KR20110031462A - 피리미딜 술폰아미드 유도체 및 케모카인 매개 질환의 치료를 위한 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 케모카인 매개 질환 및 질병의 치료에 사용하기 위한 하기 화학식 1의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
<화학식 1>

Description

피리미딜 술폰아미드 유도체 및 케모카인 매개 질환의 치료를 위한 그의 용도 {PYRIMIDYL SULFONAMIDE DERIVATIVE AND ITS USE FOR THE TREATMENT OF CHEMOKINE MEDIATED DISEASES}

본 발명은 특정 헤테로시클릭 화합물, 그의 제조에 사용되는 방법 및 중간체, 그를 함유하는 제약 조성물 및 요법에 있어서의 그의 용도에 관한 것이다.

케모카인은 천식 및 알레르기 질환뿐만 아니라 자가면역 병증, 예를 들면 류마티스양 관절염 및 아테롬성경화증을 비롯한 다양한 질환 및 장애에서의 면역 및 염증 반응에서 중요한 역할을 한다. 이들 작은 분비 분자는 보존된 시스테인 모티프에 특징이 있는 8-14 kDa 단백질의 점점 증가하고 있는 상위패밀리이다. 오늘날, 케모카인 상위패밀리는 특징적인 구조적 모티프를 나타내는 3개의 군인 C-X-C, C-C 및 C-X₃-C 패밀리를 포함한다. C-X-C 및 C-C 패밀리는 서열이 유사하며, 시스테인 잔기의 NH-근위 쌍 사이에 단일의 아미노산이 삽입되어 있는 것을 기초로 하여 서로 구별된다. C-X₃-C 패밀리는 시스테인 잔기의 NH-근위 쌍 사이에 3중 아미노산이 삽입되어 있는 것을 기초로 하여 다른 2개의 패밀리와 구별된다.

C-X-C 케모카인은 인터류킨-8 (IL-8) 및 호중구-활성화 펩티드 2 (NAP-2)와 같은 호중구의 활성화제 및 여러 효능있는 화학유인물질을 포함한다.

C-C 케모카인은 단핵구 및 림프구의 효능있는 화학유인물질을 포함하나, 호중구의 화학유인물질을 포함하지 않는다. 그 예로는 인간 단핵구 화학주성 단백질 1-3 (MCP-1, MCP-2 및 MCP-3), RANTES (Regulated on Activation, Normal T Expressed and Secreted), 에오탁신 및 대식세포 염증 단백질 1α 및 1β (MIP-1α 및 MIP-1β)가 포함된다.

C-X₃-C 케모카인 (프락탈카인으로도 공지되어 있음)은 중추 신경계 (CNS)에서의 미세아교세포 뿐만 아니라 단핵구, T 세포, NK 세포 및 비만 세포의 효능있는 화학유인물질 및 활성화제이다.

연구 결과, 케모카인의 활성은 G 단백질-커플링된 수용체의 하위패밀리에 의해 매개되는 것으로 밝혀졌으며, 이들 중에는 CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 및 CCR11 (C-C 패밀리의 경우); CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 및 CXCR5 (C-X-C 패밀리의 경우); 및 CX₃CR1 (C-X₃-C 패밀리의 경우)로 표기되는 수용체가 있다. 이들 수용체를 조절하는 작용제가 상기한 것과 같은 장애 및 질환의 치료에 유용할 것이므로, 이들 수용체는 약물 개발을 위한 좋은 표적이다.

본 발명자들의 PCT 특허 출원 WO 2004/011443에서, 본 발명자들은 케모카인 수용체의 조절제로서 사용하기 위한 피리미디닐 술폰아미드 유도체를 개시하였다.

본 발명은 하기 화학식 1의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

상기 화합물은 WO-2004/011443에 개시된 화합물을 참조로 예상되지 않으며, 항상 2개 이상의 구조적 차이가 존재한다. 또한, 본 발명자들은 화학식 1의 화합물이 상기 화합물과 비교시 개선된 약리학적 프로파일을 나타낸다는 것을 발견하였다. 구체적으로, 화학식 1의 화합물은 하기 기재한 바와 같은 하나 이상의 개선된 약리학적 특성을 갖는다. 본 발명자들이 이론적 고려사항에 제한되기를 원치 않지만, 화학식 1의 화합물의 개선된 약리학적 프로파일은 인간에서 보다 긴 작용 지속기간을 제공할 것으로 기대된다. 본 발명의 한 측면에서, 화학식 1의 화합물의 일일 1회 또는 2회의 투여가 허용될 수 있다.

광학 활성 형태의 합성은 당업계에 널리 공지되어 있는 유기 화학의 표준 기술에 의해, 예를 들어 광학 활성 출발 물질로부터의 합성에 의해, 또는 라세미 형태의 분할에 의해 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Enantioselective Synthesis of fully protected anti 3-amino-2-hydroxy butyrates; Tetrahedron Asymmetry; 1995, vol 6, no 9 pp 2329-2342] 참조). 유사하게, 상기 언급된 활성은 하기 언급되는 표준 실험실 기술을 이용하여 평가할 수 있다.

본 발명 내에서, 화학식 1의 화합물, 또는 그의 염 또는 용매화물이 호변이성질체 현상을 나타낼 수 있고, 본 명세서 내의 화학식 도면이 가능한 호변이성질체 형태 중 하나만을 나타낼 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명은 모든 호변이성질체 형태 및 이들의 혼합물을 포함하며, 단지 화학식 도면 내에서 이용되는 임의의 하나의 호변이성질체 형태에 국한되지 않는다는 것을 이해하여야 한다. 본 명세서 내의 화학식 도면은 가능한 호변이성질체 형태 중 단 하나만을 나타낼 수 있고, 본 명세서가 본원에 도식으로 나타낼 수 있는 바로 그 형태로 그려지지 않는 화합물의 모든 가능한 호변이성질체 형태를 포함함을 이해해야 한다.

또한, 화학식 1의 화합물 및 그의 염이 용매화된 형태 뿐만 아니라, 예를 들어 수화된 형태와 같은 비용매화된 형태로 존재할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명이 이러한 용매화된 형태 또는 수화된 형태 모두를 포함하는 것으로 이해해야 한다.

본 발명은 상기 정의된 화학식 1의 화합물 뿐만 아니라, 그의 염에 관한 것이다. 제약 조성물에 사용하기 위한 염은 제약상 허용되는 염일 것이나, 다른 염이 화학식 1의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염의 생산에 유용할 수 있다. 본 발명의 제약상 허용되는 염에는 이러한 염을 형성하기에 충분히 염기성인, 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물의 염기성 부가염이 포함될 수 있다. 이러한 염은 제약상 허용되는 양이온을 제공하는 무기 또는 유기 염기로 형성될 수 있다. 무기 또는 유기 염기와의 이러한 염에는, 예를 들어 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨 또는 칼륨 염, 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 또는 마그네슘 염, 또는 유기 아민 염, 예컨대 트리스-(2-히드록시에틸)아민, 디에탄올아민 또는 에탄올아민과의 염이 포함된다.

본 발명은 또한

(a) 하기 화학식 2a의 화합물을 적합한 염기, 촉매 및 용매의 존재하에 하기 술폰아미드 2c로 처리하고, 이어서 임의로, 임의의 순서로

i) 임의의 보호기를 제거하고;

ii) 염을 형성하는

것을 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물의 제조 방법을 제공한다.

<화학식 2a>

(상기 식에서, PG는 보호기 또는 2개의 별개의 수소 원자이고, L은 이탈기임)

<화학식 2c>

화학식 2a의 화합물과 술폰아미드 2c의 반응은 적합한 촉매의 존재하에 수행될 수 있고, 열적으로 또는 마이크로웨이브로 가열될 수 있다.

적합한 염기의 예에는 금속 (비)카르보네이트, 예컨대 세슘, 칼륨, 리튬 또는 나트륨으로부터의 것들, 또는 금속 포스페이트, 예컨대 리튬, 나트륨 또는 칼륨으로부터의 것들 (예컨대, 인산칼륨 (K₃PO₄)), 또는 트리알킬아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디-이소프로필에틸아민이 포함된다. 가장 편리하게는, 탄산세슘이 사용된다. 적합한 용매에는 톨루엔 및 에테르, 예컨대 아니솔, 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 글라임 및 디글라임 또는 에스테르, 예컨대 n-부틸아세테이트 또는 이소프로필아세테이트가 포함된다. 편리하게는, 1,4-디옥산이 사용된다. 반응은 10℃ 내지 120℃의 온도, 편리하게는 105℃에서 수행될 수 있다. 적합한 촉매의 예에는 적합한 리간드, 예컨대 (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스[디페닐-포스핀 (Xantphos) 또는 2-디시클로헥실-포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐 또는 2-디시클로헥실-포스피노-2',4',6'-트리-이소프로필,1,1'-비페닐 (XPHOS) (0.01 내지 0.5 mol 당량으로)의 존재하의 적합한 팔라듐(0) 공급원, 예컨대 팔라듐 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd₂(dba)₃) 또는 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (Pd(Ph₃)₄) (0.01 내지 0.5 mol 당량으로)이 포함된다. 편리하게는, 촉매 조합물은 염기로서의 탄산세슘을 함유하는 105℃의 1,4-디옥산 중 0.01 내지 0.5 mol 당량의 2-디시클로헥실-포스피노-2',4',6'-트리-이소프로필,1,1'-비페닐 (Xphos)을 함유하는 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd₂(dba)₃)이다.

적합한 보호기 (PG)에는 비시클릭 및 시클릭 화합물이 둘 다 포함된다. 비시클릭 보호기의 예에는 벤질, 파라-니트로벤질 또는 파라-메톡실벤질이 포함된다. 편리하게는, PG는 시클릭이다. 적합한 시클릭 보호기의 예에는 시클로헥실리덴, 시클로펜틸리덴 및 아세토니드가 포함된다. 편리하게는, 아세토니드 보호기가 사용된다.

또는, 별법으로

(b) 하기 화학식 2b의 화합물을 적합한 염기 및 용매의 존재하에 하기 화학식 2d의 아민으로 처리하고, 이어서 임의로, 임의의 순서로

i) 임의의 보호기를 제거하고;

ii) 염을 형성하는

것을 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물의 제조 방법을 제공한다.

<화학식 2b>

(상기 식에서, PG₂는 보호기이고, L은 이탈기, 예컨대 할로겐임)

<화학식 2d>

(상기 식에서, PG는 보호기 또는 2개의 별개의 수소 원자임)

화학식 2b의 화합물과 아민 2d의 반응은 적합한 염기, 용매의 존재하에 수행될 수 있고, 열적으로 또는 마이크로웨이브로 가열될 수 있다.

적합한 염기의 예에는 나트륨, 칼륨, 세슘과 같은 금속 (비)카르보네이트, 또는 트리알킬아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디-이소프로필에틸아민이 포함된다. 편리하게는, 중탄산나트륨이 사용된다.

적합한 용매에는 N,N-디메틸아미드, 1-메틸-2-피롤리디논, 톨루엔 및 에테르, 예컨대 아니솔, 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 글라임, 디글라임 및 에스테르, 예컨대 n-부틸아세테이트 또는 이소프로필아세테이트, 및 알킬니트릴, 예컨대 아세토니트릴 또는 부티로니트릴이 포함된다. 편리하게는 아세토니트릴이 사용된다.

반응은 10℃ 내지 120℃의 온도에서 수행될 수 있다.

화학식 2a의 화합물은 하기 화학식 3의 화합물로부터, 적합한 염기 및 용매의 존재하에 아민 2d (여기서, PG는 보호기 또는 2개의 별개의 수소 원자임)로 처리함으로써 제조될 수 있다.

상기 식에서,

L은 이탈기, 예컨대 할로겐이다.

적합한 염기의 예에는 나트륨, 칼륨, 세슘과 같은 금속 (비)카르보네이트, 또는 트리알킬아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디-이소프로필에틸아민이 포함된다. 편리하게는 중탄산나트륨이 사용된다.

적합한 용매에는 N,N-디메틸아미드, 1-메틸-2-피롤리디논, 에테르, 예컨대 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 글라임 및 디글라임, 및 에스테르, 예컨대 부틸아세테이트 또는 이소프로필아세테이트, 및 알킬니트릴, 예컨대 아세토니트릴 또는 부티로니트릴이 포함된다. 편리하게는, 아세토니트릴이 사용된다.

반응은 10℃ 내지 120℃의 온도, 편리하게는 100℃에서 수행될 수 있다.

화학식 2b의 화합물 (여기서, L은 이탈기, 예컨대 할로겐이고, PG₂는 적합한 보호기 또는 수소임)은 화학식 3의 화합물 (여기서, L은 이탈기, 예컨대 할로겐임)을 적합한 염기, 용매 (적합한 촉매를 함유하거나 함유하지 않으며 열적으로 또는 마이크로웨이브로 가열됨)의 존재하에 술폰아미드 2c와 반응시키고,

이어서 임의로, 임의의 순서로

i) 임의의 보호기를 부가하고;

ii) 화학식 2b의 화합물을 추가의 화학식 2b의 화합물로 전환시킴으로써

제조할 수 있다.

적합한 염기의 예에는 나트륨 또는 칼륨과 같은 알칼리 금속 수소화물, 또는 금속 알콕시드, 예컨대 리튬, 나트륨 또는 칼륨-tert-부톡시드, 알칼리 금속 헥사메틸디실라지드, 예컨대 리튬, 나트륨 또는 칼륨-헥사메틸디실라지드, 또는 나트륨, 칼륨, 세슘과 같은 금속 카르보네이트가 포함된다. 적합한 용매에는 아세토니트릴, 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 글라임 및 디글라임이 포함된다. 반응 온도는 0℃ 내지 120℃에서 수행될 수 있다. 적합한 촉매의 예에는 적합한 리간드, 예컨대 (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스[디페닐-포스핀 (Xantphos), 또는 2-디시클로헥실-포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐 또는 2-디시클로헥실-포스피노-2',4',6'-트리-이소프로필,1,1'-비페닐 (XPHOS)의 존재하의 적합한 팔라듐(0) 공급원, 예컨대 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (Pd(Ph₃)₄) 또는 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd₂(dba)₃)이 포함된다.

편리한 보호기 (PG₂)의 예에는 에테르, 예컨대 트리메틸실릴메틸 에테르 (SEM) ([2-(클로로메톡시)에틸](트리메틸)실란을 사용한 알킬화) 또는 파라-메톡시벤질 (PMB) 기 (파라-메톡시벤질클로라이드를 사용한 알킬화)가 포함된다.

화학식 3의 화합물 (여기서, L은 할로겐임)은 화학식 3의 화합물 (여기서, L은 히드록시기임)로부터, 적합한 용매하에 또는 용매없이 할로겐화제, 예컨대 인 옥시클로라이드와 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 반응은 N,N-디메틸아닐린의 존재 또는 부재하에 수행될 수 있다. 적합한 용매에는 톨루엔, 크실렌, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 글라임 및 디글라임이 포함된다.

반응은 90℃ 내지 150℃의 온도에서 수행될 수 있다.

화학식 3의 화합물 (여기서, L은 히드록시기임)은 하기 화학식 4의 화합물로부터, 적합한 염기 및 용매의 존재하에 1-(브로모메틸)-2,3-디플루오로벤젠과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

상기 식에서,

L은 히드록시기이다.

적합한 염기의 예에는 리튬, 나트륨, 칼륨과 같은 알칼리 금속 수산화물, 또는 리튬, 나트륨, 칼륨, 세슘과 같은 금속 (비)카르보네이트, 또는 리튬, 나트륨, 칼륨 또는 세슘과 같은 금속 아세테이트, 또는 금속 알콕시드, 예컨대 리튬, 나트륨, 칼륨 tert-부톡시드가 포함된다. 적합한 용매에는 물, N,N-디메틸아미드, 1-메틸-2-피롤리디논, 에테르, 예컨대 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 글라임 및 디글라임, 및 알코올, 예컨대 메탄올, 에탄올 및 tert-부탄올 또는 아세토니트릴이 포함된다. 편리하게는, 그 중의 30 내지 60℃의 메탄올 및 물 혼합물 중 나트륨 아세테이트가 사용된다. 보다 편리하게는 그 중의 40℃의 아세토니트릴 및 물 혼합물 중 나트륨 아세테이트가 사용된다.

화학식 4의 화합물 (여기서, L은 히드록시기임), 화학식 2c 및 2d의 화합물 (여기서, PG는 보호기, 예컨대 아세토니드 또는 시클로헥실리덴, 또는 2개의 별개의 수소 원자임)은 본원에 기재된 절차를 이용하여 제조할 수 있거나, 상업적으로 입수가능하거나, 문헌에 널리 공지되어 있거나, 또는 공지된 기술을 이용하여 쉽게 제조할 수 있다.

각각의 방법에서, 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 생체내 가수분해가능한 에스테르의 제조에 대해 상기 요약된 변형법, 각각의 언급된 편리하거나 적합한 물질 또는 반응 조건은 본 발명의 개별적인 별개의 측면을 나타낸다.

본 발명의 방법에서, 출발 시약 또는 중간체 화합물 중의 히드록실기 또는 아미노기와 같은 특정 관능기는 보호기에 의해 보호될 필요가 있을 수 있다는 것은 당업자가 이해할 것이다. 따라서, 화학식 1의 화합물의 제법은 적절한 단계에서 하나 이상의 보호기를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 관능기의 보호 및 탈보호는 문헌 ['Protective Groups in Organic Chemistry', edited by J. W. F. McOmie, Plenum Press (1973)] 및 ['Protective Groups in Organic Synthesis', 2nd edition, T. W. Greene ＆ P. G. M. Wuts, Wiley-Interscience (1991)]에 충분히 기재되어 있다.

편리한 이탈기의 예는 표준 화학 교본, 예컨대 옥스포드 유니버시티 프레스(Oxford University Press)에서 발행된 조나단 클레이든 등(Jonathan Clayden et al.)의 "Organic Chemistry" (3rd Edn 2005)에 제공된다. 여기에는 할로겐, 메실레이트 및 토실레이트 기가 포함된다. 할로겐, 예컨대 염소 또는 브롬, 편리하게는 염소가 편리한 이탈기이다.

상기 화학식 1의 화합물은 상기 논의된 바와 같이 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물로 전환될 수 있다. 염은 통상적으로 염기성 부가염이다.

화학식 1의 화합물은 약제, 특히 케모카인 수용체 (특히 CXCR2) 활성의 조절자로서 활성을 가지며, 케모카인의 과도한 또는 비조절된 생산에 의해 악화되거나 또는 유발되는 인간 및 비인간 동물의 질병/질환의 (치료학적 또는 예방학적) 치료에 사용될 수 있다. 이러한 질병/질환의 예에는 하기로부터 독립적으로 또는 임의의 조합으로 선택되는 각각의 질병/질환이 포함된다.

(1) 기도 - 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)을 비롯한 폐쇄성 기도 질환; 천식, 예를 들어 기관지성, 알레르기성, 내인성, 외인성 및 먼지 천식, 특히 만성 또는 난치성 천식 (예를 들어, 후기발생 천식 및 기도 과민반응); 기관지염; 급성, 알레르기성, 위축성 비염 및 만성 비염, 예를 들어 건락성 비염, 비후성 비염, 화농성 비염, 건성 비염 및 약물성 비염; 막성 비염, 예를 들어 크루프성, 섬유소성 및 가막성 비염 및 선병성 비염; 계절성 비염, 예를 들어 신경성 비염 (고초열) 및 혈관운동성 비염; 사르코이드증, 농부 폐 질환 및 관련 질환, 폐 섬유증 및 특발성 간질성 폐렴;

(2) 골 및 관절 - 류마티스양 관절염, 골관절염 혈청음성 척추관절병증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터병 포함), 베체트병, 쇼그렌 증후군 및 전신성 경화증;

(3) 피부 - 건선, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염 및 기타 습진성 피부염군, 지루성 피부염, 편평 태선, 천포창, 수포성 천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 피부혈관염, 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증, 포도막염, 원형 탈모증 및 봄철 결막염;

(4) 위장관 - 복강 질환, 직장염, 호산구성 위장관염, 비만세포증, 크론병, 궤양성 대장염, 부정형 대장염, 현미경적 대장염, 염증성 장 질환, 과민성 장 증후군, 비-염증 설사, 소화관에서 먼 곳에 영향을 주는 (예를 들어, 편두통, 비염 및 습진) 식품-관련 알레르기;

(5) 중추 및 말초 신경계 - 신경변성 질환 및 치매 장애, 예컨대 알츠하이머병, 근위측성 측삭 경화증 및 기타 운동신경원병, 크로이츠펠트-야콥병 및 다른 프리온 질환, HIV 뇌병증 (AIDS 치매 복합증), 헌팅턴병, 전측두엽성 치매, 루이 소체 치매 및 혈관성 치매; 다발신경병증, 예컨대 길랑-바레 증후군, 만성 염증 탈수초성 다발신경근병증, 다초점 운동 신경병증, 신경총병증; CNS 탈수초, 예컨대 다발성 경화증, 급성 파종/출혈 뇌척수염, 및 아급성 경화성 범뇌염; 신경근육 장애, 예컨대 중증 근무력증 및 램버트-이튼 증후군; 척수 장애, 예컨대 열대 경직 하반신마비 및 근육강직 증후군: 부신생물성 증후군, 예컨대 소뇌 변성 및 뇌척수염; CNS 외상; 편두통; 및 뇌졸중;

(6) 기타 조직 및 전신성 질환 - 아테롬성 동맥경화증, 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS), 홍반성 루푸스, 전신성 루푸스, 홍반성, 하시모토 갑상선염, 유형 I 당뇨병, 신증후군, 호산구증가 근막염, 과IgE 증후군, 나종성 나병, 및 특발성 혈소판 감소성 자반증; 수술후 유착, 및 패혈증;

(7) 동종이식 거부반응 - 예를 들어 신장, 심장, 간, 폐, 골수, 피부 및 각막 이식 후의 급성 및 만성 거부반응; 및 만성 이식편 대 숙주 질환;

(8) 암 - 특히 비-소세포 폐암 (NSCLC), 악성 흑색종, 전립선암 및 편평세포 육종, 종양 전이, 비-흑색종 피부암 및 화학예방 전이;

(9) 혈관신생이 상승된 CXCR2 케모카인 수준과 관련된 질환 (예컨대, NSCLC, 당뇨병성 망막병증);

(10) 낭성 섬유종;

(11) 화상 상처 ＆ 만성 피부 궤양;

(12) 생식계 질환 - 예를 들어 배란, 월경 및 착상의 장애, 조기분만, 자궁내막증;

(13) 재관류 손상 - 심장, 뇌, 말초 사지 및 다른 기관에서의 재관류 손상, 아테롬성 동맥경화증의 억제.

따라서, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 생체내 가수분해성 에스테르를 제공한다.

편리하게는, 본 발명의 화합물은 케모카인 수용체가 CXC 케모카인 수용체 하위패밀리에 속하는, 보다 바람직하게는 표적 케모카인 수용체가 CXCR2 수용체인 질환의 치료에 사용된다.

본 발명의 화합물로 치료될 수 있는 특정 질병은 암, 혈관신생이 상승된 CXCR2 케모카인 수준과 관련된 질환, 및 염증 질환, 예를 들어 천식, 알레르기성 비염, COPD, 류마티스양 관절염, 건선, 염증성 장 질환, 골관절염 또는 골다공증이다. 독립적으로 또는 임의의 조합으로 선택되는 경우의 상기 열거된 각각의 질병/질환은 본 발명의 독립적인 실시양태를 나타낸다.

본 발명의 화합물은 또한 케모카인 수용체가 CCR 케모카인 수용체 하위패밀리에 속하는, 보다 바람직하게는 표적 케모카인 수용체가 CCR2b 수용체인 질환의 치료에 사용될 수 있다.

추가의 측면에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 생체내 가수분해성 에스테르를 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 케모카인 수용체 활성의 조절이 유익한 인간 질환 또는 질병 치료용 의약으로서 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 생체내 가수분해성 에스테르의 용도를 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 천식, 알레르기성 비염, 암, COPD, 류마티스양 관절염, 건선, 염증성 장 질환, 골관절염 또는 골다공증 치료용 의약으로서 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 생체내 가수분해성 에스테르의 용도를 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물의 용도를 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 케모카인 수용체 활성의 조절이 유익한 인간 질환 또는 질병의 치료용 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물의 용도를 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 천식, 알레르기성 비염, 암, COPD, 류마티스양 관절염, 건선, 염증성 장 질환, 골관절염 또는 골다공증의 치료용 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물의 용도를 제공한다.

본 명세서의 문맥상, 용어 "요법"은 또한 달리 명시하지 않는 한 "예방"까지도 포함한다. 용어 "치료학적" 및 "치료학적으로"도 이에 따라 해석되어야 한다.

본 발명은 또한 추가로 환자에게 치료 유효량의 상기 정의된 바와 같은 화학식의 화합물, 또는 제약상 허용되는 염 또는 용매화물을 투여하는 것을 포함하는, 케모카인이 케모카인 (특히, CXCR2) 수용체에 결합하는 케모카인 매개 질환의 치료 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 염증 질환, 특히 천식, 알레르기성 비염, COPD, 류마티스양 관절염, 건선, 염증성 장 질환, 골관절염 또는 골다공증을 앓고 있거나 그 위험에 있는 환자에게 치료 유효량의 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 상기 질환의 치료 방법을 제공한다.

상기 언급한 치료 용도의 경우에, 투여량은 물론 사용되는 화합물, 투여 방식, 원하는 치료 및 해당 장애에 따라 달라질 것이다.

화학식 1의 화합물, 및 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물은 그 자체로 사용될 수도 있지만, 일반적으로는 화학식 1의 화합물/염/용매화물 (활성 성분)을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 함유하는 제약 조성물의 형태로 투여될 것이다. 투여 방식에 따라, 제약 조성물은 편리하게는 0.05 내지 99 중량％ (중량기준 백분율), 보다 편리하게는 0.05 내지 80 중량％, 보다 더 편리하게는 0.10 내지 70 중량％ 및 보다 더 편리하게는 0.10 내지 50 중량％의 활성 성분 (모든 중량 백분율은 총 조성물을 기준으로 함)을 포함할 것이다.

본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 추가로 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 혼합하는 것을 포함하는, 본 발명의 제약 조성물의 제조 방법을 제공한다. 제약 조성물은 용액, 현탁액, 헵타플루오로알칸 에어로졸 및 건조 분말 제제 형태로 (예를 들어, 폐 및/또는 기도, 또는 피부로) 국소 투여되거나; 또는 예를 들어 정제, 캡슐, 시럽, 분말 또는 과립 형태로 경구 투여에 의해, 또는 용액 또는 현탁액 형태로 비경구 투여에 의해, 또는 피하 투여에 의해, 또는 좌제 형태로 직장내 투여에 의해, 또는 경피로 전신 투여될 수 있다. 편리하게는, 본 발명의 화합물은 경구 투여된다.

치료학적 의약으로서의 그의 용도 이외에, 화학식 1의 화합물, 및 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물은 또한 신규 치료제에 대한 조사의 일부로서 고양이, 개, 토끼, 원숭이, 래트 및 마우스와 같은 실험 동물에서 케모카인 조절 활성의 효과의 평가를 위한 시험관내 및 생체내 시험 시스템의 개발 및 표준화에서의 약리학적 수단으로서 유용하다.

본 발명은 또한 화학식 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물, 또는 화학식 1의 화합물을 포함하는 제약 조성물 또는 제제를 천식, 알레르기성 비염, 암, COPD, 류마티스양 관절염, 건선, 염증성 장 질환, 과민성 장 증후군, 골관절염 또는 골다공증 중 임의의 하나의 치료를 위한 요법제 및/또는 작용제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는, 조합 요법에 관한 것이다.

특히 염증 질환 류마티스양 관절염, 건선, 염증성 장 질환, 과민성 장 증후군, COPD, 천식 및 알레르기성 비염의 치료를 위해, 본 발명의 화합물은 작용제, 예컨대 TNF-α 억제제, 예컨대 항-TNF 모노클로날 항체 (예컨대, 레미케이드(Remicade), CDP-870 및 D₂.E₇.) 및 TNF 수용체 면역글로불린 분자, 예컨대 에타네르셉트(Etanercept) (엔브렐(Enbrel)), 비-선택적인 COX-1/COX-2 억제제 (예컨대 피록시캄, 디클로페낙), 프로피온산, 예컨대 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜 및 이부프로펜), 페나메이트 (예컨대 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존), 피라졸론 (예컨대 페닐부타존), 살리실레이트 (예컨대 아스피린), COX-2 억제제 (예컨대 멜록시캄, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브 및 에토리콕시브) 저용량 메토트렉세이트, 레플루노미드; 시클레소니드; 히드록시클로로퀸, d-페니실라민, 아우라노핀, 또는 비경구 또는 경구 골드와 조합될 수 있다. 염증성 장 질환 및 과민성 장 장애에 대해, 추가적 편리한 작용제에는, 술파살라진 및 5-ASA, 국소 및 전신 스테로이드, 면역조절제 및 면역억제제, 항생제, 프로바이오틱스 및 항-인테그린이 포함된다.

본 발명은 또한 류코트리엔 생합성 억제제, 5-리폭시게나제 (5-LO) 억제제 또는 5-리폭시게나제 활성 단백질 (FLAP) 길항제, 예를 들어 질류톤; ABT-761; 펜류톤; 테폭살린; 애보트(Abbott)-79175; 애보트-85761; N-(5-치환)-티오펜-2-알킬술폰아미드; 2,6-디-tert-부틸페놀 히드라존; 메톡시테트라히드로피란, 예를 들어 제네카(Zeneca) ZD-2138; 화합물 SB-210661; 피리디닐-치환 2-시아노나프탈렌 화합물, 예를 들어 L-739,010; 2-시아노퀴놀린 화합물, 예를 들어 L-746,530; 인돌 및 퀴놀린 화합물, 예를 들어 MK-591, MK-886 및 BAY x 1005와 본 발명의 화합물의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 및 페노티아진-3-온, 예를 들어 L-651,392; 아미디노 화합물, 예를 들어 CGS-25019c; 벤족살라민, 예를 들어 온타졸라스트; 벤젠카르복스이미드아미드, 예를 들어 BIIL 284/260; 자피르루카스트, 아블루카스트, 몬텔루카스트, 프란루카스트, 베르루카스트 (MK-679), RG-12525, Ro-245913, 이라루카스트 (CGP 45715A) 및 BAY x 7195와 같은 화합물로 이루어진 군으으로부터 선택된 류코트리엔 LTB.sub4., LTC.sub4., LTD.sub4. 및 LTE.sub4.에 대한 수용체 길항제와 본 발명의 화합물의 조합물에 관한 것이다

본 발명은 또한 이소형 PDE4D의 억제제를 비롯한 PDE4 억제제와 본 발명의 화합물의 조합물에 관한 것이다

본 발명은 또한 항히스타민성 H.sub1. 수용체 길항제, 예컨대 세티리진, 로라타딘, 데스로라타딘, 펙소페나딘, 아스테미졸, 아젤라스틴 및 클로르페니라민과 본 발명의 화합물의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 위보호성 H₂ 수용체 길항제의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 α₁- 및 α₂-아드레날린성 수용체 효능제 혈관수축제 교감신경흥분제, 예컨대 프로필헥세드린, 페닐에프린, 페닐프로판올아민, 슈도에페드린, 나파졸린 히드로클로라이드, 옥시메타졸린 히드로클로라이드, 테트라히드로졸린 히드로클로라이드, 크실로메타졸린 히드로클로라이드 및 에틸노르에피네프린 히드로클로라이드의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 항콜린제 예컨대 이프라트로퓸 브로마이드; 티오트로퓸 브로마이드; 옥시트로퓸 브로마이드; 피렌제핀; 및 텔렌제핀의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 β₁- 내지 β₄-아드레날린성 수용체 효능제 예컨대 메타프로테레놀, 이소프로테레놀, 이소프레날린, 알부테롤, 살부타몰, 포르모테롤, 살메테롤, 테르부탈린, 오르시프레날린, 비톨테롤 메실레이트 및 피르부테롤; 또는 테오필린 및 아미노필린을 비롯한 메틸크산타닌; 나트륨 크로모글리케이트; 또는 무스카린성 수용체 (M1, M2 및 M3) 길항제의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 인슐린-유사 성장 인자 유형 I (IGF-1) 모방체의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 프레드니손, 프레드니솔론, 플루니솔리드, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 플루티카손 프로피오네이트 및 모메타손 푸로에이트와 같은, 전신 부작용이 감소된 흡입 글루코코르티코이드와 본 발명의 화합물의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과, 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMP)의 억제제, 즉 스트로멜리신, 콜라게나제, 및 젤라티나제 뿐만 아니라, 아그레카나제; 특히 콜라게나제-1 (MMP-1), 콜라게나제-2 (MMP-8), 콜라게나제-3 (MMP-13), 스트로멜리신-1 (MMP-3), 스트로멜리신-2 (MMP-10), 및 스트로멜리신-3 (MMP-11) 및 MMP-12의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 케모카인 수용체 기능의 다른 조절제, 예컨대 CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 및 CCR11 (C-C 패밀리의 경우); CXCR1, CXCR3, CXCR4 및 CXCR5 (C-X-C 패밀리의 경우) 및 CX₃CR1 (C-X₃-C 패밀리의 경우)의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 항바이러스제, 예컨대 비라셉트(Viracept), AZT, 아시클로비르 및 팜시클로비르, 및 항패혈증 화합물 예컨대 발란트(Valant)의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 심혈관 작용제, 예컨대 칼슘 채널 차단제, 지질 강하제, 예컨대 스타틴, 피브레이트, 베타-차단제, ACE 억제제, 안지오텐신-2 수용체 길항제 및 혈소판 응집 억제제의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 CNS 작용제, 예컨대 항우울제 (예컨대 세르트랄린), 항-파킨슨병 약물 (예컨대 데프레닐, L-도파, 레큅, 미라펙스, MAOB 억제제 예컨대 셀레긴 및 라사길린, comP 억제제 예컨대 타스마르, A-2 억제제, 도파민 재흡수 억제제, NMDA 길항제, 니코틴 효능제, 도파민 효능제 및 뉴런 산화질소 신타제의 억제제) 및 항-알츠하이머 약물 예컨대 도네페질, 타크린, COX-2 억제제, 프로펜토필린 또는 메트리포네이트의 조합물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물과 (i) 트립타제 억제제; (ii) 혈소판 활성화 인자 (PAF) 길항제; (iii) 인터류킨 전환 효소 (ICE) 억제제; (iv) IMPDH 억제제; (v) VLA-4 길항제를 비롯한 부착 분자 억제제; (vi) 카텝신; (vii) MAP 키나제 억제제; (viii) 글루코스-6 포스페이트 데히드로게나제 억제제; (ix) 키닌-B.sub1. - 및 B.sub2. -수용체 길항제; (x) 항-통풍 작용제, 예를 들어, 콜히친; (xi) 크산틴 옥시다제 억제제, 예를 들어, 알로퓨리놀; (xii) 요산뇨배설촉진제, 예를 들어, 프로베네시드, 술핀피라존과 벤즈브로마론; (xiii) 성장 호르몬 분비촉진제; (xiv) 형질전환 성장 인자 (TGFβ); (xv) 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF); (xvi) 섬유모세포 성장 인자, 예를 들어, 염기성 섬유모세포 성장 인자 (bFGF); (xvii) 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF); (xviii) 캡사이신 크림; (xix) NKP-608C; SB-233412 (탈네탄트) 및 D-4418로 이루어진 군으로부터 선택된 타키키닌(Tachykinin) NK.sub1. 및 NK.sub3. 수용체 길항제; (xx) UT-77및 ZD-0892로 이루어진 군으로부터 선택된 엘라스타제 억제제; (xxi) TNFα 전환 효소 억제제 (TACE); (xxii) 유도된 산화질소 신타제 억제제 (iNOS) 또는 (xxiii) TH2 세포 상에 발현되는 화학유인물질 수용체-상동성 분자 (CRTH2 길항제)의 조합물에 관한 것이다.

본 발명의 화합물은 또한 골다공증 작용제, 예컨대 랄록시펜, 드롤록시펜, 라소폭시펜 또는 포소막스, 및 면역억제제 예컨대 FK-506, 라파마이신, 시클로스포린, 아자티오프린 및 메토트렉세이트와 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 골관절염의 치료를 위한 현존하는 치료제와 함께 사용될 수 있다. 함께 사용되는 적합한 작용제에는 표준 비-스테로이드성 항-염증 작용제 (이하 NSAID's) 예컨대 피록시캄, 디클로페낙, 프로피온산 예컨대 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜 및 이부프로펜, 페나메이트 예컨대 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론 예컨대 페닐부타존, 살리실레이트 예컨대 아스피린, COX-2 억제제 예컨대 셀레콕시브, 발데콕시브, 로페콕시브 및 에토리콕시브, 진통제 및 관절내 요법제 예컨대 코르티코스테로이드 및 히알루론산 예컨대 히알간 및 신비스크 및 P2X7 수용체 길항제가 포함된다.

본 발명의 화합물은 또한 암의 치료를 위한 현존하는 치료제와 함께 사용될 수 있다. 함께 사용되는 적합한 작용제에는 다음이 포함된다.

(i) 의료 종양학에서 사용되는 항증식/항신생물 약물 및 이의 조합, 예컨대 알킬화제 (예를 들면, 시스-플라틴, 카르보플라틴, 시클로포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란, 클로람부실, 부술판 및 니트로소우레아); 항대사제 [예를 들면, 항폴린산제, 예를 들어 플루오로피리딘 (예컨대 5-플루오로우라실 및 테가푸르), 랄티트렉세드, 메토트렉세이트, 시토신 아라비노시드 및 히드록시우레아, 겜시타빈 및 파클리탁셀 (탁솔(Taxol, 등록상표))]; 항종양 항생제 (예를 들면, 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티노마이신 및 미트라마이신과 같은 안트라시클린류); 항유사분열제 (예를 들면, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드류, 및 탁솔 및 탁소테레와 같은 탁소이드류); 및 토포이소머라제 억제제 (예를 들면, 에토포시드 및 테니포시드와 같은 에피포도필로톡신류, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);

(ii) 세포 증식 억제제, 예컨대 항에스트로겐 (예를 들면, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요오독시펜), 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (예를 들면, 풀베스트란트), 항안드로겐 (예를 들면, 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드 및 시프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 효능제 (예를 들면, 고세렐린, 루프로렐린 및 부세렐린), 프로게스토겐(예를 들면, 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제 (예를 들면, 아나스트로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑세메스탄) 및 5α-리덕타제의 억제제, 예컨대 피나스테리드;

(iii) 암 세포 침습을 억제하는 작용제 (예를 들면, 마리마스타트와 같은 메탈로프로테이나제 억제제 및 우로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체 기능의 억제제);

(iv) 성장 인자 기능의 억제제, 예를 들면, 상기 억제제는 성장 인자 항체, 성장 인자 수용체 항체 (예를 들면, 항-erbb2 항체 트라스투주맙 [헤르셉틴 (Herceptin, 상표명)], 및 항-erbb1 항체 세툭시맙 [C225]), 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 티로신 키나제 억제제 및 세린/트레오닌 키나제 억제제, 표피 성장 인자 패밀리의 억제제 (예를 들면, EGFR 패밀리 티로신 키나제 억제제, 예컨대 N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(게피티닙, AZD1839), N-(3-에틴일페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민(에를로티닙, OSI-774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(CI 1033)), 혈소판 유도 성장 인자 패밀리의 억제제 및 간세포 성장 인자 패밀리의 억제제;

(v) 항혈관형성제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효과를 억제하는 것들 (예를 들면, 항 혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙 [아바스틴 (Avastin, 상표명)], 국제 특허 출원 WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 및 WO 98/13354에 개시된 것과 같은 화합물) 및 다른 메커니즘에 의해 작동하는 화합물 (예를 들면, 리노마이드, 인테그린 ανβ3 기능의 억제제 및 안지오스타틴);

(vi) 혈관 손상제, 예컨대 콤프레타스타틴 A4 및 국제 특허 출원 WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 및 WO 02/08213에 개시된 화합물;

(vii) 안티센스 요법, 예를 들면 상기 열거된 표적에 지정된 것들, 예컨대 항-ras 안티센스인 ISIS 2503;

(viii) 유전자 요법 접근법, 예를 들면 변형 p53 또는 변형 BRCA1 또는 BRCA2와 같은 변형 유전자를 대체하는 접근법, GDEPT (유전자 지정 효소 전구약물 요법) 접근법, 예컨대 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 박테리아 니트로리덕타제 효소를 사용하는 것, 및 화학 요법 또는 방사선 요법, 예컨대 다중 약물 내성 유전자 요법에 대해 환자의 내성을 증가시키는 접근법; 및

(ix) 면역 요법 접근법, 예를 들면 환자의 종양 세포의 면역원성을 증가시키는 생체외 및 생체내 접근법, 예컨대 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자와 같은 시토킨류를 이용한 형질감염, T-세포 에너지를 감소시키는 접근법, 형질감염된 면역 세포, 예컨대 시토킨 형질감염된 수지상 세포를 사용하는 접근법, 시토킨 형질감염된 종양 세포주를 사용하는 접근법 및 항-이티오타입 항체를 사용하는 접근법.

이제 하기 구체적 설명, 실시예, 생물학적 데이터 및 참조 실시예를 참조로 본 발명을 설명할 것이나, 여기에 제한되는 것은 아니다.

구체적 설명

화학식 1의 화합물은 하기 확인된 공지된 화합물 중 임의의 하나에 비해 하나 이상의 개선된 약리학적 특성을 갖는다 (표 1 및 2 참조).

인간 청소의 간 대사 성분은, 인간 간세포로부터의 스케일링된 시험관내 고유 청소율 (CL_고유) 데이터 (문헌 [Chem Biol Interact. 2007, 168(1), 2-15] 참조) 및 인간 혈액 결합의 정도 (주로 혈장 단백질 결합으로 인함)로부터 예측된다. 간의 잘 교반된 모델은 간세포를 사용하여 측정한 고유 청소율 (CL_고유)로부터 간에서의 혈액 청소율을 예측하기 위한 모델이다 (문헌 [Drug Metab Dispos. 2005, 33(9), 1304-11] 참조). 모델은 통상적으로 하기와 같이 기록된다.

여기서, A는 간 1 g 당 간세포의 수 (×백만)이고, B는 체중 1 kg 당 간의 g이고 (이들 파라미터의 표준 값: A=120, B=22.1), fu_인간은 혈장에서의 인간 유리 분획이고, fu_고유는 간세포 매트릭스에서의 유리 분획이고, B/P는 인간 혈액에서의 혈액 대 혈장 농도 비율이다.

상기 모델로부터, 시험관내에서 인간 간세포 고유 청소율 (CL_고유)을 감소시키는 것은 인간 대사성 청소율 (CL)을 감소시킨다는 것이 명백하다. 대사성 청소율 (CL)을 감소시키는 것은 제거 반감기 (t_½)를 증가시켜, 약물의 작용 지속기간을 증가시킨다 (하기 널리 공지된 방정식을 고려하여 확인할 수 있음).

제거 반감기 (t_½)는 (혈장 농도-시간 프로파일의 가장 넓은 영역과 연관된 단계에서) 절반 혈장 농도에 도달하는데 걸리는 시간이고, V_d는 분포 부피이다 (문헌 [Clinical Pharmacokinetics, concepts and applications, 3rd edition. 1995. by M Rowland and T. N. Tozer. Publisher Williams and Wilkins] 및 [Current Drug Matabolism. 2006, 7(3), 251-64] 참조).

상기로부터, 낮은 청소율 CL_고유 및 CL이 약물의 치료학적 농도를 달성하는데 요구되는 투여량 및 또한 투여 빈도 모두에 영향을 미칠 것임을 알 수 있다. 낮은 CL은 치료학적 농도를 달성하는데 낮은 용량의 약물이 요구되는 것을 의미한다.

특히, WO 2004/011443의 화합물 (즉, 실시예 21 및 39-42 (표 1 참조))과 화학식 1의 화합물 (표 2 참조)의 비교는 화학식 1의 화합물이 그의 간 대사 안정성의 척도로서 개선된 효능 (pIC₅₀ = 8.2) 및 감소된 간 고유 청소율 (CL_고유 = 2.1)을 둘 다 가짐을 나타낸다.

구체적으로는, WO 2004/011443의 실시예 21 (pIC₅₀ = 5.6) (표 1)은 화학식 1의 화합물 (CL_고유 = 2.1)과 비교하여 낮은 간 고유 청소율 값 (CL_고유 = 2.3)을 나타냈다. 그러나, 상기 화합물은 실시예 39 내지 42의 화합물 (316 내지 1000배) 및 화학식 1의 화합물 (398배) 보다 유의하게 낮은 효능을 나타낸다.

WO 2004/011443의 실시예 39 내지 42의 몇몇 화합물에 포함된 구조적 변형 (표 1)은 화학식 1의 화합물 (pIC₅₀ = 8.2)과 비교하여 더 높은 효능 (pIC₅₀ = 8.1 내지 8.6)을 유발하였다. 그러나, 실시예 39 내지 42의 화합물은 WO-2004/022443의 실시예 21의 화합물 (2.2 내지 7.4배) 및 화학식 1의 화합물 (2.4 내지 8.1배)에 비해, 더 높은 간 고유 청소율에 의해 입증되는 바와 같이 대사적으로 덜 안정하다. 부가적으로, 화학식 1의 화합물은 인간 혈장에서의 유리한 유리 분획을 나타낸다. 인간 혈장에서의 개선된 유리 분획은 인간에서의 개선된 전체 인간 전혈 효능을 일으키는 것으로 기대된다.

달리 언급되지 않는 한, 이제 본 발명은 본원에서 하기의 비제한적인 실시예에 의해 예시될 것이며, 여기서

(i) 주어진 핵자기 공명 (NMR) 스펙트럼은 배리언 유니티 이노바 (Varian Unity Inova) 300 또는 400 MHz 분광계에서 측정하였다. ¹H NMR 데이터는 내부 표준물로서 테트라메틸실란 (TMS)에 대해 100만분의 1 (ppm)로 나타낸, 주요 진단 프로톤에 대한 델타값의 형태로 인용된다.

(ii) 질량 분광계 (MS) 스펙트럼은 핀니간 매트 (Finnigan Mat) SSQ7000 또는 마이크로매스 플랫폼 분광계 (Micromass Platform spectrometer)에서 측정하였다.

(iii) 실시예의 표제 및 부제 화합물 및 방법은 어드밴스드 케미칼 디벨롭먼트 인코포레이티드 (Advanced Chemical Development Inc, 캐나다)로부터의 IUPAC ACD 명명 프로그램 (버전 8.0)을 사용하여 명명하였다.

(iv) 순상 컬럼 크로마토그래피 및 순상 HPLC는 실리카 컬럼을 사용하여 수행하였다. 역상 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC) 정제는 워터스(Waters) 600 펌프 제어기, 워터스 2487 검출기 및 길슨 (Gilson) FC024 단편 수집기가 구비된 워터스 마이크로매스 (Waters Micromass) LCZ, 또는 시메트리(Symmetry) 노바팍(NovaPak) 또는 엑스-테라(Ex-Terra) 역상 실리카 컬럼을 사용한 길슨 오토 퓨리피케이션 시스템 (Gilson Auto Purification System)을 사용하여 수행하였다.

(v) 광학 회전은 AA-1000 편광계를 이용하여 측정하였다. [α]_D는 20℃의 온도 및 나트륨 D선의 파장 (589.3 nm)에서 측정하였다.

(vi) 도 1 내지 6에 나타낸 X-선 분말 회절 (XRPD) 분석은 패널리티컬 큐빅스 프로 (PANalytical CubiX PRO) 기기를 이용하여 수행하였다. 데이터는 0.02°증분 당 100-초 노출시키는 2°내지 40°2θ 스캔 범위에 걸친 θ-2θ 구성의 패널리티컬 큐빅스 프로 기기 상에서 수집하였다. X-선을 45 kV 및 40 mA에서 작동하는 구리 미세 장초점 튜브에 의해 생성하였다. 구리 X-선의 파장은 1.5418 Å이었다. 약 2 mg의 화합물을 놓은 제로 배경 홀더에서 데이터를 수집하였다. 홀더는, 비-회절 면을 따라 절단한 후 광학적 플랫 처리로 연마한 단일 결정의 규소로부터 제조되었다. 이 표면 상에 입사된 X-선은 브래그(Bragg) 소광에 의해 무효화시켰다. 언급된 모든 피크는 ± 0.1 θ로 정확하다.

(vii) 하기 약어가 사용되었다.

Xphos 2-디시클로헥실-포스피노-2',4',6'-트리-이소프로필,1,1'-비페닐

AcOH 아세트산

CHCl₃ 클로로포름

DCM 디클로로메탄

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸술폭시드

Et₂O 디에틸 에테르

EtOAc 에틸 아세테이트

MgSO₄ 황산마그네슘

NMP 1-메틸피롤리딘-2-온

THF 테트라히드로푸란

H₂O 물

NH₃ 암모니아

TFA 트리플루오로아세트산

MeOH 메탄올

EtOH 에탄올

실시예 1

N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1R,2R)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

i) 1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논

물 (67 mL) 중 시트르산 (70 g, 0.37 mol)을 물 (89 mL) 및 에틸 아세테이트 (600 mL) 중 (S)-칼륨 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실레이트 (문헌 [J. Med. Chem. 1991, 34, (1), 392-397]) (75 g, 0.41 mol)의 교반 용액에 첨가하였다. 유기 용액을 분리하고, 수용액을 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 진공하에 농축시킨 다음, 실온에서 고 진공하에 건조시켜 투명한 오일 (59 g, 0.41 mol)을 수득하였다. 교반하면서, 유리 산 ((4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실산)을 무수 디에틸 에테르 (800 mL) 중에 용해시키고, 질소 분위기하에 0℃로 냉각시켰다. 메틸 마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중 3 M, 200 mL, 0.60 mole)을 적가하였다. 이어서, 추가량의 무수 디에틸 에테르 (300 mL)를 첨가한 후, 추가량의 메틸 마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중 3 M, 97 mL, 0.29 mol)을 첨가하였다. 첨가는 75분에 걸쳐 완료되었다. 반응 혼합물을 0℃에서 추가로 30분 동안 교반한 후, 실온으로 가온하고, 추가로 18시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 (91 mL)를 5분에 걸쳐 적가하였고, 상기 기간 동안 온도가 21 → 25℃로 상승하였으며, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙조에서 5℃로 예냉된 수성 염화암모늄 (730 mL 중 230 g)에 배치식으로 부었고, 상기 시간 동안 온도가 10℃로 상승하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 디에틸 에테르 (4 x 600 mL)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 건조시키고 (MgSO₄), 진공하에 농축시켜 (조 온도 < 20℃), 생성물을 미황색 오일 (27 g, 46％)로서 수득하였다.

ii) (1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-[(1R)-1-페닐에틸]에탄아민

　(R)-(α)-메틸벤질아민 (29.6 g, 31 mL, 0.24 mol)을 무수 아세토니트릴 (430 mL) 중 단계 i)의 생성물 (1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논) (27.1 g, 0.19 mol)의 교반 용액에 2분에 걸쳐 질소 분위기하에 적가하였다. 반응 혼합물을 수조에서 냉각시키고, 아세트산 (14.6 g, 13.9 mL, 0.24 mol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 상기 기간 동안 온도를 20 내지 23℃로 유지하였다. 추가로 10분 동안 교반한 후, 온도를 24 내지 26℃로 유지하면서 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (99.7 g, 0.47 mol)를 1시간에 걸쳐 배치식으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 (주말에 걸쳐) 교반하였다. 혼합물을 수성 중탄산나트륨에 붓고, 발포가 중지될 때까지 (pH 7 내지 8) 고체 중탄산나트륨을 첨가하였다. 유기 용액을 분리하고, 수성 상을 디에틸 에테르 (2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 수성 염화나트륨 (300 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고, 진공하에 농축시켜, 2상 오일 (투명/황색) (43.5 g)을 수득하였다. 이소헥산을 첨가하고, 저점도 층을 분리하였다. 이어서, 이소헥산 추출물을 진공하에 농축시켜, 조 생성물을 미황색 오일 (43 g, 92％)로서 수득하였다.

(R)-(α)-메틸벤질아민 10.3 g 및 33.6 g과 1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논 각각 9.4 g 및 30.8 g을 사용하여 상기 반응을 2회 더 반복함으로써, 조 생성물을 각각 14.7 g 및 43 g 수득하였다. 합한 조 생성물 (100.7 g)을 하기와 같이 정제하였다.

부분입체이성질체 생성물 혼합물을 실리카 상에서 크로마토그래피로 (바이오티지 (Biotage), EtOAc:이소헥산:트리에틸아민 20:80:0.5) 배치식으로 정제하였다 (각각의 구동 당 대략 22.5 g). 바람직한 생성물을 함유하는 적절한 분획 (상부 스팟)을 2개의 별도의 배치로 합하고 (분획 1: 32.9 g, 및 분획 2: 19.5 g), 개별적으로 재크로마토그래피 처리하여 (분획 1 - 2 배치, 분획 2 - 1 배치), 부제 화합물을 미황색 오일 (39.2 g, 33％)로서 수득하였다.

220 nm에서 키랄 HPLC 순도 100％ (키로바이오틱 (Chirobiotic) V 컬럼 4.6 x 100 mm, 6.7:3.3:90의 MeOH 중 0.1％ AcOH : MeOH 중 0.1％ TEA : MeOH로 용출, 1 ml/분, 20℃, 15분에 걸쳐).

iii) tert-부틸 {(1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}카르바메이트

에탄올 (270 mL) 중 단계 ii)의 생성물 ((1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-[(1R)-1-페닐에틸]에탄아민) (18.9 g, 76 mmol), 디-tert-부틸 디카르보네이트 (16.9 g, 76 mmol) 및 탄소 상 20％ 수산화팔라듐(II) (0.92 g)의 혼합물을 72시간에 걸쳐 (주말에 걸쳐) 교반하면서 실온에서 4압력의 수소하에 수소화시켰다. 반응 혼합물을 하이플로 (Hyflo)를 통해 여과하고, 용매를 증발시켜, 부제 화합물을 무색 결정질 고체 (18.7 g, 100％)로서 수득하였다.

iv) (2R,3R)-3-아미노부탄-1,2-디올 히드로클로라이드

수조에서 21℃ 내지 25℃의 온도를 유지하면서 메탄올 (51 mL) 중 단계 iii)의 생성물 (tert-부틸 {(1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}카르바메이트) (10 g, 41 mmol)의 용액을 교반하면서 디옥산 중 4 M HCl (51 mL)로 10분에 걸쳐 적가처리하고, 이어서 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 톨루엔과 함께 2회 공비킨 후, 고 진공하에 건조시켜, 부제 화합물을 약간의 잔류 용매를 보유하는 황색 점성의 검 (7.3 g)으로서 수득하였다.

v) (2R,3R)-3-({6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘-4-일}아미노)부탄-1,2-디올

아세토니트릴 (80 mL) 중 단계 iv)의 생성물 ((2R,3R)-3-아미노부탄-1,2-디올 히드로클로라이드) (3.3 g, (NMR 분석으로부터 75중량％ 기준), 2.5 g, 17 mmol), 4,6-디클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘 (WO-2004/011443) (5.0 g, 16 mmol) 및 탄산수소나트륨 (4.4 g, 53 mmol)의 혼합물을 질소 분위기하에 18시간 동안 교반하면서 환류하에 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고, 물과 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 황색 오일 (7.5 g)을 수득하였다. 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피로 (바이오티지, 에틸 아세테이트:이소헥산 8:2) 정제하여, 생성물을 백색 포말 (5.7 g, 95％)로서 수득하였다.

vi) N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1R,2R)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

무수 디옥산 (85 mL) 중 단계 v)의 생성물 ((2R,3R)-3-({6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘-4-일}아미노)부탄-1,2-디올) (5.3 g, 14 mmol), 아제티딘-1-술폰아미드 (WO-2004/011443) (2.7 g, 19 mmol), 팔라듐(II) 트리스(디벤질리덴아세톤) 디팔라듐 (0) (0.82 g), XPhos (0.82 g) 및 탄산세슘 (6.4 g, 20 mmol)의 혼합물을 질소 분위기하에 교반하면서 90분 동안 105℃에서 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (13 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 유기 분획을 분리하고, 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 적색 포말 (10.0 g)을 수득하였다. 생성물을 크로마토그래피 (SiO₂, EtOAc)로 2회 정제하여, 황색 포말을 수득하였고, 이를 DCM 중에 현탁시키고, 10분 동안 환류시킨 후, 교반하면서 밤새 실온으로 냉각시켰다. 고체를 여과하고, 진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 결정질 형태 변형 A로 지정된 무색 고체 (4.2 g, 63％)로서 수득하였다.

220 nm에서의 키랄 HPLC 순도 98.3％ (키랄셀 OD 컬럼 4.6 x 250 mm, 90:10, 이소헥산 중 0.1％ TFA : 이소프로판올로 용출, 1 ml/분, 40℃, 90분에 걸쳐).

실온에서 1주간 물질 (10.8 mg)을 물 (150 ㎕) 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 A의 결정화도를 향상시켰다. 1주 후, 고체를 슬러리로부터 단리하고, XRPD로 분석하였다. 변형 A에 대한 XRPD 패턴을 도 1에 나타냈다. 변형 A의 몇몇 특징적인 피크를 하기 표 3에 기재하였다.

실온에서 1주간 변형 A (8.9 mg)를 시클로헥산 (70 ㎕) 중에서 슬러리화시킴으로써, 변형 B를 제조하였다. 1주 후 슬러리로부터 고체를 단리하고, XRPD로 분석하였다. 변형 B에 대한 XRPD 패턴을 도 2에 나타냈다. 변형 B의 몇몇 특징적인 피크를 하기 표 4에 기재하였다. 또한, 1주간 변형 A를 실온에서 이소-프로판올 중에서, 그리고 70℃에서 헥산, 시클로헥산, 물 또는 톨루엔 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 B를 생산하였다.

실온에서 1주간 변형 A (9.6 mg)를 디옥산 (50 ㎕) 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 C를 제조하였다. 1주 후 슬러리로부터 고체를 단리하고, XRPD를 통해 분석하였다. 변형 C에 대한 XRPD 패턴을 도 3에 나타냈다. 변형 C에 대한 몇몇 특징적인 피크를 하기 표 5에 기재하였다.

실온에서 1주간 변형 A (9.1 mg)를 에틸 아세테이트 (50 ㎕) 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 D를 제조하였다. 1주 후 슬러리로부터 고체를 단리하고, XRPD를 통해 분석하였다. 변에 D에 대한 XRPD 패턴을 도 4에 나타냈다. 변형 D에 대한 몇몇 특징적인 피크를 하기 표 6에 기재하였다. 또한 70℃에서 1주간 변형 A를 에틸 아세테이트 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 D를 제조하였다.

실온에서 1주간 변형 A (6.8 mg)를 헥산 (100 ㎕) 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 E를 제조하였다. 1주 후 슬러리로부터 고체를 단리하고, XRPD를 통해 분석하였다. 변형 E에 대한 XRPD 패턴을 도 5에 나타냈다. 변형 E에 대한 몇몇 특징적인 피크를 하기 표 7에 기재하였다.

실온에서 1주간 A (9.1 mg)를 디에틸 에테르 (70 ㎕) 중에서 슬러리화시킴으로써 변형 F를 제조하였다. 1주 후 슬러리로부터 고체를 단리하고, XRPD로 분석하였다. 변형 F에 대한 XRPD 패턴을 하기 도 6에 나타냈다. 변형 F에 대한 몇몇 특징적인 피크를 하기 표 8에 기재하였다.

실시예 2

실시예 1의 화합물의 별법의 제조

a) (1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민

에탄올 (30 mL) 중 실시예 1 단계 ii)의 생성물 ((1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-[(1R)-1-페닐에틸]에탄아민) (2 g, 8.0 mmol)에 수산화팔라듐 (0.05 g, 20％ Pd)을 첨가하고, 혼합물을 교반하면서 5 bar의 실온에서 16시간에 걸쳐 수소화시켰다. 추가의 수산화팔라듐 (0.2 g)을 첨가하고, 혼합물을 추가로 72시간 동안 수소화시켰다. 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켜, 생성물을 투명한 오일 (0.79 g, 67％)로서 수득하였다.

b) 6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민

아세토니트릴 (12 mL) 중 단계 a)의 생성물 ((1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민) (0.40 g, 2.8 mmol), 4,6-디클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘 (WO-2004/011443) (0.77 g, 2.5 mmol) 및 탄산수소나트륨 (0.24 g, 2.8 mmol)의 혼합물을 질소 분위기하에 교반하면서 18시간 동안 환류하에 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고, 물과 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 황색 오일 (1.2 g)을 수득하였다. 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피로 (바이오티지, 에틸 아세테이트:이소헥산 2.5:7.5) 정제하여, 부제 화합물을 투명한 점성의 오일 (1.1 g, 95％)로서 수득하였다.

c) N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드

무수 디옥산 (15 mL) 중 단계 b)의 생성물 (6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민) (1.1 g, 25 mmol), 아제티딘-1-술폰아미드 (WO-2004/011443) (0.51 g, 3.8 mmol), 팔라듐(II)트리스(디벤질리덴아세톤) 디팔라듐 (0) (0.15 g), XPhos (0.15 g) 및 탄산세슘 (1.2 g, 20 mmol)의 혼합물을 개방 용기에서 교반하면서 12분 동안 100℃/300W max로 마이크로웨이브로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (2.4 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 유기 분획을 분리하고, 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 적색 검 (1.7 g)을 수득하였다. 생성물을 크로마토그래피 (SiO₂, EtOAc:이소헥산 1:1 이어서 EtOAc:이소헥산 4:6)로 2회 정제하여, 생성물을 무색 포말 (1.0 g, 75％)로서 수득하였다.

d) N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1R,2R)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

메탄올 (19.5 mL) 및 물 (5방울) 중 단계 c)의 생성물 (N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1R)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드) (0.87 g, 1.7 mmol) 및 파라-톨루엔술폰산 (0.85 g, 3.4 mmol)의 혼합물을 60℃에서 20시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹이고, 이를 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 증발시켜, 미황색 포말 (0.74 g)을 수득하였다. 크로마토그래피 (SiO₂, EtOAc:이소헥산 9:1)로 정제하여 포말을 수득하였고, 이를 고 진공하에 40℃에서 18시간 동안 건조시켜, 표제 화합물을 무색 고체 (0.54 g, 67％)로서 수득하였다.

실시예 3

반응식 1 (하기 나타냄)에 요약된 경로를 이용하여 대규모로 반복되는 실시예 1의 화합물의 제조

<반응식 1>

단계 1

물 (800 ml) 중 시트르산 (848 g, 4.41 mol)을 물 (1062 ml) 및 에틸 아세테이트 (7150 ml) 중 칼륨 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실레이트 (문헌 [J. Med. Chem. 1991, 34, (1), 392-397]) (900 g, 4.89 mol)의 교반 용액에 첨가한 후, 15 분 동안 교반하여, 무색 2상 용액을 수득하였다. 첨가하는 동안 발열은 관측되지 않았다. 유기상을 분리하고, 건조시켰다 (MgSO₄). 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 3500 ml)로 추출하고, 유기물을 건조시켰다 (MgSO₄). 유기 분획을 합하고, 진공하에 농축시키고, 실온에서 고 진공하에 건조시켜, 투명 오일 (685.1 g, 4.66 mol)을 수득하였다. 오일을 ¹H NMR 분석에서 생성물 양에 대해 영향을 미치지 않도록 -30℃에서 2일 동안 보관하였다. 오일을 디에틸 에테르 (13000 ml) 중에 용해시키고, 질소 분위기하에 5℃로 냉각시켰다. 0 내지 10℃의 반응 온도를 유지하면서 메틸 마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중 3.0 M, 3500 ml, 10.50 mol)를 반응물에 90분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료되는 대로, 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반한 후, 밤새 교반하면서 실온으로 가온하였다. 메틸 아세테이트 (75 ml, 0.94 mol)를 반응 혼합물에 첨가하자, 가스 발생 및 약간의 발열이 일어났다. 반응 혼합물을 수성 염화암모늄에 첨가하고 (8700 ml 중 2750 g) (첨가하는 동안 25℃ 미만의 온도를 유지함), 10분 동안 교반하였다. 유기상을 분리하고, 수성 상을 디에틸 에테르 (3 x 7100 ml)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (MgSO₄), 진공하에 농축시켜, 케톤을 황색 오일로서 수득하였다.

단계 2

(R)-(+)-1-페닐에틸아민 (715 g, 5.90 mol)을 질소 분위기하에 아세토니트릴 (11100 ml) 중 케톤 (700 g, 4.86 mol)의 교반 용액에 55분에 걸쳐 적가하였다. 첨가하는 동안 약간의 발열이 관측되었다. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 25℃ 미만의 온도를 유지하면서 아세트산 (348 ml, 6.03 mol)을 45분에 걸쳐 적가하자, 백색 침전물이 형성되었다. 추가로 10분 동안 교반한 후, 25℃ 미만의 온도를 유지하면서 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (2340 g, 11.04 mol)를 1시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였고, 가스 발생이 관측되었다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 질소 분위기하에 (5 L/분 유속) 교반하면서 반응 혼합물을 90분에 걸쳐 물 (11000 ml)에 첨가하였다. 첨가는 온도의 감소 및 가스 발생을 일으켰다. 용액이 pH 7에 도달할 때까지 중탄산나트륨 (1560 g, 18.57 mol)을 혼합물에 조금씩 첨가하였다. 첨가는 발열 및 가스 발생을 일으켰다. 유기상을 분리하고, 수성 상을 디에틸 에테르 (2 x 10000 ml)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 수성 염화나트륨으로 세척하고 (7000 ml 중 2760 g), 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 2상 오일 (투명/황색)을 수득하였다. 헵탄 (2000 ml)을 첨가하고, 저점도 층을 분리하였다. 이어서, 헵탄 추출물을 진공하에 농축시켜, 조 생성물을 미황색 오일 (929.3 g, 76.7％)로서 수득하였다. 부분입체이성질체 생성물 혼합물을 실리카 상에서 크로마토그래피로 (에틸 아세테이트:헵탄:트리에틸아민 20:80:0.5) 배치식으로 정제하여, 생성물을 황색 오일로서 수득하였다. 낮은 부분입체이성질체 순도로 단리된 아민을 재크로마토그래피 처리하여, 생성물의 제2 배치를 수득하였다.

단계 3

IMS (3375 ml) 중 아민 (236.1 g, 0.95 mol), 디-tert-부틸디카르보네이트 (208.0 g, 0.95 mol) 및 탄소 상 20％ 수산화팔라듐(II) (11.5 g)의 혼합물을 7일에 걸쳐 교반하면서 실온에서 4 bar의 수소압하에 수소화시켰다. 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켜, 무색 결정질 고체를 수득하였다.

단계 4

질소 분위기하에 디옥산 중 4 M HCl (1800 ml, 7.22 mol)을 메탄올 (1800 ml) 중 Boc 아민 (353.5 g, 1.44 mol)의 냉각 용액에 적가하였다. 첨가하는 동안 수조가 나타낸 반응 온도는 14 내지 20℃ 범위였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 톨루엔과 함께 2회 공비시키고 (2 x 500 ml), 이어서 고 진공하에 건조시켜, 갈색 점성의 검을 수득하였다.

단계 5

아세토니트릴 (6500 ml) 중 아미노디올 (266.4 g, 대략 75중량％, 199.8 g, 1.38 mol), 4,6-디클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘 (390.0 g, 1.27 mol) 및 중탄산나트륨 (361.0 g, 4.30 mol)의 혼합물을 질소 분위기하에 17시간 동안 교반하면서 환류하에 가열하였다. 상기 시간 동안 회백색 현탁액이 형성되었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (4000 ml) 및 물 (4000 ml) 사이에 분배하였다. 유기층을 분리하고, 물 (2000 ml) 및 염수 (2000 ml)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 진한 황색 오일을 수득하였다. 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피로 (에틸 아세테이트:헵탄 4:1) 정제하여, 클로로피리미딘을 황색 검으로서 수득하였다.

단계 6

1,4-디옥산 (6400 ml) 중 클로로피리미딘 (382.1 g, 1.02 mol), 아제티딘-1-술폰아미드 (200.0 g, 1.48 mol), 디-팔라듐-트리스(디벤질리덴아세톤) (56.1 g), X-Phos (56.5 g) 및 탄산세슘 (465.0 g, 1.43 mol)의 혼합물을 105℃에서 90분 동안 질소 분위기하에 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (950 ml)을 혼합물에 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 첨가하는 동안 발열이 관측되었다. 적색 용액이 갖는 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (3500 ml) 및 물 (3500 ml) 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고, 물 (2500 ml) 및 염수 (2500 ml)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하였다. 생성된 적색 용액을 진공하에 농축시켜, 적색 포말을 수득하였다. 생성물을 실리카 상에서 크로마토그래피로 (에틸 아세테이트:헵탄 1:1 이어서 에틸 아세테이트) 정제하여, 황색 포말을 수득하였다. 황색 포말을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 10분 동안 환류시키자, 미황색 침전물이 형성되었고, 실온으로 냉각시켰다. 침전물을 여과한 다음, 재결정화시키고 (에틸 아세테이트:헵탄), 여과하고 60℃에서 진공하에 건조시켜, ASA 피리미딘을 무색 고체로서 수득하였다. 교반하면서, 고체를 추가로 실온에서 5일 동안 DCM (2 L) 중에 현탁시켰다. 고체를 여과하고 진공하에 건조시켜, 실시예 1의 표제 화합물을 무색 고체로서 수득하였다.

생물학적 데이터

인간 간 고유 청소율 (CL_고유) 분석

대부분의 약물에 대해, 그의 혈장 청소율의 많은 구성성분이 간 대사에 의해 기여된다. 고유 청소율 (CL_고유)은 대사가 진행되는 화합물의 잠재력의 측정치이고, 혈장 단백질 결합 및 간 혈류의 고려로부터 생체내 간 청소율과 관련될 수 있다. 따라서, CL_고유는 프로젝트 내에서 화합물의 상대적 대사 안정성의 지표로서 사용될 수 있고, 다른 외부 프로브 기질과 비교될 수 있다. 게다가, 간 대사 청소율이 논점인 것으로 공지된 연구 프로젝트 내에서의 시험관내 CL_고유의 측정은 화합물의 생체내 상이한 약동학 거동을 이해하는데 유용한 수단일 수 있다.

시험 상세사항

하기 상세사항은 pH 7.4 생리학적 조건을 유지하면서 HSA (인간 혈청 알부민)를 함유하지 않는 현탁 완충액을 사용한 인간 간세포 인큐베이션으로부터 고유 청소율 (CL_고유)을 측정하는 방법을 요약한다.

숙련된 과학자가 본 시험 절차의 작동 특성을 재연하도록, 시험 절차의 초기 검증 및 마무리 시점에서 사용된 시약에 대한 특정 공급업체 및 카탈로그 번호를 언급하였다. 시약의 대체가 분석의 작동 특성에 유의하게 영향을 미치지 않는다는 것에 대한 유사 기록 명세서 또는 하기 실험적 확인으로써, 이를 적합한 대체 시약으로 대체하는 것이 배제되지 않는다.

간세포를 인간 간의 일부의 2-단계 계내 콜라게나제 관류 방법에 의해 제조하고, 단백질 무함유 완충액 (하기 참조) 중에 현탁시키고, 얼음 상에 보관한 후 인큐베이션하였다.

계내 콜라게나제 관류에 의한 인간 간세포의 단리

본 방법은 베리(Berry)와 프렌드(Friend)의 1단계 절차 (문헌 [High yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells. J. Cell Biol., 1969, 43, p506])로부터 개발된 세글렌(Seglen) 절차 (문헌 [Preparation of rat liver cells. I. Effect of Ca2+ on enzymatic dispersion of isolated, perfused liver. Exptl. Cell Res., 1972, 74, p450] 및 [preparation of isolated rat liver cells. Methods Cell Biol., 1976, 13, p29])에 기초한다.

본 발명자들은 본 발명에 이르러 단백질 무함유 세포 현탁액의 제조를 개시하였다.

화학물질 및 시약

5％ 과산화수소: 밀리큐(Milli-Q) 수로 희석된 60％ (w/v) 과산화수소 (피셔 사이언티픽(Fisher Scientific)).

간 관류 매질: 깁슨 라이프 테크놀로지스(Gibson Life Technologies)에 의해 즉시사용가능하도록 공급됨 (카탈로그 번호 17701).

간 소화 매질: 깁슨 라이프 테크놀로지스에 의해 즉시사용가능하도록 공급됨 (카탈로그 번호 17703).

현탁 매질: 2.34 g Na HEPES, 2.0 g HSA 분획 V, 0.4 g D-프럭토스, DMEM (1 ℓ 분말 동등물, 시그마(Sigma); 1 g·l^-1 글루코스 함유, Na 피루베이트 함유, NaHCO₃ 무함유, 페놀 레드 무함유), 밀리큐 수를 사용하여 1 ℓ까지 만듦, 1 M HCl을 사용하여 pH를 7.4로 만듬 (단백질 무함유 현탁 완충액은 2.0 g HSA 분획 V를 빼고 제조함).

간세포 단리

소화 매질로 관류시킨 간의 캡슐을 절단하여 개방하고, 세포를 매질로 온화하게 티징하였다. 이어서, 세포를 현탁 매질 50 ml를 함유하는 비커내로 메쉬 (대략 250 μM)를 통과시켰다. 100 ml의 최종 부피까지의 추가의 현탁 완충액을 사용하여 메쉬를 비커내로 세정하였다. 현탁액을 2개의 플라스틱 50 mL 원심분리관 (얼음 상에서 예냉시킴)로 나누고, 4℃에서 2분 동안 50xg로 원심분리하였다. 상층액을 경사분리하고, 펠렛을 단백질 무함유 현탁 완충액에 원래 부피로 재현탁시켰다. 원심분리 단계를 반복하고, 각각의 펠렛을 단백질 무함유 현탁 완충액 대략 10 ml 중에 재현탁시켰다. 현탁액을 합하고, 단백질 무함유 현탁 완충액을 사용하여 부피를 50 mL까지 만들었다.

간세포 수율 및 생존율 추정

분취량의 세포 현탁액 (0.2 mL)을 단백질 무함유 현탁 완충액 0.2 ml로 희석하였다. 희석된 세포에 트리판 블루 용액 0.2 mL (0.4％ w/v)를 첨가한 후, 온화하게 혼합하였다. 1분 후, 파스퇴르 피펫을 사용하여 샘플을 빼내고, 모세관 작용에 의해 임프루브드 노이바우어 카운팅 챔버(Improved Neubauer Counting Chamber)를 채웠다. 이어서, 도립 현미경을 사용하여 세포를 계수하였다 (중앙 스퀘어만) (생존 세포는 염료의 침투를 막을 수 있고, 비-생존 세포는 염색됨). 제조물에서의 생존 세포의 비율(％)을 하기에 따라 계산하였다.

생존 세포의 농도를 계산하였다.

계수 절차를 2벌로 수행하였다.

세포 현탁액을 적절한 부피의 단백질 무함유 현탁 완충액으로 희석하여, 요구 농도의 생존 세포를 얻었고, 사용 전 1시간 까지 얼음 상에 보관하였다.

단백질 제거

신선한 인간 간세포를 일반적으로 HSA를 함유하는 현탁 완충액에서 얻었다. 하기 절차에 단백질의 제거를 기재하였다. 냉동보존 세포는 단백질 무함유 현탁 완충액을 사용하여 간단하게 제조할 수 있었다.

단백질 무함유 현탁 완충액은 간단하게 HSA가 없는 단백질 현탁 완충액을 사용하여 유사한 방식으로 제조하였다. 세포 현탁액을 상기 기재한 바와 같이 50xg에서 재-원심분리하고, 상층액을 폐기하였다. 이어서, 이를 적절한 부피의 단백질 무함유 현탁 완충액으로 대체하였다. 상기 과정을 2회 반복하여, 남아있는 임의의 미량의 단백질을 제거하고, 세포의 최종 재-현탁액을 확인하여, 목적 인큐베이션 농도의 2배 농도를 얻었다.

시험 절차

인큐베이션할 시험 화합물을 DMSO 중 0.1 mM의 농축 원액 (1％ v/v 최종 용매 농도)으로부터 적합한 바이알 내의 적절한 부피 (0.5 mL)의 단백질 무함유 현탁 완충액으로 첨가하였다. 2x10⁶개 세포·mL^-1 농도의 적절한 부피의 세포 (0.5 mL) (최종 인큐베이션 세포 농도의 2배, 트리판 블루 배제에 의한 생존율 > 85％)를 별개의 바이알에 넣고, 두 바이알 모두를 37℃의 수조에서 예비-인큐베이션하였다.

예비-인큐베이션 5분 후, 적절한 부피의 완충액 및 화합물을 세포에 첨가하여, 1x10⁶개 세포·mL^-1의 최종 세포 농도를 얻었고, 반응을 계속 진행하였다.

적절한 시점 (예컨대, 5, 10, 20, 30, 60, 90 및 120분)에, 인큐베이션 혼합물로부터 분취량 (50 ㎕)을 취하고, 2 부피의 빙냉 용매 메탄올에 첨가하여, 반응을 종결시키고, 간세포를 변성시켰다. 또한, 대조군 인큐베이션을 세포 또는 화합물 없이 수행하였다. 인큐베이션이 켄칭되는 대로, 샘플을 5분 동안 진탕시키고, -20℃ 이하에서 2시간 동안 보관하여 단백질 침전을 보조한 후, 3000 rpm 및 4℃에서 15분 동안 원심분리하였다. 상층액을 HPLC 바이알로 옮기고, 적합한 출발점으로서 하기 방법을 사용하여 HPLC-MS로 분석하였다.

용매: A: 메탄올 중 0.1％ 포름산 및 B: 물 중 0.1％ 포름산 (v/v)

컬럼: 워터스 엑스테라 C₁₈ 20 x 3.9 mm, 3.5 ㎛

유속 1.5 ml·분^-1

구배: 0％ B (0.3분), 0％ → 100％ B (0.7분에 걸쳐), 100％ B로 유지 (0.2분), 100％ → 0％B (0.01분에 걸쳐)

데이터 분석 및 계산 방법

인큐베이션 화합물의 생성된 피크 영역을 엑셀 스프레스시트로 옮기고, ln [잔류 농도] 대 시간의 플롯을 생성하였다. 후속의 데이터 처리는 1-구획과 유사하였고, 약동학 모델 As 용량/C₀은 인큐베이션 부피에 대한 용어이고 (ml·10⁶개 세포^-1로 표시), 제거율 상수 k = 0.693/t_½이고, t_½에 의해 CL_고유를 나타내는 방정식은 하기 방정식 1로 주어진 바와 같이 유도할 수 있다.

<방정식 1>

이어서, 인큐베이션으로부터의 모 화합물의 손실의 t_½ 및 CL_고유를 측정하였다.

효능 (pIC₅₀) - 리간드 결합 분석

인간 CXCR2 수용체에서의 길항제의 효능을, 인간 재조합 CXCR2 수용체로 형질감염된 HEK293 세포의 막으로부터 CXCR2 방사성리간드인 [¹²⁵I]인터류킨-8 (IL-8)의 특이적 결합을 억제하는 그의 능력을 정량화함으로써 시험관내에서 측정하였다.

실험 절차

물질

상업적으로 공급된 물질을 하기와 같이 수득하였다.

U-바닥 96-웰 플레이트 (3799) 및 225 cm² 통풍 마개 배양 플라스크 (3001) [코스타(Costar), 코닝(Corning), 영국 켄트]. 멀티스크린 필터 플레이트 (0.45 μm; MAHV N45 50), 진공 매니폴드 및 펌프 (XF54 230 50) [밀리포어(Millipore), 영국 왓퍼드]. N-[2-히드록시에틸]피페라진-N'-[2에탄술폰산] (HEPES; H-3375), 에틸렌 디아민-테트라아세트산 (EDTA; E1644), 마그네슘 클로라이드 (M-9272), 젤라틴 (G9382), 디티오트레이톨 (DTT; D06052), 염화나트륨 (S3160/63), 수산화나트륨 (B6506), 바시트라신 (B0125), 불활성화 소 태아 혈청 (FCS; CR0848) 및 DMSO 플루카 케미카(Fluka Chemika) (41648) [시그마, 영국 풀]. 마이크로신트(MicroScint)-O (6013611) [패커드 바이오사이언스(Packard BioScience), 영국 팽번]. 완전 프로테아제 억제제 칵테일 정제 (1836145) [뵈링거 만하임, 게엠베하(Boehringer Mannheim, GmbH), 독일]. 인간 재조합 [¹²⁵I]IL-8 74 TBq/mmol, 0.712 MBq/ml (IM249) [아머샴(Amersham), 영국 호샴]. 모든 다른 조직 배양 시약은 인비트로겐(Invitrogen, 영국 트코틀랜드 페이즐리)으로부터 입수하였다. 모든 다른 화학적 시약은 피셔 사이언티픽(영국 러프버러)으로부터의 분석 등급이었다.

용액

HEPES (10 mM), 염화칼륨 (2.7 mM), 염화나트륨 (137 mM), 인산수소칼륨 (0.4 mM), 염화칼슘 (1.8 mM), 염화마그네슘 (1 mM), 젤라틴 (0.1％ (w/v)) 및 바시트라신 (100 ㎍/ml)을 함유하는 HEPES-완충 염 용액 (pH 7.4).

HEPES (10 mM), 염화칼륨 (2.7 mM), 염화나트륨 (137 mM), 인산수소칼륨 (0.4 mM), 글루코스 (11 mM)를 함유하는 HEPES-완충 티로드 용액 (pH 7.4).

저장성 완충액: 물 : HEPES-완충 티로드 용액의 3:1 혼합물.

세포 배양물 및 막 제조

HEK293 세포를 진핵 발현 백터 RcCMV로 미리 클로닝한 인간 CXCR2 (EMBL L19593) cDNA로 형질감염시켰다. 클로닝된 세포주를 안정하게 형질감염된 제네티신-내성 집단으로부터 생성하였다. 세포를 37℃, 5％ CO₂의 가습 인큐베이터에서 10％ (v/v) 소 태아 혈청 및 글루타민 (2 mM)을 함유하는 DMEM 매질 중 대략 80％ 전면배양률(confluence)로 통상적으로 성장시켰다. 아큐타제(Accutase, 상표명)를 이용하여 세포를 37℃에서 3 내지 5분 동안 플라스크로부터 수집하고, 얼음 상에서 2x10⁷개 세포/mL의 밀도로 저장성 완충액 중에 재현탁시켰다. 22000 rpm으로 폴리트론 조직 균질화기 세트를 이용하여 균질화시킴으로써 막을 얼음 상에서 제조하였다. 막 분획을 수크로스 구배 원심분리에 의해 정제하였고, 여기서 균질화된 세포가 41％ (w/v) 수크로스 용액 상에 층을 이룬 후, 4℃에서 1시간 동안 140000 g로 원심분리하였다. 막 분획을 경계면에서 수집하고, HEPES-완충 티로드 용액을 사용하여 4배 희석하고, 4℃에서 20분 동안 100000 g로 원심분리하였다. 막 펠렛을 HEPES-완충 티로드 용액 중 1x10⁸개 세포 동등물/mL로 재현탁시키고, 이어서 -80℃에서 분취하여 보관하였다. 막 제조 및 보관에 사용된 모든 완충액은 1 mM DTT 및 완전 프로테아제 억제제(상표명) 칵테일 정제의 존재하에 제조사 지시서에 따라 제조하였다.

분석 프로토콜

분석을 96-웰 플레이트 내의 HEPES-완충 염 용액 중에서 수행하였다. [¹²⁵I]IL-8을 0.06 nM의 최종 농도 (9.6 nM 원액으로부터 예비-희석)로 사용하였다. 분석에서의 최종 DMSO 농도는 1 ％ (v/v)였다. 시험 화합물을 DMSO 중에 연속 희석하여 제조한 후, HEPES-완충 염 용액으로 10배 희석하여, 화합물 및 10％ DMSO를 함유하는 작업 용액을 수득하였다. [¹²⁵I]IL-8의 총 결합 (B0)에 대한 대조군을 화합물의 부재하에 측정하였다. 비-특이적 결합 (NSB)에 대한 대조군을 (1R)-5-[[(3-클로로-2-플루오로페닐)메틸]티오]-7-[[2-히드록시-1-메틸에틸]아미노]티아졸로[4,5-d]피리미딘-2(3H)-온 이수화물, 나트륨 염 (1 μM 최종 농도)의 존재하에 [¹²⁵I]IL-8 결합을 측정함으로써 결정하였다. 동결된 막의 분취량을 녹이고, 앞서 결정한 농도로 희석하여, 첨가된 총 방사성표지의 대략 10％ 결합 (전형적으로는 약 1x10⁶개 세포 동등물/mL)를 얻었다. 분석 성분을 다음과 같이 각 웰에 첨가하였다; 10％ DMSO를 함유하는 완충액 중 1/10 부피의 시험 화합물 또는 대조군, 1/10 부피의 방사성표지, 8/10 부피의 희석된 막. 플레이트를 밀봉하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션한 후, 분석 혼합물을 희석하고, 이어서 밀리포어 진공 매니폴드를 이용하여 2부피의 차가운 HEPES-완충 염 용액으로 세척하였다. 여과 플레이트를 공기 건조시킨 후, 개별 필터를 폴리프로필렌 시험 튜브로 펀칭하고 방사성을 코브라(Cobra) II 감마 계수기 (패커드 바이오사이언스)를 이용하여 샘플 당 1분 동안 직접 감마 계수에 의해 측정하거나, 또는 별법으로 전체 여과 플레이트를 캐리어 플레이트에 넣고 마이크로신트-O 50 ㎕를 각각의 웰에 첨가하였다. 탑카운트(TopCount) 기기(패커드 바이오사이언스)를 이용하여 96-웰 플레이트 섬광 계수를 샘플 웨레 당 1분 동안 수행하였다.

데이터 분석

[¹²⁵I]IL-8의 특이적 결합을 각각의 분석 플레이트에서 측정한 대조군 NSB 값의 평균의 차에 의해 계산하였다. 데이터를 농도-반응 플롯으로 변형시키고, 총 특이적으로 결합된 [¹²⁵I]IL-8 (B0-NSB)에 대한 비율(％)로서 나타냈다. IC₅₀을 특이적으로 결합된 [¹²⁵I]IL-8을 50％ 억제하는데 필요한 화합물의 몰 농도로서 정의하였다. 기술 통계량 (평균±SEM)의 계산을 위해 IC₅₀ 값을 역대수 (pIC₅₀)로 변형시켰다. 사용된 [¹²⁵I]IL-8의 농도 (0.06 nM)는 IL-8에 대해 측정된 K_d (평형 해리 상수) (1.2 nM) 미만이었으며, 따라서 pIC₅₀ 값은 결합 친화도 (pKi)에 근접했다.

화학식 1의 화합물은 >8의 pIC₅₀ 값을 갖는 것으로 밝혀졌다.

혈장 단백질 결합 (PPB)의 측정

혈장 단백질에 대한 약물의 결합 정도는 그의 생체내 효능 및 약동학을 측정하는데 있어서 결정적인 인자이다. 혈장 단백질 결합 정도의 측정에 사용된 방법은 37℃에서 혈장과 완충액 사이에서의 화합물의 평형 투석을 포함한다. 이어서, 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)와 질량 분석법 (MS) 검출을 이용하여 혈장 및 완충액 중 화합물의 농도를 측정한다. 투석 방법은 동시에 10개까지의 화합물의 혼합물을 사용하는 것을 포함한다. 분석에 이용된 농도에서, 화합물이 단독으로 또는 혼합물로 사용되는 경우 결과에서의 유의한 차이가 없음이 밝혀졌다.

방법

막 (분자량 차단값(cut-off) 5000)을 먼저 투석 완충액 중에 최소 1시간 동안 침지시켜 제조하였다. 이어서, 투석 막을 투석 세포에 탑재하였다.

디메틸술폭시드 (DMSO) 중 화합물의 원액을 제조하였다. 본 단계 및 후속의 모든 액체 취급 단계는 보통 테칸(Tecan) 액체 취급 로봇을 이용하여 수행하였다. 5개 이하의 화합물의 혼합물을 사용하였다. 혼합물 중 각각의 화합물의 농도는 보통 1 mM이었다. 각각의 혼합물에 함유된 모든 화합물이 분자량에서 서로 5단위 이상의 차이를 갖도록 혼합물을 선택하였다.

인간 혈장 결합 실험에 대해 통상적으로 동결된 혈장 (EDTA 항응고제)을 사용하였다. 사용 직전에 1 M HCl을 사용하여 혈장의 pH를 7.4로 조정하였다.

이어서, 화합물의 DMSO 원액 (7.5 ㎕)을 혈장 (750 ㎕)과 함께 투석 세포에 첨가하였다. 이를 각각의 혼합물에 대해 2벌로 수행하였다. 이로써 각각의 화합물을 10 μM 농도로 함유하는 (원액이 표준 1 mM인 경우) 혈장 용액 중 1％ DMSO를 얻었다. 이어서, 투석 세포를 밀봉하고, 디아노름(Dianorm) 회전기 단위로 고정하고, 37℃에서 18시간 동안 평형화시켰다. 투석 세포를 평형화시키는 동안, DMSO 원액을 사용하여 혈장 및 완충액 샘플의 최종 분석에 사용하기 위한 최적화된 HPLC/MS 방법을 생성하였다.

평형화 후, 세포를 개방하고, 테칸 액체 취급 로봇을 이용하여 각각의 투석 세포 양측의 혈장 및 완충액으로부터 분취액을 제거하였다. 이어서, 블랭크 혈장을 완충액 샘플에 첨가하고, 완충액을 혈장 샘플에 첨가하여, 각각의 샘플이 6배 희석된 혈장의 매트릭스에 있도록 하였다. 이어서, 표준물을 DMSO 원액 및 블랭크 6배 희석된 혈장으로부터 제조하였다. 4개의 표준물의 농도는 통상적으로 50 nM, 150 nM, 500 nM 및 2500 nM이었다.

이어서, HPLC 및 MS 검출을 이용하여 샘플 및 표준을 분석하였고, 이는 화합물의 혼합물의 디컨볼류션을 가능하게 하였다. HPLC 방법은 희석된 혈장을 직접 주입가능하게 하는 전방(forward) 플러싱 컬럼 스위칭 기술을 포함한다.

결과의 계산

혼합물 중 각각의 화합물에 대한 검량 곡선을 자동으로 계산한 후 완충액 및 혈장 샘플의 농도를 삽입하는 매스링스(MassLynx) 소프트웨어를 이용하여 크로마토그램을 수행하였다. 이들 농도는 여전히 혈장의 희석에 대해 보정을 필요로 한다. 하기 방정식을 이용하여 결합률(％)을 매스링스 데이터로부터 계산하였다.

분자에서의 1.2의 인자는 수성 샘플을 혈장으로 약간 희석한 것을 나타낸다. 분모에서의 6의 인자는 혈장 샘플을 완충액으로 6배 희석한 것에 대해 보정하는 역할을 한다.

각각의 화합물에 대한 유리율(％) (100-％ 결합)을 농도 데이터로부터 계산한 후, 기록하였다.

래트에서의 생체이용률 (F)

여기에 수컷 래트에서의 생체내 약동학 파라미터를 얻는데 사용된 방법을 기재하였다. 이는 모든 화합물을 사용하는 것에 대해 적용가능하지만, 디폴트 제제, 투여 수준 또는 샘플링 간격이 부적절할 수 있는 경우에 용해도, 분석 감도, 예상 청소율 및 반감기와 같은 파라미터를 기초로 변형될 필요가 있을 수 있다. 본원에 기재된 방법은 그로부터 정당화 및 문서화된 변형이 이루어질 수 있는 표준 접근법을 나타낸다. 본 방법은 또한 투여될 단일 화합물 또는 혼합물 (카세트)에 대해서도 허용된다.

투여량 제조

1 mg·mL^-1의 표준 투여 용액을 제조하였다. 권장 투여 비히클 (화합물이 등장성 염수에 충분히 가용성이 아닌 경우)은 50％ PEG 400:50％ 멸균수였다. 화합물의 필요한 질량을 PEG400 중에 용해시킨 후, 물을 첨가하였다. 투여 용액 중 화합물의 농도를, 분취액을 50 ㎍·mL^-1의 공칭 농도로 희석하고 이 농도에서의 표준 용액 및 QC 표준물의 2벌 주입에 대해 보정하여 분석하였다.

투여

250 내지 350 g의 래트 3마리의 군에게 화합물을 볼루스로서 꼬리 정맥에 정맥내 투여하였다 (대략 1 mL·kg^-1). 경구 투여시, 3마리 동물의 개별 군에게 경구 위관영양법으로 투여하였다 (3 mL·kg^-1). 전달된 투여량을 중량 감소로 추정하였다.

필요에 따라 이 효과를 조사하기는 하였지만, 투여 이전에 통상적으로 동물로부터 음식물을 회수하지는 않았다.

샘플 수집

투여-전 샘플을 경구 군으로부터 취하였다. 혈액 샘플 (0.25 mL)을 1 ml 주사기로 채취하고, EDTA 튜브로 옮기고, 샘플 수집 직후 혈장을 원심분리 (3분, 13000 rpm)에 의해 제조하였다.

표준 프로토콜에 대한 샘플링 시간 (분)

샘플 분석

분석물질(들)의 농도를 정량 혈장 내에서 질량 분석법으로 측정하였다.

표준물 및 QC의 제조

표준물 및 품질 대조군 원액을 메탄올 중 50 ㎍/mL의 농도로 제조하였다. 표준물 및 QC 원액을 하기 표에 따라 테칸 제네시스(TECAN GENESIS)로 희석하고, 혈장으로 차단하였다.

10 ㎕의 각각의 상기 용액 A - H (합한 표준물 원액의 연속 희석에 의해 생성) 및 10 ㎕의 용액 B, D 및 G (합한 QC 원액의 연속 희석에 의해 생성)를 테칸에 의해 블랭크 혈장 50 ㎕를 함유하는 96 웰 1.2 mL 폴리프로필렌 튜브에 첨가하였다. 생성된 표준 곡선 및 QC 샘플의 최종 농도를 상기 표에 나타냈다. 더 높거나 더 낮은 범위는 농축된 또는 희석된 초기 원액을 사용하여 얻을 수 있다.

샘플의 제조

각각의 시험 샘플, 표준물 및 QC에 물 150 ㎕를 첨가하였다. 샘플을 하기 정의한 순서로 배열하였다.

1. 상승 농도의 순서로 표준물

2. 상승 농도 매뉴얼 표준의 순서로 QC

3. IV 투여된 동물로부터의 시험 샘플 (1 M, 2 M에 이어서 3 M 샘플)

4. 상승 농도의 순서로 QC

5. PO 투여된 동물로부터의 시험 샘플 (4 M, 5 M에 이어서 6 M 샘플)

6. 상승 농도의 순서로 QC

7. 상승 농도의 순서로 표준물

이어서, 샘플을 캡핑하고, 반복된 전화에 의해 혼합한 후, IEC 센트라(CENTRA) 원심분리기로 20분 동안 3500 rpm에서 원심분리하였다. 각각의 샘플의 분취량 (120 ㎕)을 LC/MS 분석하였다.

질량 분석법

HP1100 HPLC 시스템이 장착된 TSQ700 또는 TSQ 또는 SSQ7000 질량 분석계를 이용하였다. 이용된 공급원은 APCI 또는 ESI였다. 시험 샘플에서 확인되는 농도 범위를 포괄하는 표준물 및 품질 대조군 샘플은 25 ％의 공칭 농도 이내일 것으로 예상하였다.

결과

약동학 데이터 분석 및 도표화를 윈논린(WinNonlin) 및 엑셀(Excel)을 이용하여 달성하였다. 표준 비-구획 분석을 이용하여 도표화된 파라미터를 추정하였다. 투여량이 정규화되면 생체이용률 (F)을 정맥내 및 경구 AUC (혈장 농도 시간 곡선의 적분값)의 비율로부터 계산하였다.

용해도 (S)의 측정

화합물의 용해도는, 스크리닝을 위한 화합물 용액의 제조에 영향을 미칠 뿐만 아니라 동물 및 인간 연구에서 고체 투여 화합물의 흡수에 영향을 미치는 중요한 특성이다. 용해도 측정을 위한 하기 기재된 방법에는 화합물의 포화 용액을 생성한 후, HPLC와 UV 정량화, 및 MS 동정을 이용하여 용액을 분석하는 것이 포함된다.

방법

용매 약 0.3 내지 3.0 mL를 약간의 화합물과 함께 유리 스크류-탑 샘플 튜브에 넣음으로써, 용해도를 측정하기 위한 포화 용액을 제조하였다. 이어서, 튜브를 일정한 실온 (20℃)에서 밤새 진탕시켰다. 진탕 후에 용해되지 않은 물질이 용액 내에 존재하면, 추가량을 첨가하고, 이러한 경우가 아니면 진탕을 계속하였다. 이어서, 샘플을 원심분리 튜브로 옮기고, 헤라우스 바이오퓨즈 프레스코(Heraeus Biofuge Fresco) 원심분리기를 이용하여 13000 rpm으로 약 30분 동안 원심분리하였다. 이어서, 상층액을 제거하고, 새로운 원심분리 튜브에 넣고, 다시 13000 rpm에서 약 30분 동안 원심분리하였다. 용해되지 않은 물질이 튜브의 바닥에 펠렛을 형성하였고, 펠렛 상부의 액체를 분석용으로 제거하였다. 이어서, HPLC와 UV 정량화를 이용하여 용액을 분석하였다. 화합물에 대한 반응이 매우 강한 경우, 반응물이 UV 반응의 보다 적합한 범위 내에 들도록 용액을 정확하게 희석해야 한다. 또한, 화합물의 샘플을 정확하게 칭량하고, 이를 완전히 용해시키는 적절한 부피의 용매 (전형적으로는, DMSO, 에탄올 또는 메탄올)에 용해시킴으로써 표준물을 제조하였다. 이어서, 상기 샘플을 HPLC/UV로 분석하였다. 이번에도 상기 표준물의 반응물은 UV 반응의 적절한 범위 내에 있어야 하며, 그렇지 않다면 보다 적절한 농도로 제조하여 HPLC/UV로 분석해야 한다.

결과

HPLC/UV 크로마토그램에서 관측된 피크 면적과 함께 샘플의 임의의 희석에 대한 보정 및 주입 부피의 차이로부터 용해도 (S)를 계산하였다. 하기 방정식을 이용하였다.

참조 실시예 1

N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1R,2S)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

i) 1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논

-115℃에서 질소하에, 무수 1:1 디에틸 에테르/펜탄 (160 ml) 중 (+)-메틸-(R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실레이트 (5 mL)의 용액에 1.6 M 메틸리튬 (18 mL)을 30분에 걸쳐 적가하였다. 추가로 1시간 40분 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액 (80 mL)으로 켄칭하고, 이어서 주위 온도에 도달하게 하였다. 유기층을 수집하고, 수성층을 추가로 디에틸 에테르로 2회 추출하였다. 유기물을 합하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 진공하에 증발시켜, 부제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (수율: 4.77g).

ii) (1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-페닐메틸]에탄아민

디클로로에탄 (40 mL) 중 단계 (i)의 생성물 (1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논) (3.58 g)의 용액에 벤질아민 (3 mL) 및 빙초산 (1.6 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 빙조에서 냉각시켰다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (7.4 g)를 25분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 주위 온도에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭한 후, 디클로로메탄으로 4시간 동안 추출하였다. 합한 유기물을 수집하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 증발시켜, 미황색 오일을 수득하였다. 이소헥산/에틸 아세테이트 혼합물 (10 → 20 → 30 → 40％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 제1 용출 부분입체이성질체로서의 미황색 오일로 수득하였다 (수율 3.66 g).

iii) (1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민

에탄올 (50 mL) 중 단계 (ii)의 생성물 ((1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-페닐메틸]에탄아민) (3.65 g)의 용액에 목탄 상 10％ 팔라듐 (0.4 g)을 첨가하고, 전체를 4 bar의 주위 온도에서 12시간 동안 수소화시켰다. 혼합물을 여과하고, 용매를 진공하에 증발시켜, 부제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다 (수율: 2.5 g)

iv) 6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민

아세토니트릴 (15 mL) 중 단계 (iii)의 생성물 ((1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민) (0.67 g)의 용액에 4,6-디클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘 (WO-2004/011443) (1.3 g), 중탄산나트륨 (0.39 g)을 첨가하고, 혼합물을 질소하에 12시간 동안 환류하에 두었다. 냉각 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배하였다. 유기층을 수집하고, 수성층을 추가로 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 증발시켰다. 잔류물을 이소헥산/에틸아세테이트 혼합물 (5 → 20％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (수율: 1.25 g).

v) N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드

무수 디옥산 (6 mL) 중 단계 (iv)의 생성물 (6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민)) (0.45 g), 아제티딘-1-술폰아미드 (WO-2004/011443) (0.295 g), 팔라듐(II) 트리스(디벤질리덴아세톤) 디팔라듐 (0) (0.1 g), XPhos (0.052 g) 및 탄산세슘 (0.53 g)의 혼합물을 개방 용기에서 교반하면서 15분 동안 100℃/300W max에서 마이크로웨이브로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (2.4 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 유기 분획을 분리하고, 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 적색 검 (1.1 g)을 수득하였다. 잔류물을 이소헥산/에틸아세테이트 혼합물 (5 → 40％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 미황색 포말로서 수득하였다 (수율: 0.4g).

vi) N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1R,2S)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

메탄올 (5 mL) 및 물 (3방울) 중 단계 (v)의 생성물 ((N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1R)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드) (0.38 g) 및 파라-톨루엔술폰산 (0.093 g)의 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹이고, 이를 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄) 증발시켜, 미황색 포말 (0.29 g)을 수득하였다. 디클로로메탄 중에서 분쇄하여 정제함으로써, 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다 (수율: 0.23 g).

참조 실시예 2

N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1S,2R)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

i) 1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논

-115℃에서 질소하에, 무수 1:1 디에틸 에테르/펜탄 (35 mL) 중 (-)-메틸-(S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실레이트 (1 mL)의 용액에 1.6 M 메틸리튬 (5.6 mL)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 추가로 80분 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액 (15 mL)으로 켄칭한 후, 주위 온도로 이르게 하였다. 유기층을 수집하고, 수성층을 추가로 디에틸 에테르로 2회 추출하였다. 유기물을 합하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 진공하에 증발시켜, 부제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (수율: 0.25 g).

ii) (1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-페닐메틸]에탄아민

디클로로에탄 (15 mL) 중 단계 (i)의 생성물 (1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논) (1.3 g)의 용액에 벤질아민 (1.1 mL) 및 빙초산 (0.575 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 빙조에서 냉각시켰다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (2.68 g)를 25분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 주위 온도에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭한 후, 디클로로메탄으로 4회 추출하였다. 합한 유기물을 수집하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 증발시켜, 미황색 오일을 수득하였다. 이소헥산/에틸 아세테이트 혼합물 (10 → 20 → 30 → 40％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 제1 용출 부분입체이성질체로서 투명 오일로 수득하였다 (수율: 1.1 g).

iii) (1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민

에탄올 (20 mL) 중 단계 (ii)의 생성물 ((1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-페닐메틸]에탄아민) (1.4 g)의 용액에 목탄 상 10％ 팔라듐 (0.18 g)을 첨가하고, 전체를 4 bar의 주위 온도에서 12시간 동안 수소화시켰다. 혼합물을 여과하고, 용매를 진공하에 증발시켜, 부제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다 (수율: 0.82 g).

iv) 6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민

아세토니트릴 (10 mL) 중 단계 (iii)의 생성물 ((1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민) (0.655 g)의 용액에 4,6-디클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘 (WO-2004/011443) (1.2 g), 중탄산나트륨 (0.38 g)을 첨가하고, 혼합물을 질소하에 12시간 동안 환류하에 두었다. 냉각시킨 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배하였다. 유기층을 수집하고, 수성층을 추가로 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 증발시켰다. 잔류물을 이소헥산/에틸아세테이트 혼합물 (5 → 20％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (수율: 1.5 g).

v) N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드

무수 디옥산 (8 mL) 중 단계 (iv)의 생성물 (6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민)) (0.52 g), 아제티딘-1-술폰아미드 (WO-2004/011443) (0.34 g), 팔라듐(II) 트리스(디벤질리덴아세톤) 디팔라듐 (0) (0.115 g), XPhos (0.06 g) 및 탄산세슘 (0.612 g)의 혼합물을 개방 용기에서 교반하면서 20분 동안 100℃/300W max에서 마이크로웨이브로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (2.4 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 유기 분획을 분리하고, 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 적색 검 (2 g)을 수득하였다. 잔류물을 이소헥산/에틸아세테이트 혼합물 (5 → 40％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 크림색 포말로서 수득하였다 (수율: 0.42 g).

vi) N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1S,2R)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

메탄올 (5 mL) 및 물 (3방울) 중 단계 (v)의 생성물 ((N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1S)-1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드) (0.31 g) 및 파라-톨루엔술폰산 (0.076 g)의 혼합물을 60℃에서 4.5시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹이고, 이를 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 증발시켜, 미황색 포말을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 혼합물 (1 → 2％ 메탄올)로 용출시켜 실리카겔 크로마토그래피로 정제한 후, 디클로로메탄 중에서 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (수율: 0.185 g).

참조 실시예 3

N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1S,2S)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

i) 1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논

-115℃에서 질소하에, 무수 1:1 디에틸 에테르/펜탄 (160 ml) 중 (+)-메틸-(R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실레이트 (5 mL)의 용액에 1.6 M 메틸리튬 (18 mL)을 30분에 걸쳐 적가하였다. 추가로 1시간 40분 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액 (80 mL)으로 켄칭하고, 이어서 주위 온도에 도달하게 하였다. 유기층을 수집하고, 수성층을 추가로 디에틸 에테르로 2회 추출하였다. 유기물을 합하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 진공하에 증발시켜, 부제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (수율: 4.77 g).

ii) (1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-페닐메틸]에탄아민

디클로로에탄 (40 mL) 중 단계 (i)의 생성물 (1-[(4R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에타논) (3.58 g)의 용액에 벤질아민 (3 mL) 및 빙초산 (1.6 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 빙조에서 냉각시켰다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (7.4 g)를 25분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 주위 온도에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭한 후, 디클로로메탄으로 4회 추출하였다. 합한 유기물을 수집하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 증발시켜, 미황색 오일을 수득하였다. 이소헥산/ 에틸 아세테이트 혼합물 (10 → 20 → 30 → 40％ 에틸아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 제2 용출 부분입체이성질체로서 미황색 오일로 수득하였다 (수율 0.74 g).

iii) (1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민

에탄올 (20 mL) 중 단계 (ii)의 생성물 ((1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]-N-페닐메틸]에탄아민) (0.73 g)의 용액에 목탄 상 10％ 팔라듐 (0.1 g)을 첨가하고, 전체를 4 bar의 주위 온도에서 12시간 동안 수소화시켰다. 혼합물을 여과하고, 용매를 진공하에 증발시켜, 부제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다 (수율: 0.43 g).

iv) 6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민

아세토니트릴 (8 mL) 중 단계 (iii)의 생성물 ((1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에탄아민) (0.32 g)의 용액에 4,6-디클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]피리미딘 (WO-2004/011443) (0.616 g), 중탄산나트륨 (0.185 g)을 첨가하고, 혼합물을 질소하에 12시간 동안 환류하에 두었다. 냉각시킨 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배하였다. 유기층을 수집하고, 수성층을 추가로 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 증발시켰다. 잔류물을 이소헥산/에틸 아세테이트 혼합물 (5 → 20％ 에틸 아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (수율:0.58 g).

v) N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드

무수 디옥산 (5 mL) 중 단계 (iv)의 생성물 (6-클로로-2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-N-{(1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}피리미딘-4-아민)) (0.37 g), 아제티딘-1-술폰아미드 (WO-2004/011443) (0.24 g), 팔라듐(II) 트리스(디벤질리덴아세톤) 디팔라듐 (0) (0.082 g), XPhos (0.042 g) 및 탄산세슘 (0.435 g)의 혼합물을 개방 용기에서 교반하면서 15분 동안 100℃/300W max에서 마이크로웨이브로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (2.4 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 유기 분획을 분리하고, 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공하에 농축시켜, 적색 검 (1.1 g)을 수득하였다. 잔류물을 이소헥산/에틸아세테이트 혼합물 (10 → 40％ 에틸 아세테이트)로 용출시켜 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 부제 화합물을 미황색 포말로서 수득하였다 (수율: 0.36 g).

vi) N-(2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-{[(1S,2S)-2,3-디히드록시-1-메틸프로필]아미노}피리미딘-4-일)아제티딘-1-술폰아미드

메탄올 (5 mL) 및 물 (2방울) 중 단계 (v)의 생성물 ((N-[2-[(2,3-디플루오로벤질)티오]-6-({(1S)-1-[(4S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일]에틸}아미노)피리미딘-4-일]아제티딘-1-술폰아미드) (0.346 g) 및 파라-톨루엔술폰산 (0.084 g)의 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹이고, 이를 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 증발시켜, 미황색 포말을 수득하였다.

디클로로메탄/메탄올 혼합물 (2 → 4％ 메탄올)로 용출시켜 실리카겔 크로마토그래피로 정제한 후, 디클로로메탄 중에서 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (수율: 0.185 g).

Claims (14)

1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
   <화학식 1>
   

   
2. 제1항에 있어서, 케모카인 매개 질환 또는 질병의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
3. 제2항에 있어서, 천식, 알레르기성 비염, COPD, 염증성 장 질환, 골관절염, 골다공증, 류마티스양 관절염 또는 건선의 치료용 의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
4. 제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제약상 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
5. (a) 하기 화학식 2a의 화합물을 적합한 염기, 촉매 및 용매의 존재하에 하기 화학식 2c의 술폰아미드로 처리하고, 이어서 임의로, 임의의 순서로
   i) 임의의 보호기를 제거하고,
   ii) 염을 형성하거나;
   <화학식 2a>
   

   

   
   (상기 식에서, PG는 보호기 또는 2개의 별개의 수소 원자이고, L은 이탈기임)
   <화학식 2c>
   

   

   
   또는 별법으로
   (b) 하기 화학식 2b의 화합물을 적합한 염기 및 용매의 존재하에 하기 화학식 2d의 아민으로 처리하고, 이어서 임의로, 임의의 순서로
   i) 임의의 보호기를 제거하고,
   ii) 염을 형성하는
   <화학식 2b>
   

   

   
   (상기 식에서, PG₂는 보호기이고, L은 이탈기임)
   <화학식 2d>
   

   

   
   (상기 식에서, PG는 보호기 또는 2개의 별개의 수소 원자임)
   것을 포함하는, 제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 제조 방법.
6. 하기 화학식 1a의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염.
   <화학식 1a>
   

   
7. 하기 화학식 2a의 화합물.
   <화학식 2a>
   

   

   
   상기 식에서,
   L은 할로겐이다.
8. 하기 화학식 2e의 화합물.
   <화학식 2e>
   

   

   
   상기 식에서,
   L은 할로겐이다.
9. 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 화학식 1의 화합물을 포함하는 제약 조성물 또는 제제를 다른 요법제 및/또는 또 다른 제약 작용제와 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 조합 요법.
10. 제9항에 있어서, 천식, 알레르기성 비염, COPD, 염증성 장 질환, 과민성 장 증후군, 골관절염, 골다공증, 류마티스양 관절염 또는 건선의 치료를 위한 조합 요법.
11. 화학식 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 또 다른 제약 작용제와 함께 포함하는 제약 조성물.
12. 제16항에 있어서, 천식, 알레르기성 비염, COPD, 염증성 장 질환, 과민성 장 증후군, 골관절염, 골다공증, 류마티스양 관절염 또는 건선의 치료를 위한 제약 조성물.
13. 제11항에 있어서, 암의 치료를 위한 제약 조성물.
14. 제1항에 있어서,
    (a) 본원의 표 3에 나타낸 바와 같은 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 특징으로 하는, 변형 A로 지정된 결정질 형태;
    (b) 상기 표 4에 나타낸 바와 같은 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 특징으로 하는, 변형 B로 지정된 결정질 형태;
    (c) 본원의 표 5에 나타낸 바와 같은 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 특징으로 하는, 변형 C로 지정된 결정질 형태;
    (d) 본원의 표 6에 나타낸 바와 같은 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 특징으로 하는, 변형 D로 지정된 결정질 형태;
    (e) 본원의 표 7에 나타낸 바와 같은 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 특징으로 하는, 변형 E로 지정된 결정질 형태; 또는
    (f) 본원의 표 8에 나타낸 바와 같은 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴을 특징으로 하는, 변형 F로 지정된 결정질 형태
    중 임의의 한 형태의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

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