CN101389611A - 抑制由vla-4所介导的白血球粘附的嘧啶磺酰胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明揭示结合VLA－4的化合物。某些所述化合物还抑制白血球粘附，且尤其抑制由VLA－4所介导的白血球粘附。所述化合物可用于治疗人类或动物个体中的发炎性疾病，诸如，哮喘、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)、动脉粥样硬化、AIDS痴呆、糖尿病、发炎性肠道疾病、克罗恩氏病(Crohn′s disease)、类风湿性关节炎、组织移植、肿瘤转移和心肌局部缺血。也可投予所述化合物用于治疗发炎性脑病，诸如，多发性硬化症。

Description

抑制由VLA-4所介导的白血球粘附的嘧啶磺酰胺化合物
本发明主张2006年2月27日申请之美国临时专利申请案第60/777,595号的优先权，所述专利的揭示内容以引用的方式全部并入本文中。
技术领域
本发明涉及抑制白血球粘附且尤其抑制由α4整合素所介导的白血球粘附的化合物，其中所述α4整合素较佳为VLA-4。本发明还涉及包含所述化合物的医药组合物以及使用本发明的化合物或医药组合物用于治疗(例如)炎症的方法。
参考文献
在本申请案中用上标数字的形式引用以下公开案：
1 海姆勒(Hemler)与高田(Takada)，欧洲专利申请公开案，第330,506号，1989年8月30日公开；
2 艾丽斯(Elices)等人，细胞(Cell)，60：577584(1990)；
3 施普林格(Springer)，自然(Nature)，346：425434(1990)；
4 奥斯本(Osborn)，细胞(Cell)，62：36(1990)；
5 维德(Vedder)等人，外科学(Surgery)，106：509(1989)；
6 普雷托兰(Pretolani)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)，180：795(1994)；
7 亚伯拉罕(Abraham)等人，临床检查杂志(J.Clin.Invest.)，93：776(1994)；
8 穆里根(Mulligan)等人，免疫学杂志(J.Immunology)，150：2407(1993)；
9 撒布斯基(Cybulsky)等人，科学(Science)，251：788(1991)；
10 李(Li)等人，动脉硬化、血栓和血管生物学(Arterioscler.Thromb.)，13：197(1993)；
11 沙萨维尔(Sasseville)等人，美国病理学杂志(Am.J.Path.)，144：27(1994)；
12 杨(Yang)等人，美国科学院院刊(Proc.Nat.Acad.Science)(USA)，90：10494(1993)；
13 伯克利(Burkly)等人，糖尿病(Diabetes)，43：529(1994)；
14 巴伦(Baron)等人，临床检查杂志(J.Clin.Invest.)，93：1700(1994)；
15 海姆(Hamann)等人，免疫学杂志(J.Immunology)，152：3238(1994)；
16 亚德诺科(Yednock)等人，自然(Nature)，356：63(1992)；
17 巴伦(Baron)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)，177：57(1993)；
18 范迪森-詹森(van Dinther-Janssen)等人，免疫学杂志(J.Immunology)，147：4207(1991)；
19 范迪森-詹森(van Dinther-Janssen)等人，风湿性疾病纪事(Annals.RheumaticDis.)，52：672(1993)；
20 艾丽斯(Elices)等人，临床检查杂志(J.Clin.Invest.)，93：405(1994)；
21 帕斯蒂格(Postigo)等人，临床检查杂志(J.Clin.Invest.)，89：1445(1991)；
22 保罗(Paul)等人，移植学会会报(Transpl.Proceed.)，25：813(1993)；
23 奥卡哈拉(Okarhara)等人，癌症研究(Can.Res.)，54：3233(1994)；
24 帕沃宁(Paavonen)等人，国际癌症杂志(Int.J.Can.)，58：298(1994)；
25 斯卡登道夫(Schadendorf)等人，病理学杂志(J.Path.)，170：429(1993)；
26 鲍(Bao)等人，生物多样性研究的区别(Diff.)，52：239(1993)；
27 劳里(Lauri)等人，英国癌症杂志(British J.Cancer)，68：862(1993)；
28 川口(Kawaguchi)等人，日本癌症研究杂志(Japanese J.Cancer Res.)，83：1304(1992)；
29 康拉德(Konradi)等人，PCT/US00/01686，2000年1月21日申请。
上述所有公开案的全文是以引用的方式并入本文中，所述引用的程度就如同已特定地和个别地将各个公开案的全部内容以引用的方式并入一般。
背景技术
最先经海姆勒(Hemler)与高田(Takada)1辨识的VLA-4(也称为α4β1整合素和CD49d/CD29)为细胞表面受体的β1整合素家族的成员，所述家族中的各个成员包含两种次单元，α链与β链。VLA-4含有α4链与β1链。存在至少9种β1整合素，其皆具有相同β1链且各自具有独特α链。所述9种受体皆与各种细胞基质分子(诸如，纤维结合蛋白、昆布氨酸和胶原蛋白)的不同互补序列结合。VLA-4(例如)与纤维结合蛋白结合。VLA-4还与由内皮细胞和其它细胞表达的非基质分子结合。这些非基质分子包括VCAM-1，其通过培养中的细胞激素活化的人脐静脉内皮细胞而表达。VLA-4的独特抗原决定基是产生纤维结合蛋白结合活性和VCAM-1结合活性的原因且已显示各活性独立地受到抑制2。
由VLA-4和其它细胞表面受体所介导的细胞间粘附与许多发炎反应相关联。在损伤位点或其它发炎性刺激位点处，活化血管内皮细胞表达粘附白血球的分子。白血球粘附至内皮细胞的机制部分涉及白血球上的细胞表面受体与内皮细胞上的相应细胞表面分子的识别与结合。一旦结合后，白血球即穿过血管壁进入受损伤位点且释放化学介体来抵御感染。有关免疫系统的粘附受体的述评，例如参见施普林格(Springer)3和奥斯本(Osborn)4。
发炎性脑失调症(诸如，实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)、多发性硬化症(MS)和脑膜炎)为中枢神经系统失调症的实例，其中内皮/白血球粘附机制对原本健康的脑组织造成破坏。在患有这些发炎性疾病的个体中，大量白血球穿过血脑屏障(BBB)。白血球释放出毒性介体，其引起广泛性组织损伤，从而导致受损神经传导和麻痹。
在其它器官系统中，组织损伤还会经由导致白血球迁移或活化的粘附机制而发生。例如，已显示心肌局部缺血后对心脏组织造成的初始损伤可通过白血球进入受损组织引起更进一步损伤而进一步加重(维德(Vedder)等人)5。其它由粘附机制所介导的炎症或医学病况包括(例如)哮喘6-8、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)、动脉粥样硬化9-10、AIDS痴呆11、糖尿病12-14(包括急性青少年发病型糖尿病)、发炎性肠道疾病15(包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(Crohn′s disease)、多发性硬化症16-17、类风湿性关节炎18-21、组织移植22、肿瘤转移23-28、脑膜炎、脑炎、中风和其它大脑外伤、肾炎、视网膜炎、异位性皮肤炎、牛皮癣、心肌局部缺血和诸如在成人呼吸窘迫综合症中所出现的急性白血球介导的肺损伤。
已揭示经取代氨基嘧啶为一类抑制VLA-4与VCAM-1结合的物质且其因此展现抗炎特性29。当这些化合物具有对此种结合的拮抗特性时，这些化合物的增强的生物可用性将增大其功效。
发明内容
本发明提供化合物、其医药学上可接受的盐和酯、其组合物、其合成和用于治疗VLA-4介导的疾病的方法。基于因而加以评估的本发明那些化合物的活体内数据，预期这些化合物当经口传递时展现如通过常规的曲线下面积(AUC)分析所测量到的增强的生物可用性。
在一实施例中，本发明提供式I的化合物：
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
或其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，R1为C1-C2烷基。在其它实施例中，R1为甲基或三氟甲基。在其它实施例中，R1为甲基。
在一些实施例中，R2为C1-C4烷基。在其它实施例中，R2为C1-C3烷基。在其它实施例中，R2为甲基、乙基、异丙基或正丙基。在另一实施例中，R2为甲基或乙基，且在另一实施例中，R2为异丙基。
在一些实施例中，R2为C3-C6环烷基。在其它实施例中，R2为环戊基。
在一些实施例中，R2为C2-C4烯基。在其它实施例中，R2为烯丙基。
在一些实施例中，R2为C2-C4炔基。在其它实施例中，R2为炔丙基。
本发明的化合物的实例包括具有表1中所列举的R1和R2基团的那些化合物(包括其医药学上可接受的盐或酯)。
表1
Figure A200780006583D00112
 
R1 R2
三氟甲基 乙基
甲基 异丙基
甲基 环戊基
 
甲基 甲基
甲基 炔丙基
甲基 乙基
甲基 烯丙基
丁基 乙基
3-氯丙基 乙基
3-氯丙基 甲基
3，3，3-三氟丙基 乙基
丙基 乙基
异丙基 乙基
在另一实施例中，本发明提供式II的化合物：
Figure A200780006583D00121
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
或其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，R1为C1-C2烷基。在其它实施例中，R1为甲基或三氟甲基。在其它实施例中，R1为甲基。
在一些实施例中，R2为C1-C4烷基。在其它实施例中，R2为C1-C3烷基。在其它实施例中，R2为甲基、乙基、异丙基或正丙基。在另一实施例中，R2为甲基或乙基，且在另一实施例中，R2为异丙基。
在一些实施例中，R2为C3-C6环烷基。在其它实施例中，R2为环戊基。
在一些实施例中，R2为C2-C4烯基。在其它实施例中，R2为烯丙基。
在一些实施例中，R2为C2-C4炔基。在其它实施例中，R2为炔丙基。
本发明的化合物的实例包括具有表2中所列举的R1和R2基团的那些化合物(包括其医药学上可接受的盐或酯)。
表2
 
R1 R2
三氟甲基 乙基
甲基 异丙基
甲基 环戊基
甲基 甲基
甲基 炔丙基
甲基 乙基
甲基 烯丙基
丁基 乙基
3-氯丙基 乙基
3-氯丙基 甲基
3，3，3-三氟丙基 乙基
丙基 乙基
异丙基 乙基
苯环上的吡咯烷基羰氧基的邻位和间位取代也在本发明的范畴内。
本发明也提供表3中的化合物以及其医药学上可接受的盐或酯。
表3
Figure A200780006583D00141
在另一方面中，本发明提供包含医药学上可接受的载剂和治疗有效量的一种或多种本文所定义的化合物的医药组合物。
在其一方法方面中，本发明针对一种用于治疗患者中至少部分由α4整合素(较佳为VLA-4)所介导的疾病的方法，所述方法包含投予包含医药学上可接受的载剂和治疗有效量的一种或多种本发明的化合物的医药组合物。
本发明的化合物和医药组合物适用于治疗至少部分由α4整合素(其中所述α4整合素较佳为VLA-4)或白血球粘附所介导的病症。所述病症包括(例如)哮喘、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、AIDS痴呆、糖尿病(包括急性青少年发病型糖尿病)、发炎性肠道疾病(包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)、多发性硬化症、类风湿性关节炎、组织移植、肿瘤转移、脑膜炎、脑炎、中风和其它大脑外伤、肾炎、视网膜炎、异位性皮肤炎、牛皮癣、心肌局部缺血和诸如在成人呼吸窘迫综合症中所出现的急性白血球介导的肺损伤。
其它病症包括(但不限于)发炎性病症，诸如，结节性红斑、过敏性结膜炎、视神经炎、葡萄膜炎、过敏性鼻炎、强直性脊椎炎、牛皮癣性关节炎、脉管炎、赖特综合症(Reiter′s syndrome)、全身性红斑性狼疮症、进行性系统性硬化症、多肌炎、皮肌炎、韦格纳肉芽肿病(Wegner′s granulomatosis)、主动脉炎、肉状瘤病、淋巴球减少症、颞动脉炎、心包炎、心肌炎、充血性心脏衰竭、结节性多动脉炎、过敏性综合症、过敏症、高嗜酸性粒细胞综合症、丘-施二氏综合症(Churg-Strauss syndrome)、慢性阻塞性肺病、过敏性肺炎、慢性活动性肝炎、间质性膀胱炎、自体免疫内分泌衰竭、原发性胆汁性肝硬变、自体免疫再生障碍性贫血、慢性持续性肝炎和甲状腺炎。
在一实施例中，由α4整合素所介导的病症为发炎性疾病。
在另一实施例中，所述病症为自体免疫疾病。
在一些实施例中，所述疾病选自哮喘、多发性硬化症和发炎性肠道疾病。在其它实施例中，所述疾病为克罗恩氏病。在其它实施例中，所述疾病为类风湿性关节炎。
在另一方面中，本发明提供一种用于制备式I的化合物或其医药学上可接受的盐或酯的方法：
Figure A200780006583D00161
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
所述方法包含：
a)使式III的化合物
Figure A200780006583D00162
其中Pg为羧基保护基；
与C1-C4醛或酮、C2-C4烯基醛或酮、C2-C4炔基醛或酮、C3-C6环烷基酮和苯甲醛在还原性胺化条件下接触以得到式IV的化合物：
Figure A200780006583D00171
b)使化合物IV与其中Z为卤基的式R1SO2Z的磺酰基卤化物在一定条件下接触以形成式V的化合物：
Figure A200780006583D00172
和
c)将所述羧基保护基去除以得到式I的化合物。
在另一方面中，本发明提供一种用于制备式I的化合物或其医药学上可接受的盐或酯的方法：
Figure A200780006583D00173
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
所述方法包含：
a)使式VI的化合物
Figure A200780006583D00181
其中Pg为羧基保护基；
与过量R′SO2X接触以得到式VII的化合物：
Figure A200780006583D00182
b)从式VII的化合物选择性地去除单个-SO2R′基团以得到式VIII的化合物：
Figure A200780006583D00183
c)使化合物VIII与其中X为卤基的式R2-X的烷化剂接触，或当R2为甲基时与硫酸二甲酯接触以形成式IX的化合物：
Figure A200780006583D00191
和
d)将所述羧基保护基去除以得到式I的化合物。
附图说明
无
具体实施方式
如上所述，本发明涉及抑制白血球粘附且尤其抑制至少部分由α4整合素(较佳为VLA-4)所介导的白血球粘附的化合物。然而，在进一步详细地描述本发明之前，将首先对以下术语进行定义。
定义
除非另有说明，否则在本说明书和权利要求书中所使用的以下术语具有下面所给出的含义：
除非另作定义，否则如本文所使用的术语“烷基”是指具有1至4个碳原子且较佳具有1至3个碳原子的单价直链和支链烃基。所述术语的实例为诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基的基团。
“烯基”是指具有2至4个碳原子且较佳具有2至3个碳原子的直链或支链单价烃基，其具有至少一个乙烯基(>C＝C<)不饱和位点并较佳具有一个乙烯基(>C＝C<)不饱和位点。所述烯基的实例包括乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、正丙烯-1-基(-CH＝CHCH3)、正丁烯-2-基(-CH2CH＝CHCH3)等等。顺式和反式异构体或所述异构体的混合物也包括在这些术语的范围内。
“炔基”是指具有2至4个碳原子且较佳具有2至3个碳原子的直链或支链单价烃基，其具有至少一个炔属-C≡C-不饱和位点并较佳具有一个炔属-C≡C-不饱和位点。所述炔基的实例包括乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH2C≡CH)、正丙炔-1-基(-CH≡CHCH3)等等。
“卤基”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘，且较佳为氟或氯。
“卤烷基”是指具有1至5个卤基的烷基。所述基团较佳具有1至3个卤基和1至2个碳原子。示范性卤烷基包括卤甲基(例如，氟甲基)、二卤甲基(例如，二氟甲基)、三卤甲基(例如，三氟甲基)、卤乙基(例如，2-氯乙-1-基)、三卤乙基(例如，2，2，2-三氟乙-1-基)、卤丙基(例如，3-氯丙-1-基)和三卤丙基(例如，3，3，3-三氟丙-1-基)。
“医药学上可接受的载剂”意指适用于制备医药组合物的载剂，其通常安全、无毒性且既无生物学上的不良之处也无其它不良之处，且包括可为兽医用途和人类医药用途所接受的载剂。如于本说明书和权利要求书中所使用的“医药学上可接受的载剂”包括一种和多种如此的载剂。
“医药学上可接受的盐”是指保持本发明的化合物的生物有效性和性质且无生物学上的不良之处或无其它不良之处的盐。在许多状况下，本发明的化合物能够通过氨基和/或羧基或与所述者类似的基团的存在形成酸性和/或碱性盐。
医药学上可接受的碱加成盐可自无机碱和有机碱进行制备。衍生自无机碱的盐包括(仅举例来说)钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括(但不限于)伯胺、仲胺和叔胺的盐，所述胺诸如，烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、经取代烷基胺、二(经取代烷基)胺、三(经取代烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、经取代烯基胺、二(经取代烯基)胺、三(经取代烯基)胺、环烷基胺、二(环烷基)胺、三(环烷基)胺、经取代环烷基胺、二取代环烷基胺、三取代环烷基胺、环烯基胺、二(环烯基)胺、三(环烯基)胺、经取代环烯基胺、二取代环烯基胺、三取代环烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、杂芳基胺、二杂芳基胺、三杂芳基胺、杂环胺、二杂环胺、三杂环胺、混合的二胺和三胺，其中胺上的取代基中至少两个不同，且选自烷基、经取代烷基、烯基、经取代烯基、环烷基、经取代环烷基、环烯基、经取代环烯基、芳基、杂芳基、杂环基等等组成的群组。也包括其中两个或三个取代基与氨基氮一起形成杂环基或杂芳基的胺。
合适胺的实例包括(仅举例来说)异丙胺、三甲胺、二乙胺、三(异丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、缓血酸胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡碱、普鲁卡因(procaine)、海卓胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可豆碱、嘌呤、六氢吡嗪、六氢吡啶、吗啉、N-乙基六氢吡啶等等。也应了解其它羧酸衍生物将适用于本发明的实践中，例如，羧酸酰胺，包括羧酰胺、低碳烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺等等。
医药学上可接受的酸加成盐可自无机酸和有机酸进行制备。衍生自无机酸的盐包括源自盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等等的盐。衍生自有机酸的盐包括源自乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、丁二酸、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等等的盐。
术语“医药学上可接受的阳离子”是指医药学上可接受的盐的阳离子。
当然，在本文所定义的所有经取代基团中，预期本文不拟包括通过本身又具有另外取代基的定义取代基而获得的聚合物(例如，经取代芳基，其具有经取代芳基作为取代基，而所述作为取代基者自身为经取代芳基所取代，等等)。在所述状况下，所述取代基的最大数目为3。也就是说，上述定义中的各者均受到限制，例如经取代芳基受限于-经取代芳基-(经取代芳基)-(经取代芳基)。
疾病的“治疗”包括：
(1)预防所述疾病，也就是说，在可能接触疾病或易患疾病但尚未遭受或表现疾病症状的哺乳动物中使疾病的临床症状不出现；
(2)抑制所述疾病，也就是说，阻止或减缓疾病或其临床症状的发展，或
(3)缓解所述疾病，也就是说，使疾病或其临床症状消退。
“治疗有效量”意指化合物当投予哺乳动物以治疗疾病时足以实现所述疾病的所述治疗的量。“治疗有效量”将视化合物、疾病和其严重程度以及待治疗的哺乳动物的年龄、重量等而变化。
整合素为同源跨膜连接蛋白的大家族，所述同源跨膜连接蛋白为动物细胞上与多数细胞外基质蛋白(诸如，胶原蛋白、纤维结合蛋白和昆布氨酸)结合的主要受体。整合素为包含α链和β链的杂二聚物。迄今为止，已确认20种不同的由9种不同α次单元和14种不同β次单元构成的整合素杂二聚体。术语“α4整合素”是指一类杂二聚体、酶联细胞表面受体，其含有与β次单元中的任一种成对的α4次单元。VLA-4为α4整合素的实例，且为α4次单元与β1次单元的杂二聚体，且也称为α4β1整合素。
化合物制备
本发明的化合物可使用以下一般方法和程序自易得到的起始物质进行制备。应了解在给出典型或较佳工艺条件(也就是说，反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)之处，除非另有说明，否则也可使用其它工艺条件。最佳反应条件可随所使用的特定反应物或溶剂而变化，但所述条件可由所属领域的技术人员根据常规最佳化程序来确定。
另外，如将为所属领域的技术人员所了解，常规保护基可能为必需的以防止某些官能基发生不恰当反应。用于各种官能基的合适保护基以及用于保护特定官能基和使其去保护的合适条件在此项技术中已为我们所熟知。例如，在1991年纽约(New York)威利出版社(Wiley)出版的T.W.格林(Greene)与G.M.瓦茨(Wuts)的有机合成中的保护基(Protecting Groupsin Organic Synthesis)，第2版，和其中所引用的文献中对众多保护基进行了描述。
此外，本发明的化合物通常将含有一个或多个手性中心。因此，若须要时，可制备或分离呈纯立体异构体(也就是说，呈个别对映异构体或非对映异构体)或呈富集立体异构体的混合物的所述化合物。除非另有说明，否则所有所述立体异构体(和富集混合物)包括在本发明的范畴内。纯立体异构体(或富集混合物)可使用(例如)此项技术中熟知的光学活性起始物质或立体选择性试剂进行制备。或者，所述化合物的外消旋混合物可使用(例如)手性管柱色谱法、手性拆分剂等等进行分离。
使用ChemDraw10.0版(可购自马萨诸塞州(MA)(邮编02140)剑桥(Cambridge)剑桥公园100大道的剑桥软件公司(Cambridgesoft at 100 Cambridge Park Drive)，)来命名本发明的多数化合物。
在一实施例中，本发明的化合物可如下面流程1中所述进行制备，其中仅为达成说明的目的，R1为甲基且R2为异丙基。
流程1
其中Pg为羧基保护基，诸如，苯甲基、叔丁基等等。
流程1特别适用于制备其中R2为烷基或环烷基的化合物。
在流程1中，起始中间物5-氨基嘧啶(化合物1.1)在美国专利第US 7,026,328 B1号中有详细描述，且仅为了说明的目的，在所述流程中以4-取代苯丙氨酸衍生物表示。当然，应了解2-和3-取代苯丙氨酸衍生物将遵循类似反应路径。
具体来说，在流程1中，在常规还原性胺化条件下，使5-氨基-2-二乙氨基-4-取代嘧啶(化合物1.1，从相应5-硝基-嘧啶通过用5重量％Pd/C或5重量％PtO2进行还原而制备)与略微过量的C1-C4醛或酮(在流程1中通过丙酮来说明)反应。在流程1中，化合物1.1的5-氨基形成中间物亚胺(未图示)，其经由合适催化剂(诸如，PtO2等等)且通过常规还原剂(诸如，氰基硼氢化钠、硼氢化钠、氢气)而原位还原为相应胺(化合物1.2)。所述反应在适当惰性稀释剂(诸如，四氢呋喃、二氯甲烷等等)中进行。使反应保持在约0℃至约30℃下直到反应实质上实质上完成，其通常在约0.5小时至16小时的范围内发生。在反应完成后，化合物1.2是通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
使化合物1.2中的氨基转化为相应烷基磺酰胺基(化合物1.3)是经由常规方法进行。例如，在一方法中，在用以清除所产生的酸的适当碱(诸如，三乙胺、二异丙基乙胺等等)存在下使化合物1.2与略微过量的烷磺酰基卤化物(诸如，甲烷磺酰氯)接触。所述反应较佳在合适惰性溶剂(诸如，四氢呋喃、二噁烷、氯仿等等)中进行。所述反应较佳在约-5℃至-30℃下进行，且持续进行直到反应实质上实质上完成，其通常在0.5小时至16小时之内发生。在反应完成后，化合物1.3可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
烷基磺酰基卤化物为已知化合物或可通过常规合成程序制备的化合物。所述化合物通常是使用三氯化磷和五氯化磷从相应磺酸(也就是说，来自式R1-SO3H的化合物，其中R1如上所定义)进行制备。所述反应通常是通过使所述磺酸与约2至5摩尔当量三氯化磷或五氯化磷(纯的或于诸如二氯甲烷的惰性溶剂中)在0℃至约80℃范围内的温度下接触约1小时至约48小时而进行以得到磺酰氯。或者，所述磺酰氯可在常规反应条件下通过用氯气(Cl2)和水处理硫醇而从相应硫醇化合物(也就是说，来自式R1-SH的化合物，其中R1如上所定义)进行制备。
用于本发明的磺酰氯的实例包括(但不限于)甲烷磺酰氯、乙烷磺酰氯、2-丙烷磺酰氯、1-丁烷磺酰氯、三氟甲烷磺酰氯、2，2，2-三氟乙烷磺酰氯等等。
接着通过常规条件将化合物1.3的羧基保护基去除以得到化合物1.4(式I的化合物)。在一实施例中，叔丁基保护基可通过与甲酸接触而去除。在另一实施例中，苯甲基保护基可通过在高氢气压力下通常于质子性溶剂(诸如，甲醇)中且在钯/碳催化剂存在下与氢气接触而去除。在反应完成后，化合物1.4可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收。
在另一实施例中，本发明的化合物可如下面流程2中所述进行制备。
Figure A200780006583D00241
流程2
其中R1与R2如本文所定义；Pg为羧基保护基且X为卤基。
在流程2中，起始中间物5-氨基嘧啶(化合物1.1)在美国专利第US 7,026,328 B1号中有详细描述，且仅为了说明的目的，在所述流程中以4-取代苯丙氨酸衍生物表示。当然，应了解2-和3-取代苯丙氨酸衍生物将遵循类似反应路径。
具体来说，在流程2中，使5-氨基-2-二乙氨基-4-取代嘧啶(化合物1.1，从相应5-硝基-嘧啶通过用5重量％Pd/C或5重量％PtO2进行还原而制备)与略微过量的R1-磺酰基卤化物(诸如，甲烷磺酰氯)在用以清除所产生的酸的适当碱(诸如，三乙胺、二异丙基乙胺等等)存在下反应。所述反应较佳在合适惰性溶剂(诸如，四氢呋喃、二噁烷、二氯甲烷、氯仿等等)中进行。所述反应较佳在约-5℃至30℃下进行，且持续进行直到反应实质上实质上完成，其通常在0.5小时至16小时之内发生。在反应完成后，化合物1.5可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
从化合物1.5选择性地去除单个R1SO2-基团在常规条件下进行。例如，化合物1.5与碱在质子性溶剂(诸如，甲醇、乙醇或水)中且视情况在THF等等存在下(例如，甲醇/四氢呋喃的1:1混合物或水/四氢呋喃的1:1混合物)的反应得到化合物1.6。反应混合物包含过量的合适碱(诸如，碳酸钾、碳酸钠等等)，且反应较佳保持在诸如20℃至60℃的高温下。持续进行反应直到实质上实质上完成，其通常在24-144小时之内发生。在反应完成后，化合物1.6可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
化合物1.6与过量烷基卤化物、二烷基硫酸盐、烯基卤化物、炔基卤化物或环烷基卤化物(也就是说，X-R2-“卤化物”)的反应在常规条件下进行以得到化合物1.7。所述反应通常是通过在用以清除反应期间所产生的酸的碱(诸如，碳酸钾、三乙胺等等)存在下于惰性稀释剂(诸如，丙酮、氯仿、二氯甲烷等等)中使化合物1.6与约1.1至20当量如此的卤化物接触而进行。所述反应较佳在约20℃至60℃下进行，且持续进行直到反应实质上实质上完成，其通常在0.1小时至16小时之内发生。在反应完成后，化合物1.6可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
接着通过常规条件将化合物1.7的羧基保护基去除以得到化合物1.8(式I的化合物)。在一实施例中，叔丁基保护基可通过与甲酸接触而去除。在另一实施例中，苯甲基保护基可通过在高氢气压力下通常于质子性溶剂(诸如，甲醇)中且在钯/碳催化剂存在下与氢气接触而去除。在反应完成后，化合物1.8可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收。
在另一实施例中，本发明的化合物可如下面流程3中所述进行制备。
流程3
其中R1如上所定义，Pg为羧基保护基，诸如，苯甲基、叔丁基等等，且R2′为具有连接于碘基的CH2部分的烷基、烯基、炔基或苯基伸烷基。
在流程1中，起始中间物5-氨基嘧啶(化合物1.1)在美国专利第7,026,328 B1号中有详细描述，且仅为了说明的目的，在所述流程中以4-取代苯丙氨酸衍生物表示。当然，应了解2-和3-取代苯丙氨酸衍生物将遵循类似反应路径。
具体来说，在流程1中，通过常规方法使5-氨基-2-二乙氨基-4-取代嘧啶(化合物1.1，从相应5-硝基-嘧啶通过用5重量％Pd/C或5重量％PtO2进行还原而制备)转化为相应三氟乙酰胺(化合物1.8)。例如，将略微过量的三氟乙酸酐与化合物1.1于合适惰性稀释剂(诸如，四氢呋喃、二氯甲烷、吡啶等等)中化合。将所述反应保持在约0℃至约30℃下直到反应实质上实质上完成，其通常在约0.5小时至24小时的范围内发生。
在反应完成后，化合物1.8是通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
再次经由常规技术使化合物1.8转化为相应N(R2′)，N-三氟乙酰胺基-嘧啶(化合物1.9)。例如，使过量卤化物R2′-I与化合物1.8在过量合适的碱(诸如，碳酸钾)存在下于合适惰性稀释剂(诸如，DMF)中化合。在一实施例中，采用大约2当量的R2′-I和碳酸钾。将反应保持在密封容器中的环境条件下，且持续进行直到反应实质上实质上完成，其通常在20-72小时之内发生。在反应完成后，化合物1.9是通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
接着将三氟乙酰基去除以得到相应胺(化合物1.10)。在所述实施例中，三氟乙酰基充当胺保护基。如上，所述反应按常规方法(例如)通过使化合物1.9与大幅过量的合适碱(诸如，碳酸钾)于水与质子性溶剂(诸如，甲醇)的混合物中接触而进行。所述反应在诸如40℃至60℃的高温下进行，且持续进行直到反应实质上实质上完成。在反应完成后，化合物1.10是通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
接着，经由常规方法使化合物1.10中的氨基转化为相应烷基磺酰胺基(化合物1.11)。例如，在一方法中，在用以清除所产生的酸的适当碱(诸如，三乙胺、二异丙基乙胺等等)存在下使化合物1.10与略微过量的烷基磺酰基卤化物接触。所述反应较佳在合适惰性溶剂(诸如，四氢呋喃、二噁烷、氯仿等等)中进行。所述反应较佳在约0℃至30℃下进行，且持续进行直到反应实质上实质上完成，其通常在2-48小时之内发生。在反应完成后，化合物1.11可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收，或者在未纯化和/或分离的状况下用于下一步。
通过常规条件将化合物1.11的羧基保护基去除以得到化合物1.12(式I的化合物)。在一实施例中，叔丁基保护基可通过与甲酸接触而去除。在另一实施例中，苯甲基保护基可通过在高氢气压力下通常于质子性溶剂(诸如，甲醇)中且在钯/碳催化剂存在下与氢气接触而去除。在反应完成后，化合物1.12可通过常规方法(包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤等等)回收。
本发明也包括本发明的化合物的酯。将酯的制备阐述在上面所述的各种流程中，诸如，在流程1中(化合物1.3)，在流程2中(化合物1.7)和在流程3中(化合物1.11)。此外，实例1描述吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-异丙基甲基磺酰胺基)-嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯的制备，且实例4描述吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-(丙-2-炔基)甲基-磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯的制备。本发明的酸的酯也可通过此项技术中熟知的方法自酸进行制备。例如，氨基酸甲酯可使用伯伦纳(Brenner)与休伯(Huber)，瑞士化学会志(Helv.Chim.Acta)1953，36，1109的方法进行制备。
医药调配物
当用作药物时，本发明的化合物通常是以医药组合物的形式投予。所述化合物可通过包括经口、经直肠、经皮、皮下、静脉内、肌肉内和鼻内的多种途径进行投予。这些化合物作为可注射和口服组合物均有效。所述组合物是以医药技术中熟知的方式进行制备且包含至少一种活性化合物。
本发明也包括医药组合物，其含有作为活性成份的一种或多种上述式I-II的化合物与医药学上可接受的载剂。在制造本发明的组合物的过程中，通常将活性成份与赋形剂混合，通过赋形剂稀释或封入可呈胶囊、药囊、纸或其它容器的形式的载体内。所采用的赋形剂通常为适合于投予人类个体或其它哺乳动物的赋形剂。当赋形剂用作稀释剂时，其可为充当活性成份的媒剂、载剂或介质的固体、半固体或液体物质。因此，组合物可呈如下形式：片剂、药丸、散剂、锭剂、药囊、扁胶剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气溶胶(呈固体或在液体介质中)、软膏(其含有(例如)可达10重量％的活性化合物)、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装散剂。
在制备调配物的过程中，活性化合物在与其它成份组合之前可能必需将其研磨以提供适当粒度。若活性化合物实质上不溶，则通常将其研磨至粒度为小于200目(mesh)。若活性化合物实质上可溶于水，则一般通过研磨来调整粒度以提供在调配物中实质上均一的分布，例如约40目。
合适赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄耆胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。调配物可另外包括：润滑剂，诸如，滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化和悬浮剂；防腐剂，诸如，羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。可对本发明的组合物进行调配以便在通过采用此项技术中已知的程序投予患者后提供活性成份的迅速、持续或延缓释放。
通过静脉内调配物来投予治疗剂在制药工业中是熟知的。静脉内调配物应具有除仅为其中治疗剂可溶的组合物之外的一些性质。例如，调配物应增进活性成份的总稳定性，且调配物的制造应具有成本效益。所有这些因素最终决定静脉内调配物的总效果和有用性。
可包括在本发明的化合物的医药调配物中的其它辅助添加剂如下所示：溶剂：乙醇、甘油、丙二醇；稳定剂：乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸；抗菌防腐剂：苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯；缓冲剂：柠檬酸/柠檬酸钠、酒石酸氢钾、酒石酸氢钠、乙酸/乙酸钠、顺丁烯二酸/顺丁烯二酸钠、邻苯二甲酸氢钠、磷酸/磷酸二氢钾、磷酸/磷酸氢二钠；和渗透改性剂：氯化钠、甘露糖醇、右旋糖。
缓冲剂的存在可为必需的以维持水相pH值在约4至约8的范围内且较佳在约4至约6的范围内。缓冲系统通常为弱酸与其可溶性盐的混合物，例如，柠檬酸钠/柠檬酸；或为二元酸的单阳离子或双阳离子盐，例如，酒石酸氢钾；酒石酸氢钠、磷酸/磷酸二氢钾和磷酸/磷酸氢二钠。
所使用的缓冲系统的量是视(1)所要pH值和(2)药物的量而定。通常，所使用的缓冲剂的量在调配物的缓冲剂：药物(其中缓冲剂的摩尔数视为缓冲剂成份(例如，柠檬酸钠和柠檬酸)的组合摩尔数)的摩尔比为0.5:1至50:1的范围内以维持pH值在4至8的范围内，且通常使用所存在的缓冲剂(组合):药物为1:1至10:1的摩尔比。
本发明中的一种适用缓冲剂为在5-50mg/mL柠檬酸钠：1-15mg/mL柠檬酸的范围内的柠檬酸钠/柠檬酸，其足以维持组合物的水相pH值为4-6。
缓冲试剂也可能存在以经由与溶解金属离子(例如，Ca、Mg、Fe、Al、Ba)形成可溶金属络合物而防止药物沉淀，所述溶解金属离子可能是从玻璃容器或橡皮塞浸出或可能存在于一般自来水中。对于药物来说，所述试剂可充当竞争性络合剂且产生导致不恰当微粒存在的可溶性金属络合物。
此外，可能需要将渗透压(tonicity)调节至与人类血液渗透压相同的值的试剂(例如，量为约1-8mg/mL的氯化钠)的存在以避免在投予静脉内调配物后的红血球膨胀或皱缩，从而导致不良副作用(诸如，恶心或腹泻)且可能导致相关联的血液失调症。一般来说，调配物的渗透压与在282至288mOsm/kg范围内的人类血液的渗透压相当，且一般为285mOsm/kg，其相当于与0.9％氯化钠溶液相对应的渗透压。
静脉内调配物可通过直接静脉内注射(团式静脉注射)投予，或可通过添加到适当输液(诸如，0.9％氯化钠注射剂或其它相容输液)中经由输注而投予。
较佳将组合物调配成口服单位剂型，各剂量含有约1mg至约250mg的活性成份，更通常含有约5mg至约100mg的活性成份，例如，约10mg至约30mg的活性成份。术语“单位剂型”是指适合作为用于人类个体和其它哺乳动物的单位剂量的实体离散的单位，各单位含有经计算可产生所要治疗效果的预定量的活性物质与合适医药赋形剂。
活性化合物在宽剂量范围内有效，且通常是以医药学上有效的量投予。然而，应了解实际上投予的化合物的量将由医师根据包括待治疗的病症、选定的投予途径、所投予的实际化合物、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度和其类似情况的相关情况来判定。
对于制备固体组合物(诸如，片剂)来说，将主要活性成份与医药赋形剂混合以形成含有本发明的化合物的均质混合物的固体预调配组合物。若提及所述预调配组合物为均质的，则其意指活性成份均匀分散于整个组合物中以便可易于将组合物再分成等效单位剂型，诸如，片剂、药丸和胶囊。接着将所述固体预调配物再分成上述类型的单位剂型，其含有(例如)0.1mg至约500mg的本发明的活性成份。
可对本发明的片剂或药丸进行包衣或以别的方式进行配制以得到提供长期作用的优势的剂型。例如，片剂或药丸可包含内部剂量组份和外部剂量组份，后者呈在前者上的外壳形态。所述两种组份可由肠溶性层所隔开，所述肠溶性层用来抵抗胃中的崩解且允许内部组份完好地进入十二指肠或允许其延缓释放。多种物质可用于所述肠溶性层或肠溶衣，所述物质包括许多聚合酸以及聚合酸与诸如虫胶、十六醇和乙酸纤维素的物质的混合物。
其中可并入本发明的新颖组合物以经口方式或通过注射投予的液体形式包括水溶液、经适当调味的糖浆、水性悬浮液或油悬浮液和含食用油(诸如，棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的经调味的乳液以及酏剂和类似医药媒剂。
吸入型或吹入型组合物包括于医药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，和散剂。液体或固体组合物可含有合适医药学上可接受的如前所述的赋形剂。较佳地，组合物是通过经口或鼻呼吸途径投予以获得局部或全身效果。在较佳医药学上可接受的溶剂中的组合物可通过使用惰性气体而得以喷雾。雾化溶液可直接自喷雾装置吸进或喷雾装置可连接到面帷罩或间歇性正压呼吸机。溶液、悬浮液或散剂组合物可自以适当方式输送调配物的装置较佳经口或经鼻投予。
以下调配物实例例示说明本发明的医药组合物。
调配物实例1
制备含有以下成份的硬明胶胶囊：
成份                               量 (毫克/胶囊)
活性成份                           30.0
淀粉30                             5.0
硬脂酸镁                           5.0
将上述成份混合且以340毫克的量装入硬明胶胶囊中。
调配物实例2
使用以下成份制备片剂：
成份                                   量(毫克/片剂)
活性成份                               25.0
微晶纤维素                             200.0
胶态二氧化硅                           10.0
硬脂酸                                 5.0
将组份掺合且压缩以形成各自重240毫克的片剂。
调配物实例3
制备含有以下组份的干粉吸入器调配物：
成份                                    重量％
活性成份                                5
乳糖                                    95
将活性成份与乳糖混合且将混合物添加到干粉吸入用具中。
调配物实例4
制备各含有30毫克活性成份的片剂，如下所示：
成份                                     量(毫克/片剂)
活性成份                                       30.0毫克
淀粉                                           45.0毫克
微晶纤维素                                     35.0毫克
聚乙烯吡咯烷酮(作为在无菌水中的                4.0毫克
10％溶液)
羧甲基淀粉钠                                   4.5毫克
硬脂酸镁0.5毫克
滑石粉                                         1.0毫克
使活性成份、淀粉和纤维素穿过20目美国筛，且充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，接着使其穿过16目美国筛。在50℃至60℃下使由此所产生的颗粒干燥且穿过16目美国筛。接着将先前穿过30目美国筛的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石粉添加到所述颗粒中，将其在混合后于压片机上进行压缩以得到各自重120毫克的片剂。
调配物实例5
制造各含有40毫克药物的胶囊，如下所示：
成份                                  量(毫克/胶囊)
活性成份                                    40.0毫克
淀粉                                        109.0毫克
硬脂酸镁                                    1.0毫克
所有成份                                    150.0毫克
将活性成份、淀粉和硬脂酸镁掺合，使其穿过20目美国筛，且以150毫克的量装入硬明胶胶囊中。
调配物实例6
制造各含有25毫克活性成份的栓剂，如下所示：
成份                                       量
活性成份                                   25毫克
饱和脂肪酸甘油酯直到                       2,000毫克
使活性成份穿过60目美国筛且悬浮于先前使用必需的最少热量熔化的饱和脂肪酸甘油酯中。接着将混合物倒入标称2.0克容量的栓剂模中且使其冷却。
调配物实例7
制造每5.0毫升剂量各含有50毫克药物的悬浮液，如下所示：
成份                                        量
活性成份                                    50.0毫克
三仙胶                                      4.0毫克
羧甲基纤维素钠(11％)                        50.0毫克
微晶纤维素(89％)
蔗糖                                        1.75克
苯甲酸钠                                    10.0毫克
调味剂和着色剂                              适量
纯水直到                                    5.0毫升
将活性成份、蔗糖和三仙胶掺合，使其穿过10目美国筛，且接着与先前制成的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠于水中的溶液混合。通过一些水将苯甲酸钠、调味剂和着色剂稀释，且在搅动的同时进行添加。接着添加充足的水以得到所需体积。
调配物实例8
成份                                   量(毫克/胶囊)
活性成份                               15.0毫克
淀粉                                   407.0毫克
硬脂酸镁                               3.0毫克
所有成份                               425.0毫克
将活性成份、淀粉和硬脂酸镁掺合，使其穿过20目美国筛，且以425.0毫克的量装入硬明胶胶囊中。
调配物实例9
可制备皮下用调配物，如下所示：
成份                                    量
活性成份                                5.0毫克
玉米油                                  1.0毫升
调配物实例10
可制备静脉内调配物，如下所示：
成份                                    量
活性成份                                250毫克
等渗盐水                                1000毫升
在本发明的方法中所采用的另一种调配物采用经皮传递装置(“贴片”)。所述经皮贴片可用来提供受控量的本发明的化合物的连续性或不连续性浸入。用于传递药剂的经皮贴片的构造和使用在此项技术中是熟知的。例如参见1991年6月11日颁布的美国专利第5,023,252号，所述案以引用的方式并入本文中。可构造所述贴片以用于连续、脉冲或按需传递药剂。
常常希望或必需直接或间接地将医药组合物引入脑中。直接技术通常涉及将药物传递导管置放于主体脑室系统中以避开血脑屏障。一种用于将生物因子传送至身体的特定解剖学区域的如此的可植入传递系统描述在美国专利第5,011,472号中，所述案以引用的方式并入本文中。
间接技术通常涉及通过使亲水性药物转化为脂溶性药物而对组合物进行调配以提供药物的潜伏化。潜伏化一般是经由使存在于药物上的羟基、羰基、硫酸根和伯氨基封闭以使药物脂溶性更高且易于越过血脑屏障传送而达成。或者，亲水性药物的传递可通过可瞬时打开血脑屏障的高渗压溶液的动脉内输注而增强。
用于本发明的其它合适调配物可见于美国宾夕法尼亚州费城Mace出版公司雷氏药学大全(Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mace Publishing Company，Philadelphia，PA，)第17版(1985)中。
如上所述，本文所述的化合物适合用于上述多种药物传递系统中。另外，为增加所投予的化合物的活体内血清半衰期，可将化合物装入胶囊，引入脂质体的内腔，制成胶体，或可采用其它可提供化合物的延长的血清半衰期的常规技术。多种方法可用于制备脂质体，如在索卡(Szoka)等人的美国专利第4,235,871号、第4,501,728号和第4,837,028号中所述，各专利以引用的方式并入本文中。
必要时可对具有所要生物活性的化合物进行改性以提供所要性质，诸如，改良药理学性质(例如，活体内稳定性、生物可用性)或在诊断应用中被检测到的能力。稳定性可以多种方法进行分析，诸如，通过在与肽酶或人血浆或血清一起培养期间测量蛋白质的半衰期。已对许多如此的蛋白质稳定性分析进行了描述(例如参见，范霍夫(Verhoef)等人，欧洲药物代谢与药物动力学杂志(Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet.)，1990，15(2)：83-93)。
本发明的共轭物为VLA-4拮抗剂且预期其较之于非共轭化合物提供增强的活体内滞留。共轭物在体内的所述种改良滞留将导致药物的所需剂量降低，此又将导致较少的副作用和降低的毒性可能性。此外，可以更低频率将药物调配物投予患者，同时获得类似或改良治疗效果。
预期本发明的共轭物通过竞争性地结合至VLA-4而在活体内展现对由VLA-4介导的白血球至内皮细胞的粘附的抑制。较佳地，本发明的化合物可用于静脉内调配物中以治疗由VLA-4或白血球粘附介导的疾病。所述疾病包括哺乳动物患者中的发炎性疾病，诸如，哮喘、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、AIDS痴呆、糖尿病(包括急性青少年发病型糖尿病)、发炎性肠道疾病(包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)、多发性硬化症、类风湿性关节炎、组织移植、肿瘤转移、脑膜炎、脑炎、中风和其它大脑外伤、肾炎、视网膜炎、异位性皮肤炎、牛皮癣、心肌局部缺血和诸如在成人呼吸窘迫综合症中所出现的急性白血球介导的肺损伤。本发明的调配物特别适用于治疗发炎性肠道疾病(诸如，克罗恩氏病)、多发性硬化症和类风湿性关节炎。
用于显示治疗发炎性病症的功效的适当活体内模型包括小鼠、大鼠、豚鼠或灵长类动物中的EAE(实验性自体免疫脑脊髓炎)模型以及其它依赖于α4整合素的炎症模型。
发炎性肠道疾病或“IBD”是指致使肠变得发炎的病症群体，其通常表现为包括腹部绞痛和疼痛、腹泻、体重减轻和肠出血的症状。IBD为两种相似疾病溃疡性结肠炎(“UC”)与克罗恩氏病(“CD”)的集合术语。
克罗恩氏病(“CD”)为造成胃肠(GI)道出现炎症的慢性自体免疫失调症。尽管CD可涉及到GI道的任何区域，但最通常侵害小肠和/或结肠。在克罗恩氏病中，可涉及到肠的所有层，且在患病肠部位之间可存在正常健康肠。CD与纤维化、狭窄和裂隙、患病肠道与邻近结构(也就是说，膀胱、其它肠段、皮肤)之间的漏管和脓肿相关联。CD患者通常显现腹泻、腹部疼痛和体重减轻。腹部疼痛通常为隐袭的且可能与疼痛炎性包块相关联。发烧、体重减轻、口腔炎、肛周瘘和/或裂伤、关节炎以及结节性红斑皆常见。存在与CD相关的相当高的发病率，特别在患有当前可用药物不能控制的疾病的患者中。患有中度至重度疾病的患者中多达75％需要外科手术，且所述患者中多达75％将在10年内经受手术后疾病复发，且多达50％将在20年内经受反复外科手术。所述高复发率显示需要对以后继续复发的疾病的新有效治疗和疾病好转的维持。
溃疡性结肠炎或“UC”为大肠和直肠的慢性、间歇性发炎性疾病，其特征为带血腹泻。溃疡性结肠炎为主要限于结肠粘膜与粘膜下层的发炎反应。溃疡性结肠炎可根据部位进行分类：“直肠炎”仅涉及直肠，“直肠乙状结肠炎”侵害直肠与乙状结肠，“左侧大肠炎”涉及大肠的整个左侧，“全结肠炎”使整个结肠发炎。在发炎性肠道疾病的病灶内，淋巴细胞和巨噬细胞为数众多且可使发炎性损伤加重。发炎性肠道疾病(IBD)的示范性动物模型是通过HLA-B27转殖基因大鼠实现。所述大鼠过分表达与脊椎关节病(一类侵害骨骼的发炎性病症)相关联的人HLA-B27分子(重链和β球蛋白基因)。在骨骼发炎性变化发作之前，这些动物在小肠内显现非肉芽肿炎症且在结肠上出现弥散隐窝脓肿，病状类似于人类中的克罗恩氏病。功效研究是如下面实例J中所述通过本发明的化合物在HLA-B27转殖基因大鼠IBD模型中进行。
哮喘为一种特征为气管支气管树对增强支气管气道发作性收缩的各种刺激的反应性增强的疾病。所述刺激导致炎症的各种介体从IgE包被的肥大细胞释放，所述介体包括组织胺、嗜酸性和嗜中性趋化因子、白三烯、前列腺素和血小板活化因子。所述因子的释放募集引起发炎性损伤的嗜碱性细胞、嗜酸性细胞和嗜中性细胞。
用于哮喘的活体内研究的一些适当动物模型可包括如实例E中所述的大鼠哮喘模型、小鼠哮喘模型和绵羊模型。
动脉粥样硬化是一种动脉(例如，冠状动脉、颈动脉、主动脉和回肠动脉)疾病。基本病变(粥样斑)由带有脂质核心和纤维盖帽的内膜内的凸起病灶斑块组成。粥样斑危及动脉血流且使受损害的动脉衰弱。心肌和脑梗塞是所述疾病的主要后果。巨噬细胞和白血球被募集至粥样斑且促进发炎性损伤。
类风湿性关节炎是一种慢性、复发性发炎性疾病，其主要造成关节的损伤和毁坏。类风湿性关节炎通常首先侵害手与脚的小关节，但接着可影响腕关节、肘关节、踝关节和膝关节。关节炎是由滑膜细胞与从循环浸润入关节的滑膜衬里中的白血球的相互作用引起。例如参见，保罗(Paul)的免疫学(Immunology)(第3版，乌鸦出版社(Raven Press)，1993)。随时间流逝会出现骨侵蚀、软骨的毁坏和关节完整性的完全丧失。最后，可侵害多个器官系统。
类风湿性关节炎中的关节损伤开始于触发事件(可能为自体免疫性的或传染性的)后滑膜巨噬细胞和成纤维细胞的增殖。淋巴细胞浸润血管周区域且内皮细胞增殖。接着发生新血管生成。受侵袭关节中的血管因炎性细胞的小凝块而变得堵塞。发炎滑膜组织随时间流逝开始无规律地生长，形成侵袭性血管翳组织。血管翳侵袭且毁坏软骨和骨。释放出多种细胞激素、介白素、蛋白酶和生长因子，此引起进一步的关节毁坏和全身性并发症的出现。参见，菲尔斯坦(Firestein)G.S.风湿性关节炎的病因和发病机理(Etiologyand pathogenesis of rheumatoid arthritis)，路迪(Ruddy)S、哈里斯(Harris ED)、斯莱杰(Sledge)CB、凯利(Kelley)WN编，凯利风湿病学(Kelley′s Textbook of Rheumatology)，第7版，费城：W.B.桑德斯出版公司(Philadelphia：W.B.Saunders)，2005：996-1042。
用于研究类风湿性关节炎的适当动物模型可包括如本文实例G和H中所述的佐剂诱导的关节炎(“AIA”)模型和胶原蛋白诱导的关节炎(“CIA”)模型。
本发明的化合物的另一适应症为由VLA-4所介导的器官或移植物排斥反应。近几年来，用于移植组织和器官(诸如，皮肤、肾、肝脏、心脏、肺、胰腺和骨髓)的外科手术的效率已有相当大的提高。可能首要突出问题是缺乏令人满意的试剂用于在接受者中诱导对移植的同种异体移植物或器官产生免疫耐受性。当将同种异体细胞或器官移植入宿主(也就是说，供给者与接受者为同一种的不同个体)中时，宿主免疫系统可能对移植物中的外来抗原发动免疫反应(宿主抗移植物疾病)而导致移植组织毁坏。CD8+细胞、CD4细胞和单核细胞皆涉及到移植组织的排斥。与α4整合素结合的本发明的化合物特别可用于阻断接受者中同种异体抗原诱导的免疫反应，进而防止所述细胞参与移植组织或器官的毁坏。例如参见，保罗(Paul)等人，世界移植杂志(Transplant International)9，420-425(1996)；高新斯基(Georcyznski)等人，免疫学(Immunology)87，573-580(1996)；高新斯基(Georcyznski)等人，移植免疫杂志(Transplant.Immunol.)3，55-61(1995)；Yang等人，移植杂志(Transplantation)60，71-76(1995)；安德森(Anderson)等人，APMIS102，23-27(1994)。
与VLA-4结合的本发明的化合物的一种相关用途是介导“移植物抗宿主”疾病(“GVHD”)中所涉及的免疫反应。例如参见，时力高(Schlegel)等人，免疫学杂志(J.Immunol.)155，3856-3865(1995)。GVHD为一种潜在致命性疾病，其当将免疫活性细胞转移到同种异体接受者中时发生。在所述种状况下，供给者的免疫活性细胞可侵袭接受者的组织。在发生GVHD期间，皮肤、肠上皮细胞和肝脏组织为经常的靶目标且可遭到毁坏。当免疫组织被移植时，诸如在骨髓移植的状况下，所述疾病呈现特别严重的问题；但严重程度较低的GVHD也已在其它状况(包括心脏和肝脏移植)中报道过。本发明的治疗剂可特别用以阻断供给者T-细胞的活化，进而干扰其溶解宿主中的靶细胞的能力。
本发明的化合物的又一用途为抑制肿瘤转移。已报道一些肿瘤细胞表达VLA-4，且与VLA-4结合的化合物阻断所述细胞至内皮细胞的粘附。史坦贝克(Steinback)等人，泌尿学研究(Urol.Res.)23，175-83(1995)；奥罗兹(Orosz)等人，国际癌症期刊(Int.J.Cancer)60，867-71(1995)；佛瑞德门(Freedman)等人，白血病.淋巴瘤(Leuk.Lymphoma)13，47-52(1994)；正幸(Okahara)等人，癌症研究(CancerRes.)54，3233-6(1994)。
本发明的化合物的又一用途为治疗多发性硬化症。多发性硬化症为一种进行性神经自体免疫疾病，所述病在美国侵害估计250,000至350,000人。多发性硬化症被认为是特异性自体免疫反应的结果，其中某些白血球侵袭为覆盖神经纤维的绝缘鞘的髓鞘且发起对其的毁坏。在多发性硬化症的动物模型中，已显示抗VLA-4的鼠单株抗体阻断白血球至内皮的粘附，且因此在动物中预防中枢神经系统的炎症和随后的麻痹16。
本发明的医药组合物适合用于多种药物传递系统中。用于本发明的合适调配物可见于美国宾夕法尼亚州费城Mace出版公司雷氏药学大全(Remington′s PharmaceuticalSciences，Mace Publishing Company，Philadelphia，PA)，第17版(1985)中。
投予患者的量将视正投予的物质、投予的目的(诸如，预防或治疗)、患者的状态、投予的方式和其类似因素而变化。在治疗应用中，将组合物以足以治愈或至少部分地抑制疾病和其并发症的症状的量投予已患有所述疾病的患者。将足以实现此目的的量定义为“治疗有效剂量”。有效用于所述用途的量将根据适当动物模型资料(诸如，本文所提供的资料)视正治疗的疾病状况以及主治临床医师依据如下因素所作的判断而定：炎症的严重程度、患者的年龄、体重和全身状态等等。基于所述资料来估计适当人用剂量的方法在此项技术中已知。(例如参见1993年美国宾夕法尼亚州兰开斯特食品行业咨询公司(Technomic，Inc.，Lancaster，PA)瓦格纳(Wagner)，J.G.的医药科学家的药物代谢动力学(Pharmacokinetics for the Pharmaceutical Scientist))。
投予患者的组合物呈上述医药组合物形式。所述组合物可通过常规灭菌技术进行灭菌，或可进行无菌过滤。可对所得水溶液进行包装以按原状使用，或可将其冻干(在投予前与无菌含水载剂组合的冻干制剂)。
若有必要时，可对具有所要生物活性的化合物进行修饰以提供所要性质，诸如，改良药理学性质(例如，活体内稳定性、生物可用性)或在诊断应用中被检测到的能力。稳定性可以多种方法进行分析，诸如，通过在与肽酶或人血浆或血清一起培养期间测量蛋白质的半衰期。已对许多如此的蛋白质稳定性分析进行了描述(例如参见，范霍夫(Verhoef)等人，欧洲药物代谢与药物动力学杂志(Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet.)，1990，15(2)：83-93)。
本发明的化合物的治疗剂量将根据(例如)治疗的特殊用途、化合物投予的方式、患者的健康状况以及处方医师的判断而变化。例如，对于静脉内投予来说，剂量将通常在每公斤体重约20μg至约2000μg的范围内，较佳在约20μg至约500μg的范围内，更佳在每公斤体重约100μg至约300μg的范围内。用于鼻内投予的合适剂量范围通常是每公斤体重约0.1pg至1mg。有效剂量可从得自活体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线进行外推。
本发明的化合物也能够结合α4β1和α4β7整合素或拮抗其作用。因此，本发明的化合物也可用于预防由所述整合素与其各自配位体相结合而诱导的症状、失调症或疾病，或使所述症状、失调症或疾病好转。
在本发明的另一方面中，本文所述的化合物和组合物可用来抑制免疫细胞从血流到中枢神经系统的迁移(在例如多发性硬化症的状况下)，或到达导致髓鞘炎症诱导性毁坏的区域的迁移。较佳地，所述试剂以抑制脱髓鞘且进一步可促进髓鞘再生的方式抑制免疫细胞迁移。所述试剂也可防止脱髓鞘且促进先天性代谢障碍的中枢神经系统的髓鞘再生，在所述先天性代谢障碍中浸润免疫细胞主要在CNS中影响髓鞘发育。当将所述试剂投予患有由脱髓鞘疾病或病症诱导的麻痹的个体时，其也较佳地减轻麻痹。
通过本文所揭示的组合物、化合物和方法所治疗的发炎性疾病通常包括与脱髓鞘相关的病症。就组织学上来说，髓鞘异常为脱髓鞘或髓鞘形成不良。脱髓鞘意味着髓鞘的毁坏。髓鞘形成不良是指由寡树突神经胶质细胞的功能不良引起的髓鞘的缺陷性形成或维持。较佳地，预期本文所揭示的组合物和方法可治疗与脱髓鞘相关的疾病和病症且有助于髓鞘再生。预期可治疗的额外疾病或病症包括脑膜炎、脑炎和脊髓损伤以及通常由于发炎反应而诱导脱髓鞘的病症。
预期本文所揭示的组合物、化合物和混合物可用于治疗与脱髓鞘相关联的病症和疾病。涉及脱髓鞘的疾病和病症包括(但不限于)多发性硬化症、先天性代谢障碍(例如，苯酮尿症(PKU)、家族黑蒙性白痴病(Tay-Sachs disease)、尼曼-匹克二氏病(Niemann-Pick disease)、戈谢病(Gaucher′s disease)、赫尔勒氏综合症(Hurler′ssyndrome)、克拉培氏病(Krabbe′s disease)以及其它影响鞘发育的脑白质营养不良)、带有异常髓鞘形成的神经病(例如，格林-巴利综合症(Guillain Barré)、慢性免疫脱髓鞘多发性神经病(CIDP)、多灶性CIDP、多灶性运动神经病(MMN)、抗MAG(髓鞘相关性糖蛋白)综合症、GALOP(步态失调、自身抗体、大龄、发病、多发性神经病)综合症、抗硫脂抗体综合症、抗GM2抗体综合症、也称为科让-福克斯综合症(Crow-Fukase Syndrome)和高月病(Takatsuki disease)的POEMS(多发性神经病、内脏增大、内分泌病、M蛋白和皮肤改变)综合症、神经束膜炎、IgM抗GD1b抗体综合症)、药物相关性脱髓鞘(例如，由投予氯奎、FK506、双环己哌啶(perhexiline)、普鲁卡因酰胺(procainamide)和齐咪苯(zimeldine)引起的)、其它遗传性脱髓鞘病症(例如，碳水化合物缺乏糖蛋白病、科凯恩氏综合症(Cockayne′s syndrome)、先天性髓鞘发育不良、先天性肌肉萎缩症、法伯氏病(Farber′s disease)、玛芮奈斯克-斯乔格仁综合症(Marinesco-Sj
Figure A200780006583D0039111435QIETU
rendyndrome)、异染性脑白质营养不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、雷夫叙姆病(Refsum disease)、朊病毒相关病症和萨拉病(Salla disease))和其它脱髓鞘病症(例如，脑膜炎、脑炎(也称为急性播散性脑脊髓炎(ADEM))或脊髓损伤)或疾病。
存在各种可用来在活体内研究这些疾病的疾病模型。举例来说，动物模型包括(但不限于)：
表4
Figure A200780006583D00391
最常见的脱髓鞘疾病为多发性硬化症(“MS”)，但许多其它代谢和发炎性失调症导致缺陷性或异常髓鞘形成。MS为一种慢性神经病，其出现在早期成年期且在多数状况下发展至严重失能。仅在美国就存在大约350,000个MS病例。除外伤外，MS为早期至中间成年期中神经功能障碍的最常见原因。
MS的原因仍待确定。MS特征为慢性炎症、脱髓鞘和神经胶瘤病(疤痕)。脱髓鞘可导致对轴突传导产生负性或正性影响。正性传导异常包括减缓的轴突传导、在高频率而非低频率的脉冲群存在下出现的易变传导阻断或完全传导阻断。正性传导异常包括自发地或在机械应力之后的异位性脉冲产生以及脱髓鞘外显子之间的异常“串话(cross-talk)”。
已观测到对髓鞘蛋白(髓鞘碱性蛋白(MBP)或髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP))具有反应性的T细胞可介导实验过敏性脑脊髓炎中的CNS炎症。也已观测到患者具有升高含量的CNS免疫球蛋白(Ig)。更有可能的是一些在MS中所观测到的组织损伤是由活化T细胞、巨噬细胞或星形胶质细胞的细胞激素产物所介导。
现今，经诊断患有MS的80％患者在疾病发作后仍能活20年。控制MS的治疗包括：(1)目的在于改善疾病过程的治疗(包括急性恶化的治疗)以及针对疾病的长期抑制的治疗；(2)MS症状的治疗；(3)医学并发症的预防和治疗；以及(4)继发性个人与社会问题的处理。
MS的发作可为剧烈的或为如此的轻微以致于未促使患者寻求医护。最常见的症状包括一肢或多肢虚弱、归因于视神经炎的视觉模糊、感觉紊乱、复视和运动失调。可将疾病的过程分为3种一般类型：(1)复发性MS，(2)慢性进行性MS，和(3)静止性MS。复发性MS特征为神经功能障碍的复发性发作。MS发作通常历时数天至数周且可接着完全、部分痊愈或不能痊愈。从发作中恢复通常发生在症状高峰的数周至数月内，但很少有一些恢复可持续两年或两年以上。
慢性进行性MS可导致逐渐进行性恶化，无稳定或好转时期。这种形式出现在先前有复发性MS病史的患者中，但在20％患者中可能没有复发史。在进行性过程期间也可出现急性复发。
第三种形式为静止性MS。静止性MS特征为程度(magnitude)可变的固定神经缺损。患有静止性MS的多数患者具有复发性MS的早期病史。
疾病过程也视患者的年龄而定。例如，有利预后因素包括早期发作(儿童期除外)、复发性过程以及发作后5年几乎没有残余失能。相反，不良预后与大龄发作(也就是说，40岁或40岁以上)和进行性过程相关联。因慢性进行性MS倾向于在复发MS的更大年龄时开始，所以这些变量是相互依赖的。来自慢性进行性MS的失能通常是归因于患者中的进行性截瘫或四肢麻痹(麻痹)。在本发明的一方面中，较佳当患者处于好转期而非处于疾病的复发性阶段时对其进行治疗。
短期使用促肾上腺皮质激素或口服皮质类固醇(例如，口服泼尼松(prednisone)或静脉内注入甲泼尼龙(methylprednisolone))为用于治疗MS急性恶化的患者的唯一特效性治疗措施。
用于MS的较新治疗包括通过干扰素β-1b、干扰素β-1a和
Figure A200780006583D0041154401QIETU
(先前称为共聚物1)对患者进行治疗。已显示这3种药物显著降低疾病的复发率。自行经肌肉内或皮下投予这些药物。
然而，目前治疗方法中没有一种抑制脱髓鞘，更不用说促进或允许自发性髓鞘再生或减轻麻痹。本发明的一方面预期通过本文所揭示的试剂单独地或与其它标准治疗方法组合来治疗MS。
辐射也可诱发脱髓鞘。相信归因于辐射的中枢神经系统(CNS)毒性是由(1)脉管结构的损伤、(2)寡树突神经胶质细胞-2星形胶质细胞祖细胞和成熟寡树突神经胶质细胞的缺失、(3)海马体、小脑和皮质中的神经干细胞群的缺失以及细胞激素表达的全身性变化所引起。多数辐射损伤是由在治疗某些癌症期间施以的放射线治疗引起的。有关述评，参见贝尔克(Belka)等人，2001英国癌症杂志(Br.J.Cancer)85：1233-9。然而，放射性暴露对宇航工作者来说(和普威尔(Hopewell)，1994空间研究进展(Adv.Space Res.)14：433-42)以及在暴露于放射性物质的事件中可能也为一问题。
也预期对这些病症和疾病进行缓解性治疗或改善性治疗。
实例
提供以下合成和生物学实例以阐明本发明且在任何情况下不应将其解释为限制本发明的范畴。除非另有说明，否则所有温度的单位为摄氏度。在下面实例中，以下缩写具有下述含义。若未对某一缩写进行定义，则所述缩写具有其普遍认可的含义。
Figure A200780006583D0041111546QIETU
     ＝埃
br s    ＝宽单峰
BSA     ＝牛血清白蛋白
d       ＝二重峰
dd      ＝二重峰的二重峰
dq      ＝四重峰的二重峰
dsextet ＝六重峰的二重峰
DMF     ＝二甲基甲酰胺
EC50            ＝存在50％群体的所要反应时的剂量
EDTA            ＝乙二胺四乙酸
EtOAc           ＝乙酸乙酯
EtOH            ＝乙醇
Et3N            ＝三乙胺
EM              ＝发射波长(单位为nm)
EX              ＝激发波长(单位为nm)
g               ＝克
HBSS            ＝汉克斯平衡盐溶液(Hank′s balanced salt solution)
HEPES           ＝4-(2-羟基乙基)-1-六氢吡嗪乙烷磺酸
HPLC            ＝高效液相色谱法
hrs或h          ＝小时
IC50            ＝酶的活体外50％抑制所需的抑制剂的浓度
in.             ＝英寸
i.p.            ＝腹膜内
i-PrOH          ＝异丙醇
kg              ＝公斤
L               ＝升
LC/MS           ＝液相色谱/质谱分析
m               ＝多重峰
m2              ＝平方米
M               ＝摩尔浓度
mbar            ＝毫巴
mg              ＝毫克
MHz             ＝兆赫
min.            ＝分钟
mL              ＝毫升
mm              ＝毫米
mM              ＝毫摩尔浓度
mmol            ＝毫摩尔
mOsm            ＝毫渗
MTBE            ＝甲基叔丁基醚
m/z或M/Z        ＝质荷比
N               ＝当量
ng              ＝纳克
nm              ＝纳米
NMR             ＝核磁共振
PBS             ＝磷酸盐缓冲生理食盐水
PBS++           ＝含钙和镁的PBS
ppm             ＝百万分率
psi             ＝磅每平方英寸
p.o.            ＝口服，照字面意义为“经口”，包括经口管饲
q               ＝四重峰
q.s.            ＝足量
Rf              ＝滞留因子(物质行进的距离与溶剂前沿行进的距离的比)
rpm             ＝每分钟转数
rt或RT               ＝室温
Rt                   ＝滞留时间
s                    ＝单峰
t                    ＝三重峰
TFA                  ＝三氟乙酸
THF                  ＝四氢呋喃
TLC                  ＝薄层色谱法
UV                   ＝紫外线
wt/wt                ＝重量重量比
w/v                  ＝重量体积比
μg                   ＝微克
μm                   ＝微米
μM                   ＝微摩尔浓度
实例1
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-异丙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸的制备
实例1中所采用的合成方案概述于下面所说明的流程4中。
Figure A200780006583D00431
流程4
在流程4中，化合物4是从5-硝基嘧啶化合物1以三锅式程序进行制备。流程4的合成方案通过一个或多个以下方面显著简化这种化合物的制备：
1)充分加速的硝基还原步骤；
2)在具有相同溶剂和相同催化剂的相同烧瓶中进行的流线式还原/还原性胺化程序，因而使操作减少且对氧敏感的产物暴露于空气的状况减至最少；
3)还原性胺化步骤的条件将双异丙基氨基嘧啶副产物的生成减至最低，进而排除对化合物3进行色谱纯化的需要；
4)描述一些条件，通过所述条件有可能将单异丙基氨基嘧啶中间物(化合物2)经由湿磨相应L-酒石酸盐而纯化(尽管通过还原性胺化步骤的改良也已使对化合物2的所述不连续纯化的需求不再必要)，和
5)已确定通过从MTBE-己烷或MTBE-环己烷中结晶进行化合物3的不连续纯化的条件。
在流程4的反应步骤中，快速色谱是使用百特基(Biotage)Flash 75L且使用800gKP-Sil二氧化硅滤筒(32-63μM，60埃，500-550m2/g)进行。将EM科学(Sciences)硅胶60F(254)，250μM厚的板用于正相，报道分析薄层色谱的Rf。NMR光谱是通过瓦利安吉米尼(Varian Gemini)300MHz光谱仪(对于1H光谱，采用300MHz，而对于13C光谱，采用75MHz)获得。分析HPLC是通过具有菲罗门月神(Phenomenex Luna)，3μm，C-18，30×4.6mm柱的安捷伦(Agilent)1100系列HPLC进行。检测器为210nm下进行检测的紫外检测器。溶剂为在水中的0.1％ TFA和在乙腈中的0.1％ TFA。标准流动速率为1.5mL/min，且将标准方法命名为M1，溶剂梯度从20％ CH3CN变化到70％CH3CN，历时2.33分钟。将替代方法命名为M2，流动速率为2mL/min且梯度从20％CH3CN变化到70％ CH3CN，历时1.75分钟。方法M15的流动速率为1.5ml/min，溶剂组成从20％CH3CN变化到70％ CH3CN，历时10分钟，在70％下保持2分钟，接着逐渐升高至95％，历时1分钟，且在95％下保持2分钟。LC/MS是通过安捷伦(Agilent)1100系列HPLC进行，所述HPLC具有带有电喷雾电离作用(除非另作说明为化学电离作用)的1100系列MSD。柱和条件与独立式HPLC相匹配。
步骤1：吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(异丙基氨基)嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯(2)的制备
Figure A200780006583D00451
使硝基嘧啶-氨基甲酸酯1(100g，189mmol)和PtO2(6.33g，27.85mmol)悬浮于360mL含水THF(5％H2O)中。在氢气(60psi)下且在室温下搅拌所述混合物。3小时后，TLC(在硅胶上的50％EtOAc/己烷)显示硝基的完全还原(通过硅胶和EtOAc的TLC分析显示氨基-嘧啶的Rf为0.2(条带状)且起始硝基嘧啶-氨基甲酸酯的Rf为0.86)。在这点上，在所述两步法中将PtO2用于两步允许具有显著加快硝基还原速率的额外特征的单锅式反应的进行。因氨基嘧啶产物易于氧化，故在任何状况下，注意将暴露于空气/氧气的状况减至最少。
将乙醇(200mL)、丙酮(21mL，1.5当量)和冰乙酸(3.0mL，0.28当量)添加到氢化烧瓶中的氨基嘧啶溶液中。在抽空且净化后，通过H2(60psi)对烧瓶加压。允许还原性胺化过夜进行。使用EtOAc作为洗提液，通过二氧化硅进行的TLC得到：异丙基氨基-嘧啶的Rf为0.41(条带状)且起始氨基嘧啶氨基甲酸酯的Rf为0.11。TLC和LC/MS两者确认反应完全，实际上并无双异丙基氨基嘧啶产生。若有必要时可使用HPLC作为替代方法以监控反应的进程。用EtOAc(1L)稀释粗制反应溶液，且经由碱性氧化铝(400mL)垫过滤。通过EtOAc(200mL)和EtOH(200mL)冲洗氧化铝，且在真空中使组合的有机溶液浓缩。通过N2对烧瓶进行排气。将粘性油再溶解于无水甲苯(700mL)中，且浓缩。通过氮气对烧瓶进行排气后，又通过另400mL甲苯的共沸去除使产物干燥。得到粘性红棕色油。
如通过LC/MS所证实，相较于其中双异丙基氨基嘧啶氨基甲酸酯杂质需要通过色谱去除的先前方法来说，用这种程序产生极少量的双异丙基氨基嘧啶氨基甲酸酯杂质。
若需要单异丙基氨基嘧啶2步骤的正规纯化，则可使其自THF/醚沉淀为(L)-酒石酸盐，且加以研磨。小规模实例如下：(5.09g，99.6％产率)将L-酒石酸(1.42g)溶解于热THF(45mL)中。将热酒石酸溶液添加到异丙基氨基嘧啶2(5.1g)的胶状物中。使混合物涡旋且将其温热直到均质。溶液的颜色从粉紫色变为棕褐色。将溶液在真空中浓缩以得到棕褐色胶状物。添加乙醚(约150mL)，随之观察到呈油状。将乙醚混合物在真空中浓缩。添加丙酮(约20mL)，且接着添加乙醚(约200mL)，并再次观察到形成胶质油。第三次使混合物浓缩。添加二氯甲烷(5-10mL)，继而添加乙醚(约80mL)。观察到在鲜艳橙粉色上清液下面形成棕褐色沉淀物。将混合物过滤。用乙醚(50mL)冲洗沉淀物，且接着又用丙酮与乙醚(1:1)的混合物(约60mL)进行冲洗。将沉淀物在真空中过夜干燥以得到乳白色固体(4.9g，76％产率)。将固体酒石酸盐的少量等分试样溶解于i-PrOH和EtOH中，且使其通过碱性氧化铝小柱塞以得到游离碱。通过TLC与LC/MS分析游离碱等分试样。使剩余盐悬浮于CH2Cl2(250mL)与1N NaHCO3(150mL)的混合物中。在搅拌且稍微起泡的同时，固体溶解且游离碱性胺萃取到有机层中。再次用EtOAc(150mL)萃取水层，且将有机萃取物组合并经MgSO4(约150g)干燥。使经干燥的有机溶液通过碱性氧化铝(约100g)柱塞以得到浅粉红色溶液，将其在真空中浓缩以得到棕褐色/粉红色胶状物(3.28g，从起始硝基氨基甲酸酯计产率为64％)。
对若干其它酸进行研究以设法与单异丙基氨基嘧啶氨基甲酸酯2形成盐。对甲苯磺酸与甲烷磺酸得到油状物。可与HCl和H3PO4形成固体盐，但酒石酸似乎提供最有利的溶解度特性。盐酸盐和磷酸盐显现易于溶解于CH2Cl2、i-PrOH和丙酮中，而酒石酸盐显现大部分不溶于CH2Cl2中，且仅部分可溶于其它溶剂中。
步骤2：吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-异丙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯(3)的制备
Figure A200780006583D00461
将来自步骤1的异丙基氨基嘧啶氨基甲酸酯2(采用189mmol)溶解于吡啶(680mL)中，且使溶液在N2下冷却到0℃。将甲烷磺酰氯(44mL，3.0当量)经由注射泵经20分钟添加到异丙基氨基嘧啶氨基甲酸酯的冷吡啶溶液中。将冰浴移走且使溶液升温到室温。使溶液搅拌6小时。去除少许等分试样，且进行小规模处理(用EtOAc稀释，用5％KH2PO4、盐水洗涤，且接着经MgSO4干燥)。通过TLC分析显示反应完全且通常无残余吡啶(除基线点之外仅有一点)。使本体反应溶液浓缩。当已收集650mL馏出物时，用EtOAc(2L)稀释血红色油。用5％ KH2PO4(1L和750mL)、0.2N柠檬酸(1L)和盐水(1L)洗涤有机溶液。经MgSO4(150g)使有机溶液干燥。将经干燥的有机溶液经由硅胶(1L)垫过滤以得到墨绿色溶液。用EtOAc(1.5L)冲洗烧瓶和硅胶以使有机溶液的总体积达到3.5L。经由碱性氧化铝(300mL)垫将溶液过滤以得到深绿色溶液。在真空中使溶液浓缩。获得微红色胶状物(150g)。
用氮气对烧瓶进行冲洗，盖上盖子且置放入冰箱中，随之形成棕红色固体。LC/MS显示可接受的纯度，但TLC分析显示一个鲜红色基线点以及两至三个非常暗淡的杂质点。吡啶的气味仍存在。将棕红色固体溶解于CH2Cl2(100mL)、THF(200mL)与乙醚(800mL)的混合物中。使溶液经由硅胶(1L)垫过滤/洗提，且用乙醚(3L)冲洗二氧化硅。大部分有色基线杂质留于硅胶上。使溶液浓缩以得到红色油，将所述油干燥成粉红色泡沫固体(100g)，通过LC/MS分析其纯度为94.7％。接着通过硅胶(2L)用CH2Cl2(3L)、CH2Cl2和乙醚(1:1；4L)、乙醚(4L)、乙醚：THF(1:1；4L)以及含有5％Et3N和2％ EtOH的EtOAc(4L)洗提而对所述物质进行色谱分析。CH2Cl2：乙醚洗提剂得到混合部分的红色油(12.4g；部分A)且乙醚洗提剂得到一般纯的棕褐色油(13g；部分B)。大部分物质留在柱上，且了解到所要产物已结晶于柱上。通过乙醚：THF和EtOAc(含有5％ Et3N和2％ EtOH)进行洗提使产物再溶解且洗提于富集塞(部分C)中。将部分A与部分B组合且一起浓缩。将部分C独立浓缩。在浓缩且干燥后，在两部分中形成结晶。进一步研究发现固体可从甲基叔丁基醚(MTBE)、环己烷、乙醚-己烷(1:1)、MTBE-己烷或环己烷-己烷中再结晶。将组合部分A与B以及部分C各自从MTBE-己烷中再结晶以得到呈白色固体的叔丁基酯3(总共57.75g，纯度>99％)以及红色滤液/母液。将母液浓缩以得到红色油(24g)。通过百特基(Biotage)75对母液油进行色谱分析且用在CH2Cl2中(12L)的4％THF进行洗提以得到富集部分，接着使其浓缩和再结晶以得到另外14g经纯化的叔丁基酯。
通过方法M2的LC/MS得到所要产物的tR＝1.97分钟，M/Z＝619([M+1]+)。
通过方法M15的LC/MS得到所要产物的tR＝6.09分钟，M/Z＝619([M+1]+)。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ，ppm：0.88(d，j＝6Hz，1.4H)，1.04(d，j＝6Hz，2H)，1.20(m，10H)，1.37(s，4.8H)，1.39(s，4.8H)，1.93(AA′BB′，4H)，2.80(s，1.7H)，2.9(s，1.6H)，3.18(m，2.4H)，3.4-3.7(与两个明显三重峰重叠的多重峰，8.3H)，4.40(sextet，j＝6Hz，1.1H)，4.8(sextet，1H)，5.64(d，j＝6.5Hz，0.5H)，5.70(d，j＝6.5Hz，0.5H)，7.03(m，2H)，7.18(明显dd，2H)，7.80(d，j＝4Hz，1H)。1H NMR揭示旋转异构体。
预期用甲烷磺酰氯进行处理是在几乎没有或没有另外碱的状况下于THF中进行。若使用碱，则应采用诸如三乙胺或二异丙基乙胺的碱。
步骤3：(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-异丙基甲基-磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸(4)的制备
Figure A200780006583D00481
将来自步骤2的叔丁基酯(57.75g，0.093mol)的甲酸(1.5L)溶液加热到50℃，过夜，且接着在真空中浓缩。或者，也可使反应在70℃或80℃下进行60-90分钟。
将水(约100mL)添加到粗产物中，且将混合物浓缩到干燥。在高真空下将残余物干燥。由1.0N HCl(250mL与200mL)将粗产物溶解且浓缩两次。将产物两次溶解于热THF中且浓缩到干燥以得到泡沫固体。将泡沫固体在高真空、65℃下干燥两小时。将所述固体从烧瓶刮出，且在真空烘箱中干燥，过夜(60℃，28英寸汞柱)以得到(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-异丙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸的盐酸盐-5(50.9g；纯度：98.3％)。
通过方法M15的LC/MS得到tR＝1.96分钟，M/Z＝563。
通过方法M2的LC/MS得到tR＝1.43分钟，M/Z＝563。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ，ppm：0.80(d，j＝6Hz，1.4H)，1.02(d，j＝6Hz，1.6H)，1.23(m，9.2H)，1.80-2.0(AA′BB′+m，5.2H)，2.99(d，3.2H)，3.2-3.45(m，4.5H)，3.45-3.8(m，7.6H)，4.40(sextet，1H)，4.90(m，3H)，7.00(d，2H)，7.23(d，2H)，7.60(d，0.25H)，7.75(d，1H)，7.83(d，0.25H)。
13C NMR(CD3OD，75MHz)δ，ppm：6.5，14.7，14.8，15.4，15.5，19.4，20.0，20.2，29.91，30.44，33.95，34.15，41.03，41.08，(41.71，41.99，42.28，42.6，42.8，43.1-溶剂峰)，47.21，47.36，50.01，50.42，62.43，102.11，102.23，116.78，124.9，125.19，128.54，129.01，138.49，139.02，145.53，145.60，145.78，148.68，156.77，156.86，166.91，167.07。
实例2
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸(7)的制备
Figure A200780006583D00491
步骤1：吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-硝基嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯(6)的单锅式还原/还原性乙基化
Figure A200780006583D00492
在THF(35mL)中将硝基-氨基甲酸酯(化合物5，10.8g，20mmol)制成浆，且添加水(1mL，3体积％)。将溶液搅拌，添加亚当斯(Adams)催化剂(0.360g，6摩尔％)，且通过进行抽空(50毫米汞柱)和再充满干燥氮气(10psi)的三次循环将所述溶液脱氧。最后，通过氢气(60psi)对反应容器加压，且将反应混合物用力搅拌90分钟。若有必要或需要时，可通过TLC(硅胶，用二氯甲烷:甲醇(95:5)洗提)监控氢化反应的进程。硝基氨基甲酸酯的Rf为0.95，伯胺的Rf等于0.16。
以干燥氮气代替氢气(进行抽空和再充满氮气的三次循环)。添加乙醇(25mL)、乙酸(0.3mL)和乙醛(1.2mL，21mmol，1.05当量)，在低压(约150毫米汞柱)下将容器部分抽空以便使挥发性乙醛的损失降至最低，再充满氮气(10psi)，且将反应混合物用力搅拌50分钟。在这个时间结束时，通过部分抽空且用氢气再加压两次而使氮气为氢气所代替(60psi)。又将混合物搅拌45分钟。通过TLC(硅胶，用二氯甲烷:甲醇(95:5)洗提)可监控还原性胺化的进程。伯胺的Rf等于0.16，仲胺的Rf等于0.32且叔胺的Rf等于0.43。在过程结束时，通过进行抽空和再充满氮气的三次循环而将氢气冲走，使用甲醇冲洗将硅藻土床上的催化剂滤掉，将滤液汽提直到干燥以得到琥珀色油(11.9g)。产物对氧敏感，导致在TLC中相当的发暗和低Rf物质的出现。所有处理应在有适当预防措施的状况下进行。
通过快速色谱，使用含有0.3％氢氧化铵的二氯甲烷:甲醇混合物(97:3)来纯化反应产物。将含有N-乙基产物的部分组合以得到7.9g呈琥珀色油的化合物6(纯度：98.5％；73％产率)。粗产物的纯度显现适用于许多目的，特别是若已知后续预期反应的产物为结晶体时尤如此。
1H-NMR，CDCl3，(δ)：7.60(s，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，2H)，7.05(d，J＝8.4Hz，2H)，5.75(d，J＝7.5Hz，1H)，4.84(q，J＝6.6Hz，1H)，3.64-3.46(m，8H)，3.19(d，J＝6.3Hz，2H)，2.86(q，J＝7.2Hz，2H)，1.94(m，4H)，1.39(s，9H)，1.20-1.11(m，9H)。
13C-NMR，CDCl3，(δ)：171.7，157.7，157.5，153.1，150.3，145.8，133.7，130.2，121.5，117.4，81.8，54.7，46.4，46.3，42.4，41.7，37.4，28.0，25.8，24.9，15.5，13.5。
MS(m/z)：527.3[M+1]。
步骤2与3：(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基甲基磺酰胺基)-嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸7
遵循实例1的步骤2与3的程序，使化合物6转化为相应(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸7，其特征如下所示：
1H-NMR，CDCl3，(δ)：8.17(s，1H)，7.77(s，1H)，7.26-7.23(m，2H)，7.00-6.98(d，2H)，4.85-4.82(m，1H)，3.58-3.51(m，6H)，3.43-3.39(m，3H)，2.96-2.84(m，3H)，2.01-1.91(m，4H)，1.29-0.97(m，9H)；
13C-NMR，CDCl3，(δ)：175.6，165.7，157.2，155.2，152.0，151.8，151.7，151.3，136.0，135.9，131.5，123.0，110.5，56.7，43.8，39.4，39.2，37.4，26.7，25.8，14.4，13.3；和
MS：M(+H)549。
实例3
(S)-2-(5-(N-环戊基甲基磺酰胺基)-2-(二乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸(8)的制备
Figure A200780006583D00501
遵循实例1的程序且采用环戊酮代替丙酮(实例1)或乙醛(实例2)来制备(S)-2-(5-(N-环戊基甲基磺酰胺基)-2-(二乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸8，其特征如下所示：
1H-NMR，CDCl3，(δ)：7.74-7.71(d，1H)，7.28-7.24(m，2H)，7.04-7.00(m，2H)，5.00-4.95(m，1H)，4.37-4.27(m，1H)，3.60-3.37(m，9H)，3.00-2.97(d，3H)，2.03-1.78(m，6H)，1.67-1.40(m，6H)，1.31-1.23(m，6H)；
13C-NMR，CDCl3，(δ)：173.6，173.4，163.1，155.1，152.4，152.0，145.3，144.7，135.5，135.1，131.6，131.4，123.2，109.6，109.4，62.5，62.3，56.7，56.5，48.1，40.3，40.1，36.8，36.4，31.2，30.5，26.7，25.8，23.2，23.1，12.7；和
MS：M(+H)589。
实例4
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-(丙-2-炔基)甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸(13)的制备
实例4中所采用的合成方案概述于下面所说明的流程6中。
Figure A200780006583D00521
流程6
步骤1：吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-(甲基磺酰基)-甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯(10)
将氨基嘧啶(2.0g，4.0mmol-化合物9)(通过使化合物1还原而制备)溶解于二氯甲烷(10mL)中。添加THF(10mL)和三乙胺(2.8mL，20mmol)，且将反应物在冰浴中冷却。添加甲烷磺酰氯(1.1mL，14mmol)，且将反应物经18小时温到室温。将反应混合物在真空中浓缩，且将残余物溶解于乙酸乙酯中。用0.2N柠檬酸、水、饱和NaHCO3和盐水洗涤溶液。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩以得到呈棕色泡沫状物的粗产物。通过快速色谱(2:3 乙酸乙酯/己烷)使残余物纯化以得到2.2g(73％)呈黄色泡沫状物的二磺酰化物质(化合物10)。
步骤2：吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(甲基磺酰胺基)-嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯(11)
将化合物10(2.2g，3.4mmol)溶解于甲醇(5mL)和THF(5mL)中。添加1.0MK2CO3(10mL)，且在40℃下将反应混合物加热96小时。用2N HCl将反应混合物酸化至pH值为3，且用乙酸乙酯进行萃取。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩以得到1.68g(86％)呈米色泡沫状物的产物(化合物11)。粗制物质无需纯化即可使用。
步骤3：吡咯烷-1-甲酸(S)-4-(3-叔丁氧基-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-(丙-2-炔基)甲基-磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-氧代丙基)苯基酯(12)
将化合物11(0.20g，0.35mmol)、K2CO3(0.073g，0.53mmol)和丙酮(3mL)置放入密封管中，且在室温下搅拌1小时。添加炔丙基氯(0.26mL，3.5mmol)，且将反应物密封，并加热回流48小时。将反应混合物在真空中浓缩，且将残余物溶解于乙酸乙酯中。用水和盐水洗涤溶液。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩以得到呈桔黄色薄膜的粗产物。通过快速色谱(1:1 乙酸乙酯/己烷)使残余物纯化以得到0.11g(51％)呈透明薄膜的化合物12。
MS(m/z)615，(M+H)+。
步骤4：(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-(丙-2-炔基)甲基磺酰胺基)-嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸(13)
将甲酸(2mL)添加到叔丁基酯(100mg)中，且在40℃下搅拌，过夜。在减压下将甲酸去除以得到定量产率的化合物13，且其特征如下所示：
1H-NMR，CDCl3，(δ)：8.13(s，1H)，7.97(s，1H)，7.26-7.24(d，2H)，7.02-6.99(d，2H)，4.59-4.44(m，1H)，4.04-3.79(m，1H)，3.64-3.53(m，6H)，3.45-3.39(t，3H)，3.08-2.84(m，4H)，2.84-1.89(m，4H)1.22-1.17(t，6H)；
13C-NMR，CDCl3，(δ)：165.3，155.3，151.8，136.1，131.5，123.0，76.1，76.0，56.8，49.9，48.1，43.8，41.2，40.2，37.4，26.7，25.9，13.3；和
MS：M(+H)559。
实例5
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-甲基甲基磺酰胺基)-嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸(14)的制备
遵循实例4的程序且采用硫酸二甲酯代替炔丙基氯来制备标题化合物，且其特征如下所示：
1H-NMR，CDCl3，(δ)：8.14(s，1H)，7.83(s，1H)，7.26-7.23(d，2H)，7.01-6.98(d，2H)，4.84-4.81(m，1H)，3.60-3.53(m，6H)，3.43-3.38(m，3H)，3.09(s，3H)，2.94(s，3H)，2.00-1.91(m，4H)，1.22-1.18(t，6H)；
13C-NMR，CDCl3，(δ)：175.5，1654，160.7，156.3，155.3，151.8，149.1，136.0，131.6，123.0，113.4，56.9，43.9，38.8，38.1，37.4，26.7，25.8，13.2；和MS：M(+H)535。
实例A
α4β1整合素粘附分析：金科特(Jurkat)TM细胞与人血浆纤维结合蛋白的粘附
程序
在4℃下用浓度为10μg/mL的人纤维结合蛋白(吉拜克(Gibco)/BRL，目录号33016-023)对96孔板(科斯达(Costar)3590EIA板)进行涂布，过夜。接着用牛血清白蛋白(BSA；0.3％)在生理食盐水中的溶液对所述板进行阻断处理。根据制造厂说明书用钙黄绿素AM对金科特TM细胞(维持在对数期生长中)进行标记，且以2×106个细胞/毫升的浓度悬浮于Hepes/生理食盐水/BSA中。接着在室温下将所述细胞暴露于测试化合物和对照化合物30分钟，随后转移到经纤维结合蛋白涂布的板的各个孔中。在37℃下允许粘附发生35分钟。接着通过轻柔抽吸和移液用新鲜生理食盐水对孔进行洗涤。使用荧光板读数仪以EX485/EM530对与剩余粘附细胞相结合的荧光进行定量。
细胞培养物是通过首先在第一天使生长停滞期金科特TM细胞以1:10分裂且在第二天以1:2分裂而制备以在第三天执行分析。将在第一天以1:10分裂的细胞在第三天以1:4进行分裂以执行第4天分析。
分析板是通过首先制备吉拜克/BRL人纤维结合蛋白(目录号33016-023)于PBS++中浓度为10μg/mL的工作溶液(working solution)而准备。
接着在室温下以50μL/孔对科斯达3590 EIA板进行涂布，历时2小时(但也可将其置于4℃下过夜)。最后，对板进行抽吸，且在室温下以Hepes/生理食盐水缓冲液(100μL/孔)阻断1小时，继而用150μL PBS++洗涤三次。
化合物稀释是通过如下制备化合物的1:3连续稀释液而达成。对于各板(4种化合物/板)来说，将600μL添加到4个放于微试管(Titertube)架中的伯乐(Bio-Rad)微试管中。使用此项技术中熟知的方法将足够的化合物添加到各合适的管中以得到2倍浓缩物。使用猎鹰弹性板(Falcon Flexiplate)将100μL Hepes/生理食盐水缓冲液或人血清添加于B行到G行中。将设定为180μL的多通道移液器与所述移液器上以等间距隔开的四个吸头一起使用。将各组4管混合5次，且将180μL 2×化合物转移到B行的各化合物稀释液的第一列，使A行为空。将180μL添加到A行的其它孔中。顺着板通过将50μL转移到下一个稀释液中且混合5次(每次在混合后更换吸头)而进行连续稀释。在F行停止稀释。G行无化合物存在。
21/6抗体于HEPES/生理食盐水缓冲液或人血清中的20μg/ml溶液为阳性对照，且将其搁置于试剂槽中以添加到细胞悬浮液板中。
细胞染色是通过首先以离心分离(1100rpm，历时5分钟)将对数期金科特TM细胞收集于50mL管中而达成。使细胞再悬浮于50mL PBS++中，旋转，且使其再悬浮于20mL PBS++中。通过在室温下添加20μL钙黄绿素AM将细胞染色30分钟。以HEPES/生理食盐水缓冲液使体积达到50mL，且对细胞进行计数，旋转，且使其再悬浮于HEPES/生理食盐水缓冲液或人血清中至浓度为2×106个细胞/毫升。
使用以下程序培养化合物。在新弹性板(flexiplate)中，将65μL经染色细胞添加到B行至H行中。接着按照板配置将65μL2×化合物添加到适当的行中且混合3次。将65μL2×-21/6抗体添加到H行中，且混合3次。最后，在室温下将板培养30分钟。
在以下处理程序之后，使用荧光板读数仪以EX 485/EM530测量纤维结合蛋白粘附。在培养后，将细胞混合3次，且将100μL转移到经纤维结合蛋白涂布的板中，并在37℃下培养约35分钟。通过顺着孔的侧面轻柔地移入100μL RT PBS++且将板旋转90度来进行抽吸而逐行地洗涤各板。重复这个程序以进行共3次的洗涤。在通过顺着孔的侧面移入而洗涤后，将100μL装入各孔中。
在人血清存在的状况下和在人血清不存在的状况下计算各化合物的IC50值。IC50为生长或活性受到50％抑制时的浓度。当根据纤维结合蛋白分析进行测试时皆发现本文所揭示的化合物具有小于0.1μM的IC50。
实例B
测定候选化合物与α4β1结合的活体外饱和分析
将对数生长金科特TM细胞洗涤且使其再悬浮于含有20μg/mL 15/7抗体的正常动物血浆中(亚德诺科等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，(1995)270(48)：28740)。
将金科特TM细胞两倍稀释于含有已知候选化合物量(为在66μM至0.01μM范围内变化的不同浓度，将标准12点连续稀释用于标准曲线)的正常血浆样本中，或两倍稀释于从经过候选化合物处理的动物的周边血获得的血浆样本中。
接着在室温下将细胞培养30分钟，用含有2％胎牛血清以及氯化钙和氯化镁(分析介质，各为1mM)的磷酸盐缓冲生理食盐水(“PBS”)洗涤两次以去除未结合15/7抗体。
接着将细胞以1∶200暴露于已通过与来自正研究的动物物种的5％血清共培养而被吸附掉任何非特异性交叉反应性的藻红素共轭山羊F(ab′)2抗小鼠IgG Fc(美国缅因州威斯布鲁克免疫技术公司(Immunotech，Westbroo k，ME))，且在4℃下于暗处培养30分钟。
用分析介质将细胞洗涤两次，且使其再悬浮于相同分析介质中。接着如亚德诺科等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，1995，270：28740中所述通过标准荧光活化细胞分选仪(“FACS”)分析对其进行分析。
接着将数据绘制为荧光与剂量的关系图，例如以正常剂量-反应方式。导致曲线的上平直部分的剂量级表示在活体内模型中获得功效所需的剂量级。
α4 依赖活体外效能分析的结果显示当在所述分析中进行测试时本发明的某些化合物显示抑制α4β1整合素的EC50小于20μg/mL。
实例C
测定化合物与VLA-4结合的活体外分析
活体外分析是用来评定候选化合物与α4β1整合素的结合。在这个分析中结合的化合物可通过常规分析(例如，竞争性分析)而用于评定生物样本中的VCAM-1量。所述分析对低至约1μM的IC50值敏感。
α4β1整合素的活性是通过可溶性VCAM-1与作为表达高含量的α4β1整合素的人T细胞株的金科特TM细胞(例如，美国典型微生物保藏数据库(American Type CultureCollection)，第TIB 152号、第TIB 153号和第CRL 8163号)相互作用而进行测量。VCAM-1以α4β1整合素依赖性方式与细胞表面相互作用(亚德诺科等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，1995，270：28740)。
重组可溶性VCAM-1表现为在N末端含有VCAM-1的7个胞外域且在C末端含有人IgG1重链恒定区的嵌合性融合蛋白。VCAM-1融合蛋白是通过亚德诺科(见上)所述的方式制备且纯化。
如由亚德诺科(见上)所述，使金科特TM细胞在补充有10％胎牛血清、青霉素、链霉素和谷氨酰胺的RPMI 1640中生长。
将金科特TM细胞与1.5mM MnCl和5μg/mL 15/7抗体一起在冰上培养30分钟。Mn+2活化受体以增强配位体结合，且15/7为单株抗体，其识别α4β1整合素的活化/配位体占据构象且将分子锁定于所述构象中，因而使VCAM-1/α4β1整合素相互作用稳定。亚德诺科等人，见上。其它研究者已制备类似于15/7抗体的抗体(卢克(Luque)等人，1996，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271：11067)且可用于所述分析中。
接着将细胞与候选化合物(为在66μM至0.01μM范围内变化的不同浓度，使用标准5点连续稀释)在室温下培养30分钟。接着将15μL可溶性重组VCAM-1融合蛋白添加到金科特TM细胞中且于冰上培养30分钟。亚德诺科等人，见上。
接着将细胞洗涤两次，且使其以1:200再悬浮于PE共轭山羊F(ab′)2抗小鼠IgG Fc(美国缅因州威斯布鲁克免疫技术公司(Immunotech，Westbrook，Me.))中，并在暗处于冰上培养30分钟。将细胞洗涤两次，且如亚德诺科等人(见上)所述通过标准荧光活化细胞分选仪(“FACS”)分析进行分析。
IC50小于约15μM的化合物具有对α4β1的结合亲和力。
在上述实例中制备的化合物当在所述分析中测试时具有或预期具有15μM或更小的IC50(或预期在活体内具有活性)。这个分析中的某一化合物具有小于5μM的IC50。
实例D
测定生物可用性的盒式给药和血清分析
口服生物可用性是通过用一盒(也就是说，每一给药溶液为6种化合物的混合物)对大鼠进行给药而筛选。所述盒包括总剂量为10mg/kg的5种测试物品和1种标准化合物。以等摩尔1N NaOH使各化合物/测试物品转化为钠盐，且以2mg/mL溶解于水中。所述盒是通过将等体积的各6种溶液混合而制备。将盒式给药溶液充分混合且接着将pH值调节至7.5-9。在研究前一天制备给药溶液，且在室温下搅拌，过夜。
在所述筛选中，使用来自查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)的6-8周龄雄性远交群(Sprague Dawley，SD)大鼠。大鼠被隔离(quarantine)至少一天，且使其连续进食并饮水。在投予盒的前一夜，大鼠被禁食大约16小时。
向4只SD大鼠分配给各盒。将给药溶液的单剂量经口投予各大鼠。记录给药体积(5mL/kg)和时间，且在给药后2小时让大鼠进食。
在以下时点经由心脏穿刺收集血样：4h、8h和12h。在10-20秒钟内用CO2气体使大鼠麻醉，其后立即收集血液。在收集12小时样本后，经由CO2窒息和随后的颈椎脱臼对大鼠实施无痛致死术。
在对血样进行处理之前将其于低温(4℃)下保存在肝素化的微量采血管中。使血样离心(10,000rpm，5分钟)，且取出血浆样本并存储于-20℃冷冻箱中直到分析药物含量。将以下方案用于直接血浆沉淀来分析血浆中的药物含量。
活体内血浆样本是通过按次序添加100μL测试血浆、150μl甲醇且继而使其旋涡10-20秒钟而于1.5mL96孔板中制备。添加150μL于乙腈中的0.05ng/μL的内标，且使其旋涡30秒钟。
标准曲线样本是通过按次序添加100μL对照小鼠血浆，继而添加150μL甲醇且使其旋涡10-20秒钟而于1.5mL96孔板中制备。添加150μL于乙腈中的0.05ng/μL的内标，且使其旋涡30秒钟。通过在50％甲醇中的0-200ng(10种浓度)所关注化合物对样本进行强化(spiked)以获得范围为0.5ng/mL至2,000ng/mL的标准曲线。同样，使样本旋涡30秒钟。
接着在艾本德微量离心机(Eppendorf microfuge)中将样本以3,000rpm旋转20-30分钟，其后将80-90％的上清液转移入干净96孔板中。然后使有机溶剂蒸发直到样本干燥(在N2、40℃下/30-60分钟，吹氮浓缩仪(ZymarkTurbovap))。
接着将残余物溶解于200-600L移动相(50％ CH3OH/0.1％TFA)中。然后使用PE-Sciex API-3000三重四极质谱仪(SN0749707)、帕金埃尔默(Perkin-Elmer)、200系列自动进样器和日本岛津(Shimadzu)10A泵进行LC/MS/MS分析。通过PE-Sciex分析仪(版本：1.1)进行数据收集且使用PE-Sciex分析仪(版本：1.1)完成数据分析与定量化。将5-50μl体积样本注射于使用25％ CH3OH、0.1％ TFA-100％ CH3OH、0.1％ TFA的移动相的逆相热海波希尔(ThermoHypersil)DASH-18柱(吉斯通(Keystone)2.0×20mm，5μm，PN：8823025-701)上。运行时间为约8分钟，流动速率为约300μL/min。
曲线下面积(AUC)是使用线性梯形法则从t＝0到最终血浆浓缩物取样时间tx进行计算(参见，基础药物代谢动力学手册(Handbook of Basic Pharmacokinetics)，沃尔夫冈(Wolfgang)A.瑞驰希尔(Ritschel)与格雷戈里(Gregory)L卡尔恩斯(Kearns)，第5版，1999)。
AUC0-tx＝∑0-n((Cn+Cn+1)/2))·(tn+1-tn)[单位：(μg/mL)h]
在盒式给药实例的状况下，在血管外给药后4h、8h和12h时取样，AUC是从t＝0h到t＝12h进行计算。
上面实例1-5中的各化合物当在这个分析中测试时且当以10mg/kg剂量使投予标准化时提供至少为5μgh/mL的AUC。
实例E
哮喘模型(E1)
由α4β1整合素介导的发炎性病症包括(例如)嗜酸性球侵入、气管过度反应性和随慢性哮喘出现的阻塞。下面描述哮喘的动物模型，所述模型是用来研究本发明的化合物用于治疗哮喘的活体内效果。
大鼠哮喘模型(E2)
遵循由查普曼(Chapman)等人，美国呼吸和重症护理医学杂志(Am J.Resp.Crit.Care Med.)，153-4，A219(1996)和查普曼等人，美国呼吸和重症护理医学杂志(Am.J.Resp.Crit.Care Med.)155：4，A881(1997)所述的程序，两篇文献的全文皆以引用的方式并入本文中。
将卵白蛋白(OA；10μg/mL)与氢氧化铝(10mg/mL)混合且在第0天注射(腹膜内)入棕色挪威鼠中。在第7天和第14天重复注射OA与佐剂。在第21天，将致敏动物束缚于塑料管中且以仅鼻部暴露系统的方式暴露(60分钟)于OA(10mg/kg)气溶胶中。72小时后用戊巴比妥(pentobarbital，250mg/kg，腹膜内)将动物处死。使用3等分量(4mL)汉克斯溶液(HBSS×10,100ml；EDTA100mM，100mL；HEPES1M，25mL；用H2O补充至1L)经由气管插管对肺进行灌洗；集中所回收的细胞，且通过添加汉克斯溶液将所回收流体的总体积调整至12mL。对总细胞进行计数(希森美康(Sysmex)微细胞计数器F-500，日本东亚医用电子株式会社(TOA Medical ElectronicsOtd.，Japan))，且通过将回收的流体稀释(到大约106个细胞/毫升)且将等分试样(100μl)移入离心机(英国珊顿自动细胞离心涂片机(Cytospin，Shandon，U.K.))中而制成涂片。将涂片风干，使用坚牢绿于甲醇中的溶液(2mg/mL)固定5秒种，并用曙红G(5秒钟)和噻嗪(5分钟)(英国布朗蒂夫奎科(Diff-Quick，Browne Ltd.U.K.))进行染色以便区分嗜酸性细胞、嗜中性细胞、巨噬细胞和淋巴细胞。每涂片的共500个细胞是通过油浸下的光学显微镜检法(×100)而计数。可将本发明的化合物调配入0.5％羧甲基纤维素和2％吐温(Tween)80悬浮液中，且经口将其投予已对过敏原，卵白蛋白敏感化的大鼠。抑制主动致敏的棕色挪威鼠气管中过敏原诱导的白血球积聚的化合物被认为在所述模型中具有活性。
小鼠哮喘模型(E3)
也遵循昆(Kung)等人，美国呼吸系统细胞和分子生物学杂志(Am J.Respir.Cell Mol.Biol.)，13：360-365，(1995)和施耐德Schneider等人，(1999)美国呼吸系统细胞和分子生物学杂志(Am J.Respi r.Cell Mol.Biol.)20：448-457(1999)所述的程序在急性肺部炎症小鼠模型中对化合物进行评估，所述文献的全文各自以引用的方式并入本文中。在第一天将雌性黑色/6只小鼠(8-12周龄)通过腹膜内注射0.2mL含有20μg卵白蛋白(等级4，西格玛(Sigma))和2mg注射性明矾(皮尔斯(Pierce))的卵白蛋白/明矾混合物而致敏。在第14天施以加强注射。在第28天和第29天通过雾化1％卵白蛋白(在0.9％生理食盐水中)激发小鼠，历时20分钟。在首次激发后48小时(在第30天)，对小鼠实施无痛致死术，且收集支气管肺泡灌洗样本(3mL)。通过FACS/FITC染色方法对嗜酸性细胞进行定量化。可将本发明的化合物调配入0.5％羧甲基纤维素和2％吐温(Tween)80悬浮液中，且经口将其投予已对过敏原，卵白蛋白敏感化的小鼠。抑制主动致敏的C57BL/6小鼠气管中过敏原诱导的白血球积聚的化合物被认为在所述模型中具有活性。
绵羊哮喘模型(E4)
这个模型采用亚伯拉罕(Abraham)等人，临床检查杂志(J.Clin，Invest)，93：776-787(1994)和亚伯拉罕(Abraham)等人，美国呼吸和重症监护医学杂志(Am J.Respir.Crit.Care Med.)，156：696-703(1997)所述的程序，所述文献的全文皆以引用的方式并入本文中。本发明的化合物是通过经静脉内(生理食盐水溶液)、经口(2％吐温(Tween)80，0.5％羧甲基纤维素)和以气溶胶投予对猪蛔虫(Ascaris suum)抗原过敏的绵羊而进行评估。降低早期抗原诱导的支气管反应和/或阻断晚期气管反应(例如，具有防御抗原诱导的晚期反应和气管过度反应(“AHR”)的保护作用)的化合物被认为在所述模型中具有活性。
将显示对吸入的猪蛔虫抗原产生早期和晚期支气管反应的过敏性绵羊用来研究候选化合物的气管作用。在用2％利多卡因(lidocaine)使鼻孔局部麻醉后，经鼻孔将气囊导管向前伸入食管下段中。接着用有囊气管导管以可挠性光纤支气管镜作为引导穿过另一鼻孔来培养动物。
根据亚伯拉罕(Abraham)(1994)估算胸膜腔内压。气溶胶(参见下面的调配物)是使用抛弃式医用喷雾器而产生，所述喷雾器提供如通过安徒生(Andersen)级联冲击器测定的质量中位数气体动力学直径(mass median aerodynamic diameter)为3.2μm的气溶胶。将喷雾器连接到由电磁阀和压缩空气(20psi)源组成的剂量计系统。将喷雾器的输出导入塑料T型接头中，所述接头的一端连接到活塞式呼吸器的吸入口。在呼吸器的吸入循环开始时将电磁阀启动1秒钟。以500mL的VT以及20次呼吸/分钟的速率输送气溶胶。使用仅0.5％碳酸氢钠溶液作为对照。
为评估支气管反应，根据亚伯拉罕(Abraham)(1994)产生碳酰胆碱(carbachol)的累积浓度-反应曲线。在处理开始前和其后以及在抗原激发后24小时进行支气管活组织检查。支气管活组织检查是根据亚伯拉罕(Abraham)(1994)进行。
也可根据亚伯拉罕(Abraham)(1994)进行肺泡巨噬细胞的活体外粘附研究，且可计算粘附细胞的百分比。
气溶胶调配物
使用以下程序制备化合物于0.5％碳酸氢钠/生理食盐水(w/v)中浓度为30.0毫克/毫升的溶液：
A.0.5％碳酸氢钠/生理食盐水储备溶液的制备：100.0毫升
 
成份 克/100.0毫升 终浓度
碳酸氢钠 0.5克 0.5％
生理食盐水 加足量到100.0毫升 加足量到100％
程序：
1.将0.5克碳酸氢钠添加入100毫升量瓶中。
2.添加大约90.0毫升生理食盐水且经超声波处理直到溶解。
3.添加足量生理食盐水直到100.0毫升且完全混合。
B.30.0毫克/毫升化合物的制备：10.0毫升
 
成份 克/10.0毫升 终浓度
化合物 0.300克 30.0毫克/毫升
0.5％碳酸氢钠/生理食盐水储备溶液         加足量到10.0毫升 加足量到100％
程序：
1.将0.300克化合物添加入10.0毫升量瓶中。
2.添加大约9.7毫升0.5％碳酸氢钠/生理食盐水储备溶液。
3.进行超声波处理直到化合物完全溶解。
4.添加足量0.5％碳酸氢钠/生理食盐水储备溶液直到10.0毫升且完全混合。
实例F
大鼠中佐剂诱导的关节炎
佐剂诱导的关节炎(“AIA”)为一种可用于研究类风湿性关节炎(“RA”)的动物模型，其是通过将结核分枝杆菌(M.tuberculosis)注射入刘易斯(Lewis)大鼠的尾基部而诱导。在注射后第10天与第15天之间，动物显现出严重、进行性关节炎。
通常，测试化合物在大鼠中改变由佐剂诱导的水肿引起的后爪肿胀以及骨损伤的能力。为对由AIA引起的后爪肿胀的抑制作用进行定量化，已定义两炎症阶段：(1)原发性和继发性经注射后爪，和(2)继发性未注射后爪，后者通常在受注射爪中从诱导炎症约11天后开始显现出来。后一类型炎症的减弱是免疫抑制活性的迹象。参考常(Chang)，关节炎和风湿病(Arth.Rheum.)，20，1135-1141(1977)。
使用RA的动物模型(诸如，AIA)使我们能够研究在疾病的早期阶段所涉及的细胞事件。在佐剂关节炎的早期发展阶段期间，巨噬细胞和淋巴细胞上的CD44表达被上调，而在疾病的后期发展阶段，LFA 1表达被上调。认识到在佐剂关节炎的最早阶段粘附分子与内皮之间的相互作用可导致用于治疗RA的方法的重大进步。
实例G
大鼠中胶原蛋白诱导的关节炎
目的：测定通过每日两次经口给药(第(-1)-20天)而投予的本发明的典型化合物(“化合物A”)抑制大鼠中在逐渐发展成II型胶原蛋白关节炎期间出现的炎症、软骨毁坏和骨骼再吸收的功效。
动物：54只雌性路易斯(Lewis)大鼠(哈伦(Harlan))，抵达时重125-150g。(在第10、11、12天用胶原蛋白对6组中的50只(10只一组)进行注射以得到50只反应者)。使以4-5只/笼居住的动物(10只/组用于关节炎模型，4只/组用作正常对照)适应环境4-8天。经口以3mg/kg、10mg/kg和30mg/kg每日两次给动物用药。
物质：媒剂中的试剂或药物、II型胶原蛋白、弗氏不完全佐剂(Freund′s incompleteadjuvant)、甲胺喋呤(methotrexat)(西格玛(Sigma))、化合物A
一般研究设计
在第-1天开始给药。
用异氟烷使适应环境的动物麻醉，且给予胶原蛋白注射(D0)。在第6天再次将其麻醉以进行第二次胶原蛋白注射。胶原蛋白是通过制成4mg/mL于0.01 N乙酸中的溶液而制备。通过人工混合将等体积的胶原蛋白和弗氏不完全佐剂乳化直到这种物质的小球当置于水中时保持其形态为止。各动物接受每次涂于背部的3个位点上的300μL混合物。
在第9天用测径规对正常(疾病前)右踝关节和左踝关节进行测量。在第10-12天，出现关节炎的发作。
在研究的第(-)1、6、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20天称大鼠的重量，且从第9天开始每天用测径规对踝进行测量。在第20天获得最终体重。在最终体重测量后，将动物麻醉以收集末期血浆，且接着对其实施无痛致死术。
将两后爪以及膝部去除。称后爪的重量，置放(与膝部一起)入福尔马林中，且接着处理以进行显微观察。
关节的处理
在固定剂中1-2天且接着在脱钙剂中4-5天后，将踝关节沿纵向切成两半，将膝关节沿额面切成两半，加以处理，包埋，切片且用甲苯胺蓝染色。
相较于未接受治疗的对照组来说，测试剂量(3.0mg/kg、10.0mg/kg和30.0mg/kg)的化合物A显示对踝炎症以及踝组织病理的显著抑制。
实例H
HLA-B27大鼠中结肠炎的诱导
本发明的化合物使结肠炎好转的功效在HLA-B27转殖基因大鼠中进行测定。HLA-B27转殖基因大鼠已曾用作发炎性肠道疾病的动物模型，其模仿人类中的克罗恩氏病。所述大鼠过度表达人MHC I类HLA-B27重链和β-2微球蛋白，其诱导包括结肠炎症的多种自体免疫疾病。
本发明的化合物A使结肠炎消退的治疗效果在HLA-B27转殖基因大鼠中进行评估。以100mg/kg本发明的化合物A每日两次经皮下给患病大鼠用药，历时16天。给予100mg/kg本发明的化合物A的动物样本显示结肠炎的临床和组织学消退且模仿类似于用抗α4抗体GG5/3处理的阳性对照组的功效。
疾病活动指数(DAI)记分显示相较于给予媒剂的大鼠来说，给予100mg/kg本发明的化合物A和10mg/kg GG5/3(阳性对照)的大鼠的总记分提高。给予化合物A和GG5/3的大鼠的粪便稠度和FOB记分在统计学上不同于媒剂组。
结肠炎的诱导
从塔柯尼克(Taconic)定购20只HLA-B27(6-9周龄)转殖基因大鼠。使大鼠适应动物房(animal facility)的环境10周。每周一次将不同笼中的动物垫草混乱以控制“脏”环境细菌群。
治疗
基于重量和DAI记分(FC≥3，FOB≥2)将大鼠选入且随机分入四组(n＝5)中。通过化合物A 100mg/kg(pH2.8)每日两次经皮下给实验组用药，历时16天，且于药效谷底期(trough)时终止。对照组包括经媒剂处理(pH3.2)的组以及在第0天、第3天和第6天以10mg/kg(5mL/kg)经皮给药且在第8天于谷底期时终止的GG5/3(小鼠抗大鼠α-4整合素抗体)阳性对照组(表H1)。每5天配制化合物A和媒剂处理液。
表H1 IBD的研究设计
 
处理 数目 剂量(毫克/公斤/天)   剂量体积(毫升/公斤)    途径 频率 调配物
媒剂 5 0 0 SC 每天两次 0.9％生理食盐水，用10NNaOH调节至pH3.3        
化合物A      5 100 5 SC 每天两次 0.9％生理食盐水，用10NNaOH调节至pH2.8        
GG5/3 5 30 5 SC 第0天、第3天和第6天  1×PBS
SC＝皮下
终点读出资料
每周进行四次疾病活动指数记分、粪便稠度检查以及粪便潜血检查以得到一生临床记分。研究的主要读出资料为盲肠、近端结肠、中间结肠和远程结肠的组织病理学分析。应用IBD记分系统(表H2)。
表H2 IBD记分系统
Figure A200780006583D00641
相较于媒剂组来说，给予化合物A和GG5/3(阳性对照)的大鼠的疾病活动指数(DAI)记分较低。化合物A和GG5/3(阳性对照)用药组的粪便稠度和粪便潜血检查AUC记分也在统计学上与媒剂组不同。
尽管已对本发明的一些实施例进行了阐明和描述，但应了解在不脱离本发明的精神和范畴的情况下可在其中作出各种更改。

Claims (38)

1.一种式I的化合物：
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
或其医药学上可接受的盐或酯。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为C1-C2烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为甲基或三氟甲基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为甲基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为C1-C4烷基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为C1-C3烷基。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中R2为甲基或乙基。
8.根据权利要求6所述的化合物，其中R2为异丙基。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为C3-C6环烷基。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中R2为环戊基。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为C2-C4烯基。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中R2为烯丙基。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为C2-C4炔基。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中R2为炔丙基。
15.一种式II的化合物：
Figure A200780006583C00031
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；或其医药学上可接受的盐或酯。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中R1为C1-C2烷基。
17.根据权利要求15所述的化合物，其中R1为甲基或三氟甲基。
18.根据权利要求15所述的化合物，其中R1为甲基。
19.根据权利要求15所述的化合物，其中R2为C1-C4烷基。
20.根据权利要求15所述的化合物，其中R2为C1-C3烷基。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中R2为甲基或乙基。
22.根据权利要求20所述的化合物，其中R2为异丙基。
23.根据权利要求16所述的化合物，其中R2为C3-C6环烷基。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中R2为环戊基。
25.根据权利要求15所述的化合物，其中R2为C2-C4烯基。
26.根据权利要求25所述的化合物，其中R2为烯丙基。
27.根据权利要求15所述的化合物，其中R2为C2-C4炔基。
28.根据权利要求27所述的化合物，其中R2为炔丙基。
29.一种化合物，其选自以下化合物组成的群组：
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基-1，1，1-三氟甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-异丙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(5-(N-环戊基甲基磺酰胺基)-2-(二乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-甲基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-(丙-2-炔基)甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基甲基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(5-(N-烯丙基甲基磺酰胺基)-2-(二乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基丁基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)-丙酸；
(S)-2-(5-(3-氯-N-乙基丙基磺酰胺基)-2-(二乙氨基)-嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(5-(3-氯-N-甲基丙基-磺酰胺基)-2-(二乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基-3，3，3-三氟丙基磺酰胺基)-嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)丙酸；
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基丙基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)苯基)-丙酸；和
(S)-2-(2-(二乙氨基)-5-(N-乙基-2-甲基丙基磺酰胺基)嘧啶-4-基氨基)-3-(4-(吡咯烷-1-羰氧基)-苯基)丙酸；
以及其医药学上可接受的盐或酯。
30.一种医药组合物，其包含医药学上可接受的载剂和治疗有效量的一种或多种根据权利要求1所述的化合物。
31.一种用于治疗患者至少部分由α4整合素所介导的疾病的方法，所述方法包含投予根据权利要求30所述的医药组合物。
32.一种用于减少和/或预防哺乳动物患者的疾病的炎性成分的方法，所述方法包含将根据权利要求30所述的医药组合物投予给所述哺乳动物。
33.一种用于减轻和/或预防哺乳动物患者的自体免疫反应的方法，所述方法包含将根据权利要求30所述的医药组合物投予给所述哺乳动物。
34.根据权利要求31所述的方法，其中所述疾病选自哮喘、多发性硬化症和发炎性肠道疾病。
35.根据权利要求31所述的方法，其中所述疾病为克罗恩氏病(Crohn′s disease)。
36.根据权利要求31所述的方法，其中所述疾病为类风湿性关节炎。
37.一种用于制备式I的化合物或其医药学上可接受的盐或酯的方法
Figure A200780006583C00051
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
所述方法包含：
a)使式III的化合物
Figure A200780006583C00052
其中Pg为羧基保护基；
与C1-C4醛或酮、C2-C4烯基醛或酮、C2-C4炔基醛或酮、C3-C6环烷基酮和苯甲醛在还原性胺化条件下接触以得到式IV的化合物：
b)使化合物IV与其中Z为卤基的式R1SO2Z的磺酰基卤化物在一定条件下接触以形成式V的化合物：
和
c)将所述羧基保护基去除以得到式I的化合物。
38.一种用于制备式I的化合物或其医药学上可接受的盐或酯的方法：
Figure A200780006583C00062
其中：
R1选自C1-C4烷基和C1-C4卤烷基组成的群组；且
R2选自C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和C3-C6环烷基组成的群组；
所述方法包含：
a)使式VI的化合物：
其中Pg为羧基保护基；
与过量R′SO2X接触以得到式VII的化合物：
Figure A200780006583C00071
b)从所述式VII的化合物选择性地去除单个-SO2R′基团以得到式VIII的化合物：
Figure A200780006583C00072
c)使化合物VIII与其中X为卤基的式R2-X的烷化剂接触，或当R2为甲基时与硫酸二甲酯接触以形成式IX的化合物：
Figure A200780006583C00073
和
d)将所述羧基保护基去除以得到式I的化合物。
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