CN101415685B - 激酶抑制剂及其使用方法 - Google Patents
激酶抑制剂及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101415685B CN101415685B CN2007800120196A CN200780012019A CN101415685B CN 101415685 B CN101415685 B CN 101415685B CN 2007800120196 A CN2007800120196 A CN 2007800120196A CN 200780012019 A CN200780012019 A CN 200780012019A CN 101415685 B CN101415685 B CN 101415685B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- disease
- formula
- acid
- salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 0 *CC[n]1ncc2c1ccc(Oc1ccccc1CN)c2 Chemical compound *CC[n]1ncc2c1ccc(Oc1ccccc1CN)c2 0.000 description 3
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
- C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
- C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D231/38—Nitrogen atoms
- C07D231/40—Acylated on said nitrogen atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/415—1,2-Diazoles
- A61K31/416—1,2-Diazoles condensed with carbocyclic ring systems, e.g. indazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
- C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
式(I)化合物及其药学上可接受的盐和前药可用于治疗和预防由激酶介导的各种疾病。
Description
本申请要求2006年1月31日申请的美国临时专利申请号60/763,712的权益,该临时专利申请通过引用全部结合到本文中。
发明背景
1.发明领域
本发明涉及激酶抑制剂、含有所述激酶抑制剂的药物组合物及制备这些激酶抑制剂的方法。本发明的激酶抑制剂用于治疗炎症、骨关节炎、类风湿性关节炎、癌症、自身免疫性疾病和其它细胞因子介导的疾病。
2.现有技术水平的描述
许多慢性和急性炎性疾病与促炎细胞因子的过量产生有关。这类细胞因子包括但不限于肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素8(IL-8)和白介素6(IL-6)。类风湿性关节炎(RA)是慢性病,其中TNF-α和IL-1β与该病发作及见于这种虚弱症的骨和关节破坏的进程有关。最近被批准用于类风湿性关节炎的治疗性治疗包括了可溶性TNF-α受体(ENBRELTM)和IL-1受体拮抗剂(ANAKINRATM)。这些治疗通过阻断它们相应的细胞因子与其天然受体结合的能力而起作用。用于治疗细胞因子介导的疾病的替代方法目前仍在研究之中。其中一种方法包括抑制调节促炎细胞因子(例如p38)合成和产生的信号转导途径。
p38(亦称CSBP或RK)是一种已被证明是调节促炎细胞因子的丝氨酸/苏氨酸促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)。p38MAPK最初被鉴定为在脂多糖(LPS)处理后小鼠单核细胞中使酪氨酸磷酸化的激酶。Saklatvala等人(Cell,1994,78:1039-1049)最早证实p38MAPK与细胞响应细胞因子之间的关系,他们指出IL-1可能通过促分裂原活化蛋白激活蛋白激酶2(MAPKAP激酶-2),从而激活导致小分子热休克蛋白Hsp27磷酸化的蛋白激酶级联。对得自纯的激酶的肽序列进行分析后表明,在小鼠单核细胞中它与由LPS激活的p38MAPK有关(Han,J.等,Science,1994,265:808-811)。同时,还表明在响应多种细胞应激(包括暴露于UV辐射和渗压震扰)时,p38MAPK通过上游激酶而自我激活,而且直接使Hsp27磷酸化的激酶根据结构被证实是MAPKAP激酶-2(Rouse,J.等,Cell,1994,78:1027-1037)。随后,有研究显示p38MAPK是一系列吡啶基咪唑化合物的分子靶标,这些化合物抑制由LPS攻击的人单核细胞产生TNF(Lee,J.等,Nature,372:739-746)。这是一个关键性的发现,导致了对p38MAPK的各种选择性抑制剂的开发,以及对其在细胞因子信号转导中的作用进行阐述。
已知道p38MAPK的多种形式(α、β、γ、δ),分别由独立的基因编码,形成参与细胞响应各种刺激(包括渗压胁迫、紫外线和细胞因子介导的反应)的激酶级联的部分。一般认为这四种同等型(isoform)的p38调节胞内信号转导的不同方面。p38的活化是一系列导致促炎细胞因子(例如TNF-α)合成与产生的信号转导活动的部分。p38通过使包括其它激酶和转录因子在内的下游底物磷酸化而起作用。有研究显示抑制p38MAPK的成分在体外和体内模型中阻断细胞因子的产生,这些细胞因子包括但不限于TNF-α、IL-6、IL-8和IL-1β(Adams,J.L等,Progress in Medicinal Chemistry,2001,38:1-60)。
Ab1(亦称Ableson)是在造血细胞中表达的酪氨酸激酶,与包括慢性髓细胞白血病(CML)和急性成淋巴细胞白血病(ALL)在内的各种体液肿瘤的进程有关。转化是染色体易位(称为费城染色体)的结果。这就导致组成型激活Ableson与断裂点簇区(BCR)之间的嵌合体-Ab1-BCR蛋白。甲磺酸伊马替尼亦称伊马替尼(Imatinib)(Novartis)是Ab1的有效抑制剂,近来已用于治疗CML患者(N.Engl.J.Med.,2001,344:1031-1037)。这种药物已经成为这种致死疾病的标准治疗法,并且在包括胃肠道间质瘤(GIST)在内的多种其它癌症情况下也备受注目。
有证据表明,成纤维细胞通过刺激Ab1途径而对生长因子蛋白TGF-β作出反应,并导致预示纤维变性的形态变异;因此,Ab1可能在纤维变性疾病(如特发性肺纤维变性)的发病机制中发挥作用。Leof等人(J.Clin.Invest.,2004,114(9)1308-1316)已经证实了甲磺酸伊马替尼在博来霉素介导的肺纤维变性小鼠模型中的临床前功效。正在肺纤维变性患者中对甲磺酸伊马替尼进行评价。
TEK(亦称Tie-2)是另一个仅在内皮细胞中表达的受体酪氨酸激酶,在血管生成中起着作用。促血管生成素-1因子的结合导致TEK激酶域的自身磷酸化,并且导致似乎是介导内皮细胞与近表皮支持细胞相互作用的信号转导过程,从而促进新形成血管的成熟。另一方面,促血管生成素-2因子,似乎拮抗促血管生成素-1对TEK的作用,并且使血管生成中断(Maisonpierre等,Science,1997,277:55-60)。Tie2在肿瘤血管生成的血管中上调(Trogan,E.,Br.J.Cancer,1998,77:51-56),有证据表明它可能在造血系统癌中起着支持作用(L.Naldini等,Cancer Cell,2005,8:211-226;Suda,T.等,Cell,2004,118:149-161)。除了血管生成在癌症中的可能作用外,它还可能涉及诸如类风湿性关节炎(RA)、牛皮癣等疾病和炎症驱动性病理的发展进程。血管翳(造成关节炎进程的破坏性病变)的形成部分是由新血管形成驱动的,Lin,C.等人在最新论文(Arthritis and Rheumatism,2005,52(5):1585-1594)中证实Tie2在小鼠胶原诱导性关节炎RA模型中的病理作用。因此,抑制Tie2可能为对抗增殖性疾病和炎性疾病提供有益的作用。
其它若干激酶涉及增殖性疾病(例如癌症)的进程。其中,已经证实多个Src家族成员的蛋白质发挥Src的类似作用,并可能在不受控制的细胞增殖期间提供平行的信号转导途径。主要的实例包括酪氨酸激酶Lyn、Fyn、Lck和Hck。Lyn和Hck涉及B细胞急性成淋巴细胞白血病(B-ALL)、B细胞造血系统癌的进程(Li,S.等,Nat Genet.,200436(5):453-461)。
酪氨酸激酶受体的Eph(产生红细胞生成素的肝细胞瘤扩增序列)家族与肝配蛋白结合,导致了多个细胞过程。Eph似乎在调节肿瘤细胞粘附、移动和侵袭中发挥作用,若干证据证实了在病理过程中Eph和肝配蛋白在新血管形成中的活性作用。Eph A受体在肺、肾和胃肿瘤血管系统中过量表达并是显性阴性的,有研究表明可溶性EphA2或EphA3蛋白在体内调节肿瘤血管的生成和进程(Lackmann M.等,IUBMB Life,2005,57(6):421-31)。
血管内皮生长因子及其关联受体,例如KDR(VEGFR2)和FLT1(VEGFRR1)是血管生成的关键调节剂。蛋白质类治疗药在结肠癌中颇有前途,通过VEGFR途径发挥作用。SUTENT/SU11248(苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate))(Pfizer)是有效的KDR抑制剂,在针对GIST和肾细胞癌时显示出有前景的结果。
当用脂多糖(LPS)体外刺激时,外周血单核细胞(PBMC)表现出表达和分泌促炎细胞因子。当PBMC在用LPS刺激之前用p38抑制剂预处理时,这类化合物能有效地阻断这一作用(Lee,J.C.等,Int.J.Immunopharmacol.,1988,10:835-843)。p38抑制剂在炎性疾病动物模型中的功效推动了对可能说明这些抑制剂效果的根本机制的研究。使用以下吡啶基咪唑抑制剂,在与炎症反应有关的多个细胞系统中,对p38在细胞响应IL-1和TNF时的作用进行了研究:内皮细胞与IL-8(Hashimoto,S.等,J.Pharmacol.Exp.Ther.,2001,293:370-375)、成纤维细胞与IL-6/GM-CSF/PGE2(Beyaert,R.等,EMBOJ.,1996,15:1914-1923)、中性粒细胞与IL-8(Albanyan,E.A.等,Infect.Immun.,2000,68:2053-2060)、巨噬细胞与IL-1(Caivano,M.和Cohen,P.,J.Immunol.,2000,164:3018-3025)以及平滑肌细胞与RANTES(Maruoka,S.等,Am.J.Respir.Crit.Care Med.,1999,161:659-668)。许多疾病的破坏性作用是由促炎细胞因子过量产生所引起的。p38抑制剂调节这种过量产生的能力使之成为疾病变调剂良好的候选成分。
已知的p38MAPK抑制剂在许多普遍得到认可的疾病模型中具有活性。p38MAPK抑制剂在多个炎症的标准动物模型中具有积极作用,包括胶原诱导性关节炎大鼠模型(Jackson,J.R.等,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1998,284:687-692);佐剂诱导性关节炎大鼠模型(Badger,A.M.等,Arthritis Rheum.,2000,43:175-183;Badger,A.M.等,J.Pharmacol.Exp.Ther.,(1996)279:1453-1461)和角叉菜胶诱导的足肿胀小鼠模型(Nishikori,T.等,Eur.J.Pharm.,2002,451:327-333)。已经证实在这些动物模型中,阻断p38功能的分子在抑制骨吸收、炎症和其它基于免疫和炎症的病理中是有效的。
因此,安全有效的激酶抑制剂可能为治疗通过调节一种或多种激酶可被调节的虚弱疾病提供治疗方法。
国际专利申请公布号WO2004/078116公开了作为激酶抑制剂的某些化合物。在这些化合物中有在5位上具有取代基的某些N1-取代的吲唑衍生物,它含有吡唑-5-基脲基团。这类化合物的实例包括实施例94和实施例138的化合物,其中N1取代基分别为甲基和2-羟基-2-甲基丙基。
现已发现,通过选择伯醇基-CH2CH2OH作为N1取代基以及5位含有3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基的特定取代基,可获得具有特别所需性质的化合物。
发明概述
本发明提供抑制一种或多种激酶及抑制细胞因子产生、血管生成或细胞增殖等激酶介导的反应的化合物。这些化合物具有疾病治疗药的功效,所述疾病可通过抑制激酶信号转导途径来进行治疗。
发明详述
一方面,本发明提供具有下式I的化合物:
或其药学上可接受的盐。
该化合物亦使用以下化学命名:1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄基)脲。
已经发现式I化合物针对某些激酶的功效得到改进。另外,还观察到其中当N1取代基代以式-CH2CH2OPO3H磷酸酯基团时,相应化合物的溶解度比式I化合物的大若干个数量级。因此,式I化合物对于产生可溶性前药具有独特的地位。更详细地讲,正如以下实验数据所证实的一样,已证实式I化合物明显是比WO2004/078116中实施例94和实施例138的化合物更有效的Ab1和Tie2抑制剂。此外,WO2004/078116中实施例94和实施例138的化合物不具有可以衍生化以提供前药的伯醇基。
除式I化合物外,本发明还包括该化合物的药学上可接受的盐和该化合物的溶剂合物以及其药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的”是指物质或组合物与制剂包含的其它成分和/或与其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。
“溶剂合物”是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的缔合物或络合物。形成溶剂合物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”是指溶剂分子是水的络合物。
根据另一方面,本发明提供式I化合物在制备用于治疗哺乳动物的激酶介导的疾病的药物中的用途。
另一方面,本发明提供治疗或预防激酶介导的疾病的方法,该方法包括按有效治疗或预防所述激酶介导的疾病的量给予式I化合物。
本发明还提供式I化合物的前药。
“前药”是指可在生理条件下或者通过溶剂分解而转化为特定的化合物或该化合物的盐的化合物。
本发明化合物的游离羟基可以通过将羟基转化成例如但不限于以下基团而衍生化为前药:磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲氨基乙酸酯或磷酰基氧基甲基氧基羰基基团,如Advanced Drug DeliveryReviews,1996,19,115中所述。本发明还包括羟基的氨基甲酸酯前药,同样还有羟基的碳酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯。还包括羟基衍生化为(酰氧基)甲醚和(酰氧基)乙醚,其中酰基可以为任选被包括但不限于以下基团取代的烷基酯:醚、胺和羧酸官能团,或者其中酰基为上述氨基酸酯。这一类型的前药参见J.Med.Chem.,1996,39,10。更具体的实例包括醇基的氢原子被例如以下基团取代:(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷酰基、芳基酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α-氨基酰基,其中各α-氨基酰基独立选自天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(去掉半缩醛形式的糖的一个羟基所获得的基团)。
因此,根据另一个方面,本发明提供式I化合物的前药在制备用权利要求1的化合物治疗哺乳动物的激酶介导的疾病的药物中的用途。在一个实施方案中,该前药为磷酸酯前药。
另一方面,本发明提供用式I化合物治疗或预防哺乳动物的激酶介导的疾病的方法,该方法包括按有效治疗或预防所述激酶介导的疾病的量给予哺乳动物式I化合物的前药。在一个实施方案中,该前药为磷酸酯前药。
因此,根据另一个方面,本发明提供磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)-甲基)-4-氟-苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其药学上可接受的盐。
虽然不希望受理论的束缚,但是一般认为磷酸酯化合物起相应伯醇的前药的作用。
如本文所述,已经证实式I化合物的磷酸酯具有特别良好的溶解度。
除非另有说明,否则“药学上可接受的盐”包括保持指定化合物相应的游离酸或游离碱的生物功效并且不是生物学上或其它方面不良的盐。本发明的化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或这两种官能团,因此,与许多无机或有机碱或者无机或有机酸反应形成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的实例包括通过本发明化合物与无机酸或有机酸或无机碱反应而制备的盐,这类盐包括但不限于硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。因为本发明的单个化合物可包括一个以上的酸性或碱性部分,所以本发明的化合物可包括单个化合物的单盐、二盐或三盐。
如果本发明的化合物为碱,则所需药学上可接受的盐可通过本领域可用的任何合适的方法来制备,例如通过用酸性化合物例如无机酸或有机酸处理游离碱来制备,无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等;有机酸例如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、葡糖醛酸或半乳糖醛酸等吡喃糖醛酸、柠檬酸或酒石酸等α羟基酸、天冬氨酸或谷氨酸等氨基酸、苯甲酸或肉桂酸等芳香酸、对甲苯磺酸或乙磺酸等磺酸,等等。
如果本发明的化合物是酸,则所需的药学上可接受的盐可通过任何合适的方法来制备,例如通过用无机或有机碱处理游离酸来制备。合适的无机盐的实例包括与例如锂、钠、钾、钡和钙等碱金属和碱土金属所形成的盐。合适的有机碱盐的实例包括例如铵、二苄基铵、苄基铵、2-羟乙基铵、双(2-羟乙基)铵、苯乙基苄胺、二苄基乙二胺等盐。酸性部分的其它盐可包括例如与普鲁卡因、奎宁和N-甲基氨基葡萄糖形成的盐,加上与碱性氨基酸例如甘氨酸、鸟氨酸、组氨酸、苯基甘氨酸、赖氨酸和精氨酸形成的盐。
式I化合物还包括不一定是药学上可接受的盐的这类化合物的其它盐,它可用作制备和/或纯化式I化合物的中间体和/或用于拆分式I化合物的对映体。
本发明还包括同位素标记的本发明化合物,该化合物与本文所述化合物相同,只是一个或多个原子被原子的原子质量或质量数不同于一般天然存在的原子质量或质量数的原子置换。一般可按照类似于本文以下流程和/或实施例中所公开的方法,通过同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂来制备同位素标记的本发明化合物。
本发明化合物的合成
可通过包括以下方法的合成路线来制备本发明的化合物:类似于化学领域众所周知的方法,或者按国际专利申请公布号WO2004/078116所述方法,特别是根据本文所包括的内容。原料一般可得自市售来源,例如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI),或者容易地用本领域技术人员熟知的方法制备(例如按Louis F.Fieser和MaryFieser概述的方法制备,Reagents for Organic Synthesis,第1-19卷,Wiley,N.Y.(1967-1999年版本),或Beilsteins Handbuch der organischenChemie,4,Aufl.主编,Springer-Verlag,Berlin,包括增刊(亦可通过Beilstein在线数据库获得)。
根据另一个方面,本发明提供用于制备式I化合物或其药学上可接受的盐的方法,该方法包括:
(a)使下式II的化合物或其盐:
与下式III的化合物偶合:
式II中,P1表示氢原子或羟基保护基,式III中,Z表示离去基团或相应的异氰酸酯基;或者
(b)使下式IV的化合物还原:
其中Re表示氢原子或醇残基;
然后脱去任何保护基,且如有需要,则制成药学上可接受的盐。
由P1表示的合适羟基保护基的实例包括环状半酮缩醇,例如四氢-2H-吡喃-2-基。
由Z所表示的离去基团可为例如未取代或取代的烃氧基例如卤代(1-6C)烷氧基(例如2,2,2-三氯乙氧基)、烯氧基例如CH2=C(CH3)O-或任选被例如一个或多个选自F、Cl、Br和NO2的基团取代的芳氧基。任选取代的芳氧基的具体取值包括苯氧基、4-氯苯氧基、4-溴苯氧基、4-氟苯氧基、4-硝基苯氧基和2-硝基苯氧基。在一个具体的实施方案中,Z为苯氧基。
已经证实,当化合物III的Z为任选取代的芳氧基(例如苯氧基)时,化合物IV无需色谱法步骤便可以良好收率和高纯度获得最佳分离。
当Z为任选取代的苯氧基时,式(II)化合物与式(III)化合物的偶合可方便地在0℃和100℃之间的温度下、更具体地讲在环境温度下进行。适宜的溶剂包括非质子溶剂例如醚(例如四氢呋喃或对二噁烷)、DMF、DMSO或乙腈。偶合反应在碱例如叔胺(例如三乙胺或DMA)存在下方便地进行。
当由醇残基表示时,Re的具体取值包括(1-6C)烷氧基,例如乙氧基。
我们认为式(II)和式(IV)化合物是新的化合物,由本发明的又一个方面提供。
当Z由任选取代的芳氧基表示时,我们同样认为式(III)化合物是新的化合物,由本发明的又一个方面提供。
另一方面,本发明提供制备式I化合物的磷酸酯前药的方法,即制备磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其药学上可接受的盐的方法,该方法包括使1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄基)脲或其盐磷酸化。
通过使醇与二烷基氨基磷酸二烷基酯(dialkyldialkylphosphinamidite)或二烷基氨基磷酸二芳基酯(例如二异丙基氨基磷酸二叔丁酯或二异丙基氨基磷酸二苯酯)反应,随后通过水解或催化氢化脱去磷酸酯产物上的烷基或芳基,方便地进行磷酸化反应。
出于说明性目的,流程1和流程2及实施例举例说明了用于制备本发明化合物以及关键中间体的方法。本领域技术人员需要理解的是,可以采用其它合成路线合成本发明的化合物。虽然在流程中对具体的原料和试剂进行了描述并在下面进行了论述,但是可容易地用其它原料和试剂代之以提供多种衍生物和/或反应条件。另外,可根据本说明书,采用本领域技术人员所熟知的常规化学法对通过下述方法制备的许多化合物进行进一步修饰。
流程1
流程2
流程2中所示化合物77的腈还原需要高浓度的酸(例如HCl或乙酸)以使二聚体形成减至最小。然而,较高浓度的酸也可能引起一些酯化合物78水解为相应的酸。流程3表示制备式I化合物的改进方法,该方法降低了二聚体和酸杂质的形成。
流程3
流程3表示在将化合物77的酯基团还原为相应的醇后再使腈基团还原,以提供不含酸杂质并且二聚体杂质形成最少的化合物79A的方法。
更准确地讲,化合物77可按逐步的方式还原,其中酯基团在合适的溶剂中用硼氢化钠还原,以提供相应的醇化合物78A。然后化合物78A的腈基团在标准催化氢化条件下,或者在合适的有机溶剂中用硼化镍还原,以提供相应的甲胺化合物79A。
流程3所示路线提供了优于形成式I化合物的流程2所示路线的若干优势。采用流程3所示路线,腈基团的还原可用较高浓度的HCl进行,这就有利地降低了形成二聚体杂质的量。另外,流程3所示路线避免了在最终步骤中使用硼氢化钠,从而避免了从最终产物除去残余硼杂质的额外的纯化步骤。因此,通过包括反应顺序较早期硼氢化钠的还原步骤,可在中间顺序步骤中容易地除去残余的硼。另外,氨基醇化合物79A与化合物69A的偶合可以在较低温度下进行,因此改进了产物72的纯度。因此,流程3所示路线能够改进式I化合物合成的产量,从而提供产生式I化合物的有效合成路线,这更利于或适于大规模的制备。
因此,本发明还提供式(II)化合物的制备方法,该方法包括:
(i)在催化氢化条件下或在硼化镍存在时,使下式(V)的化合物还原:
其中P2表示氢或羟基保护基。
提及步骤(i)时,氢化催化剂包括任何合适的钯催化剂,例如Pd(OH)2或负载于碳上的钯。氢化发生在酸性条件下(例如通过加入酸,例如HCl或乙酸)或者加入氨。催化氢化可在任何合适的溶剂系统例如醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇)、酯(例如乙酸乙酯)或醚(例如THF)中进行。混合溶剂(例如醇与THF)也适合于氢化步骤。氢压力的范围介于25-100psi之间,例如40psi。还原通常在20-100℃温度之间进行。
提及步骤(i)时,硼化镍可以原位由过渡金属盐,特别是Ni(II)盐与硼氢化钠制备。在一个优选的实施方案中,硼化镍由氯化镍(II)与硼氢化钠制备。反应便于在合适的溶剂例如醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇)中进行。还原通常在环境温度下进行。
可以用任何适宜的酯还原条件(例如硼氢化钠),在合适的溶剂例如醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇)中,通过使下式(VI)的化合物还原来制备式(V)化合物:
其中P3的定义同P2的定义。
在制备本发明的化合物时,中间体的远距离官能团(例如伯胺或仲胺、伯醇或仲醇等)的保护可能是必要的。这类保护的需求将随远距离官能团的性质和制备方法的条件而变化。例如,合适的氨基保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBz)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。适宜的羟基保护基包括四氢-2H-吡喃-2-基、苄基、三烷基甲硅烷基和缩醛。本领域技术人员容易确定这类保护的需求。对于保护基及其应用的概述,参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
治疗方法
本发明的化合物可以用来治疗由蛋白激酶调变或调节而介导的疾病。因此,本发明另一方面提供通过按有效治疗或预防所述疾病的量给予哺乳动物(例如人)治疗有效量的本发明化合物或其溶剂合物、代谢物或药学上可接受的盐,来治疗或预防本文所述疾病或病症的方法。在一个实施方案中,该方法包括按有效抑制一种或多种激酶的量给予哺乳动物本发明的化合物。
“有效量”是指当给予需要这种治疗的哺乳动物一定量的化合物时,其量足以有效治疗由一种或多种蛋白激酶的活性介导的疾病,例如p38MAPK和相关激酶介导的事件(例如细胞因子产生)。因此,例如本发明化合物或其盐、活性代谢物的治疗有效量,是足以调变、调节或抑制一种或多种蛋白激酶的活性,从而使该活性介导的疾病病况得到减缓或减轻的量。
“治疗”是指至少缓解至少部分受累于一种或多种蛋白激酶活性的哺乳动物(例如人)的疾病病况。术语“治疗”是指治疗性治疗以及治疗性和预防性方法,其中,目标是预防或者减慢(减轻)不良的生理变化或病症。对于本发明的目的,有益或所需的临床结果包括但不限于缓和症状、减轻疾病程度、使疾病稳定(即不加重)、延迟或减缓疾病进程、改善或减轻疾病以及不论是否可检测得出的缓解(不论部分还是整体)。“治疗”也可指当与若不接受治疗的预期存活相比时,存活的时间延长。需要治疗的哺乳动物(例如人)包括已经患有疾病或病症的以及易于患上疾病或病症的哺乳动物(例如人),或者疾病或病症受到预防的哺乳动物(例如人)。
给予哺乳动物的本发明化合物的量将根据例如具体化合物、疾病病况及其严重程度、需要治疗的哺乳动物的特征(例如体重)等因素而改变,但是尽管如此仍可由本领域技术人员按常规方法确定。
本文所用术语“哺乳动物”是指患有本文所述疾病或者有发生该病风险的温血动物,包括但不限于豚鼠、狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和灵长类动物,包括人。
在本发明的一个方面,本发明的化合物或其药用盐可配制成药物组合物,用于给予动物或人以治疗或预防激酶介导的疾病。本文所用术语“激酶介导的疾病”是指其中已知p38起作用的任何疾病或其它有害病症,包括已知由IL-1、TNF、IL-6或IL-8过量产生所引起的病症。这类病症包括但不限于炎性疾病、自身免疫性疾病、破坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病毒性疾病、纤维变性疾病和神经变性性疾病。
可以治疗或预防的炎性疾病包括但不限于急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘、变态反应和成人呼吸窘迫综合征。
可以治疗或预防的自身免疫性疾病包括但不限于肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病(Graves′disease)、自身免疫性胃炎、胰岛素依赖型糖尿病(I型)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性白细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、多发性硬化、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病(Crohn′s disease)、牛皮癣或移植物抗宿主病。
可以治疗或预防的破坏性骨病包括但不限于骨质疏松症、骨关节炎和多发性骨髓瘤相关性骨病。
可以治疗或预防的纤维变性疾病包括但不限于特发性肺纤维变性、肾纤维变性和肝纤维变性。
可以治疗或预防的增殖性疾病包括但不限于急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移性黑素瘤、卡波西肉瘤(Kaposi′ssarcoma)、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、星形细胞瘤、骨癌、脑癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、头颈癌、血癌、造血系统疾病(hematopoiesis disorder)、间质性肺疾病、卡波西肉瘤、淋巴细胞白血病、黑素瘤、髓细胞白血病、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌和胃癌。可以治疗的其它患者包括进行骨髓移植的患者。
可以治疗或预防的感染性疾病包括但不限于脓毒病、败血症性休克和志贺菌病。
可以治疗或预防的病毒性疾病包括但不限于急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、HIV感染和CMV视网膜炎。
可以用本发明的化合物治疗或预防的变性性病症或疾病包括但不限于阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)、帕金森病(Parkinson′s disease)、脑缺血和其它神经变性性疾病。
术语“激酶介导的疾病”还包括脑卒中、心脏病发作、心肌缺血、器官缺氧、血管增生、心脏肥大和凝血酶诱导血小板聚集中的局部缺血/再灌注。
另外,本发明的激酶抑制剂也用于抑制可诱导的促炎蛋白(例如前列腺素内过氧化物合酶-2(PGHS-2),亦称环加氧酶-2(COX-2))的表达。因此,其它“激酶介导的疾病”包括但不限于水肿、痛觉缺失、热病和疼痛例如神经肌肉疼痛、头痛、癌症疼痛、牙痛和关节炎疼痛。
可用本发明的激酶抑制剂治疗或预防的病症和疾病还可方便地通过据信是造成所述疾病原因的细胞因子(例如IL-1、TNF、IL-6、IL-8)来分组。
因此,IL-1介导的疾病或病症包括类风湿性关节炎、骨关节炎、脑卒中、内毒素血症和/或中毒性休克综合征、由内毒素诱发的炎症反应、炎性肠病、结核病、动脉粥样硬化、肌肉变性、恶病质、牛皮癣性关节炎、赖特综合征(Reiter′s syndrome)、痛风、创伤性关节炎、风疹性关节炎、急性滑膜炎、糖尿病、胰腺β细胞疾病和阿尔茨海默病。
TNF介导的疾病或病症包括但不限于类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎病症、脓毒病、败血症性休克、内毒素休克、革兰氏阴性菌脓毒病、中毒性休克综合征、成人呼吸窘迫综合征、脑型疟、慢性肺部炎性疾病、石末沉着病、肺结节病、骨吸收疾病、再灌注损伤、移植物抗宿主反应、同种移植物排斥、由感染所致的热病和肌痛、感染、AIDS、ARC或恶性肿瘤继发性恶病质、疤痕疙瘩形成、疤痕组织形成、克罗恩病、溃疡性结肠炎或pyresis。TNF介导的疾病还包括例如HIV病毒感染、CMV病毒感染、流行性感冒病毒感染和疱疹病毒感染;以及兽病毒感染,例如慢病毒感染,包括但不限于马传染性贫血病毒感染、山羊关节炎病毒感染、绵羊脱髓鞘性脑白质炎病毒感染或绵羊肺腺瘤病病毒感染;或反转录病毒感染,包括猫免疫缺陷病毒感染、牛免疫缺陷病毒感染或犬免疫缺陷病毒感染。
IL-8介导的疾病或病症包括但不限于以大量嗜中性粒细胞浸润为特征的疾病,例如牛皮癣、炎性肠病、哮喘、心脏和肾再灌注损伤、成人呼吸窘迫综合征、血栓形成和肾小球性肾炎。
另外,本发明的化合物可局部用于治疗或预防由IL-1或TNF引起或加重的疾病。这类疾病包括但不限于关节发炎、湿疹、牛皮癣、晒伤等炎性皮肤病、结膜炎等炎性眼病、pyresis、疼痛和其它与炎症相关的疾病。
虽然本发明的化合物主要用作温血动物(包括人)的治疗药物,但是当需要抑制细胞因子的作用时,它们同样有用。因此,它们用作药理学标准以用于开发新的生物学试验以及寻找新的药物。
以治疗或预防为目的的本发明化合物的剂量大小无疑将根据疾病的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及给药途径,按照众所周知的医学原则加以变动。
本发明另一方面提供用作治疗罹患本文所述疾病或病症的哺乳动物(例如人)的这类疾病或病症的药物的本发明化合物。本发明还提供本发明化合物在制备用于治疗罹患这类疾病的温血动物(例如人等哺乳动物)的本文所述疾病或病症的药物中的用途。
联合疗法
本发明的化合物可与其它药物和疗法联用,所述药物和疗法用于治疗可能因抑制激酶及有关细胞因子(例如IL-1、TNF、IL-6或IL-8)而受益的疾病。第二药物的剂量可根据临床上所采用的剂量加以适当选择。本发明化合物与第二药物的比例可根据给药对象、给药途径、目标疾病、临床情况、药物组合和其它因素适当加以确定。例如,在给药对象为人的情况下,可使用的第二药物的用量为0.01-100重量份/本发明化合物的重量份。
药物组合制剂或剂量方案的第二药物对于本发明的化合物具有例如互补活性,因而彼此不会产生不利影响。组合制剂中适当存在的这些药物的含量对既定目的是有效的。因此,本发明另一方面提供组合物,该组合物包含本发明的化合物以及例如本文所述的第二药物。
可以单一的药物组合物一起给予或者单独给予本发明的化合物和另外的活性药物,当单独给药时,可按任何顺序同时或序贯给药。这种序贯给药在时间上可以是接近的或是相隔很久的。可以选择本发明化合物和第二药物的量以及给药的相对时间长短,以达到所需的联合治疗效果。
联合疗法可提供“增效作用”,并证明是“增效的”,也就是说,当活性成分一起使用时所达到的效果大于各化合物单独使用的效果总和。当本发明化合物和第二药物是以下情形时,可以获得增效作用:(1)共同配制并以组合的单位剂量剂型同时给药或递药;(2)按单独的剂型交替给药或平行给药;或(3)通过某些其它的方案。如果以交替疗法递药,则当序贯给予或递送本发明的化合物与第二药物时可达到增效作用,例如用单独的注射器进行不同的注射时。例如在交替治疗期间,可以序贯给予(即依次给予)有效剂量的各个活性成分,而在联合疗法中,同时给予有效剂量的两种或更多种活性成分。
例如,由于本发明化合物抑制细胞因子的能力,因此在通常用例如以下环加氧酶抑制性非类固醇抗炎药(NSAID)治疗某些炎性疾病和非炎性疾病中颇有价值:吲哚美辛、酮咯酸、乙酰水杨酸、布洛芬、舒林酸、托美丁和吡罗昔康。本发明化合物与NSAID一起共同给药可导致后者所需的产生治疗效果的用量减少,因此可能降低NSAID的毒副作用,例如对胃肠的影响。因此,本发明的又一个特征是提供药物组合物,该组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐,以及环加氧酶抑制性非类固醇抗炎药和药学上可接受的稀释剂或载体。
本发明的化合物还可用于与例如金、甲氨蝶呤、类固醇和青霉胺等抗风湿药联用以治疗例如类风湿性关节炎等疾病,以及与类固醇联用以治疗例如骨关节炎等疾病。
本发明的化合物还可用于与软骨保护药、抗退化药和/或修复药(例如双醋瑞因(Diacerhein)、透明质酸制剂(例如Hyalan、Rumalon、Arteparon)和氨基葡萄糖盐(例如Antril))联用治疗退行性疾病(degradative disease),例如骨关节炎。
本发明的化合物还可用于与抗哮喘药(例如支气管扩张药和白三烯拮抗剂)联用以治疗哮喘。
本发明化合物的给药
可通过适于待治疗疾病的任何途径给予本发明的化合物。合适的途径包括口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。应当理解的是,所用的给药途径可随例如接受治疗者的疾病而改变。如果口服给予本发明的化合物,则它可与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制成丸剂、胶囊剂、片剂等。如果经胃肠外给予本发明的化合物,则它可与药学上可接受的胃肠外溶媒一起,以单位剂量可注射形式配制,有关详情见下文。
药物制剂
为了使用本发明的化合物以治疗性治疗(包括预防性治疗)包括人在内的哺乳动物,通常依照标准制药规程制成药物组合物。本发明这一方面提供包含本发明化合物以及药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。
按与规范医疗实践一致(即用量、浓度、时间表、进程、溶媒和给药途径与规范医疗实践一致)的方式,来配制本发明的药物组合物、确定本发明的药物组合物的剂量及给予本发明的药物组合物。本文中要考虑的因素包括待治疗的具体疾病、待治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、病因、给药部位、给药方法、给药的时间表及医学从业者已知的其它因素。待给予化合物的治疗有效量出于这些考虑予以确定,并且是必要的预防、改善或治疗疾病的最低量。通常将本发明的化合物制成药物剂型以提供容易控制的药物剂量,并且能够使患者顺应于处方方案。
本文采用的组合物优选是无菌的。特别是用于体内给药的剂型必需是无菌的。通过例如除菌滤膜过滤易完成这种灭菌。化合物通常可以固体组合物、冻干剂型或水溶液剂保存。
可以制备本发明化合物的药物制剂以用于不同的给药途径和类型。例如,具有所需纯度的本发明化合物可任选与药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂相混合,制成冻干制剂、磨碎粉剂或水溶液剂的形式(Remington′s Pharmaceutical Sciences(1980)第16版,Osol,A.主编)。可以在环境温度与合适的pH下,按所需纯度与生理上可接受的载体,也就是说在所使用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体相混合,来进行配制。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度,但其范围可为例如约3至约8。合适的实施方案是pH5下乙酸盐缓冲液中的制剂。可以用常规溶解和混合方法来制备制剂。例如,在一种或多种赋形剂存在下,将大量药物物质(即本发明的化合物或这些化合物的稳定形式(例如与环糊精衍生物或其它已知络合剂的络合物))溶于合适的溶剂。
所采用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于使用本发明化合物的方法和目的。一般根据本领域技术人员公认为安全的溶剂(GRAS)来选择给予哺乳动物的溶剂。一般而言,安全的溶剂是无毒的水性溶剂(例如水)和可溶于或易混溶于水的其它无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇类(例如PEG400,PEG300)等及其混合物。可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所采用的剂量和浓度下对于接受者是无毒的,包括缓冲剂,例如磷酸、柠檬酸和其它有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸和甲硫氨酸;防腐剂(例如氯化十八烷基二甲基苄基铵;六甲氯铵;苯扎氯铵、苄索氯铵;苯酚、丁醇和苯甲醇;对羟基苯甲酸烷基酯,例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯;儿茶酚;间苯二酚;环己醇;3-戊醇;及间甲苯酚);低分子量(<约10个残基)多肽;蛋白质,例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水聚合物,例如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,例如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,例如EDTA;糖类,例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇;成盐抗衡离子,例如钠;金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物);和/或非离子表面活性剂,例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。制剂还可包括一种或多种稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂和为药物(即本发明的化合物或其药物组合物)提供精致外观,或者有助于制备药物产品(即药物)的其它已知添加剂。例如,也可通过凝聚技术或通过界面聚合将活性药物成分包封在已制成的微胶囊内,微胶囊例如分别在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳、纳米粒和纳米囊)或者粗乳状液中的羟甲基纤维素微胶囊或明胶微胶囊及聚甲基丙烯酸甲酯微胶囊。这些技术参见Remington′sPharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.主编(1980)。“脂质体”是由不同类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂组成的用于将药物递送给哺乳动物的小囊泡。脂质体的成分通常排列成双层结构,类似于生物膜的脂质排列。
可以制备本发明化合物的缓释制剂。缓释制剂合适的实例包括含有本发明化合物的固体疏水聚合物的半透性基质,其基质为成型制品的形式,例如薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)或聚乙烯醇))、聚交酯(美国专利第3,773,919号)、L-谷氨酸与γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙立德组成的可注射微球体)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
本发明的药物组合物可以是无菌可注射制剂的形式,例如无菌可注射的水性或油性混悬剂。可按照已知技术用上文提及的合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制这种混悬剂。无菌可注射的制剂也可是无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂(例如1,3-丁二醇中的溶液剂),或者可制备成为冻干粉剂。其中可以使用的可接受的溶媒和溶剂为水、林格液(Ringer′s solution)和等渗氯化钠溶液。另外,无菌固定油类可方便地用作溶剂或悬浮介质。对于此目的,可以使用任何温和的固定油,包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外,脂肪酸(例如油酸)同样可用于制备注射剂。
适于胃肠外给药的本发明药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液剂以及水性和非水性无菌混悬剂,所述溶液剂可含有抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂以及提供与待接受者血液等渗的制剂的溶质;所述混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。
本发明的组合物还可制成适于口服的形式(例如片剂、锭剂、硬质胶囊剂、软质胶囊剂、水性混悬剂、油性混悬剂、乳剂、可分散粉剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)、适于局部用的形式(例如乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、水性或油性溶液剂、水性或油性混悬剂)、适于吸入法给药的形式(例如微细粉剂或液体气溶胶)、适于吹入法给药的形式(例如微细粉剂)。
用于片剂剂型的合适的药学上可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂(例如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙);成粒剂和崩解剂,例如玉米淀粉或藻酸;粘合剂,例如淀粉;润滑剂,例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉;防腐剂,例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯以及抗氧化剂例如抗坏血酸。片剂剂型可以不包衣或者包衣,以改变其崩解性以及随后活性成分在胃肠道内的吸收,或者改进其稳定性和/或外观,在任一种情况下,都采用常用的包衣材料和本领域众所周知的方法。
用于口服的组合物可制成硬明胶胶囊剂的形式,其中将活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混匀,或制成软明胶胶囊剂的形式,其中将活性成分与水或油(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混匀。
水性混悬剂一般含有微细粉末形式的活性成分以及一种或多种悬浮剂,例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯树胶;分散剂或湿润剂,例如卵磷脂或环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯),或者环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基十六醇),或者环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯),或者环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯失水山梨醇单油酸酯)。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)、抗氧化剂(例如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂和/或甜味剂(例如蔗糖、糖精或天冬甜素)。
可将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制油性混悬剂。油性混悬剂还可含有增稠剂例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂(例如上述甜味剂)和矫味剂以提供适口的口服制剂。可添加抗氧化剂(例如抗坏血酸)来保存这些组合物。
适于通过加入水来制备水性混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂一般含有活性成分以及分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂见上文已提及的示例。也可存在其它赋形剂,例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
本发明的药物组合物还可是水包油乳剂的形式。油相可为植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或任何这些油的混合物。合适的乳化剂可以为例如天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆磷脂、卵磷脂)、由脂肪酸与己糖醇酐衍生的酯或偏酯(例如失水山梨糖醇单油酸酯)以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯)。乳剂还可含有甜味剂、矫味剂和防腐剂。
糖浆剂和酏剂可用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖)配制,还可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
可通过将活性成分与在常温下为固体但在直肠温度下为液体从而在直肠中融化释放药物的合适的无刺激性赋形剂相混合来制备栓剂剂型。合适的赋形剂包括例如可可脂和聚乙二醇。适于阴道给药的剂型可呈子宫托、阴道塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂剂型,除含有活性成分以外,还含有本领域已知的合适载体。
一般可采用本领域众所周知的常规方法,将活性成分与常规局部可接受的溶媒或稀释剂一起配制而得到局部剂型,例如乳膏剂、软膏剂、凝胶剂以及水性或油性溶液剂、水性或油性混悬剂。
用于经皮给药的组合物可以是本领域普通技术人员熟知的经皮贴剂的形式。
通过吹入法给药的组合物可以是微细粉的形式,含有平均直径为例如30μm以下的颗粒,粉末本身包含单独的活性成分,或者用一种或多种生理上可接受的载体(例如乳糖)稀释。然后可方便地将用于吹入法的粉末保留在含有例如1-50mg活性成分的胶囊中用于涡轮式吸入装置(turbo-inhaler device),例如用于已知药物色甘酸钠的吹入法给药。
用于吸入法给药的组合物可以是常规压缩气雾剂的形式,可使活性成分分散成为含有微细固体的气雾剂或液滴。可以使用常规气雾剂抛射剂,例如挥发性氟化烃类或烃类,气雾剂装置便于使计量的活性成分分散开来。
可根据给药所采用的方法以多种方式对将使用的药物组合物(或剂型)进行包装。例如用于配送的产品可包括在其中以适当的形式存放药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员熟知的,包括例如瓶子(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属瓶等容器。容器还可包括防拆封的装置以防止不慎接触到包装内容物。另外,容器上还可张贴描述容器的内容物的标签。标签还可包括适当警示。制剂也可以单位剂量容器或多剂量容器(例如密封安瓿和小瓶)包装,并可在冷冻干燥(冷干)条件下保存,临用前只需加入无菌液体载体(例如水)便可用于注射。由上述各种无菌粉剂、颗粒剂和片剂来配制现配现用的注射溶液剂和混悬剂。优选的单位剂量剂型是含有上述日剂量或单位日分剂量的或其适当部分的活性成分的剂型。
本发明还提供包含至少一种如上定义的活性成分以及兽药载体的兽药组合物。兽药载体是用于给予组合物目的的材料,可以是固体、液体或气体材料,这些材料另外是惰性或兽药领域可接受的,而且与活性成分相容。可经胃肠外、口服或通过任何其它所需途径给予这些兽药组合物。
与一种或多种赋形剂混合以生产单一剂型的本发明化合物的量必然根据待治疗的受治疗者、疾病或病况的严重程度、给药速度、化合物的特性和处方医师的判断而改变。在一个实施方案中,给予有需要的哺乳动物合适量的本发明化合物。在一个实施方案中,给药量每天介于约0.001mg/kg体重至约60mg/kg体重之间。在另一个实施方案中,给药量每天介于0.5mg/kg体重至约40mg/kg体重之间。在某些情况下,上述范围下限以下的剂量水平就足够了,而在其它情况下可采用较大剂量又不引起任何毒副作用,前提条件是将这种较大剂量先分成若干用于全天给药的小剂量。有关给药途径和剂量方案的更多资料,可参见Comprehensive Medicinal Chemistry第5卷,第25.3章(Corwin Hansch;编辑委员会主席),Pergamon Press1990,该文献通过引用特别结合到本文中。
制造品
在本发明的另一个实施方案中,提供含有用于治疗上述疾病的材料的制造品,即“药盒”。在一个实施方案中,药盒包括装有本发明化合物的容器。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、泡眼包装等。容器可由多种材料(例如玻璃或塑料)制成。容器可容纳用于有效治疗疾病的本发明化合物或其制剂,可具有无菌接口(例如容器可以是静脉用溶液剂袋或者小瓶,具有用皮下注射针可穿透的塞子)。
药盒还可包括贴在容器上或者附在容器内的标签或包装说明书。术语“包装说明书”是指通常包括在治疗产品商业包装内的说明书,关于这些治疗产品的使用说明书,其上注明有关的适应症、用法、用量、给药、禁忌和/或注意事项等信息。在一个实施方案中,标签或包装说明书标明可用包含本发明化合物的组合物治疗激酶介导的疾病或病症。标签或包装说明书还标明可用所述组合物治疗其它疾病。
在某些实施方案中,药盒适于递送固体口服形式的本发明化合物,例如片剂或胶囊剂。这种药盒优选包括多个单位剂量。这类药盒可包括卡片,上面标明剂量使用顺序的方向。这种药盒的一个实例为“泡眼包装”。泡眼包装是包装业众所周知的,广泛用来包装药物单位剂型。如有需要,可以数字、字母或其它记号的形式或者用日历卡等帮助记忆,在日历卡治疗时间表上标明可以给予剂量的日期。
根据另一个实施方案,药盒可包括(a)其中装有本发明化合物的第一容器;和(b)其中装有第二药物制剂的第二容器,其中第二药物制剂包含用于治疗激酶介导的疾病或病症的第二化合物。或者,药盒还另外包括装有药学上可接受的缓冲溶液的第三容器,缓冲溶液例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸缓冲盐溶液、林格液和右旋糖溶液。药盒还可包括出于商业立场和用户立场所需要的其它资料,包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
药盒还可包括给予本发明的化合物以及第二药物制剂(如果存在的话)的说明书。例如,如果药盒包括包含本发明化合物的第一组合物和第二药物制剂,则该药盒还包括同时、序贯或单独给予有需要的患者第一药物组合物和第二药物组合物的说明书。
在某些其它实施方案中,其中药盒包括本发明的组合物和第二药物制剂,药盒可包括用于盛装单个组合物的容器,例如分装瓶或分装箔纸袋,然而,单个组合物也可装在单个不分装的容器内。在某些实施方案中,药盒包括用于给予单独成分的说明书。当单独成分优选以不同的剂型(例如口服和胃肠外)给予、以不同剂量的间隔给予、或者当组合物各个成分的滴定是处方医师所需要的时,药盒形式是特别有利的。
生物活性
p38MAPK抑制
可以在体外、体内或在细胞系中对本发明化合物抑制p38MAPK活性进行分析。体外测定法包括测定抑制激酶活性或测定抑制活化p38MAPK的腺苷三磷酸酶活性的测定法。体外替代测定法定量测定抑制剂与p38MAPK结合的能力,可通过在结合之前对抑制剂进行放射性标记,分离抑制剂/p38MAPK复合物,测定放射性标记结合的量进行测定,或者可进行竞争实验来测定,其中将新的抑制剂与结合到已知放射性配体的p38MAPK一起保温。这些测定法和其它有益的体外测定和细胞培养实验为本领域技术人员所熟知。
本发明化合物抑制效果的细胞培养实验可用来测定与用阴性对照处理的细胞相比,在用抑制剂处理细胞中全血或其细胞部分中所产生的TNF-α、IL-1、IL-6或IL-8的含量。通过采用市售ELISA或按以下生物实施例部分所述方法,来测定这些细胞因子的水平。
实施例
为了说明本发明,将下面的实施例包括在内。然而,要理解的是,这些实施例并不限制本发明,只是给出实施本发明的方法。
生物实施例
通过下列体外测定法来证实本发明化合物的生物学活性。用于实施例C-M的化合物为:化合物72:1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-IH-吲唑-5-基氧基)苄基)脲(实施例1和实施例3);和化合物74:磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯(实施例2和实施例4)。
实施例A
p38生化测定法
用100μl反应物在室温下进行了p38活性测定,反应物含有5nM活化的p38α酶和25mM HEPES(pH7.4)、100μM钒酸盐、1mM DTT、10mM MgCl2和10μM[γ-33P]-ATP(~0.1μCi P33/反应物)中的1μM ATF-2(转录激活因子2融合蛋白)作为底物。30-40分钟后,加入25%TCA终止反应,使之静置5分钟后,直接转移到GF-B膜滤板上。采用Tomtec Mach III自动收获器,滤板用0.5%磷酸洗涤两次达30秒钟。洗涤后,继续保持真空30秒钟使滤板干燥。向滤板各孔中加入大约30μl闪烁液,然后用液体闪烁计数器(Packard TopCountHTS)读数。
实施例B
PBMC测定法
采用当用脂多糖刺激时合成和分泌TNF-α的人外周血单核细胞(“PBMC”),来测定本发明化合物抑制TNF-α产生的能力。
将化合物按5倍连续稀释于DMSO以制备化合物试验溶液,然后,稀释液用MEM、2%热灭活胎牛血清(“FBS”)、20mMHEPES、2mM L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素稀释至5倍母液。
如下从人血中分离出PBMC。采集志愿者的全血样品放到得自Becton Dickinson公司的VacutainerTM CPT中。将各管混匀,用水平转子按1500-1800RCF(相对离心力)在室温(18-25℃)下离心最少15分钟。对于每份供血,将暗黄覆盖层合并到单只管中,用磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)洗涤两次。将细胞沉淀重新悬浮于MEM、2%热灭活胎牛血清(“FBS”)、20mM HEPES、2mM L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素中。用血细胞计数器测定细胞总数,调节细胞悬液至2X106个细胞/ml。
向96孔细胞培养板各孔中加入0.1ml细胞悬液。加入化合物试验溶液(30μl),将细胞放入37℃/5%CO2培养箱中孵育1小时后,向各孔加入20μl7.5ng/ml脂多糖(LPS大肠杆菌(E.Coli)K-235),将细胞放回37℃/5%CO2培养箱中16-20小时。将细胞以1100RCF离心15分钟。将大约0.12ml的上清液转移到干净的96孔聚丙烯板中。或者立即测定样品,或者将样品保存于-80℃下备用。用人TNF-α酶联免疫吸附测定法(例如下文所述方法)来测定各样品中的TNF-α水平。
采用以下测定法测定TNF-α水平。将溶于碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液(BupHTM碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液Pack)的150μl2μg/ml抗TNF-α纯的小鼠单克隆IgG加到96孔Immulon4板(Immulon4ELISA平底板;Dynex,目录号011-010-3855)的各孔中,来制备TNF-α抗体包被板,并且在2-8℃下孵育过夜。除去包被溶液后,加入200μl封闭缓冲液(20mM HEPES(pH7.4)、150mM NaCl、2%BSA),将各板保存在2-8℃下备用。最高浓度6000pg/ml用样品稀释液(20mMHEPES(pH7.4)、150mM NaCl、2mM MgCl2、1%BSA)按1:2连续稀释,绘制出10点重组人TNF-α标准曲线。
用300μl“洗涤缓冲液”(20mM HEPES(pH7.4)、150mMNaCl、2mM MgCl2、0.02%吐温-20(Tween-20))洗涤5次,从TNF-αELISA板中除去封闭溶液。将50μl样品稀释液加到所有孔中后,将50μl TNF-α标准曲线溶液或试验化合物上清液加到所有孔中。振荡(300rpm)下将板在室温下孵育1小时。板用300μl洗涤缓冲液洗涤5次。将“抗体稀释液”(20mM HEPES(pH7.4)、150mM NaCl、2mMMgCl2、1%BSA、0.02%吐温-20)中的100μl0.2μg/ml生物素化山羊抗人TNF-α加到每孔中,振荡(300rpm)下将板在室温下孵育1小时。板用300μl洗涤缓冲液/孔洗涤5次。每孔加入抗体稀释液中的100μl0.02μg/ml链霉抗生物素碱性磷酸酶,振荡(300rpm)下将板在室温下孵育1小时。板用300μl洗涤缓冲液/孔洗涤5次。每孔加入二乙醇胺缓冲液与0.5mM MgCl2中的200μl1mg/ml pNPP(磷酸对硝基苯酯),振荡(300rpm)下将板在室温下孵育30-45分钟。通过测定光密度来监测反应进程:当最高标准达到OD介于2.0和3.0之间时,每孔加入50μl2N NaOH。用设置为405nm的微量滴定板读板仪,在30分钟内测定各孔的光密度。用4参数曲线拟合在XL fit中对数据进行了分析。
以下试剂用于上述测定中。Dulbecco磷酸缓冲盐溶液,不含钙或镁(Gibco目录号14190);极限必需培养基Eagle(MEM;Gibco目录号11090);青霉素-链霉素(Gibco目录号15140);L-谷氨酰胺,200mM(Gibco目录号25030);HEPES,1M(Gibco目录号15630);胎牛血清(“FBS”;HyClone目录号SH30070.03);得自大肠杆菌K-235的脂多糖(“LPS”;Sigma目录号L2018);抗TNF-α纯的小鼠单克隆IgG(R&D Systems目录号MAB210);BupHTM碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液Pack(Pierce目录号28382);HEPES(FW238.3;Sigma目录号H3575);NaCl(Sigma目录号S7653);牛血清白蛋白(“BSA”;JacksonImmunoReseach目录号001-000-162);聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯(Sigma目录号P2287);氯化镁六水合物(Sigma目录号M2670);重组人TNF-α(R&D Systems目录号210TA010);生物素化TNF-α亲和纯化的山羊IgG(R&D Systems目录号BAF210);链霉抗生物素碱性磷酸酶(Jackson ImmunoResearch目录号016-050-084);二乙醇胺底物缓冲液(Pierce目录号34064);磷酸对硝基苯酯(Sigma目录号N2765)。
实施例C
化合物72针对不同激酶的活性
应用本公司内部p38α放射性激酶测定法,采用ATF-2作为底物,对化合物72的p38α活性进行了研究。通过分析1μM化合物72存在下202蛋白激酶的活性,来测定化合物72的选择性。对在每个确立方案最初筛选的抑制>80%(Km时的ATP浓度)的激酶进行了IC50测定。
如表1所示,化合物72是p38αAbelson细胞质酪氨酸激酶(Abelson cytoplasmic tyrosine kinase,Ab1)、Abelson相关基因(Arg)和Tie-2受体酪氨酸激酶的有效抑制剂。除了这些活性外,化合物72还对BCR-Ab1T315I的伊马替尼抗性形式、src家族酪氨酸激酶Hck、Lyn和Fyn以及受体酪氨酸激酶FGFR1(成纤维细胞生长因子受体1;FGFR1)和VEGFR2(血管内皮生长因子受体2;KDR)适度有效。
表1
激酶 | IC50 |
p38α | <2nM |
Ab1 | 4nM |
Arg | 10nM |
Tie2 | 1nM |
Ab1(T315I) | 68nM |
Hck | 26nM |
Lyn | 25nM |
Fyn | 41nM |
FGFR1 | 28nM |
VEGFR | 74nM |
为了比较,还对WO2004/078116中实施例94和实施例138的化合物进行了试验。
实施例94
实施例138
结果见下表1a。
表1a
实施例94 | 实施例138 | |
激酶 | IC50 | IC50 |
p38α | <2nM | <2nM |
Ab1 | 10nM | >500nM |
Tie2 | 4nM | >500nM |
结果表明,比起WO2004/078116实施例94和实施例138的化合物,化合物72显然是Ab1和Tie2更有效的抑制剂。
实施例D
化合物72针对p38途径的细胞活性
HeLa细胞用化合物72处理60分钟后,用1μg/ml茴香霉素刺激60分钟,以诱导p38途径活化。细胞用针对磷酸化形式的HSP27(Ser78)抗体标记,GAPDH作为归一化对照。用LI-CORAeriustm成像仪使细胞成像并定量。
结果表明,化合物72是细胞中p38途径的有效抑制剂,表观IC50为2nM。在功能细胞测定中,还测定了这一化合物在用细菌脂多糖(LPS)处理以诱导细胞因子产生的全血中抑制TNF-α产生的能力(如ELISA所测一样),得到的表观IC50为30nM。
实施例E
化合物72针对Tie2受体的细胞活性
对于时程实验,使HUVEC血清饥饿2小时,然后用200ng/ml Tie2受体激动剂促血管生成素-1(Ang-1)刺激。在规定时间点收获细胞,用针对磷酸-AKT、磷酸-Erk、磷酸-HSP27、磷酸-p38和GAPDH的抗体进行免疫印迹。定量测定信号,并将信号归一化至GAPDH,以评价作为Tie2受体活化结果的诱导程度。用免疫印迹和表示在人脐血管内皮细胞(HUVEC)中响应Tie2受体激动剂Ang-1的Erk、AKT和p38途径活化时程的曲线图表示结果。结果表明,在响应Tie2受体活化时仅AKT和Erk途径被激活。
对于Tie2活化研究,使HUVEC血清饥饿2小时,然后用不同浓度的化合物72处理60分钟后,用200ng/ml Ang-1刺激10分钟。然后用抗磷酸酪氨酸(pTyr)抗体和抗Tie2抗体对Tie2进行免疫纯化(IP)和免疫印迹,以评价Tie2自身磷酸化的程度。裂解物分别用抗磷酸-Erk抗体和抗磷酸-AKT(Ser473)抗体进行免疫印迹。定量测定信号并使之归一化至作为加样对照的GAPDH。用免疫印迹和曲线图表示结果。化合物72处理导致剂量依赖性地抑制Tie2自身磷酸化以及其下游效应物Erk和AKT,前者的IC50<33nM,后者<11nM。
实施例F
化合物72针对BCR-Ab1的细胞活性
BCR-Ab1阳性的慢性髓细胞性白血病细胞系K562用不同浓度的伊马替尼或化合物72按规定在37℃、5%CO2下处理72小时。随后,用CellTiter Blue(Promega)测定细胞存活力以确定各化合物的IC50值。对于伊马替尼和化合物72,测得IC50值分别为278nM和62nM。
制备了用不同浓度的伊马替尼或化合物72在37℃、5%CO2下处理2小时的K562细胞提取物,并进行用于自身磷酸化Ab1(p-Ab1,Tyr245)和Ab1底物STAT5(pSTAT5,Tyr694)和CrkL(pCrkL,Tyr207)的免疫印迹。结果表明,在BCR-Ab1驱动的细胞系K562中,化合物72抑制增殖的有效性比伊马替尼高4倍。测定了在浓度为5000nM、1000nM、333nM、111nM、37nM和0nM的伊马替尼或化合物72中,用pBCR-Ab1、pSTAT5、pCrkL或GAPDH处理的K562提取物的免疫印迹结果。这一测定法表明,化合物72和伊马替尼均能够抑制BCR-Ab1及其底物STAT5和CrkL的自身磷酸化。根据增殖数据,化合物72在抑制这些底物的磷酸化时更为有效。
实施例G
化合物72和化合物74的物理性质、代谢特征和安全特征
1.溶解度测定
溶解度测定结果见下表2。
表2:溶解度
化合物72 | 化合物74(前药) |
pH3.0<0.005mg/ml | pH1.2<1mg/ml |
pH7.4<0.005mg/ml | pH6.5>1000mg/ml |
pH7.4~940mg/ml |
为了比较,证实了WO2004/078116实施例94和实施例138化合物的溶解度在pH6.5和pH7.4时均<0.001mg/ml。
2.CYP抑制测定法(荧光,LC-MS)
用合并的人肝微粒体(n=1),通过液相色谱/质谱法(LC/MS)测定所形成的特异性底物的代谢物与内标的比率与对照相比,得出了CYP3A4、CYP2C19和CYP2C9的IC50值。通过测定市售P450同等型特异性荧光探针对照和重组蛋白(n=1)相比较的相对荧光,得出CYP2D6和CYP1A2的IC50值。结果见下表3。
表3:CYP抑制特征(化合物72)
IC50 | |
CYP3A4 | 咪达唑仑:~8μM睾酮:~10μM |
CYP2D6 | 3μM |
CYP2C9 | 5μM(LC/MS) |
CYPC19 | 25μM(LC/MS) |
CYP1A2 | 25μM |
3.非靶毒性测定法
对化合物72在10μM时针对下列一组28个受体、离子通道和转运蛋白的结合(配体置换测定法)进行了测定。
所筛选出的28个分子实体中,仅钠通道(位点2)显示出与化合物有显著的相互作用(>50%置换)。
4.安全评价实验
用标准膜片钳方案进行了hERG测定。按照方案进行了AMES测定(细菌逆向突变测定)。按0.5-5000μg/试验板、S9活化/未活化下测定化合物72。按照方案进行了体外和体内小核实验。结果见下表4。
表4:安全性
测定法 | 化合物72 |
hERG膜片钳 | 64%抑制,10μM |
AMES突变性 | 阴性 |
小核实验(体外) | 阴性 |
5.耐受性研究
按10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg,每日两次给予小鼠(品系CD-1,每剂量组n=5)化合物72(作为化合物74)14天。在整个研究过程中评价了体重减轻情况。在最后一天采血用于临床化学分析(白蛋白、碱性磷酸酶、ALT、淀粉酶、BUN、钙、胆固醇、肌酸酐、葡萄糖、磷酸盐、总胆红素、TP、球蛋白)。结果见表5。未观察到化合物相关的死亡。在该项研究中,即使在100mg/kg时,也未观察到剂量限制性毒性(DLT),因此未鉴定出最大耐受剂量(MTD)。
表5:耐受性(体内)
物种 | 小鼠(CD-1) |
剂量 | 10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg,每日两次 |
研究时期 | 14天 |
体重减轻 | <5%(所有剂量组) |
临床化学分析 | 正常范围内(所有剂量组) |
注释: | 没有化合物相关的死亡未观察到DLT未达到MTD |
实施例H
啮齿动物和灵长类动物中化合物72的药代动力学特性
采用非室(不依赖于模型)方法对得自所有下述物种的血浆浓度时间曲线进行了分析。下面分别提供小鼠、大鼠和猴的清除率(Cl)、清除百分率计算值(ER%)、分布容积(Vz)、达到1/2最大浓度的时间(t1/2)和暴露(AUC,曲线下面积)值。
1.小鼠:静脉内推注(IV,1mg/kg)或口服(PO,10mg/kg)给药后,检测雌性Balb/c小鼠(n=3只/时间点)中化合物72的药代动力学特性。在口服给药后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时以及静脉给药后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时和8小时,获取血样。
静脉内:1mg/kg 口服:10mg/kg
Cl=2.6ml/分钟/kg AUC=10.5μg·小时/kg
ER=2.8% F=16%
Vz=0.085L/kg Cmax=1.8μg/ml
t1/2=3.9小时
AUC=6.6μg·小时/kg
2.大鼠:在静脉内推注(2mg/kg)或口服(30mg/kg)给药后,检测雄性Sprague-Dawley大鼠(n=3只/时间点)中化合物72的药代动力学特性。按小鼠PK研究所列相同时间点采集血样。
静脉内:1mg/kg 口服:30mg/kg
Cl=3.2ml/分钟/kg AUC=35μg·小时/kg
ER=4.6% F=15%
Vz=0.048L/kg Cmax=4.5μg/ml
t1/2=3.9小时
AUC=4.7μg·小时/kg
3.猴:在静脉内推注(2mg/kg)或口服(10mg/kg)给药后,检测雄性猕猴(n=3只/时间点)中化合物72的药代动力学特性。按小鼠PK研究所列相同时间点采集血样。
静脉内:1mg/kg 口服:10mg/kg
Cl=8.8ml/分钟/kg AUC=7.6μg·小时/kg
ER=20% F=38%
Vz=3.2L/kg Cmax=0.26μg/ml
t1/2=4.6小时
AUC=4.1μg·小时/kg
实施例I
胶原诱发关节炎(CIA)大鼠模型中的化合物72
在本项研究中,化合物72以前药的形式(化合物74)给予。雌性路易斯(Lewis)大鼠(200g;每治疗组n=8)用II型胶原/弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant)注射(300μl的0.6mg胶原注射剂,第0天和第6天背侧注射)。给予动物:(1)溶媒:5ml/kg,口服,每日两次x7;(2)化合物72:0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg,口服,每日两次x7;或者(3)恩利10mg/kg,皮下,第1天和第4天。恩利用作阳性对照。在第11-18天给予化合物。在第11天以及之后每天测量了踝直径(图70)。在研究结束时,测得爪重并进行了显微组织学测定。切取后爪和后膝,将后爪称重后,与后膝一起放入福尔马林中。在固定剂中1-2天后,放入脱钙剂中4-5天,对踝关节和膝进行处理,包埋,切片,用甲苯胺蓝染色。对踝和膝进行0-5分的评分,用于评价炎症、血管翳形成和骨吸收。
结果表明,化合物72剂量依赖性地改善了与该病模型有关的所有参数。对于踝直径和组织病理,化合物72的表观ED50分别为1.5mg/kg和3.0mg/kg。在10mg/kg时,化合物72促进疾病在研结束时消退。
实施例J
化合物72体内抑制血管生成
在本项研究中化合物72以前药的形式(化合物74)给予。将500μl生长因子还原基质胶(matrigel)植入雌性CD-1小鼠(19-22g,每治疗组n=4)皮下,基质胶含有1500ng/ml bFGF或0ng/ml bFGF,为阴性对照。按规定剂量和时间表经口管饲法给予试验化合物。给予动物:(1)溶媒:30mM磷酸盐缓冲液,10ml/kg,口服,每日两次x7;(2)化合物72:10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg活性药物,口服,每日两次x7;或(3)SU11248:(Sutent)40mg/kg,口服,每日一次x7。Sutent是KDR抑制剂,用作本项研究的阳性药物对照。在第7天使动物安乐死。收获基质胶,称重,在磷酸缓冲盐溶液(pH7.4)中匀化。将样品离心,通过显色反应分析了所得裂解物的血红蛋白浓度。化合物72以剂量依赖性方式抑制bFGF诱导的血管生成。在100mg/kg时,血管生成被显著抑制达72%(p<0.05,Dunnett多重比较检验)。
实施例K
化合物72抑制BCR-Ab1驱动的肿瘤
在本项研究中化合物72以前药的形式(化合物74)给予。将107K562细胞植入雌性Scid-beige小鼠(17-20g,每组n=8)右胁皮下。当肿瘤大小达到200±50mm3时,按规定剂量和时间表通过经口管饲法给予试验化合物。给予动物:(1)溶媒:20%Trappsol,10ml/kg,口服,每日两次x7;(2)化合物74:30mg/kg或100mg/kg活性药物,口服,每日两次x7或每日一次x7);或者(3)伊马替尼400mg/kg,口服,每日两次x7。伊马替尼是已知的Ab1抑制剂,用作本项研究的阳性药物对照。在整个研究过程中监测肿瘤大小和动物体重。结果见下表6。
表6
治疗 | %消退和完全应答 |
伊马替尼400mg/kg每日两次 | 98%R(6/8) |
化合物7230mg/kg每日两次100mg/kg每日两次100mg/kg每日一次 | 停滞(0/8)93%R(5/8)停滞(0/8) |
化合物74在该模型中是有效的。30mg/kg每日两次或100mg/kg每日一次给药导致肿瘤停滞,引起94%肿瘤消退,当剂量增加至100mg/kg,每日两次时,8只动物中有5只动物完全应答(100%肿瘤消退)。化合物72在整个疗程当中耐受性良好,引起不超过10%的体重减轻。
实施例L
多发性骨髓瘤模型中的化合物72
在本项研究中化合物72以前药的形式(化合物74)给予。将15x106RPMI8226细胞植入雌性Scid-beige小鼠(17-20g,每组n=8)右胁皮下,另加上溶媒(20%Trappsol,10ml/kg,口服,每日两次x14)或化合物74(100mg/kg活性药物,口服,每日两次x14)。当肿瘤大小达到200±50mm3时,按规定剂量和时间表通过经口管饲法给予试验化合物。在整个研究中监测肿瘤大小和动物体重,对化合物72抑制肿瘤生长的能力(%TGI=(1-T/C)x100)进行了评价。结果见表7。随着本项研究的进程,化合物72(按其前药形式即化合物74给药)对肿瘤生长的作用有统计显著性。这些数据表明,本项研究中所观察到的化合物72的作用是其抑制p38的能力以外的作用,或者独立于其抑制p38的能力。化合物72在整个疗程当中耐受性良好,引起不超过10%的体重减轻。
表7
组别 | %肿瘤生长抑制(TGI) |
对照 | 0% |
化合物37d60mg/kg | 31% |
化合物72100mg/kg | 67% |
多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226用不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132(用作阳性对照)或化合物72在37℃、5%CO2下处理72小时。然后用CellTiter Blue(Promega)测定了细胞存活力,从而测得各化合物的IC50值(表8)。在规定浓度范围内用化合物72处理是不会抗增殖的。MG-132产生本公司内部测试历史范围内的IC50(表8)。这些数据有力地表明,所观察到的见于体内化合物72的TGI作用很可能是由肿瘤外作用(extra-tumor effect)所致。这一作用与已发表报告所指出的p38和Tie2两者的活性对于体内这一类型肿瘤的生长/存活可能非常关键的结论一致。
表8
化合物 | 增殖IC50 |
MG-132 | 114nM |
化合物72 | >10,000nM |
实施例M
化合物72针对VEGFR2的细胞活性
使HUVEC血清饥饿2小时后用不同浓度的化合物72或对照VEGFR2抑制剂((Z)-3-[(2,4-二甲基-3-(乙氧基羰基)吡咯-5-基)亚甲基]吲哚啉-2-酮)处理60分钟,然后用20ng/ml VEGF刺激5分钟。制备出不同处理的裂解物,用对在Tyr1175上磷酸化的VEGFR2特异性的抗体进行了免疫印迹。然后用LI-COR Aeriustm成像仪,对所得化合物72和对照抑制剂VEGFR1的印迹成像,并进行了定量。将磷酸-VEGFR2信号归一化至GAPDH作为加样对照。然后运用4参数曲线拟合方案,用这些数值计算出化合物72和对照VEGFR2抑制剂VEGFR1的IC50值。
化合物72抑制HUVEC的血管内皮受体II型(VEGFR2)自身磷酸化。结果表明,化合物72处理导致剂量依赖性地抑制VEGFR2在酪氨酸残基1175上的自身磷酸化,其IC50为48nM。
制备实施例
在下述实施例中,除非另有说明,否则所有温度均为摄氏度。试剂购自供应商(例如Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI或Maybridge),无需进一步纯化即可使用,除非另有说明。四氢呋喃(THF)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)、甲苯、二噁烷和1,2-二氟乙烷购自Aldrich,试剂装在Sure密封瓶中,按常规方法使用。
一般在氮气或氩气的正压下或者用干燥管(除非另有说明)在无水溶剂中进行下列反应,反应瓶通常配有橡胶塞以便通过注射器注入底物和试剂。玻璃器皿经烤箱烘干和/或加热烤干。
用配有硅胶柱或在硅胶SepPak柱体(Waters)上的Biotage系统(生产商:Dyax Corporation)进行柱色谱法。
用Varian仪器在400MHz下操作来记录1H-NMR谱。用CDCl3溶液获取1H-NMR谱(单位ppm),用氯仿作为参比标准(7.25ppm)。根据需要使用其他NMR溶剂。如果报告峰裂数,则使用下列缩写词:s(单峰),d(双峰),t(三重峰),m(多重峰),br(宽峰),dd(双双重峰),dt(双三重峰)。如果给出偶合常数,则单位为赫兹(Hz)。
实施例1
1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1
唑-5-基氧基)苄基)脲(72)的制备:方法1
化合物(72)按照方法1的合成见流程1,步骤A-J。
步骤A:2-(苄氧基)-5-氟苄腈62的制备:在氮气氛、冰浴中,在装有机械搅拌器和测温探头的12L四颈圆底烧瓶中,于30分钟内通过滴液漏斗将氢化钠(74g,1.82mol)的DMF(1.95L)悬浮液慢慢加到苯甲醇(142g,1.3mol)中。在冰浴(0℃)中将混合物搅拌120分钟,通过滴液漏斗在35分钟内加入2,5-二氟苄腈(180g,1.3mol)的DMF(650ml)溶液。使所得混合物升温至室温。2小时后,将混合物在冰浴(4℃)中冷却,用饱和NH4Cl(130ml)猝灭后加入水(2.6Lx3)。将浆状物在室温下搅拌过夜,沉淀物经过滤后用水(650mlx3)洗涤。将固体真空干燥2天,得到292g(99.3%)所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78(dd,1H,J=3.2Hz,J=8.2Hz),7.5-7.76(m,1H),7.35-7.48(m,6H),5.28(s,2H)。
步骤B:5-氟-2-羟基苄腈63的制备:在氮气氛下,将无水10%Pd/C(2.48g)装入5L烧瓶中。在氮气氛下,慢慢加入2-(苄氧基)-5-氟苄腈(148g,651mmol)的甲醇(2.34L)溶液。真空除去烧瓶中的空气,向烧瓶中充入H2(气罐)三次。将混合物在室温下搅拌1小时。上述方法重复多两次以促进反应完成。再将混合物在室温下搅拌2小时。在氮气氛下,使混合物通过硅藻土垫过滤后,用EtOAc(150mlx2)洗涤。钯废物用(50ml)漂洗后弃去。滤液经浓缩后,得到所需化合物(94.6g,106%,黄色固体)。测得MS(APCI-)m/z137(M-1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(br,1H),7.58(dd,1H,J=3.2Hz,J=8.2Hz),7.43(m,1H),6.91-7.03(dd,1H J=4.5Hz,J=9.2Hz)。
步骤C:5-氟-2-(4-甲基-3-硝基苯氧基)苄腈64的制备:在室温下,在装有机械搅拌器、冷凝器和J-Kem测温探头的三颈5L烧瓶中,将5-氟-2-硝基甲苯(158g,1.02mol)的N,N-二甲基乙酰胺(500ml)溶液加到5-氟-2-羟基苄腈(147g,1.07mol)和碳酸钾(163g,1.2mol)与N,N-二甲基乙酰胺(573ml)的混合物中。将混合物加热至100℃。8小时后,使反应混合物冷却至室温,在冰浴中加入水(3400ml)。沉淀物经过滤后,用水(1073mlx2)洗涤,真空干燥(40℃),得到所需化合物(264g,90%,褐色固体)。测得MS(APCI-)m/z272(M-1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(d,1H,J=9Hz),7.41-7.48(m,1H),7.38(m,1H),7.07-7.14(m,1H),6.88-7.10(m,1H),2.63(s,3H)。
步骤D:2-(3-氨基-4-甲基苯氧基)-5-苄腈65的制备:在装有机械搅拌器、冷凝器和J-Kem测温探头的四颈12000ml圆底烧瓶中,加入2-(3-氨基-4-甲基苯氧基)-5-苄腈(247g,907mmol)和锌粉(297g,4.5mol)并悬浮于1:1MeOH/THF(2.2L)中。通过加料漏斗在40分钟内慢慢加入NH4Cl饱和水溶液(1.6L)(保持内部温度在60℃以下)。使反应混合物冷却至室温,并在室温下搅拌1小时。经过滤除去锌粉,滤饼用EtOAc(450mlx3)洗涤。加入NH4OAc饱和水溶液(1500ml,由2kgNH4OAc与4L H2O制备)和H2O(1500mlx2)。滤液通过旋转蒸发浓缩直到余留的大多为水。黄褐色固体经过滤后用H2O(1500mlx4)洗涤,经真空干燥,得到211.5g(96%)所需化合物。测得MS(APCI+)m/z243(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(m,1H),7.18(m,1H),6.65-6.85(m,5H),3.60(br,2H),2.17(s,3H)。
步骤E:2-(1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄腈66的制备:在装有机械搅拌器、J-KEM测温探头的6L圆底烧瓶中,在2分钟内滴加浓HCl(359ml)来处理2-(3-氨基-4-甲基苯氧基)-5-苄腈(209g,862mmol)和NH4BF4的乙酸(1.75L)/水(862ml)冷溶液(0℃)。将浆状物在冰浴中搅拌30分钟后加入亚硝酸钠。将反应混合物在0℃下搅拌1小时,然后升温至室温。在室温下搅拌3小时后,通过旋转蒸发除去溶剂后与甲苯(200mlx2)共沸。残余物经真空干燥过夜。将固体悬浮于丙酮(200ml)和EtOAc(200ml)中,通过旋转蒸发除去溶剂。将残余物悬浮于EtOAc(200ml),旋转蒸发除去溶剂。将残余物悬浮于EtOAc(1145ml),一次性加入乙酸钾(254g,2.6mol)。将混合物在室温下搅拌20小时后过滤。滤饼用EtOAc(500mlx6)洗涤。将合并的滤液浓缩。将残余物悬浮于EtOAc(500ml)和庚烷(500ml)中。将黄色固体过滤(141.3g)。将母液浓缩并从MTBE/己烷(100ml/100ml)中重结晶出来,得到20.1g。第二母液经浓缩后用MTBE/庚烷(100ml/100ml)研磨,得到额外的14.28g。合并产物,得到176g(收率81%)所需化合物。测得MS(APCI+)m/z254(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.38(br,1H),8.07(s,1H),7.94(dd,1H,J=3,1Hz,J=8.2Hz),7.64(d,1H,J=9Hz),7.54(m,2H),7.21(dd,1H,J=9Hz),6.96(dd,1H,,J=4.3Hz,J=9.3Hz)。
步骤F:2-(1-(2,2-二甲氧基乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄腈67的制备:在室温下,将2-(1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄腈(5.000g,19.7mmol)悬浮于N,N-二甲基乙酰胺(50ml)中,分批加入氢化钠(0.684g,25.7mmol)。一次性滴加2-溴-1,1-二甲氧基乙烷(3.49ml,29.6mmol),将反应混合物加热至80℃18小时。使反应混合物冷却至室温后,减压浓缩,得到粗产物,使之在EtOAc与NH4Cl饱和水溶液之间分配。合并的有机层用水(3x)、盐水洗涤,干燥(MgSO4)后减压浓缩,得到粗产物。粗产物用快速柱色谱法纯化(洗脱液25%EtOAc/己烷),得到3.88g(57.6%)所需化合物。未分离出N-2异构体。测得MS(APCI+)m/z342(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(s,1H),7.54(d,1H,J=9Hz),7.36(m,2H),7.16(m,2H),6.82(dd,1H,J=4.3Hz,J=9.3Hz),4.76(t,1H,J=5.3Hz),4.49(d,2H,J=5.3Hz),3.41(s,6H)。
步骤G:(2-(1-(2,2-二甲氧基乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苯基)甲胺68的制备:2-(1-(2,2-二甲氧基乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄腈(3.80g,11.13mmol)的THF(100ml)溶液滴加到氢化铝锂(0.6338g,16.70mmol)的THF(100ml)搅拌悬浮液(0℃)中。将反应混合物保持在0℃直到加完原料。将反应混合物升温至室温并搅拌,直到通过HPLC分析观察到原料完全消耗掉。将反应混合物滴加到Rochelle盐饱和水溶液的搅拌溶液中(室温)。快速搅拌两相混合物30分钟,直到铝盐溶于溶液。分离各层,水层用大量EtOAc萃取。合并的有机物经(MgSO4)干燥后减压浓缩,得到3.73g(97%)粗产物,无需进一步纯化便可使用。测得MS(APCI+)m/z346(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(s,1H),7.48(d,1H,J=9Hz),6.9-7.15(m,5H),4.76(t,1H,J=5.3Hz),4.49(d,2H,J=5.3Hz),3.88(s,2H),3.36(s,6H)。
步骤H:1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(2-(1-(2,2-二甲氧基乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄基)脲70的制备:将(2-(1-(2,2-二甲氧基乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苯基)甲胺(2.00g,5.791mmol)、3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯(3.516g,8.686mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.026ml,17.37mmol)悬浮于N,N-二甲基乙酰胺(50ml)中并在80℃下加热过夜。将反应混合物减压浓缩,残余物用EtOAc和NH4Cl饱和水溶液稀释。有机物用水(3x)、盐水洗涤,干燥(MgSO4)后减压浓缩,得到粗产物,将其用快速柱色谱法纯化(洗脱液35-45%EtOAc/己烷)。溶剂蒸发后,得到所需产物(2.57g,74%,浅黄色泡沫状物)。测得MS(APCI+)m/z602(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(s,1H),7.43(d,1H,J=9Hz),6.72-7.30(m,9H),6.18(s,1H),6.01(br,1H),5.47(t,1H,J=6.1Hz),4.76(t,1H,J=5.3Hz),4.44(t,4H,J=5.6Hz),3.38(s,6H),2.37(s,3H),1.30(s,9H)。
步骤I:1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-氧代乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄基)脲71的制备:在室温下,将1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-((2-(1-(2,2-二甲氧基乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苯基)甲基)脲(0.500g,0.8324mmol)溶于二氯甲烷,将碘三甲基硅烷(0.3554ml,2.497mmol)滴加到搅拌的溶液中。反应混合物通过HPLC分析监测,当检测不出原料时,将混合物用二氯甲烷稀释,用10%Na2S2O4水溶液、NaHCO3饱和水溶液、盐水洗涤,干燥(MgSO4)后减压浓缩,得到536mg(定量收率)粗产物,无需进一步纯化便可使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),7.97(s,1H),6.78-7.30(m,10H),6.17(s,1H),5.99(br,1H),5.44(q,1H,J=6.1Hz),4.46(m,4H),H2.35(s,3H),1.34(s,9H)。
步骤J:1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄基)脲72的制备:在室温下,将1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-((5-氟-2-(1-(2-氧代乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)甲基)脲(2.179g,3.929mmol)悬浮于MeOH(40ml)中,分批用硼氢化钠(0.7432g,19.64mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌,直到经HPLC分析观察到原料全部转化成产物。将反应混合物减压浓缩后用NH4Cl饱和水溶液稀释,并萃取到二氯甲烷中。使有机物干燥(MgSO4)后减压浓缩,得到粗产物,将其用快速柱色谱法纯化(洗脱液2-6%iPrOH/DCM),得到1.21g(55%)所需化合物。测得MS(APCI+)m/z557(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),7.97(s,1H),7.68(d,1H,J=9.1Hz),7.35(s,1H),6.85-7.4(m,8H),6.24(s,1H),4.87(t,1H,J=5.4Hz),4.43(t,1H,J=5.6Hz),4.28(d,1H,J=5.9Hz),3.80(q,1H,J=5.5Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。
实施例2
磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲
基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯(74)的制备:方法1
化合物(74)按照方法1的合成见流程1,步骤K-L。
步骤K:磷酸二苄酯·2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-5-基)乙酯73的制备:在室温下,将1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-((5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)甲基)脲(0.357g,0.6414mmol)、二异丙基氨基磷酸二苯酯(0.2970ml,0.9620mmol)和2H-四唑(0.07189g,1.026mmol)悬浮于DMF(10ml)中,并搅拌直到TLC(10:1DCM-Et2O)分析显示原料完全消耗掉。加入叔丁基过氧化氢(0.4439ml,3.207mmol)后,反应物通过HPLC分析进行监测。反应完成后,加入10%Na2S2O3水溶液,将反应混合物搅拌10分钟。将反应混合物倒入NaHCO3饱和水溶液中,并萃取到EtOAc中。合并的有机物用水(2x)和盐水洗涤。将有机物干燥(MgSO4)后减压浓缩,得到粗产物,将其用快速柱色谱法纯化(洗脱液30-40%EtOAc/己烷),得到458mg(87%)所需化合物。测得MS(APCI+)m/z817(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(s,1H),6.7-7.35(m,10H),6.18(s,1H),6.16(s,1H),4.62(s,1H),5.36(t,1H,J=6Hz),4.81(d,4H,J=8.2Hz),4.54(t,2H,J=5.1Hz),4.39(m,4H),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。
步骤L:磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯74的制备:将磷酸二苄酯·2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯(1.920g,2.35mmol)悬浮于EtOH(0.05M,50ml)和环己-1,4-二烯(3.56ml,82.14mmol)中,加入10%Pd/C(20%(重量),0.384g)。将反应混合物回流过夜。将反应混合物通过GF纸过滤后用MeOH洗涤。使有机层减压浓缩,得到粗产物,使之溶于MeOH,并通过Gellman acrodisk(0.45um)过滤器以除去痕量钯污染物。溶剂蒸发后,将所得胶状物在CH3CN中研磨,经过滤收集所形成的固体,高真空下干燥3小时,得到1.21g(89%)所需化合物。测得MS(APCI+)m/z637(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),8.00(s,1H),7.71(d,1H,J=9Hz),6.88-7.37(m,10H),6.24(s,1H),4.61(br,1H),4.28(d,2H,J=5.7Hz),4.19(dd,2H,J=5.2Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。
实施例3
1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-((5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-
吲唑-5-基氧基)苯基)甲基)脲(72)的制备:方法2
按照方法2合成化合物(72)的一个替代方法见流程2,步骤A-F。
步骤A:2-(4-氨基-3-甲基苯氧基)-5-氟苄腈65的制备:在室温下,在抽真空后充入氩气的3L四颈烧瓶中,在快速搅拌下将2,5-二氟苄腈(295.3ml,812.0mmol)和4-氨基-3-甲基苯酚(100.0g,812.0mmol)溶于无水DMSO(2.75M)。将溶液抽真空后充入氩气(3x)。加入碳酸钾(185.2g,1340mmol)(-325目)。将反应混合物抽真空后充入氩气(3x)后,升温至80℃(内部探头)16小时。TLC表明完全转化。使反应混合物冷却至室温,快速搅拌下慢慢倒入2L冰水中。将圆底烧瓶中的残余物反复溶于水,并倒入冰水中直到总体积达3L,将全部固体溶于冰水。在其达到室温的同时,将悬浮液快速搅拌2小时。经过滤收集褐色固体,用水(3L)洗涤,风干,用乳胶板干燥后,在高真空、40℃下干燥44小时,得到194g(99%)所需产物,为黄褐色固体。测得MS(APCI+)m/z243(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(m,1H),7.18(m,1H),6.65-6.85(m,5H),3.60(br,2H),2.17(s,3H)。
步骤B:2-(1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄腈66的制备:在室温下,在500ml装有大磁力搅棒的单颈烧瓶中,将2-(4-氨基-3-甲基苯氧基)-5-氟苄腈(274.5ml,219.6mmol)溶于氯仿(0.8M),用乙酸钾(25.86g,263.5mmol)处理。使反应混合物冷却至0℃后,在5分钟内通过加料漏斗用乙酸酐(62.28ml,658.8mmol)处理。将反应物与回流冷凝器相接,再用100ml氯仿处理,并加热至40℃。通过加料漏斗滴加亚硝酸异戊酯(58.74ml,439.2mmol)。加料漏斗用60ml+40ml氯仿漂洗后移开,代以玻璃塞子。将反应物加热至回流20小时,冷却至室温后,真空浓缩成褐色固体。高真空下干燥30分钟后,将褐色固体悬浮于1L水中,剧烈搅拌15分钟后过滤。在室温下,将所得橙褐色固体(83g)溶于400ml MeOH,用1.0M盐酸(241.6ml,241.6mmol)处理。将混合物与回流冷凝器相接,并升温至70℃20小时。将反应物冷却至0℃,依次加入1.0M氢氧化钠(252.6ml,252.6mmol)和水(250ml)。将所得黄色悬浮液在冰浴中搅拌10分钟后,使之沉淀。将悬浮液过滤,用水(1L)洗涤,风干,用乳胶板干燥并在高真空、40℃下干燥36小时,得到50.7g(91%)所需产物,为流动性良好的黄褐色固体。测得MS(APCI+)m/z254(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.38(br,1H),8.07(s,1H),7.94(dd,1H,J=3,1Hz,J=8.2Hz),7.64(d,1H,J=9Hz),7.54(m,2H),7.21(dd,1H,J=9Hz),6.96(dd,1H,J=4.3Hz,J=9.3Hz)。
步骤C:2-(5-(2-氰基-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯77的制备:将2-(1H-吲唑-5-基氧基)-5-氟苄腈(40.7g,160.7mmol)溶于400ml DMF中,将溶液放到水浴(室温)中。加入碳酸铯(157.1g,482.2mmol)。在水浴中30分钟后,滴加2-溴乙酸甲酯(33.47ml,353.6mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。向混合物中加入水(400ml,略微放热),将整个混合物转移到2L分液漏斗(装有400ml EtOAc)中。分离各层,水层用EtOAc(3X200ml)萃取。合并的萃取物用水和盐水洗涤后,分离各层。有机层经MgSO4干燥,通过硅藻土垫过滤,减压浓缩后,在高真空下干燥1小时,得到66.3g黄褐色固体。将该固体溶于400ml热EtOAc中,在回流下用活性炭处理10分钟。使混合物通过硅藻土垫过滤后,减压浓缩。经过滤除去不溶性物料。将固体溶于300ml热EtOAc中,加入300ml己烷。使混合物冷却至室温。经过滤收集浅褐色固体32.24g(61.7%)。测得MS(APCI+)m/z326(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03,1H),7.41-7.36(m,3H),7.22-7.16(m,2H),6.81(dd,J=4.29Hz,9.37Hz,1H),5.19(s,2H),3.79(s,3H)。
步骤D:2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯二盐酸盐78的制备:将2-(5-(2-氰基-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯(10.00g,30.74mmol)装入2500ml帕尔(Parr)氢化容器中。加入甲醇(0.1M,310ml)和浓HCl(25.62ml,307.4mmol)。加入10%Pd/C(2.0g,迪高沙型(Degussa type)),容器用氢气吹洗(三次,未抽真空)。在40psi下,向容器充入氢气,放置在摇动器上18小时。再向混合物中加入1.0g10%Pd/C,再将混合物放回帕尔氢化器中18小时。将混合物通过硅藻土垫过滤后减压浓缩(浴温保持在20℃以下)。使残余物与MeOH(3X100ml)共沸。第三次共沸后将浴温升至40℃。将残余物(油状物)在高真空下干燥2小时,得到所需产物(11.6g,93.8%,黄色固体)。测得MS(APCI+)m/z330(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.08(s,1H),6.84-7.76(m,6H),5.43(s,2H),4.8(br,2H),4.105(q,2H,J=5.6Hz),3.68(s,3H)。
步骤E:2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯79的制备:在室温下,2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯二盐酸盐(17.5g,43.51mmol)的二甲基乙酰胺(0.5M,88ml)溶液依次用3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯(17.96g,44.38mmol)、二异丙基乙胺(30.3ml,174mmol)处理。将混合物在80℃下加热过夜。使混合物真空浓缩,将残余物在EtOAc与NH4Cl饱和水溶液之间分配。分离出有机层,用盐水洗涤,通过1PS纸过滤,真空蒸发成褐色泡沫状物。将泡沫状物在乙醚中研磨,经过滤收集析出的固体,得到22.55g(89%)所需化合物。测得MS(APCI+)m/z585(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.3(s,1H),8.07(s,1H),7.68(d,1H,J=8.9Hz),6.85-7.37(m,8H),6.24(s,1H),5.4(s,2H),4.28(d,2H,J=5.8Hz),3.68(s,3H),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。
步骤F:1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-((5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)甲基)脲72的制备:在室温下,2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯(4.6g,7.87mmol)的甲醇(0.1M,80ml)溶液分批用硼氢化钠(893mg,23.6mmol)处理。将混合物在室温下搅拌18小时,将溶剂真空蒸发成暗黄色残余物。将残余物在二氯甲烷和NH4Cl饱和水溶液之间分配。有机层通过1PS纸过滤,真空蒸发,用Biotage纯化,用2-10%iPrOH/DCM洗脱。将所需部分真空蒸发成白色泡沫状物,2.97g(68%)。测得MS(APCI+)m/z557(M+1)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),7.97(s,1H),7.68(d,1H,J=9.1Hz),7.35(s,1H),6.85-7.4(m,8H),6.24(s,1H),4.87(t,1H,J=5.4Hz),4.43(t,1H,J=5.6Hz),4.28(d,1H,J=5.9Hz),3.80(q,1H,J=5.5Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。
实施例4
磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲
基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯(74)的制备:方法2
化合物(72)按照方法2合成的替代方法见流程2,步骤G-H。
步骤G:磷酸二叔丁酯·2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯80的制备:在室温下,1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-((5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)甲基)脲(1.5g,2.69mmol)的DMF(0.2M,15ml)溶液用咪唑(183mg,2.69mmol)和咪唑盐酸盐(423mg,4.04mmol)处理。当观察到完全溶解后,加入二异丙基氨基磷酸二叔丁酯(1.28ml,4.04mmol)。在室温下连续搅拌18小时。在室温下慢慢加入过氧化氢(50%水溶液,0.535ml,9.43mmol),继续搅拌1小时。根据LC和TLC测定,判断反应完成情况。使残余物在二氯甲烷与10%Na2S2O3水溶液之间分配。水层用EtOAc(2x)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤,通过1PS纸过滤,真空蒸发至黄色油状物。油状物用硅胶塞纯化(用DCM、3-5%MeOH/DCM洗脱)。所需部分经真空蒸发,得到所需产物1.59g(79%,白色泡沫状物)。测得MS(APCI+)m/z749(M+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.01(s,1H),7.73(d,1H,J=9.1Hz),6.79-7.35(m,8H),6.23(s,1H),4.62(t,2H,J=4.7Hz),4.26(m,4H),2.35(s,3H),1.43,s,9H),1.25(s,18H)。
步骤H:磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯74的制备:在室温下,磷酸二叔丁酯·2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯(3.66g,4.89mmol)的EtOH(0.2M,24ml)溶液用5N HCl/iPrOH(2.93ml,14.7mmol)处理。在室温下连续搅拌过夜。将溶剂真空蒸发,残余物从甲苯和乙醚(2x)共蒸发出来。将浅褐色泡沫状物溶于MeOH后,慢慢倒入装有水的烧杯中。经过滤收集析出的固体,得到2.83g(91%)所需产物。测得MS(APCI+)m/z637(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.00(s,1H),7.71(d,1H,J=9Hz),6.88-7.37(m,10H),6.24(s,1H),4.61(br,1H),4.28(d,2H,J=5.7Hz),4.19(dd,2H,J=5.2Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。
实施例5
5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄腈(78A)
在90分钟内,分五个批次按每次约5克向2-(5-(2-氰基-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酸甲酯77(按实施例3制备)(60.0g,184.4mmol)的MeOH(370ml)溶液中加入NaBH4(24.42g)。最后一次加入NaBH4时,将温度由25℃升至44.7℃。将混合物真空浓缩。向浓缩物中加入饱和NH4Cl(600ml)和EtOAc(600ml),将混合物剧烈搅拌1小时。分离各层,水层用EtOAc(2X100ml)萃取。合并的有机物用饱和NH4Cl(2X100ml)、水(200ml)、盐水(500ml)洗涤,经MgSO4干燥,通过GF/F纸过滤后浓缩成浅橙色固体。将粗制固体溶于CH2Cl2(1L),搅拌下加入己烷(2.25L)。得到浅褐色固体,搅拌30分钟后收集固体,高真空下干燥,得到45.5g产物。将滤液减压浓缩后,将产物重新溶于CH2Cl2(100ml),加入己烷(200ml)。经过滤收集所得固体(6.2g)。合并两次产物,得到51.7g(94.3%)78A。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(s,1H),7.49(d,1H),7.39-7.36(m,2H),7.21-7.16(m,2H),6.90(dd,1H),4.49(t,2H),4.17-4.13(m,2H),2.81(t,1H)。
实施例6
2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙醇(79A)
(方法A)
向250ml帕尔(Parr)摇瓶中加入5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄腈78A(按实施例5制备)(80.0g,269.1mmol)、Pd(OH)2(32g,40%装载)、EtOH(5L)和浓HCl(224ml,2691mmol)。将容器密封,用氢气吹洗,排气后充入氢气至180PSI。将内部温度降至18℃,搅拌23小时后,用HPLC确定反应完全情况。取出上述反应混合物,依次用80g原料和53.2g原料各重复整个顺序两次。合并的反应混合物(4次反应)通过GF/F过滤,将滤液减压浓缩。将残余物溶于1N HCl(3.0L),用EtOAc(3X2L)洗涤。向水层中加入EtOAc(2L),将各相剧烈搅拌10分钟后,除去有机层。将这一步骤重复多两次后,将水相转移到冷却的烧瓶(冰浴)中。向酸性含水混合物中加入NaOH颗粒(40gx11),按不使温度升至35℃以上的方式加入。一旦pH达~14时,将混合物转移到分液漏斗,用CH2Cl2(4X1L)萃取。合并的萃取物用水(2X1L)和盐水(2X1L)洗涤。萃取物经MgSO4(~250g)干燥,通过GF/F过滤后减压浓缩。将浓缩物溶于CH2Cl2(3.5L),加入己烷(4L)。先加入2L己烷时,得到褐色固体。搅拌1小时后,经过滤收集固体,滤饼用1:2CH2Cl2/己烷(500ml)洗涤。将滤饼真空干燥,得到165.1g(55.6%)79A。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(s,1H),7.42(d,1H),7.17-7.12(m,3H),6.87(td,1H),6.80(dd,1H),4.46(t,2H),4.12(t,2H),3.86s(2H),1.87(brs,1H)。
实施例7
2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙醇(79A)
(方法B)
向(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲唑-5-基氧基)苄腈(1.0g,3.36mmol)和NiCl26H2O(148mg,0.336mmol)与MeOH(30ml)的溶液中分批(2-3次)加入NaBH4(636mg,16.8mmol),将反应物搅拌3小时。慢慢加入饱和Na2CO3溶液(15ml),将混合物搅拌75分钟,期间形成微细固体。使反应混合物通过GF/F过滤,滤饼用MeOH(20ml)洗涤。使滤液真空浓缩至约15ml,加入乙酸异丙酯(20ml),使混合物浓缩。向浓缩物中加入乙酸异丙酯(20ml),将混合物搅拌5分钟。分离各相,有机层用10%盐水(20ml)洗涤。加入柠檬酸(0.1M,20ml)后,使两相充分混匀。除去有机层,水溶液用乙酸异丙酯(20ml)和EtOAc(20ml)洗涤。向水层中加入乙酸异丙酯(20ml)和50%NaOH(1ml)。使各相充分混匀后除去水溶液。有机物用10%盐水(20ml)洗涤,经Na2SO4干燥后浓缩至850mg(85%)。
实施例8
3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸苯酯
在10.9℃下,向3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-胺(102.9g,448.9mmol)的EtOAc(1L)溶液中加入NaOH溶液(2.5M,269ml),将两相反应混合物加热至15.9℃后保持稳定。一次性加入氯甲酸苯酯(98.4g,156.5mmol),将温度升至25.5℃后保持稳定。移开冰浴,反应物用HPLC监测。1小时后,另加入25ml2.5M NaOH。将反应混合物搅拌过夜后,用EtOAc(200ml)稀释。有机层用盐水(1L)洗涤,经Na2SO4(200g)干燥后浓缩至约400-500ml EtOAc。将浓缩溶液加热至60℃。固体溶解后,慢慢加入庚烷(2L),期间形成固体。搅拌30分钟后,经过滤收集固体,滤饼用400-500ml庚烷洗涤。将滤饼在环境温度下于真空炉中干燥,得到156.9g(95.0%)标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.31(m,6H),7.26-7.225(m,2H),7.13(br s,2H),6.96(br s,1H),6.47(br s,1H),2.42(s,3H),1.34(s,9H)。
实施例9
1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-1H-吲
唑-5-基氧基)苄基)脲(72)
向2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙醇(71.55g,237mmol)的DMA(350ml)溶液(4.1℃)中加入3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸苯酯(80.5g,230mmol)的DMA(350ml)溶液。将温度升至18.4℃后保持稳定。移开冰冷,将反应物搅拌2小时。加入另一份2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙醇后将反应物搅拌2小时。使反应混合物在乙酸异丙酯(1.6L)与水(2.4L)之间分配。除去水层,有机层依次用0.5N NaOH(2X2.4L)和饱和盐水(1X2.4L)洗涤。有机层经Na2SO4(300g)干燥后浓缩,得到110.8g(86.6%)产物。
以上描述仅被视作本发明原理的示例性描述。此外,由于许多修改和变动对本领域技术人员是极为显而易见的,因此不得将本发明局限于如上所示的精确解释和方法。因此,所有适当的修改和等同内容均可归于落入本文所附权利要求书中所限定的本发明的范围之内。
术语“包含”、“含有”和“包括”当用于本说明书及所附权利要求书中时,是指存在具体记载的特征、整体、组分或步骤,但是并不排除其它未指出的一种或多种其它特征、整体、组分、步骤或组别。
Claims (14)
3.一种药物组合物,其包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
4.权利要求1的化合物在制备用于治疗哺乳动物的激酶介导的疾病的药物中的用途。
5.权利要求4的用途,其中所述激酶介导的疾病是炎性疾病、自身免疫性疾病、破坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病毒性疾病或神经变性性疾病,所述破坏性骨病选自骨质疏松症、骨关节炎和多发性骨髓瘤相关性骨病。
6.一种下式II的化合物或其盐:
其中P1表示氢原子或羟基保护基。
7.一种下式IV的化合物:
其中Re表示氢原子或C1-6烷氧基。
8.权利要求1的化合物的前药在制备用权利要求1的化合物治疗哺乳动物的激酶介导的疾病的药物中的用途,其中所述前药是磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其药学上可接受的盐。
9.权利要求8的用途,其中所述激酶介导的疾病是炎性疾病、自身免疫性疾病、破坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病毒性疾病或神经变性性疾病,所述破坏性骨病选自骨质疏松症、骨关节炎和多发性骨髓瘤相关性骨病。
10.磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其药学上可接受的盐。
11.一种用于制备权利要求10中所限定的化合物的方法,该方法包括使权利要求1中所限定的化合物磷酸化。
12.一种药物组合物,其包含权利要求10的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
13.权利要求2的方法,其中Z为任选被一个或多个选自F、Cl、Br和NO2的基团取代的芳氧基。
14.权利要求2的方法,其中所述式(II)化合物通过以下方法制备:
(i)在催化氢化条件下或在硼化镍存在下,使下式(V)的化合物还原:
其中P2表示氢或羟基保护基。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US76371206P | 2006-01-31 | 2006-01-31 | |
US60/763,712 | 2006-01-31 | ||
PCT/US2007/002272 WO2007089646A1 (en) | 2006-01-31 | 2007-01-26 | Kinase inhibitors and methods of use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101415685A CN101415685A (zh) | 2009-04-22 |
CN101415685B true CN101415685B (zh) | 2011-08-24 |
Family
ID=38037453
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2007800120196A Active CN101415685B (zh) | 2006-01-31 | 2007-01-26 | 激酶抑制剂及其使用方法 |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8044083B2 (zh) |
EP (1) | EP1981851B1 (zh) |
JP (1) | JP5131990B2 (zh) |
KR (1) | KR101357465B1 (zh) |
CN (1) | CN101415685B (zh) |
AT (1) | ATE542800T1 (zh) |
AU (1) | AU2007210073B2 (zh) |
BR (1) | BRPI0707401B8 (zh) |
CA (1) | CA2635813C (zh) |
CY (1) | CY1112770T1 (zh) |
DK (1) | DK1981851T3 (zh) |
ES (1) | ES2379656T3 (zh) |
HK (1) | HK1123548A1 (zh) |
HR (1) | HRP20120256T1 (zh) |
IL (3) | IL192949A (zh) |
MY (1) | MY151835A (zh) |
NZ (1) | NZ570846A (zh) |
PL (1) | PL1981851T3 (zh) |
PT (1) | PT1981851E (zh) |
RS (1) | RS52298B (zh) |
RU (1) | RU2442777C2 (zh) |
SG (1) | SG175599A1 (zh) |
SI (1) | SI1981851T1 (zh) |
TW (1) | TWI388557B (zh) |
UA (1) | UA94733C2 (zh) |
WO (1) | WO2007089646A1 (zh) |
ZA (1) | ZA200806507B (zh) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7135575B2 (en) | 2003-03-03 | 2006-11-14 | Array Biopharma, Inc. | P38 inhibitors and methods of use thereof |
EP1981851B1 (en) | 2006-01-31 | 2012-01-25 | Array Biopharma, Inc. | Kinase inhibitors and methods of use thereof |
US8202899B2 (en) * | 2007-07-25 | 2012-06-19 | Array Biopharma Inc. | Pyrazole urea derivatives used as kinase inhibitors |
EP2196461A1 (de) | 2008-12-15 | 2010-06-16 | Bayer CropScience AG | 4-Amino-1,2,3-benzoxathiazin-Derivate als Pestizide |
NZ618795A (en) | 2011-05-13 | 2015-07-31 | Array Biopharma Inc | Pyrrolidinyl urea, pyrrolidinyl thiourea and pyrrolidinyl guanidine compounds as trka kinase inhibitors |
MY183153A (en) | 2012-03-01 | 2021-02-16 | Array Biopharma Inc | Crystalline forms of 1-(3-tert-butyl-1-p-tolyl-1h-pyrazol-5-yl) -3-(5-fluoro-2-(1-(2-hydroxyethyl)-indazol-5-yloxy)benzyl) urea hydrochloride |
CN105073739B (zh) * | 2013-02-27 | 2017-10-24 | 阵列生物制药公司 | 用于制备吲唑衍生物的中间体及其制备方法 |
US10342786B2 (en) | 2017-10-05 | 2019-07-09 | Fulcrum Therapeutics, Inc. | P38 kinase inhibitors reduce DUX4 and downstream gene expression for the treatment of FSHD |
SG11202003035SA (en) | 2017-10-05 | 2020-04-29 | Fulcrum Therapeutics Inc | Use of p38 inhibitors to reduce expression of dux4 |
PT3725786T (pt) | 2017-12-13 | 2023-10-17 | Genfleet Therapeutics Shanghai Inc | Forma cristalina e forma salina de inibidor de tgf-bri e método de preparação das mesmas |
WO2023084459A1 (en) | 2021-11-15 | 2023-05-19 | Pfizer Inc. | Methods of treating sars-cov-2 |
Family Cites Families (78)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3755332A (en) * | 1971-07-01 | 1973-08-28 | Ciba Geigy Corp | Substituted 4 indazolaminoquinolines |
JPS5998060A (ja) | 1982-11-27 | 1984-06-06 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | インダゾ−ル誘導体、その製造法および農薬 |
US4571255A (en) * | 1983-12-29 | 1986-02-18 | Ppg Industries, Inc. | Subsituted phenoxybenzisoxazole herbicides |
US5234942A (en) * | 1984-10-19 | 1993-08-10 | Ici Americas Inc. | Heterocyclic amides and leucotriene antagonistic use thereof |
SU1545940A3 (ru) | 1984-10-19 | 1990-02-23 | Ай-Си-Ай Америказ Инк (Фирма) | Способ получени гетероциклических кислот или их солей |
GB8524157D0 (en) * | 1984-10-19 | 1985-11-06 | Ici America Inc | Heterocyclic amides |
PL265549A1 (en) | 1985-03-26 | 1988-09-01 | The method of manufacture of new heterocyclic amides | |
JPS6368568A (ja) | 1986-09-10 | 1988-03-28 | Otsuka Pharmaceut Factory Inc | p−アミノフエノ−ル誘導体 |
NZ224714A (en) | 1987-06-01 | 1990-03-27 | Janssen Pharmaceutica Nv | Substituted benzotriazole derivatives and pharmaceutical compositions |
IE910278A1 (en) | 1990-02-16 | 1991-08-28 | Ici Plc | Heterocyclic compounds |
EP0586608A1 (en) * | 1991-05-29 | 1994-03-16 | Pfizer Inc. | Tricyclic polyhydroxylic tyrosine kinase inhibitors |
CA2116863A1 (en) * | 1992-07-03 | 1994-01-20 | Sumio Yokota | Condensed heterocyclic derivatives and herbicides |
EP0684235A1 (en) | 1994-05-27 | 1995-11-29 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel azolyl methyl phenyl derivatives having aromatase inhibitory activity |
EP0854870B1 (en) | 1995-10-06 | 2009-06-10 | Merck & Co., Inc. | Substituted imidazoles having anti-cancer and cytokine inhibitory activity |
US6083949A (en) * | 1995-10-06 | 2000-07-04 | Merck & Co., Inc. | Substituted imidazoles having anti-cancer and cytokine inhibitory activity |
JP3554337B2 (ja) | 1996-09-04 | 2004-08-18 | ファイザー・インク | インダゾール誘導体、およびホスホジエステラーゼ(pde)タイプ4と腫瘍壊死因子(tnf)産生の阻害剤としてのインダゾール誘導体の使用 |
KR100567649B1 (ko) | 1996-09-25 | 2006-04-05 | 아스트라제네카 유케이 리미티드 | 혈관 내피 성장 인자와 같은 성장 인자의 효과를 억제하는 퀴놀린 유도체 |
US6218386B1 (en) * | 1996-11-08 | 2001-04-17 | Dupont Pharmaceuticals | A1-(3-aminoindazol-5-yl)-3 butyl-cyclic urea useful as a HIV protease inhibitor |
US5932570A (en) * | 1996-11-08 | 1999-08-03 | Dupont Pharmaceuticals Company | 1-(3-aminoindazol-5-yl)-3-phenylmethyl-cyclic ureas useful as HIV protease inhibitors |
CA2270966A1 (en) | 1996-11-08 | 1998-05-14 | Du Pont Pharmaceuticals Company | 1-(3-aminoindazol-5-yl)-3-phenylmethyl-cyclic ureas useful as hiv protease inhibitors |
US5945418A (en) * | 1996-12-18 | 1999-08-31 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of p38 |
UA73073C2 (uk) | 1997-04-03 | 2005-06-15 | Уайт Холдінгз Корпорейшн | Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція |
PL191111B1 (pl) * | 1997-04-24 | 2006-03-31 | Ortho Mcneil Pharm Inc | Podstawione imidazole, sposób ich wytwarzania, kompozycje zawierające podstawione imidazole oraz ich zastosowanie |
WO1998052941A1 (en) * | 1997-05-22 | 1998-11-26 | G.D. Searle And Co. | PYRAZOLE DERIVATIVES AS p38 KINASE INHIBITORS |
US6093742A (en) * | 1997-06-27 | 2000-07-25 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of p38 |
US6297239B1 (en) | 1997-10-08 | 2001-10-02 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of prenyl-protein transferase |
TR200001079T2 (tr) * | 1997-10-20 | 2000-07-21 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Bisiklik kinaz inhibitörleri. |
EP1028953A1 (en) * | 1997-11-03 | 2000-08-23 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. | Aromatic heterocyclic compounds as anti-inflammatory agents |
ID24942A (id) | 1997-11-04 | 2000-08-31 | Pfizer Prod Inc | Senyawa terapi aktif yang berdasarkan penggantian bioisoster katekol dengan indazole pada inhibitor pde4 |
ID23921A (id) | 1997-11-04 | 2000-05-25 | Pfizer Prod Inc | Penggantian indazola bioisostere katekol pada senyawa-senyawa aktif untuk terapi |
US6329412B1 (en) * | 1997-11-04 | 2001-12-11 | Pfizer Inc | Bisamidine compounds as antiproliferative agents |
US6589954B1 (en) * | 1998-05-22 | 2003-07-08 | Scios, Inc. | Compounds and methods to treat cardiac failure and other disorders |
GB9820767D0 (en) | 1998-09-23 | 1998-11-18 | Cerebrus Ltd | Chemical compounds VIII |
UA73492C2 (en) | 1999-01-19 | 2005-08-15 | Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents | |
WO2000050425A1 (en) * | 1999-02-22 | 2000-08-31 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclo heterocyclic derivatives as antiinflammatory agents |
SI1165516T1 (en) * | 1999-03-12 | 2005-02-28 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. | Heterocyclic urea and related compounds useful as anti-inflammatory agents |
JP2002539206A (ja) * | 1999-03-12 | 2002-11-19 | ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 抗炎症剤としての芳香族複素環化合物 |
CA2366012A1 (en) * | 1999-03-29 | 2000-10-05 | Shire Biochem Inc. | Methods of treating leukemia |
AU4063600A (en) * | 1999-04-05 | 2000-10-23 | Merck & Co., Inc. | A method of treating cancer |
ATE264328T1 (de) | 1999-04-21 | 2004-04-15 | Wyeth Corp | Substituierte 3-cyano-(1.7), (1.5) und (1.8)naphthyridininhibitoren von tyrosin kinasen |
US6355636B1 (en) * | 1999-04-21 | 2002-03-12 | American Cyanamid Company | Substituted 3-cyano-[1.7],[1.5], and [1.8] naphthyridine inhibitors of tyrosine kinases |
CZ20014126A3 (cs) | 1999-05-21 | 2002-03-13 | Scios Inc. | Indolové deriváty jako inhibitory p38 kinasy |
PE20010306A1 (es) | 1999-07-02 | 2001-03-29 | Agouron Pharma | Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa |
TWI262914B (en) * | 1999-07-02 | 2006-10-01 | Agouron Pharma | Compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases |
ES2253233T3 (es) * | 1999-07-09 | 2006-06-01 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. | Procedimiento para sintesis de compuestos de urea heteroaril sustituidos. |
JP2003523952A (ja) * | 1999-11-27 | 2003-08-12 | ドン ファ ファーマシューティカル インダストリアル カンパニー リミテッド | 新規な3−ニトロピリジン誘導体及び該誘導体を含む製薬組成物 |
WO2001038306A1 (en) | 1999-11-27 | 2001-05-31 | Dong Wha Pharm. Ind. Co., Ltd | Novel 3-nitropyridine derivatives and the pharmaceutical compositions containing said derivatives |
AU4890301A (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-30 | Dong Wha Pharmaceutical Industrial Co., Ltd. | 6-methylnicotinamide derivatives as antiviral agents |
EP1341782A2 (en) * | 2000-11-20 | 2003-09-10 | Scios Inc. | Inhibitors of p38 kinase |
US7105682B2 (en) | 2001-01-12 | 2006-09-12 | Amgen Inc. | Substituted amine derivatives and methods of use |
US7102009B2 (en) * | 2001-01-12 | 2006-09-05 | Amgen Inc. | Substituted amine derivatives and methods of use |
TW593278B (en) * | 2001-01-23 | 2004-06-21 | Wyeth Corp | 1-aryl-or 1-alkylsulfonylbenzazole derivatives as 5-hydroxytryptamine-6 ligands |
JP4130774B2 (ja) | 2001-03-09 | 2008-08-06 | ファイザー・プロダクツ・インク | 抗炎症薬としてのトリアゾロピリジン類 |
US7199147B2 (en) * | 2001-06-12 | 2007-04-03 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Rho kinase inhibitors |
CZ2004359A3 (cs) | 2001-09-26 | 2004-09-15 | Pharmacia Italia S.P.A. | Aminoindazolové deriváty aktivní jako inhibitory kinázy, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky obsahující tyto deriváty |
WO2003032989A1 (en) | 2001-10-18 | 2003-04-24 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | 1,4-disubstituted benzo-fused urea compounds as cytokine inhibitors |
WO2003051847A1 (en) | 2001-12-19 | 2003-06-26 | Smithkline Beecham P.L.C. | (1-h-indazol-3-yl) -amide derivatives as gsk-3 inhibitors |
DE60319066T2 (de) * | 2002-02-25 | 2009-02-26 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield | 1,4-disubstituierte benzokondensierte cycloalkyl-harnstoffverbindungen zur behandlung von zytokinvermittelten erkrankungen |
FR2836915B1 (fr) | 2002-03-11 | 2008-01-11 | Aventis Pharma Sa | Derives d'aminoindazoles, procede de preparation et intermediaires de ce procede a titre de medicaments et compositions pharmaceutiques les renfermant |
FR2836914B1 (fr) * | 2002-03-11 | 2008-03-14 | Aventis Pharma Sa | Indazoles substitues, compositions les contenant, procede de fabrication et utilisation |
WO2003087072A1 (fr) | 2002-03-29 | 2003-10-23 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Agent therapeutique destine a des troubles endotheliaux |
CA2492911A1 (en) * | 2002-07-19 | 2004-01-29 | Memory Pharmaceuticals Corporation | 6-amino-1h-indazole and 4-aminobenzofuran compounds as phosphodiesterase 4 inhibitors |
AU2003278249B8 (en) | 2002-09-05 | 2010-11-18 | Aventis Pharma S.A. | Novel aminoindazole derivatives as medicines and pharmaceutical compositions containing same |
RU2005115842A (ru) | 2002-10-24 | 2006-03-10 | Мерк Патент ГмбХ (DE) | Производные метиленмочевины |
US7737153B2 (en) * | 2002-10-28 | 2010-06-15 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Heteroaryloxy-substituted phenylaminopyrimidines as rho-kinase inhibitors |
US7196082B2 (en) * | 2002-11-08 | 2007-03-27 | Merck & Co. Inc. | Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension |
WO2004052280A2 (en) | 2002-12-10 | 2004-06-24 | Imclone Systems Incorporated | Anti-angiogenic compounds and their use in cancer treatment |
US7135575B2 (en) * | 2003-03-03 | 2006-11-14 | Array Biopharma, Inc. | P38 inhibitors and methods of use thereof |
US7521447B2 (en) * | 2003-03-03 | 2009-04-21 | Array Biopharma Inc. | P38 inhibitors and methods of use thereof |
GB0320244D0 (en) | 2003-05-06 | 2003-10-01 | Aventis Pharma Inc | Pyrazoles as inhibitors of tumour necrosis factor |
US7129252B2 (en) * | 2003-06-16 | 2006-10-31 | Guoqing P Chen | Six membered amino-amide derivatives an angiogenisis inhibitors |
SE0301906D0 (sv) | 2003-06-26 | 2003-06-26 | Astrazeneca Ab | New compounds |
WO2005004818A2 (en) | 2003-07-09 | 2005-01-20 | Imclone Systems Incorporated | Heterocyclic compounds and their use as anticancer agents |
MXPA06002853A (es) | 2003-09-11 | 2006-06-14 | Kemia Inc | Inhibidores citoquina. |
CA2547837A1 (en) | 2003-12-18 | 2005-07-14 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Polymorph of birb 796, a p38map kinase inhibitor |
EP1699783B1 (en) | 2003-12-22 | 2012-07-25 | Eli Lilly And Company | Opioid receptor antagonists |
WO2006122230A1 (en) * | 2005-05-11 | 2006-11-16 | Array Biopharma Inc. | P38 inhibitors and methods of use thereof |
EP1981851B1 (en) | 2006-01-31 | 2012-01-25 | Array Biopharma, Inc. | Kinase inhibitors and methods of use thereof |
-
2007
- 2007-01-26 EP EP07762713A patent/EP1981851B1/en active Active
- 2007-01-26 JP JP2008553277A patent/JP5131990B2/ja active Active
- 2007-01-26 RS RS20120119A patent/RS52298B/en unknown
- 2007-01-26 BR BRPI0707401A patent/BRPI0707401B8/pt active IP Right Grant
- 2007-01-26 RU RU2008135332/04A patent/RU2442777C2/ru active
- 2007-01-26 UA UAA200810690A patent/UA94733C2/ru unknown
- 2007-01-26 AU AU2007210073A patent/AU2007210073B2/en active Active
- 2007-01-26 PL PL07762713T patent/PL1981851T3/pl unknown
- 2007-01-26 NZ NZ570846A patent/NZ570846A/en unknown
- 2007-01-26 CA CA2635813A patent/CA2635813C/en active Active
- 2007-01-26 SI SI200730895T patent/SI1981851T1/sl unknown
- 2007-01-26 MY MYPI20082836 patent/MY151835A/en unknown
- 2007-01-26 US US12/161,412 patent/US8044083B2/en active Active
- 2007-01-26 DK DK07762713.1T patent/DK1981851T3/da active
- 2007-01-26 AT AT07762713T patent/ATE542800T1/de active
- 2007-01-26 WO PCT/US2007/002272 patent/WO2007089646A1/en active Application Filing
- 2007-01-26 CN CN2007800120196A patent/CN101415685B/zh active Active
- 2007-01-26 ES ES07762713T patent/ES2379656T3/es active Active
- 2007-01-26 PT PT07762713T patent/PT1981851E/pt unknown
- 2007-01-26 SG SG2011073152A patent/SG175599A1/en unknown
- 2007-01-26 KR KR1020087021184A patent/KR101357465B1/ko active IP Right Grant
- 2007-01-30 TW TW096103341A patent/TWI388557B/zh active
-
2008
- 2008-07-22 IL IL192949A patent/IL192949A/en active IP Right Grant
- 2008-07-25 ZA ZA200806507A patent/ZA200806507B/xx unknown
-
2009
- 2009-01-23 HK HK09100807.4A patent/HK1123548A1/xx unknown
-
2011
- 2011-02-03 US US13/020,578 patent/US8039639B2/en active Active
-
2012
- 2012-03-19 CY CY20121100291T patent/CY1112770T1/el unknown
- 2012-03-21 HR HR20120256T patent/HRP20120256T1/hr unknown
- 2012-05-08 IL IL219643A patent/IL219643A/en active IP Right Grant
- 2012-05-08 IL IL219644A patent/IL219644A/en active IP Right Grant
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101415685B (zh) | 激酶抑制剂及其使用方法 | |
JP7106572B2 (ja) | 免疫調節剤として有用な化合物 | |
ES2637721T3 (es) | Macrociclos como inhibidores de quinasa | |
US10167257B2 (en) | Indole derivatives for use in medicine | |
ES2682043T3 (es) | Ibrutinib deuterado | |
US20180037553A1 (en) | Inhibitors of tryptophan-2,3-dioxygenase or indoleamine-2,3-dioxygenase | |
EP3191484B1 (en) | Pyrazolopyridine derivatives and their use in therapy | |
WO2021068898A1 (zh) | 新颖的kras g12c蛋白抑制剂及其制备方法和用途 | |
CN109311854A (zh) | 具有仲酰胺官能团的苯并氮杂卓二甲酰胺化合物 | |
TW201102369A (en) | Quinazoline derivatives | |
CA2965741A1 (en) | Pharmaceutical compound | |
CN101083996A (zh) | 作为hedgehog途径调节剂的化合物和组合物 | |
CN104271577A (zh) | 作为mek抑制剂的杂环基化合物 | |
BR122014012788A2 (pt) | derivados de pirimidina fundidos, seus usos, e composição farmacêutica para inibição da atividade de tirosina quinase | |
CA2773561A1 (en) | Pharmaceutical compositions and formulations including inhibitors of the pleckstrin homology domain and methods for using same | |
CN110831926B (zh) | 新型四氢萘基脲衍生物 | |
CN102803225A (zh) | 咪唑衍生物和它们作为细胞周期蛋白依赖性激酶调节剂的应用 | |
CN102643268A (zh) | 喹啉类及噌啉类化合物及其应用 | |
JP2022507879A (ja) | 化合物 | |
GB2508652A (en) | Heterocyclic piperazine derivatives | |
AU2012322660A1 (en) | Pyrazol-3-ones that activate pro-apoptotic BAX | |
JP7455133B2 (ja) | インドールアミン-2,3-ジオキシゲナーゼ阻害活性を有するキノロン誘導体 | |
WO2019195682A1 (en) | Aryl hydrocarbon receptor modulators and uses thereof | |
US20060264431A1 (en) | P38 inhibitors and methods of use thereof | |
CA2943001A1 (en) | Inhibitors of the wnt signalling pathways |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |