TWI388557B

TWI388557B - 激酶抑制劑及其使用方法

Info

Publication number: TWI388557B
Application number: TW096103341A
Authority: TW
Inventors: Robert Groneberg; Laurence E Burgess; Darren Harvey; Ellen Laird; Mark Munson; James Rizzi; Martha Rodriguez; Charles Todd Eary; Daniel Watson
Original assignee: Array Biopharma Inc
Priority date: 2006-01-31
Filing date: 2007-01-30
Publication date: 2013-03-11
Also published as: KR20090003194A; MY151835A; ZA200806507B; RU2442777C2; ES2379656T3; NZ570846A; IL219644A; JP5131990B2; US8044083B2; CA2635813C; RS52298B; SG175599A1; US20110124878A1; EP1981851B1; CN101415685B; TW200808774A; US8039639B2; WO2007089646A1; BRPI0707401A2; UA94733C2

Description

激酶抑制劑及其使用方法

本申請案主張在2006年1月31日提出申請之美國臨時專利申請案第60/763,712號之利益，將其完整內容以引用方式納入本文中。

本發明關於激酶抑制劑，含有抑制劑之醫藥組成物及製備這些抑制劑的方法。本發明的激酶抑制劑有用於治療發炎、骨關節炎、類風濕性關節炎、癌症、自體免疫性疾定及其它的激酶介導性疾病。

許多慢性及急性發炎症狀與前炎性細胞激素的過度產生有關聯。該等細胞激素包括(但不限於此)腫瘤壞死因子α(TNF－α)、介白素1 β(IL－1 β)、介白素8(IL－8)及介白素6(IL－6)。類風濕性關節炎(RA)為其中TNF－α及IL－1 β與疾病肇始及由該衰弱症狀發現的骨與關節毀壞進度有牽連的慢性疾病。最近證實用於RA之治療包括可溶性TNF－α受體(ENBREL^TM )及IL－1受體拮抗劑(ANAKINRA^TM )。這些治療係藉由阻斷彼之各個細胞激素與彼之天然受體結合的能力起作用。治療細胞激素介導性疾病的替換方法目前在研究中。一種該等方法包含抑制用於調節前炎性細胞激素，如p38的合成與產生的傳訊路徑。

已證明p38(也稱為CSBP或RK)為調節前炎性細胞激素的絲胺酸/蘇胺酸絲裂原活化性蛋白激酶(MAPK)。p38 MAPK先被鑑證為在小鼠單細胞中以脂多醣體(LPS)處理之後成為磷酸化之酪胺酸的激酶。在p38 MAPK與細胞對細胞激素的反應之間的連結首先由Saklatvala等人確立(Cell,1994,78：1039－1049)，其證明IL－1活化蛋白激酶級聯，該級聯有可能藉由以絲裂原活化性蛋白活化之蛋白激酶2(MAPKAP激酶－2)引起小的熱休克蛋白，Hsp27磷酸化。自純化之激酶所衍生之肽序列的分析顯示其與在小鼠單細胞中以LPS活化之p38 MAPK有關係(Han J.等人之Science,1994,265：808－811)。同時證明p38 MAPK本身係藉由反應不同的細胞壓力(包括曝露於UV照射及滲壓休克)的上游激酶而活化，以及直接磷酸化Hsp27之激酶本體被確認為MAPKAP激酶－2(Rouse,J.等人之Cell,1994,78：1027－1037)。接著證明p38 MAPK為抑制從LPS－挑戰之人類單細胞產生TNP的吡啶基咪唑化合物系統的分子標的(Lee,J.等人之Nature,372：739－746)。這是關鍵性的發現，並引導發展許多p38 MAPK的選擇性抑制劑及其在細胞激素傳訊中的角色說明。

現在已知分別以單獨基因編碼的多種p38 MAPK型式(α、β、γ、δ)構成涉入細胞對各種刺激(包括滲壓、UV光及細胞激素介導性事件)的反應之激酶級聯的一部分。這四種同型的p38被認為調節不同的細胞內傳訊觀點。p38的活化為引導前炎性細胞激素，如TNF－α合成及產生的傳訊事件級聯的一部分。p38係以磷酸化下游基質起作用，該基質包括其它的激酶及轉錄因子。已證明抑制p38 MAPK之劑會阻斷在試管內及活體內模式中之細胞激素的產生，該激素包括(但不限於此)TNF－α、IL－6、IL－8及IL－1 β(Adams,J.L.等人之Progress in Medicinal Chemistry,2001,38：1－60)。

Abl(也稱為Ableson)為表現在造血細胞中且與各種液體腫瘤，包含慢性骨髓白血病(CML)及急性淋巴胚細胞白血病(ALL)的進展有牽連的酪胺酸激酶。轉型為染色體易位的結果，已知為費城染色體。這引導在Ableson與斷裂點叢集區(BCR)之間的構成性活化嵌合－－Abl－BCR蛋白。也稱為伊馬替尼(Imatinib)(諾華藥廠(Novartis))之GLEEVEC為Abl之有效抑制劑，並於目前用於治療CML病患(N.Engl.J.Med.,2001,344：1031－1037)。該藥物成為該致命疾病護理的標準，並也正著眼於各種其它癌症設定，包括胃腸道間質瘤(GIST)。

有證據顯示纖維母細胞係藉由刺激Abl路徑而反應於生長因子蛋白TGF－β及引導表示有纖維化的形態變化；因此，Abl可在纖維化疾病的致病性中扮演一角色，諸如特發性肺纖維化。Leof等人(J.Clin.Invest.,2004,114(9)1308－1316)證明GLEEVEC在博來霉素(bleomycin)介導性肺纖維化模式之小鼠中的臨床前效力。GLEEVEC正在患有肺纖維化的病患中評估。

TEK(也稱為Tie－2)為只表現在內皮細胞上的另一受體酪胺酸激酶，已證明其在血管生成中扮演一角色。血管生成素－1因子的結合引起TEK的激酶功能域自磷酸化且引起訊號轉導過程，其顯露出介導內皮細胞與周圍內皮支持細胞的交互作用，藉此促進新形成的血管成熟。另一方面，血管生成素－2因子顯露出拮抗血管生成素－1在TEK上的作用及破壞血管生成(Maisonpierre等人之Science,1997,277：55－60)。Tie2向上調節腫瘤血管生成(Trogan,E.Br.J.Cancer,1998,77：51－56)且有證據顯示其可在造血組織癌中扮演一支持角色(L.Naldini等人之Cancer Cell,2005,8：211－226；Suda,T.等人之Cell,2004,118：14－161)。除了在癌症中可能的角色，血管生成也牽連諸如類風濕性關節炎(RA)、牛皮癬及以發炎驅動之病理學進展的疾病。成為關節炎進展原因的破壞性部隊的血管翳形成一部分係由新血管形成而驅動，並由Lin,C.等人的最新論文(Arthritis and Rheumatism,2005,52(5)：1585－1594)證明Tie2在RA的小鼠膠原誘導性關節炎模式中的病理學角色。因此，Tie2之抑制可提供對抗增殖性及發炎性疾病之有利功效。

數種其它的激酶與增殖性疾病的進展有牽連，如癌症。在這些之中，已證明很多Src家族成員蛋白質扮演類似於Src的角色且可在未受控制之細胞增殖期間提供並行的傳訊路徑。主要的實例包括酪胺酸激酶Lyn、Fyn、Lck及Hck。Lyn及Hck已與B－細胞急性淋巴胚細胞白血病(B－ALL)、B細胞的造血組織癌的進展有牽連(Li,S.等人之Nat Genet.,2004 36(5)：453－461)。

酪胺酸激酶受體的Eph(以促紅血球生成素產生之肝癌增幅序列)家族結合ephrin，其引導許多細胞程序。Eph顯露出扮演一調理腫瘤細胞附著及運動與侵入的角色，並有一些證據證明Eph及ephrin在病理學程序期間在新生血管化中的活性角色。Eph A受體過度表現在肺、腎及胃腫瘤血管分佈中，並已證明負顯性的可溶性EphA2或A3蛋白質會在活體內調節腫瘤血管生成及進展(Lackmann M.等人之IUMBM Life,2005,57(6)：421－31)。

血管內皮生長因子及彼之同源受體，例如KDR(VEGFR2)及FLT1(VEGFRR1)為血管生成的關鍵性調節劑。蛋白質治療藥物AVASTIN已在結腸癌中顯示出希望且經由VEGFR路徑起作用。SUTENT/SU11248(舒尼替尼(sunitinib)馬來酸鹽)(輝瑞藥廠)為有效的KDR抑制劑且顯示出對抗GIST及腎細胞癌有希望的結果。

當在試管內以脂多醣體(LPS)刺激時，已證明末梢血液單細胞(PMBC)會表現及分泌前炎性細胞激素。當PBMC在以LPS刺激之前以該等化合物預處理時，則p38抑制劑有效地阻斷該效果(Lee,J.C.等人之Int.J.Immunopharmacol.,1988,10：835－843)。p38抑制劑在發炎性疾病的動物模式中的效力促使可說明這些抑制劑效果的內在機制的研究。已在許多關於發炎反應的細胞系統中使用吡啶基咪唑抑制劑研究p38在細胞對IL－1及TNF之反應中的角色，該等細胞為：內皮細胞及IL－8(Hashimoto,S.等人之J.Pharmacol.Exp.Ther.,2001,293：370－375)、纖維母細胞及IL－6/GM－CSF/PGE2(Beyaert,R.等人之EMBO J.,1996,15：1914－1923)、嗜中性球及IL－8(Albanyan,E.A.等人之Infect.Immun.,2000,68：2053－2060)、巨噬細胞及IL－1(Caivano,M.和Cohen,P.,J.Immunol.,2000,164：3018－3025)與平滑肌細胞及RANTES(Maruoka,S.等人之Am.J.Respir.Crit.Care Med.,1999,161：659－668)。許多疾病狀態的毀壞效果係由炎前性細胞激素的過度表現而引起。p38抑制劑調節該過度產生的能力使彼等成為極佳的疾病修改劑候選者。

已知的p38 MAPK抑制劑在各種廣泛認知的疾病模式中具有活性。p38 MAPK抑制劑在許多標準的發炎動物模式中顯示出正效果，包括大鼠膠原誘導性關節炎(Jackson,J.R.等人之J.Pharmacol.Exp.Ther.,1998,284：687－692)；大鼠佐劑誘導性關節炎(Badger,A.M.等人之Arthritis Rheum.,2000,43：175－183；Badger,A.M.等人之J.Pharmacol.Exp.Ther.,(1996)279：1453－1461)；及在小鼠中的角叉菜膠誘導性足掌水腫(Nishikori,T.等人之Eur.J.Pharm.,2002,451：327－333)。已證明阻斷p38功能的分子抑制在這些動物模式中的骨再吸收、發炎及其它免疫與發炎為基準之病理學中是有效的。

因此，安全且有效的激酶抑制劑會提供一種治療可以調節一或多種激酶而調整的衰弱疾病之方式。

國際專利申請案第WO 2004/078116號揭示作為激酶抑制劑的某些化合物。其中，這些化合物為在含有吡唑－5－基尿素基團的5－位置上具有取代基的某些經N1－取代之吲唑衍生物。這些化合物的實例包括實施例94及138的化合物，其中N1取代基分別為甲基及2－羥基－2－甲基丙基。

目前頃發現具有特殊希望的特性之化合物可藉由選擇一級醇基團－CH₂ CH₂ OH作為N1取代基及在含有3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基之5－位置上的特殊取代基而獲得。

發明摘述

本發明係提供抑制一或多種激酶及激酶介導性事件，如抑制細胞激素產生、血管生成或細胞增殖之化合物。該等化合物具有作為可藉由抑制激酶傳訊路徑而治療疾病的治療劑之用途。

發明詳述

在一個觀點中，本發明係提供具有式I之化合物：或其醫藥上可接受之鹽。

該化合物也可以化學名稱1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素敘述。

頃發現式I化合物具有對抗某些激酶的改進效力。此外，觀察到其中N1取代基被式－CH₂ CH₂ OPO₃ H之磷酸酯基團置換的對應之化合物的溶解度比式I化合物大數倍。因此，式I化合物具有一產生可溶性前藥的獨持位置。更特別地，由下列的試驗數據所證明，頃發現式I化合物比WO 2004/078116之實施例94及138的化合物為更具顯著效力的Abl及Tie2抑制劑。而且，WO 2004/078116之實施例94及138的化合物不具有可衍生而供應前藥的一級醇基團。

除了式I化合物之外，本發明也包括化合物的醫藥上可接受之鹽類，以及化合物的溶劑化物與其醫藥上可接受之鹽類。

〝醫藥上可接受之〞用語表示物質或化合物可與其它成分，包含調配物及/或欲以其治療之哺乳動物以化學及/或毒物學相容。

〝溶劑化物〞係指一或多種溶劑分子與本發明化合物的結合物或複合物。形成溶劑化物的溶劑之實例包括(但不限於此)水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、醋酸乙酯、醋酸及乙醇胺。〝水合物〞術語係指其中溶劑分子為水的複合物。

根據另一個觀點，本發明係提供式I化合物在製造用於治療在哺乳動物中的激酶介導性症狀之藥劑中的用途。

在另一個觀點，本發明係提供一種治療或預防激酶介導性症狀的方法，其包含以有效治療或預防該激酶介導性症狀之量的式I化合物投予。

在本文也提供式I化合物之前藥。

〝前藥〞為可在生理條件下或藉由溶劑分解而轉化成指定的化合物或該化合物之鹽的化合物。

可將本發明化合物的自由羥基衍化成前藥，其係藉由將羥基轉化成如(但不限於此)磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲胺基醋酸酯或磷醯氧基甲氧基羰基之基團，如在Advanced Drug Delivery Reviews,1996,19,115中所概述。也包括羥基之胺基甲酸酯前藥，如羥基之碳酸酯前藥、磺酸酯及硫酸酯。也涵蓋羥基，如(醯氧基)甲基及(醯氧基)甲醚之衍化作用，其中醯基可為視需要被含有(但不限於此)醚、胺基羧酸官能度之基團取代之烷基酯，或其中醯基為如上述之胺基酸酯。該類型的前藥敘述在J.Med.Chem.,1996,39,10中。更特殊的實例包括以如(C₁ －C₆ )烷醯氧基甲基、1－((C₁ －C₆ )烷醯氧基)乙基、1－甲基－1－((C₁ －C₆ )烷醯氧基)乙基、(C₁ －C₆ )烷氧基羰氧基甲基、N－(C₁ －C₆ )烷氧基羰胺基甲基、琥珀醯基、(C₁ －C₆ )烷醯基、α－胺基(C₁ －C₄ )烷醯基、芳醯基及α－胺醯基或α－胺醯基－α－胺醯基之基團置換醇基團之氫原子，其中每一α－胺醯基係獨立選自天然生成之L－胺基酸、P(O)(OH)₂ 、－P(O)(O(C₁ －C₆ )烷基)₂ 或糖基(移除碳水化合物的半縮醛型式之羥基所得之基)。

因此，根據另一個觀點，本發明係提供式I化合物之前藥在製造用於在哺乳動物中以根據申請專利範圍第1項之化合物治療之激酶介導性症狀的藥劑中的用途。在一個具體實例中，前藥為磷酸酯前藥。

在另一觀點中，本發明係提供一種以式I化合物治療或預防在哺乳動物中的激酶介導性症狀的方法，其包含以有效治療或預防該激酶介導性症狀之量的式I化合物之前藥投予哺乳動物。在一個具體實例中，前藥為磷酸酯前藥。

根據另一觀點，因此，本發明係提供磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)－甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯或其醫藥上可接受之鹽。

無意受到理論限制，咸信磷酸酯化合物具有作為對應之一級醇的前藥之功能。

如本文所述，頃發現式I化合物之磷酸酯具有特別好的溶解力。

〝醫藥上可接受之鹽〞包括保留指定的化合物對應之自由酸與鹼的生物有效性且不是生物學或其它方面不希望的鹽類，除非有其它另外的指示。本發明化合物可具有足夠的酸性基團、足夠的鹼性基團或兩種官能基團，並因此與許多無機或有機鹼或酸中任一反應，以形成醫藥上可接受之鹽。醫藥上可接受之鹽類的實例包括藉由本發明化合物與無機或有機酸或無機鹼反應所製備的那些鹽類，該鹽類包括(但不限於此)硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸單氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔－1,4－二酸鹽、己炔－1,6－二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基醋酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ－羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、丙烷磺酸鹽、萘－1－磺酸鹽、萘－2－磺酸鹽及苯乙醇酸鹽。因為本發明的單一化合物可包括一種以上的酸性或鹼性部分，所以本發明化合物可包括在單一化合物中的單－、二－或三－鹽類。

如果本發明化合物為鹼，則所欲之醫藥上可接受之鹽可藉由所屬技術領域中可用的任何適合的方法製備，例如以酸性化合物處理自由鹼，例如以無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似物，或以有機酸，如醋酸、馬來酸、琥珀酸、苯乙醇酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖酸(如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α－羥酸(如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(如天冬胺酸或麩胺酸)、芳香酸(如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(如對－甲苯磺酸或乙烷磺酸)或類似物。

如果本發明化合物為酸，則所欲之醫藥上可接受之鹽可藉由任何適合的方法製備，例如以無機或有機鹼處理自由酸。適合的無機鹽類之實例包括由鹼及鹼土金屬所形的那些鹽類，如鋰、鈉、鉀、鋇及鈣。適合的有機鹼鹽類的實例包括例如銨、二苯甲銨、苯甲銨、2－羥乙銨、雙(2－羥乙基)銨、苯乙基苯甲胺、二苯甲基乙二胺及類似鹽類。酸性部分的其它鹽類可包括例如由普魯卡因(procaine)、奎寧及N－甲基葡萄糖胺所形成的那些鹽類，加上由鹼性胺基酸，如甘胺酸、鳥胺酸、組胺酸、苯基甘胺酸、賴胺酸及精胺酸所形成的鹽類。

式I化合物也包括該等化合物的其它鹽類，其不必為醫藥上可接受之鹽類，且可用作製備及/或純化式I化合物及/或分離式I化合物之鏡像異構物的中間物。

本發明也包含以同位素標定之本發明化合物，其與本文所引述的那些化合物相同，但事實上一或多個原子被具有原子量或質量數與通常天然發現的原子量或質量數不同的原子置換。以同位素標定之本發明化合物通常可遵照類似於下述流程及/或本文實施例中所揭示的那些步驟以同位素標定之試劑取代未以同位素標定之試劑而製備。

本發明化合物的合成

本發明化合物可以合成途徑製備，包括類似於那些在化學技術領域中所熟知或如國際專利申請發表案第WO 2004/078116中所述之方法，特別依照本文所包括的敘述。原料通常可自市售來源取得，如Aldrich Chemicals(威斯康辛州之Milwaukee)，或使用那些熟習所屬技術領域者熟知的方法輕易製備(例如通常由紐約Wiley以Louis F.Fieser和Mary Fieser之Reagents for Organic Synthesis,v.1－19(1967－1999編輯)或柏林Springer－Verlag以Aufl.編輯之Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4，包括附錄所述之方法(也可經由Beilstein線上資料庫取得)製備)。

根據另一觀點，本發明係提供一種製備式I化合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含：(a)使式II化合物或其鹽(其中P¹ 代表氫原子或羥基保護基)與式III化合物 (其中Z代表脫離基或對應之異氰酸酯)偶合；或(b)使式IV化合物還原 (其中R^e 代表氫原子或醇之殘基)；接著移除任何保護基，若有需要時，形成醫藥上可接受之鹽。

以P¹ 代表的適宜之羥基保護基的實例包括環族半縮醛，如四氫－2H－吡喃－2－基。

以Z代表的脫離基可為例如未經取代或經取代之烴氧基，例如鹵基(1－6C)烷氧基，如2,2,2－三氯乙氧基、烯氧基，如CH₂ ＝C(CH₃ )O－、或視需要例如被一或多種選自F、Cl、Br及NO₂ 之基團取代之芳氧基。視需要經取代之芳氧基的特殊意義包括苯氧基、4－氯苯氧基、4－溴苯氧基、4－氟苯氧基、4－硝苯氧基及2－硝苯氧基。在特殊的具體實例中，Z為苯氧基。

當化合物III之Z為視需要經取代之芳氧基時，如苯氧基，則發現可有利地分離出高產量及高純度的化合物IV，而不以色層分離法步驟。

當Z為視需要經取代之芳氧基時，則式(II)化合物與式(III)化合物的偶合可適宜在介於0至100℃之溫度下，而更特別地在周圍溫度下執行。適宜的溶劑包括非質子溶劑，如醚類(例如四氫呋喃或對－二烷)、DMF、DMSO或乙腈。偶合反應適宜在鹼的存在下執行，如三級胺(例如三乙胺或DMA)。

當R^e 代表醇之殘基時，則其特殊意義包括(1－6C)烷氧基，如乙氧基。

咸信式(II)及(IV)化合物為新穎的，並被提供成為本發明的另一觀點。

當Z代表視需要經取代之芳氧基時，則也咸信式(III)化合物為新穎的，並提供成為本發明的另一觀點。

在另一觀點中，本發明係提供一種製備式I化合物之磷酸酯前藥，即磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素或其鹽磷酸化。

根據本發明的磷酸化適宜藉由醇與二烷基次磷酸亞醯胺酸二烷基或二芳基酯，如二異丙基次磷酸亞醯胺酸二－第三丁酯或二異丙基次磷酸亞醯胺酸二苯酯反應，接著藉由水解或催化氫化而移除在磷酸酯產物上的烷基或芳基而執行。

以說明為目的，流程1與2及實施例說明用於製備本發明化合物與關鍵性中間物的方法。那些熟習所屬技術領域者應理解可使用其它的合成途徑合成本發明化合物。雖然特殊的原料及試劑描述在下列的流程及討論中，但是可輕易被其它的原料及試劑取代，以提供各種衍生物及/或反應條件。此外，許多以下述方法所製備的化合物可依照本揭示內容使用那些熟習所屬技術領域者熟知的慣例化學進一步修改。

如圖2所示之化合物77的腈還原需要高濃度的酸，使二聚物的形成減至最低。然而，較高的酸濃度也可引起一些酯化合物78水解成對應之酸。流程3說明一種用於製備式I化合物的改進方法，其減低二聚物及酸雜質的形成。

流程3說明一種在還原腈基團之前先使化合物77的酯基團還原成對應之醇的方法，以提供沒有酸雜質且二聚物雜質形成減至最低的化合物79A。

更特別地，化合物77可以逐步方式還原，其中酯基團係以在適合的溶劑中的硼氫化鈉還原，以提供對應之醇化合物78A。化合物78A之腈基團接著在標準的催化氫化條件下或使用在適合的有機溶劑中的硼化鎳還原，以提供對應之甲胺化合物79A。

就形成式I化合物而言，流程3所示之途徑提供許多超越流程2所示之途徑的優點。使用流程3所示之途徑可以較高的HCl濃度執行腈基團的還原，其有利於降低所形成的二聚物雜質量。此外，流程3所示之途徑避免在最終步驟中使用硼氫化鈉，藉此避免從最終產物移除殘餘硼雜質的額外純化步驟。因此，藉由包括在反應順序初期的硼氫化鈉還原步驟可在中間物順序步驟期間輕易地移除殘餘硼。此外，胺醇化合物79A與化合物69A的偶合可在較低溫下執行，因此改進產物72的純度。因此，流程3所示之途徑能夠改進合成式I化合物的輸出量，並接著提供用於生產式I化合物的有效合成途徑，其更順從或適合於大規模製造。

因此，也提供一種製備式(II)化合物的方法，其包含：(i)使式(V)化合物 (其中P² 代表氫或羥基保護基)在催化氫化條件下或在硼化鎳的存在下還原。

有關步驟(i)，氫化催化劑包括任何適合的鈀觸媒，如Pd(OH)₂ 或負載在碳上的鈀。氫化發生在酸性條件下(如藉由加入酸，例如HCl或醋酸)或氨的加入。催化氫化可在任何適合的溶劑系統中進行，如醇(例如甲醇、乙醇、異丙醇)、酯(例如醋酸乙酯)或醚(例如THF)。混合性溶劑，例如醇與THF也適合於氫化步驟。氫壓力可在介於25至100 psi之範圍內，例如，40 psi。還原典型地在介於20－100℃之溫度下執行。

有關步驟(i)，硼化鎳可從過渡金屬鹽，較佳為Ni(II)鹽及硼氫化鈉當場製備。在較佳的具體實例中，硼化鎳係從氯化鎳(II)及硼氫化鈉而製備。該反應適宜在適合的溶劑中執行，如醇(例如甲醇、乙醇、異丙醇)。該還原典型地在周圍溫度下執行。

式(V)化合物可藉由還原式(VI)化合物而製備其中P³ 與P² 相同，其係使用任何適宜的酯還原條件(例如硼氫化鈉)在適合的溶劑中，如醇(例如甲醇、乙醇、異丙醇)。

在製備本發明的化合物時，中間物的遠端官能基(例如一級或二級胺類、醇類等)的保護可為必要的。該等保護的需求將依據遠端官能基的本性及製備方法的條件而改變。例如，適合的胺基保護基(NH－Pg)包括乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苯甲氧基羰基(CBz)及9－茀甲氧羰基(Fmoc)。適宜的羥基保護基包括四氫－2H－吡喃－2－基、苯甲基、三烷矽基及縮醛。該等保護的需求可由熟習所屬技術領域者輕易決定。關於保護基及彼之用途的概括說明，參見紐約John Wiley & Sons以T.W.Greene之Protective Groups in Organic Synthesis,1991。

治療方法

可使用本發明化合物治療以調節或調整蛋白激酶所介導之疾病。因此，本發明的另一觀點係提供治療或預防本文所述之疾病的方法，其係藉由治療有效量之本發明化合物或其溶劑化物、代謝物或醫藥上可接受之鹽投予哺乳動物，如人類，該量有效治療或預防該病症。在一個具體實例中，該方法包含以有效抑制一或多種激酶之量的本發明化合物投予哺乳動物。

〝有效量〞係指當投予需要該等治療之哺乳動物時足以有效治療以一或多種蛋白激酶活性(如p38 MAPK)介導之疾病及有關聯的激酶介導性事件(如產生細胞激素)的化合物量。因此，例如治療有效量的本發明化合物或其鹽、活性代謝物為足以調節、調整或抑制一或多種蛋白激酶活性的量，使得以該活性介導之疾病症狀減輕或緩和。

〝治療(treating)〞意欲代表至少減緩在受到一或多種蛋白激酶活性至少部份影響的哺乳動物，如人類中的疾病症狀。〝治療(treat)〞及〝治療(treatment)〞術語係指治療及預防(prophylactic)或預防(preventative)策略二者，其中目標為預防或降低(減低)非所欲之生理變化或病症。就本發明的目的而言，有利或所欲之臨床結果包括(但不限於此)緩和徵狀、縮減疾病程度、穩定(即不變差)疾病狀態、延緩或降低疾病進展、改善或緩和疾病狀態及緩解(無論為部分或全部)，無論是否可偵測或不可偵測。〝治療〞也可代表與假設未接受治療所預期之存活率相比較而延長存活率。那些需要治療者包括那些已具有症狀或病症者與那些傾向具有症狀或病症者，或那些其中症狀或病症受到預防者。

投予哺乳動物之本發明化合物的量將依據如特殊的化合物、疾病症狀和其嚴重性、需要治療之哺乳動物本體(例如，體重)的因素而定，但是因此可由熟習所屬技術領域者依慣例決定。

用於本文之〝哺乳動物〞術語係指具有或正在發展本文所述之疾病風險的溫血動物，並包括(但不限於此)天竺鼠、狗、貓、大鼠、小鼠、倉鼠及靈長類，包括人類。

在本發明的一個觀點中，本發明化合物或其醫藥鹽類可調配成用於投予動物或人類以治療或預防激酶介導性症狀的醫藥組成物。用於本文之〝激酶介導性症狀〞術語代表其中已知p38扮演一角色且包括已知由IL－1、TNF、IL－6或IL－8過度表現所引起之症狀的任何疾病或其它的有害症狀。該等症狀包括(但不限於此)發炎性疾病、自體免疫性疾病、毀壞性骨病症、增殖性病症、感染性疾病、病毒性疾病、纖維變性疾病及神經退化性疾病。

可以治療或預防的發炎性疾病包括(但不限於此)急性胰臟炎、慢性胰臟炎、氣喘病、過敏及成人呼吸性窘迫症候群。

可以治療或預防的自體免疫性疾病包括(但不限於此)腎絲球腎炎、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡、硬皮症、慢性甲狀腺炎、葛瑞夫玆氏(Graves’)病、自體免疫性胃炎、胰島素依賴性糖尿病(I型)、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性嗜中性白血球減少症、血小板減少症、異位性皮膚炎、慢性活動肝炎、重症肌無力、多發性硬化症、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克隆氏(Crohn’s)病、牛皮癬或移植物對抗宿主疾病。

可以治療或預防的毀壞性骨病症包括(但不限於此)骨質疏鬆症、骨關節炎及多發性骨髓瘤相關之骨病症。

可以治療或預防的纖維變性疾病包括(但不限於此)特發性肺纖維化、腎及肝纖維化。

可以治療或預防的增殖性疾病包括(但不限於此)急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、轉移性黑色素瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、骨髓發育不全症候群、多發性骨髓瘤、星狀細胞瘤、骨癌、腦癌、乳癌、結腸癌、胃癌、神經膠質細胞瘤、神經膠母細胞瘤、多型性神經膠母細胞瘤、頭與頸癌、血液系統腫瘤、血球生成性病症、肺間質病、卡波西氏肉瘤、淋巴細胞白血病、黑色素瘤、骨髓性白血病、非小細胞肺癌、卵巢癌、攝護腺癌、肉瘤、皮膚癌、小細胞肺癌及胃癌。可治療的其它病患包括那些接受骨髓移植者。

可以治療或預防的感染性疾病包括(但不限於此)敗血症、敗血性休克及志賀氏菌病。

可以治療或預防的病毒性疾病包括(但不限於此)急性肝炎感染(包括肝炎A、肝炎B及肝炎C)、HIV感染及CMV視網膜炎。

可以本發明化合物治療或預防的退化性症狀包括(但不限於此)阿耳滋海默症、帕金森氏病、腦缺血及其它神經退化性疾病。

〝激酶介導性症狀〞術語也包括在中風時的缺血/再灌注、心臟突發症、心肌缺血、器官低氧症、血管增生、心臟肥大及血栓誘導性血小板凝集。

此外，本發明的激酶抑制劑也有用於抑制可誘導之炎前蛋白質的表現，如前列腺素內過氧化物合成酶－2(PGHS－2)，也稱為環加氧酶－2(COX－2)。因此，其它的〝激酶介導性症狀〞包括(但不限於此)水腫、痛覺缺失、發熱及疼痛，如神經肌肉痛、頭痛、癌痛、牙痛及關節炎痛。

可以本發明的激酶抑制劑治療或預防的症狀及疾病也可適宜以細胞激素(例如IL－1、TNF、IL－6、IL－8)分組，咸信該細胞激素為疾病的原因。

因此，IL－1介導性疾病或症狀包括類風濕性關節炎、骨關節炎、中風、內發毒血症及/或毒性休克症候群、以內毒素誘導之發炎性反應、發炎性腸病、結核病、動脈粥樣硬化症、肌肉退化症、惡病質、牛皮癬關節炎、萊特氏(Reiter’s)症候群、痛風、創傷性關節炎、風疹關節炎、急性滑膜炎、糖尿病、胰臟β－細胞疾病及阿耳滋海默症。

TNF介導性疾病或症狀包括(但不限於此)類風濕性關節炎、類風濕性脊椎炎、骨關節炎、痛風性關節炎與其它關節炎症狀、敗血症、敗血性休克、內毒素休克、革蘭氏陰性敗血症、毒素休克症候群、成人呼吸性窘迫症候群、腦型瘧疾、慢性肺發炎疾病、矽肺病、肺類肉瘤病、骨再吸收症、再灌注傷害、移植物對抗宿主反應、異種移植排斥、由於發炎而發熱與肌痛、繼發成感染的惡病質、AIDS、ARC或惡性病、瘢痕瘤形成、疤痕組織形成、克隆氏病、潰瘍性結腸炎或輕癱。TNF介導性疾病也包括病毒性感染，如HIV、CMV、流行性感冒及疱疹；以及獸醫病毒性感染，如慢病毒感染，包括(但不限於此)馬感染性貧血病毒、山羊關節炎病毒、脫髓鞘性腦白質炎病毒或梅迪病病毒；或反轉錄病毒感染，包括貓免疫不全病毒、牛免疫不全病毒或犬免疫不全病毒。

IL－8介導性疾病或症狀包括(但不限於此)以大量嗜中性球浸潤為特徵的疾病，如牛皮癬、發炎性腸疾病、氣喘病、心臟與腎再灌注傷害、成人呼吸性窘迫症候群、血栓症及腎絲球腎炎。

此外，可局部使用本發明化合物治療或預防由IL－1或TNF所引起或惡化的症狀。該等症狀包括(但不限於此)紅腫的關節、濕疹、牛皮癬、發炎性皮膚症狀，如曬傷、發炎性眼部疾病，如結膜炎、輕癱、疼痛及與發炎有關的其它症狀。

雖然本發明化合物主要具有作為用於溫血動物中(包括人類)的治療劑之價值，但是也有用於任何需要抑制細胞激素效果的時候。因此，彼等用作在發展新的生物試驗及搜尋新的藥理劑中使用的藥理標準。

本發明以治療或預防為目的的劑量大小當然將依據症狀本性與嚴重性、動物或病患的年齡與性別及投予途徑且根據熟知的醫學原理自然地改變。

本發明的另一觀點係提供用作治療在遭受本文所述之疾病或症狀所苦的哺乳動物中(例如，人類)的該疾病或症狀之藥劑的本發明化合物。也提供本發明化合物在製備用於治療在遭受本文所述之該等病症所苦的溫血動物中(如哺乳動物)的疾病及症狀之藥劑的用途。

組合治療法

本發明化合物可與在可從抑制激酶及相關聯的細胞激素，如IL－1、TNF、IN－6或IL－8得到的疾病狀態治療中所使用的其它藥物及治療組合使用。第二種藥物的劑量可以臨床上所使用的劑量為基準適當地選擇。本發明化合物對第二種藥物之比例可根據投予之受藥者、投予途徑、標的疾病、臨床症狀、組合及其它因素而適當地決定。例如，在其中投予之受藥者為人類的例子中，可使用以每份本發明化合物重量計0.01至100重量份之量的第二種藥物。

醫藥組合調配物或服藥攝生法的第二種藥物具有例如對本發明化合物的輔助活性，使得彼等互相之間沒有相反的影響。該等藥物適合以有效於意欲目的的量存在於組合中。因此，本發明的另一觀點係提供一種含有本發明化合物與第二種藥物，如本文所述者組合的組成物。

本發明化合物與額外的醫藥活性藥物(類)可在單一醫藥組成物中一起或單獨投予，並在單獨投予時，該投予可同時或以任何次序相繼發生。該相繼投予可以接近的時間或以遠離的時間。以選擇本發明化合物與第二種藥物(類)的量及投予的相關時間以便達成所欲之組合治療效果。

組合治療法可提供〝協同作用〞且顯示出〝協同性〞，即當一起使用活性成分時所達成的效果大於單獨使用化合物所引起的效果總和。當本發明化合物與第二種藥物：(1)共同調配在組合的單位劑量調配物中且同時投予或輸送；(2)以單獨的調配物交替或並行輸送；或(3)以一些其它的攝生法時，則可達到協同效果。當以交替治療法輸送時，則在本發明化合物與第二種藥物相繼投予或輸送時可達成協同效果，例如，藉由在單獨的注射器中以不同的注射液。例如，在交替治療法期間可相繼，即連續投予每一活性成分的有效劑量，反之，在組合治療法中，一起投予二或多種活性成分的有效劑量

例如，藉由彼等抑制細胞激素的能力使本發明化合物具有治療某些發炎及非發炎性疾病的價值，該等疾病目前係由環加氧酶－抑制性非類固醇抗發炎藥物(NSAID)所治療，如吲哚美辛(indomethacin)、酮洛來克(ketorolac)、乙醯基水楊酸、布洛芬(ibuprofen)、舒林酸(sulindac)、托爾米丁(tolmetin)及吡羅昔康(piroxicam)。本發明化合物與NSAID的共同投予可造成產生治療效果所需求的後者試劑的量減少，因此，來自NSAID的反效果，如胃腸道效果的可能性減低。因此，根據本發明進一步的特點，其係提供一種包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽與環加氧酶－抑制性非類固醇抗發炎劑及醫藥上可接受之稀釋劑或載體結合或摻合的醫藥組成物。

也可使用本發明化合物與抗關節炎劑，如金、胺甲蝶呤、類固醇及青黴素胺組合治療如類風濕性關節炎之症狀，以及與類固醇組合治療如骨關節炎之症狀。

也可使用本發明化合物與軟骨保護劑、抗退化劑及/或修復劑，如達賽瑞英(Diacerhein)、玻尿酸調配物，如玻璃酸(Hyalan)、儒馬隆(Rumalon)、阿替帕榮(Arteparon)及葡萄糖胺鹽類，如安退爾(Antril)組合治療退化性疾病，例如骨關節炎。

也可使用本發明化合物與抗氣喘劑，如支氣管擴張劑及白三烯拮抗劑組合治療氣喘病。

本發明化合物的投予

本發明化合物可以任何適合於欲治療之症狀的途徑投予。適合的途徑包括口服、非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、動脈內、皮膚內、腦脊髓膜內及硬腦膜上)、穿透皮膚、直腸、鼻、局部(包括頰內及舌下)、陰道內、腹膜內、肺內及鼻內。應理解所使用的途徑可隨例如接受者症狀而改變。在化合物經口服投予時，其可與醫藥上可接受之載體或賦形劑調配成藥丸、膠囊、藥片等。在化合物非經腸投予時，其可與醫藥上可接受之非經腸媒劑調配且具有單位注射劑型，如以下所詳述。

醫藥調配物

為了使用本發明化合物治療(包括預防治療)哺乳動物，包括人類，故一般係根據標準的醫藥實施方式調配成醫藥組成物。根據本發明的該觀點，其係提供一種含有本發明化合物與醫藥上可接受之稀釋劑或載體結合的醫藥組成物。

本發明的醫藥組成物係與良好的醫學實施一致的方式，即投予量、濃度、時間表、程序、媒劑及途徑而調配、服藥及投予。在本發明上下文中的考慮因素包括欲治療之特殊病症、欲治療之特殊哺乳動物、各個病患的臨床症狀、病症原因、藥劑輸入位置、投予方法、投予時間表列及醫師已知的其它因素。欲投予之化合物的治療有效量將由該等考慮支配，並為預防、改善或治療病症所需的最小量。本發明化合物典型地被調配成醫藥劑型，以提供可輕易控制的藥物劑量及能夠使病患服從規定的攝生法。

用於本文之組成物係以無菌較佳。特別地，欲以活體內投予使用的調配物必須為無菌。該無菌作用係藉由例如經由無菌過濾薄膜過濾可輕易完成。化合物通常可以固體組成物、凍乾的調配物或水性溶液貯存。

本發明化合物的醫藥調配物可就各種投予途徑及類型而製備。例如，具有所欲純度的本發明化合物可視需要與具有凍乾的調配物、研磨的粉末或水溶液形式的醫藥上可接受之稀釋劑、載體、賦形劑或穩定劑(Osaol,A.編輯的第16版Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980))混合。調配可藉由在周圍溫度下於適當的pH下及以所欲之純度與生理上可接受之載體，即在所使用的劑量及濃度下對接受者沒有毒性的載體混合而進行。調配的pH主要係依據特殊用途及化合物濃度而定，但是可以例如從約3至約8為範圍。在pH 5之醋酸鹽緩衝液中調配為適合的具體實例。調配物可使用慣例的溶解及混合步驟而製備。例如，將大量藥物物質(即本發明化合物或化合物的穩定型式(例如，與環糊精衍生物或其它已知的複合劑之複合物))在一或多種賦形劑的存在下溶解在適合的溶劑中。

所使用的特殊載體、稀釋劑或賦形劑將依據欲應用本發明化合物的方式及目的而定。通常對溶劑的選擇係依據熟習所屬技術領域者理解對所投予之哺乳動物安全(GRAS)的溶劑。通常安全的溶劑為無毒性水溶劑，如水，以及可溶於或互溶於水中的其它無毒性溶劑。適合的水溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等及其混合物。可接受之稀釋劑、載體、賦形劑及穩定劑在所使用的劑量及濃度下對接受者沒有毒性，並包括緩衝劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽及有它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；保存劑(如氯化十八烷基二甲基苯甲銨、氯化六烴季銨、氯化苯二甲烴銨、氯化苯銨松寧、酚、丁醇或苯甲醇、苯甲酸烷基酯，如苯甲酸甲酯或乙酯、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3－戊醇及間－甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，如血清白蛋白、白明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯基吡咯烷酮；胺基酸，如甘胺酸、麩胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或賴胺酸；單醣、二醣及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如EDTA；糖類，如蔗糖、甘露醇、繭糖或山梨醇；鹽成形抗衡離子，如鈉；金屬錯合物(例如，Zn－蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，如TWEEN^TM 、PLURONIC^TM 或聚乙二醇(PEG)。調配物也可包括一或多種穩定劑、界面活性劑、濕潤劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、保存劑、抗氧化劑、遮光劑、助滑劑、加工輔助劑、著色劑、甜味劑、香料劑、調味劑及其它已知的添加劑，以提供講究的藥物呈現(即本發明化合物或其醫藥組成物)或輔助醫藥產品(即藥劑)的製造。活性醫藥成分也可包陷於例如分別以相分離技術或以界面聚合所製備的微膠囊中，例如，羥甲基纖維素或白明膠－微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；膠體藥物輸送系統中(例如，脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)或巨乳液中。該等技術揭示在Osaol,A.編輯的第16版Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980)中。〝脂質體〞為由各種類型的脂質、磷脂及/或界面活性劑所組成的小泡囊，其有用於輸送藥物至哺乳動物中。脂質體的組份常以雙層形成方式排列，類似於生物薄膜的脂質排列。

可製備本發明化合物的緩釋型製劑。適合的緩釋型製劑的實例包括含有本發明化合物的固體疏水性聚合物之半滲透基質，該基質具有成形物件的形式，例如，膜或微膠囊。緩釋型基質的實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(甲基丙烯酸2－羥乙酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國專利第3,773,919號)、L－麩胺酸與γ－乙基－L－麩胺酸酯之共聚物、不可降解之乙烯－醋酸乙烯酯、可降解之乳酸－乙醇酸共聚物，如LUPRON DEPOT^TM (由乳酸－乙醇酸共聚物及柳培林(leuprolide acetate)所組成的可注射微球)及聚－D－(－)－3－羥基丁酸。

本發明的醫藥組成物可具有無菌注射製劑的形式，如無菌注射水性或油性懸浮液。該懸浮液可根據已知的技藝使用那些已於上述之適合的分散或濕潤劑及懸浮劑而調配。無菌注射製劑也可為在無毒性的經非腸可接受之稀釋劑或溶劑中的無菌注射製劑，如在1,3－丁二醇中的溶液，或被製成凍乾的粉末。其中，可使用的可接受之媒劑及溶劑為水、林葛爾氏(Ringer’s)溶液及等滲壓氯化鈉溶液。此外，無菌固定油可依慣例用作溶劑或懸浮介質。就該目的而言，可使用任何品牌的固定油，包括合成的單－或二甘油酯。此外，同樣地可使用脂肪酸，如油酸製備注射劑。

適合於非經腸投予之本發明的醫藥組成物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可包括抗氧化劑、緩衝劑、制菌劑及溶質，使得調配物與意欲之接受者的血液具有等滲壓性；以及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。

本發明的組成物也可被調配成適合於口服使用(例如，藥片、錠劑、硬或軟膠囊、水性或油性懸浮液、乳液、可分散性粉末或顆粒、糖漿或酏劑)、局部使用(例如，乳膏、軟膏、凝膠或水性或油性溶液或懸浮液)、以吸入投予(例如，微細粉末或液體氣膠)、以吹氣投予(例如，微細粉末)的形式。

適合於藥片調配物的醫藥上可接受之賦形劑包括例如惰性稀釋劑，如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣；成粒或崩散劑，如玉米澱粉或藻酸；結合劑，如澱粉；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉；保存劑，如對－羥基苯甲酸乙酯或丙酯；及抗氧化劑，如抗壞血酸。藥片調配物可不被包膜或被包膜，以便或改進彼之崩散及接著在腸胃道內吸收活性成分，或改進彼之穩定性及/或外觀，在任一例子中，使用所屬技術領域中熟知慣例的包膜劑及步驟。

口服使用的調配物可被調配成具有硬膠囊形式，其中將活性成分與惰性固體稀釋劑混合，例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土，或成為軟膠囊形式，其中將活性成分與水或油混合，如花生油、液態石蠟或橄欖油。

水性懸浮液通常包括具有細粉末狀形式的活性成分與一起的一或多種懸浮劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、黃蓍樹膠及阿拉伯膠；分散或濕潤劑，如卵磷脂或環氧烷羥與脂肪酸之縮合產物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、或環氧乙烷與長鏈脂肪族醇之縮合產物(例如，十七乙烯氧基鯨蠟醇)、或環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇之部分酯類的縮合產物(如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)、或環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇酐之部分酯類的縮合產物(例如，聚乙烯山梨醇酐單油酸酯)。水性懸浮液也可包括一或多種保存劑(如對－羥基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化劑(如抗壞血酸)、著色劑、調味劑及/或甜味劑(如蔗糖、糖精或阿斯巴甜)。

油性懸浮液可藉由將活性成分懸浮在植物油中(如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或在礦物油中(如液態石蠟)而調配。油性懸浮液也可包括增稠劑，如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入如以上所列的那些甜味劑及調味劑，以提供可食用之經口服製劑。這些組成物可藉由加入抗氧化劑，如抗壞血酸而保存。

適合於藉由加入水而製備水性懸浮液的可分散性粉末及顆粒通常包括活性成分與一起的分散或濕潤劑、懸浮劑及一或多種保存劑。適合的分散或濕潤劑及懸浮液係以上列已說明的那些試劑為實例。另外的賦形劑也可以存在，如甜味劑、調味劑及著色劑。

本發明的醫藥組成物也可具有水包油型乳液形式。油相可為植物油，如橄欖油或花生油，或礦物油，例如，液態石蠟或任何彼之混合物。適合的乳化劑可為例如天然生成之膠(如阿拉伯膠或黃蓍樹膠)、天然生成之磷脂(如大豆、卵磷脂)、衍生自脂肪酸及己糖醇酐之酯類或部分酯類(例如，山梨醇酐單油酸酯)及該部分酯類與環氧乙烷之縮合產物(如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯)。乳液也可包括甜味劑、調味劑及保存劑。

糖漿及酏劑可以甜味劑調配，如甘油、丙二醇、山梨醇、阿斯巴甜或蔗糖，並也可包括緩和劑、保存劑、調味劑及/或著色劑。

栓劑調配物可藉由混合活性成份與適合的無刺激性賦形劑而製備，該賦形劑在常溫下為固體，但是在直腸溫度下為液體，因此，在直腸中熔融而釋放出藥物。適合於陰道投予之調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊膏、泡棉或噴霧調配物呈現，除了活性成分之外，其包括如所屬技術領域中已知適當的載體。

局部用調配物，如乳膏、軟膏、凝膠及水性或油性溶液或懸浮液通常可藉由以慣例且局部可接受之媒劑或稀釋劑使用所屬技術領域中熟知的慣例步驟調配活性成分而獲得。

穿透皮膚投予之組成物可具有那些所屬技術領域中具有通常知識者熟知的穿透皮膚之皮膚貼片形式。

以吹氣投予之組成物可具有細微粉末形式，其包括平均直徑為例如30微米或更小的粒子，粉末本身包含單獨或被一或多種生理上可接受之載體(如乳糖)稀釋的活性成份。接著使吹氣用之粉末適宜地保留在膠囊中，其包括例如1至50毫克供渦輪式吸入器裝置(如用於已知的色甘酸鈉劑之吹氣裝置)使用的活性成分。

以吸入投予之組成物可具有為了配置成為含有細微固體之氣溶膠或液體小滴的活性成分所安排之慣例的加壓氣膠形式。可使用慣例的氣溶膠推進劑，如揮發性氟化烴類或烴類，並適宜地安排氣溶膠裝置，以配置計量的活性成分量。

供使用的醫藥組成物(或調配物)可依據投予藥物所使用的方法而以各種方式包裝。例如，銷售用的物件可包括具有醫藥調配物以適當的形式沉積在其中的容器。適合的容器為那些熟習所屬技術領域者所熟知，並包括如瓶子(塑膠及玻璃)、藥袋、安瓶、塑膠袋、金屬圓筒及類似物之物質。容器也可包括防破壞裝配，以避免不慎接近包裝內容物的機會。標籤也可包括適當的警語。調配物也可包裝在單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓶及小瓶，並可貯存在冷凍乾燥(凍乾)的狀態下，在使用之前只需加入無菌液態載體，例如水，以供立即注射。即席的注射溶液及懸浮液係從先前所述之無菌粉末、顆粒及藥片種類而製備。較佳的單位劑量調配物為那些含有如本文以上所引述之日劑量或單位日次劑量或其適當的分裝之活性成分的調配物。

本發明進一步提供含有至少一種如以上所定義之活性成分與其獸醫用載體一起的獸醫用組成物。獸醫用載體為有用於投予組成物為目的之物質，並可為固體、液體或氣體物質，除此之外，其為惰性或為獸醫技藝中可接受的，且與活性成分相容。這些獸醫用組成物可以非經腸、口服或任何其它所欲途徑投予。

與一或多種賦形劑組合以產生單一劑型之本發明化合物的量有必要依據所治療之受藥者、病症或症狀嚴重性、投予速度、化合物的清除及配藥醫師的判斷力而改變。在一個具體實例中，以適合的本發明化合物量投予需要其之哺乳動物。在一個具體實例中，以每天介於約0.001毫克/每公斤體重至約60毫克/每公斤體重之間的量進行投予。在另一具體實例中，以每天介於0.5毫克/每公斤體重至約40毫克/每公斤體重之間的量進行投予。在一些情況中，低於上述範圍下限的劑量水平可能更適當，雖然在其它例子中，可能使用還更大的劑量而不引起任何有害的副作用，其先決條件係先將該等較大的劑量分成數份小的劑量供整天投予。關於進一步的投予途徑及劑量攝生法資料，參見Pergamon Press於1990年的第5冊Comprehensive Medicine Chemistry的第25.3章(Corwin Hansch；Chairman of Editorial Board)，特別將其以引用方式納入本文中。

物件製品

在本發明的另一具體實例中，其係提供包含有用於治療上述病症之物質的物件製品或〝套組〞。在一個具體實例中，套組包含含有本發明化合物的容器。適合的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、氣泡包裝(blister pack)等。容器可以各種材料形成，如玻璃或塑膠。容器可容納本發明化合物或其調配物，其有效治療症狀且可具有一無菌入口(例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有以皮下注射針可穿通之塞子的小瓶)。

套組可進一步包含在容器上或與容器結合的標籤或說明書。用於本文之〝說明書(package insert)〞術語係指在治療產品的市售包裝內習慣裝入的使用指南，其包括關於用藥指示、用法、劑量、投予方式、禁忌及/或關於使用該等治療產品的警語之資料。在一個具體實例中，標籤或說明書指示可使用包含本發明化合物的組成物治療激酶介導性疾病或病症。標籤或說明書也可能指示可使用該組成物治療其它病症。

在某些具體實例中，套組適合輸送固體口服劑型的本發明化合物，如藥片或膠囊。該套組較佳地包括許多單位劑量。該套組可包括具有指引意欲使用之劑量次序的紙卡。該套組的實例為〝氣泡包裝〞。氣泡包裝為包裝工業中所熟知且廣泛地用於包裝醫藥單位劑型。若必要時，可提供記憶輔助，例如以數字、字母或其它標記形式或在可投予劑量之治療時間表中標示日期的月曆插件。

根據另一具體實例，套組可包含(a)第一容器，其具有容納在其中的本發明化合物；及(b)第二容器，其具有容鈉在其中的第二種醫藥調配物，其中第二種醫藥調配物包含有用於治療激酶介導性疾病或病症的第二種化合物。另一選擇或另外，套組可進一步包含含有醫藥上可接受之緩衝劑的第三容器，如注射用的制菌水(BWFI)、以磷酸鹽緩衝之食鹽水、林葛爾氏溶液及葡萄糖溶液。該套組可進一步包括以市售及使用者為觀點所欲之其它物質，包括其它的緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。

套組可進一步包含投予本發明化合物及若存在的第二種醫藥調配物之指示。例如，如果套組包含含有本發明化合物的第一種組成物及第二種醫藥調配物時，則套組可進一步包含使第一及第二種醫藥組成物同時、相繼或分開投予需要其之病患的指示。

在其中套組包含本發明組成物及第二種醫藥調配物的某些其它的具體實例中，套組可包含用於容納單獨的組成物之容器，如分次的瓶子或分次的鋁箔包裝，然而，也可將單獨的組成物容納在單一的未分次之容器內。在某些具體實例中，套組包含用於投予單獨的組份之指示。當單獨的組份較佳地以不同的劑型投予時(例如，經口服及非經腸)，以不同的劑量間隔投予時，或當組合物的各個組份之滴定為配藥醫師所期望時，則套組型式特別有利。

生物活性 p38 MAPK抑制

可在試管內、活體內或細胞系中分析本發明化合物對抑制p38 MAPK的活性。在試管內的分析包括測定活化之p38 MAPK的激酶活性或ATPase活性抑制。試管內的分析替換法定量抑制劑與p38 MAPK結合的能力，而該能力的測量可藉由在結合之前以放射標定抑制劑，分離抑制劑/p38 MAPK複合物及測定放射標定結合量，或藉由進行其中新的抑制劑與結合於已知的放射配位基的p38 MAPK培養的競爭實驗。這些及其它有用的試管內及細胞培養分析為那些熟習所屬技術領域者所熟知。

可使用本發明化合物的抑制效果的細胞培養分析測定在以抑制劑處理之細胞中的全血或其細胞部分中所產生的TNF－α、IL－1、IL－6或IL－8量，與以負對照劑處理之細胞相比較。這些細胞激素的水平可經由使用市售可取得的ELISA或如下列的生物實施例章節中所述而測定。

實施例

為了說明本發明而納入下列的實施例。然而，應瞭解這些實施例不是限制本發明，而只意味著建議一種實施本發明的方法。

生物實施例

本發明化合物的生物活性係藉由下列的試管內分析予以證明。在實施例C－M中所使用的化合物為：化合物72：1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素(實施例1及3)；及化合物74：磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯(實施例2及4)。

實施例A

p38生化分析 p38活性係在室溫下在含有在25mM HEPES(pH 7.4)、100 μM釩酸鹽、1mM DTT、10mM MgCl₂ 及10 μM〔γ－³³ P〕－ATP(~0.1 μ Ci P³³ /反應)中作為基質的5nM活化之p38 α酵素及1 μM ATF－2(活化轉錄因子2融合蛋白)的100微升反應中分析。反應係在30－40分鐘之後藉由加入25% TCA而終止，允許放置5分鐘及接著直接轉移至GF－B薄膜過濾盤中。將過濾物使用Tomtec Mach III自動化收成器以0.5%磷酸經30秒清洗兩次。在清洗之後，繼續真空30秒，以乾燥過濾物。每一槽孔以約30微升閃爍劑加入過濾盤中，並接著在液體閃爍計數器中(Packard TopCount HTS)讀取。

實施例B

PBMC分析本發明化合物抑制TNF－α產生的活性係藉由使在以脂多醣體刺激時會合成及分泌TNF－α的人類末梢血液單核細胞(〝PBMC〞)而評定。

化合物試驗溶液係在DMSO中製成5倍系列稀釋液而製得，接著該稀釋液係藉由以MEM、2%以熱失活之胎牛血清(〝FBS〞)、20mM HEPES、2mM L－麩醯胺酸及1%青黴素/鏈黴素稀釋而稀釋成5x貯存液。

將PMBC如下所示從人類血液分離。全血樣品係由來自人類自願者收集至Becton Dickinson的Vacutainer^TM CPT中。將試管混合及在室溫下(18－25℃)在平行旋轉輪中以1500－1800 RCF(相對離心力)離心最少15分鐘。將每一供血者的白血球衣層匯集至單一試管中及以磷酸鹽緩衝之食鹽水(〝PBS〞)清洗兩次。將沉澱的細胞再懸浮在MEM、2%以熱失活之胎牛血清(〝FBS〞)、20mM HEPES、2mM L－麩醯胺酸及1%青黴素/鏈黴素中。使用血球計數器測定總細胞數及將細胞懸浮液調整成2 x 106細胞/毫升。

將0.1毫升細胞懸浮液加入96－槽孔細胞培養盤的每一槽孔中。加入化合物試驗溶液(30微升)，並將細胞在37℃/5%CO₂ 培養器中培養1小時，並接著將20微升7.5毫微克/毫升之脂多醣類(LPS大腸桿菌K－235)加入每一槽孔中及將細胞送回37℃/5%CO₂ 培養器中培養16－20小時。將細胞在1100 RCF下離心15分鐘。將約0.12毫升上層清液轉移至透明的96槽孔聚丙烯盤中。立即分析樣品，或將其貯存在－80℃下，直到準備分析為止。使用如下述之人類TNF－α ELISA分析測定在每一樣品中的TNF－α水平。

TNF－α水平係使用下列的分析測定。以TNF－α抗體塗佈之盤係藉由在碳酸鹽－碳酸氫鹽緩衝液(BupH^TM 之碳酸鹽－碳酸氫鹽緩衝液包)中的150微升2微克/毫升之以TNF－α純化之小鼠單株IgG加入96－槽孔Immulon－4盤的槽孔(Immulon 4 ELISA平底盤；Dynex，目錄編號011－010－3855)中而製得，並在2－8℃下培養隔夜。移除塗佈溶液，並加入200微升阻斷緩衝液(20mM HEPES，pH 7.4、150mM NaCl、2% BSA)及將該盤貯存在2－8℃下，直到準備使用為止。10點重組體人類TNF－α標準曲線係藉由在樣品稀釋劑中(20mM HEPES，pH 7.4、150mM NaCl、2mM MgCl₂ 、1% BSA)的1：2之系列稀釋液而製得，具有6000微微克/毫升之最高濃度。

阻斷溶液係藉由以300微升〝清洗緩衝液〞(20mM HEPES，pH 7.4、150mM NaCl、2mM MgCl₂ 、0.02% Tween－20)清洗5次而自TNF－α ELISA盤移除。將50微升樣品稀釋劑加入所有的槽孔中，並接著將50微升TNF－α標準曲線溶液或試驗化合物上層清液加入所有的槽孔中。將盤在室溫下以搖動(300 rpm)培養1小時。將盤以300微升清洗緩衝液清洗5次。每一槽孔加入在〝抗體稀釋劑〞(20mM HEPES，pH 7.4、150mM NaCl、2mM MgCl₂ 、1% BSA、0.02% Tween－20)中的100微升0.2微克/毫升之生物素化山羊抗人類TNF－α，並將盤在周圍溫度下以搖動(300 rpm)培養1小時。將盤以每一槽孔300微升清洗緩衝液清洗5次。每一槽孔加入在抗體稀釋劑中的100微升0.02微克/毫升之鏈親和素鹼性磷酸酶，並將盤在周圍溫度下以搖動(300 rpm)培養1小時。將盤以每一槽孔300微升清洗緩衝液清洗5次。每一槽孔加入在具有0.5mM MgCl₂ 之二乙醇胺緩衝液中的200微升1毫克/毫升之pNPP(磷酸對－硝苯酯)，並將盤在周圍溫度下以搖動(300 rpm)培養30至45分鐘。反應進度係藉由測定旋光密度而監控：當最高標準達到介於2.0至3.0之間的OD時，則每一槽孔加入50微升2N NaOH。在30分鐘之內使用設定成405奈米的微滴定盤讀數機測定每一槽孔的旋光密度。在XL擬合中使用4－參數曲線擬合分析數據。

下列試劑係用在上述分析中。沒有鈣或鎂之杜貝可氏(Dulbecco’s)磷酸鹽緩衝之食鹽水(Gibco之目錄編號14190)；伊格(Eagle)的最小必需培養基(MEM，Gibco之目錄編號11090)；青黴素－鏈黴素(Gibco之目錄編號15140)；200mM L－麩醯胺酸(Gibco之目錄編號25030)；1M HEPES(Gibco之目錄編號15630)；胎牛血清(〝FBS〞，HyClone之目錄編號SH30070.03)；來自大腸桿菌K－235之脂多醣類(〝LPS〞，Sigma之目錄編號L2018)；抗－TNF－α，純化之小鼠單株IgG(R&D Systems之目錄編號MAB210)；BupH^TM 之碳酸鹽－碳酸氫鹽緩衝液包(Pierce之目錄編號28382)；HEPES(分子量238.3，Sigma之目錄編號H3575)；NaCl(Sigma之目錄編號S7653)；胎牛血清白蛋白(〝BSA〞，Jackson ImmunoResearch之目錄編號001－000－162)；聚氧乙烯20山梨醇酐單月桂酸酯(Sigma之目錄編號P2287)；氯化鎂六水合物(Sigma之目錄編號M2670)；重組體人類TNF－α(R&D Systems之目錄編號210TA010)；以生物素化TNF－α親和力純化之山羊IgG(R&D Systems之目錄編號BAF210)；鏈親和素鹼性磷酸酶(Jackson ImmunoResearch之目錄編號016－050－084)；二乙醇胺基質緩衝液(Pierce之目錄編號34064)；磷酸對－硝苯酯(Sigma之目錄編號N2765)。

實施例C

化合物72對抗各種激酶的活性利用使用ATF－2作為基質的自製p38 α放射活性激酶分析探究化合物72之p38 α活性。化合物72的選擇性係在1 μM化合物72的存在下分析202蛋白激酶的活性而測定。接著在每一確立模式的初篩選中(在K_m 下的ATP濃度)進行受到>80%抑制的那些激酶的IC₅₀ 測定。

如表1所示，化合物72為有效的p38 α Abelson細胞質酪胺酸激酶(Abl)、Abelson相關之基因(Arg)及Tie－2受體酪胺酸激酶抑制劑。除了這些活性之外，化合物72也具有對抗耐伊馬替尼型式之BCR－Abl T315I、src－家族酪胺酸激酶Hck、Lyn與Fyn及受體酪胺酸激酶FGFR1(纖維母細胞生長因子受體1；FGFR1)與VEGFR2(血管內皮生長因子受體2；KDR)的適度性效力。

以比較方式，也可測試WO 2004/078116的實施例94及138之化合物。

實施例94

實施例138

將結果提供在下列表1a中。

結果顯示化合物72比WO 2004/078116的實施例94及138之化合物明顯更有效的Abl及Tie2抑制劑。

實施例D

化合物72對抗p38路徑的細胞活性在以1微克/毫升之大茴香黴素刺激60分鐘以誘導p38路徑活化之前，先將HeLa細胞以化合物72處理60分鐘。將細胞以對抗磷酸化型式之HSP27(Ser78)之抗體及作為標準化對照組的GAPDH標定。將細胞使用LI－COR Aeriustm成像劑成像及定量。

結果證明化合物72為在細胞中有效的p38路徑抑制劑，具有2nM之表觀IC₅₀ 。在功能性細胞分析中，也測試該化合物在以細菌脂多醣類(LPS)處理以誘導細胞激素產生的全血中抑制TNF－α產生的能力(以ELISA偵測)，得到30nM之表觀IC₅₀ 。

實施例E

化合物72對抗Tie2受體的細胞活性關於時程實驗，使HUVEC經2小時匱乏血清，接著以200毫微克/毫升之Tie2受體激動劑血管生成素－1(Ang－1)刺激。在指定的時間點收成細胞，並以對抗磷酸－AKT、磷酸－Erk、磷酸－HSP27、磷酸－p38及GAPDH之抗體免疫轉漬。訊號被定量且以GAPDH標準化，以評定由於Tie2受體活化而誘導的程度。結果係以顯示反應在人類臍帶血管內皮細胞(HUVEC)中的Tie2受體激動劑Ang－1之Erk、AKT及p38路徑活化的時程之免疫轉漬及圖形證明。這些結果顯示只有AKT及Erk路徑被活化而對Tie2受體活化反應。

關於Tie2活化研究，使HUVEC經2小時匱乏血清，接著在以200毫微克/毫升之Ang－1刺激10分鐘之前，先以不同濃度的化合物72處理60分鐘。接著將Tie2以抗－磷酸酪胺酸(pTyr)與抗－Tie2抗體免疫純化(IP)及免疫轉漬，以評定Tie2自磷酸化的程度。將溶胞物分別以抗－磷酸－Erk及抗－磷酸－AKT(Ser473)抗體免疫轉漬。訊號被定量且以作為裝載對照組的GAPDH標準化。結果顯示在免疫轉漬及圖形中。以化合物72處理引起以劑量依賴性抑制Tie2自磷酸化與其下游效應子Erk及AKT二者，前者具有<33nM之IC₅₀ 及後者具有<11nM之IC₅₀ 。

實施例F

化合物72對抗BCR－Abl的細胞活性將BCR－Abl正慢性骨髓白血病細胞系K562在37℃，5% CO₂ 下以各種濃度的伊馬替尼或化合物72依指示處理72小時。接著使用CellTiter Blue(Promega)測量細胞存活率，以測定每一種化合物的IC₅₀ 值。所測定的伊馬替尼及化合物72之IC₅₀ 值分別為278nM及62nM。

準備在37℃，5% CO₂ 下以不同濃度的伊馬替尼或化合物72處理2小時的K562細胞萃取物，並以自我磷酸化之Abl(p－Abl，Tyr245)及Abl基質STAT5(pSTAT5，Tyr694)與CrkL(pCrkL，Tyr207)免疫轉漬。結果顯示化合物72具有比伊馬替尼更多4倍抑制在以BCR－Abl驅動之細胞系K562中增殖的效力。測量在5000、1000、333、111、37及0nM之伊馬替尼或化合物72的濃度下以pBCR－Abl、pSTAT5、pCrkL或GAPDH處理之K562萃取物的免疫轉漬的結果。該分析顯示化合物72及伊馬替尼二者能夠抑制BCR－Abl與其基質STAT5與CrkL的自磷酸化。根據增殖數據，化合物72更具有抑制這些基質磷酸化的效力。

實施例G

化合物72及74的物理特性、代謝分佈及安全性分佈 1.溶解度測定將溶解度測定結果顯示在表2中。

以比較方式，發現WO 2004/078116的實施例94及138之化合物在pH 6.5及7.4下的溶解度為<0.001毫克/毫升。

2.CYP抑制分析(螢光，LC－MS) CYP3A4、CYP2C19及CYP2C9之IC₅₀ 值係藉由使用匯聚的人肝脂質體(n＝1)的液相色層分離法/質譜法(LC/MS)測量與對照組相比較的特殊基質對內標準的代謝物形成之比而衍生。CYP2D6及CYP1A2之IC₅₀ 值係藉由測量與市售可取得的P450－同型特殊的螢光探針及重組蛋白質(n＝1)之對照組相比較之相對螢光而衍生。結果顯示在表3中。

3.脫靶毒性分析分析化合物72在10μM下對抗下列名單的28個受體、離子通道及轉運蛋白的結合(配位基置換分析)。

在篩選的28個分子實體之中，只顯示鈉通道(位置2)會與化合物顯著地交互作用(>50%置換)。

4.安全性評定分析 hERG分析係使用標準的膜片鉗模式執行。AMES分析(細菌回復突變試驗)係根據該模式執行。在有/沒有S9活化之0.5－5000微克/試驗盤下測試化合物72。在試管內及活體內微核分析係根據該模式執行。將結果顯示在表4中。

5.耐受性研究小鼠(CD－1品種，每一服藥組的n＝5)以10、30或100毫克/公斤BID之化合物72(如化合物74)服藥14天。評定在整個研究期間的重量減輕。在最後一天移出血液用於臨床化學性(白蛋白、鹼性磷酸酶、ALT、澱粉酶、BUN、鈣、膽固醇、肌酸酐、葡萄糖、磷酸鹽、總膽紅素、TP、球蛋白)。將結果顯示在表5中。未觀察到任何化合物相關的致死率。在該研究中，甚至在100毫克/公斤下未發現任何劑量引起的毒性(DLT)，因此，未鑑證最大耐受劑量(MTD)。

實施例H

化合物72在齧齒動物及靈長動物中的藥物動力學使用無房室(模式無關性)方法分析如下所述自所有種類而衍生的血漿濃度時間曲線。分別就如下的小鼠、大鼠及猴子提供清除率(Cl)、經計算的萃取率百分比(ER %)、分佈體積(Vz)、時間對1/2－最大濃度(t_1/2 )及暴露(AUC，曲線下的面積)值。

1.小鼠：在純種(Balb/c)雌性小鼠中(n＝3/時間點)以藥丸靜脈內(IV，1毫克/公斤)或口服(PO，10毫克/公斤)投予之後，檢查化合物72的藥物動力學。血液樣品係在PO服藥之後15和30分鐘及1、2、4、8和24小時及以IV投予1、2、4及8小時時獲得。

IV：1毫克/公斤口服：10毫克/公斤Cl＝2.6毫升/分鐘/公斤 AUC＝10.5微克－小時/公斤ER＝2.8% F＝16% V_z ＝0.085公升/公斤 C_max ＝1.8微克/毫升T_1/2 ＝3.9小時AUC＝6.6微克－小時/公斤

2.大鼠：在雄性史－道二氏(Sprague－Dawley)大鼠中(n＝3/時間點)以藥丸IV(2毫克/公斤)或PO(30毫克/公斤)投予之後，檢查化合物72的藥物動力學。血液係在與小鼠PK研究所列之相同的時間取樣。

IV：1毫克/公斤口服：30毫克/公斤Cl＝3.2毫升/分鐘/公斤 AUC＝35微克－小時/公斤ER＝4.6% F＝15% V_Z ＝0.048公升/公斤 C_max ＝4.5微克/毫升T_1/2 ＝3.9小時AUC＝4.7微克－小時/公斤

3.猴子：在雄性食蟹猴中(n＝3/時間點)以藥丸IV(2毫克/公斤)或PO(10毫克/公斤)投予之後，檢查化合物72的藥物動力學。血液係在與小鼠PK研究所列之相同的時間取樣。

IV：1毫克/公斤口服：10毫克/公斤Cl＝8.8毫升/分鐘/公斤 AUC＝7.6微克－小時/公斤ER＝20% F＝38% V_Z ＝3.2公升/公斤 C_max ＝0.26微克/毫升T_1/2 ＝4.6小時AUC＝4.1微克－小時/公斤

實施例I

在膠原誘導性關節炎(CIA)的大鼠模式中的化合物72 在該研究中服用前藥型式(化合物74)的化合物72。將雌性路易士(Lewis)大鼠(200公克)(每一處理組的n＝8)以II型膠原/傅氏(Freund’s)不完全佐劑注射(0.6毫克膠原的300微升注射液，背側面，第0天及第6天)。使動物服用：(1)媒劑：5毫升/公斤，PO，BID x 7；(2)化合物72：0.3、1、3或10毫克/公斤，PO，BID x 7；或(3)ENBREL：10毫克/公斤，SC，第1及第4天。ENBREL充當正對照組。化合物在第11－18天投予。在第11天及之後每天測量踝關節直徑(圖70)。在研究結束時，測定足掌重量及顯微鏡組織學。將後足掌及膝蓋二者取下，將後足掌稱重，並與膝蓋放入福馬林中。在固定劑中1－2天及在脫鈣劑中4－5天之後，將踝關節及膝蓋處理、包埋、切片及以甲苯胺藍染色。以0－5分評等踝關節及膝蓋的發炎性、血管翳形成及骨再吸收性。

結果顯示化合物72以劑量依賴方式改進所有與該疾病模式有關聯的參數。化合物72對踝關節直徑及組織病理學分別具有1.5及3.0毫克/公斤之表觀ED₅₀ 。在10毫克/公斤時，化合物72在研究結束時誘導疾病退化。

實施例J

化合物72抑制在活體內的血管生成在該研究中服用前藥型式(化合物74)的化合物72。將雌性CD－1小鼠(19－20公克)(每一處理組的n＝4)經皮下植入含有1500毫微克/毫升之bFGF或0毫微克/毫升之bFGF作為負對照組的500微升生長因子減低之基質膠(matrigel)。將試驗化合物以指示的劑量及時間表經口服強飼投予。使動物服用：(1)媒劑：30mM磷酸鹽緩衝液，10毫升/公斤，PO，BID x 7；(2)化合物72：10、30或100毫克/公斤之活性藥物，PO，BID x 7；或(3)SU11248：(舒尼替尼(Sutent))40毫克/公斤，PO，QD x 7。舒尼替尼為KDR抑制劑及充當在該研究中的正藥物對照組。使動物在第7天安樂死。收成基質膠，稱重及在以磷酸鹽緩衝之食鹽水(pH 7.4)中均化。將樣品離心及以比色反應分析所得溶胞物的血紅素濃度。化合物72以劑量依賴方式抑制bFGF－誘導之血管生成。在10毫克/公斤時，血管生成受到72%的顯著抑制(p<0.05，杜奈特氏(Dunnett’s)多重比較試驗)。

實施例K

化合物72抑制以BCR－Abl驅動之腫瘤在該研究中服用前藥型式(化合物74)的化合物72。將雌性Sci－beige小鼠(17－20公克)(每一處理組的n＝8)在右脅腹上經皮下植入107 K562細胞。當腫瘤達到200±50立方毫米尺寸時，則將試驗化合物以指示的劑量及時間表經口服強飼投予。使動物服用：(1)媒劑：20% Trappsol，10毫升/公斤，PO，BID x 7；(2)化合物74：30或100毫克/公斤之活性藥物，PO，BID或QD x 7；或(3)伊馬替尼(GLEEVEC)：400毫克/公斤，PO，BID x 7。伊馬替尼為已知的Abl抑制劑及充當在該研究中的正藥物對照組。在整個研究期間監控腫瘤尺寸及體重。將結果顯示在表6中。

化合物74在該模式中有效。投予30毫克/公斤BID或100毫克/公斤QD造成腫瘤停止，並當劑量增加至100毫克/公斤BID時，則發生94%之腫瘤退化及5或8隻動物具有完全反應(100%之腫瘤退化)。化合物72具有良好的耐受性，在整個處理程序期間引起低於10%之重量減輕。

實施例L

在多發性骨髓瘤模式中的化合物72 在該研究中服用前藥型式(化合物74)的化合物72。將雌性Sci－beige小鼠(17－20公克)(每一處理組的n＝8)在右脅腹上經皮下植入具有媒劑(20% Trappsol，10毫升/公斤，PO，BID x 14)或化合物74(100毫克/公斤之活性藥物，PO，BID x 14)的15 x 106 RPMI 8226細胞。當腫瘤達到200±50立方毫米尺寸時，則將試驗化合物以指示的劑量及時間表經口服強飼投予。在整個研究期間監控腫瘤尺寸及體重，並評估化合物72抑制腫瘤生長(% TGI＝(1－T/C)x 100)的能力。將結果顯示在表7中。化合物72(以成為化合物74的前藥型式服藥)在整個該研究過程對腫瘤生長得到在統計學上顯著的效果。這些數據暗示在該研究中所觀察的化合物72具有附加或獨立於其抑制p38的能力。化合物72具有良好的耐受性，在整個處理期間引起低於10%之重量減輕。

將多發性骨髓瘤細胞系RPMI 8226以各種濃度的蛋白酶體抑制劑MG－132(充當正對照組)或化合物72在37℃，5% CO₂ 下處理72小時。接著使用CellTiter Blue(Promega)測量細胞存活率，以測定每一種化合物的IC₅₀ 值(表8)。以整個指示的濃度範圍內的化合物72處理不具抗增殖性。MG－132得到在自製測試的歷史範圍內的IC₅₀ (表8)。這些數據極力地指示由於額外的腫瘤效果而有可能在活體內發現就化合物72所觀察到的TGI效果。該等角色與暗示p38與Tie2二者的活性可為該類型腫瘤在活體內生長/存活的標準所發表的報告一致。

實施例M

化合物72對抗VEGFR2的細胞活性使HUVEC經2小時匱乏血清，接著在以20毫微克/毫升之VEGF刺激5分鐘之前，先以不同濃度的化合物72或對照組VEGFR2抑制劑((Z)－3－[(2,4－二甲基－3－(乙氧羰基)吡咯－5－基)亞甲基]吲哚－2－酮)處理60分鐘。準備各種治療的溶胞物，並以對Tyr1175上磷酸化之VEGFR2特殊的抗體免疫轉漬。接著將所得化合物72及對照組抑制劑VEGFR1之污漬使用LI－COR Aeriustm成像劑成像及定量。磷酸－VEGFR2訊號係以作為裝載對照組的GAPDH標準化。接著使用這些值利用4－參數曲線擬合模式得到化合物72及對照組VEGFR2抑制劑VEGFR1之IC₅₀ 值。

化合物72抑制在HUVEC中的血管內皮受體II型(VEGFR2)的自磷酸化。結果顯示以化合物72處理會在酪胺酸殘基1175上引起以劑量依賴方式抑制VEGFR2的自磷酸化，具有48nM之IC₅₀ 。

製備實施例

在以下所述之實施例中，所有的溫度設定為攝氏度數，除非有其它另外的指示。試劑係購自市場上的供應商，如Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI或Maybridge，並以未進一步純化予以使用，除非有其它另外的指示。四氫呋喃(THF)、N,N－二甲基甲醯胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)、甲苯、二烷及1,2－二氟乙烷係購自Aldrich的安全密封瓶及以收到的狀態使用。

下列所述之反應通常係在正氮氣或氬氣壓力下或以在無水溶劑中的乾燥試管(除非有其它另外的說明)進行，並且反應燒瓶典型地配備用於經由注射器引入基質及試劑之膠墊。將玻璃器具以烘箱乾燥及/或以加熱乾燥。

管柱色層分離法係在具有矽膠管柱之Biotage系統上(製造商：Dyax Corporation)或在二氧化矽SepPak匣上(Waters)進行。

¹ H－NMR光譜係記錄在400MHz下操作的Varian儀器上。¹ H－NMR光譜係以成為CDCl₃ 溶液使用氯仿作為參考標準(7.25ppm)所獲得(以ppm報告)。若需要時，使用其它的NMR溶劑。在報告峰波多重性時，使用下列縮寫：s(單峰)、d(二重峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)、dd(雙二重峰)、dt(雙三重峰)。在提供偶合常數時，則以赫茲(Hz)報告。

實施例1

1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素(72)之製備：方法1 一種根據方法1之化合物(72)的合成顯示在流程1，步驟A至J中。

步驟A：2－(苯甲氧基)－5－氟苯甲腈62之製備。在配備機械攪拌器及溫度探針的12公升4頸圓底燒瓶中，將在DMF(1.95公升)中的氫化鈉(74公克，1.82莫耳)之懸浮液經由滴液漏斗經30分鐘緩慢加入在冰浴中於氮氣下的苯甲醇(142公克，1.3莫耳)中。將混合物在冰浴中(0℃)攪拌120分鐘，經35分鐘經由滴液漏斗加入在DMF(650毫升)中的2,5－二氟苯甲腈(180公克，1.3莫耳)之溶液。將所得混合物溫熱至達室溫。在2小時之後，將混合物在冰浴中(4℃)冷卻及以飽和NH₄ Cl(130毫升)中止，接著加入水(2.6公升x 3)。將漿液在室溫下攪拌隔夜，並將沉澱物過濾及以水(650毫升x 3)清洗。將固體在真空中經2天乾燥，得到292公克(99.3%)所欲化合物。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 7.78(dd,1H,J＝3.2Hz,J＝8.2Hz),7.5－7.76(m,1H),7.35－7.48(m,6H),5.28(s,2H)。

步驟B：5－氟基－2－羥苯甲腈63之製備：將無水的10% Pd/C(2.48公克)放入在N₂ 下的5公升燒瓶中。在N₂ 下緩慢加入在甲醇(2.34公升)中的2－(苯甲氧基)－5－氟苯甲腈(148公克，651毫莫耳)之溶液。以真空移出燒瓶的空氣，並將燒瓶以H₂ (氣球)裝入三次。將混合物在室溫下攪拌1小時。重複上述程序兩次以上，以推動反應完成。將混合物在室溫下再攪拌2小時。將混合物在N₂ 下經由矽藻土墊過濾及以EtOAc(150毫升x 2)清洗。將鈀廢料以水(50毫升)沖洗及丟棄。將過濾物濃縮，得到成為黃色固體的(94.6公克，106%)所欲化合物。偵測MS(APCI－)m/z 137(M－1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 11.07(br,1H),7.58(dd,1H,J＝3.2Hz,J＝8.2Hz),7.43(m,1H),6.91－7.03(dd,1H,J＝4.5Hz,J＝9.2Hz)。

步驟C：5－氟基－2－(4－甲基－3－硝苯氧基)苯甲腈64之製備：在配備機械攪拌器、冷凝器及J－Kem溫度探針的3頸5公升燒瓶中，將在N,N－二甲基乙醯胺(500毫升)中的5－氟基－2－硝甲苯(158公克，1.02莫耳)之溶液加入在室溫下在N,N－二甲基乙醯胺(573毫升)中的5－氟基－2－羥苯甲腈(147公克，1.07莫耳)與碳酸鉀(163公克，1.2莫耳)之混合物中。將混合物加熱至100℃。在8小時之後，將反應混合物冷卻至室溫，並在冰浴中加入水(3400毫升)。將沉澱物過濾，以水(1073毫升x 2)清洗及在真空中(40℃)乾燥，得到成為棕色固體的(264公克，90%)所欲化合物。偵測MS(APCI－)m/z 272(M－1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 8.10(d,1H,J＝9Hz),7.41－7.48(m,1H),7.38(m,1H),7.07－7.14(m,1H),6.88－7.10(m,1H),2.63(s,3H)。

步驟D：2－(3－胺基－4－甲基苯氧基)－5－苯甲腈65之製備：在配備機械攪拌器、冷凝器及J－Kem溫度探針的4頸12000毫升圓底燒瓶中，將2－(3－胺基－4－甲基苯氧基)－5－苯甲腈(247公克，907毫莫耳)及Zn粉(297公克4.5莫耳)放入且懸浮在1：1之MeOH/THF(2.2公升)中。經40分鐘經由加料漏斗緩慢加入飽和水性NH₄ Cl(1.6公升)(使內溫維持在60℃以下)。將反應混合物冷卻至周圍溫度及在室溫下攪拌1小時。以過濾移除鋅粉及將濾塊以EtOAc(450毫升x 3)清洗。加入飽和水性NH₄ OAc(1500毫升，自2公斤NH₄ OAc及4公升H₂ O所製備)及H₂ O(1500毫升x 2)。將過濾物以旋轉蒸發器濃縮，直到大部分的水維持不變為止。將黃褐色固體過濾及以H₂ O(1500毫升x 4)清洗，並在真空中乾燥，以提供211.5公克(96%)所欲化合物。偵測MS(APCI＋)m/z 243(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.38(m,1H),7.18(m,1H),6.65－6.85(m,5H),3.60(br,2H),2.17(s,3H)。

步驟E：2－(1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲腈66之製備：在配備機械攪拌器及J－KEM溫度探針的6公升圓底燒瓶中，將2－(3－胺基－4－甲基苯氧基)－5－苯甲腈(209公克，862毫莫耳)及在醋酸(1.75公升)/水(862毫升)中的NH₄ BF₃ 之冷溶液(0℃)以濃縮HCl(359毫升)逐滴處理2分鐘。將漿液在冰浴中攪拌30分鐘及加入亞硝酸鈉。將反應混合物在0℃下攪拌1小時及接著溫熱至室溫。在室溫下攪拌3小時之後，將溶劑以旋轉蒸發器移除及與甲苯(200毫升x 2)共沸。將殘餘物在真空中經隔夜乾燥。將固體懸浮在丙酮(200毫升)及EtOAc(200毫升)中，並以旋轉蒸發移除溶劑。將殘餘物懸浮在EtOAc(200毫升)中及以旋轉蒸發移除。將殘餘物懸浮在EtOAc(1145毫升)中及一次加入醋酸鉀(254公克2.6莫耳)。將混合物在室溫下攪拌20小時及過濾。將濾塊以EtOAc(500毫升x 6)清洗。將合併的過濾物濃縮。將殘餘物懸浮在EtOAc(500毫升)及庚烷(500毫升)中。將黃色固體過濾(141.3公克)。將母液濃縮及自MTBE/己烷(100毫升/100毫升)再結晶，以供應20.1公克。將第二母液濃縮及以MTBE/庚烷(100毫升/100毫升)濕磨，得到額外14.28公克。合併收成物得到176公克(81%產量)所欲化合物。偵測MS(APCI＋)m/z 254(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 13.38(br,1H),8.07(s,1H),7.94(dd,1H,J＝3.1Hz,J＝8.2Hz),7.64(d,1H,J＝9Hz),7.54(m,2H),7.21(dd,1H,J＝9Hz),6.96(dd,1H,J＝4.3Hz,J＝9.3Hz)。

步驟F：2－(1－(2,2－二甲氧基乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲腈67之製備：將2－(1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲腈(5.000公克，19.7毫莫耳)懸浮在N,N－二甲基乙醯胺(50毫升)中，並在室溫下分批加入氫化鈉(0.684公克，25.7毫莫耳)。一次逐滴加入2－溴基－1,1－二甲氧基乙烷(3.49毫升，29.6毫莫耳)及將反應混合物加熱至80℃經18小時。將反應混合物冷卻至室溫及在減壓下濃縮，以供應粗物質，將其分溶在EtOAc與飽和水性NH₄ Cl之間。將合併的有機層以水(3 x)及食鹽水清洗，並乾燥(MgSO₄ )及接著在減壓下濃縮，以供應粗物質。將粗產物以快速管柱色層分離法(溶離劑為25% EtOAc/己烷)純化，以供給3.88公克(57.6%)所欲化合物。N－2異構物未被分離。偵測MS(APCI＋)m/z 342(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.98(s,1H),7.54(d,1H,J＝9Hz),7.36(m,2H),7.16(m,2H),6.82(dd,1H,J＝4.3Hz,J＝9.3Hz),4.76(t,1H,J＝5.3Hz),4.49(d,2H,J＝5.3Hz),3.41(s,6H)。

步驟G：(2－(1－(2,2－二甲氧基乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯基)甲胺68之製備：將在THF(100毫升)中的2－(1－(2,2－二甲氧基乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲腈(3.80公克，11.13毫莫耳)逐滴加入在THF(100毫升)中的氫化鋰鋁(0.6338公克，16.70毫莫耳)之0℃的攪拌懸浮液中。將反應混合物維持在0℃，直到達成原料全部加完為止。將反應混合物溫熱至周圍溫度及攪拌，直到以HPLC分析發現原料全部消耗為止。將反應混合物逐滴加入飽和水性羅雪(Rochelle’s)鹽之室溫下的攪拌溶液中。將兩相混合物快速攪拌30分鐘，直到鋁鹽成為溶液為止。將層分開及將水層以更多EtOAc萃取。將合併的有機物乾燥(MgSO₄ )及在減壓下濃縮，以供應3.73公克(97%)粗產物，使用未進一步純化之該產物。偵測MS(APCI＋)m/z 346(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.90(s,1H),7.48(d,1H,J＝9Hz),6.9－7.15(m,5H),4.76(t,1H,J＝5.3Hz),4.49(d,2H,J＝5.3Hz),3.88(s,2H),3.36(s,6H)。

步驟H：1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(2－(1－(2,2－二甲氧基乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲基)尿素70之製備：將(2－(1－(2,2－二甲氧基乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯基)甲胺(2.00公克，5.791毫莫耳)、3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基胺基甲酸2,2,2－三氯乙酯(3.516公克，8.686毫莫耳)及N,N－二異丙基乙胺(3.026毫升，17.37毫莫耳)懸浮在N,N－二甲基乙醯胺(50毫升)中及在80℃下加熱隔夜。將反應混合物在減壓下濃縮，並將殘餘物以EtOAc及飽和水性NH₄ Cl稀釋。將有機物以水(3 x)及食鹽水清洗,乾燥(MgSO₄ )及接著在減壓下濃縮，以供應粗物質，將其以快速管柱色層分離法(溶離劑為35－45% EtOAc/己烷)純化。在溶劑蒸發之後，獲得成為淡黃色泡沫的所欲產物(2.57公克，74%)。偵測MS(APCI＋)m/z 602(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 7.88(s,1H),7.43(d,1H,J＝9Hz),6.72－7.30(m,9H),6.18(s,1H),6.01(br,1H),5.47(t,1H,J＝6.1Hz),4.76(t,1H,J＝5.3Hz),4.44(t,4H,J＝5.6Hz),3.38(s,6H),2.37(s,3H),1.30(s,9H)。

步驟I：1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－酮乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素71之製備：將1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(2－(1－(2,2－二甲氧基乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲基)尿素(0.500公克，0.8324毫莫耳)溶解在室溫下的二氯甲烷中，並將碘基三甲基矽烷(0.3554毫升，2.497毫莫耳)逐滴加入攪拌的溶液中。將反應混合物以HPLC分析監控，並在未偵測到任何原料時，將混合物以二氯甲烷稀釋，並以10%水性Na₂ S₂ O₄ 、飽和水性NaHCO₃ 及食鹽水清洗，乾燥(MgSO₄ )及在減壓下濃縮，以供應536毫克(定量產率)粗產物，使用未進一步純化之該產物。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 9.76(s,1H),7.97(s,1H),6.78－7.30(m,10H),6.17(s,1H),5.99(br,1H),5.44(q,1H,J＝6.1Hz),4.46(m,4H),2.35(s,3H),1.34(s,9H)。

步驟J：1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素72之製備：將1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－酮乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯基)甲基)尿素(2.179公克，3.929毫莫耳)懸浮在MeOH(40毫升)中，並在室溫下以硼氫化鈉(0.7432公克，19.64毫莫耳)分批處理。將反應混合物在室溫下攪拌，直到以HPLC分析觀察到原料全部轉化成產物為止。將反應混合物在減壓下濃縮，並接著以飽和水性NH₄ Cl稀釋及萃取至二氯甲烷中。將有機物乾燥(MgSO₄ )及在減壓下濃縮，以供應粗物質，將其以快速管柱色層分離法(溶離劑為2－6% iPrOH/DCM)純化，以提供1.21公克(55%)所欲化合物。偵測MS(APCI＋)m/z 557(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.29(s,1H),7.97(s,1H),7.68(d,1H,J＝9.1Hz),7.35(s,1H),6.85－7.4(m,8H),6.24(s,1H),4.87(t,1H,J＝5.4Hz),4.43(t,1H,J＝5.6Hz),4.28(d,1H,J＝5.9Hz),3.80(q,1H,J＝5.5Hz),2.35(s,9H)。

實施例2

磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯(74)之製備：方法1 一種根據方法1之化合物(74)的合成顯示在流程1，步驟K至L中。

步驟K：2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－5－基)乙基磷酸二苯甲酯73之製備：將1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－((5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯基)甲基)尿素(0.357公克，0.6414毫莫耳)、二異丙基次磷酸亞醯胺酸二苯酯(0.2970毫升，0.9620毫莫耳)及2H－四唑(0.07189公克，1.026毫莫耳)懸浮在DMF(10毫升)中及在室溫下攪拌，直到TLC(10：1之DCM－Et₂ O)分析顯示原料全部消耗為止。加入第三丁基過氧化氫(0.4439毫升，3.207毫莫耳)及接著以HPLC分析監控反應。一旦完成反應時，加入10%水性Na₂ S₂ O₃ 及將反應混合物攪拌10分鐘。將反應混合物倒入飽和水性NaHCO₃ 中及萃取至EtOAc中。將合併的有機物以水(2 x)及鹽水清洗。將有機物乾燥(MgSO₄ )及在減壓下濃縮，以供應粗物質，將其以快速管柱色層分離法(溶離劑為30－40% EtOAc/己烷)純化，以提供458毫克(87%)所欲化合物。偵測MS(APCI＋)m/z 817(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.85(s,1H),6.7－7.35(m,10H),6.18(s,1H),6.16(s,1H),4.62(s,1H),5.36(t,1H,J＝6Hz),4.81(d,4H,J＝8.2Hz),4.54(t,2H,J＝5.1Hz),4.39(m,4H),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。

步驟L：磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯74之製備：將磷酸2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯(1.920公克，2.35毫莫耳)懸浮在EtOH(0.05M，50毫升)中，並加入環己－1,4－二烯(3.56毫升，82.14毫莫耳)及10% Pd/C(20%/重量，0.384公克)。將反應混合物回流隔夜。將反應混合物經由GF紙過濾及以MeOH清洗。將有機層在減壓下濃縮，以供應粗物質，將其溶解在MeOH中及通過Gellman acrodisk(0.45微米)過濾器，以移除少量鈀雜質。在溶劑蒸發之後，將所得膠以CH₃ CN濕磨，並以過濾收集所形成的固體及在高真空下經3小時乾燥，以提供1.21公克(89%)所欲化合物。偵測MS(APCI＋)m/z 637(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.30(s,1H),8.00(s,1H),7.71(d,1H,J＝9Hz),6.88－7.37(m,10H),6.24(s,1H),4.61(br,1H),4.28(d,2H,J＝5.7Hz),4.19(dd,2H,J＝5.2Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。

實施例3

1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－((5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯基)甲基)尿素(72)之製備：方法2 一種根據方法2合成化合物(72)的替換方法顯示在流程2，步驟A至F中。

步驟A：2－(4－胺基－3－甲基苯氧基)－5－氟苯甲腈65之製備。在已抽氣及回充氬氣的3公升4頸燒瓶中，將2,5－二氟苯甲腈(295.3毫升，812.0毫莫耳)及4－胺基－3－甲酚(100.0公克，812.0毫莫耳)溶解在室溫下以快速攪拌的無水DMSO(2.75M)中。將溶液抽氣/回充氬氣(3 x)。加入碳酸鉀(185.2公克，1340毫莫耳)(－325網目)。將反應混合物抽氣/回充氬氣(3 x)及溫熱至80℃(內部探針)經16小時。TLC顯示全部轉化。將反應混合物冷卻至室溫及緩慢倒入以快速攪拌的2公升冰水中。將圓底燒瓶中的殘餘物重複溶解在水中及倒入冰水中，直到達成3公升總體積及所有的固體在冰水中為止。將懸浮液快速攪拌2小時，使其達到室溫。以過濾收集棕色固體，以水(3公升)清洗，以空氣乾燥，以乳膠阻隔膜乾燥及在40℃之高真空下經44小時乾燥，以提供成為黃褐色固體的194公克(99%)所欲產物。偵測MS(APCI＋)m/z 243(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.38(m,1H),7.18(m,1H),6.65－6.85(m,5H),3.60(br,2H),2.17(s,3H)。

步驟B：2－(1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲腈66之製備：在含有大機械攪拌棒的500毫升單頸燒瓶中，將2－(4－胺基－3－甲基苯氧基)－5－氟苯甲腈(274.5毫升，219.6毫莫耳)溶解在氯仿(0.8M)中及在周圍溫度下以醋酸鉀(25.86公克，263.5毫莫耳)處理。將反應混合物冷卻至0℃及以經由加料漏斗的醋酸酐(62.28毫升，658.8毫莫耳)處理5分鐘。反應配備回流冷凝器，以額外100毫升氯仿處理及加熱至40℃。經由加料漏斗逐滴加入亞硝酸異戊酯(58.74毫升，439.2毫莫耳)。將加料漏斗以60毫升＋40毫升氯仿沖洗，移除及換以玻璃塞。將反應加熱至回流20小時，冷卻至室溫及在真空中濃縮成棕色固體。在高真空下經30分鐘乾燥之後，將棕色固體懸浮在1公升水中，劇烈攪拌15分鐘及過濾。將所得橘－棕色固體(83公克)溶解在400毫升MeOH中及在室溫下以1.0M氫氯酸(241.6毫升，241.6毫莫耳)處理。使混合物配備回流冷凝器及溫熱至70℃經20小時。將反應冷卻至0℃及加入1.0M氫氧化鈉(252.6毫升，252.6毫莫耳)，接著加入水(250毫升)。將所得黃色懸浮液在冰浴中攪拌10分鐘及接著允許沉積。將懸浮液過濾，以水(1公升)清洗，以空氣乾燥，以乳膠阻隔膜乾燥及在40℃之高真空下經36小時乾燥，以提供成為自由流動的黃褐色固體的50.7公克(91%)所欲產物。偵測MS(APCI＋)m/z 254(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 13.38(br,1H),8.07(s,1H),7.94(dd,1H,J＝3.1Hz,J＝8.2Hz),7.64(d,1H,J＝9Hz),7.54(m,2H),7.21(dd,1H,J＝9Hz),6.96(dd,1H,J＝4.3Hz,J＝9.3Hz)。

步驟C：2－(5－(2－氰基－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯77之製備：將2－(1H－吲唑－5－基氧基)－5－氟苯甲腈(40.7公克，160.7毫莫耳)溶解在400毫升DMF中，並將溶液放入水浴中(室溫)。加入碳酸銫(157.1公克，482.2毫莫耳)。在水浴中30分鐘之後，逐滴加入2－溴基醋酸甲酯(33.47毫升，353.6毫莫耳)。將混合物在室溫下攪拌4小時。將水(400毫升，輕微放熱)加入混合物中及將整個混合物轉移至2公升分液漏斗中(含有400毫升EtOAc)。將層分開，並將水層以EtOAc(3 x 200毫升)萃取。將合併的萃取物以水及食鹽水清洗，並將層分開。將有機層經MgSO₄ 乾燥，經由矽藻土墊過濾，在減壓下濃縮及在高真空下經1小時乾燥，以提供66.3公克黃褐色固體。將固體溶解在400毫升熱EtOAc中及在回流下以木炭處理10分鐘。將混合物經由矽藻土墊過濾及在減壓下濃縮。以過濾移除不可溶物質。將固體溶解在300毫升熱EtOAc中及加入300毫升己烷。將混合物冷卻至室溫。以過濾收集淺棕色固體，32.24公克(61.7%)。偵測MS(APCI＋)m/z 326(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 8.03(s,1H),7.41－7.36(m,3H),7.22－7.16(m,2H),6.81(dd,J＝4.29Hz,9.37Hz,1H),5.19(s,2H),3.79(s,3H)。

步驟D：2－(5－(2－胺甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯78之製備：將2－(5－(2－氰基－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯(10.00公克，30.74毫莫耳)放入2500毫升帕而(Parr)氫化容器中。加入甲醇(0.1M，310毫升)及濃縮HCl(25.62毫升，307.4毫莫耳)。加入10% Pd/C(2.0公克，脫氣類型)及將容器以氫氣沖洗(3次，未進行任何真空抽氣)。容器裝入在40 psi下的氫氣及留置在搖動器上18小時。將額外1.0公克10% Pd/C加入混合物中，並將混合物放回帕而氫化器中經額外18小時。將混合物經由矽藻土墊過濾及在減壓下濃縮(使浴溫維持在20℃以下)。將殘餘物與MeOH(3 x 100毫升)共沸。在第三次共沸之後，使浴溫上升至40℃。將殘餘物(油)在高真空下經2小時乾燥，以提供成為黃色固體的所欲產物(11.6公克，93.8%)。偵測MS(APCI＋)m/z 330(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.08(s,1H),6.84－7.76(m,6H),5.43(s,2H),4.8(br,2H),4.105(q,2H,J＝5.6Hz),3.68(s,3H)。

步驟E：2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯79之製備：將在二甲基乙醯胺(0.5M，88毫升)中的2－(5－(2－胺甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯二鹽酸鹽(17.5公克，43.51毫莫耳)之溶液在室溫下以3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基胺基甲酸2,2,2－三氯乙酯(17.96公克，44.38毫莫耳)及接著以二異丙基乙胺(30.3毫升，174毫莫耳)處理。將混合物在80℃下加熱隔夜，將混合物在真空中濃縮及將殘餘物分佈在EtOAc與飽和水性NH₄ Cl之間。將有機層分開及以鹽水清洗，經由IPS紙過濾，在真空中蒸發成棕色泡沫。將泡沫在醚中濕磨，並以過濾收集沉澱的固體，以提供22.55公克(89%)所欲化合物。偵測MS(APCI＋)m/z 585(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.3(s,1H),8.07(s,1H),7.68(d,1H,J＝8.9Hz),6.85－7.37(m,8H),6.24(s,1H),5.4(s,2H),4.28(d,2H,J＝5.8Hz),3.68(s,3H),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。

步驟F：1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－((5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯基)甲基)尿素72之製備：將在甲醇(0.1M，80毫升)的2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯(4.6公克，7.87毫莫耳)之溶液在室溫下以硼氫化鈉(893毫克，23.6毫莫耳)分批處理。將混合物在室溫下攪拌18小時，並在真空中蒸發溶劑，成深黃色殘餘物。將殘餘物分佈在二氯甲烷與飽和水性NH₄ Cl之間。將有機層經由IPS紙過濾，在真空中蒸發及在以2－10% iPrOH/DCM溶離之Biotage中純化。所欲部份在真空中蒸發成白色泡沫，2.97公克(68%)。偵測MS(APCI＋)m/z 557(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.29(s,1H),7.97(s,1H),7.68(d,1H,J＝9.1Hz),7.35(s,1H),6.85－7.4(m,8H),6.24(s,1H),4.87(t,1H,J＝5.4Hz),4.43(t,1H,J＝5.6Hz),4.28(d,1H,J＝5.9Hz),3.80(q,1H,J＝5.5Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。

實施例4

磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯(74)之製備：方法2 一種根據方法2合成化合物(74)的替換方法顯示在流程2，步驟G至H中。

步驟G：2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙基磷酸二－第三丁酯80之製備：將在DMF(0.2M，15毫升)中的1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－((5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯基)甲基)尿素(1.5公克，2.69毫莫耳)之溶液在室溫下以咪唑(183毫克，2.69毫莫耳)及咪唑鹽酸鹽(423毫克4.04毫莫耳)處理。在觀察到全部溶解之後，加入二異丙基次磷酸亞醯胺酸二－第三丁酯(1.28毫升，4.04毫莫耳)。在室溫下持續攪拌18小時。在室溫下緩慢加入過氧化氫(50%水性，0.535毫升，9.43毫莫耳)，並持續攪拌1小時。以LC及TLC偵測反應完成。將殘餘物分佈在二氯甲烷與10%水性Na₂ S₂ O₃ 之間。將水層以EtOAc(2 x)萃取。將合併的有機萃取物以鹽水清洗，經由IPS紙過濾，在真空中蒸發成黃色油。將油以DCM、3－5% MeOH/DCM溶離之矽膠塞純純化。所欲部份在真空中蒸發，以提供成白色泡沫的所欲產物，1.59公克(79%)。偵測MS(APCI＋)m/z 749(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.29(s,1H),8.01(s,1H),7.73(d,1H,J＝9.1Hz),6.79－7.35(m,8H),6.23(s,1H),4.62(t,2H,J＝4.7Hz),4.26(m,4H),2.35(s,3H),1.43(s,9H),1.25(s,18H)。

步驟H：磷酸二氫2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙酯74之製備：將在EtOH(0.2M，24毫升)中的2－(5－(2－((3－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)脲基)甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙基磷酸二－第三丁酯(3.66公克，4.89毫莫耳)之溶液在室溫下以5N HCl/iPrOH(2.93毫升，14.7毫莫耳)處理。在室溫下持續攪拌隔夜。將溶劑在真空中蒸發，並將殘餘物自甲苯及醚(2 x)共同蒸發。將米黃色泡沫溶解在MeOH中及緩慢倒入含有水的燒杯中。以過濾收集沉澱的固體，以提供2.83公克(91%)所欲產物。偵測MS(APCI＋)m/z 637(M＋1)。¹ H NMR(400MHz,DMSO－d₆ )δ 8.30(s,1H),8.00(s,1H),7.71(d,1H,J＝9Hz),6.88－7.37(m,10H),6.24(s,1H),4.61(br,1H),4.28(d,2H,J＝5.7Hz),4.19(dd,2H,J＝5.2Hz),2.35(s,3H),1.25(s,9H)。

實施例5

5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲腈(78A) 將NaBH₄ (24.42公克)以5份各5公克經90分鐘加入在MeOH(370毫升)中的2－(5－(2－氰基－4－氟苯甲基)－1H－吲唑－1－基)醋酸甲酯77(如實施例3所製備)(60.0公克，184.4毫莫耳)之溶液中。在最後加入NaBH₄ 時，使溫度從25℃上升至44.7℃。將混合物在真空下濃縮。將飽和NH₄ Cl(600毫升)及EtOAc(600毫升)加入濃縮物中，並將混合物劇烈攪拌1小時。將層分開及將水層以EtOAc(2 x 100毫升)萃取。將合併的有機物以飽和NH₄ Cl(2 x 100毫升)、水(200毫升)及鹽水(500毫升)清洗，經MgSO₄ 乾燥，經由GF/F紙過濾及濃縮成鮮橘色固體。將粗固體溶解在CH₂ Cl₂ (1公升)中及以劇烈攪拌加入己烷(2.25公升)。形成淺棕色固體，並在攪拌30分鐘之後收集固體及在高真空下乾燥，得到45.5公克。將過濾物在減壓下濃縮。將該物質再溶解在CH₂ Cl₂ (100毫升)中及加入己烷(200毫升)。經由過濾收集所得固體(6.2公克)。將兩次收成物合併，得到51.7公克(94.3%)78A。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.99(s,1H),7.49(d,1H),7.39－7.36(m,2H),7.21－7.16(m,2H),6.90(dd,1H),4.49(t,2H),4.17－4.13(m,2H),2.81(t,1H)。

實施例6

2－(5－(2－胺甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙醇(79A)(方法A) 將5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲腈78A(如實施例5所製備)(80.0公克，269.1毫莫耳)、Pd(OH)₂ (32公克，40%裝載)、EtOH(5公升)及濃縮HCl(224毫升，2691毫莫耳)加入250毫升帕而搖動器中。將容器密封，以氫沖洗，抽氣及裝入氫氣至180 psi。使內部溫度下降至18℃，並在攪拌23小時之後，以HPLC判斷反應完成。將上述反應混合物移出，並以80公原料重複整個順序兩次及接著以53.2公克原料重複。將合併的反應混合物(4次反應)經由GF/F過濾及將過濾物在減壓下濃縮。將殘餘物溶解在1N HCl(3.0公升)中及以EtOAc(3 x 2公升)清洗。將EtOAc(2公升)加入水層中，並將相劇烈攪拌10分鐘及接著移出有機層。將該步驟重複2次以上及將水層轉移至冷卻之燒瓶中(冰浴)。將NaOH小粒(40公克x 11)以使得溫度不會上升至35℃以上的方式加入酸性水性混合物中。一旦pH為~14時，則將混合物轉移至分液漏斗中及以CH₂ Cl₂ (4 x 1公升)萃取。將合併的萃取物以水(2 x 1公升)及食鹽水(2 x 1公升)清洗。將萃取物經MgSO₄ (~250公克)乾燥，經由GF/F過濾及在減壓下濃縮。將濃縮物溶解在CH₂ Cl₂ (3.5公升)中及加入己烷(4公升)。在加入最初的2公升己烷之後，形成棕色固體，在攪拌1小時之後，經由過濾收集固體及將濾塊以1：2之CH₂ Cl₂ /己烷(500毫升)清洗。將濾塊在真空下乾燥，得到165.1公克(55.6%)79A。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.90(s,1H),7.42(d,1H),7.17－7.12(m,3H),6.87(td,1H),6.80(dd,1H),4.46(t,2H),4.12(t,2H),3.86(s,2H),1.87(br s,1H)。

實施例7

2－(5－(2－胺甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙醇(79A)(方法B) 將NaBH₄ (636毫克，16.8毫莫耳)分批(2－3次)加入在MeOH(30毫升)中的5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲腈(1.0公克，3.36毫莫耳)及NiCl₂ ．6H₂ O(148毫克，0.336毫莫耳)之溶液中，並將反應攪拌3小時。緩慢加入Na₂ CO₃ 飽和溶液(15毫升)，並將混合物在形成細固體期間攪拌75分鐘。將反應混合物經由GF/F過濾及將濾塊以MeOH(20毫升)清洗。將過濾物在真空下濃縮成約15毫升，加入醋酸異丙酯(20毫升)及將混合物濃縮。將醋酸異丙酯(20毫升)加入濃縮物中及將混合物攪拌5分鐘。將相分開及將有機層以10%鹽水(20毫升)清洗。加入檸檬酸(1.0M，20毫升)及將相劇烈混合。移出有機層，並將水層以醋酸異丙酯(20毫升)及EtOAc(20毫升)清洗。將醋酸異丙酯(20毫升)加入水層中，並加入50% NaOH(1毫升)。將相劇烈混合及移出水層。將有機物以10%鹽水(20毫升)清洗，經Na₂ SO₄ 乾燥及濃縮成850毫克(85%)。

實施例8

3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基胺基甲酸苯酯將NaOH溶液(2.5M，269毫升)加入在10.9℃下在EtOAc(1公升)中的3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－胺(102.9公克，448.9毫莫耳)之溶液中，並將兩相反應混合物溫熱至15.9℃及接著使其穩定。一次加入氯基甲酸苯酯(98.4公克，156.5毫莫耳)，並使溫度上升至25.5℃及接著使其穩定。移除冰浴及以HPLC監控反應。在1小時之後，加入額外25毫升2.5M NaOH。將反應混合物攪拌隔夜及接著以EtOAc(200毫升)稀釋。將有機層以鹽水(1公升)清洗，經Na₂ SO₄ (200公克)乾燥及濃縮成約400至500毫升EtOAc。將濃縮溶液溫熱至60℃。在固體溶解之後，在形成固體的期間緩慢加入庚烷(2公升)。在攪拌30分鐘之後，經由過濾收集固體及將濾塊以400－500毫升庚烷清洗。將濾塊在周圍溫度下的真空烘箱中乾燥，得到156.9公克(95.0%)標題化合物。¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )δ 7.39－7.31(m,6H),7.26－7.225(m,2H),7.13(brs,2H),6.96(brs,1H),6.47(brs,1H),2.42(s,3H),1.34(s,9H)。

實施例9

1－(3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基)－3－(5－氟基－2－(1－(2－羥乙基)－1H－吲唑－5－基氧基)苯甲基)尿素(72)：將3－第三丁基－1－對－甲苯基－1H－吡唑－5－基胺基甲酸苯酯(80.5公克，230毫莫耳)的DMA(350毫升)溶液加入在DMA(350毫升)中的2－(5－(2－(胺甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙醇(71.55公克，237毫莫耳)之4.1℃的溶液中。使溫度上升至18.4℃及使其穩定。移除冰浴及將反應攪拌2小時。加入額外一份2－(5－(2－(胺甲基)－4－氟苯氧基)－1H－吲唑－1－基)乙醇及將反應攪拌2小時。將反應混合物分溶在醋酸異丙酯(1.6公升)與水(2.4公升)之間。將水層移出，並將有機層以0.5N NaOH(2 x 2.4公升)及接著以飽和鹽水(1 x 2.4公升)清洗。將有機層經Na₂ SO₄ (300公克)乾燥及濃縮，得到110.8公克(86.6%)。

上述的描述被認為是本發明原理的說明而已。再者，因為許多修改及變化可輕易為那些熟習所屬技術領域者明白，所以不希望將本發明局限於如上述所示確切的建構及方法。因此，可訴諸所有適合的修改及同等物落在隨後以申請專利範圍所定義之本發明的範圍內。

當在本說明書及在下列的申請專利範圍中使用〝包含(comprise)〞、〝包含(comprising)〞、〝包括(include)〞、〝包括(including)〞及〝包括(include)〞用字時，則意欲以彼等詳細指明所陳述之特點、整數、組份或步驟的存在，但是彼等不排除一或多種其它特點、整數、組份、步驟或其群組的存在或添加。

Claims

一種具有式I之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。
一種製備如申請專利範圍第1項所定義之化合物的方法，其包含：(a)使式II化合物或其鹽(其中P¹ 代表氫原子或羥基保護基)與式III化合物 (其中Z代表脫離基或對應之異氰酸酯)偶合；或(b)使式IV化合物還原 (其中R^e 代表氫原子或醇之殘基)；接著移除任何保護基，若有需要時，形成醫藥上可接受之鹽。
根據申請專利範圍第2項之方法，其中Z為視需要被一或多種選自F、Cl、Br及NO₂ 之基團取代之芳氧基。
根據申請專利範圍第2項之方法，其中該式(II)化合物係藉由下列的方法而製備，該方法包含：(i)使式(V)化合物 (其中P² 代表氫或羥基保護基)在催化氫化條件下或在硼化鎳的存在下還原。
一種醫藥組成物，其包含根據申請專利範圍第1項之化合物及醫藥上可接受之載體或稀釋劑。
根據申請專利範圍第5項之醫藥組成物，其用於治療在哺乳動物中的激酶介導性症狀。
根據申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其中該激酶介導性症狀為發炎性疾病、自體免疫性疾病、毀壞性骨病症、增殖性病症、感染性疾病、病毒性疾病或神經退化性疾病。
一種用作醫藥劑的根據申請專利範圍第1項之化合物。
一種根據申請專利範圍第1項之化合物之用途，其係用在製造用於治療在哺乳動物中的激酶介導性症狀的醫藥劑。
根據申請專利範圍第9項之用途，其中該激酶介導性症狀為發炎性疾病、自體免疫性疾病、毀壞性骨病症、增殖性病症、感染性疾病、病毒性疾病或神經退化性疾病。
一種式II化合物，或其鹽，其中P¹ 代表氫原子或羥基保護基。
一種式IV化合物，其中R^e 代表氫原子或醇之殘基。
一種根據申請專利範圍第1項之化合物的前藥之用途，其係用在製造用於在哺乳動物中以根據申請專利範圍第1項之化合物治療之激酶介導性症狀的醫藥劑，其中該前藥為磷酸二氫2-(5-(2-((3-(3-第三丁基-1-對-甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)-甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其醫藥上可接受之鹽。
根據申請專利範圍第13項之用途，其中該激酶介導性症狀為發炎性疾病、自體免疫性疾病、毀壞性骨病症、增殖性病症、感染性疾病、病毒性疾病、神經退化性疾病或疼痛。
一種以根據申請專利範圍第1項之化合物治療在哺乳動物中的激酶介導性症狀之醫藥組成物，其包含有效治療該激酶介導性症狀的量之根據申請專利範圍第1項之化合物的前藥，其中該前藥為磷酸二氫2-(5-(2-((3-(3-第三丁基-1-對-甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)-甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其醫藥上可接受之鹽。
根據申請專利範圍第15項之醫藥組成物，其中該激酶介導性症狀為發炎性疾病、自體免疫性疾病、毀壞性骨病症、增殖性病症、感染性疾病、病毒性疾病、神經退化性疾病或疼痛。
一種磷酸二氫2-(5-(2-((3-(3-第三丁基-1-對-甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基)-甲基)-4-氟苯氧基)-1H-吲唑-1-基)乙酯或其醫藥上可接受之鹽。
一種製備如申請專利範圍第17項所定義之化合物的方法，其包含將如申請專利範圍第1項所定義之化合物磷酸化。
一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第17項之化合物及醫藥上可接受之載體或稀釋劑。