CN110650959B - 治疗化合物和组合物及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本文描述可用作JAK激酶抑制剂的化合物及其盐。还提供包括所述JAK抑制剂和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的药物组合物，和治疗响应于Janus激酶活性抑制的患者疾病或病症或减轻其严重程度的方法。

Description

治疗化合物和组合物及其使用方法
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2018年3月9号提交的U.S.专利申请编号62/640,865及2017年5月22号提交的国际专利申请号PCT/CN2017/085276的优先权，其公开内容全部以引用方式并入本文。
发明领域
本发明涉及Janus激酶如JAK1抑制剂化合物，以及包含这些化合物的组合物和使用方法，包括但不限于诊断和治疗患有响应于JAK激酶抑制的病症的患者。
发明背景
细胞因子通路介导许多生物功能，包括炎症和免疫的很多方面。Janus激酶(JAK)、包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2是与I型和II型细胞因子受体相关的细胞质蛋白激酶，并调节细胞因子信号转导。细胞因子与同源受体结合触发受体相关JAK的激活，导致JAK-介导的、信号传导及转录激活(STAT)蛋白的酪氨酸磷酸化，并最终转录激活特定基因组(Schindler等,2007,J.Biol.Chem.282:20059-63)。JAK1、JAK2和TYK2表现出广泛的基因表达模式，而JAK3表达仅限于白细胞。细胞因子受体通常作为异质二聚体起效，因此，一般有多于一种类型的JAK激酶与细胞因子受体复合物相关。已经在许多病例中通过遗传研究确定并通过其它实验证据证实了与不同细胞因子受体复合物相关的特定JAK。JAK酶抑制的示例性治疗益处受到讨论，例如在国际申请号WO 2013/014567中。
JAK1最初在新型激酶筛选中被确定(Wilks A.F.,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:1603-1607)。遗传和生化研究已经显示，JAK1与I型干扰素(例如IFNα)、II型干扰素(例如IFNγ)及IL-2和IL-6细胞因子受体复合物在功能和生理上相关(Kisseleva等,2002,Gene 285:1-24；Levy等,2005,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.3:651-662；O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。JAK1基因敲除小鼠会因LIF受体信号的缺陷在围产期死亡(Kisseleva等,2002,Gene 285:1-24；O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。衍生自JAK1基因敲除小鼠的组织的表征证明了该激酶在IFN、IL-10、IL-2/IL-4和IL-6通路中起到重要作用。欧盟委员会批准了靶向IL-6通路的人源化单克隆抗体(Tocilizumab)用于治疗中至重度类风湿性关节炎(Scheinecker等,2009,Nat.Rev.Drug Discov.8:273-274)。
CD4 T细胞通过在肺内产生TH2细胞因子而在哮喘发病机理中起到重要作用，包括IL-4、IL-9和IL-13(Cohn等,2004,Annu.Rev.Immunol.22:789-815)。IL-4和IL-13诱导粘液产生增加、向肺部募集嗜酸性粒细胞并增加IgE产生(Kasaian等,2008,Biochem.Pharmacol.76(2):147-155)。IL-9致使肥大细胞活化，这加重哮喘症状(Kearley等,2011,Am.J.Resp.Crit.Care Med.,183(7):865-875)。IL-4Rα链激活JAK1并当分别与通用γ链或IL-13Rα1链相连时与IL-4或IL-13结合(Pernis等,2002,J.Clin.Invest.109(10):1279-1283)。通用γ链也可与IL-9Rα组合以结合IL-9，且IL-9Rα同样会激活JAK1(Demoulin等,1996,Mol.Cell Biol.16(9):4710-4716)。尽管通用γ链可激活JAK3，但是已经证实JAK1远强于JAK3，且即使存在JAK3活性，JAK1抑制足以使通过通用γ链的信号传导失活(Haan等,2011,Chem.Biol.18(3):314-323)。通过阻断JAK/STAT信号通路来抑制IL-4、IL-13和IL-9信号传导，可减轻临床前肺炎症模型中的哮喘症状(Mathew等,2001,J.Exp.Med.193(9):1087-1096；Kudlacz et.al.,2008,Eur.J.Pharmacol.582(1-3):154-161)。
生化和遗传研究已经表明在JAK2和单链(例如EPO)、IL-3和干扰素γ细胞因子受体家族间存在关联(Kisseleva等,2002,Gene 285:1-24；Levy等,2005,Nat.Rev.Mol.CellBiol.3:651-662；O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。与此一致，JAK2基因敲除小鼠会死于贫血(O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。JAK2中的激酶激活突变(例如JAK2 V617F)与人类骨髓增殖性障碍有关。
JAK3仅与存在于IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21细胞因子受体复合物中的γ通用细胞因子受体链相关。JAK3对淋巴样细胞的发育和增殖至关重要，JAK3的突变会导致重症联合免疫缺陷(SCID)(O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。基于其在调节淋巴细胞中的作用，JAK3和JAK3-介导的通路已被靶向用于免疫抑制适应症(例如移植排斥和类风湿性关节炎)(Baslund等,2005,Arthritis&Rheumatism 52:2686-2692；Changelian等,2003,Science 302:875-878)。
TYK2与I型干扰素(例如IFNα)、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23细胞因子受体复合物相关(Kisseleva等,2002,Gene 285:1-24；Watford,W.T.&O’Shea,J.J.,2006,Immunity 25:695-697)。与此一致，衍生自TYK2缺陷型人的原代细胞在I型干扰素、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23信号传导中存在缺陷。靶向IL-12和IL-23细胞因子共有的p40亚基的全人单克隆抗体(Ustekinumab)最近得到欧盟委员会批准可用于治疗中至重度斑块型银屑病(Krueger等,2007,N.Engl.J.Med.356:580-92；Reich等,2009,Nat.Rev.Drug Discov.8:355-356)。此外，靶向IL-12和IL-23通路的抗体已进行了治疗克罗恩(Crohn)病的临床试验(Mannon等,2004,N.Engl.J.Med.351:2069-79)。
国际专利申请公开号WO 2010/051549、WO 2011/003065、WO 2015/177326和WO2017/089390中探讨了某些被报道可用作一种或多种Janus激酶抑制剂的吡唑并嘧啶化合物。其展示了某些具体化合物的数据，显示出对JAK1以及JAK2、JAK3和/或TYK2激酶的抑制。
目前仍需要作为Janus激酶抑制剂的其它化合物。例如，需要具有作为一种或多种Janus激酶(例如JAK1)抑制剂的有用效力以及对达到有用治疗益处所必要的其他药理性质的化合物。例如，需要一种有效的化合物，其通常展示出对一种Janus激酶高于其它激酶的选择性(例如对JAK1的选择性优于其它激酶，如富亮氨酸重复激酶2(LRRK2))。同样需要显示出对一种Janus激酶选择性高于其它Janus激酶的有效化合物(例如对JAK1的选择性高于其他Janus激酶)。在对JAK1抑制有响应的病症中，对JAK1展现出选择性的激酶可提供具有更少副作用的治疗益处。此外，目前需要具有其它性质的有效JAK1抑制剂(例如熔点、pK、溶解度等)，这些性质对制剂和吸入施用是必需的。这样的化合物将尤其适用于治疗例如哮喘的病症。
本领域需要对由JAK激酶介导的病症、如前文所述的那些的另外的或替代治疗。
发明简述
本文提供抑制JAK激酶的吡唑并嘧啶，如选自式(I)化合物、其立体异构体或其盐，如其药学上可接受的盐。JAK激酶可以是JAK1。
一个实施方案提供式(I)化合物或其立体异构体或盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000041
其中：
R1是氢或CH3；
R2是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基或-ORa，其中R2任选被一个或多个独立选自卤素、C1-C3烷基、氰基、羟基和氧代基的基团取代；
Ra是C1-C6烷基、-苯基-CORbRc、-苯基-(3-6-元杂环基)或3-11-元杂环基，其中Ra任选被一个或多个独立选自卤素、C1-C3烷基、氰基、羟基和氧代基的基团取代；
每个Rb和Rc独立是氢或CH3；
R3是氢或NH2；
R4是氢或CH3；且
R5是氢或NH2。
还提供药物组合物，包含本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
还提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐在治疗中的用途，如治疗炎性疾病(例如哮喘)。还提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗炎性疾病的药物中的用途。还提供预防、治疗响应于Janus激酶活性抑制的患者疾病或病症或减轻其严重程度的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐。
本文所述的某些化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)具有作为一种或多种Janus激酶(例如JAK1)抑制剂的有益效力。某些化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)还a)对一种Janus激酶具有高于其它激酶的选择性，b)对JAK1具有高于其它Janus激酶的选择性，和/或c)具有其它制剂和吸入施用必需的性质(例如熔点、pK、溶解度等)。本文所述某些化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)可对治疗如哮喘的病症尤为有效。
发明详述
定义
“卤素”或“卤代”意指F、Cl、Br或I。此外，术语如“卤代烷基”旨在包括单卤代烷基和多卤代烷基，其中一个或多个卤素取代烷基中的一个或多个氢。
术语“烷基”意指饱和直链或支链单价烃基，其中烷基可任选被取代。在一个实例中，烷基是1至18个碳原子(C1-C18)。在另一些实例中，烷基是C0-C6、C0-C5、C0-C3、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C5、C1-C4或C1-C3。C0烷基意指键。烷基实例包括甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、n-丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、i-丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、n-丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、i-丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、s-丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、t-丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(n-戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基和1-辛基。在一些实施方案中，对于“任选取代的烷基”的取代基包括下列中1-4个实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分可任选被取代，如被1-4个选自所述同一列表的取代基实例取代。
术语“烯基”意指具有至少一个不饱和位点即碳碳双键的直链或支链单价烃基，其中烯基可任选被取代，且包括具有“顺式”和“反式”取向或备选地“E”和“Z”取向的基团。在一个实例中，烯基是2至18个碳原子(C2-C18)。在另一些实例中，烯基是C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C3。实例包括但不限于乙烯基(ethenyl)或乙烯基(vinyl)(-CH＝CH2)、丙-1-烯基(-CH＝CHCH3)、丙-2-烯基(-CH2CH＝CH2)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。在一些实施方案中，“任选取代烯基”的取代基包括下列中1-4个实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分可任选被取代，如被1-4个选自所述同一列表的取代基实例取代。
术语“炔基”意指具有至少一个不饱和位点即碳碳三键的直链或支链单价烃基，其中炔基可任选被取代。在一个实例中，炔基是2至18个碳原子(C2-C18)。在另一些实例中，炔基是C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C3。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(-C≡CCH3)、丙-2-炔基(炔丙基，-CH2C≡CH)、丁-1-炔基、丁-2-炔基和丁-3-炔基。在一些实施方案中，“任选取代炔基”的取代基包括下列的1-4个实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分可任选被如1-4个选自所述同一列表的取代基的实例取代。
“亚烷基”意指饱和支链或直链烃基，其具有通过从母体烷烃的相同或两个不同碳原子上移去两个氢原子得到的两个单价自由基中心。在一个实例中，二价亚烷基是1-18个碳原子(C1-C18)。在另一些实例中，二价亚烷基是C0-C6、C0-C5、C0-C3、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C5、C1-C4或C1-C3。C0亚烷基意指键。亚烷基实例包括亚甲基(-CH2-)、1,1-乙基(-CH(CH3)-)、(1,2-乙基(-CH2CH2-)、1,1-丙基(-CH(CH2CH3)-)、2,2-丙基(-C(CH3)2-)、1,2-丙基(-CH(CH3)CH2-)、1,3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1,1-二甲基乙-1,2-基(-C(CH3)2CH2-)、1,4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。
术语“杂烷基”意指直链或支链单价烃基，由所声称的碳原子数或如果没有声称则最多18个碳原子和1至5个选自O、N、Si和S的杂原子组成，且其中氮和硫原子可任选被氧化，且氮杂原子可任选被季胺化。在一些实施方案中，杂原子选自O、N和S，其中氮和硫原子可任选被氧化，且氮杂原子可任选被季胺化。杂原子可位于杂烷基的任何内部位置，包括烷基与分子剩余部分相连处(例如-O-CH2-CH3)。实例包括-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-Si(CH3)3和-CH2-CH＝N-OCH3。至多两个杂原子可是连续的，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。杂烷基可任选被取代。在一些实施方案中，“任选取代的杂烷基”的取代基包括以下的1至4个实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分可任选被如1-4个选自所述同一列表的取代基的实例取代。
“氨基”指可任选被取代的伯胺(即–NH2)、仲胺(即–NRH)、叔胺(即–NRR)和季胺(即-N(+)RRR)，其中每个R是相同的或不同的且选自烷基、环烷基、芳基和杂环基，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基如本文定义。具体的仲胺和叔胺是烷基胺、二烷基胺、芳基胺、二芳基胺、芳烷基胺和二芳烷基胺，其中烷基和芳基部分可任选被取代。具体的仲胺和叔胺是甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、苯胺、苄胺、二甲胺、二乙胺、二丙胺和二异丙胺。在一些实施方案中，季胺的R基团是各自独立任选取代的烷基。
“芳基”意指碳环芳族基团，无论是否稠合至一个或多个基团，具有指定的碳原子数或如果没有指定则最多14个碳原子。一个实例包括具有6-14个碳原子的芳基。另一个实例包括具有6-10个碳原子的芳基。芳基实例包括苯基、萘基、联苯基、菲基、并四苯基、1,2,3,4-四氢化萘基、1H-茚基、2,3-二氢-1H-茚基等(参见例如Lang’s Handbook ofChemistry(Dean,J.A.,ed.)13th ed.Table 7-2[1985])。具体的芳基是苯基。取代的苯基或取代的芳基指被1、2、3、4或5个取代基取代的苯基或芳基，例如1-2、1-3或1-4取代基，如选自本文指定的基团(参见“任选取代的”定义)，如F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分可任选被如1-4个选自所述同一列表的取代基的实例取代。术语“取代的苯基”的实例包括单-或二(卤代)苯基如2-氯代苯基、2-溴代苯基、4-氯代苯基、2,6-二氯代苯基、2,5-二氯代苯基、3,4-二氯代苯基、3-氯代苯基、3-溴代苯基、4-溴代苯基、3,4-二溴代苯基、3-氯代-4-氟代苯基、2-氟代苯基、2,4-二氟苯基等；单-或二(羟基)苯基，如4-羟基苯基、3-羟基苯基、2,4-二羟基苯基，其受保护的羟基衍生物等；硝基苯基，如3-或4-硝基苯基；氰基苯基，例如4-氰基苯基；单-或二(烷基)苯基，如4-甲基苯基、2,4-二甲基苯基、2-甲基苯基、4-(异丙基)苯基、4-乙基苯基、3-(n-丙基)苯基等；单或二(烷氧基)苯基，例如3,4-二甲氧基苯基、3-甲氧基-4-苄氧基苯基、3-乙氧基苯基、4-(异丙氧基)苯基、4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基等；3-或4-三氟甲基苯基；单-或二羧基苯基或(保护的羧基)苯基如4-羧基苯基、单-或二(羟基甲基)苯基或(保护的羟基甲基)苯基，如3-(保护的羟基甲基)苯基或3,4-二(羟基甲基)苯基；单-或二(氨基甲基)苯基或(保护的氨基甲基)苯基如2-(氨基甲基)苯基或2,4-(保护的氨基甲基)苯基；或单-或二(N-(甲基磺酰基氨基))苯基，如3-(N-甲基磺酰基氨基))苯基。同样，术语“取代的苯基”表示取代基不同的二取代的苯基，例如3-甲基-4-羟基苯基、3-氯代-4-羟基苯基、2-甲氧基-4-溴代苯基、4-乙基-2-羟基苯基、3-羟基-4-硝基苯基、2-羟基-4-氯代苯基、2-氯代-5-二氟甲氧基等，以及取代基不同的三取代的苯基，例如3-甲氧基-4-苄氧基-6-甲基磺酰基氨基、3-甲氧基-4-苄氧基-6-苯基磺酰基氨基，和取代基不同的四取代的苯基，如3-甲氧基-4-苄氧基-5-甲基-6-苯基磺酰基氨基。在一些实施方案中，芳基如苯基的取代基包括酰胺。例如，芳基(例如苯基)取代基可以是-(CH2)0-4CONR'R”，其中每个R'和R”独立意指下列基团，包括例如，氢；未取代的C1-C6烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6烷基；未取代的C1-C6杂烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6杂烷基；未取代的C6-C10芳基；被以下基团取代的C6-C10芳基：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基，或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；和被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”；或R'和R”可与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环，其中环原子任选被N、O或S取代，且其中环任选被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代。
“环烷基”意指非芳族、饱和或部分不饱和的环烃基，其中环烷基可任选被本文所述的一个或多个取代基独立取代。在一个实例中，环烷基是3至12个碳原子(C3-C12)。在另一些实例中，环烷基是C3-C8、C3-C10或C5-C10。在另一些实例中，环烷基作为单环是C3-C8、C3-C6或C5-C6。在另一个实例中，环烷基作为双环是C7-C12。在另一个实例中，环烷基作为螺环系统是C5-C12。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、全氘代环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基。具有7至12个环原子的双环环烷基示例性排列包括但不限于[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环系统。示例性桥连双环环烷基包括但不限于双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷。螺环烷基的实例包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷和螺[4.5]癸烷。在一些实施方案中，“任选取代的环烷基”的取代基包括1至4个选自下列的实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、芳基和杂环部分可任选被取代，如被1至4个选自所述同一列表的取代基实例取代。在一些实施方案中，环烷基的取代基包括酰胺。例如，环烷基的取代基可以是-(CH2)0-4CONR'R”，其中R'和R”各自独立意指以下基团，包括例如氢；未取代的C1-C6烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6烷基；未取代的C1-C6杂烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6杂烷基；未取代的C6-C10芳基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”取代的C6-C10芳基；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；和被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”；或R'和R”可与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环，其中环原子任选被N、O或S取代，且其中环任选被以下基团取代：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”。
“杂环基团”、“杂环的”、“杂环(heterocycle)”、“杂环基”或“杂环(heterocyclo)”可互换使用，意指任何单环、双环、三环或螺环、饱和或不饱和的芳族(杂芳基)或非芳族(例如杂环烷基)的环系统，具有3至20个环原子(例如3-10个环原子)，其中环原子是碳且环或环系统中至少一个原子是选自氮、硫或氧的杂原子。若环系统中任何环原子是杂原子，则该系统为杂环，而不论该环系统与分子剩余部分在何处相连。在一个实例中，杂环基包括3-11个环原子(“元”)且包括单环、双环、三环和螺环系统，其中环原子是碳，环或环系统中至少一个原子是选自氮、硫或氧的杂原子。在一个实例中，杂环基包括1至4个杂原子。在一个实例中，杂环基包括1至3个杂原子。在另一个实例中，杂环基包括具有1-2、1-3或1-4个选自氮、硫或氧的杂原子的3-至7-元单环。在另一个实例中，杂环基包括具有1-2、1-3或1-4个选自氮、硫或氧的杂原子的4-至6-元单环。在另一个实例中，杂环基包括3-元单环。在另一个实例中，杂环基包括4-元单环。在另一个实例中，杂环基包括5-6元单环，例如5-6元杂芳基。在另一个实例中，杂环基包括3-11元杂环烷基，如4-11元杂环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基包括至少一个氮。在一个实例中，杂环基包括0-3个双键。任意氮或硫杂原子可任选被氧化(例如NO、SO、SO2)，且任意氮杂原子可任选被季胺化(例如[NR4]+Cl-、[NR4]+OH-)。杂环的实例有环氧乙烷基、氮丙啶基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、1,2-二硫杂环丁基、1,3-二硫杂环丁基、吡咯烷基、二氢-1H-吡咯基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、二氢噻吩基、四氢噻吩基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吗啉基、硫吗啉基、1,1-二氧代-硫吗啉基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、六氢噻喃基、六氢嘧啶基、噁嗪烷基(oxazinanyl)、噻嗪烷基(thiazinanyl)、硫氧杂环己烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂
Figure BDA0002282880340000101
基、氧氮杂环庚基、二氮杂环庚基、1,4-二氮杂环庚基、二氮杂
Figure BDA0002282880340000102
基、硫氮杂
Figure BDA0002282880340000103
基、硫氮杂环庚基(thiazepanyl)、四氢噻喃基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、1,1-二氧代异噻唑烷酮基、噁唑烷酮基、咪唑烷酮基、4,5,6,7-四氢[2H]吲唑基、四氢苯并咪唑基、4,5,6,7-四氢苯并[d]咪唑基、1,6-二氢咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶基、噻嗪基、噁嗪基、噻二嗪基、噁二嗪基、二噻嗪基、二噁嗪基、噁噻嗪基、噻三嗪基、噁三嗪基(oxatriazinyl)、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、噻喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氢杂环戊基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基(dithianyl)、二硫戊环基(dithiolanyl)、嘧啶酮基、嘧啶二酮基、嘧啶-2,4-二酮基、哌嗪酮基、哌嗪二酮基、吡唑烷基咪唑啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚基、6-氮杂双环[3.1.1]庚基、3-氮杂双环[3.1.1]庚基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、2-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、2-氮杂双环[2.2.2]辛基、8-氮杂双环[2.2.2]辛基、7-氧杂双环[2.2.1]庚烷、氮杂螺[3.5]壬基、氮杂螺[2.5]辛基、氮杂螺[4.5]癸基、1-氮杂螺[4.5]癸-2-酮基、氮杂螺[5.5]十一烷基、四氢吲哚基、八氢吲哚基、四氢异吲哚基、四氢吲唑基、1,1-二氧代六氢噻喃基。含有硫或氧原子和1至3个氮原子的5-元杂环的实例是噻唑基，包括噻唑-2-基和噻唑-2-基N-氧化物；噻二唑基，包括1,3,4-噻二唑-5-基和1,2,4-噻二唑-5-基、噁唑基例如噁唑-2-基，和噁二唑基，如1,3,4-噁二唑-5-基和1,2,4-噁二唑-5-基。含有2至4个氮原子的5-元环杂环实例包括咪唑基如咪唑-2-基；三唑基如1,3,4-三唑-5-基；1,2,3-三唑-5-基、1,2,4-三唑-5-基，和四唑基如1H-四唑-5-基。苯并稠合的5-元杂环实例是苯并噁唑-2-基、苯并噻唑-2-基和苯并咪唑-2-基。6-元杂环的实例含有1至3个氮原子和任选硫或氧原子，例如吡啶基，如吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；嘧啶基，如嘧啶-2-基和嘧啶-4-基；三嗪基，如1,3,4-三嗪-2-基和1,3,5-三嗪-4-基；哒嗪基，尤其是哒嗪-3-基和吡嗪基。其它杂环基实例有吡啶N-氧化物和哒嗪N-氧化物和吡啶基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、哒嗪基和1,3,4-三嗪-2-基。杂环可任选被取代。例如“任选取代的杂环”的取代基包括1至4个以下实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氧代基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、芳基和杂环部分可任选被取代，如被1至4个选自所述同一列表的取代基实例取代。在一些实施方案中，杂环基如杂芳基或杂环烷基的取代基包括酰胺。例如杂环(例如杂芳基或杂环烷基)取代基可以是-(CH2)0-4CONR'R”，其中每个R'和R”独立意指包括以下的基团，例如氢；未取代的C1-C6烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6烷基；未取代的C1-C6杂烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6杂烷基；未取代的C6-C10芳基；被以下基团取代的C6-C10芳基：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；和被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”；或R'和R”可与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环，其中环原子任选被N、O或S取代且其中该环任选被以下基团取代：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”。
“杂芳基”意指任意单-、双-或三环系统，其中至少一个环为包含1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-或6-元芳族环，在一个实例实施方案中，至少一个杂原子是氮。参见例如Lang’s Handbook of Chemistry(Dean,J.A.,ed.)13th ed。表7-2[1985].。该定义包含任意双环基，其中任意上述杂芳基环与芳环稠合，其中芳环或杂芳基环与分子剩余部分相连。在一个实施方案中，杂芳基包括5-6元单环芳族基团，其中一个或多个环原子是氮、硫或氧。杂芳基实例包括噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑并[1,5-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基和嘌呤基，以及苯并稠合衍生物，例如苯并噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基和吲哚基。杂芳基可任选被取代。在一些实施方案中，“任选取代的杂芳基”的取代基包括1至4个选自下列的实例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2、NHCH3、N(CH3)2、NO2、N3、C(O)CH3、COOH、CO2CH3、甲基、乙基、丙基、异-丙基、丁基、异丁基、环丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺酰基氨基、甲磺酰基氨基、SO、SO2、苯基、哌啶基、哌嗪基和嘧啶基，其中其烷基、苯基和杂环部分可任选被取代，如被1至4个选自所述同一列表的取代基实例取代。在一些实施方案中，杂芳基的取代基包括酰胺。例如，杂芳基取代基可以是-(CH2)0-4CONR'R”，其中每个R'和R”独立意指下列基团，包括例如氢；未取代的C1-C6烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6烷基；未取代的C1-C6杂烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6杂烷基；未取代的C6-C10芳基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”取代的C6-C10芳基；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；和被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”；或R'和R”可与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环，其中环原子任选被N、O或S取代，且其中环任选被以下基团取代：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”。
在具体实施方案中，杂环基以杂环基的碳原子相连。举例来说，碳键合的杂环基包括以下键合安排：吡啶环的2、3、4、5或6位、哒嗪环的3、4、5或6位、嘧啶环的2、4、5或6位、吡嗪环的2、3、5或6位；呋喃、四氢呋喃、硫杂呋喃(thiofuran)、噻吩、吡咯或四氢吡咯环的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑环的2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑环的3、4或5位；氮丙啶环的2或3位、氮杂环丁烷的2、3或4位、喹啉环的2、3、4、5、6、7或8位或异喹啉环的1、3、4、5、6、7或8位。
在某些实施方案中，杂环基是N-连接的。举例来说，氮键合的杂环基或杂芳基包括以下键合安排：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的1位；异吲哚或异二氢吲哚的2位；吗啉的4位，和咔唑或β-卡啉的9位。
术语“烷氧基”意指式-OR表示的直链或支链单价烃基，其中R是烷基，如本文定义。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、单-、二-和三-氟代甲氧基和环丙氧基。
“酰基”意指式-C(O)-R表示的包含羰基的取代基，其中R是氢、烷基、环烷基、芳基或杂环基，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基如本文定义。酰基包括烷酰基(例如乙酰基)、芳酰基(例如苯甲酰基)和杂芳酰基(例如吡啶酰基(pyridinoyl))。
“任选取代的”除非另外指出，表示基团可以是未取代的或被一个或多个(例如0、1、2、3、4或5或更多，或其中可衍生的任何范围)对该基团所列的取代基取代，其中所述取代基可以相同或不同。在一个实施方案中，任选取代的基团具有1个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有2个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有3个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有4个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有5个取代基。
单独或作为另一个取代基一部分的烷基(例如烷氧基)，以及同样单独或作为另一个取代基一部分的亚烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环烷基和环烷基的任选取代基，可以是如本文所述的各种基团，以及选自下列基团：卤素；氧代基；CN；NO；N3；-OR'；全氟-C1-C4烷氧基；未取代的C3-C7环烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C3-C7环烷基；未取代的C6-C10芳基(例如苯基)；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”取代的C6-C10芳基；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”；-NR'R”；-SR'；-SiR'R”R”'；-OC(O)R'；-C(O)R'；-CO2R'；-CONR'R”；-OC(O)NR'R”；-NR”C(O)R'；-NR”'C(O)NR'R”；-NR”C(O)2R'；-S(O)2R'；-S(O)2NR'R”；-NR'S(O)2R”；-NR”'S(O)2NR'R”；脒基；胍基；-(CH2)1-4-OR'；-(CH2)1-4-NR'R”；-(CH2)1-4-SR'；-(CH2)1-4-SiR'R”R”'；-(CH2)1-4-OC(O)R'；-(CH2)1-4-C(O)R'；-(CH2)1-4-CO2R'；和-(CH2)1-4CONR'R”或其组合，数量为0至(2m'+1)，其中m'是该基团中碳原子的总数。每个R'、R”和R”'独立地意指基团，包括例如氢；未取代的C1-C6烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6烷基；未取代的C1-C6杂烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6杂烷基；未取代的C6-C10芳基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”取代的C6-C10芳基；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；和被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”。当R'和R”连接在同一氮原子上时，其可与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环，其中环原子任选被N、O或S取代且其中该环任选被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代。例如，-NR'R”意欲包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
类似地，芳基和杂芳基的任选取代基种类繁多。在一些实施方案中，芳基和杂芳基的取代基选自卤素；CN；NO；N3；-OR'；全氟-C1-C4烷氧基；未取代的C3-C7环烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C3-C7环烷基；未取代的C6-C10芳基(例如苯基)；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”取代的C6-C10芳基；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”；-NR'R”；-SR'；-SiR'R”R”'；-OC(O)R'；-C(O)R'；-CO2R'；-CONR'R”；-OC(O)NR'R”；-NR”C(O)R'；-NR”'C(O)NR'R”；-NR”C(O)2R'；-S(O)2R'；-S(O)2NR'R”；-NR'S(O)2R”；-NR”'S(O)2NR'R”；脒基；胍基；-(CH2)1-4-OR'；-(CH2)1-4-NR'R”；-(CH2)1-4-SR'；-(CH2)1-4-SiR'R”R”'；-(CH2)1-4-OC(O)R'；-(CH2)1-4-C(O)R'；-(CH2)1-4-CO2R'；和-(CH2)1-4CONR'R”或其组合，数量为0至(2m'+1)，其中m'是基团中碳原子的总数。每个R'、R”和R”'独立地意指基团，包括例如氢；未取代的C1-C6烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6烷基；未取代的C1-C6杂烷基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代的C1-C6杂烷基；未取代的C6-C10芳基；被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基或NR'R”取代的C6-C10芳基；未取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)；和被以下基团取代的3-11元杂环基(例如包含1至4个选自O、N和S的杂原子的5-6元杂芳基或包含1至4个选自O、N和S的杂原子的4-11元杂环烷基)：卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”。当R'和R”连接在同一氮原子上时，其可与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环，其中环原子任选被N、O或S取代，且其中环任选被卤素、OH、CN、未取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基、氧代基或NR'R”取代。例如-NR'R”意欲包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
术语“氧代基”意指＝O或(＝O)2。
如本文所用，与化学结构中的键相交的波浪线
Figure BDA0002282880340000151
表示化学结构中与波浪键相连的原子和分子剩余部分或分子片段的剩余部分相连的点。在一些实施方案中，箭头和星号以波浪线的方式使用表示连接点。
在某些实施方案中，二价基团一般不描绘具体键合构型。应当理解的是，除非另外指出，一般性描述意欲包括两种键合构型。例如，在基团R1–R2–R3中，如果基团R2被描述为–CH2C(O)–，则应当理解的是，除非另有说明，该基团可以作为R1–CH2C(O)–R3和R1–C(O)CH2–R3键合。
术语“发明的化合物”和“本发明的化合物”等，除另外指出，包括本文式(I)化合物如化合物1-18，有时意指为JAK抑制剂，包括其立体异构体(包括阻转异构体)、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、同位素、盐(例如药学上可接受的盐)和前药。在一些实施方案中，溶剂化物、代谢物、同位素或前药以及其任意组合被排除在外。
短语“药学上可接受的”意指当向动物例如人类适量施用时不会产生不利、过敏或其它不良反应的分子实体和组合物。
本发明的化合物可以是盐形式，如药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”意指保留了游离碱的生物学有效性和性质并且在生物学或其它方面不是不可取的盐，与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等形成，有机酸可以选自脂族、脂环族、芳香族、芳脂族、杂环类、羧酸类和磺酸类有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸(embonic acid)、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝的盐等的那些。具体的碱加成盐是铵、钾、钠、钙和镁盐。衍生自药学上可接受有机无毒碱的盐包括以下的盐：伯胺、仲胺和叔胺，取代铵，包括天然存在的取代胺，环胺和碱离子交换树脂，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱(theobromine)、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。具体有机非毒性碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、氨丁三醇、二环己胺、胆碱和咖啡因。
在一些实施方案中，盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、三氟乙酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、硫酸氢盐、苯磺酸盐、乙磺酸盐、丙二酸盐、昔萘酸盐(xinafoate)、抗坏血酸盐、油酸盐、烟酸盐、糖精酸盐、己二酸盐、甲酸盐、乙醇酸盐、棕榈酸盐、L-乳酸盐、D-乳酸盐、天冬氨酸盐、苹果酸盐、L-酒石酸盐、D-酒石酸盐、硬脂酸盐、糠酸盐(例如2-糠酸盐或3-糠酸盐)、萘二磺酸盐(萘-1,5-二磺酸盐或萘-1-(磺酸)-5-磺酸盐)、乙二磺酸盐(乙烷-1,2-二磺酸盐或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸盐)、羟乙磺酸盐(2-羟基乙基磺酸盐)、2,4,6-三甲基苯磺酸盐(2-mesitylenesulphonate)、2-萘磺酸盐(2-萘磺酸盐)、2,5-二氯苯磺酸盐、D-扁桃酸盐、L-扁桃酸盐、肉桂酸盐、苯甲酸盐、己二酸盐、乙磺酸盐、丙二酸盐、mesitylate(2,4,6-三甲基苯磺酸盐)、萘磺酸盐(2-萘磺酸盐)、樟脑磺酸盐(camsylate)(樟脑-10-磺酸盐，例如(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐)、谷氨酸盐、戊二酸盐、马尿酸盐(2-(苯甲酰氨基)乙酸盐)、乳清酸盐(orotate)、木酸盐(xylate)(对二甲苯-2-磺酸盐)和双羟萘酸盐(2,2’-二羟基-1,1’-双萘甲烷-3,3’-二羧酸盐)。
“无菌”制剂是无菌的或不含所有活的微生物及其孢子。
“立体异构体”意指具有相同化学组成但在原子或基团空间排列不同的化合物。立体异构体包括非对映异构体、对映异构体、构象异构体等。.
“手性”意指具有镜像配对物不可重合性质的分子，而术语“非手性”意指其镜像配对物可重合的分子。
“非对映异构体”意指具有两个或多个手性中心且分子非彼此镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性或生物活性。非对映异构体的混合物可在高分辨率分析方法如电泳和色谱如HPLC下分离。
“对映体”意指化合物的彼此为非重叠镜像的两个立体异构体。
本文所用的立体化学定义和惯例一般遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,NewYork,1994。许多有机化合物以光学活性形式存在，即其具有可旋转平面偏振光平面的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S被用于表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)被用于表明化合物对平面偏振光的旋转，(-)或l表示化合物为左旋。以(+)或d为前缀的化合物为右旋。对于给定的化学结构，除非彼此呈镜像外，其立体异构体是相同的。特定的立体异构体也可被称为对映体，这种异构体的混合物常称为对映体混合物。50:50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋物，这在当化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性时可出现。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”意指两种对映体的等摩尔混合物，没有光学活性。
术语“互变异构体”或“互变异构形式”意指可经低能垒互换的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子性互变异构体)包括质子迁移相互转换，如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构。价键互变异构体包括某些键合电子的重组导致的相互转换。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化物形式以及包括水合形式的溶剂化物形式存在。“溶剂化物”意指一个或多个溶剂分子与本发明化合物的缔合或复合。形成溶剂化物的溶剂的实例包括水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。本发明某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。通常，所有物理形式均包含在本发明范围内。术语“水合物”意指其中溶剂分子为水的复合物。
“代谢物”意指特定化合物或其盐经由体内代谢生成的产物。这类产物可例如源自所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、去酯化、酶促剪切等。
代谢物产物典型地如下鉴定：制备本发明化合物的放射性标记的同位素(例如14C或3H)，以可检测剂量(例如大于约0.5mg/kg)施用于动物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或人，给予足够时间供代谢发生(通常约30秒至30小时)并从尿、血或其它生物样本中分离其转换产物。这些产物因被标记而易于分离(其余产物通过使用能够结合在代谢物中存活的表位的抗体进行分离)。代谢物结构以常规方式测定，例如MS、LC/MS或NMR分析。通常，代谢物分析以本领域技术人员熟知的常规药代研究相同的方式进行。代谢物产物，只要以其它方式在体内不被发现，即可用于本发明化合物治疗剂量的诊断测定。
“受试者”、“个体”或“患者”是脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于农场动物(如牛)、运动动物、宠物(如豚鼠、猫、狗、兔子和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物是人类。在包括向患者施用本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐的实施方案中，患者可能有治疗需求。
术语“Janus激酶”意指JAK1、JAK2、JAK3和TYK2蛋白激酶。在一些实施方案中，Janus激酶可进一步定义为JAK1、JAK2、JAK3或TYK2中的一个。在任意实施方案中，可以将JAK1、JAK2、JAK3和TYK2中的任意一个明确排除为Janus激酶。在一些实施方案中，Janus激酶是JAK1。在一些实施方案中，Janus激酶是JAK1和JAK2的组合。
术语“抑制”和“降低”或这些术语的任何变体，包括任何可以测量的减少或完全抑制以实现期望结果。例如，与正常情况相比，可以是活性(例如JAK1活性)降低量约、至多约或至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多、或其中可衍生的任何范围。
在一些实施方案中，本文所述化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)相对于JAK3和TYK2具有选择性抑制JAK1的作用。在一些实施方案中，化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)相对于JAK2、JAK3或TYK2或JAK2、JAK3或TYK2的任意组合具有选择性抑制JAK1的作用。在一些实施方案中，化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)相对于JAK3和TYK2具有选择性抑制JAK1和JAK2的作用。在一些实施方案中，化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)相对于JAK3具有选择性抑制JAK1的作用。“选择性抑制”指化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)是与对另一种特定Janus激酶(例如JAK3)相比，对特定Janus激酶(例如JAK1)具有至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多、或其中可衍生的任何范围的更好活性的抑制剂，或与对另一种特定Janus激酶(例如JAK3)活性相比，对特定Janus激酶(例如JAK1)具有至少2-、3-、4-、5-、10-、25-、50-、100-、250-或500-倍的更好活性。
“治疗有效量”意指本发明化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)的量，其(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍，或(ii)减弱、减轻或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状，和任选地(iii)预防或延迟本文所述特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发生。在一些实施方案中，治疗有效量是足以降低或减轻自身免疫或炎性疾病(例如哮喘)的症状的量。在一些实施方案中，治疗有效量是足以显著降低B-细胞活性或数量的本文所述化学实体的量。对癌症，药物的治疗有效量可减少癌细胞的数量；缩小肿瘤尺寸；抑制(即一定程度上减缓，优选停止)癌症细胞渗入周围器官；抑制(即一定程度上减缓、优选停止)肿瘤转移；一定程度上抑制肿瘤生长；或一定程度上减轻一种或多种癌症相关症状。在该药物可以阻止生长或杀死现有的癌细胞的程度上，其可能是抑制细胞生长的或细胞毒性的。对癌症治疗，可例如通过评估疾病发展时间(TTP)或测定应答率(RR)来测量功效。
“治疗”(及变体如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)意指试图改变所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预，且可用于预防或在临床病理学过程中进行。治疗的期望效果包括预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接的病理后果、稳定(即不恶化)疾病状态、降低疾病进展速率、减轻或缓解疾病状态、与不接受治疗的预期存活期相比延长的存活期，和缓解或改善预后。在一些实施方案中，本发明化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)被用于延迟疾病或障碍的发生，或用于减缓疾病或障碍的进展。需要治疗的那些包括已经患有病症或障碍的那些，以及倾向于具有病症或障碍的那些(例如通过基因变异)，或需要预防病症或障碍的那些。
“炎性障碍”意指任何疾病、障碍或综合征，其中过度或不受调节的炎性反应导致过度炎性症状、宿主组织损伤或组织功能丧失。“炎性障碍”也意指由白细胞流入或中性粒细胞趋化性介导的病理状态。
“炎症”意指由组织损伤或破坏引起的局部保护性响应，其用于破坏、稀释或分离(隔绝)致伤试剂和受伤组织。炎症尤其与白细胞流入或中性粒细胞趋化性显著相关。炎症可由致病生物体和病毒感染所致或由非传染性手段所致，如外伤或心肌梗死或中风后的再灌注、对外界抗原的免疫应答和自身免疫应答。因此，适于用本发明化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)治疗的炎性障碍包括与特异性防御系统以及非特异性防御系统的反应相关的疾病。
“特异性防御系统”意指对特异性抗原的存在起反应的免疫系统的组成部分。由特定防御系统的反应引起的炎症实例包括对外源抗原的典型反应、自身免疫疾病和由T-细胞介导的迟发性超敏反应。慢性炎性疾病、固体移植组织和器官的排斥例如肾脏和骨髓移植、及移植物抗宿主病(GVHD)，是特定防御系统炎性反应的进一步例子。
术语“非特异性防御系统”意指由无法免疫记忆的白细胞(例如粒细胞和巨噬细胞)介导的炎性障碍。至少部分地由非特异性防御系统反应引起的炎症的实例包括与以下病症相关的炎症：如成人(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)或多器官损伤综合征；再灌注损伤；急性肾小球肾炎；反应性关节炎；具有急性炎症成分的皮肤病；急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经系统炎性障碍如中风；热损伤；炎症性肠病；粒细胞输注相关综合征；和细胞因子-诱导的毒性。
“自身免疫疾病”意指其中组织损伤与体液或细胞介导的对身体自身成分的应答相关的任意一组障碍。自身免疫疾病的非限制性实例包括类风湿性关节炎、狼疮和多发性硬化。
“过敏性疾病”如本文所用，意指过敏引起的任何症状、组织损伤或组织功能损失。“关节炎病”如本文所用，意指特征在于可归因于多种病因的关节的炎症性损伤的任何疾病。“皮炎”如本文所用，意指皮肤疾病大家族中的任意一种特征在于归因于多种病因的皮肤炎症。“移植排斥”如本文所用，意指任意针对移植组织如器官或细胞(例如骨髓)的免疫反应，其特征在于移植和周围组织的功能丧失、疼痛、肿胀、白细胞增多和血小板减少症。本发明的治疗方法包括治疗炎症细胞活化相关障碍的方法。
“炎症细胞活化”意指通过刺激物(包括但不限于细胞因子、抗原或自身抗体)诱导增殖性细胞响应、产生可溶性介质(包括但不限于细胞因子、氧自由基、酶、前列腺素类或血管活性胺)或炎症细胞(包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、粒细胞(即多形核白细胞如嗜中性粒细胞、嗜碱粒细胞和嗜酸性粒细胞)、肥大细胞、树突状细胞、朗格汉斯细胞和内皮细胞)中的新的或增加数量的介体(包括但不限于主要组织相容性抗原或细胞粘附分子)的细胞表面表达。本领域技术人员将认识到所述细胞中这些表型的一种或组合的活化可促进炎性疾病的开始、永存化或恶化。
在一些实施方案中，可根据本发明方法治疗的炎性障碍包括但不限于哮喘、鼻炎(例如过敏性鼻炎)、过敏性气道综合征、特应性皮炎、支气管炎、类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎、慢性阻塞性肺病和迟发型超敏反应。
术语“癌症”和“癌症的”、“肿瘤(neoplasm)”和“肿瘤(tumor)”和相关术语意指或描述哺乳动物的生理状况，其典型特征为不受控制的细胞生长。“肿瘤”包括一个或多个癌症细胞。癌症实例包括癌、胚细胞瘤、肉瘤、精原细胞瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、白血病和骨髓或淋巴恶性肿瘤。此类癌症更多具体实例包括鳞状细胞癌症(例如上皮鳞状细胞癌症)和肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌和肺鳞状癌。其它癌症包括皮肤癌、角化棘皮瘤(keratoacanthoma)、滤泡癌、毛细胞白血病、口腔癌、咽(口腔)癌、唇癌、舌癌、口腔(mouth)癌、唾液腺癌、食道癌、喉癌、肝细胞癌(hepatocellular)、胃癌(gastric)、胃癌(stomach)、胃肠道癌、小肠癌、大肠癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞癌(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、泌尿生殖癌、胆道癌、甲状腺癌、乳头状癌(papillary)、肝癌(hepatic)、子宫内膜癌、子宫癌、唾腺癌、肾脏(kidney)或肾(renal)癌、前列腺癌、睾丸癌、外阴癌、腹膜癌、肛门癌、阴茎癌、骨癌、多发性骨髓瘤、B-细胞淋巴瘤、中枢神经系统癌症、脑癌、头颈癌、霍奇金氏(Hodgkin’s)病和相关转移瘤。肿瘤疾病(neoplastic disorders)的实例包括骨髓增殖性障碍，如真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化如原发性骨髓纤维化，和慢性髓性白血病(CML)。
“化疗剂”是可用于治疗给定障碍例如癌症或炎性疾病的药剂。化疗剂的实例是领域内熟知并包括如U.S.公开申请号2010/0048557中公开的实例，以引文形式并入本文。此外，化疗剂包括任意化疗剂的药学上可接受的盐、酸或衍生物，以及其两种或更多的组合。
“包装说明书”用于意指通常包括在治疗产品商业包装中的说明书，其包含使用所述治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、禁忌或警告信息。
除非另外指明，本文描述的结构包括仅在一个或多个同位素富集原子存在上有不同的化合物。可掺入到本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。同位素标记的化合物(例如用3H和14C标记的那些)可用于化合物或底物组织分布测定。氚(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于易于制备与检测而是有用的。更进一步，用较重的同位素如氘(即2H)取代可提供由更高的代谢稳定性(例如体内半衰期增加或剂量要求减少)带来的某些治疗优势。在一些实施方案中，一个或多个氢原子被2H或3H取代，或一个或多个碳原子被13C-或14C-富集碳取代。正电子发射同位素如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射成像术(PET)研究以检测底物受体占有率。同位素标记的化合物通常可按照类似于本文方案和实施例所公开的那些方法、以同位素标记试剂替代非同位素标记试剂来制备。
特别考虑到的是，关于本发明的一个实施方案讨论的任何限制可以适用于本发明的任何其它实施方案。此外，本发明任意化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)或组合物可用于本发明的任意方法中，且本发明任意方法可用于生产或使用本发明任意化合物或其盐(例如其药学上可接受的盐)或组合物。
术语“或”的使用用于指示“和/或”，除非清楚指明仅指备选项或备选项间相互排斥，但是本公开支持仅指备选项和“和/或”的定义。
在本申请中，术语“约”用以表示数值包含用于测定该值的设备或方法的标准偏差。
如本文所用的“一个(a)”或“一个(an)”表示一个或更多，除非清楚地另外说明。如本文所用的“另一个”表示至少第二个或更多。
本文所用标题仅用于排版目的。
Janus激酶抑制剂
一个实施方案提供式(I)化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000221
其中：
R1是氢或CH3；
R2是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基或-ORa，其中R2任选被一个或多个独立地选自卤素、C1-C3烷基、氰基、羟基和氧代基的基团取代；
Ra是C1-C6烷基、-苯基-CORbRc、-苯基-(3-6-元杂环基)或3-11-元杂环基，其中Ra任选被一个或多个独立地选自卤素、C1-C3烷基、氰基、羟基和氧代基的基团取代；
每个Rb和Rc独立地是氢或CH3；
R3是氢或NH2；
R4是氢或CH3；且
R5是氢或NH2。
在一些实施方案中，R1是氢。在一些实施方案中，R1是CH3。在一些实施方案中，R3是氢。在一些实施方案中，每个R4和R5是氢。在一些实施方案中，每个R1、R3、R4和R5是氢。
在一些实施方案中，R2选自卤素、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基。在一些实施方案中，R2选自
Figure BDA0002282880340000231
在一些实施方案中，提供选自下列1-18的化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体：
Figure BDA0002282880340000232
Figure BDA0002282880340000241
Figure BDA0002282880340000251
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000252
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000261
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000262
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体：
Figure BDA0002282880340000263
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000264
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)或其立体异构体：
Figure BDA0002282880340000271
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000272
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000273
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体：
Figure BDA0002282880340000274
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体：
Figure BDA0002282880340000281
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000282
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000283
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000284
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000291
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000292
在一些实施方案中，提供下列化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)：
Figure BDA0002282880340000293
在一些实施方案中，提供选自下列(a)–(v)的化合物或其盐(例如药学上可接受的盐)或立体异构体：
Figure BDA0002282880340000294
Figure BDA0002282880340000301
Figure BDA0002282880340000311
还提供药物组合物，其包含本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
还提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐在治疗中的用途，如炎性疾病(例如哮喘)的治疗。还提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗炎性疾病的药剂中的用途。还提供预防、治疗患者响应于Janus激酶活性抑制的疾病或病症或减轻其严重程度的方法，其包括向患者施用治疗有效量的本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，治疗的疾病或病症是癌症、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、骨髓纤维变性、慢性髓性白血病(CML)、类风湿性关节炎、炎性肠病、克罗恩病(Crohn’s disease)、银屑病、接触性皮炎或迟发型超敏反应。
在一个实施方案中，提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐用于治疗以下疾病的用途：癌症、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、骨髓纤维变性、慢性髓性白血病(CML)、类风湿性关节炎、炎性肠病、克罗恩病、银屑病、接触性皮炎或迟发型超敏反应。
在一个实施方案中，提供了配制为吸入施用的组合物。
在一个实施方案中，提供了包含本发明化合物或其药学上可接受的盐的计量剂量吸入器。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为LRRK2抑制剂效力的至少五倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为LRRK2抑制剂效力的至少十倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为JAK2抑制剂效力的至少五倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为JAK2抑制剂效力的至少十倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为JAK3抑制剂效力的至少五倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为JAK3抑制剂效力的至少十倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为TYK2抑制剂效力的至少五倍。
在一个实施方案中，本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐作为JAK1抑制剂的效力是作为TYK2抑制剂的效力的至少十倍。
在一个实施方案中，提供了治疗哺乳动物脱发的方法，其包括向哺乳动物施用本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐用于治疗脱发的用途。
在一个实施方案中，提供本文所述JAK抑制剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗哺乳动物脱发的药剂中的用途。
本发明化合物可包含一个或多个不对称碳原子。因此，化合物可以以非对映异构体、对映体或其混合物形式存在。化合物合成可使用外消旋物、非对映异构体或对映体作为起始材料或中间物。特定非对映异构化合物的混合物可以通过色谱法或结晶法以一种或多种特定非对映异构体分离或富集。类似地，可使用同样技术或本领域内其它已知技术分离对映体混合物或对映体富集。每个不对称碳或氮原子可以是R或S构型，且两种构型均包含在本发明范围内。
在本文所示结构中，如任意特定手性原子的立体化学是未指定的，则考虑所有立体异构体且作为本发明化合物被包括。当通过实心楔形或虚线代表具体构型来限定立体化学时，则该立体异构体就此被限定和定义。除非另有说明，如果使用实心楔子或虚线，旨在指示相对的立体化学。
另一方面包括本文所述化合物的前药，包括已知的氨基保护基和羧基保护基在生理条件下被释放、例如水解以产生本发明化合物。
术语“前药”意指药物活性物质的前体或衍生物形式，其与母体药物相比对患者效果较差，且能够被酶或水解活化或转化为更活跃的母体形式。参见例如Wilman,“Prodrugsin Cancer Chemotherapy”Biochemical Society Transactions,14,pp.375-382,615thMeeting Belfast(1986)和Stella等,“Prodrugs:A Chemical Approach to TargetedDrug Delivery,”Directed Drug Delivery,Borchardt等,(ed.),pp.247-267,HumanaPress(1985)。前药包括但不限于含磷酸盐/酯的前药、含硫代磷酸盐/酯的前药、含硫酸盐/酯的前药、含肽的前药、D-氨基酸-修饰的前药、糖基化的前药、含β-内酰胺的前药、含任选取代的苯氧基乙酰胺的前药或含任选取代的苯基乙酰胺的前药以及5-氟胞嘧啶和5-氟尿苷前药。
特定类别的前药是这样的化合物，其中氨基、脒基、氨基亚烷基氨基、亚氨基亚烷基氨基或胍基中的氮原子被以下取代：羟基、烷基羰基(-CO-R)、烷氧羰基(-CO-OR)，或酰氧基烷基-烷氧羰基(-CO-O-R-O-CO-R)取代，其中R是单价或二价基团，例如烷基、亚烷基或芳基，或具有式-C(O)-O-CP1P2-卤代烷基的基团，其中P1和P2相同或不同且是氢、烷基、烷氧基、氰基、卤素、烷基或芳基。在一个具体实施方案中，氮原子是脒基的氮原子之一。前药可通过使化合物与活化的基团如酰基反应、以例如使所述化合物中的氮原子与活化酰基的示例性羰基键合来制备。活化的羰基化合物实例是含有与羰基键合的离去基团的那些，并包括例如酰卤、酰基胺、酰基吡啶鎓盐、酰基烷氧化物、酰基酚盐如对硝基苯氧基酰基、二硝基苯氧基酰基、氟苯氧基酰基和二氟苯氧基酰基。反应通常在惰性溶剂中、于降低的温度如-78℃至约50℃进行。反应同样可在无机碱例如碳酸钾或碳酸氢钠或有机碱如胺、包括吡啶、三甲胺、三乙胺、三乙醇胺等的存在下进行。
还包括其它类型的前药。例如，本文所述JAK抑制剂的自由羧基可衍生为酰胺或烷基酯。作为另一个实例，包括自由羟基的本发明化合物可通过将羟基转换为例如但不限于磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲基氨基乙酸酯或磷酰氧基甲氧基羰基而衍生为前药，如Fleisher,D.等,(1996)Improved oral drug delivery:solubility limitationsovercome by the use of Advanced Drug Delivery Reviews,19:115.中概述。同样包括羟基和氨基的氨基甲酸酯前药，如羟基的碳酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯。羟基衍生为(酰氧基)甲基和(酰氧基)乙基醚，其中所述酰基可以是任选被包括但不限于醚、胺和羧酸功能基的基团取代的烷基酯，或其中酰基是如前文所述的氨基酸酯，也包括在内。该类型的前药描述见J.Med.Chem.,(1996),39:10.中。更多具体的实例包括醇基上氢原子被置换为基团如(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷酰基、芳基酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中每个α-氨基酰基均独立选自天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(除去碳水化合物的半缩醛形式的羟基得到的基团)。
“离去基团”意指化学反应中第一反应物的一部分，其在化学反应中从第一反应物被置换。离去基团的实例包括但不限于卤素原子、烷氧基和磺酰氧基。磺酰氧基实例包括但不限于烷基磺酰氧基(例如甲基磺酰氧基(甲磺酸酯基)和三氟甲基磺酰氧基(三氟甲磺酸酯基))和芳基磺酰氧基(例如对甲苯磺酰氧基(甲苯磺酸酯基)和对硝基磺酰氧基(硝基磺酸酯基(nosylate group)))。
Janus激酶抑制剂化合物的合成
化合物可以通过本文所述的合成途径合成。在某些实施方案中，除了本文所包含的描述之外或根据本文所包含的描述，可以使用化学领域内熟知的方法。起始材料通常可从商业来源购得，如Aldrich Chemicals(Milwaukee,Wis.)或使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如按以下一般所述的方法制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-19,Wiley,N.Y.(1967-1999ed.),BeilsteinsHandbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin,包括增刊(也可以通过Beilstein线上数据库获得))，或Comprehensive Heterocyclic Chemistry,Editors Katrizky and Rees,Pergamon Press,1984。
化合物可以单独制备或作为包含至少2个、例如5至1,000个或10至100个化合物的化合物库制备。化合物库可以通过组合“分离和混合”方法或使用溶液相或固相化学通过多个并行合成、通过本领域技术人员已知方法制备。因此，根据本发明的另一方面，提供包含至少2个本发明化合物的化合物库。
出于说明目的，下述反应方案提供本发明化合物以及关键中间物的合成路径。更详细的各个反应步骤描述参见下文实施例部分。本领域技术人员将理解，也可采用其它合成途径。尽管一些特定的起始材料和试剂在下述方案中描述和讨论，其它起始材料和试剂可替代以提供不同的衍生物或反应条件。此外，根据下述方法制备的许多化合物可进一步根据本公开内容、使用本领域技术人员熟知的常规化学进行修饰。
在制备本发明化合物时，可能有必要保护中间体的远端功能基(例如伯胺或仲胺)。对这种保护的需求可依据远端功能基的性质和制备方法的条件而异。合适的氨基-保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苯磺酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBZ)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。对这种保护的需求由本领域技术人员很容易地决定。有关保护基与其用途的一般描述参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,JohnWiley&Sons,New York,1991中。
本发明化合物合成中通常使用的其它转换，可以使用多种试剂和条件进行，包括以下：
(1)羧酸与胺反应形成酰胺。所述转换可使用本领域技术人员已知的多种试剂实现，但全面综述可见Tetrahedron,2005,61,10827-10852.中。
(2)伯胺或仲胺与芳基卤化物或类卤化物例如三氟甲磺酸酯的反应通常称为“Buchwald-Hartwig交叉偶联反应”，可通过使用多种催化剂、配体和碱来实现。这些方法综述由Comprehensive Organic Name Reactions and Reagents,2010,575–581.提供。
(3)芳基卤化物和乙烯基硼酸或硼酸酯间的钯交叉偶联反应。这种转化是“Suzuki-Miyaura交叉偶联反应”的一种，该类型反应在Chemical Reviews,1995,95(7),2457-2483.中充分综述。
(4)本领域技术人员熟知酯水解以生成相应羧酸，且条件包括：对于甲酯和乙酯，使用强碱水溶液如氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾或强无机酸水溶液如HCl；对于叔丁基酯，水解使用酸实现，例如HCl的二噁烷溶液或三氟乙酸(TFA)的二氯甲烷(DCM)溶液。
反应方案1
Figure BDA0002282880340000361
反应方案1说明其中化合物6、8和10的合成。化合物1可以用4-溴代-1-(二氟甲氧基)-2-碘苯在钯催化条件下芳基化，生成化合物2。化合物2的硝基可用条件如铁和氯化铵还原，生成氨基苯胺3。酰胺键与市售吡唑[1,5-a]嘧啶-3-甲酸在偶联试剂例如但不限于PyAOP及有机碱例如但不限于DIPEA和DMAP存在下、有机溶液例如但不限于DMF中偶联，提供化合物4。化合物4可使用条件如碘化钠和CuI与碱如N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺、在溶剂如tBuOH中转换为相应的碘化物5。通过用取代的硼酸(或酯)或BF3K盐、在钯催化条件下和碱例如但不限于碳酸铯、在溶剂例如但不限于1,4-二噁烷中处理化合物4，可以形成化合物7。此外，通过用适当取代的苯酚在Pd催化偶联条件下与碱例如但不限于碳酸铯、在溶剂例如但不限于甲苯中处理化合物4，可合成化合物9。可通过使用酸例如但不限于HCl、在溶剂例如但不限于1,4-二噁烷中，实现移去式5、7和9化合物中SEM保护基团以生成式6、8和10化合物。
反应方案2
Figure BDA0002282880340000371
反应方案2说明其中式I–III化合物的合成。可以以适当取代的2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺与碱例如但不限于碳酸铯、在溶剂例如但不限于DMF中处理式6、8和10化合物，以得到式I–III化合物。
反应方案3
Figure BDA0002282880340000381
反应方案3说明其中式IV–VI化合物的合成。可以用适当取代的苯酚在Pd催化偶联条件下与碱例如但不限于碳酸铯、在溶剂例如但不限于甲苯中处理式II化合物(R1＝Br)以得到式IV化合物。可以用取代的硼酸(或酯)或BF3K盐在钯催化条件下与碱例如但不限于碳酸铯、在溶剂例如但不限于1,4-二噁烷中处理化合物4以得到式V化合物。可使用J.Am.Chem.Soc.,2014,136,4149–4152中描述的方法得到式VI的二氟甲基化合物。此外，当式V化合物的R1是适当取代的烯烃时，使用标准方法进一步处理该烯烃可实现提供氟代烷烃。
反应方案4
Figure BDA0002282880340000391
反应方案4说明其中式VII化合物的合成。可以用溴化剂例如但不限于NBS、在溶剂例如但不限于乙酸中处理市售4-(二氟甲氧基)苯酚，得到化合物12。可以用(溴二氟甲基)磷酸二乙酯与碱例如但不限于氢氧化钾、在溶剂例如但不限于乙腈中处理化合物12，实现化合物12的二氟甲基化，以形成化合物13。可以用4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑4-溴代-1-(二氟甲氧基)-2-碘代苯在钯催化条件下与碱例如但不限于碳酸钾、在溶剂例如但不限于DMA中处理化合物13，产生化合物14。化合物14的硝基可以使用条件如铁和氯化铵还原，产生氨基苯胺15。化合物15的酰胺键与市售吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸在偶联试剂例如但不限于PyAOP和有机碱例如但不限于DIPEA和DMAP存在下、在溶剂例如但不限于DMF中偶联，提供化合物16。用酸例如但不限于HCl、在有机溶剂例如但不限于1,4-二噁烷中可以移去化合物16的SEM保护基团，产生式VII化合物。
反应方案5
Figure BDA0002282880340000401
反应方案5说明其中式VIII化合物的合成。可以用2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺与碱例如但不限于碳酸铯、在溶剂例如但不限于DMF中处理化合物17，以得到化合物18。可用酸例如但不限于HCl、在有机溶剂例如但不限于1,4-二噁烷中移去化合物18的BOC保护基团，产生式VIII化合物。
应当理解，当合适的功能基存在时，多种通式化合物或在其制备中所使用的任意中间物可通过一种或多种标准合成方法、采用缩合、取代、氧化、还原或剪切反应进一步衍生。具体取代方法包括常规烷基化、芳基化、杂芳基化、酰化、磺酰化、卤化、硝化、甲酰化和偶联方法。
在另一个实例中，伯胺或仲胺基团可通过酰化转化为酰胺基团(-NHCOR'或–NRCOR')。酰化可通过与合适的酰氯在碱如三乙胺存在下、在适合的溶剂如二氯甲烷中反应实现，或通过与合适的羧酸在适合的偶联试剂如HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)存在下、在适合的溶剂如二氯甲烷中反应实现。类似地，胺基可通过与合适的磺酰氯在适合的碱如三乙胺存在下、在适合的溶剂如二氯甲烷中反应而转换为磺酰胺基(-NHSO2R'或–NR”SO2R')。伯胺或仲胺基团可通过在适合的碱如三乙胺存在下、在适合的溶剂如二氯甲烷中与合适的异氰酸酯反应而转换为脲基(-NHCONR'R”或–NRCONR'R”)。
可通过硝基(-NO2)还原得到胺(-NH2)，例如通过催化氢化，使用例如氢、在金属催化剂例如载体如碳上的钯存在下、在溶剂如乙酸乙酯或醇例如甲醇中。或者，可使用如金属、例如锡或铁在酸如盐酸存在下通过化学还原实现转换。
在另一个实例中，可还原腈(-CN)得到氨基(-CH2NH2)，例如催化氢化，使用例如氢在金属催化剂、例如载体如碳上的钯或阮内镍存在下、在溶剂如醚例如环醚如四氢呋喃中、在合适的温度、例如从约-78℃至溶剂回流温度。
在另一个实例中，氨基(-NH2)可得自羧酸基团(-CO2H)，通过转化为相应酰基叠氮化物(-CON3)、Curtius重排和水解所得异氰酸酯(-N＝C＝O)。
醛基(-CHO)可通过还原胺化转化为胺基(-CH2NR'R”)，使用胺和硼氢化物，例如三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠、在溶剂如卤代烃例如二氯甲烷或醇如乙醇中、必要时在酸如乙酸存在下、在环境温度附近进行。
在另一个实例中，可以通过使用Wittig或Wadsworth-Emmons反应、采用合适的正膦或膦酸酯在本领域技术人员已知的标准条件下将醛基转换为烯基(-CH＝CHR')。
醛基可通过在合适的溶剂如甲苯中、使用二异丁基氢化铝还原酯基(如–CO2Et)或腈基(-CN)得到。或者，可以使用任意合适的本领域技术人员已知的氧化剂氧化醇基得到醛基。
取决于R的性质，可通过酸或碱催化水解将酯基(-CO2R')转换为相应酸基(-CO2H)。如果R是t-丁基，酸催化水解可例如通过用有机酸如三氟乙酸在水性溶剂中处理或通过用无机酸如盐酸在水性溶剂中处理来实现。
羧酸基(-CO2H)可通过与适当的胺在合适的偶联试剂如HATU存在下、在合适的溶剂如二氯甲烷中反应而转换为酰胺基(CONHR'或–CONR'R”)。
在另一个实例中，可通过转换为相应的酰氯(-COCl)并随后通过Arndt-Eistert合成将羧酸同系化一个碳(即–CO2H到–CH2CO2H)。
在另一个实例中，-OH基可由相应的酯(例如-CO2R')或醛(-CHO)通过还原产生，使用例如复合金属氢化物如氢化铝锂在二乙醚或四氢呋喃中、或硼氢化钠在溶剂如甲醇中进行。或者，醇可通过还原相应酸(-CO2H)制备，使用例如氢化铝锂在溶剂如四氢呋喃中、或使用硼烷在溶剂如四氢呋喃中进行。
醇基可使用本领域技术人员已知的条件转换为离去基团，如卤素原子或磺酰氧基如烷基磺酰氧基，例如三氟甲基磺酰氧基或芳基磺酰氧基，例如对甲苯磺酰氧基。例如，醇可与亚硫酰氯在卤代烃(例如二氯甲烷)中反应，以得到相应的氯化物。反应中也可使用碱(例如三乙胺)。
在另一个实例中，醇、苯酚或酰胺基可烷基化，通过在溶剂如四氢呋喃中、在膦如三苯基膦和活化剂如偶氮二甲酸二乙酯、二异丙基酯或二甲酯存在下偶联苯酚或酰胺与醇来进行。或者，可使用合适的碱例如氢化钠去质子化、随后添加烷基化剂如烷基卤来实现烷基化。
化合物中的芳香族卤素取代基可进行卤素-金属交换，通过用碱例如锂碱如n-丁基或t-丁基锂、任选在低温例如-78℃左右、在溶剂如四氢呋喃中处理，之后以亲电子试剂猝灭以引入所期望的取代基。因此，例如可通过使用N,N-二甲基甲酰胺作为亲电子试剂引入甲酰基。或者，芳香族卤素取代基可经历金属(例如钯或铜)催化的反应，以引入例如酸、酯、氰基、酰胺、芳基、杂芳基、烯基、炔基、硫基-或氨基取代基。可采用的合适的方法包括Heck、Suzuki、Stille、Buchwald或Hartwig所描述的那些。
与合适的亲核试剂如胺或醇反应后，芳香族卤素取代基还可发生亲核置换。有利的是，这类反应可在微波辐射存在下、在升高的温度进行。
分离方法
在每个示例性方案中，将反应产物彼此或从起始材料分离可以是有利的。每一步或系列步骤的所期望产品通过领域内常规技术分离或纯化(下文称为分离)至所需的均匀度。典型的所述分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶或研磨、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可涉及多种方法，包括例如反相和正相色谱；尺寸排阻色谱；离子交换色谱；超临界流体色谱；高、中和低压液相色谱方法和装置；小规模分析色谱；模拟移动床色谱(SMB)和制备级薄层或厚层色谱，以及小规模薄层色谱和快速色谱技术。
另一类分离方法涉及以试剂处理混合物，所述试剂经选择以结合或使其可分离所需产品、未反应的起始材料、反应副产物等。所述试剂包括吸附剂或吸收剂如活性炭、分子筛、离子交换介质等。或者，所述试剂在碱性材料的情况下可以是酸，在酸性材料情况下可以是碱，结合试剂如抗体、结合蛋白、选择性螯合剂如冠醚、液/液离子萃取剂(LIX)等。
合适的分离方法的选择依据所涉及材料的性质。分离方法的实例包括沸点、蒸馏和升华中的分子量、色谱中是否存在极性功能基、多相萃取中材料在酸性或碱性介质中的稳定性等。本领域技术人员将应用最有可能实现所需分离的技术。
非对映异构体混合物可通过本领域技术人员熟知的方法如色谱或分步结晶、基于其物理化学差异而分离成各自非对映异构体。对映体可如下分离：与适当的旋光活性化合物(例如手性助剂如手性醇类或Mosher氏酰氯)反应而将对映体混合物转化为非对映异构混合物、分离非对映异构体并将单个非对映异构体转换(例如水解)为相应的纯对映体。同样，一些本发明化合物可以是阻转异构体(例如取代的联芳基)，也被视为本发明的一部分。对映体也可使用手性HPLC柱或超临界流体色谱分离。
基本不含有其立体异构体的单一立体异构体例如对映体可经由拆分外消旋混合物得到，使用方法如利用光学活性拆分剂形成非对映异构体(Eliel,E.和Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,J.Chromatogr.,113(3):283-302(1975))。本发明手性化合物的外消旋混合物可经由任何合适的方法分离和隔离，包括：(1)与手性化合物形成离子非对映异构体盐，通过分步结晶或其它方法分离，(2)用手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体，并转换为纯立体异构体，和(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology,IrvingW.Wainer,Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
非对映异构体盐可通过对映体纯手性碱如番木鳖碱、奎宁、麻黄碱、士的宁、α-甲基-β-苯基乙胺(安非他命)等与带有酸性功能基如羧酸和磺酸的不对称化合物的反应而形成。非对映异构体盐可通过分步结晶或离子色谱被诱导分离。对于氨基化合物光学异构体的分离，加入手性羧酸或磺酸如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸可形成非对映异构体盐。
或者，使要拆分的底物与手性化合物的一个对映体反应以生成非对映异构体对(Eliel,E.和Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994,p.322)。非对映异构体化合物可通过使非对称化合物与对映体纯手性衍生试剂如薄荷基衍生物反应、之后分离非对映异构体并水解以得到纯的或富集的对映体而形成。测定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯如薄荷基酯，例如在碱存在下制备(-)氯甲酸薄荷酯，或Mosher酯、α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基醋酸酯(Jacob,J.Org.Chem.47:4165(1982))，并对两种阻旋异构对映体或非对映异构体的存在进行NMR光谱分析。可通过正相-和反相-色谱、按照分离阻旋异构的萘基-异喹啉的方法(WO 96/15111，以引文方法并入本文)分离和隔离阻旋异构化合物的稳定非对映异构体。通过方法(3)，两种对映体的外消旋混合物可通过手性固定相色谱分离(Chiral LiquidChromatography W.J.Lough,Ed.,Chapman and Hall,New York,(1989)；Okamoto,J.ofChromatogr.513:375-378(1990))。富集或纯化的对映体可通过用于辨别其它含有不对称碳原子的手性分子的方法辨别，如旋光和圆二色谱。手性中心和对映体的绝对立体化学可通过x-射线晶体学测定。
可以通过表征方法如NMR和分析型HPLC观察位置异构体和用于其合成的中间物。对于某些相互转化能垒足够高的化合物，其E和Z异构体可以分离，例如通过制备型HPLC。
药物组合物和施用
本发明涉及的化合物是JAK激酶抑制剂，如JAK1抑制剂，并且可以用于多种疾病的治疗，例如炎性疾病，如哮喘。
因此，另一个实施方案提供药物组合物或药剂，包含本发明化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，以及使用本发明化合物以制备所述组合物和药剂的方法。
在一个实例中，本发明化合物或其药学上可接受的盐可通过在环境温度、合适的pH值和所需纯度下与生理学上可接受的载体即在所用剂量和浓度下对接受者无毒的载体混合而配制成盖伦施用形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但典型在约3至约8的任意范围内。在一个实例中，本发明化合物或其药学上可接受的盐配制在pH5的醋酸盐缓冲液中。在另一个实施方案中，本发明的化合物是无菌的。化合物可作为例如固体或无定形组合物、冻干制剂或水溶液储存。
组合物的配制、给药和施用方式均符合良好医学实践。在此背景下需要考虑的因素包括所治疗特定障碍、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床情况、障碍的起因、药剂递送位置、施用方法、施用安排以及医生从业者熟知的其它因素。
应当理解，任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄率、药物组合以及接受治疗的特定疾病的严重程度。最佳剂量水平和给药频率将通过临床试验确定，如药学领域所要求的。通常，口服施用的日剂量范围在约0.001mg至约100mg每kg患者体重范围间，常为0.01mg至约50mg每kg，例如0.1至10mg每kg，单剂量或分剂量服用。通常，吸入施用的日剂量范围在约0.1μg至约1mg每kg患者体重范围间，优选0.1μg至50μg每kg，单剂量或分剂量服用。另一方面，可能有必要在某些情况下使用超出这些限制的剂量。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可采取任意合适方式施用，包括口服、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内、吸入和硬膜外和鼻内，和如需局部治疗，也可采取病灶内施用。胃肠外输注包括肌肉、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，采用吸入施用。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以以任意便捷的施用形式给药，例如片剂、粉末、胶囊、锭剂、颗粒、溶液、分散剂、混悬剂、糖浆、喷雾、气化剂(vapors)、栓剂、凝胶、乳剂、贴剂等。所述组合物可含有药物制剂中的常规组分，例如稀释剂(例如葡萄糖、乳糖或甘露醇)、载体、pH调节剂、缓冲剂、甜味剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、加香剂、调味剂、其它已知添加剂以及其它活性剂。
合适的载体和赋形剂为本领域技术人员熟知并详述于例如Ansel,Howard C.,等,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.,等Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,PharmaceuticalPress,2005中。例如载体包括溶剂、分散介质、包衣料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等材料和其组合，如本领域技术人员已知(参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,pp 1289-1329,1990)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则囊括其在治疗或药物组合物中的用途。示例性赋形剂包括磷酸二钙、甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁或其组合。药物组合物依据其是否以固体、液体或气溶胶形式施用或是否所述施用途径需要无菌施用可包括不同类型的载体或赋形剂。
例如用于口服施用的片剂和胶囊可以以单位剂量形式呈递，并可以包含常规赋形剂如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如土豆淀粉或可接受的润湿剂如十二烷基硫酸钠。可以依据常规药学实践中熟知的方法将片剂包衣。口服液体制剂可以是例如水性或油性混悬剂、溶液、乳剂、糖浆或酏剂，或可以作为干燥产品存在，在使用前用水或其它合适的媒介物重构。所述液体制剂可含有常规添加剂如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水媒介物(可能包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，以及如果需要的话，常规调味剂或着色剂。
为了局部施用于皮肤，化合物可制成霜剂、洗液或软膏。可用于药物的霜剂或软膏制剂是本领域熟知的常规制剂，例如药学标准教科书如British Pharmacopoeia中描述。
本发明化合物或其药学上可接受的盐也可配制用于吸入，例如作为鼻喷雾剂，或干粉或气雾剂吸入剂。为了吸入递送，化合物典型是微粒形式，其可以通过多种技术制备，包括喷雾干燥、冷冻干燥和微粉化。可通过使用例如压力驱动的喷射雾化器或超声波雾化器产生气溶胶，如使用推进剂驱动的计量气溶胶，或例如从吸入胶囊或其它“干粉”递送系统无推进剂施用微粉化化合物。
举例来说，本发明组合物可制备成雾化器递送的混悬液，或在液体推进剂中的气溶胶，例如用于加压定量剂量吸入器(PMDI)。技术人员已知适合用于PMDI的推进剂，并包括CFC-12、HFA-134a、HFA-227、HCFC-22(CCl2F2)和HFA-152(CH4F2和异丁烷)。
在一些实施方案中，本发明组合物是干粉形式，以使用干粉吸入器(DPI)递送。已知多种类型的DPI。
施用递送的微粒可以与辅助递送和释放的赋形剂一同制剂。例如，在干粉制剂中，微粒可以与有助于从DPI流入肺的大载体颗粒一同制剂。已知合适的载体颗粒，并包括乳糖颗粒；其质量中值空气动力学直径可以是例如大于90μm。
在基于气溶胶的制剂的情况下，一个实例是：
Figure BDA0002282880340000461
*或其药学上可接受的盐
本发明化合物或其药学上可接受的盐可依据所使用的吸入器系统如所述地给药。除化合物外，施用形式可另外包含如上所述赋形剂或例如推进剂(例如在计量气溶胶情况下的Frigen)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂、填充剂(例如在粉末吸入剂情况下的乳糖)或酌情其它活性化合物。
为了吸入的目的，大量系统可用于产生和施用最佳粒径的气溶胶，使用对患者合适的吸入技术。除了使用适配器(垫片、膨胀器)和梨形容器(例如
Figure BDA0002282880340000462
)，以及发射喷雾(puffer spray)的自动装置
Figure BDA0002282880340000463
外，对计量气溶胶，尤其是在干粉吸入剂的情况下，可使用多种技术方案(例如
Figure BDA0002282880340000464
或吸入器，例如U.S.专利号5,263,475中所描述，以引文形式并入本文)。此外，本发明化合物或其药学上可接受的盐可在多室装置中递送以允许组合活性剂的递送。
所述化合物或其药学上可接受的盐也可通过胃肠外在无菌介质中施用。依据所使用的媒介物和浓度，所述化合物可以悬浮或溶解在媒介物中。有利地，佐剂如局部麻醉剂、防腐剂或缓冲剂可以溶解于媒介物中。
靶向吸入药物递送
本发明的化合物可用于靶向吸入递送。通过局部(吸入)施用递送至肺的药物优化最近被综述(Cooper,A.E.等Curr.Drug Metab.2012,13,457-473)。
由于递送设备的限制，人类吸入药物的剂量可能是低的(大约<1mg/日)，这需要高度有效的分子。因为如从吸入器中单次抽吸可递送的药物的有限数量以及与肺中高气溶胶负荷相关的安全担忧(例如咳嗽或刺激)等因素，针对目标靶点的高度效力对吸入药物而言尤为重要。例如，在一些实施方案中，如本文所述JAK1生化测定中约0.5nM或更少的Ki以及如本文所述JAK1基于细胞的测定中约20nM或更少的IC50，对于吸入JAK1抑制剂可能是理想的。在其它实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐的预计人体剂量比本领域内已知化合物的预计人体剂量至少小1/2。因此，在一些实施方案中，本文所述化合物(或其药学上可接受的盐)表现出所述效力值。
IL13信号传导密切牵涉于哮喘发病机理。IL13是需要活性JAK1以传导信号的细胞因子。因此，JAK1的抑制也可抑制IL13信号传导，这可为哮喘患者带来益处。IL13信号传导在动物模型(例如小鼠模型)中的抑制可预测对人类哮喘患者的未来益处。因此，吸入JAK1抑制剂显示在动物模型中对IL13信号传导的抑制可能是有益的。测量所述抑制的方法是本领域已知的。例如，如本文中讨论和本领域内已知，JAK1依赖性STAT6磷酸化是已知的IL13刺激下游。因此，在一些实施方案中，本文所述化合物(或其药学上可接受的盐)显示对肺pSTAT6诱导的抑制。为检查在pSTAT6水平的药效学作用，将本发明化合物与1μg IL13鼻内共同给药于雌性Balb/c小鼠。在临施用前，将化合物配制在0.2％(v:v)Tween80的盐水溶液中并与IL13 1:1(v:v)混合。通过移液管将固定体积(50μL)直接分配到鼻孔中向轻度麻醉(异氟烷)小鼠施用鼻内剂量，以达到目标剂量水平(3mg/kg，1mg/kg，0.3mg/kg，0.1mg/kg)。在给药后0.25小时，通过心脏穿刺收集血样(约0.5mL)并离心(1500g，10min，+4℃)得到血浆。将肺部以冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)灌注、称重，并在液氮中速冻。所有样品在约-80℃保存到分析时。以每克组织加入2mL HPLC级水后，使用Omni-Prep Bead Ruptor在4℃将解冻的肺样品称重并匀浆。血浆和肺部样品通过用三倍体积乙腈的蛋白质沉淀提取，所述乙腈包含甲苯磺丁脲(50ng/mL)和拉贝洛尔(25ng/mL)作为分析内标。涡旋混合并在3200g和4℃离心30分钟后，将上清液用HPLC级水在96孔板中适量稀释(例如1:1v:v)。针对一系列基质匹配的校准和质量控制标准，将血浆和肺部样品的代表性等分试样通过LC-MS/MS进行母体化合物分析。通过将对照Balb/c小鼠血浆或肺匀浆(在HPLC级水中2:1)的等分试样以被测化合物加标并按照实验样品的描述进行提取来制备标准物。肺:血浆比率被确定为在采样时间(0.25h)平均肺浓度(μM)与平均血浆浓度(μM)的比率。以下列方程计算理论靶点占有，假定所有药物在肺组织内且未结合的部分可与靶点相互作用：
(未结合组织浓度/(未结合组织浓度+体外细胞效力，即IC50))*100
为测量pSTAT6水平，将小鼠肺在-80℃冷冻保存至测定时并在0.6ml冰冷的细胞裂解缓冲液(Cell Signalling Technologies，目录#9803S)中匀浆，所述缓冲液补充有1mMPMSF和蛋白酶(Sigma Aldrich，目录#P8340)和磷酸酶(Sigma Aldrich，目录#P5726和P0044)抑制剂的合剂。将样品在4℃以16060xg离心4分钟以去除组织碎片，并使用PierceBCA蛋白质测定试剂盒(目录#23225)确定匀浆的蛋白质浓度。将样品在冰冷的蒸馏水中稀释至浓度5mg/ml并通过Meso Scale Discovery电化学发光免疫分析法测定pSTAT6水平。简而言之，将5μl/孔的150μg/ml STAT6捕获抗体(R&D Systems，目录#MAB 2169)包被至96孔Meso Scale Discovery高结合板(目录#L15XB-3)上，并在室温风干5小时。通过加入150μl/孔30mg/ml Meso Scale Discovery Blocker A(目录#R93BA-4)封闭孔板，并在室温、微孔板摇床上孵育2小时。将封闭的板以Meso Scale Discovery TRIS洗涤缓冲液(目录#R61TX-1)洗涤4次，随后以50μl/孔转移肺匀浆以达到250μg/孔的蛋白质负载。将测定板在4℃孵育过夜并以TRIS洗涤缓冲液洗涤4次，随后加入25μl/孔2.5μg/ml sulfotag-标记的pSTAT6检测抗体(BD Pharmingen，目录#558241)在室温置于微孔板摇床上2小时。以TRIS洗涤缓冲液将板洗涤4次，加入150μl/孔1X Meso Scale Discovery Read Buffer T(目录#R92TC-1)。通过Meso Scale Discovery SECTOR S 600仪器测定电化学发光来定量肺匀浆的pSTAT6水平。
JAK1和JAK2间的选择性对吸入JAK1抑制剂可能很重要。例如GMCSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)是专门通过JAK2发出信号的细胞因子。GMCSF活性的中和与肺中肺泡蛋白沉着症(PAP)相关。然而，次最大JAK2抑制似乎与PAP无关。因此，即使是适度的JAK1 vsJAK2选择性也可能在避免GMCSF通路的完全抑制和避免PAP是有益的。例如，对JAK1相对JAK2的选择性为约2x-5x的化合物可能对吸入JAK1抑制剂是有益的。因此，在一些实施方案中，本文所述化合物(或其药学上可接受的盐)显示出所述选择性。测量JAK1和JAK2选择性的方法是本领域内已知的，且信息也可在本文实施例中找到。
此外，可能希望吸入的JAK1抑制剂对一种或多种其它激酶具有选择性以减少脱靶激酶通路抑制而产生潜在毒性的可能性。因此，吸入的JAK1抑制剂针对广泛的非JAK激酶具有选择性也是有益的，如在可得自ThermoFisher Scientific的SelectScreenTM生化激酶分析服务、使用AdaptaTM筛选方案测定条件(2016年7月29日修订)的方案中、LanthaScreenTMEu激酶结合测定筛选方案和测定条件(2016年6月7日修订)和/或Z’LYTETM筛选方案和测定条件(2016年9月16日修订)。例如，本发明化合物或其药学上可接受的盐表现出相对一组非JAK激酶，对JAK1具有至少50倍的选择性。因此，在一些实施方案中，本文所述化合物(或其药学上可接受的盐)显示出所述选择性。
肝细胞毒性、一般细胞毒性或未知机理的细胞毒性对潜在药物、包括吸入药物来说是不期望的特征。吸入的JAK1抑制剂对多种细胞类型具有低内在细胞毒性可能是有益的。用于评估细胞毒性的典型细胞类型包括原代细胞如人肝细胞，和增殖性确定细胞系如Jurkat、HEK-293和H23。例如，在对所述细胞类型的细胞毒性测量中，吸入JAK1抑制剂具有大于50μM或大于100μM的IC50可能是有益的。因此，在一些实施方案中，本文所述化合物(或其药学上可接受的盐)表现出所述数值。测量细胞毒性的方法为本领域已知。在一些实施方案中，本文所述化合物进行如下测试：
(a)在T175烧瓶中将Jurkat、H23和HEK293T细胞保持在亚汇合密度。将细胞以450细胞/45μl培养基铺在Greiner384孔黑色/透明的组织培养物处理的板中(Greiner目录#781091)。分配细胞后，将板在室温平衡30分钟。在室温30分钟后，将细胞在CO2和湿度控制培养箱中37℃孵育过夜。第二天，以100％DMSO(DMSO在细胞上的最终浓度＝0.5％)稀释的化合物处理细胞，以10点的剂量-反应曲线，最高浓度为50μM。之后将细胞和化合物在CO2和湿度控制培养箱中于37℃孵育72小时过夜。72小时孵育后，使用
Figure BDA0002282880340000491
(Promega目录#G7572)测量所有孔的存活力。在室温孵育20分钟后，在EnVisionTM(Perkin ElmerLife Sciences)使用发光模式读板；
(b)使用人原代肝细胞：将被测化合物制成10mM的DMSO溶液。此外，将阳性对照如氯丙嗪制成10mM的DMSO溶液。通常使用7-点剂量反应曲线以2倍稀释评估被测化合物。典型地，测试的最大浓度是50-100μM。最高浓度通常由被测化合物的溶解度决定。将冷冻保存的原代人肝细胞(BioreclamationIVT)(批次IZT)在InVitroGroTM HT解冻培养基(BioreclamationIVT)中、在37℃解冻、沉淀并重悬。通过台盼蓝排除法评估肝细胞活力，并将细胞以13,000细胞/孔的密度接种在黑壁BioCoatTM胶原蛋白384孔板(Corning BD)中的、补充有1％TorpedoTM抗生素混合物(BioreclamationIVT)和5％胎牛血清的InVitroGroTMCP平板培养基中。将细胞在处理前过夜孵育18小时(37℃，5％CO2)。在孵育18小时后，除去平板培养基并用化合物处理肝细胞，所述化合物稀释在包含1％TorpedoTM抗生素混合物和1％DMSO(无血清条件)的InVitroGroTM HI孵育培养基中。将肝细胞以浓度如0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25和50μM的被测化合物处理，最终体积为50μL。测定中包括阳性对照(例如氯丙嗪)，通常浓度与被测化合物相同。用1％DMSO作为媒介物对照处理另外的细胞。所有处理进行48小时(37℃下，5％CO2)且每次处理条件一式三份进行。在化合物处理48小时后，采用
Figure BDA0002282880340000501
细胞活力测定法(Promega)作为终点分析，测量ATP含量以确定细胞活力。依据制造说明书进行测定。使用EnVisionTMMuliplate读数仪(PerkinElmer,Waltham,MA,USA)确定发光。发光数据相对于媒介物(1％DMSO)对照孔标准化。抑制曲线和IC50估计值通过对数转换的抑制剂浓度(包括媒介物在内的7点连续稀释)相对于可变Hill斜率的归一化响应进行非线性回归而生成，顶部和底部分别限制为常数值100和0(GraphPad PrismTM,GraphPad Software,La Jolla,CA,USA)。
hERG(人类Ether-à-go-go相关基因)钾通道的抑制可能致使长QT综合征和心律不齐。尽管吸入JAK1抑制剂的血浆水平预计较低，通过肺吸收离开肺进入血流的肺部沉积化合物将直接循环至心脏。因此，吸入JAK1抑制剂的局部心脏浓度可以瞬时高于总血浆水平，尤其是施药后即时。因此，最小化吸入JAK1抑制剂的hERG抑制可能是有益的。例如，在一些实施方案中，优选hERG IC50是自由药物血浆Cmax的30倍。因此，在一些实施方案中，本发明化合物(或其药学上可接受的盐)在如以下条件中显示最小化的hERG抑制：
(a)采用hERG 2pt自动膜片钳条件，检查化合物对哺乳动物细胞中表达的hERG的体外效应，在室温使用QPatch
Figure BDA0002282880340000502
(Sophion Bioscience A/S,Denmark)评估，此为一种自动平行膜片钳系统。在一些情况下，化合物仅以一种或两种浓度如1或10μM测试。在其它情况下，建立更广泛的浓度响应关系以允许IC50估值。例如，选择被测化合物浓度以半对数增量跨越约10-90％的抑制范围。在两个或更多单元格(cell)(n≥2)中检测每种测试物品浓度。每种测试物品浓度的暴露时间至少是3分钟；和/或
(b)WO 2014/074775实施例中描述的那些，在“Effect on Cloned hERGPotassium Channels Expressed in Mammalian Cells,”下，ChanTestTM，Charles RiverCompany，方案具有以下变化：将稳定表达hERG的细胞保持在-80mV。使用固定幅度的脉冲模式测量由于化合物引起的hERG钾电流的起始和稳态抑制(调节预脉冲：+20mV持续1秒；重极化试验渐升至(repolarizing test ramep to)90mV(-0.5V/s)，以5秒的间隔重复)。每次记录均以最后应用超大浓度的参考物质E-4021(500nM)作为结束(Charles River公司)。将剩余未抑制电流从数据中离线减去以确定测试物质的hERG抑制效力。
CYP(细胞色素P450)抑制对吸入JAK1抑制剂可能不是所需的特质。例如，可逆或时间依赖性CYP抑制剂可能引起其自身血浆水平或其它共施用药物(药物相互作用)的血浆水平不期望的增加。此外，时间依赖性CYP抑制有时由母体药物向反应性代谢物的生物转化引起。所述反应性代谢物可能共价修饰蛋白质，潜在导致毒性。因此，最小化可逆和时间依赖性CYP抑制对吸入JAK1抑制剂可能是有益的。因此，在一些实施方案中，本发明化合物(或其药学上可接受的盐)显示出最小或没有可逆和/或时间依赖性CYP抑制。测量CYP抑制的方法是本领域已知的。使用合并(n＝150)人肝微粒体(Corning,Tewksbury,MA)、以之前报道的方法(Halladay等,Drug Metab.Lett.2011,5,220–230)、在0.16–10μM的化合物浓度范围内评估本文所述化合物的CYP抑制。孵育时间和蛋白质浓度依据CYP同种型(isoform)和所分析的探针底物/代谢物。使用每种CYP的以下底物/代谢物和孵育时间及蛋白质浓度：CYP1A2，非那西汀/对乙酰氨基酚，30分钟，0.03mg/ml蛋白质；CYP2C9，华法林/7-羟基华法林，30分钟，0.2mg/ml蛋白质；CYP2C19，美芬妥英/4-羟基美芬妥英，40分钟，0.2mg/ml蛋白质；CYP2D6，右美沙芬/右啡烷(Dextrorphan)，10分钟，0.03mg/ml蛋白质；CYP3A4，咪达唑仑/1-羟基咪达唑仑，10分钟，0.03mg/ml蛋白质和CYP3A4睾酮/6β-羟基睾酮，10分钟，0.06mg/ml蛋白质。先前已经确定这些条件与CYP-特异性代谢物形成线性速率。所有反应均以1mM NADPH引发，并通过加入包含适当稳定标记内标物的0.1％甲酸的乙腈溶液终止。以LC-MS/MS分析样品。
对注定要通过干粉吸入递送的化合物，还要求能够产生可微粒化至1-5μm的化合物的结晶形式。粒径是吸入化合物肺部沉积的重要决定因素。直径小于5微米(μm)的颗粒通常被定义为可呼吸的。直径大于5μm的颗粒更有可能沉积在口咽中并相应地较小可能沉积在肺部。此外，直径小于1μm的细颗粒比大颗粒更有可能保持悬浮在空气中，并相应地更有可能从肺中呼出。因此，对于作用部位在肺部的吸入药物，1-5μm的颗粒直径可能是有益的。用于测量颗粒粒径的典型方法包括激光衍射和级联碰撞(cascade impaction)。用于定义颗粒粒径的典型值包括：
·D10、D50和D90。这些是对颗粒直径的量度，分别表示样品的10％、50％或90％低于该值。例如3μm的D50表明样品的50％尺寸低于3μm。
·质量平均空气动力学直径(MMAD)。MMAD是按质量计颗粒的50％更大且50％更小处的直径。MMAD是衡量集中趋势的指标。
·几何标准偏差(GSD)。GSD是MMAD的分散度大小的量度，或空气动力学粒度分布传播的量度。
吸入药物的通用制剂是干粉制剂，包括活性药物成分(API)与载体如乳糖混合，含有或不含有额外添加剂如硬脂酸镁。对所述或其它制剂，API自身具有允许将其研磨成1-5μm的可吸入粒径的特性可以是有益的。应避免颗粒团聚，其可通过本领域已知方法测量，如检查不同压力条件下的D90值。相应地，在一些实施方案中，本发明化合物(或其药学上可接受的盐)可以以所述可吸入粒径制备，其很少或不团聚。
至于结晶度，对于一些吸入药物制剂，包括乳糖混合物，重要的是要使用特定结晶形式的API。结晶度和结晶形式可能会影响与吸入药物相关的许多参数，包括但不限于：化学和空气动力学随时间的稳定性、与吸入制剂成分如乳糖的相容性、吸湿性、肺滞留性和肺刺激性。因此，稳定可重现的结晶形式对吸入药物可能是有益的。此外，用于将化合物研磨至所需粒径的技术通常是高能的，并可能引起低熔点结晶形式转换为其它结晶形式，或成为完全或部分无定形形式。熔点低于150℃的结晶形式可能与研磨不兼容(incompatible)，而熔点低于100℃的结晶形式有可能与研磨不相容(non-compatible)。因此，对吸入药物来说具有至少高于100℃的熔点可能是有益的，且理想情况下高于150℃。相应地，在一些实施方案中，本文化合物(或其药学上可接受的盐)显示出所述性质。
此外，最小化分子量可助于降低吸入JAK1抑制剂的有效剂量。较低的分子量导致相应更高数量的每单位质量活性药物成分(API)的分子。因此找到保留吸入药物的所有其它所需性质的吸入JAK1抑制剂的最小分子量可能是有益的。
最后，所述化合物需要在给定时间段内在肺中保持足够的浓度，以便能够发挥所需持续时间的药理作用，并且对于不需要对该靶标进行全身抑制的药理靶标，应使其具有低全身暴露。肺对大分子(蛋白质、肽)以及小分子具有固有的高渗透性，具有并行的短肺半衰期，因此，可能有必要通过对化合物的一种或多种性质改性来降低肺吸收率：最小化膜通透性、增加pKa、增加cLogP、降低溶解度、降低溶出率或向化合物中引入一定程度碱性(例如引入胺)以提升与富含磷脂的肺组织的结合，或通过捕获于酸性亚细胞区室如溶酶体(pH5)。测量所述性质的方法是本领域已知的。
因此，在一些实施方案中，本发明化合物(或其药学上可接受的盐)表现出一种或多种上述特性。此外，在一些实施方案中，相对于本领域内已知化合物，本发明化合物有利地表现出一种或多种所述特性，这对于吸入药物相比意欲作为口服药物的本领域化合物尤为如此。例如，具有快速口服吸收的化合物通常在吸入时很难保留在肺中。
Janus激酶抑制剂的治疗方法及用途
本发明的化合物或其药学上可接受的盐抑制Janus激酶如JAK1激酶的活性。例如，化合物或其药学上可接受的盐抑制JAK1激酶引起的信号转导子和转录激活子(STATs)的磷酸化以及STAT介导的细胞因子产生。本发明的化合物可通过细胞因子通路用于抑制细胞中的JAK1激酶活性，如IL-6、IL-15、IL-7、IL-2、IL-4、IL-9、IL-10、IL-13、IL-21、G-CSF、IFNα、IFNβ或IFNγ通路。因此，在一个实施方案中，提供使细胞与本发明化合物或其药学上可接受的盐接触以抑制细胞中Janus激酶活性(例如JAK1活性)的方法。
所述化合物可用于治疗由异常IL-6、IL-15、IL-7、IL-2、IL-4、IL9、IL-10、IL-13、IL-21、G-CSF、IFNα、IFNβ或IFNγ细胞因子信号引起的免疫性障碍。
因此，一个实施方案包括本发明化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗。
在一些实施方案中，提供本发明化合物或其药学上可接受的盐在炎性疾病治疗中的用途。进一步提供本发明化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗炎性疾病如哮喘的药剂中的用途。还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗炎性疾病如哮喘。
另一个实施方案包括预防、治疗患者响应于Janus激酶活性如JAK1激酶活性抑制的疾病或病症如哮喘或减轻其严重程度的方法。所述方法可包括向患者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐的步骤。在一个实施方案中，响应于Janus激酶如JAK1激酶抑制的所述疾病或病症是哮喘。
在一个实施方案中，所述疾病或病症是癌症、中风、糖尿病、肝肿大、心血管疾病、多发性硬化、阿尔兹海默症、囊性纤维化、病毒性疾病、自身免疫疾病、动脉粥样硬化、再狭窄、银屑病、类风湿性关节炎、炎性肠病、哮喘、过敏性疾病、炎症、神经系统疾病、激素相关疾病、器官移植相关病症(例如移植排斥)、免疫缺陷障碍、破坏性骨障碍、增殖性障碍、感染性疾病、细胞死亡相关病症、凝血酶诱导的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病症、CNS障碍或骨髓增殖性障碍。
在一个实施方案中，所述炎性疾病是类风湿性关节炎、银屑病、哮喘、炎性肠病、接触性皮炎或迟发型超敏反应。在一个实施方案中，所述自身免疫疾病是类风湿性关节炎、狼疮或多发性硬化。
在另一个实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗肺病如纤维化肺病或间质性肺部疾病(例如间质性肺炎)。在一些实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗特发性肺纤维化(IPF)、系统性硬化间质性肺疾病(SSc-ILD))、非特异性间质性肺炎(NSIP)、类风湿性关节炎-相关间质性肺病(RA-ILD)、结节病、超敏性肺炎，或继发于硬皮病以外的结缔组织疾病(例如多肌炎、皮肌炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或混合性结缔组织疾病)的ILD。
在一个实施方案中，所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、阴茎癌、泌尿生殖道癌、精原细胞瘤、食道癌、喉癌、胃癌(gastric)、胃癌(stomach)、胃肠道癌、皮肤癌、角化棘皮瘤(keratoacanthoma)、滤泡癌、黑素瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞癌(NSCLC)、肺腺癌、肺鳞状癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、乳头状癌(papillary)、膀胱癌、肝癌、胆道癌、肾(kidney)癌、骨癌、髓样障碍(myeloid disorder)、淋巴样障碍(lymphoiddisorder)、毛细胞癌、口腔和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口(mouth)癌、唾液腺癌、咽癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肾(renal)癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、大肠癌、子宫内膜癌、子宫癌、脑癌、中枢神经系统癌症、腹膜癌、肝细胞癌、头癌、颈癌、霍奇金氏(Hodgkin’s)病或白血病。
在一个实施方案中，所述疾病是骨髓增殖性障碍。在一个实施方案中，所述骨髓增殖性障碍是真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化或慢性髓性白血病(CML)。
另一个实施方案包括本发明化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗本文所述疾病(例如炎性障碍、免疫障碍或癌症)的药剂中的用途。在一个实施方案中，本发明提供通过靶向抑制JAK激酶如JAK1治疗如本文所述疾病或病症、例如炎性障碍、免疫障碍或癌症的方法。
组合疗法
所述化合物可单独施用或与其它活性剂组合用于治疗。药物组合物或给药方案的第二种或另外的(例如第三种)化合物通常具有与本发明化合物的互补活性，使得它们不会相互不利影响。这类活性剂以达到预期目的的有效量适宜地组合存在。所述化合物可以在单一药物组合物中共同施用或分别施用，当分别施用时可以同时或相继进行。所述相继施用在时间上可以是接近或隔远的。
例如，其它化合物可与本发明化合物或其药学上可接受的盐组合用于预防或治疗炎性疾病如哮喘。组合疗法的合适治疗剂包括但不限于：腺苷A2A受体拮抗剂；抗感染药；非甾体糖皮质激素受体(GR受体)激动剂；抗氧化剂；β2肾上腺素受体激动剂；CCR1拮抗剂；趋化因子拮抗剂(非CCR1)；皮质类固醇；CRTh2拮抗剂；DP1拮抗剂；甲酰基肽受体拮抗剂；组蛋白脱乙酰酶激活剂；氯通道hCLCA1阻断剂；上皮钠通道阻断剂(ENAC阻断剂；细胞间黏附分子1阻断剂(ICAM阻断剂)；IKK2抑制剂；JNK抑制剂；瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)抑制剂；Bruton’s酪氨酸激酶(BTK)抑制剂(例如非尼替尼(fenebrutinib))；脾酪氨酸激酶(SYK)抑制剂；类胰蛋白酶-β抗体；ST2受体抗体(例如AMG282)；环加氧酶抑制剂(COX抑制剂)；脂加氧酶抑制剂；白细胞三烯受体拮抗剂；双重β2肾上腺素受体激动剂/M3受体拮抗剂(MABA化合物)；MEK-1抑制剂；髓过氧化物酶抑制剂(MPO抑制剂)；毒蕈碱拮抗剂；p38MAPK抑制剂；磷酸二酯酶PDE4抑制剂；磷脂酰肌醇3-激酶δ抑制剂(PI3-激酶δ抑制剂)；磷脂酰肌醇3-激酶γ抑制剂(PI3-激酶γ抑制剂)；过氧物酶体增殖物活化受体激动剂(PPARγ激动剂)；蛋白酶抑制剂；视黄酸受体调节剂(RARγ调节剂)；他汀类药物；血栓烷拮抗剂；TLR7受体激动剂；或血管舒张剂。
此外，本发明化合物或其药学上可接受的盐可与以下物质组合：(1)皮质类固醇，如双丙酸阿氯米松、阿洛米松(amelometasone)、倍氯米松双丙酸酯、布地奈德、丙酸布地克索(butixocort propionate)、比索奈德(biclesonide)、丙酸氯倍他索、去异丁酸环缩松(desisobutyrylciclesonide)、地塞米松、艾泼诺双氯乙酸盐(etiprednoldicloacetate)、醋酸氟轻松、糠酸氟替卡松、丙酸氟替卡松、氯替泼诺(loteprednoletabonate)(局部)或糠酸莫米他松；(2)β2-肾上腺素受体激动剂如舒喘灵(salbutamol)、沙丁胺醇(albuterol)、特布他林、非诺特罗、比托特罗(bitolterol)、卡布特罗(carbuterol)、克伦特罗(clenbuterol)、吡布特罗(pirbuterol)、里莫特罗(rimoterol)、特布他林、曲托喹酚(tretoquinol)、妥洛特罗(tulobuterol)和长效β2-肾上腺素受体激动剂如奥西纳林(metaproterenol)、异丙基肾上腺素(isoproterenol)、异丙肾上腺素(isoprenaline)、沙美特罗(salmeterol)、茚达特罗(indacaterol)、福莫特罗(包括富马酸福莫特罗)、阿福特洛(arformoterol)、卡莫特罗(carmoterol)、阿贝地洛(abediterol)、三苯乙酸维兰特罗(vilanterol trifenate)或奥达特罗(olodaterol)；(3)皮质类固醇/长效β2激动剂组合产品，如沙美特罗/丙酸氟替卡松(
Figure BDA0002282880340000551
也以
Figure BDA0002282880340000552
出售)、福莫特罗/布地奈德
Figure BDA0002282880340000553
福莫特罗/丙酸氟替卡松
Figure BDA0002282880340000554
福莫特罗/环缩松、福莫特罗/糠酸莫米他松、茚达特罗/糠酸莫米他松、三苯乙酸维兰特罗/糠酸氟替卡松(BREO ELLIPTA)或阿福特罗/环缩松；(4)抗胆碱剂，例如毒蕈碱-3(M3)受体拮抗剂如异丙托溴铵、噻托溴铵(tiotropium bromide)、阿地溴铵(aclidinium bromide)(LAS-34273)、格隆溴铵(glycopyrronium bromide)或芜地溴铵(umeclidinium bromide)；(5)M3-抗胆碱剂/β2-肾上腺素受体激动剂组合产物，如维兰特罗/芜地溴铵
Figure BDA0002282880340000561
Figure BDA0002282880340000562
奥达特罗/噻托溴铵、格隆溴铵/茚达特罗(
Figure BDA0002282880340000563
也以
Figure BDA0002282880340000564
出售)、氢溴酸非诺特罗/异丙托溴铵
Figure BDA0002282880340000565
硫酸沙丁胺醇/异丙托溴铵
Figure BDA0002282880340000566
富马酸福莫特罗/格隆溴铵或阿地溴铵/福莫特罗；(6)双重药理学M3-抗胆碱剂/β2-肾上腺素受体激动剂，如batefenterol琥珀酸酯、AZD-2115或LAS-190792；(7)白细胞三烯调节剂，例如白细胞三烯拮抗剂，如孟鲁司特、扎鲁司特或普仑司特(pranlukast)，或白细胞三烯生物合成抑制剂如齐留通，或LTB4拮抗剂如amelubant，或FLAP抑制剂如fiboflapon，GSK-2190915；(8)磷酸二酯酶-IV(PDE-IV)抑制剂(口服或吸入)，如罗氟司特(roflumilast)、西洛司特(cilomilast)、奥格司特(oglemilast)、咯利普兰(rolipram)、替托司特(tetomilast)、AVE-8112、revamilast、CHF 6001；(9)抗组织胺类，例如选择性组胺-1(H1)受体拮抗剂如非索非那定、西替利嗪、氯雷他定或阿司咪唑，或双重H1/H3受体拮抗剂如GSK 835726或GSK1004723；(10)镇咳药，如可待因或右美沙芬(dextramorphan)；(11)粘液溶解药，例如N-乙酰半胱氨酸或富多斯坦(fudostein)；(12)祛痰剂/粘液促动调节剂(mucokineticmodulator)，例如安溴索(ambroxol)、高渗溶液(例如盐水或甘露醇)或表面活性剂；(13)粘液溶解肽，例如重组人脱氧核糖核酸酶I(链道酶-α和rhDNase)或螺杀菌素；(14)抗生素，例如阿奇霉素、妥布霉素或氨曲南；(15)非选择性COX-1/COX-2抑制剂，如布洛芬或酮洛芬；(16)COX-2抑制剂，如塞来昔布和罗非昔布；(17)VLA-4拮抗剂，如WO 97/03094和WO 97/02289中描述的那些，上述文件均以引用方式并入本文；(18)TACE抑制剂和TNF-α抑制剂，例如抗-TNF单克隆抗体，如
Figure BDA0002282880340000567
和CDP-870，和TNF受体免疫球蛋白分子，如
Figure BDA0002282880340000568
(19)基质金属蛋白酶抑制剂，例如MMP-12；(20)人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，如BAY-85-8501或WO 2005/026124、WO 2003/053930和WO 2006/082412中描述的那些，上述文件均以引用方式并入本文；(21)A2b拮抗剂如WO 2002/42298中描述的那些，以引用方式并入本文；(22)趋化因子受体功能调节剂，例如CCR3和CCR8的拮抗剂；(23)调节其它前列腺素类受体的化合物，例如血栓烷A2拮抗剂；DP1拮抗剂如拉罗匹仑(laropiprant)或asapiprant，CRTH2拮抗剂如OC000459、非维匹仑(fevipiprant)、ADC 3680或ARRY 502；(24)PPAR激动剂包括PPARα激动剂(如非诺贝特)、PPARδ激动剂、PPARγ激动剂如匹格列酮、罗格列酮和巴拉格列酮(balaglitazone)；(25)甲基黄嘌呤如茶碱或氨茶碱，和甲基黄嘌呤/皮质类固醇组合如茶碱/布地奈德、茶碱/丙酸氟替卡松、茶碱/环缩松、茶碱/糠酸莫米他松和茶碱/倍氯米松双丙酸酯；(26)A2a激动剂如EP1052264和EP1241176中描述的那些；(27)CXCR2或IL-8拮抗剂如AZD-5069、AZD-4721或danirixin；(28)IL-R信号调节剂如阿那白滞素(kineret)和ACZ 885；(29)MCP-1拮抗剂如ABN-912；(30)p38 MAPK抑制剂如BCT197、JNJ49095397、losmapimod或PH-797804；(31)TLR7受体激动剂如AZD 8848；(32)PI3-激酶抑制剂如RV1729或GSK2269557(nemiralisib)；(33)三重组合产品如TRELEGY ELLIPTA(糠酸氟替卡松、芜地溴铵和维兰特罗)；或(34)TRPA1、BTK或SYK的小分子抑制剂。
在一些实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐，可与一种或多种其它药物组合使用，例如抗过度增殖药、抗癌药、细胞生长抑制剂、细胞毒性剂、抗炎药或化疗剂，如U.S.公开申请号2010/0048557中公开的那些活性剂，引用在此并入本文。本发明化合物或其药学上可接受的盐也可与放射疗法或外科手术组合使用，如本领域已知。
任意前述物质与本发明化合物或其药学上可接受的盐的组合物被特别考虑。
制品
另一个实施方案包括用于治疗响应于Janus激酶如JAK1激酶抑制的疾病或障碍的制品(例如药盒)。所述药盒可包括：
(a)第一种药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐；和
(b)使用说明。
在另一个实施方案中，所述药盒还包括：
(c)第二种药物组合物，如药物组合物，包含用于前述治疗的活性剂，如用于治疗炎性疾病的活性剂，或化疗剂。
在一个实施方案中，说明书描述向所需患者同时、顺序或分开施用所述第一种和第二种药物组合物。
在一个实施方案中，所述第一种和第二种组合物包含在分开的容器中。在另一个实施方案中，所述第一种和第二种组合物包含在同一容器中。
使用的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。所述容器可以由多种材料形成，如玻璃或塑料。所述容器包括本发明化合物或其药学上可接受的盐，其对于治疗所述病症有效且可以具有无菌接入端口(例如所述容器可以是静脉输液袋或具有可通过皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。标签或包装说明书表明所述化合物用于治疗所选疾病，如哮喘或癌症。在一个实施方案中，所述标签或包装说明书表明所述化合物可用于治疗障碍。此外，所述标签或包装说明书可表明待治疗的患者患有以过度活跃或不规则Janus激酶活性为特征的障碍，如过度活跃或不规则的JAK1活性。所述标签或包装说明书也可表明化合物可用于治疗其它障碍。
替代地，或另外地，药盒可进一步包括第二种(或第三种)容器，其包含药学上可接受的缓冲液，如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、Ringer氏溶液或葡萄糖溶液。其可进一步包括商业和用户角度所希望的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
为说明本发明，包含下列实施例。然而应该理解的是这些实施例不限制本发明且仅意指建议实践本发明的方法。本领域技术人员将意识到上述化学反应可易于调整以制备一些本发明的其它化合物，且制备本发明化合物的备选方法被视为在本发明范围内。例如，根据本发明的非示例化合物的合成可通过本领域技术人员显而易见的修改而成功进行，例如适当保护干扰基团、使用除本文所述外本领域已知的其它合适试剂，或对反应条件进行常规修改。或者，本文公开的或本领域已知的其它反应被认为是对制备本发明其它化合物具有适用性。
实施例
一般实验细节
除非另有说明，否则所有溶剂和市售试剂均按原样使用。当通过硅胶色谱纯化产品时，使用手动填充硅胶的玻璃柱(Kieselgel 60，220-440目，35-75μm)或
Figure BDA0002282880340000582
SPE SiII柱。‘Isolute SPE Si柱’意指预装的聚丙烯色谱柱，其包含未键合的活性二氧化硅和平均尺寸是50μm且标称孔隙率
Figure BDA0002282880340000585
的不规则颗粒。当使用
Figure BDA0002282880340000583
SCX-2柱时，‘
Figure BDA0002282880340000584
SCX-2柱’意指预装的聚丙烯色谱柱，其包含非封端的丙磺酸功能化硅胶强阳离子交换吸附剂。
LCMS条件
方法A
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000581
Figure BDA0002282880340000591
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法B
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000592
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法C
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000593
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法D
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000594
Figure BDA0002282880340000601
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法E
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000602
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法F
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000603
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法G
在配备C18反相柱(50x2.1mm Ascentis Express C18，2.7μm粒径)的SHIMADZU20A HPLC上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000604
Figure BDA0002282880340000611
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法H
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000612
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法I
在配备Poroshell HPH-C18柱(50x3mm，2.7μm粒径)的SHIMADZU 20A HPLC上进行实验，洗脱溶剂A：水/5mM NH4HCO3；溶剂B：乙腈。梯度：
Figure BDA0002282880340000613
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法J
在配备C18反相柱(50x3mm Kinetex XB-C18，2.6μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000614
Figure BDA0002282880340000621
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法K
在配备C18反相柱(50x3mm Shim-Pack XR-ODS，2.2μm粒径)的SHIMADZU LCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000622
检测-UV(220和254nm)和ELSD
方法L
在配备C18反相柱(50x2.1mm Kinetex XB-C18 100A，2.6μm粒径)的SHIMADZULCMS-2020上进行实验，洗脱溶剂A：水+0.05％三氟乙酸；溶剂B：乙腈+0.05％三氟乙酸。梯度：
Figure BDA0002282880340000623
检测-UV(220和254nm)和ELSD
通用缩写列表
ACN                  乙腈
盐水                 饱和氯化钠水溶液
CH3OD                氘化甲醇
CDCl3                氘代氯仿
DCM                  二氯甲烷
DIEA或DIPEA          二异丙基乙胺
DMA                  二甲基乙酰胺
DMAP                 4-二甲基氨基吡啶
DMF                  二甲基甲酰胺
DMSO                 二甲基亚砜
DMSO-d6              氘代二甲基亚砜
EDC或EDCI            1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
EtOAc                乙酸乙酯
EtOH                 乙醇
FA                   甲酸
HOAc                 乙酸
g                    克
h                    小时
HATU                 (O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)
HCl                  盐酸
HOBt                 羟基苯并三唑
HPLC                 高效液相色谱
IMS                  工业甲基化烈酒(industrial methylated spirits)
L                    升
LCMS                 液相色谱-质谱
LiHMDS或LHMDS        六甲基二硅基氨基锂(lilthium hexamethydisylazide)
MDAP                 质量导向自动纯化
MeCN                 乙腈
MeOH                 甲醇
min                  分钟
mg                   毫克
mL                   毫升
NMR                  核磁共振波谱
Pd2(dba)3.CHCl3       三(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物
PE                   石油醚
Prep-HPLC            制备级高效液相色谱
SCX-2                强阳离子交换
TBAF                 四正丁基氟化铵
THF                  四氢呋喃
TFA                  三氟乙酸
Xantphos             4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨
中间体1
Figure BDA0002282880340000641
N-(5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：4-溴代-1-(二氟甲氧基)-2-碘代苯的合成
Figure BDA0002282880340000642
向4-溴代-2-碘苯酚(282g，943mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2000mL)和水(500mL)中的溶液中加入2-氯代-2,2-二氟乙酸钠(216g，1.42mol)和Cs2CO3(617g，1.89mol)。反应容器配有用于释放CO2的出气口。将所得混合物在120℃搅拌过夜，让其冷却至室温并倒入冰水(3000mL)。将所得溶液以乙酸乙酯(3x1500mL)萃取并合并有机层。将乙酸乙酯萃取物以盐水(1000mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(1/10)洗脱，以得到300g(91％)4-溴代-1-(二氟甲氧基)-2-碘代苯，为浅黄色油。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.96(dd,J＝5.7Hz,2.4Hz,1H),7.45(dd,J＝8.7Hz,2.4Hz,1H),7.03(d,J＝8.7Hz,1H),6.39(t,J＝72.9Hz,1H)。
步骤2：5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑的合成
Figure BDA0002282880340000651
在氮气、-70℃和搅拌下向4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑(100g，411mmol)在无水THF(1000mL)中的溶液中逐滴加入LiHMDS溶液(490mL，1.0mol/L的THF溶液)。将所得溶液在-50℃搅拌1小时并随后冷却至-70℃。将ZnCl2(500mL，0.7mol/L的THF溶液)在-70℃逐滴加入。允许所得溶液升温至室温并在室温搅拌1小时。向混合物中加入4-溴代-1-(二氟甲氧基)-2-碘代苯(150g，860mmol)、Pd(PPh3)4(24.0g，20.8mmol)。将所得溶液在回流温度加热过夜，让其冷却至室温并减压浓缩。将该规模的反应重复一次，并将两次所得粗产品合并以纯化。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(1/20)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩。由此得到共300g(79％)5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑，为浅黄色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.27(s,1H),7.68(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.62(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,1H),6.39(t,J＝72.5Hz,1H),5.44–5.19(m,2H),3.72–3.54(m,2H),0.94–0.89(m,2H),0.02(s,9H)。
步骤3：5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺的合成
Figure BDA0002282880340000652
向5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(50.1g，108mmol)在乙醇(2000mL)和水(200mL)中的溶液中加入铁粉(60.1g，1.07mol)和NH4Cl(28.0g，0.523mol)。在回流温度、氮气下将反应混合物搅拌3小时。滤出固体，并以乙醇(100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残留物溶解于3000mL乙酸乙酯中。将乙酸乙酯溶液以1x500mL盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩，以得到50.1g粗5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺，为黄色油。将粗产物不经纯化直接用于下一步。LC/MS(方法G，ESI)：[M+H]+＝434.2，RT＝0.93min。
步骤4：N-(5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000661
向5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺(50.1g，115mmol)的DMA(1500mL)溶液中加入吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(32.1g，196.0mmol)、PyAOP(102g，196mmol)、DMAP(1.41g，11.0mmol)和DIPEA(44.1g，0.341mol)。将所得溶液在60℃油浴中搅拌3小时，并随后让其冷却至室温。之后将反应混合物在水/冰(2000mL)和乙酸乙酯(2000mL)间分配。将水相以乙酸乙酯(2x)萃取。合并有机层，以盐水(1000mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(4:1)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩。向残留物中加入水(150mL)并将混合物在水中室温搅拌1小时。过滤收集固体并风干，以得到60.1g(91％)N-(5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为浅黄色固体。LC/MS(方法G，ESI)：[M+H]+＝579.1&581.1,RT＝1.10min.1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.62(s,1H),8.80(dd,J＝6.9,1.7Hz,1H),8.73(s,1H),8.53(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.38(s,1H),7.79(d,J＝2.4Hz,1H),7.67(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.29(d,J＝1.4Hz,1H),7.00(dd,J＝6.9,4.2Hz,1H),6.43(t,J＝72.6Hz,1H),5.53-5.27(m,2H),3.73-3.50(m,2H),0.88(ddd,J＝9.5,6.4,4.4Hz,2H),0.00(s,9H).
中间体2
Figure BDA0002282880340000662
N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-[5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体1，5.00g，8.63mmol)以HCl/二噁烷(150mL，4M)在室温处理过夜。将所得混合物减压浓缩。得到3.80g N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色固体。中间体纯度足以不经进一步纯化用于下一步。LC/MS(方法I，ESI)：[M+H]+＝449.0,RT＝1.02min.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.11(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.67–8.64(m,2H),8.32(s,1H),7.80(d,J＝2.4Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,1H),7.23(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),6.81(t,J＝73.2Hz,1H)。
中间体3
Figure BDA0002282880340000671
N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[5-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000672
在氮气下向N-[5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(100mg，0.173mmol)在t-BuOH(2mL)中的溶液中加入N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺(2.28mg，0.0259mmol)、NaI(155mg，1.04mmol)、CuI(4.93mg，0.026mmol)。将所得溶液在120℃、氮气下油浴中搅拌14小时，之后冷却至室温。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，以得到80mg(74％)N-[5-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色固体。LC/MS(方法J，ESI)：[M+H]+＝627.1,RT＝1.31min.
步骤2：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000681
将N-[5-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80.0mg，0.128mmol)用CF3CO2H(3.0mL)在室温处理30分钟。将所得混合物减压浓缩。将残留物溶于水中。缓慢加入饱和碳酸氢钠直至溶液pH～8。过滤收集固体。将固体以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(2/1)洗脱，以得到23.0mg(36％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为浅黄色固体。LC/MS(方法K，ESI)：[M+H]+＝497.1，RT＝1.74min.1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.08(dd,J＝6.9,1.5Hz,1H),8.65–8.61(m,2H),8.27(s,1H),7.94(s,1H),7.87(d,J＝8.7Hz,1H),7.21–7.18(m,2H),6.78(t,J＝73.2Hz,1H)。
中间体4
Figure BDA0002282880340000682
N-(3-(5-((1R,2R)-2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[5-[5-(2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000691
在氮气下向N-[5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体1，1.00g，1.73mmol)在二噁烷(15mL)和水(3.0mL)中的溶液中加入(2-氰基环丙基)三氟硼酸钾(449mg，2.60mmol)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(141mg，0.173mmol，0.10equiv)和Cs2CO3(1.13g，3.47mmol，2.01equiv)。将所得溶液在80℃油浴中搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将该规模的反应重复五次，合并5次操作的粗产物以纯化。将残留物通过硅胶短垫，以乙酸乙酯/石油醚(6/4)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，以得到2.5g(纯度＝85％，以LCMS在254nm测得)N-[5-[5-(2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色固体。中间体品质足以进行下一步。无需进一步纯化。LC/MS(方法G，ESI)：[M+H]+＝566.2，RT＝1.07min。
步骤2：N-(3-[5-[(1R,2R)-2-氰基环丙基]-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0002282880340000692
将N-[5-[5-(2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(2.90g，5.13mmol)用三氟乙酸(10mL)在二氯甲烷(20mL)中在室温处理过夜。将所得混合物真空浓缩。将残留物的pH以DIEA调整至>7。将所得混合物真空浓缩。加入水并将混合物搅拌1小时。过滤收集固体。将粗产物(2.30g)以制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm5um 13nm；流动相，含0.05％NH4OH的水和MeCN(9分钟内30.0％MeCN升至45.0％)；检测器，UV 254nm。将外消旋产物通过制备级-SFC以下列条件分离：柱：CHIRALPAKIC-SFC-02，5cm*25cm(5um)；流动相A：CO2:50，流动相B：EtOH:50；流速：180mL/min；220nm；RT1＝13.97min(第一个峰)；RT2＝17.84min(第二个峰)以得到两个馏分：
馏分1(R,R-异构体)：第一个峰是所需馏分且进一步通过从异丙醇中重结晶纯化。得到340mg(15％)N-(3-[5-[(1R,2R)-2-氰基环丙基]-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.09(dd,J＝7.1,1.7Hz,1H),8.67–8.62(m,2H),8.27(s,1H),7.43–7.35(m,3H),7.21(dd,J＝6.9,4.2Hz,1H),6.76(t,J＝73.8Hz,1H),2.79–2.72(m,1H),1.94–1.88(m,1H),1.68–1.63(m,1H),1.62–1.56(m,1H).
馏分2(S,S-异构体)：第二个峰得到474mg(21％)N-(3-[5-[(1S,2S)-2-氰基环丙基]-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.09(dd,J＝7.1,1.7Hz,1H),8.67–8.62(m,2H),8.27(s,1H),7.43–7.35(m,3H),7.21(dd,J＝6.9,4.2Hz,1H),6.76(t,J＝73.8Hz,1H),2.79–2.72(m,1H),1.94–1.88(m,1H),1.68–1.63(m,1H),1.62–1.56(m,1H).
中间体5
Figure BDA0002282880340000701
N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000711
在氮气下向N-(5-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体1，1.40g，2.41mmol)在二噁烷(15mL)和水(3.0mL)中的溶液中加入环丙基硼酸(314mg，3.66mmol)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(200mg，0.245mmol)和Cs2CO3(1.56g，4.79mmol)。将反应混合物在80℃、氮气下搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残留物通过硅胶短垫，以二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，以得到1.40g(254nm处纯度＝～85％)N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为深红色固体。LC/MS(方法G，ESI)：[M+H]+＝541.2，RT＝1.12min。该中间体无需进一步纯化即可使用。
步骤2：N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000712
将前一步得到的N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(145mg)用HCl/二噁烷(5.0mL，4M)在25℃处理2小时。将溶液减压浓缩。将残留物通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱：Xbridge C18，19*150mm，5um；流动相A：水/0.05％NH4HCO3，流动相B：ACN；流速：30mL/min；梯度：10分钟内20％B至85％B；254nm，以得到44.9mg(41％)N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色固体。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝411.2，RT＝1.14min.1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.09(dd,J＝6.9,1.5Hz,1H),8.63–8.61(m,2H),8.27(s,1H),7.28–7.25(m,3H),7.20(dd,J＝7.2,4.2Hz,1H),6.68(t,J＝73.8Hz,1H),2.04–1.95(m,1H),1.03–0.97(m,2H),0.79–0.71(m,2H)
中间体6
Figure BDA0002282880340000721
N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[5-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000722
在氮气下向N-5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基-1H-吡唑-4-基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体1，1.17g，2.02mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入4-羟基-N,N-二甲基苯甲酰胺(0.400g，2.42mmol)、Cs2CO3(0.790g，2.43mmol)、[PdCl(allyl)]2(37.0mg，0.101mmol)和t-BuBrettPhos(98.0mg，0.202mmol)。将反应混合物在90℃搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，以得到1.3g(81％)N-[5-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色油。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝664.4，RT＝1.36min.
步骤2：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000731
向N-[5-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(139mg，0.209mmol)在MeOH(3.0mL)中的溶液中加入浓盐酸(1.5mL，12M)。将反应混合物在25℃搅拌2小时并减压浓缩。将残留物用DIPEA中和。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到28mg(25％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为灰白色固体。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝534.2，RT＝1.09min。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.05(s,1H),9.73(s,1H),9.35(dd,J＝7.1,1.7Hz,1H),8.70(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.69(s,1H),8.22(s,1H),7.47(d,J＝9.3Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),7.32–7.25(m,3H),7.06(d,J＝8.7Hz,2H),7.18(t,J＝73.8Hz,1H),2.94(s,6H).
中间体7
Figure BDA0002282880340000732
N-[3-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：1-(苄基氧)-4-(二氟甲氧基)苯的合成
Figure BDA0002282880340000741
向氮气惰性氛围吹扫并保持的3000-mL圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1500mL)、4-(苄基氧)苯酚(200g，999mmol)和Cs2CO3(651g，1.99mol)。反应容器配有CO2释放的出口。随后在120℃分几批加入2-氯代-2,2-二氟乙酸钠(228g，1.50mol，1.50equiv)。加完2-氯代-2,2-二氟乙酸钠后，将反应在120℃油浴中搅拌至无气体逸出(～1h)，并随后让其冷却至室温。将反应混合物边搅拌边缓慢加入3000mL水/冰。将所得混合物以乙酸乙酯(3x4000mL)萃取。合并有机层，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(1/19)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩。将该反应重复四次。共得到450g(36％)1-(苄基氧)-4-(二氟甲氧基)苯，为白色固体。
步骤2：4-(二氟甲氧基)苯酚的合成
Figure BDA0002282880340000742
向3000-mL圆底烧瓶中加入甲醇(1500mL)、1-(苄基氧)-4-(二氟甲氧基)苯(140g，559mmol)和10％钯碳(15g，141mmol)。将所得混合物在氢(～45psi)、室温搅拌过夜。滤出催化剂。将滤液减压浓缩。将反应重复三次。得到300g(78％)4-(二氟甲氧基)苯酚，为黄色油。
步骤3：2-溴代-4-(二氟甲氧基)苯酚的合成
Figure BDA0002282880340000743
向1000-mL圆底烧瓶中加入乙酸(500mL)、4-(二氟甲氧基)苯酚(50g，312mmol)和NBS(55.6g，312mmol)。将反应混合物在15℃搅拌1小时。然后将所得混合物边搅拌边缓慢加入1000mL水/冰。将所得溶液以乙酸乙酯(3x1000mL)萃取。合并有机层，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/石油醚(30/70)洗脱。收集合适的馏分并减压浓缩。得到50g(67％)2-溴代-4-(二氟甲氧基)苯酚，为浅黄色油。
步骤4：2-溴代-1,4-双(二氟甲氧基)苯的合成
Figure BDA0002282880340000751
向2000-mL圆底烧瓶中加入CH3CN(500mL)、水(500mL)、2-溴代-4-(二氟甲氧基)苯酚(54g，226mmol)和氢氧化钾(94g，1.68mol)。将烧瓶中置于冰浴中并将反应混合物在冰浴中搅拌30分钟。之后在0℃向反应混合物中逐滴加入(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(120g，449mmol)。加完(溴二氟甲基)膦酸二乙酯后，将反应混合物在水/冰浴中搅拌1小时。将所得溶液以乙酸乙酯(3x300mL)萃取。合并有机层，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(1/19)洗脱，并收集合适的馏分，减压浓缩。得到54g(83％)2-溴代-1,4-双(二氟甲氧基)苯，为浅黄色油。
步骤5：5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑的合成
Figure BDA0002282880340000752
向氮气惰性氛围吹扫并保持的1000-mL圆底烧瓶中加入DMA(500mL)、碳酸钾(112g，810mmol)、4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑(66g，271mmol)、2-溴代-1,4-双(二氟甲氧基)苯(79g，273mmol)、2,2-二甲基丙酸(8.3g，81.3mmol)、Pd(OAc)2(6.0g，26.7mmol)和双(金刚烷-1-基)(丁基)膦(19g，52.9mmol，0.195equiv)。将反应混合物在120℃油浴中搅拌过夜并让其冷却至室温。然后将反应混合物边搅拌边加至1000mL水/冰中。将所得溶液以乙酸乙酯(3x1000mL)萃取。合并有机层，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱。收集合适的馏分并减压浓缩。得到100g(82％)5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑，为固体。
步骤6：5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-胺的合成
Figure BDA0002282880340000761
向3000-mL3-颈圆底烧瓶中加入乙醇(1500mL)、水(150mL)、5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑(100.00g，221mmol)、铁粉(124g，2.22mol)和NH4Cl(59.2g，1.11mol)。将所得混合物在回流温度油浴中搅拌2小时，然后冷却至室温。滤出固体，并以乙醇洗涤。将滤液减压浓缩。将残留物溶于3000mL乙酸乙酯中。将乙酸乙酯溶液以1x1000mL的盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。得到100g粗5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-胺，为浅黄色油，不纯化直接使用。
步骤7：N-[5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000762
向2000-mL圆底烧瓶中加入DMA(1000mL)、前一步所得5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-胺、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(58.06g，355.9mmol)、7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)(185.56g，355.9mmol)、4-二甲基氨基吡啶(2.90g，23.7mmol)和DIPEA(92.0g，712mmol)。将所得溶液在65℃油浴中搅拌过夜。之后将反应混合物边搅拌边缓慢加至2000mL水中。将反应溶液以乙酸乙酯(3x2000mL)萃取。将合并的有机相以1000mL盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并在压力下浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯/石油醚(40/60)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，得到120g N-[5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。
步骤8：N-[3-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000771
向2000-mL圆底烧瓶中加入甲醇(800mL)、浓盐酸(400mL，12N)和N-[5-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(80g，141mmol)。将所得溶液在25℃搅拌4小时。过滤收集固体。将固体放入1L烧瓶并加入H2O(200mL)。边搅拌边逐滴加入饱和NaHCO3水溶液直至溶液达到pH～8。过滤收集固体，以水洗涤并干燥，得到55g(89％)N-[3-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为浅黄色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.08(dd,J＝7.2,1.5Hz,1H),8.65–8.61(m,2H),8.28(s,1H),7.46(d,J＝9.0Hz,1H),7.40(d,J＝3.0Hz,1H),7.34(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),7.19(dd,J＝6.7,4.4Hz,1H),6.87(t,J＝73.7Hz,1H),6.73(t,J＝73.7Hz,1H).
实施例1
Figure BDA0002282880340000772
N-(3-(5-((1R,2R)-2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-((1R,2R)-2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体4，100mg，0.230mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入Cs2CO3(160mg，0.491mmol)。之后加入2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(80mg，0.482mmol)。将所得混合物在60℃油浴中搅拌30分钟。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(8％MeOH)洗脱，得到20.9mg(17％)N-(3-(5-((1R,2R)-2-氰基环丙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝521.3，RT＝1.50min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),9.35(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.68(s,1H),8.65(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.28(s,1H),7.42–7.38(m,3H),7.29(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.23(t,J＝73.2Hz,1H),5.20(s,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H),2.84–2.80(m,1H),2.12–2.09(m,1H),1.66–1.61(m,1H),1.54–1.50(m,1H)。
实施例2
Figure BDA0002282880340000781
N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体3，160mg，0.322mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液中加入Cs2CO3(210mg，0.645mmol)。向该混合物中加入2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(107mg，0.645mmol)。将所得溶液在60℃油浴中搅拌4小时。将反应混合物在水和乙酸乙酯间分配。将水相以乙酸乙酯(2x)萃取。合并有机层，以水和盐水先后洗涤，无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物通过硅胶短垫，以二氯甲烷/甲醇(90/10)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩。将粗产物进一步通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，SunFire Prep C18 OBD柱，19*150mm 5um 10nm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(12分钟内25.0％ACN升至44.0％)；检测器，UV 254/220nm，以得到24.1mg(13％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-碘苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法B，ESI)：[M+H]+＝582.2，RT＝2.92；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.11(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.67(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.36(s,1H),8.02(d,J＝2.4Hz,1H),7.90(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.24–7.21(m,2H),6.82(t,J＝73.6Hz,1H),5.24(s,2H),3.18(s,3H),3.03(s,3H)。
实施例3
Figure BDA0002282880340000791
2-氨基-N-(3-(5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[3-([3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002282880340000792
向N-[3-([3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.385mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入Cs2CO3(251mg，0.770mmol)和2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(63.0mg，0.379mmol)。将反应混合物在60℃油浴中搅拌16个小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，得到200mg(86％)N-[3-([3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯，为黄色固体。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝605.3，RT＝1.32min。
步骤2：2-氨基-N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000801
将N-[3-([3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.165mmol)用HCl的二噁烷溶液(2.0mL，4M)在室温处理2小时。将所得混合物减压浓缩。将粗产物通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水(0.05％NH3H2O)和ACN(12分钟内10％ACN升至45％)；检测器，UV 220nm，以得到27.4mg(33％)2-氨基-N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝505.2，RT＝1.58min；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.93(dd,J＝6.8,1.7Hz,1H),8.36(dd,J＝4.5,1.5Hz,1H),8.26(s,1H),7.62(dd,J＝8.7,2.7Hz,1H),7.54(d,J＝2.7Hz,1H),7.45(J＝8.7Hz,1H),7.26(t,J＝73.2Hz,1H),7.00(dd,J＝6.6,4.5Hz,1H),6.57(s,2H),5.18(s,2H),3.04(s,3H),2.87(s,3H)。
实施例4&5
Figure BDA0002282880340000802
(R)-N-(3-(5-(1,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺和(S)-N-(3-(5-(1,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1,2-二羟基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000811
向N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-乙烯基苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.70g，3.53mmol)在四氢呋喃(20mL)和水(10mL)中的溶液中加入OsO4(1.82g，7.16mmol)和NMO(831mg，7.09mmol)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得溶液以30mLH2O稀释。将所得溶液以3x50mL二氯甲烷萃取。合并有机层，以盐水洗涤，干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，得到700mg(38％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1,2-二羟基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为棕色固体。
步骤2：N-[3-[5-(1,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000812
向N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1,2-二羟基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(300mg，0.582mmol)在二氯甲烷中的溶液中加入DAST(374mg，2.32mmol)。将反应混合物在室温、氮气下搅拌2小时。然后通过加入10mL水猝灭反应。以碳酸氢钠水溶液(10％)将溶液pH值调整至7。将所得混合物以3x10mL二氯甲烷萃取，合并有机层并减压浓缩。将粗产物通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge BEH130 Prep C18OBD柱，19*150mm 5um；流动相，水(0.05％NH3H2O)和ACN(7分钟内30％ACN升至34％)；检测器，UV 254/220nm，以得到100mg外消旋混合物。将外消旋混合物通过手性-制备级-HPLC以下列条件分离：柱，CHIRALPAK IA，2.12*15cm，5um；流动相，己烷/DCM＝5/1和乙醇(保持50.0％乙醇-13分钟)；流速16mL/min，检测器，UV 220/254nm，得到两个馏分：
异构体1：7.15min处洗脱，12.4mg(4％)N-[3-[5-(1,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝520.2，RT＝1.70min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.34(dd,J＝7.0,1.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.66(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.29(s,1H),7.65–7.61(m,2H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(t,J＝73.2Hz,1H),7.29(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),6.11–5.84(m,1H),5.22(s,2H),4.88–4.68(m,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H).
异构体2：9.66min处洗脱,13.7mg(5％)N-[3-[5-(1,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝520.2，RT＝1.70min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.34(dd,J＝7.0,1.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.66(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.29(s,1H),7.65–7.61(m,2H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(t,J＝73.2Hz,1H),7.29(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),6.11–5.84(m,1H),5.22(s,2H),4.88–4.68(m,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H).
实施例6
Figure BDA0002282880340000821
N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(二氟甲基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[3-[5-(1,1-二氟-2-氧代基-2-苯乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000831
在氮气下向N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50.0mg，0.0936mmol)在甲苯(5.0mL)中的溶液中加入2,2-二氟-1-苯乙基-1-酮(29.0mg，0.186mmol)、[2-(2-氨基苯基)苯基](氯代)钯、三环己基膦(12.0mg，0.0203mmol)和K3PO4(80.0mg，0.377mmol)。将所得溶液在100℃油浴中搅拌16小时。将反应混合物冷至室温。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱，得到23mg(40％)N-[3-[5-(1,1-二氟-2-氧代基-2-苯乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为浅黄色固体。LC/MS(方法I，ESI)：[M+H]+＝610.3，RT＝1.11min。
步骤2：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(二氟甲基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000832
向N-[3-[5-(1,1-二氟-2-氧代基-2-苯乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(230mg，0.377mmol)在甲苯(30mL)和水(5.0mL)中的溶液中加入氢氧化钾(43.0mg，0.766mmol)。将所得溶液在100℃油浴中搅拌16小时。将反应混合物冷至室温。将所得溶液以50mL H2O稀释。将所得溶液以2x30mL二氯甲烷萃取并合并有机层，以无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物通过硅胶短垫，以二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩。将残留物进一步通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge BEH130 Prep C18 OBD柱，19*150mm 5um；流动相，水(0.05％NH4OH)和ACN(7分钟内29.0％ACN升至42.0％)；检测器，uv 254/220nm，得到23.7mg(12％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(二氟甲基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝506.3，RT＝1.52min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),9.35(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.68(s,1H),8.66(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.32(s,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(s,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(dd,J＝7.2,4.4Hz,1H),7.39(t,J＝73.0Hz,1H),7.14(t,J＝55.8Hz,1H),5.24(s,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H)。
实施例7
Figure BDA0002282880340000841
N-(3-(5-(2,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在氮气下向0℃的N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-氧代基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(90.0mg，0.181mmol)在二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中加入DAST(84mg，0.521mmol)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。将粗产物通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge ShieldRP18 OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水(0.05％NH3H2O)和ACN(12分钟内10％ACN升至45％)；检测器，UV 220nm，得到27.4mg产物并减压浓缩，得到36.2mg(39％)N-[3-[5-(2,2-二氟乙基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法C，ESI)：[M+H]+＝520.2，RT＝1.89min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.34(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.67(s,1H),8.64(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.28(s,1H),7.49–7.47(m,2H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),7.28(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.25(t,J＝73.6Hz,1H),6.46–6.09(m,1H),5.20(s,2H),3.26–3.19(m,2H),3.06(s,3H),2.88(s,3H).
实施例8
Figure BDA0002282880340000851
N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体6，150mg，0.281mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液中加入Cs2CO3(183mg，0.562mmol)和2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(69.0mg，0.416mmol)。将反应混合物在25℃搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(93/7)洗脱，得到22.0mg(13％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基]苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝619.3，RT＝1.50min；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.78(s,1H),9.35(dd,J＝7.1,1.7Hz,1H),8.70(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.67(s,1H),8.26(s,1H),7.49(d,J＝9.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.7Hz,2H),7.32–7.27(m,2H),7.19(t,J＝73.8Hz,1H),7.18(d,J＝3.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),5.18(s,2H),3.03(s,3H),2.94(s,6H),2.86(s,3H).
实施例9
Figure BDA0002282880340000852
N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(2-氟乙基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(丙-2-烯-1-基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000861
在氮气下向N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(6.00g，11.23mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(丙-2-烯-1-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(3.02g，18.0mmol，1.600equiv)、Pd(dppf)Cl2二氯甲烷(459mg，0.562mmol)和Cs2CO3(6.60g，20.3mmol)的水(20mL)溶液。将所得溶液在85℃搅拌3小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(32/1)洗脱，得到4.10g(74％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(丙-2-烯-1-基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为棕色固体。LC/MS(方法L，ESI)：[M+H]+＝496.1，RT＝0.83min。
步骤2：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2,3-二羟基丙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000862
向N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(丙-2-烯-1-基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(7.06g，14.2mmol)在四氢呋喃(140mL)中的溶液中加入NMO(3.33g，28.4mmol)和水(70mL)。之后在室温加入OsO4(7.23g，28.4mmol)。将所得溶液在室温搅拌2小时。之后通过加入50mL Na2S2O3(饱和)猝灭反应。将所得混合物以乙酸乙酯(3x)萃取。将合并的有机相以水和盐水先后洗涤，硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到4.02g(53％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2,3-二羟基丙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，浅黄色固体。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝530.2，RT＝0.95min。
步骤3：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-氧代基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000871
向0℃的N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2,3-二羟基丙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(670mg，1.27mmol)在CH3CN(15mL)和水(3.0mL)中的溶液中加入NaIO4(325mg，1.52mmol)。将所得溶液在室温搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残留物在水和乙酸乙酯间分配。将水相以乙酸乙酯(2x)萃取。将合并的有机相以盐水洗涤，硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，得到482mg(77％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-氧代基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色固体。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝498.2，RT＝1.03min。
步骤4：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羟基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000872
向在0℃的N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-氧代基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(487mg，0.979mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(300mg，1.42mmol)。将所得溶液在室温搅拌3小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(93/7)洗脱。合并收集的馏分并减压浓缩，得到430mg(88％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羟基乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为浅黄色固体。LC/MS(方法H，ESI)：[M+H]+＝500.3，RT＝1.00min.
步骤5：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-氟乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000881
在室温、氮气下向N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羟乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg，0.400mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入二乙基(三氟-4-硫烷基)胺(96.6mg，0.599mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩。将粗产物进一步通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，硅胶；流动相，10分钟内H2O(NH4HCO3)/CH3CN＝90/10升至H2O(NH4HCO3)/CH3CN＝50/50；检测器，UV 254nm，得到9.3mg(5％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-氟乙基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为灰白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝502.3，RT＝1.48min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),9.34(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),8.68(s,1H),8.65(dd,J＝4.2,1.4Hz,1H),8.28(s,1H),7.45–7.40(m,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H),7.28(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.23(t,J＝73.6Hz,1H),5.21(s,2H),4.74–4.72(m,1H),4.61–4.59(m,1H),3.08–3.07(m,1H),3.06(s,3H),3.02–3.00(m,1H),2.89(s,3H).
实施例10和11
Figure BDA0002282880340000891
(S)-N-(3-(5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(1-(二甲基氨基)-1-氧代基丙-2-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺和(R)-N-(3-(5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(1-(二甲基氨基)-1-氧代基丙-2-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg，0.494mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中的溶液中加入2-溴代-N,N-二甲基丙酰胺(133mg，0.739mmol)和Cs2CO3(323mg，0.991mmol)。将所得溶液在60℃油浴中搅拌16小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物在乙酸乙酯和水中分配。将水相以乙酸乙酯(2x)萃取。将合并的有机相以盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残留物通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水(10mmol/L NH4HCO3)和ACN(7分钟内25.0％ACN升至65.0％)；检测器，UV 220nm，得到120mg外消旋混合物。将外消旋混合物通过手性-制备级-HPLC以下列条件分离：柱，CHIRALPAKIF，2*25cm，5um；流动相，己烷和乙醇(保持50.0％乙醇27分钟)；检测器，UV 220/254nm，得到两个馏分：
异构体1(1st峰)：18.08min处洗脱，40.0mg(16％)N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[1-(二甲基氨基甲酰基)乙基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体，LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝504.2，RT＝1.65min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),9.35(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),8.68(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.67(s,1H),8.36(s,1H),7.64(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.61(d,J＝2.8Hz,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.24(t,J＝73.4Hz,1H),5.65(q,J＝6.8Hz,1H),3.05(s,3H),2.88(s,3H),1.60(d,J＝6.8Hz,3H)。
异构体2(2nd峰)：22.84min处洗脱，38.3mg(15％)N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[1-(二甲基氨基甲酰基)乙基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝504.2，RT＝1.65min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),9.35(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),8.68(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.67(s,1H),8.36(s,1H),7.64(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.61(d,J＝2.8Hz,1H),7.46(d,J＝2.8Hz,1H),7.30(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.24(t,J＝73.4Hz,1H),5.65(q,J＝6.8Hz,1H),3.05(s,3H),2.88(s,3H),1.60(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例12
Figure BDA0002282880340000901
N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
步骤1：7-[4-(二氟甲氧基)-3-[1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-酰胺基]-1H-吡唑-3-基]苯氧基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002282880340000902
在氮气下向N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(157mg，0.294mmol)在甲苯(10ml)中的溶液中加入Cs2CO3(115mg，0.353mmol)、t-BuBrettPhos(14.3mg，0.0295mmol)、Pd2(allyl)2Cl2(5.38mg，0.0148mmol)和7-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-甲酸叔丁酯(87.5mg，0.351mmol)。将所得溶液在100℃油浴中搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到150mg(73％)7-[4-(二氟甲氧基)-3-[1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-酰胺基]-1H-吡唑-3-基]苯氧基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-甲酸叔丁酯，为黄色固体。TLC：Rf＝0.4；乙酸乙酯/己烷＝4/1。
步骤2：N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000911
将7-[4-(二氟甲氧基)-3-[1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-酰胺基]-1H-吡唑-3-基]苯氧基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-甲酸叔丁酯(150mg，0.213mmol)用HCl的1,4-二噁烷溶液(5.0mL，4M)在室温处理1小时。将所得混合物减压浓缩。将粗产物通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水(0.05％NH3H2O)和ACN(10分钟内15.0％ACN升至55.0％)；检测器，UV 254/220nm，得到120mg(93％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法E，ESI)：[M+H]+＝603.3，RT＝2.27min；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),9.35(dd,J＝6.9,1.5Hz,1H),8.68(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.67(s,1H),8.25(s,1H),7.43(d,J＝9.0Hz,1H),7.33(dd,J＝7.2,4.2Hz,1H),7.18(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),7.13(t,J＝73.8Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.02(d,J＝3.0Hz,1H),6.82(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),6.75(d,J＝2.4Hz,1H),5.17(s,2H),3.77(s,2H),3.03(s,3H),2.93(t,J＝5.7Hz,2H),2.86(s,3H),2.65(t,J＝5.7Hz,2H).
实施例13
Figure BDA0002282880340000912
N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-乙烯基苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在氮气下向N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.30g，2.65mmol)在二噁烷(30mL)中的溶液中加入乙烯基三氟硼酸钾(389mg，2.90mmol)、K2CO3(612mg，4.43mmol)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(197mg，0.241mmol)和水(4.0mL)。将所得溶液在80℃油浴中搅拌4小时。将所得混合物减压浓缩。将残留物在水和乙酸乙酯中分配。将水相以乙酸乙酯(2x)萃取。将合并的有机相以盐水洗涤，干燥并减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以乙酸乙酯洗脱，得到574mg(45％)N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-乙烯基苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法F，ESI)：[M+H]+＝482.3，RT＝1.39min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),9.35(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),8.68(s,1H),8.62(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.30(s,1H),7.69(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.62(d,J＝2.0Hz,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(dd,J＝6.7,4.4Hz,1H),7.27(t,J＝73.6Hz,1H),6.82(dd,J＝17.6,11.2Hz,1H),5.87(d,J＝17.6Hz,1H),5.31(d,J＝11.2Hz,1H),5.22(s,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H)。
实施例14
Figure BDA0002282880340000921
N-(3-(5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体5，100mg，0.244mmol)的DMF(10mL)溶液中加入Cs2CO3(160mg，0.491mmol)。向该混合物中加入2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(83mg，0.500mmol)。将所得溶液在60℃油浴中搅拌30分钟。将所得混合物减压浓缩。将残留物以硅胶快速色谱纯化，以二氯甲烷/甲醇(8％MeOH)洗脱，得到63.8mg(53％)N-[3-[5-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体。LC/MS(方法A，ESI)：[M+H]+＝496.2，RT＝1.64min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),9.35(dd,J＝7.2,4.0Hz,1H),8.68(s,1H),8.65(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.32–7.23(m,4H),7.16(t,J＝74.0Hz,1H),5.20(s,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H),2.03–1.97(m,1H),0.99–0.94(m,2H),0.73–0.68(m,2H).
实施例15
Figure BDA0002282880340000931
N-(3-(5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向粗N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体2，3.80g，8.46mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(150mL)溶液中加入Cs2CO3(8.30g，25.5mmol)和2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(2.20g，13.3mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，边搅拌边倒入1.0L水中。过滤收集固体。将粗产物通过从乙酸乙酯中重结晶一次纯化，得到3.30g(两步内72％)N-[3-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为黄色固体。LC/MS(方法D，ESI)：[M+H]+＝536.1，RT＝2.72min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ(ppm)9.75(s,1H),9.36(dd,J＝7.2,1.6,1H),8.71–8.69(m,2H),8.30(s,1H),7.76(dd,J＝8.8,2.4,1H),7.68(d,J＝2.8Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),7.31(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.28(t,J＝73.2Hz,1H),5.22(s,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H).
实施例16
Figure BDA0002282880340000941
N-(3-(5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
用冰水浴将Cs2CO3(31g，95mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(150mL)和N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(25g，62mmol)的搅拌混合物冷至0℃。逐滴加入2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(12.5g，75.3mmol)。加完2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺后，移去冰浴，允许反应混合物升温至室温并在室温搅拌1.5小时。将反应混合物边搅拌边逐渐加入2L H2O中。过滤收集沉淀物并减压干燥。向粗产物中加入MeOH(500mL)，并将混合物搅拌加热至回流达0.5小时，随后冷却至室温。通过过滤收集固体，之后再加入500mL MeOH，并将混合物加热至回流达30分钟，之后冷却至室温。过滤收集固体，以得到99.1％HPLC纯度的标题化合物。重复相同反应(在25g规模的N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺)4次，合并4次操作的样品N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(总共81g，全部>99％HPLC纯度)，用于结晶转变。
将前一步所得N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(81g，165mmol)置于1-L圆底烧瓶中，并加入甲醇(400mL)。将混合物在室温搅拌3天。过滤收集固体并减压干燥。得到79.46g(98％)N-[3-[5-氯代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的结晶物质，为黄色固体。LC/MS(方法D，ESI)：[M+H]+＝490.2，RT＝2.63min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),9.36(dd,J＝7.0,1.4Hz,1H),8.70–8.69(m,2H),8.31(s,1H),7.64(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.57(d,J＝2.4Hz,1H),7.47(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.27(t,J＝73.2Hz,1H),5.22(s,2H),3.06(s,3H),2.89(s,3H).
实施例17
Figure BDA0002282880340000951
N-(3-(2,5-双(二氟甲氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将碳酸钾(30g，217mmol)和N-[3-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(中间体7，60g，137mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(400mL)中的搅拌混合物置于1000-mL圆底烧瓶中，使用冰水浴冷却至0℃。逐滴加入2-溴代-N,N-二甲基乙酰胺(28g，169mmol，1.2eq)，然后允许反应升温至室温，并继续在室温搅拌过夜。将反应混合物边搅拌边逐渐加入4L水中。过滤收集固体，之后加至2L乙酸乙酯中，并将混合物加热至回流温度并在该温度搅拌30分钟。让混合物冷却至室温并在室温搅拌2天。过滤收集固体。将固体分为相等两份并加入两个5-L圆底烧瓶。向两个烧瓶中加入乙酸乙酯(每个3L)，并将混合物加热至回流。将混合物在回流温度搅拌30分钟，然后冷却至室温，随后在室温搅拌48小时。过滤收集固体并真空干燥，得到40g(56％)N-[3-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，为白色固体(HPLC纯度99.0％)。
结晶转化：将EtOAc(200mL)加至500mL烧瓶中的68g N-[3-[2,5-双(二氟甲氧基)苯基]-1-[(二甲基氨基甲酰基)甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(99.0％HPLC纯度)中，并将混合物在室温搅拌2天。过滤固体并在室温真空干燥6小时，得到结晶物质(64.8g)(99.1％HPLC纯度)。LC/MS(方法D，ESI)：[M+H]+＝522.2，RT＝2.62min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),9.36(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.69(s,1H),8.67(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.30(s,1H),7.51(d,J＝8.8Hz,1H),7.39(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.33–7.31(m,2H),7.30(t,J＝73.6Hz,1H),7.24(t,J＝73.2Hz,1H),5.23(s,2H),3.05(s,3H),2.89(s,3H)。
实施例18
Figure BDA0002282880340000961
N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0002282880340000962
步骤1：3-[3-[4-(二氟甲氧基)-3-[4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基]苯氧基]苯基]-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002282880340000971
将N-[5-[5-溴代-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(300mg，0.518mmol)、3-羟基-3-(3-羟基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(275mg，1.04mmol)、[PdCl(烯丙基)]2(7.58mg，0.0207mmol)、RockPhos(24.3mg，0.0518mmol)、Cs2CO3(337mg，1.04mmol)和甲苯(4480mg，5.18mL，48.6mmol)的溶液在100℃、氮气下搅拌16小时。将所得混合物真空浓缩并通过硅胶快速色谱纯化，以甲醇/二氯甲烷(0-10％)洗脱。合并合适的馏分并减压浓缩，以得到3-[3-[4-(二氟甲氧基)-3-[4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基]苯氧基]苯基]-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯，229mg(59％)，为固体。LC/MS(方法L，ESI)：[M+H]+＝764.2.
步骤2：N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000972
将3-[3-[4-(二氟甲氧基)-3-[4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基氨基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡唑-3-基]苯氧基]苯基]-3-羟基-氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.288mmol)、二氯甲烷(3830mg，2.88mL，45.1mmol)和三氟乙酸(536mg，0.360mL，4.70mmol)的溶液在环境温度搅拌16小时。将溶液真空浓缩并不进一步纯化即使用，得到N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(220mg，113％)，LC/MS(方法X，ESI)：[M+H]+＝534.1。
步骤3：N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000981
将N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[3-(3-羟基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基]苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(220mg，0.326mmol)、1,3,5-三噁烷(39.1mg，0.434mmol)、二氯甲烷(4320mg，3.26mL，50.9mmol)、甲醇(516mg，0.652mL，15.8mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(207mg，0.979mmol)的溶液在环境温度搅拌3小时。将所得混悬液以水萃取并不进一步纯化即使用，得到N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(190mg，100％)，LC/MS(方法X，ESI)：[M+H]+＝548.2。
步骤4：N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成
Figure BDA0002282880340000982
将N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[3-(3-羟基-1-甲基-氮杂环丁烷-3-基)苯氧基]苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(190mg，0.330mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(3110mg，3.30mL，42.6mmol)、2-溴代-N,N-二甲基-乙酰胺(65.7mg，0.0469mL，0.396mmol)和N,N-二异丙基乙胺(174mg，0.230mL，1.32mmol)的溶液在50℃搅拌5天。将残留物减压浓缩并通过制备级-HPLC以下列条件纯化：柱：Gemini NX C18 110A柱，30x100mm，10um；流动相：水(0.1％NH4OH)和ACN(15分钟内20％ACN升至60％)；检测器，UV 254/220nm。合并合适的馏分并减压浓缩，得到N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(3-(3-羟基-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯氧基)苯基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(2.4mg，1％)。LC/MS(方法Y，ESI)：[M+H]+＝633.2，RT＝3.42min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.01(s,1H),9.75(s,1H),9.36(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),8.69(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.65(s,1H),8.25(s,1H),7.44(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(dd,1H),7.38–6.89(m,7H),3.32(s,2H),3.20(d,J＝13.7Hz,1H),3.04(d,J＝14.2Hz,1H),2.72–2.62(m,7H),2.47–2.39(m,1H),2.33(p,J＝1.8Hz,1H),2.16(s,3H).
下列表1中的代表性化合物使用与本文描述方案和实施例相似的方法制得。下列每种化合物的绝对立体化学可能未显示：因此，结构可能出现不止一次，每种结构代表单一的立体异构体。
表1：本发明示例性JAK抑制剂
Figure BDA0002282880340000991
Figure BDA0002282880340001001
Figure BDA0002282880340001011
Figure BDA0002282880340001021
酶法分析
JAK酶测定如下进行：
通过使用Caliper
Figure BDA0002282880340001031
技术(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)监测衍生自JAK3的肽(Val-Ala-Leu-Val-Asp-Gly-Tyr-Phe-Arg-Leu-Thr-Thr，在N末端用5-羧基荧光素荧光标记)的磷酸化，测量分离的重组JAK1和JAK2激酶结构域的活性。为确定抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中连续稀释并加入50μL激酶反应物中，其包含纯化酶(1.5nMJAK1或0.2nM JAK2)、100mM HEPES缓冲液(pH7.2)、0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、ATP(25μM)、10mM MgCl2、4mM DTT，最终DMSO浓度为2％。将反应在22℃、384-孔聚丙烯微量滴定板上孵育30分钟，之后通过加入25μL包含EDTA的溶液(100mM HEPES缓冲液(pH7.2)、0.015％Brij-35、150mM EDTA)终止反应，得到最终EDTA浓度为50mM。在终止激酶反应后，依据厂商说明、使用Caliper
Figure BDA0002282880340001032
3000测定作为总肽底物函数的磷酸化产物比例。之后使用针对ATP-竞争抑制修改的Morrison紧密结合模型(Morrison,J.F.,Biochim.Biophys.Acta.185:269-296(1969)；William,J.W.和Morrison,J.F.,Meth.Enzymol.,63:437-467(1979))测定Ki值[Ki＝Ki,app/(1+[ATP]/Km,app)]。表2列出了代表性化合物的数据。
细胞系中JAK1通路测定如下进行：
使用设计用于测量JAK1依赖性STAT磷酸化的基于细胞的测定法确定抑制剂效能(EC50)。如上所述，通过阻断Jak/Stat信号通路来抑制IL-4、IL-13和IL-9信号传导，可减轻临床前肺炎症模型中的哮喘症状(Mathew等,2001,J Exp Med 193(9):1087-1096；Kudlacz等,2008,Eur J.Pharmacol 582(1-3):154-161)。
在一种测定方法中，将从美国典型培养物保藏中心(ATCC；Manassas,VA)获得的TF-1人红白血病细胞用于测量IL-13刺激的JAK1-依赖性STAT6磷酸化下游。在用于测定前，将TF-1细胞在补充有0.5％炭/葡聚糖剥离的胎牛血清(FBS)、0.1mM非必需氨基酸(NEAA)和1mM丙酮酸钠的OptiMEM培养基(Life Technologies,Grand Island,NY)中饥饿GM-CSF过夜。在384-孔板上无血清OptiMEM培养基中采用300,000细胞每孔进行测定。在第二种测定方式中，在实验前一天将从ATCC获得的BEAS-2B人支气管上皮细胞以100,000细胞每孔铺于96-孔板上。在完全生长培养基(支气管上皮基础培养基加Bulletkit；Lonza；Basel，Switzerland)中进行BEAS-2B测定。
将被测化合物在DMSO中1:2连续稀释，之后在使用前在培养基中1:50稀释。将稀释的化合物加入细胞中，达到DMSO最终浓度0.2％，并在37℃孵育30分钟(对于TF-1测定)或1小时(对于BEAS-2B测定)。之后，用人类重组细胞因子分别以各自EC90浓度刺激细胞，如之前为每个单独批次确定的。以IL-13(R&D Systems,Minneapolis,MN)在37℃刺激细胞15分钟。通过直接加入10x裂解缓冲液(Cell Signaling Technologies，Danvers，MA)终止TF-1细胞反应，而通过移去培养基和加入1x裂解缓冲液终止BEAS-2B细胞培养。将所得样品在-80℃冷冻在平板中。使用MesoScale Discovery(MSD)技术(Gaithersburg,MD)在细胞裂解液中测量化合物介导的STAT6磷酸化抑制。EC50值确定为相对于DMSO对照测量的、50％抑制STAT磷酸化所需的化合物浓度。表2列出了代表性化合物的数据。
表2：
Figure BDA0002282880340001041

Claims (11)

1.化合物，选自
Figure FDA0004072068440000011
Figure FDA0004072068440000012
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
2.化合物，其是
Figure FDA0004072068440000013
或其药学上可接受的盐。
3.化合物，其是
Figure FDA0004072068440000014
或其药学上可接受的盐。
4.化合物，其是
Figure FDA0004072068440000021
或其药学上可接受的盐。
5.化合物，其是
Figure FDA0004072068440000022
或其药学上可接受的盐。
6.药物组合物，包含权利要求1至5任一项的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
7.权利要求1至5任一项的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体在制备用于治疗炎性疾病的药剂中的用途。
8.权利要求7的用途，其中所述炎性疾病是哮喘。
9.权利要求1至5任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防、治疗响应于Janus激酶活性抑制的患者疾病或病症或减轻其严重程度的药物中的用途。
10.权利要求9的用途，其中所述疾病或病症是哮喘。
11.权利要求9的用途，其中所述Janus激酶是JAK1。
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