例如，在室温(例如，10-30℃))，然后收集苯甲酸盐。

本发明的盐可通过使用上面介绍的方法；下面制备或实施例中介绍的方法；或文献中描述的方法来制备，或者对这些所述方法进行调整来制备。

本发明的盐可用在治疗如下疾病中：

1.呼吸道：气道阻塞性疾病，包括哮喘，包括支气管哮喘、过敏性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、运动诱发性哮喘、药物诱发性(包括阿司匹林和NSAID诱发的)哮喘和粉尘诱发性哮喘，间歇性哮喘和持续性哮喘，以及各种严重度的哮喘，及其它原因引起的气道高反应性；慢性阻塞性肺病(COPD)；支气管炎，包括传染性支气管炎和嗜酸性支气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺及相关疾病；超敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质性肺炎、抗肿瘤治疗和慢性感染(包括结核病和曲霉病及其它真菌感染)并发的纤维化；肺移植的并发症；肺血管的血管炎和血栓形成疾病及肺动脉高压；镇咳活性，包括治疗与气道炎症和分泌情况相关的慢性咳嗽及医源性咳嗽；急性鼻炎和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管运动性鼻炎；常年性(perennial)过敏性鼻炎和季节性过敏性鼻炎，包括神经性鼻炎(花粉症)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括普通感冒和由呼吸道合胞病毒、流行性感冒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒引起的感染；或嗜酸性食管炎(eosinophilic esophagitis)

2.骨和关节：与骨关节炎/骨关节病相关或包括骨关节炎/骨关节病的关节炎，包括原发性关节炎和继发性关节炎，例如先天性髋关节发育不良；颈和腰脊椎炎及腰背痛和颈部疼痛；骨质疏松；类风湿性关节炎和斯蒂尔病(Still’s disease)；血清阴性脊柱关节病，包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎和未分化脊柱关节病；脓毒性关节炎和其它感染相关的关节病和骨疾病，例如结核病，包括波特病(Potts’disease)和蓬塞综合征(Poncet’s syndrome)；晶体诱发的急性和慢性滑膜炎，包括尿酸盐沉积病、焦磷酸钙沉积病和钙磷灰石相关的腱、粘液囊和滑膜炎症；贝切特病(Behcet’s disease)；原发性和继发性斯耶格伦综合征(Sjogren’s syndrome)；全身性硬化和局限性硬皮病；系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病和未分化结缔组织病；炎性肌病，包括皮肌炎和多肌炎；风湿性多肌痛；幼年型关节炎，包括分布在任何关节的特发性炎性关节炎及相关综合征和风湿热及其全身性并发症；血管炎(vasculitis)，包括巨细胞性动脉炎、高安动脉炎(Takayasu’s arteritis)、丘-施综合征(Churg-Strauss syndrome)、结节性多动脉炎、显微镜性多动脉炎和与病毒感染、超敏反应、冷球蛋白和异蛋白相关的血管炎；腰背痛；家族性地中海热、穆-韦综合征(Muckle-Wells syndrome)和家族性爱尔兰热(Familial Hibemian Fever)、菊池病(Kikuchi disease)；药物诱发性关节痛、腱炎和肌病；

3.由损伤(例如运动损伤)或疾病引起的疼痛和结缔组织再造的肌肉骨骼疾病：关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风或晶体性关节病)、其它关节疾病(例如椎间盘变性或颞下颌关节变性)、骨再造疾病(例如骨质疏松、佩吉特病(Paget’s disease)或骨坏死)、多软骨炎、硬皮病、混合性结缔组织病、脊椎关节病或牙周病(例如牙周炎)；

4.皮肤：牛皮癣、特应性皮炎、接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病及迟发型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、扁平苔癣、萎缩性硬化性苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、盘状红斑狼疮、天疱疮、类天疱疮、大疱性表皮松解、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、中毒性红斑、皮肤嗜酸粒细胞增多、斑秃、男性型脱发、斯威特综合征(Sweet’s syndrome)、韦-克综合征(Weber-Christian syndrome)、多形性红斑；蜂窝组织炎，包括传染性和非传染性蜂窝组织炎；脂膜炎；皮肤淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌和其它发育不良性损伤；药物诱发的疾病，包括固定性药疹；

5.眼：睑炎；结膜炎，包括常年性过敏性结膜炎或春季过敏性结膜炎；虹膜炎；前色素层炎和后色素层炎；脉络膜炎；自身免疫；影响视网膜的变性或炎性疾病；眼炎，包括交感性眼炎；结节病；感染，包括病毒、真菌和细菌感染；

6.胃肠道：舌炎、龈炎、牙周炎；食管炎，包括返流；嗜酸性胃肠炎、肥大细胞增多、克罗恩病(Crohn’s disease)、结肠炎包括溃疡性结肠炎、直肠炎、肛门瘙痒；腹部疾病、肠应激综合征，以及具有远离肠作用的食物相关的变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿疹)；

7.腹部：肝炎，包括自身免疫性、酒精性和病毒性肝炎；肝纤维化和硬化；胆囊炎；胰腺炎，包括急性和慢性胰腺炎；

8.生殖泌尿系统：肾炎，包括间质性肾炎和肾小球性肾炎；肾病综合征；膀胱炎，包括急性和慢性(间质性)膀胱炎和杭纳溃疡(Hunner’s ulcer)；急性和慢性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩伦涅病(Peyronie’s disease)；勃起机能障碍(男性和女性)；

9.同种异体移植物排斥：在例如肾脏、心脏、肝脏、肺脏、骨髓、皮肤或角膜移植后或在输血后出现的急性和慢性同种异体移植物排斥；或慢性移植物抗宿主病；

10.CNS：阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)和其它痴呆疾病包括CJD和nvCJD；淀粉样变性病；多发性硬化和其它脱髓鞘综合征；脑动脉粥样硬化和血管炎；颞动脉炎；重症肌无力；急性和慢性疼痛(急性、间歇性或持续性疼痛，无论是中枢源性的还是外周源性的)，包括内脏痛、头痛、偏头痛、三叉神经痛、不典型面痛、关节和骨痛、由癌症和肿瘤侵入引起的疼痛、神经性疼痛综合征包括糖尿病性、疱疹后和HIV相关的神经病；神经性肉样瘤病；恶性、感染性或自身免疫性过程的中枢和外周神经系统并发症；

11.其它自身免疫性和变态反应性疾病，包括桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、格雷夫斯病(Graves’disease)、阿狄森病(Addison’s disease)、糖尿病、特发性血小板减少性紫癜、嗜酸性筋膜炎、高IgE综合征、抗磷脂综合征；

12.其它带有炎性或免疫性组成的疾病，包括获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、麻风病、塞扎里综合征(Sezary syndrome)和瘤外综合征；

13.心血管：影响冠脉和外周循环的动脉粥样硬化；心包炎；心肌炎；炎性和自身免疫性心肌病，包括心肌结节病；缺血性再灌注损伤；心内膜炎、心瓣炎和主动脉炎，包括传染性(例如梅毒性)的；血管炎；近端和外周静脉的疾病，包括静脉炎和血栓形成包括深静脉血栓形成及静脉曲张的并发症；

14.肿瘤：对一般癌症的治疗，包括前列腺、乳腺、肺、卵巢、胰腺、肠和结肠、胃、皮肤和脑肿瘤及影响骨髓(包括白血病)和淋巴增生系统的恶性肿瘤(例如何杰金(Hodgkin’s)和非何杰金淋巴瘤)；包括对转移性疾病和肿瘤复发及瘤外综合征的预防和治疗；和

15.胃肠道：腹部疾病、直肠炎、嗜酸性胃肠炎、肥大细胞增生、克罗恩病、溃疡性结肠炎、显微镜性结肠炎、不确定性结肠炎、肠应激病、肠应激综合征、非炎性腹泻、具有远离肠作用的食物相关的变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿疹)。

因此，本发明提供上述定义的盐，其用于治疗。

另一方面，本发明提供如上定义的盐在制备用于治疗(例如，治疗呼吸系统病症)的药物中的用途。

又一方面，本发明提供如上定义的盐，其用于治疗呼吸系统病症。

在本申请说明书的上下文中，除非另有相反的具体说明，术语“治疗”也包括“预防”。术语“治疗的”和“治疗地”也可相应地解释。

预防被认为与患有所述疾病或病症的先前发作的人员的治疗特别有关，或被认为与处于所述疾病或病症的增加危险之中的人员的治疗特别有关。处于形成具体疾病或病症的危险之中的人员，通常包括具有该疾病或病症的家族史的那些人员，或已经通过遗传学试验或筛选确定为对特别易患该疾病或病症的那些人员。

本发明还提供治疗炎症性疾病或病症(包括可逆的阻塞性气道疾病或病症)或降低所述疾病或病症风险的方法，所述方法包括向需要治疗的患者给药治疗有效量的如上定义的盐。

具体地，本发明的盐可用在治疗成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、支气管炎、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘和鼻炎中。

对于上述治疗用途，剂量当然会随所采用的化合物、给药模式、所期望的治疗和所指出的紊乱而变化。例如，如果吸入给药，本发明化合物的剂量可在0.05微克/千克体重(μg/kg)至100微克/千克体重(μg/kg)的范围内。可选择地，如果化合物口服给药，则本发明化合物的每日剂量可在0.01微克/千克体重(μg/kg)至100毫克/千克体重(mg/kg)的范围内。

本发明的盐可单独使用，但通常以药物组合物的形式给药，其中本发明的盐(活性成分)与药用助剂、稀释剂或载体结合。用于选择和制备合适药物制剂的常规方法描述在例如″Pharmaceuticals-The Science of Dosage FormDesigns″，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988中。

依赖于给药模式，所述药物组合物可包含例如0.05至99％w(重量百分比)，例如0.05至80％w，例如0.10至70％w，以及例如0.10至50％w活性成分，所有重量百分比都基于组合物总重量。

本发明也提供药物组合物，其包含如上所定义的盐和药用助剂、稀释剂或载体。

本发明还提供制备本发明组合物的方法，所述方法包括将如上所定义的盐与药用助剂、稀释剂或载体混合。

本发明的药物组合物可以局部给药(例如给药至皮肤或给药至肺和/或气道)，例如以乳膏剂、溶液剂、混悬剂、七氟代烷(HFA)气雾剂和干粉制剂(例如在称为

的吸入装置中的制剂)的形式局部给药；或全身给药，例如以片剂、胶囊剂、糖浆剂、粉剂或颗粒剂的形式口服给药；或溶液剂或混悬剂的形式胃肠外给药；或皮下给药；或以栓剂的形式直肠给药；或经皮给药。

本发明盐的干粉制剂和加压HFA气雾剂可通过口或鼻吸入给药。就吸入而言，化合物理想的是微细分散的。微细分散的化合物的质量中值直径优选小于10μm，并且可在分散剂(例如C₈-C₂₀脂肪酸或其盐(例如油酸)、胆汁盐、磷脂、烷基糖、全氟化或聚乙氧基化表面活性剂或其它药用分散剂)的辅助下，将微细分散的化合物悬浮于喷射剂混合物中。

本发明的盐也可通过干粉吸入器的途径给药。所述吸入器可以是单一或多剂量吸入器，以及可以是呼吸驱动的干粉吸入器。

一种可能性是混合微细分散的本发明化合物与载体物质例如单糖、二糖或多糖、糖醇或另一种多元醇混合。合适的载体有糖例如乳糖、葡萄糖、棉子糖、松三糖、乳糖醇、麦芽醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇或淀粉。可供选择地，微细分散的化合物可用另一种物质包衣。也可将该粉末混合物分装到硬明胶胶囊中，每个胶囊均包含所需剂量的活性化合物。

另一种可能性是将微细分散的粉末制成球，所述球在吸入操作期间碎裂。可将这种球化粉末装到多剂量吸入器(例如称为

)的储药器中，其中计量给药单元计量出所需的剂量，所需的剂量然后会被患者吸入。利用该系统，在存在或不存在载体物质的情况下，将活性化合物给予患者。

对于口服给药，本发明的化合物可与辅料或载体，例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇；淀粉，例如马铃薯淀粉、玉米淀粉或支链淀粉；纤维素衍生物；粘合剂，例如明胶或聚乙烯吡咯烷酮，和/或润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等混合，然后压制成片。如果需要包衣片，那么如上所述制备的片芯可用浓的糖溶液包衣，所述糖溶液可包含例如阿拉伯胶、明胶、滑石和二氧化钛。可供选择地，片可用溶解在易挥发有机溶剂中的合适聚合物包衣。

为了制备软明胶胶囊，可将本发明的化合物与，例如植物油或聚乙二醇混合。硬明胶胶囊可包含所述化合物的颗粒，所述颗粒使用用于片剂的任一上述赋形剂。也可将本发明化合物的液体或半固体制剂装到硬明胶胶囊中。

用于口服给药的液体制剂的形式可以是糖浆剂或混悬剂，例如包含本发明的盐以及余量为糖以及乙醇、水、甘油和聚丙二醇的混合物的溶液。任选地，这些液体制剂可包含着色剂、调味剂、糖精和/或作为增稠剂的羧甲基纤维素或本领域技术人员已知的其它赋形剂。

本发明的盐也可与另一种用于治疗一种或多种上述病症的化合物结合给药。

因此，本发明还涉及联合治疗，其中本发明的盐或包含本发明的盐的药物组合物或制剂与另一种治疗剂或多种治疗剂同时或先后给予，或与另一种治疗剂或多种治疗剂一起作为组合制剂来给予，用于治疗所列出病症中的一种或多种。

具体地，为了治疗炎症疾病，例如(但不局限于)类风湿性关节炎、骨关节炎、哮喘、过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癣和炎性肠病，可将本发明的盐与以下药物之一组合：非甾类抗炎药(在下文中为NSAIDs)，包括无论局部应用还是全身应用的非选择性环氧化酶COX-1/COX-2抑制剂(例如吡罗昔康；双氯芬酸；丙酸类，例如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬；芬那酸类，例如甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗(azapropazone)；吡唑酮类，例如保泰松；水杨酸盐(酯)，例如阿司匹林)；选择性COX-2抑制剂(例如美洛昔康、塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、鲁马考昔(lumarocoxib)、帕瑞考昔和艾托考昔)；抑制环氧化酶的一氧化氮供体(CINODs)；糖皮质激素(无论通过局部、口服、肌内、静脉内途径还是通过关节内途径来给药)；甲氨蝶呤；来氟米特；羟氯喹；d-青霉胺；金诺芬或其它胃肠外或口服金制剂；镇痛药；双醋瑞因(diacerein)；关节内治疗剂，例如透明质酸衍生物；和营养补剂，例如氨基葡萄糖。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：细胞因子或细胞因子功能的激动剂或拮抗剂(包括作用于细胞因子信号传导路径的药物，例如SOCS系统的调节剂)，包括α-、β-和γ-干扰素；I型胰岛素样生长因子(IGF-1)；白介素(IL)，包括IL1至17和白介素拮抗剂或抑制剂(例如阿那白滞素)；α肿瘤坏死因子(TNF-α)抑制剂，例如抗TNF单克隆抗体(例如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)和CDP-870)和TNF受体拮抗剂(包括免疫球蛋白分子(例如依那西普)和低分子量药物(例如己酮可可碱(pentoxyfylline)))。

另外，本发明涉及本发明的盐与以下物质的组合：靶向于B淋巴细胞的单克隆抗体(例如CD20(利妥昔单抗(rituximab))、MRA-aIL16R)和靶向于T淋巴细胞的单克隆抗体(CTLA4-Ig、HuMax Il-15)。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：趋化因子受体功能调节剂，例如CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(C-C家族)的拮抗剂；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(C-X-C家族)的拮抗剂；和CX₃CR1(C-X₃-C家族)的拮抗剂。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：基质金属蛋白酶(MMPs)即溶基质蛋白酶(stromelysin)、胶原酶和明胶酶及蛋白聚糖酶(aggrecanase)(尤其是胶原酶-1(MMP-1)、胶原酶-2(MMP-8)、胶原酶-3(MMP-13)、溶基质蛋白酶-1(MMP-3)、溶基质蛋白酶-2(MMP-10)和溶基质蛋白酶-3(MMP-11)及MMP-9和MMP-12)的抑制剂，包括药物，例如多西环素。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：白三烯生物合成抑制剂、5-脂肪氧化酶(5-LO)抑制剂或5-脂肪氧化酶活化蛋白(FLAP)拮抗剂，例如齐留通；ABT-761；芬留顿；替泊沙林；Abbott-79175；Abbott-85761；N-(5-取代的)-噻吩-2-烷基磺酰胺；2，6-二-叔丁基苯酚腙；甲氧基四氢吡喃，例如Zeneca ZD-2138；化合物SB-210661；吡啶基取代的2-氰基萘化合物，例如L-739，010；2-氰基喹啉化合物，例如L-746，530；或吲哚或喹啉化合物，例如MK-591、MK-886和BAY×1005。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：白三烯(LT)B4、LTC4、LTD4和LTE4的受体拮抗剂，选自吩噻嗪-3-基化合物，例如L-651，392；脒基化合物，例如CGS-25019c；苯并噁胺(benzoxalamine)，例如昂唑司特；苯甲脒(benzenecarboximidamide)，例如BIIL 284/260；和化合物，例如扎鲁司特、阿鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、维鲁司特(MK-679)、RG-12525、Ro-245913、伊拉司特(CGP 45715A)和BAY×7195。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，例如甲基黄嘌呤(methylxanthanine)，包括茶碱和氨茶碱；选择性PDE同工酶抑制剂，包括PDE4抑制剂、同工型PDE4D抑制剂或PDE5抑制剂。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：组胺1型受体拮抗剂，例如西替利嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮斯汀、左卡巴斯汀、氯苯那敏、异丙嗪、赛克力嗪(cyclizine)或咪唑斯汀；口服、局部或胃肠外给药。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：质子泵抑制剂(例如奥美拉唑)或胃保护性组胺2型受体拮抗剂。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：组胺4型受体拮抗剂。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：α1/α2肾上腺素受体激动剂、血管收缩药、拟交感神经药，例如丙己君(propylhexedrine)、苯福林、苯丙醇胺、麻黄碱、伪麻黄碱、盐酸萘甲唑啉、盐酸羟甲唑啉、盐酸四氢唑啉、盐酸木甲唑啉、盐酸曲马唑啉或盐酸乙基去甲肾上腺素。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：抗胆碱能药，包括毒蕈碱受体(M1、M2和M3)拮抗剂，例如阿托品、东莨菪碱、格隆铵(glycopyrrrolate)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)、噻托溴铵(tiotropiumbromide)、氧托溴铵(oxitropium bromide)、哌仑西平(pirenzepine)或替仑西平(telenzepine)。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：色原酮，例如色甘酸钠或奈多罗米钠。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：糖皮质激素，例如氟尼缩松、曲安奈德、二丙酸倍氯美松、布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：调节核激素受体(例如PPARs)的药物。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：免疫球蛋白(Ig)或Ig制品；或调节Ig功能的拮抗剂或抗体，例如抗IgE(例如奥马珠单抗(omalizumab))。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：另一种全身或局部应用的抗炎药，例如沙利度胺(thalidomide)或其衍生物、类维生素A、地蒽酚(dithranol)或卡泊三醇(calcipotriol)。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：氨基水杨酸盐(酯)和磺胺吡啶(例如柳氮磺吡啶、美沙拉嗪、巴柳氮和奥沙拉嗪)的组合；和免疫调节药，例如硫代嘌呤和皮质类固醇(例如布地奈德)。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：抗菌药，例如青霉素衍生物、四环素、大环内酯、β-内酰胺、氟喹诺酮、甲硝唑、吸入性氨基糖苷；抗病毒药，包括阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦、金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、扎那米韦(zanamavir)和特敏服(oseltamavir)；蛋白酶抑制剂，例如茚地那韦、奈非那韦、利托那韦和沙奎那韦；核苷逆转录酶抑制剂，例如去羟肌苷、拉米夫定、司他夫定(stavudine)、扎西他宾或齐多夫定；或非核苷逆转录酶抑制剂，例如奈韦拉平(nevirapine)或依法韦仑(efavirenz)。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：心血管药，例如钙通道阻断剂、β-肾上腺素受体阻断剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素2受体拮抗剂；降脂药，例如抑制素或贝特类；血细胞形态学调节剂，例如配妥西菲林(pentoxyfylline)；溶栓药或抗凝药，例如血小板聚集抑制剂。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：CNS药，例如抗抑郁药(例如舍曲林)、抗帕金森药(例如丙炔苯丙胺、L-多巴、罗匹尼罗、普拉克索、MAOB抑制剂(例如司来吉兰和雷沙吉兰)、comp抑制剂(例如托卡朋(tasmar))、A-2抑制剂、多巴胺重摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、尼古丁激动剂、多巴胺激动剂或神经元一氧化氮合酶抑制剂)或抗阿耳茨海默药(例如多奈哌齐(donepezil)、利伐斯的明、他克林、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或美曲磷酯)。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：用于治疗急性或慢性疼痛的药物，例如在中枢或外周发挥作用的止痛药(例如阿片样物质或其衍生物)、卡马西平、苯妥英、丙戊酸钠、阿米替林(amitryptiline)或其它抗抑郁药、对乙酰氨基酚或非甾类抗炎药。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：胃肠外或局部应用的(包括吸入的)局麻药，例如利诺卡因或其衍生物。

本发明的盐也可与以下物质联用：抗骨质疏松药，包括激素药物(例如雷洛昔芬(raloxifene))或二膦酸盐(例如阿伦膦酸盐(alendronate))。

本发明还涉及本发明的盐与以下物质的组合：(i)类胰蛋白酶(tryptase)抑制剂；(ii)血小板活化因子(PAF)拮抗剂；(iii)白介素转化酶(ICE)抑制剂；(iv)IMPDH抑制剂；(v)粘附分子抑制剂，包括VLA-4拮抗剂；(vi)组织蛋白酶；(vii)激酶抑制剂，例如酪氨酸激酶(例如Btk、Itk、Jak3或MAP)抑制剂(例如吉非替尼(gefitinib)或甲磺酸伊马替尼(imatinib))、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如MAP激酶(例如p38，JNK，蛋白激酶A、B或C，或IKK)抑制剂)或在细胞周期调节中牵涉的激酶(例如细胞周期蛋白依赖性激酶)的抑制剂；(viii)葡萄糖-6磷酸脱氢酶抑制剂；(ix)激肽B₁受体或激肽B₂受体拮抗剂；(x)抗痛风药，例如秋水仙碱；(xi)黄嘌呤氧化酶抑制剂，例如别嘌醇；(xii)排尿酸药，例如丙磺舒、磺吡酮或苯溴马隆；(xiii)生长激素促分泌剂；(xiv)转化生长因子(TGFβ)；(xv)血小板源性生长因子(PDGF)；(xvi)成纤维细胞生长因子，例如基本的成纤维细胞生长因子(bFGF)；(xvii)粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；(xviii)辣椒素油(capsaicin cream)；(xix)速激肽NK₁受体或速激肽NK₃受体拮抗剂，例如NKP-608C、SB-233412(他奈坦(talnetant))或D-4418；(xx)弹性酶抑制剂，例如UT-77或ZD-0892；(xxi)TNF-α转化酶抑制剂(TACE)；(xxii)诱导的一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂；(xxiii)TH2细胞上表达的化学引诱物受体同源分子(例如CRTH2拮抗剂)；(xxiv)P38的抑制剂；(xxv)调节Toll样受体(TLR)功能的药物；(xxvi)调节嘌呤能受体活性的药物，例如P2X7；(xxvii)转录因子活化抑制剂，例如NFkB、API或STATS；或(xxviii)糖皮质激素受体激动剂。

一般制备方法

如下是制备N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(在制备、实施例和测定中称作化合物A)的方法，也有显示该化合物活性的测定方法以及数据。

在实施例中，将N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺称作化合物B。

在Varian Inova 400MHz或Varian Mercury-VX 300MHz设备上记录¹HNMR光谱。将氯仿-d(δ_H 7.27ppm)、二甲基亚砜-d₆(δ_H 2.50ppm)、乙腈-d₃(δ_H1.95ppm)或甲醇-d₄(δ_H 3.31ppm)的中间峰用作内标。使用硅胶(0.040-0.063mm，Merck)进行柱色谱法。除非另有说明，起始物质是商购的。所有的溶剂和商购试剂都是实验室级的并原样使用。

下述方法用于LC/MS分析：

设备：Agilent 1100；柱：Waters Symmetry 2.1x 30mm；质量：APCI；流速：0.7ml/min；波长：254nm；溶剂A：水+0.1％TFA；溶剂B：乙腈+0.1％TFA；梯度：15至95％/B进行8分钟，95％B进行1分钟。

采用如下方式进行分析性色谱法：在Symmetry C₁₈-柱(2.1x 30mm，3.5μm粒径)上运行，用乙腈/水/0.1％三氟乙酸作为流动相，历时8分钟，梯度为5％至95％乙腈，流速为0.7ml/min。

设备细节：

○XRPD(X-射线粉末衍射)

构造的Philips X-Pert MPD机器，在2°至40°的扫描范围内，100-秒暴露/0.03°增量。通过在45kV和40mA操作的铜制长-细聚焦管(long-fine focus tube)产生X-射线。铜X-射线的波长为

(K_α1)和

(K_α2)。将数据收集到零背景支持器(zero backgroundholder)上，其上放置～2mg化合物。所述支持器由单晶硅制成，已经沿非衍射平面对其进行切割，然后在光学平面抛光机(optically flat finish)上进行抛光。入射在该表面上的X-射线被Bragg消散(extinction)抵消。XRPD数据呈现在下表中，以及提供了反射角度(°2θ)和D-间隔

数据(括号内的)。

○DSC(示差扫描量热法)热分析图是使用具有铝盘和穿孔盖(piercedlid)的TA Q1000机器测量的。样品重量在1至5mg之间变化。所述方法在氮气流(50ml/min)中进行，研究的温度以10℃/分钟的恒定温度增加速率从25℃增加至300℃。

○TGA(热解重量分析法)热分析图是使用TA Q500机器(具有铂盘)测量的。样品重量在2至15mg之间变化。所述方法在氮气流(60ml/min)中进行，研究的温度以10℃/分钟的恒定温度增加速率从25℃增加至300℃。

○¹³C CPMAS(交叉极化幻角自旋(Cross Polarisation Magic AngleSpinning))固态NMR光谱是使用Bruker Avance 400WB机器获得的。使用4mm探针并在下述参数条件对样品进行分析：倾斜的交叉极化(ramped crosspolarization)，tppm15复合脉冲，¹H去偶合(decoupling)，接触时间2ms，以及自旋速率5kHz。

○拉曼光谱是使用Jobin Yvon Horiba Lab Ram HR拉曼显微镜测量的。将固体样品(～0.1mg)放置在玻片上，激光束集中在代表整装样品的单个颗粒上。在200至2000cm^-1范围内，记录2-4分钟采集的光谱。

○IR光谱是使用配备Specac ATR附件的Perkin Elmer SpectrumgXFT-IR系统机器记录的。将固体样品(～1mg)放置在ATR的金刚石表面上，并施加70cN-M的压力。在4000至625cm^-1范围内，记录64次扫描的光谱，间隔为1cm^-1，分辨率为4cm^-1。

○GVS分布图是使用动态蒸汽吸收(Dynamic Vapour Sorption)DVS-1设备测量的。将约4-10mg的固体样品放置在玻璃容器上，在混合循环步骤方法(40至90至0至90至0％相对湿度(RH)，步长为10％RH)中在25℃记录样品重量。

○离子-化学计量法是使用KOH梯度和具有电化学检测的DionexAS11柱和Dionex IC3000设备进行的。

○溶液¹H NMR光谱是使用Varian Unity Inova光谱仪在400MHz质子频率记录的。

用在下面实施例中的缩写或术语具有如下含义：

SCX：使用磺酸吸附剂的固相萃取法

HPLC：高效液相色谱

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

制备1

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(化合物A)

a)3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸叔丁酯

萘-1-乙醇(10g)用苄基三甲基氢氧化铵(；0.9mL 40％甲醇溶液)处理，将所得混合物真空搅拌30分钟。然后将混合物冷却至0℃，用丙烯酸叔丁酯(8.19g)处理。将所得混合物缓慢温热至室温并搅拌过夜。随后将粗制混合物吸收到氧化铝(30g)上，并用乙醚(200mL)洗脱。浓缩有机物得到粗制物质(16.6g)，通过快速硅胶色谱法对所述粗制物质进行纯化(用乙醚∶己烷＝1∶8洗脱)，得到标题化合物(12.83g)。

¹H NMR(CDCl₃)δ8.05(dd，1H)，7.84(dd，1H)，7.72(dd，1H)，7.54-7.34(m，4H)，3.81-3.69(m，4H)，3.35(t，2H)，2.52-2.47(m，2H)，1.45(s，9H)。

b)3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸

将3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸叔丁酯(6.19g)吸收在二氯甲烷(30mL)中并用三氟乙酸(5mL)处理。将所得溶液在室温搅拌2小时，再加入1mL三氟乙酸，将溶液搅拌过夜。将混合物浓缩，吸收在浓度为2M的氢氧化钠溶液(30mL)中，用乙醚(ether，2x20mL)洗涤。随后将水层酸化(使用浓度为1M的盐酸溶液)，用乙醚(2x30mL)萃取。合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到小标题化合物(5.66g)，其为透明油状物。

¹H NMR(CDCl₃)δ8.05(bs，1H)，7.85(bs，1H)，7.74(bs，1H)，7.50-7.38(m，4H)，3.84-3.75(bm，4H)，3.39(bs，2H)，2.65(bs，2H)。

c)N-(2-二乙基氨基乙基)-N-(2-羟基乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]-丙酰胺

将草酰氯(0.33g)滴加到3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸(0.53g)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入二甲基甲酰胺(1滴)，继续在室温搅拌1小时。随后将混合物浓缩并重新悬浮在二氯甲烷(10mL)中，滴加到2-(2-二乙基氨基乙基氨基)乙醇(0.35g)和二异丙基乙基胺(0.56g)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌1小时，稀释(二氯甲烷，50mL)，用水(2x 20mL)、盐水(20mL)洗涤，硫酸镁干燥并浓缩，得到粗制产物(0.91g)，通过快速柱色谱法对所述粗制产物进行纯化(用5-7％甲醇/二氯甲烷洗脱)，得到0.63g小标题化合物。

¹H NMR(CDCl₃)δ8.05(d，1H)，7.85(d，1H)，7.73(d，1H)，7.52-7.47(m，2H)，7.42-7.35(m，2H)，3.84-3.78(m，6H)，3.72-3.70(m，1/2H)，3.45-3.35(m，6H)，2.79-2.77(m，1+1/2H)，2.62-2.58(m，2H)，2.54-2.49(m，4H)，1.04-1.01(m，6H)。

d)N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺

在-78℃，将二甲基亚砜(0.097g)于二氯甲烷(1mL)中的溶液加至草酰氯(0.079g)于二氯甲烷(10mL)的溶液中。将反应混合物搅拌15分钟，然后加入N-(2-二乙基氨基乙基)-N-(2-羟基乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]-丙酰胺(0.22g)于二氯甲烷(1mL+1mL洗液)中的溶液，将反应混合物再搅拌15分钟。加入三乙胺(0.29g)，历时1小时使反应混合物温热至室温，随后将混合物稀释(二氯甲烷，30mL)，有机物用碳酸氢钠溶液(20mL)、盐水(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到小标题化合物(0.21g)。

将粗制产物溶解在甲醇(10mL)中，并将7-(2-氨基乙基)-4-羟基-1，3-苯并噻唑-2(3H)-酮·盐酸盐(根据在Organic Process Research&Development 2004，8(4)，628-642中描述的方法制备；0.131g)与乙酸(0.1mL)和水(0.1mL)一起加入。在室温搅拌30分钟后，加入氰基硼氢化钠(0.020g)，将反应混合物搅拌过夜。加入氨(7N的甲醇溶液，1mL)，将混合物浓缩。通过快速色谱法对粗制残余物进行纯化(用1％氨；5％-7％甲醇/二氯甲烷洗脱)。将粗制产物直接用在下一步骤中。

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的再次制备提供了进行分析的样品。

¹H NMR(400MHz，DMSO)δ8.06(d，1H)，7.90(d，1H)，7.77(d，1H)，7.51(m，2H)，7.40(m，2H)，6.80(m，1H)，6.70(m，1H)，3.68(m，4H)，3.27(m，6H)，2.79-2.53(质子数目不能确定)，2.44(m，4H)，0.92(m，6H)。

图1：化合物B的无定形形式的XRPD

e)N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐

将N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.052g)溶解在乙醇(1.5mL)中，用48％氢溴酸(21μl)处理。过滤收集白色二氢溴酸盐固体(0.058g)。

MS：APCI(+ve)579(M+1)。

¹H NMR(DMSO)δ11.78-11.71(m，1H)，10.11-10.06(m，1H)，9.51-9.43(m，0.33H)，9.21-9.13(m，0.66H)，8.75-8.66(m，1H)，8.59-8.51(m，1H)，8.06(d，1H)，7.95-7.90(m，1H)，7.79(d，1H)，7.60-7.48(m，2H)，7.47-7.39(m，2H)，6.87(t，1H)，6.76(dd，1H)，3.78-3.53(m，10H)，3.25-3.09(m，10H)，2.91-2.80(m，2H)，2.73-2.61(m，2H)，1.26-1.15(m，6H)。NMR表明了在298K约2∶1旋转异构体的混合物。

图2：化合物A的多晶型物的XRPD

制备2

a)N′-(2，2-二甲氧基乙基)-N，N-二乙基-乙烷-1，2-二胺.

在10-15℃，将N，N-二乙基-乙二胺(150g)于甲醇(500mL)中的溶液用乙二醛缩二甲醇(60wt％水溶液，225g)逐滴快速处理。加入结束后，将溶液温热至15℃，然后温热至22℃，并在该温度保留16小时。将反应混合物用5％钯/炭(Johnson-Matthey型38H糊状物(paste)，15g)处理，在6巴氢化直到通过GC/MS判断反应结束。过滤除去催化剂，蒸发滤液至干(甲苯共沸物，2.5L)，得到196.2g小标题化合物。

¹H NMR(CDCl₃)：δ4.48(t，1H)，3.39(s，6H)，2.75(d，2H)，2.69(t，2H)，2.57-2.48(m，6H)，1.01(ts，6H)。

b)N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2，2-二甲氧基乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺.

历时45分钟，将草酰氯(151mL)滴加到3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸(389g)(实施例7步骤b))于二氯甲烷(2.1L)和DMF(0.5mL)中的溶液中。将反应混合物再搅拌16小时。随后将混合物浓缩，重新溶解在DCM(1.7L)中，在0℃和历时1.75小时滴加至N′-(2，2-二甲氧基乙基)-N，N-二乙基乙烷-1，2-二胺(325g)和异丙基二乙基胺(551mL)于DCM(1.7L)中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌3小时，用饱和溶液碳酸氢钠(5x1L)、水(1.5L)洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩得到650g小标题化合物。

m/e 431(M+H⁺，100％)

c)N-[2-(二乙基氨基)乙基]-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]-N-(2-氧代乙基)丙酰胺

在0℃和历时1.5小时，将N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2，2-二甲氧基乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(93g)于DCM(270mL)中的溶液用三氟乙酸(270mL)逐滴处理。加完后，使反应混合物温热至室温，并再搅拌1小时。将反应混合物浓缩，将残余物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(1800mL，小心！)中。将含水混合物用DCM(4x400mL)萃取，合并的萃取物用硫酸镁干燥并浓缩。将残余物直接用在下一反应中。

d)N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(化合物A)

将7-(2-氨基-乙基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮·盐酸盐(53g)于无水NMP(216mL)中的溶液加热至60℃，并用NaOH(8.2g)于甲醇(102mL)中的溶液一次性处理。将亮橙色悬浮液冷却到室温，并历时20分钟用N-[2-(二乙基氨基)乙基]-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]-N-(2-氧代乙基)丙酰胺于二氯甲烷(475mL)中的溶液逐滴处理。使反应混合物搅拌25分钟。然后历时20分钟逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠(91.5g)，将混合物再搅拌50分钟。将反应混合物倒入水(1.8L)中，用叔丁基甲基醚(TBME)(3x500mL)洗涤所得酸性溶液(pH5)。通过加入固体碳酸钾将水相碱化至pH8，用二氯甲烷(3x750mL)萃取；合并的有机物用硫酸镁干燥，浓缩得到黑色油状物。将该油状物溶解在乙醇(200mL)中，加入48％氢溴酸水溶液(73rnL)。将溶液老化30分钟，然后蒸干。将残余物用乙醇(560mL)研磨；过滤收集所得固体，在50℃真空干燥。将粘稠的固体悬浮在沸乙醇(100mL)中，趁热过滤。在50℃真空干燥收集的固体。将该物质从乙醇/水(3∶1，500mL)中重结晶。在静置过夜后，过滤收集所得固体，用冰冷的乙醇(75mL)洗涤。在真空干燥24小时，得到57g标题化合物。

制备3

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(化合物B)

将N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(10g)在饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和二氯甲烷(100mL)(加入少量甲醇以有助于溶解)。将混合物在室温搅拌1小时。然后将各相分离，水相用另一份二氯甲烷(100mL)萃取。合并的有机相用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和饱和盐水溶液(100ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发留下标题化合物(8.66g)。

¹H NMR(400MHz，DMSO)δ8.06(d，1H)，7.90(d，1H)，7.77(d，1H)，7.51(m，2H)，7.40(m，2H)，6.80(m，1H)，6.70(m，1H)，3.68(m，4H)，3.27(m，6H)，2.79-2.53(不能确定质子数目)，2.44(m，4H)，0.92(m，6H)。

制备4

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(化合物A)

将N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(例如，如在制备2中所制备)(1.88kg)于异丙醇∶水＝80∶20(20.97kg)中的悬浮液加热至回流。然后过滤溶液，使滤液冷却至50℃，然后加入N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二氢溴酸盐(1.08g)的晶种。在50℃温度保持20分钟，然后将反应混合物以速率0.1℃/min冷却到5℃，将悬浮液在5℃保持3天，然后过滤收集沉淀的物质。滤饼用异丙醇∶水＝80∶20(2.91kg)洗涤。然后在40℃真空干燥固体至恒重，得到标题化合物(1.545kg)。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.50-8.52(m，3H)，8.06(d，1H)，7.90(d，1H)，7.77(d，1H)，7.52(m，2H)，7.42(m，2H)，6.87(d，1H)，6.76(d，1H)，3.74(m，4H)，3.61(br，4H)，3.29(t，2H)，3.2-3.0(不能确定质子数目)，2.87(m，2H)，2.65(t，2H)，1.22(t，6H)。

制备5

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二盐酸盐

将37wt/wt％盐酸溶液(245.95μL)加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.56g)于甲醇(5.6mL)中的溶液中，生成透明溶液，将该透明溶液在室温搅拌15分钟。从溶液的主体中取出0.5mL等份液，用乙醚处理，形成流动固体(mobile solid)。将该悬浮液加回到溶液中，并将混合物在室温搅拌2小时。然后过滤收集标题化合物，用甲醇(1.12mL)洗涤，在滤器上干燥(0.46g)。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.46(m，1H)，8.06(d，1H)，7.88(d，1H)，7.75(d，1H)，7.55-7.38(m，4H)，6.88(d，1H)，6.76(d，1H)，3.74(m，8H)，3.28(t，2H)，3.2-3.0(不能确定质子数目)，2.92(m，2H)，2.66(t，2H)，1.25(t，6H)。

C₃₂H₄₄Cl₂N₄O₄S的计算值：C，58.98；H，6.81；N，8.60；S，4.92。实测值：C，58.89；H，6.87；N，8.58；S，5.24。

图3：化合物B·二盐酸盐的多晶型物A的XRPD

下述实施例说明本发明。

实施例1

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·柠檬酸盐

将柠檬酸(248.96mg)加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.5g)于甲醇(5mL)中的溶液中。透明溶液立即变得不透明，有橙色油状物析出。将该混合物在60℃的外部温度进行加热，形成透明溶液，然后使该透明溶液冷却至室温并搅拌48小时。过滤收集所得沉淀物，用甲醇(1mL)和乙醚(1mL)洗涤。然后在室温真空干燥固体4小时，得到标题化合物(0.3g)。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.06(d，1H)，7.88(d，1H)，7.75(d，1H)，7.50(m，2H)，7.39(m，2H)，6.82(d，1H)，6.72(d，1H)，3.75(t，2H)，3.70(t，2H)，3.6-3.3(不能确定质子数目)，3.28(t，2H)，3.1-2.4(不能确定质子数目)，0.99(br，6H)。

图4：化合物B·柠檬酸盐的二水合物多晶型物A的XRPD

实施例2

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二甲苯磺酸盐

将对甲苯磺酸一水合物(667.33mg)一次性加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(1g)于甲醇(10mL)中的溶液中，生成透明溶液。将该溶液在室温搅拌30分钟，然后真空除去溶剂。将残余物在乙醚(20mL)中在室温搅拌16小时，然后除去溶剂，加入甲基叔丁基醚(20mL)。然后将该混合物在室温搅拌16小时，接着过滤收集所得固体，用甲基叔丁基醚(5mL)洗涤。在室温真空干燥标题化合物16小时留下标题化合物，其为无定形固体(1.18g)。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.35(1H，br)，8.05(d，1H)，7.88(d，1H)，7.76(d，1H)，7.51(m，6H)，7.40(m，2H)，7.09(d，4H)，6.83(d，1H)，6.74(d，1H)，3.77(t，2H)，3.72(t，2H)，3.64(br，4H)，3.4-3.0(不能确定质子数目)，2.85(m，2H)，2.64(t，2H)，2.28(s，6H)，1.22(t，6H)。

图5：化合物B·二甲苯磺酸盐的无定形形式的XRPD

实施例3

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·磷酸盐二-半-水合物

将磷酸(199.19mg)加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(1g)于甲醇(10mL)中的溶液中，生成胶状物。将混合物加热至回流，持续的搅拌得到流动固体。使悬浮液缓慢冷却至室温，然后过滤，滤饼用甲醇(2mL)洗涤。使标题化合物(0.93g)在滤器上干燥。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.05(d，1H)，7.87(d，1H)，7.74(m，1H)，7.48(m，2H)，7.38(m，2H)，6.78(d，1H)，6.68(d，1H)，3.73(t，2H)，3.67(t，2H)，3.31(m，不能确定质子数目)，3.26(t，2H)，2.8-2.3(不能确定质子数目)，0.94(t，6H)。

图6：化合物B·磷酸盐的二-半-水合物多晶型物A的XRPD

实施例4A

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·昔萘甲酸盐二水合物

将1-羟基-萘-2-甲酸(328.42mg)于甲醇(3mL)中的悬浮液加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.5g)于甲醇(3mL)中的溶液中，将所得混合物加热回流，然后使其冷却至室温，搅拌16小时。过滤标题化合物，用甲醇(1mL)洗涤，室温真空干燥1小时(0.47g)。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.24(d，2H)，8.04(d，1H)，7.87(d，1H)，7.75(m，5H)，7.50(m，4H)，7.40(m，4H)，7.11(d，2H)，6.83(d，1H)，6.73(d，1H)，3.75(t，2H)，3.70(t，2H)，3.6-3.3(m，4H)，3.26(t，2H)，2.6-3.1(不能确定质子数目)，2.59(t，2H)，1.05(br，6H)。

图7：化合物B·二-昔萘甲酸盐的二水合物多晶型物A的XRPD

实施例4B

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·二昔萘甲酸盐二-半- 水合物

将20mg二-水合物多晶型A(实施例4A)在水(0.5ml)中浆化1周。将所得溶液离心，并将上清液与固体物质分离，使后者在通风橱中风干过夜。

图8：化合物B·二-昔萘甲酸盐的二-半-水合物多晶型物的XRPD

实施例5

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·硫酸盐

将浓硫酸(23.98μL)滴加到N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.25g)于甲醇(2.5mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌20分钟，然后在外部温度60℃加热，接着使其冷却回到室温。然后加入甲基叔丁基醚(0.5mL)，将混合物在外部温度60℃加热，接着使其冷却至室温。用甲醇将混合物转移到另一个烧瓶中以溶解混合物，然后真空除去溶剂。将甲基叔丁基醚(10mL)加至残余物中，将混合物在室温搅拌16小时。过滤收集标题化合物，在滤器上干燥(0.24g)。发现固体为无定形的。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.05(m，1H)，7.88(m，1H)，7.75(m，1H)，7.50(m，2H)，7.38(m，2H)，6.85(m，1H)，6.73(m，1H)，3.74(m，4H)，3.58-3.40(m，不能确定质子数目)，3.28(t，2H)，3.03-2.73(m，不能确定质子数目)，2.60(t，2H)，1.09(s，6H)。

图9：化合物B·硫酸盐的无定形形式的XRPD

实施例6

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·单苯甲酸盐

将苯甲酸(52.75mg)一次性加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.25g)于甲醇(2.5mL)中的溶液中，生成透明溶液。将其在室温搅拌1小时，然后真空除去溶剂。将残余物在乙腈(5mL)中在室温搅拌16小时，然后除去溶剂，加入甲基叔丁基醚(10mL)。将混合物在室温搅拌3小时，然后过滤收集标题化合物。分离标题化合物，其为无定形固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.04(m，1H)，7.94(m，2H)，7.87(m，1H)，7.73(m，1H)，7.57-7.34(m，7H)，6.84-6.68(m，2H)，3.80-3.54(m，6H)，3.30(m，由于与水重叠而不能确认)，2.78-2.37(m，不能确定质子数目)，0.91(m，6H)。

图10：化合物B·单苯甲酸盐的无定形形式的XRPD

实施例6A

结晶形式的N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢 -1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·单苯甲酸盐

将20mg无定形形式的单苯甲酸盐(实施例6)溶解在1ml丙-2-醇中。使所得溶液在通风橱中在室温缓慢蒸发，留下灰白色固体。

图11：化合物B·单苯甲酸盐的结晶形式的XRPD

实施例7

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·单富马酸盐

将富马酸(168.31mg)加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.84g)于甲醇(2mL)中的溶液中，生成不透明混合物。将混合物在外部温度60℃进行温热，然后使其冷却到室温，搅拌16小时。得到标题化合物，其在蒸干后为无定形形式。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.05(m，1H)，7.87(m，1H)，7.74(m，1H)，7.49(m，2H)，7.38(m，2H)，6.80(m，1H)，6.70(m，1H)，6.58(s，2H)，3.78-3.53(m，6H)，3.36-3.19(m，不能确定质子数目)，2.82-2.40(m，不能确定质子数目)，0.96-0.86(m，6H)。

图12：化合物B·单富马酸盐的无定形形式的XRPD

实施例8

N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑 -7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺·单苯磺酸盐

将苯磺酸(158.51mg)加至N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.58g)于甲醇(5.8mL)中的溶液中，生成透明溶液。将混合物在室温搅拌1小时。得到标题化合物，其在蒸干后为无定形固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.05(d，1H)，7.88(d，1H)，7.75(m，1H)，7.64(m，2H)，7.50(m，2H)，7.40(m，2H)，7.28(m，3H)，6.83(m，1H)，6.73(m，1H)，3.77-3.35(m，不能确定质子数目)，3.28(t，2H)，3.01-2.47(m，不能确定质子数目)，1.05(br，6H)。

图13：化合物B·单苯磺酸盐的无定形形式的XRPD。

生物测定

肾上腺素能β2介导的cAMP生成

细胞制备

在培养箱中，在37℃和5％CO₂下，H292细胞在225cm²烧瓶中在包含10％(v/v)FBS(胎牛血清)和2mM L-谷氨酰胺的RPMI培养基中生长。

实验方法

通过用Accutase^TM细胞脱附溶液处理15分钟，使附着的H292细胞从组织培养烧瓶脱离。在加湿培养箱中，在37℃和5％CO₂下，将烧瓶孵育15分钟。以0.05×10⁶个细胞/mL，将脱附的细胞重新悬浮在RPMI培养基(包含10％(v/v)FBS和2mM L-谷氨酰胺)中。将5000个细胞(100μl)加至组织培养处理96孔板的每个孔，在加湿培养箱中，在37℃和5％CO₂下，将细胞孵育过夜。将培养基取出，细胞用100μl测定缓冲液洗涤两次，用50μl测定缓冲液(包含10mM HEPES pH7.4和5mM葡萄糖的HBSS溶液)置换。在室温，将细胞放置20分钟，在此之后，添加25μl的咯利普兰(在包含2.4％(v/v)二甲基亚砜的测定缓冲液中制成1.2mM)。将细胞与咯利普兰一起孵育10分钟，在此之后，添加试验化合物，在室温将细胞孵育60分钟。测定液中最终的咯利普兰浓度为300μM，最终的载体浓度为1.6％(v/v)二甲基亚砜。反应通过除去上清液来停止，用100μl测定缓冲液洗涤一次，用50μl细胞溶解缓冲液置换。将细胞单层冷冻于-80℃，保持30分钟(或过夜)。

AlphaScreen ^TM cAMP检测

使用AlphaScreen^TM方法学，测定细胞溶解物中cAMP(环腺苷酸)的浓度。在板振荡器上，使冷冻的细胞板解冻20分钟，然后将10μl的细胞溶解物转移至96-孔白色板。将40μl与生物素化cAMP一起预孵育的混合的AlphaScreen^TM检测珠子加至每个孔，将板在室温避光孵育10小时。按照制造商所推荐的设置，使用EnVision分光光度计(Perkin-Elmer Inc.)，测量AlphaScreen^TM信号。通过参考在相同实验中使用标准cAMP浓度来确定的校正曲线，确定cAMP浓度。构建激动剂的浓度响应曲线，将数据拟合成四参数对数方程式，以确定pEC₅₀和内在活性。在每个实验中，将内在活性表达成对福莫特罗而确定的最大活性的分数。

选择性测定

肾上腺素能α1D

膜制备

膜从表达重组人α1_D受体的人胚肾293(HEK293)细胞来制备。将这些膜稀释在测定缓冲液(50mM HEPES，1mM EDTA，0.1％明胶，pH7.4)中，使最终的膜浓度能在最大和最小特异性结合之间提供明显窗口(clear window)。

实验方法

测定在U形底的96孔聚丙烯板中进行。将10μl[³H]-哌唑嗪(0.3nM最终浓度)和10μl的试验化合物(10×最终浓度)加至每个试验孔。对于每块测定板，就在存在10μl载体(10％(v/v)DMSO的测定缓冲液；定义最大结合)或10μL BMY7378(10μM最终浓度；定义非特异性结合(NSB))情况下的[³H]-哌唑嗪结合而言，得到8个重复样。然后，添加膜，使最终体积为100μL。将板在室温孵育2小时，然后使用96孔板Tomtec细胞收集器，将板过滤到PEI涂覆的GF/B滤板(在测定缓冲液中预浸1小时)上。在4℃，用250μl洗涤缓冲液(50mM HEPES，1mM EDTA，pH7.4)洗涤五次，以除去未结合的放射性物质。将板干燥，然后使用Packard板密封剂(plate sealer)，从下面将板密封，将MicroScint-O(50μl)加至每个孔。将板密封(TopSeal A)，用闪烁计数器(TopCount，Packard BioScience)，使用3分钟计数方案，测量过滤器结合的放射性。

通过从平均最大结合减去平均NSB，确定总特异性结合(B₀)。也从所有其它孔的值减去NSB值。将这些数据表达成占B₀的百分比。使用通常范围为0.1nM至10μM的系列稀释度，确定化合物浓度-效应曲线(对[³H]-哌唑嗪结合的抑制作用)。将数据拟合成四参数对数方程式，以确定化合物效力，将其表达成pIC₅₀(对[³H]-哌唑嗪结合产生50％抑制作用的摩尔浓度的负对数)。

肾上腺素能β1

膜制备

包含重组人肾上腺素能β1受体的膜得自Euroscreen。将这些膜稀释在测定缓冲液(50mM HEPES，1mM EDTA，120mM NaCl，0.1％明胶，pH7.4)中，使最终的膜浓度能在最大和最小特异性结合之间提供明显窗口。

实验方法

测定在U形底的96孔聚丙烯板中进行。将10μl[¹²⁵I]-碘代氰基吲哚洛尔(Iodocyanopindolol)(0.036nM最终浓度)和10μl的试验化合物(10×最终浓度)加至每个试验孔。对于每块测定板，就在存在10μl载体(10％(v/v)DMSO的测定缓冲液；定义最大结合)或10μl普萘洛尔(10μM最终浓度；定义非特异性结合(NSB))情况下的[¹²⁵I]-碘代氰基吲哚洛尔结合而言，得到8个重复样。然后，添加膜，使最终体积为100μL。将板在室温孵育2小时，然后使用96孔板Tomtec细胞收集器，将板过滤到PEI涂覆的GF/B滤板(在测定缓冲液中预浸1小时)上。在4℃，用250μl洗涤缓冲液(50mM HEPES，1mMEDTA，120mM NaCl，pH7.4)洗涤五次，以除去未结合的放射性物质。将板干燥，然后使用Packard板密封剂，从下面将板密封，将MicroScint-O(50μl)加至每个孔。将板密封(TopSeal A)，用闪烁计数器(TopCount，PackardBioScience)，使用3分钟计数方案，测量过滤器结合的放射性。

通过从平均最大结合减去平均NSB，确定总特异性结合(B₀)。也从所有其它孔的值减去NSB值。将这些数据表达成占B₀的百分比。使用通常范围为0.1nM至10μM的系列稀释度，确定化合物浓度-效应曲线(对[¹²⁵I]-碘代氰基吲哚洛尔结合的抑制作用)。将数据拟合成四参数对数方程式，以确定化合物效力，将其表达成pIC₅₀(对[¹²⁵I]-碘代氰基吲哚洛尔结合产生50％抑制作用的摩尔浓度的负对数)。

多巴胺D2

膜制备

包含重组人多巴胺D2s亚型受体的膜得自Perkin Elmer。将这些膜稀释在测定缓冲液(50mM HEPES，1mM EDTA，120mM NaCl，0.1％明胶，pH7.4)中，使最终的膜浓度能在最大和最小特异性结合之间提供明显窗口。

实验方法

测定在U形底的96孔聚丙烯板中进行。将30μl[³H]-螺哌隆(spiperone)(0.16nM最终浓度)和30μl的试验化合物(10×最终浓度)加至每个试验孔。对于每块测定板，就在存在30μl载体(10％(v/v)DMSO的测定缓冲液；定义最大结合)或30μl氟代哌啶醇(10μM最终浓度；定义非特异性结合(NSB))情况下的[³H]-螺哌隆结合而言，得到8个重复样。然后，添加膜，使最终体积为300μL。将板在室温孵育2小时，然后使用96孔板Tomtec细胞收集器，将板过滤到PEI涂覆的GF/B滤板(在测定缓冲液中预浸1小时)上。在4℃，用250μl洗涤缓冲液(50mM HEPES，1mM EDTA，120mM NaCl，pH7.4)洗涤五次，以除去未结合的放射性物质。将板干燥，然后使用Packard板密封剂，从下面将板密封，将MicroScint-O(50μl)加至每个孔。将板密封(TopSeal A)，用闪烁计数器(TopCount，Packard BioScience)，使用3分钟计数方案，测量过滤器结合的放射性。

通过从平均最大结合减去平均NSB，确定总特异性结合(B₀)。也从所有其它孔的值减去NSB值。将这些数据表达成占B₀的百分比。使用通常范围为0.1nM至10μM的系列稀释，确定化合物浓度-效应曲线(对[³H]-螺哌隆结合的抑制作用)。将数据拟合成四参数对数方程式，以确定化合物效力，将其表达成pIC₅₀(对[³H]-螺哌隆结合产生50％抑制作用的摩尔浓度的负对数)。

开始测定(Onset assay)

Dunkin-Hartley豚鼠(交付时为200g至300g)由指定的饲养机构提供。这些豚鼠通过颈脱位法来处死，将气管分离。将粘连的结缔组织除去，然后将每根气管都切成四个环。然后，将这些组织环连接到等长传感器。将这些组织洗涤，然后将1g的力施加给每个环。在所有实验中，都使用成对的曲线设计(paired curve design)。将致敏剂量的1μM醋甲胆碱施加给这些组织。然后，将组织洗涤(三次，各次洗涤间隔一分钟)，重新施加维持不变的1g张力，使组织保持1小时，达到平衡。然后，用1μM醋甲胆碱使组织收缩，一旦得到稳定的响应，就构建异丙肾上腺素的蓄积浓度响应曲线(10^-9M-10^-5M)。然后，将组织洗涤(三次，各次洗涤间隔一分钟)，然后放置休息一小时。在此之后，用1μM醋甲胆碱使组织收缩，添加p[A]₅₀浓度的试验化合物。一旦组织已达到最大松弛，就添加30×p[A]₅₀浓度的试验化合物。一旦组织响应已达到坪值，就将10μM索他洛尔加至上述浴中，以确认松弛是β₂介导的。

使用ADInstruments chart4forwindows软件来收集数据，所述软件测量激动剂的每个浓度所产生的最大张力。

对于异丙肾上腺素蓄积浓度曲线的每个浓度，都将响应值计算成醋甲胆碱所引起收缩的松弛百分比。将曲线描绘成log₁₀[激动剂](M)与对醋甲胆碱所引起收缩的抑制百分比。然后，将这些数据拟合成非线性回归曲线拟合。对于每个实验，都利用以下形式的4参数对数函数来对E/[A]曲线进行拟合·

E = β + \frac{(β - α) \cdot {[A]}^{m}}{{[A]}^{m} + {[A]}_{50}^{m}}

E和[A]分别为药理作用(松弛百分比)和激动剂的浓度；α、β、[A]₅₀和m分别为渐近线参数、基线参数、位置参数和斜率参数。每条异丙肾上腺素曲线的p[A]₅₀和IA都从这种拟合来确定，以确定组织是否可用于得出试验化合物的起效时间。

对于每个试验化合物的p[A]₅₀浓度，都将响应值计算成醋甲胆碱所引起收缩的松弛百分比。将结果描绘成松弛百分比与时间，计算并且记录达到90％松弛值所消耗的时间。

添加30×p[A]₅₀浓度，这使得能确定个体组织中的最大化合物作用。因此，计算并且记录p[A]₅₀浓度时的化合物作用占最大化合物作用的百分比。

大鼠的药物动力学

使用合适的给药载体，制备试验化合物的给药溶液。给药溶液中化合物的浓度通过以下方法来确定：将等份液稀释至50μg·ml^-1的标称浓度(nominal concentration)，并且凭借以此浓度双重注射标准溶液和QC标准来进行校正。化合物通过推注到尾静脉内而以静脉内的方式给予到多组大鼠(每组由三只250-350g大鼠组成)(约1ml·kg^-1)。对于口服给药，另一组动物(由2或3只动物组成)通过经口管饲法来给药(3ml·kg^-1)。所递送的剂量通过失重来估计。通常在给药之前没有对动物禁食，虽然如果需要的话就对这种情况进行研究。

从尾静脉将血液样品(0.25ml)采集到1ml注射器中，在样品采集之后，立即将其转移至EDTA试管，通过离心(5min，13000rpm)来制备血浆，之后贮存在-20℃。典型的采样时间为2、4、8、15、30、60、120、180、240、300分钟或直到准确地描述了终末半衰期(terminal t_1/2)。

血浆中分析物(或多种分析物)的浓度通过定量性质谱来测定。以甲醇中1mg/ml的浓度来制备标准和质控储备溶液。将一定范围的通过系列稀释来制备的标准和QC储备液加至对照大鼠血浆(50μl)。此浓度范围覆盖了大鼠样品中分析物的水平的范围。使用包含内标(被选择为与分析物非常相似)的50μl有机溶剂和100μl有机溶剂，对标准物、QC物和样品进行液体提取。然后，样品通过反复倒置来混合，在-20℃贮存至少1小时，然后在离心机中以3500rpm离心20分钟。转移每种样品的等份液(120μl)，用于通过LC-MSMS进行分析。覆盖试验样品中浓度范围的标准和质控样品处于上述标称浓度的25％。

利用WinNonlin来进行药物动力学数据分析。利用标准的非房室分析(non-compartmental analysis)来估计参数，例如T_max、C_max、λ_z、t_1/2_λ_z、AUC_all、AUC_INF(观察到的)、Cl(观察到的)、Vss(观察到的)。

Claims

1.N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的药用盐，前提是所述盐不是二氢溴酸盐或二盐酸盐。

2.权利要求1所述的药用盐，其中所述盐为三氟乙酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、硫酸氢盐、苯磺酸盐、乙磺酸盐、丙二酸盐、昔萘甲酸盐、抗坏血酸盐、油酸盐、烟酸盐、糖精酸盐、己二酸盐、甲酸盐、羟乙酸盐、L-乳酸盐、D-乳酸盐、天冬氨酸盐、苹果酸盐、L-酒石酸盐、D-酒石酸盐、硬脂酸盐、2-糠酸盐、3-糠酸盐、萘二磺酸盐(萘-1，5-二磺酸盐或萘-1-(磺酸)-5-磺酸盐)、乙二磺酸盐(乙烷-1，2-二磺酸盐或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸盐)、羟乙磺酸盐(2-羟基乙基磺酸盐)、均三甲苯-2-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、D-扁桃酸盐或L-扁桃酸盐。

3.N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺的药用盐，所述盐为柠檬酸盐、二甲苯磺酸盐、磷酸盐、二昔萘甲酸盐、硫酸盐、单苯甲酸盐、富马酸盐或苯磺酸盐。

4.一种制备权利要求1所述的盐的方法，所述方法包括使合适的酸与N-[2-(二乙基氨基)乙基]-N-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺在合适的溶剂中，以及任选地在升高的温度反应。

5.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的药用盐以及结合有药用助剂、稀释剂或载体。

6.权利要求1所述的药用盐，其用于治疗。

7.权利要求1所述的药用盐在制备用于治疗对β2肾上腺素受体活性的调节是有益的人类疾病或病症的药物中的用途。

8.权利要求1所述的药用盐在制备用于治疗成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、支气管炎、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘或鼻炎的药物中的用途。

9.权利要求1所述的药用盐，其用于治疗呼吸系统病症。

10.权利要求1所述的药用盐，其用于治疗成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、支气管炎、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘或鼻炎。

11.治疗对β2肾上腺素受体活性的调节是有益的疾病或病症或降低所述疾病或病症风险的方法，所述方法包括向需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的药用盐。

12.治疗炎症性疾病或病症或降低所述疾病或病症风险的方法，所述方法包括向需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1所述的药用盐。

13.权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述疾病或病症为成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、支气管炎、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘或鼻炎。