EA015388B1 - ПИРИМИДИНИЛАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ВКЛЮЧАЮЩАЯ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО α4-ИНТЕГРИНАМИ - Google Patents

ПИРИМИДИНИЛАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ВКЛЮЧАЮЩАЯ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО α4-ИНТЕГРИНАМИ Download PDF

Info

Publication number
EA015388B1
EA015388B1 EA200800975A EA200800975A EA015388B1 EA 015388 B1 EA015388 B1 EA 015388B1 EA 200800975 A EA200800975 A EA 200800975A EA 200800975 A EA200800975 A EA 200800975A EA 015388 B1 EA015388 B1 EA 015388B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
ethyl
compounds
disease
diethylamino
amino
Prior art date
Application number
EA200800975A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200800975A1 (ru
Inventor
Кристофер Майкл Сэмкоу
Ин-цзы Сюй
Фрэнк Стэпэнбэк
Дженифер Ли Смит
Кассандра Инес Росситер
Джури И. Фукуда
Андрей В. Конрэди
Original Assignee
Элан Фамэсьютикэлс, Инк.
Виет
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Элан Фамэсьютикэлс, Инк., Виет filed Critical Элан Фамэсьютикэлс, Инк.
Publication of EA200800975A1 publication Critical patent/EA200800975A1/ru
Publication of EA015388B1 publication Critical patent/EA015388B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/50—Three nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые связывают VLA-4. Некоторые из этих соединений ингибируют также адгезию лейкоцитов, в частности адгезию лейкоцитов, опосредованную VLA-4. Такие соединения можно использовать для лечения воспалительных заболеваний у человека и животных, опосредованных α4-интегринами, таких как астма, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, вызванная СПИДом деменция, диабет, воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит, последствия трансплантации тканей, метастазы опухолей и миокардиальная ишемия. Соединения могут назначаться также для лечения воспалительных заболеваний мозга, например рассеянного склероза (формулы I-III).

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, ингибирующим адгезию лейкоцитов, в частности адгезию лейкоцитов, опосредованную а4-интегринами, где а4-интегрин предпочтительно представляет собой УЪА-4. Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим вышеуказанные соединения, а также к способам лечения, например, воспалительных заболеваний, в которых используются соединения или фармацевтические композиции настоящего изобретения.
Сведения о предшествующем уровне техники
Следующие публикации указаны в настоящем патенте надстрочным индексом.
1. Нет1ег апб Такаба, Еигореап Ра!еп! Аррйсабоп РиЬ11са!юп Νο. 330506, опубликована 30 августа, 1989.
2. ЕНсек, е! а1., Се11, 60:577, 584 (1990).
3. Зртшдет, №Щ.1ге. 346:425, 434 (1990).
4. ОкЬогп, Се11, 62:3, 6 (1990).
5. Уеббег, е! а1., Зитдету, 106:509 (1989).
6. Рте!о1аш, е! а1., 1. Ехр. Меб., 180:795 (1994).
7. ЛЬтайат, е! а1., 1. С1т. 1пуек!., 93:776 (1994).
8. МиШдап, е! а1., 1. 1ттипо1оду, 150:2407 (1993).
9. СуЬи1кку, е! а1., 8с1епсе, 251:788 (1991).
10. Ъ1, е! а1., Апепокс1ег. ТйтотЬ., 13:197 (1993).
11. ЗаккеуШе, е! а1., Ат. 1. Ра!й., 144:27 (1994).
12. Уапд, е! а1., Ргос. №11. Асаб. 8с1епсе (И8А), 90: 10494 (1993).
13. Виг1бу, е! а1., О1аЬе!ек, 43:529 (1994).
14. Вагоп, е! а1., 1. С1ш. 1пуек!, 93:1700 (1994).
15. Натапп, е! а1., 1. 1ттипо1оду, 152:3238 (1994).
16. Уебпоск, е! а1., №а!иге, 356:63 (1992).
17. Вагоп, е! а1., 1. Ехр. Меб., 177:57 (1993).
18. уап ПтШегНащкеп, е! а1., 1. 1ттипо1оду, 147:4207 (1991).
19. уап ПтШегНащкеп, е! а1., Аппа1к. Вйеитабс Όίκ., 52:672 (1993).
20. Ейсез, е! а1., 1. С11п. 1пуек!, 93:405 (1994).
21. Рокйдо, е! а1., 1. Сйп. 1пуек!., 89:1445 (1991).
22. Раи1, е! а1., Тгапкр1. Ргосееб., 25:813 (1993).
23. Окатйата, е! а1., Сап. Век., 54:3233 (1994).
24. Раауопеп, е! а1., 1п!. 1. Сап., 58:298 (1994).
25. 8сйабепбот1, е! а1., 1. Ра!й., 170:429 (1993).
26. Вао, е! а1., Όίίί., 52:239 (1993).
27. Ъашт, е! а1., Вййкй 1. Сапсег, 68:862 (1993).
28. Ка^адисЫ, е! а1., 1арапеке 1. Сапсег Век., 83:1304 (1992).
29. Кошаб1, е! а1., РСТ/и800/01686, Й1еб, -Гагату 21, 2000.
Все вышеуказанные публикации включены в данный текст описания по ссылке по всей своей полноте, как если бы о каждой из них в отдельности было сказано, что она включена по ссылке по всей своей полноте.
УЪА-4 (также называемый а4(1-интегрином и СО49б/СО29) был впервые упомянут в работе Нет1ег апб Такаба1, он представлен в составе семейства (1-интегринов рецепторов клеточной поверхности, каждый из членов которого содержит две субъединицы, называемые α-цепь и β-цепь. УЪА-4 содержит α4- и (1-цепи. Существует по меньшей мере девять (1-интегринов, у всех из них одинаковая 31цепь и разные α-цепи. Эти девять рецепторов связывают различные комплементы разнообразных молекул матрикса клетки, такие как фибронектин, ламинин и коллаген. Например, УЪА-4 связывает фибронектин. Кроме того, УЪА-4 связывает молекулы, не входящие в матрикс, которые экспрессируются в эндотелиальных и других клетках. Эти нематриксные молекулы включают УСАМ-1, который экспрессируется в цитокин-активируемых эндотелиальных клетках пупочной вены в культуре. За связывание с фибронектином и УСАМ-1 отвечают различные эпитопы УЪА-4, при этом показано, что каждый вид связывания ингибируется независимо2.
Внутриклеточная адгезия, опосредованная УЪА-4 и другими рецепторами клеточной поверхности, связана с разнообразными воспалительными ответами. В месте повреждения или действия других воспалительных стимулов активированные эндотелиальные клетки кровеносных сосудов экспрессируют молекулы, которые являются адгезивными для лейкоцитов. Механизм адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам включает, помимо прочего, узнавание и связывание рецепторов клеточной поверхности лейкоцитов с соответствующими молекулами клеточной поверхности эндотелиальных клеток. После связывания лейкоциты проходят через стенку кровеносного сосуда и попадают в область повреждения, где выделяют химические медиаторы, противодействующие инфекции. Обзоры рецепторов адгезии иммунной системы содержатся, например, в работах Зртшдет3 и ОкЬогп4.
- 1 015388
Такие воспалительные заболевания мозга, как экспериментальный аллергический энцефаломиелит (ЭАЭ), рассеянный склероз (РС) и менингит, являются примерами расстройств центральной нервной системы, при которых адгезия лейкоцитов к эндотелию приводит к разрушению в остальном здоровой ткани мозга. У субъектов, страдающих такими воспалительными заболеваниями, через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) проходит большое количество лейкоцитов. Эти лейкоциты выделяют токсические медиаторы, вызывающие значительные повреждения тканей, приводящие к нарушению нервной проводимости и параличу.
В других системах органов повреждения тканей также происходят посредством адгезии, приводящей к миграции или активации лейкоцитов. Например, показано, что первичный инсульт, сопровождающий миокардиальную ишемию ткани сердца, может осложняться миграцией лейкоцитов в поврежденную ткань, что вызывает вторичный инсульт (Уеййег, е1 а1.)5. Другие воспалительные или патологические состояния, опосредованные механизмом адгезии, включают, например, астму6-8, болезнь Альцгеймера, атеросклероз9-10, вызванную СПИДом деменцию1, диабет12-14 (включая острый ювенильный приступ диабета), воспалительное заболевание кишечника15 (включая язвенные колиты и болезнь Крона), рассеянный склероз16-17, ревматоидный артрит18-21, последствия трансплантации тканей22, метастазы опухолей23 28, менингит, энцефалит, инсульт и другие повреждения мозга, нефриты, ретиниты, атопический дерматит, псориаз, миокардиальную ишемию и острое опосредованное лейкоцитами повреждение легких, такое как бывает при синдроме дыхательной недостаточности у взрослых.
Известно, что замещенные аминопиримидины, как класс, ингибируют связывание УБА-4 с УСАМ1 и соответственно демонстрируют противовоспалительные свойства29. Хотя эти соединения и являются антагонистами подобного связывания, улучшение их биодоступности повысило бы их эффективность еще больше.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям, их фармацевтически приемлемым солям, их композициям, способам их получения и способам лечения заболеваний, опосредованных УБА-4.
В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к соединениям формулы I
где К1 выбран из группы, включающей С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил, гетероарил и -Ν(Κ5)(Κ6), где К5 и К6 независимо выбраны из группы, включающей водород, С1-С4-алкил, или К5 и К6 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
К2 представляет собой С1-С4-алкил;
К3 и К4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
или фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам этих соединений.
В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к соединениям формулы II
где К7 представляет собой С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил или гетероарил;
К8 означает С1-С4-алкил;
К9 и К10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл; или фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам этих соединений.
- 2 015388
В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к соединениям формулы III
12 11 12 где К и К независимо представляют собой С1-С4-алкил, или К и К совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
К13 означает С1-С4-алкил;
К14 и К15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
или фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам этих соединений. Настоящее соединение также относится к соединениям, показанным в табл. 1'.
Таблица 1'
Структура
Название
Ы-[2-диэтиламино-5-{1Ч-этил-1\1-(трифторацетил)амино}пиримидин-4-ил]-1_ -4'-{ (пирролидин-1 -ил)карбонилокси} фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-(М-этил-М-(изопропилкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-1_-4'-{ (пирролидин-1 -ил)карбонило кси}фенилаланин
Ы-[2-диэтиламино-5-{Ы-этил-Ы-(третбутилкарбонил)амино} пиримидин-4ил]-1_-4'-{ (пирролидин-1 -ил)карбонилокси} фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-(М-этил-1М-(фуран -2-илкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-Ь-4'-{ (пиррол идин-1-ил)карбонилокси} фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-(Ы-этил-Ы-(пиперидин-1 -илкарбонил)амино}пиримиди н-4-ил]-1_-4'-{ (пирролидин-1-ил)карбонилокси}фенилаланин
- 3 015388
Структура
Название
^[2-диэтиламино-5-{Ь1-этил-Ь1-(1\1этил-М-изо-пропиламинокарбонил) амино} пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{ (пиррол идин-1 -ил )карбонилокси}фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-{Ы-этил-М-(тиен3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил] -1_-4'-{ (пиррол идин-1-ил )карбонилокси} фенилаланин
Ы-[2-диэтиламино-5-{Ы-этил-Ы-(тиен2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил] -1_-4'-{(пирролидин- 1-ил)карбонилокси} фенилаланин
Ы-[2-диэтиламино-5-{М-этил-Ы-(фуран -3-ил карбонил )амино} пиримидин-4ил]-1_-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланин
Ы-[2-диэтиламино-5-{Ы-этил-М-(3тиапирролидин-1 -ил карбонил)амино} пиримидин-4-ил]-1_-4'-{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси}фенилаланин
- 4 015388
Структура Название
11 Ы-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М-(тиен2-ил карбонил )амино}пиримидин-4-ил] -1_-4'-{ (пирролидин-1 -ил)карбонилокси }-фенилаланина трет-бутиловый эфир
12 о I Т о М-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М-(трифторметил карбонил )амино}пиримиди н-4-ил]-1_-4'-{ (пиррол идин-1 -ил)карбонилокси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
13 1\1-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М-(третбутилкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-1_-4'-{ (пиррол идин-1 -ил )карбонилокси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
14 а М-[2-диэтиламино-5-{1Ч-этил-М-(фуран -3-ил карбонил )амино}пиримидин-4-ил ]-|_-4'-{ (пирролидин-1-ил )карбонилокси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Как уже упоминалось, настоящее изобретение относится к соединениям, ингибирующим адгезию лейкоцитов, в частности адгезию лейкоцитов, по меньшей мере, частично опосредованную α4интегринами, предпочтительно УЬА-4. Однако прежде чем приступить к более подробному описанию настоящего изобретения, необходимо дать определение следующим терминам.
Определения.
Если не указано иначе, следующие термины, встречающиеся в тексте настоящего описания и формуле изобретения, соответствуют приведенным ниже значениям.
В соответствии с настоящим изобретением, если не указано иначе, термин алкил означает прямые, разветвленные и циклические алкильные группы, содержащие от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно от 1 до 3 атомов углерода. В качестве примеров подобных групп можно привести метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, циклопропил, циклобутил и метилен-циклопропил.
Термин алкенил означает прямые и разветвленные алкенильные группы, содержащие от 2 до 4 атомов углерода, предпочтительно от 2 до 3 атомов углерода, а также по меньшей мере один, предпочтительно один, сайт алкенильной ненасыщенности. Примеры алкенильных групп включают винил (-СН=СН2), аллил (-СН2СН=СН2), н-пропен-1-ил (-СН=СНСН3), н-бутен-2-ил (-СН2СН=СНСН3) и подобные им. Термин охватывает цис- и транс-изомеры, а также смеси этих изомеров.
Термин алкинил означает прямые и разветвленные алкинильные группы, содержащие от 2 до 4 атомов углерода, предпочтительно от 2 до 3 атомов углерода, а также по меньшей мере один, предпочтительно один, сайт алкинильной ненасыщенности. Примеры таких алкинильных групп включают ацетиленил (-С=СН), пропаргил (-СН2С=СН), н-пропин-1-ил (-СН=СНСН3) и подобные им.
Термин арил или Аг означает одновалентную ароматическую карбоциклическую группу из 6-14 атомов углерода, содержащую один цикл (например, фенил) или несколько конденсированных циклов (например, нафтил или антрил), при этом конденсированные циклы могут быть ароматическими (например, 2-бензоксазолин, 2Н-1,4-бензоксазин-3(4Н)-он-7-ил и подобные им), причем точка прикрепления этой группы представляет собой ароматический атом углерода. Предпочтительные арилы включают фенил и нафтил.
- 5 015388
Термир замещенный арил означает арильные группы, содержащие от 1 до 3 заместителей, предпочтительно от 1 до 2 заместителей, выбранных из группы, включающей гидроксил, ацил, ациламино, ацилокси, алкил, замещенный алкил, алкокси, замещенный алкокси, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, карбоксил, карбоксильный сложные эфиры, циано, тиол, тиоалкил, замещенный тиоалкил, тиоарил, замещенный тиоарил, тиогетероарил, замещенный тиогетероарил, тиоциклоалкил, замещенный тиоциклоалкил, тиогетероциклил, замещенный тиогетероциклил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, галоген, нитро, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил, замещенный гетероциклил, гетероарилокси, замещенный гетероарилокси, гетероциклилокси, замещенный гетероциклилокси, амино-сульфонил- (ΝΗ2-802-) и замещенный аминосульфонил.
Термины гало или галоген означают фтор, хлор, бром и йод, предпочтительно либо фтор, либо хлор.
Термин галогеналкил означает алкильные группы, содержащие от 1 до 5 галогрупп. Предпочтительно, чтобы такие группы содержали от 1 до 3 галогрупп и от 1 до 2 атомов углерода. Особо предпочтительные галогеналкильные группы включают тригалогенметил (например, трифторметил) и тригалогенэтил (например, 2,2,2-трифторэт-1-ил).
Термин гетероарил означает ароматическую карбоциклическую группу, содержащую в цикле от 2 до 10 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из числа кислорода, азота и серы. Такие гетероарильные группы могут содержать один цикл (например, пиридил или фурил) или несколько конденсированных циклов, причем каждый конденсированный цикл может быть арилом или гетероарилом. Примеры подобных гетероарилов включают, например, фуран-2-ил, фуран-3-ил, тиен-2-ил, тиен-3-ил, пиррол-2-ил, пиррол-3-ил, пиридил (2-, 3- и 4-пиридилы) и подобные им. В соответствии с одним аспектом атомы серы и/или азота гетероарила могут быть окислены (т.е. находиться в форме -8(0)-, или -δ(0)2-, и/или Ν-оксидов).
Термин гетероцикл или гетероциклический означает насыщенную или ненасыщенную негетероароматическую группу, содержащую один цикл или несколько конденсированных циклов, от 1 до 10 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов в цикле, выбранных из числа азота, серы или кислорода, причем, в случае конденсированной системы, один или несколько циклов могут представлять собой арил или гетероарил. В соответствии с одним аспектом атомы серы и/или азота гетероцикла могут быть окислены (т.е. находиться в форме -8(0)-, или -8(0)2-, и/или Ν-оксидов).
Термин фармацевтически приемлемый носитель означает носитель, пригодный для приготовления фармацевтической композиции, в целом безопасный, нетоксичный и не проявляющий биологических или других нежелательных свойств. Такие носители включают применимые в ветеринарии или при лечении людей. При использовании в настоящем описании или формуле изобретения термин фармацевтически приемлемый носитель включает как один, так и несколько таких носителей.
Термин фармацевтически приемлемая соль относится к солям, сохраняющим биологическую эффективность и свойства соединений настоящего изобретения и не проявляющим биологических или иных нежелательных свойств. Часто соединения настоящего изобретения могут образовывать кислые и/или основные соли в присутствии амино- и/или карбоксильных групп или подобных им.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований готовят из неорганических и органических оснований. К первой категории относятся, например, натриевые, калиевые, литиевые, аммонийные, кальциевые и магниевые соли. Примеры солей, полученных с участием органических оснований, включают, но не ограничиваются, соли первичных, вторичных и третичных аминов, такие как алкиламины, диалкиламины, триалкиламины, замещенные алкиламины, ди(замещенные алкил)амины, три(замещенные алкил)амины, алкениламины, диалкениламины, триалкениламины, замещенные алкениламины, ди(замещенные алкенил)амины, три(замещенные алкенил)амины, циклоалкиламины, ди(циклоалкил)амины, три(циклоалкил)амины, замещенные циклоалкиламины, дизамещенные циклоалкиламины, тризамещенные циклоалкиламины, циклоалкениламины, ди(циклоалкенил)амины, три(циклоалкенил)амины, замещенные циклоалкениламины, дизамещенные циклоалкениламины, тризамещенные циклоалкениламины, ариламины, диариламины, триариламины, гетероариламины, дигетероариламины, тригетероариламины, гетероциклиламины, дигетероциклиламины, тригетероциклиламины, смешанные ди- и триамины, где по меньшей мере два заместителя на амине отличаются друг от друга и выбраны из группы, включающей алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, гетероарил, гетероциклил и подобные им. К указанной категории относятся также амины, два или три заместителя которых совместно с атомом азота амина формируют гетероциклильную или гетероарильную группу.
К числу подходящих аминов относятся, например, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, три(изопропил)амин, три(н-пропил)амин, этаноламин, 2-диметиламиноэтанол, трометамин, лизин, аргинин, гистидин, кафеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, Νалкилглюкамины, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, морфолин, Ν-этилпиперидин и подобные им. Следует также понимать, что в практике настоящего изобретения могут быть пригодны другие производные карбоновых кислот, например амиды карбоновых кислот, включая карбоксамиды, низшие ал
- 6 015388 килкарбоксамиды, диалкилкарбоксамиды и подобные им.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот можно получить из неорганических и органических кислот. К первой категории относятся соли соляной, бромоводородной, серной, азотной, фосфорной кислот и подобные им. Соли органических кислот включают соли уксусной, пропионовой, гликолевой, пировиноградной, щавелевой, яблочной, малоновой, янтарной, малеиновой, фумаровой, винной, лимонной, бензойной, циннамовой, манделовой, метансульфоновой, этансульфоновой, паратолуолсульфоновой, салициловой кислоты и подобных им.
Термин фармацевтически приемлемый катион означает катион фармацевтически приемлемой соли.
Следует понимать, что для всех описанных здесь заместителей в объем настоящего изобретения не входят полимеры, полученные при определении заместителей, содержащих другие заместители, которые также содержат другие заместители (например, замещенный арил с замещенным арилом в качестве заместителя, который также содержит замещенную арильную группу и т.д.). Максимальное количество подобных заместителей составляет три. Это накладывает ограничение на каждое приведенное выше определение. Например, замещенные арильные группы ограничены конструкцией - замещенный арил(замещенный арил)-(замещенный арил).
Термин лечение заболевания включает:
(1) профилактику заболевания, т.е. предупреждение развития клинических симптомов заболевания у млекопитающих, которые могут заразиться или предрасположены к заболеванию, но у которых симптомы заболевания еще не появились.
(2) ингибирование заболевания, т.е. замедление или ослабление развития заболевания или его клинических симптомов, а также (3) облегчение заболевания, т.е. регрессия заболевания или его клинических симптомов.
Терапевтически эффективным количеством называют такое количество соединения, которого при введении млекопитающему для лечения заболевания достаточно для такого лечения. Терапевтически эффективное количество зависит от соединения, заболевания и его интенсивности, а также возраста, веса и т. д. млекопитающего, подлежащего лечению.
Термин фармацевтически приемлемая соль означает фармацевтически приемлемые соли соединения формулы I, полученные с помощью хорошо известных разнообразных органических и неорганических противоионов, и включает, например, натриевые, калиевые, кальциевые, магниевые, аммонийные, тетраалкиламмонийные и подобные соли; а если молекула содержит основную функциональность, то соли органических или неорганических кислот, таких как гидрохлориды, гидробромиды, тартраты, мезилаты, ацетаты, малеаты, оксалаты и подобные им.
Интегрины представляют собой большое семейство гомологичных протеинов с трансмембранными линкерами, являющихся в клетках животных основными рецепторами связывания большинства внеклеточных матриксных протеинов, таких как коллаген, фибронектин и ламинин. Интегрины представляют собой гетеродимеры, содержащие α- и β-цепи. К настоящему времени обнаружено двадцать различных гетеродимеров интегринов, они содержат 9 различных α субъединиц и 14 различных β субъединиц. Термин а4-интегрины означает класс гетеродимерных связанных с ферментами рецепторов клеточной поверхности, содержащих а4-субъединицу, сопряженную с любой из β субъединиц. Примером α4интегрина является УЬА-4, который представляет собой гетеродимер, содержащий α4 и β1субъединицы, его также называют α4β1-интегрином.
Настоящее изобретение относится к соединениям, их фармацевтически приемлемым солям, композициям, их получению и способам лечения заболеваний, опосредованных УЬА-4.
В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к соединениям формулы I
где К1 выбран из группы, включающей С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил, гетероарил и -Ν(Κ5)(Κ6), где К5 и К6 независимо выбраны из группы, включающей водород, С1-С4-алкил, или К5 и К6 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
К2 представляет собой С1-С4-алкил;
К3 и К4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл; а также к фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам этих соединений.
- 7 015388
В соответствии с некоторыми аспектами группа -ΘΟ(Θ)ΝΚ3Κ4 находится в пара-положении фенильного цикла.
В соответствии с некоторыми аспектами К3 и К4 совместно формируют гетероцикл. В соответствии с другими аспектами К3 и К4 совместно формируют пирролидинильный цикл.
В соответствии с некоторыми аспектами К2 представляет собой С1-С4-алкил. В соответствии с другими аспектами К2 означает этил.
В соответствии с другими аспектами К3 и К4 совместно формируют гетероцикл, а К2 представляет собой С1-С4-алкил. В соответствии с другими аспектами К3 и К4 совместно формируют пирролидинильный цикл, а К2 представляет собой этил.
Группы К1, К2, К3 и К4 некоторых соединений настоящего изобретения приведены в табл. 1.
Таблица 1
н1 В2 в3 в4
трифторметил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
изопропил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
т-бутил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
фуран-2-ил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
пиперидин-1ил этил В0 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
Ν-этил-М-изопропиламино этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
тиен-3-ил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
тиен-2-ил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
фуран-3-ил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
3-тиапирроли дин-1-ил этил В3 и В4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к соединениям формулы II
где К7 представляет собой С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил или гетероарил;
К8 соответствует С1-С4-алкилу;
К9 и К10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл; а также к фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам этих соединений.
В соответствии с некоторыми аспектами группа -ОС(О^К9К10 находится в пара-положении фенильного цикла.
В соответствии с некоторыми аспектами К9 и К10 совместно формируют гетероцикл. В соответствии с другими аспектами К9 и К10 совместно формируют пирролидинильный цикл.
В соответствии с некоторыми аспектами К8 представляет собой С1-С4-алкил. В соответствии с другими аспектами К8 означает этил.
В соответствии с некоторыми аспектами К7 представляет собой С1-С4-алкил. В соответствии с другими аспектами К7 выбран из группы, включающей изопропил и трет-бутил.
- 8 015388
В соответствии с некоторыми аспектами К7 представляет собой С1-С4-галогеналкил. В соответствии с другими аспектами К7 соответствует трифторметилу.
В соответствии с некоторыми аспектами К7 означает гетероарил. В соответствии с другими аспектами К7 выбран из группы, включающей фуран-2-ил, фуран-3-ил, тиен-2-ил и тиен-3-ил.
В соответствии с некоторыми аспектами К9 и К10 совместно формируют гетероцикл, К8 представляет собой С1-С4-алкил и К7 соответствует гетероарилу. В соответствии с другими аспектами К9 и К10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидинильный цикл, К8 представляет собой этил и К7 - гетероарил.
В соответствии с некоторыми аспектами К9 и К10 совместно формируют гетероцикл, К8 представляет собой С1-С4-алкил и К7 соответствует алкилу. В соответствии с другими аспектами К9 и К10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидинильный цикл, К8 представляет собой этил и К7 означает алкил.
Настоящее изобретение относится также к соединениям формулы II, группы К7, К8, К9 и К10 которых описаны в табл. 2.
Таблица 2
А7 А8 А9 А10
трифторметил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
изопропил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
трет-бутил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
фуран-2-ил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
тиен-3-ил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
тиен-2-ил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
фуран-3-ил этил В9 и В10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к соединениям формулы III
где К11 и К12 независимо представляют собой С1-С4-алкил, или К11 и К12 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
К13 соответствует С1-С4-алкилу;
К14 и К15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
а также к фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам этих соединений.
В соответствии с некоторыми аспектами группа -ОС(О)НК14К15 находится в пара-положении фенильного цикла.
В соответствии с некоторыми аспектами К14 и К15 совместно формируют гетероцикл. В соответствии с другими аспектами К14 и К15 совместно формируют пирролидинильный цикл.
В соответствии с некоторыми аспектами К13 представляет собой С1-С4-алкил. В соответствии с другими аспектами К13 - этил.
В соответствии с некоторыми аспектами К11 и К12 независимо представляют собой С1-С4-алкил. В соответствии с другими аспектами К11 - этил и К12 - изопропил.
- 9 015388
В соответствии с некоторыми аспектами К11 и К12 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл. В соответствии с другими аспектами гетероцикл выбран из группы, включающей пиперидин-1-ил и 3-тиапирролидин-1-ил.
В соответствии с дополнительными аспектами К14 и К15 совместно формируют гетероцикл, К13 соответствует С1-С4-алкилу, а К11 и К12 совместно с атомом азота, с которым они связаны, также формируют гетероцикл.
Настоящее изобретение относится также к соединениям формулы III, группы К11, К12, К13, К14 и К15 которых описаны в табл. 3.
Таблица 3
А11 А12 А13 А14 А15
В11 и В12 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пиперидиновый цикл этил В14 и В15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют пирролидиновый цикл
изопропил этил этил В14 и В15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют а пирролидиновый цикл
В11 и В12 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют 3-тиапирролидиновый цикл этил В14 и В15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют а пирролидиновый цикл
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее изобретение относится к соединениям формул Ι-ΙΙΙ, содержащим следующие карбамильные заместители:
аДт'· А-Ал4
К3 К10 причем эти группы присоединены к фенильному циклу в пара-положении. В соответствии с другими аспектами соединения из табл. 1-3 содержат карбамильные заместители, присоединенные также в параположении.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящее изобретение относится также к соединениям формул Ι-ΙΙΙ, включая указанные в табл. 1-3, причем карбамильные заместители присоединены в них в орто- или мета-положениях.
Настоящее изобретение относится также к соединениям, указанным в табл. 4.
Таблица 4
Структура Название
1 Ы-[2-диэтиламино-5-{1\1-этил-1\1-(три- фторацетил)амино}пиримидин-4-ил]- (пирролидин-1 -ил)карбонилокси }фенилаланин
2 0 Ы-[2-диэтиламино-5-{ Ν-3τηη-Ν-(η3Οпропилкарбонил)амино} пиримидин-4 -ил]-1_-4'-{ (пирролидин-1-ил)карбонилокси}фенилаланин
- 10 015388
Структура
Название
М-[2-диэтиламино-5-{1\1-этил-М-(третбутилкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонил окси} фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М(фуран-2-илкарбонил)амино}пиримид ин-4-ил]-Ь-4'-{(пиррол идин~1-ил) карбонилокси}фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М(пиперидин-1-илкарбонил)амино}пир имидин-4-ил]-1_-4'-{(пирролидин-1-ил )карбонилокси} фенилаланин
М-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М-(1Мэтил-М-изо-пропиламинокарбонил) амино} пиримидин-4-ил]-1_-4'{(пирролидин-1-ил)карбонилокси}фе нилаланин
М-[2-диэтиламино-5-{М-этил-Г\1-(тиен3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил ]-|_-4'-{ (пирролидин-1 -ил)карбонилок си}фенилаланин
- 11 015388
Структура Название
8 1\1-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М-(тиен- 2-ил карбонил )амино}пиримидин-4-ил ]-1_-4'-{ (пирролидин-1-ил)карбонилок си}фенилаланин
9 1\1-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М(фуран-3-ил карбонил )амино}пиримид ин-4-ил]-1_-4'-{(пирролидин-1-ил) карбонилокси}фенилаланин
10 7? Ы-[2-диэтиламино-5-{1\1-этил-1\1-(3-тиа пирролидин-1 -илкарбонил)амино} пиримидин-4-ил]-1_-4'-{(пирролидин- 1 -ил)карбонилокси}фенилаланин
11 О М-[2-диэтиламино-5-{М-этил-1\1-(тиен2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил ]-1_-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
12 Ж’ 1\1-[2-диэтиламино-5-{М-этил-М-(триф торметил карбонил )амино} пиримидин -4-ил]-1_-4'-{(пирролидин-1-ил)карбон илокси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
13 Ы-[2-диэтиламино-5-{М-этил-Ы-(третбутилкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-1_-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонил окси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
14 М-[2-диэтиламино-5-{Ы-этил-Ы(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримид ин-4-ил]-Ь4'-{ (пирролидин-1-ил) карбонилокси}-фенилаланина трет-бутиловый эфир
В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество одного или более описанных здесь соединений.
В соответствии с одним из своих методических аспектов настоящее изобретение относится к способу лечения заболеваний, опосредованных по меньшей мере частично а4-интегрином, предпочтительно νΐ,Λ-4, у пациента, причем указанный способ предполагает введение фармацевтической композиции,
- 12 015388 содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество одного или более соединений настоящего изобретения. В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к использованию фармацевтической композиции, содержащей соединения настоящего изобретение, для получения лекарственного средства для лечения а4-интегрин-опосредованного заболевания.
Соединения и фармацевтические композиции настоящего изобретения пригодны для лечения патологических состояний, опосредованных, по крайней мере частично, а4-интегринами, где а4-интегрин предпочтительно представляет собой УЪА-4, а также адгезией лейкоцитов. Такие патологические состояния включают, например, астму, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, вызванную СПИДом деменцию, диабет (включая острый ювенильный приступ диабета), воспалительное заболевание кишечника (включая язвенные колиты и болезнь Крона), рассеянный склероз, ревматоидный артрит, последствия трансплантации тканей, метастазы опухолей, менингит, энцефалит, инсульт и другие травмы мозга, нефриты, ретиниты, атопический дерматит, псориаз, миокардиальную ишемию и острое опосредованное лейкоцитами повреждение легких, такое как бывает при синдроме дыхательной недостаточности у взрослых.
Другие заболевания включают, но не ограничиваются ими, воспалительные состояния, такие как узловатая эритема, аллергические конъюктивиты, ретробульбарный неврит, увеит, аллергический ринит, анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, васкулит, синдром Рейтера, системная красная волчанка, прогрессирующий системный склероз, полимиозит, дерматомиозит, грануломатоз Вегнера, аортит, саркоидоз, лимфоцитопения, темпоральный артериит, перикардит, миокардит, застойная сердечная недостаточность, узловатый полиартериит, синдромы гиперчувствительности, аллергия, синдромы гиперэозинофилии, синдром Чурга-Страусса, хронические обструктивное заболевание легких, пневмонит с гиперчувствительностью, хронический активный гепатит, внутритканевый цистит, аутоиммунная эндокринная недостаточность, первичный цирроз желчного пузыря, аутоиммунная апластическая анемия, стойкий хронический гепатит и тиреоидит.
В соответствии с предпочтительным аспектом патологическое состояние, опосредованное α4интегрином, представляет собой воспалительное заболевание.
Соединения настоящего изобретения включают, например, следующие: №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(трифторацетил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(изопропилкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(трет-бутилкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(пиперидин-1-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№Щ-этил-№изопропиламинокарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-3 -илкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-2-илкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(3-тиапирролидин-1-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-2-илкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(трифторметилкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина трет-бутиловый эфир;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(трет-бутилкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир и №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир;
а также фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры указанных соединений.
- 13 015388
Получение соединений.
Соединения настоящего изобретения можно получить из легкодоступных исходных материалов с использованием следующих общих методов и процедур. Необходимо понимать, что в случае, если приведены типичные или предпочтительные условия протекания процесса (т.е. температура реакции, время, мольное соотношение реагентов, растворители, давление и т.д.), можно использовать и другие условия, если только не указано иначе. Оптимальные условия реакции могут варьировать в зависимости от конкретных используемых реагентов и растворителей, но такие условия компетентный специалист сможет определить рутинными процедурами оптимизации.
Кроме того, компетентному специалисту должно быть очевидно, что для предотвращения нежелательных реакций с участием некоторых функциональных групп может появиться необходимость во введении обычных защитных групп. В литературе хорошо известны и описаны подходящие защитные группы для различных функциональных групп и подходящие условия для введения и снятия защиты. Например, разнообразные защитные группы описаны в работе Т/Ψ. Огеепе апб О.М. \¥и£5, Рго1ес1ш§ Огоирз ίη Огдашс 8уп1йез1з, 8есопб ЕбШоп, \¥Пеу, №\ν Уогк, 1991, а также в приведенных там ссылках.
Кроме того, как правило, соединения настоящего изобретения содержат один или несколько хиральных центров. Это означает, что при необходимости такие соединения можно получить или выделить в виде чистых стереоизомеров, т.е. индивидуальных энантиомеров или диастереомеров, а также в виде смесей, обогащенных одним из стереоизомеров. Все такие стереоизомеры (и обогащенные смеси) включены в объем настоящего изобретения, если не указано иначе. Чистые стереоизомеры (или обогащенные смеси) можно приготовить с помощью, например, оптически активных исходных материалов или стереоселективных реагентов, хорошо известных в соответствующей области. Альтернативно, рацемические смеси таких соединений можно разделить с помощью, например, хиральной колоночной хроматографии, хиральных расщепляющих агентов и т.д.
В соответствии с одним аспектом соединения настоящего изобретения можно получить, как пока зано ниже на схеме.
Схема
МеОНЖгО где группы К1, К2, К3, К4, К5 и К6 описаны выше, а Рд представляет собой карбоксильную защитную группу, такую как бензил, трет-бутил и подобные им.
Исходное 5-аминопиримидиновое промежуточное соединение на схеме, соединение 1.1, подробно описано в публикации \¥О 03/099809 и для иллюстративных целей показано в виде 4-замещенного фе
- 14 015388 нилаланинового производного. Разумеется, 2- и 3-замещенные фенилаланиновые производные вступают в такие же реакции.
Конкретно, как показано на схеме, соединение 1.1, 5-амино-2-диэтиламино-4-замещенный пиримидин (полученный из соответствующего 5-нитропиримидина восстановлением на 5% Ρά/С или 5% ΡΐΟ2 по весу), конвертируется в соответствующий трифторацетамид, соединение 1.2, обычными методами. Например, небольшой избыток трифторуксусного ангидрида смешивают с соединением 1.1 в подходящем инертном разбавителе, таком как тетрагидрофуран, метиленхлорид, пиридин и подобные им. Реакцию проводят при температуре приблизительно от 0 до 30°С до фактического завершения, что обычно происходит через 0,5-24 ч. По завершении реакции соединение 1.2 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им, или, альтернативно, используют на следующем этапе без очистки и/или выделения.
Превращение соединения 1.2 в соответствующий N(К2),N-трифторацетамидопиримидин, соединение 1.3, также осуществляется традиционными методами. Например, избыток галогенида, К2-1, смешивают с соединением 1.2 в подходящем инертном разбавителе, таком как ДМФ, в присутствии избытка подходящего основания, например, карбоната калия. В соответствии с предпочтительным аспектом используют приблизительно два эквивалента К2-1 и карбоната калия. Реакция протекает при температуре окружающей среды в закупоренном контейнере до своего фактического завершения, что происходит обычно через 20-72 ч. По завершении реакции соединение 1.3 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им, или, альтернативно, используют на следующем этапе без очистки и/или выделения.
Карбоксильную защитную группу соединения 1.3 можно удалить в традиционных условиях, получив соединение формулы I (не показано). В соответствии с одним аспектом трет-бутильную защитную группу можно удалить действием муравьиной кислоты. В соответствии с другим аспектом бензильную защитную группу можно удалить действием водорода в присутствии катализатора палладий на углероде, как правило, в протонном растворителе, таком как метанол, в условиях повышенного давления водорода.
Альтернативно, трифторацетильную группу можно удалить, получив соответствующий амин, соединение 1.4. В соответствии с этим аспектом трифторацетильная группа действует как аминозащитная группа. Как и в предыдущих реакциях, это вещество обычно получают, например, смешивая соединение 1.3 с большим избытком подходящего основания, такого как карбонат калия, в смеси воды и протонного растворителя, например метанола. Реакцию проводят при повышенной температуре, например, от 40 до 60°С до ее фактического завершения. По завершении реакции соединение 1.4 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им, или, альтернативно, используют на следующем этапе без очистки и/или выделения.
В соответствии со схемой соединение 1.4 может быть использовано для получения либо производных мочевины, где К1=-NК5К6, либо ациламино-производных, если К1 представляет собой С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил или гетероарил, связанный с карбонильной группой, но не через атом азота, с которым они связаны. В первом случае производные мочевины получают традиционными методами, включающими получение на первом этапе амидохлорида, соединения 1.7. Для этого соединение 1.4 вводят в реакцию с избытком фосгена в присутствии подходящего основания, такого как карбонат калия, бикарбонат калия, карбонат натрия и подобные им. По завершении реакции соединение 1.7 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им, но предпочтительно используют на следующем этапе без очистки и/или выделения.
Полученный аминохлорид, соединение 1.7, затем конвертируют в соответствующее производное мочевины, соединение 1.8, путем его взаимодействия с подходящим амином, ^^N4, в обычных условиях. Предпочтительно, если при этом эквимолярное количество или избыток амина взаимодействует с соединением 1.7 в подходящем растворителе, например тетрагидрофуране, диоксане, хлорформе и подобных им. По завершении реакции соединение 1.8 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им, или, альтернативно, используют на следующем этапе без очистки и/или выделения.
Карбоксильную защитную группу соединения 1.8 можно удалить в обычных условиях с получением соединения 1.9, соответствующего формуле I. В соответствии с одним аспектом трет-бутильную защитную группу удаляют, воздействуя муравьиной кислотой. В соответствии с другим аспектом это делают, действуя водородом в присутствии катализатора палладий на углероде, как правило, в протонном растворителе, таком как метанол, в атмосфере водорода при повышенном давлении. По завершении реакции соединение 1.8 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им.
В соответствии со вторым аспектом ациламино-производные, соединение 1.5, получают, смешивая соединение 1.4 с небольшим избытком ацил галогенида в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, диизопропилэтиламин и подобные им (оно требуется для перехвата образующейся кислоты). Обычно реакцию проводят в подходящем инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, диоксан, хлорформ и подобные им. Предпочтительно реакцию проводят при температуре от 0 до 30°С до
- 15 015388 ее фактического завершения, что происходит, как правило, через 2-48 ч. По завершении реакции соединение 1.8 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им, или, альтернативно, используют на следующем этапе без очистки и/или выделения.
Карбоксильную защитную группу соединения 1.5 можно удалить в обычных условиях с получением соединения 1.6, соответствующего формуле I. В соответствии с одним аспектом трет-бутильную защитную группу удаляют, воздействуя муравьиной кислотой. В соответствии с другим аспектом бензильную защитную группу удаляют, действуя водородом в присутствии катализатора палладий на углероде, как правило, в протонном растворителе, таком как метанол, в атмосфере водорода при повышенном давлении. По завершении реакции соединение 1.6 выделяют традиционными методами, включая нейтрализацию, упаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные им.
Фармацевтические составы.
Если соединения настоящего изобретения используют в качестве лекарственных препаратов, то их обычно вводят в форме фармацевтических композиций. Эти соединения можно вводить по различным маршрутам, включая пероральный, ректальный, трансдермальный, подкожный, внутривенный, внутримышечный и интраназальный маршруты. Соединения эффективны при использовании в составе как пероральных составов, так и вводимых в виде инъекций. Подобные композиции готовятся с использованием методов, хорошо известных в фармацевтике, и содержат по меньшей мере одно активное соединение.
Настоящее изобретение включает также фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента одно или более соединений, охватываемых формулами Ι-ΙΙΙ, и фармацевтически приемлемые носители. При получении композиций по настоящему изобретению активный ингредиент обычно смешивают с наполнителем, разбавляют им или помещают внутрь специального носителя, который может представлять собой капсулы, таблетки, пакетики, бумажные упаковки или другие контейнеры. Используемый наполнитель, как правило, должен быть удобен для введения людям или другим млекопитающим. Если наполнитель используется как разбавитель, то он может быть твердым, полутвердым или жидким веществом, являясь при этом носителем или средой для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут принимать форму таблеток, пилюль, порошков, ромбовидных таблеток, пакетиков, облаток, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в твердой или жидкой среде), мазей, содержащих, например, до 10 мас.% активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и стерильных упакованных порошков.
В процессе приготовления состава может потребоваться размолоть активный ингредиент для получения частиц соответствующих размеров и только потом смешивать его с другими ингредиентами. Если активное соединение практически нерастворимо, то обычно его размалывают до размера частиц менее 200 меш (проходящих через сито с плотностью ячеек 200 на дюйм). Если активное соединение в значительной степени растворимо в воде, то размер частиц обычно делают таким, чтобы обеспечить их равномерное распределение в препарате, например, около 40 меш.
В качестве примеров подходящих наполнителей можно привести лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, манит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, патоку и метилцеллюлозу. Составы могут также содержать смазочные вещества, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; увлажняющие агенты; эмульсификаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и полигидроксипропилбензоаты; подсластители и вкусовые добавки. Композиции настоящего изобретения можно получить таким образом, чтобы обеспечить быстрое, отложенное или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту; для этого используются методы, хорошо известные в фармацевтике.
Внутривенное введение терапевтических агентов хорошо известно в фармацевтике. Составы для внутривенного введения должны обладать определенными свойствами, а не просто представлять собой композицию, терапевтический агент в которой растворим в воде. Например, состав должен усиливать общую стабильность активных ингредиентов, кроме того, его производство должно быть достаточно экономичным. Все эти факторы в совокупности и определяют общий успех и эффективность препарата для внутривенного введения. В фармацевтическую композицию с участием соединений настоящего изобретения можно включать и другие вспомогательные добавки, например растворители: этанол, глицерин, пропиленгликоль; стабилизаторы: этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), лимонную кислоту; антимикробные консерванты: бензиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен; агенты буферизации: лимонная кислота/цитрат натрия, гидротартрат калия, гидротартрат натрия, уксусная кислота/ацетат натрия, малеиновая кислота/малеат натрия, гидрофталат натрия; а также модификаторы ионной силы (осмотического давления): хлорид натрия, маннит, декстроза.
Для поддержания рН в диапазоне от 4 до 8 и более предпочтительно приблизительно от 4 до 6, может потребоваться буфер. Обычно буферная система представляет собой смесь слабой кислоты и ее растворимой соли, например цитрата натрия/лимонной кислоты; или моно и дисолей двухосновной кислоты, например, гидротартрат калия; гидротартрат натрия, фосфорная кислота/дигидрофосфат калия и фосфорная кислота/гидрофосфат калия.
- 16 015388
Количество используемой буферной системы зависит (1) от желаемого значения рН и (2) от количества лекарства. В общем случае, мольное соотношение буфер: лекарство (где число молей буфера определяется как суммарное число молей его ингредиентов, например, цитрата натрия и лимонной кислоты) находится в интервале от 0,5:1 до 50:1 для поддержания рН в диапазоне от 4 до 8 и обычно используется отношение от 1:1 до 10:1.
Примером пригодного для настоящего изобретения буфера является система цитрата натрия/лимонной кислоты состава от 5 до 50 мг на 1 мл цитрата натрия и от 1 до 15 мг на 1 мл лимонной кислоты, этого достаточно для поддержания рН композиции в интервале от 4 до 6.
Агент буферизации вводят также, чтобы не допустить осаждения лекарства. При этом он образует растворимые комплексы с ионами металлов, например Са, Мд, Ре, А1, Ва, которые могут попадать в раствор из стеклянных контейнеров или резиновых пробок или присутствовать в обычной питьевой воде. Агент может выступать в роли агента комплексообразования, конкурирующего с лекарством, и образовывать растворимые комплексы металлов, которые иначе привели бы к появлению нежелательных частиц.
Кроме того, наличие в системе агента, например хлорида натрия, в количестве приблизительно 1-8 мг/мл, позволяет довести осмотическое давление до тех значений, которые соответствуют человеческой крови, и, тем самым не допустить распухания или сжимания эритроцитов при внутривенном введении состава, что может привести к нежелательным побочным эффектам, таким как рвота или диарея, а также, возможно, к связанным заболеваниям крови. В общем случае, осмотическое давление состава соответствует человеческой крови, которая имеет осмолярность в интервале от 282 до 288 мОсм/кг. Обычно осмолярность состава равна 285 мОсм/кг, что эквивалентно осмотическому давлению 0,9% раствора хлорида натрия.
Внутривенные составы можно вводить прямой инъекцией, в виде внутривенного болюса, а можно путем инфузии. При этом его добавляют в соответствующий раствор для инфузии, такой как 0,9% раствор хлорида натрия или в другой совместимый раствор.
Предпочтительно готовить композиции в виде форм единичной дозированной лекарственной формы, каждая доза содержит приблизительно от 5 до 100 мг, обычно от 10 до 30 мг активного ингредиента. Термин единичная дозированная лекарственная форма означает физически дискретную единицу, подходящую в качестве единичной дозы для людей и других млекопитающих, каждая такая единица содержит заранее заданное количество активного вещества, рассчитанное так, чтобы оно вызывало желательный терапевтический эффект, в сочетании с подходящим фармацевтическим наполнителем.
Активное соединение эффективно в широком диапазоне концентраций и его, как правило, вводят в фармацевтически эффективном количестве. Необходимо понимать, однако, что фактически назначаемая доза соединения определяется врачом с учетом сопутствующих обстоятельств, включая заболевание, выбранный маршрут введения, фактическое вводимое соединение, возраст, вес и реакцию конкретного пациента, тяжесть его симптомов и т.д.
Для приготовления твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим наполнителем, получая твердую предварительную композицию, содержащую гомогенную смесь соединений настоящего изобретения. Под гомогенностью этих предварительных составов понимается то, что активный ингредиент равномерно распределен по композиции, так что ее можно легко разделить на одинаково эффективные единичные дозированные лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Этот твердый предварительный состав затем делят на единичные дозированные лекарственные формы описанного типа, содержащего, например, приблизительно от 0,1 до 500 мг активного ингредиента настоящего изобретения.
Таблетки или пилюли настоящего изобретения могут быть покрыты оболочкой или иным способом приготовлены, чтобы обеспечить пролонгированное действие. Например, таблетка или пилюля может содержать один компонент внутри, а другой снаружи, причем последний представляет собой оболочку вокруг первого. Компоненты могут быть разделены слоем, защищающим внутренний компонент от распада в желудке, так чтобы он мог пройти в двенадцатиперстную кишку, или чтобы его высвобождение было замедленным. Для таких слоев или покрытий можно использовать множество веществ, включая большое количество полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.
Жидкие формы, содержащие композиции настоящего изобретения и пригодные для введения перорально или в виде инъекций, включают водные растворы сиропов приятного вкуса, водные или масляные суспензии, а также приятные на вкус эмульсии, содержащие такие пригодные в пищу масла, такие как хлопковое, кунжутное, кокосовое или арахисовое, а также эликсиры и аналогичные фармацевтические носители.
Композиции для ингаляции или вдувания включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых, водных или органических растворителях и их смесях, а также порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые наполнители, как описано в настоящем описании. Предпочтительно для получения местного или системного эффекта вводят композиции по пероральному или назальному дыхательному маршруту. Композиции в предпочтительных фар
- 17 015388 мацевтически приемлемых растворителях можно распылять действием инертных газов. Распыляемые растворы вдыхают непосредственно из приборов для распыления (небулайзеров), либо последние можно соединить со специальной лицевой маской или промежуточным дыхательным устройством, создающим повышенное давление. Растворы, суспензии или порошковые композиции можно вводить, предпочтительно перорально или назально, из устройств, доставляющих состав соответствующим способом.
Приведенные ниже примеры фармацевтических составов иллюстрируют фармацевтические композиции настоящего изобретения.
Пример 1. Состав.
Готовят твердые желатиновые капсулы, содержащие следующие ингредиенты.
Ингредиент Количество (мг/капсулу)
Активный ингредиент30,0
Крахмал305,0
Стеарат магния5,0
Указанные ингредиенты смешивают и помещают в твердую желатиновую капсулу в количестве 340 мг.
Пример 2. Состав.
Таблетка готовится из следующих ингредиентов.
Ингредиент Количество (мг/таблетку)
Активный ингредиент25,0
Целлюлоза, микрокристаллическая 200,0
Коллоидный диоксид кремния10,0
Стеариновая кислота5,0
Компоненты перемешивают и уплотняют в таблетки весом 240 мг каждая. Пример 3. Состав.
Сухой порошок для ингаляции готовят из следующих компонентов.__________
Ингредиент Вес (%)
Активный ингредиент 5
Лактоза 25
Активный ингредиент смешивают с лактозой и смесь помещают в устройство для ингаляции сухого порошка.
Пример 4. Состав.
Таблетки, содержащие по 30 мг активного ингредиента, готовят следующим образом.
Ингредиент Количество (мг/таблетку)
Активный ингредиент 30 мг
Крахмал 45 мг
Микрокристаллическая целлюлоза 35,0 мг
Поливинилпирролидон (10% раствор 4,0 мг в стерильной воде)
Карбоксиметил-крахмал натрия 4,5 мг
Стеарат магния 0,5 мг
Тальк 1,0 мг
Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито с ячейками 20 меш (1 меш число отверстий на 1 линейный дюйм (24,5 см)) и тщательно перемешивают. Раствор поливинилпирролидона смешивают с полученным порошком, после чего пропускают через сито размером 16 меш. Полученные таким способом гранулы высушивают при температуре 50-60°С и пропускают через сито 16 меш. Карбоксиметил-крахмал натрия, стеарат магния и тальк пропускают через сито 30 меш, а затем добавляют к гранулам, которые после перемешивания прессуют в таблетки весом 120 мг каждая.
Пример 5. Состав.
Капсулы, содержащие по 40 мг лекарственного средства, готовят следующим образом.
Ингредиент Количество (мг/капсулу)
Активный ингредиент 40,0 мг
Крахмал 109,0 мг
Стеарат магния 1,0 мг
Итого 150,0 мг
Активный ингредиент, крахмал и стеарат магния смешивают, пропускают через сито размером 20 меш и заполняют им твердые желатиновые капсулы по 150 мг.
- 18 015388
Пример 6. Состав.
Суппозитории, содержащие по 25 мг активного ингредиента, готовят следующим образом.
Ингредиент Количество
Активный ингредиент мг
Глицериды насыщенных жирных 2,000 мг кислот до
Активный ингредиент пропускают через сито размером 60 меш и суспендируют в насыщенных глицеридах жирных кислот, предварительно расплавленных при минимально возможной температуре. Смесь затем выливают в форму для суппозиториев емкостью 2,0 г и позволяют остыть.
Пример 7. Состав.
Суспензии, содержащие 50 мг лекарственного средства на дозу объемом 5,0 мл, готовят следующим образом.
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 50,0 мг
Ксантановая камедь 4,0 мг
Карбоксиметилцеллюлоза натрия
(11%)
Микрокристаллическая целлюлоза 50,0 мг
(89%)
Сахароза 1,75 мг
Бензоат натрия 10,0 мг
Вкусовые добавки и красители
Очищенная вода до 5,0 мл
Активный ингредиент, сахарозу и ксантановую камедь смешивают, пропускают через сито размером 10 меш, после чего перемешивают с заранее приготовленным раствором микрокристаллической целлюлозы и карбоксиматилцеллюлозы натрия в воде. Бензоат натрия, вкусовые добавки и краситель разбавляют небольшим количеством воды и добавляют в систему при перемешивании. Затем систему доводят водой до требуемого объема.
Пример 8. Состав.
Ингредиент
Активный ингредиент
Крахмал
Стеарат магния
Итого
Количество (мг/капсулу)
15,0 мг
407,0 мг
3,0 мг
425 мг
Активный ингредиент, крахмал и стеарат магния перемешивают, пропускают через сито размером 20 меш и помещают в желатиновую капсулу в количестве 425 мг.
Пример 9. Состав.
Состав для подкожного введения можно приготовить следующим образом.
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 5,0 мг
Кукурузное масло 1,0 мл
Пример 10. Состав.
Состав для местного применения можно приготовить следующим образом.
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 1-10 г
Воск-эмульсификатор30 г
Жидкий парафин20 г
Белый мягкий парафиндо100 г
Белый мягкий парафин нагревают до плавления. В него добавляют жидкий парафин и воскэмульсификатор, после чего перемешивают систему до их растворения. Затем туда же вводят активный ингредиент и продолжают перемешивание до полного диспергирования. Смесь охлаждают до твердого состояния.
- 19015388
Пример 11. Состав.
Состав для внутривенного введения можно приготовить следующим образом.
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 250 мг
Изотонический физиологический 1000 мл раствор
Еще один предпочтительный состав, реализованный в способах по настоящему изобретению, предполагает использование приспособлений для трансдермальной доставки (пластыри). Такие трансдермальные пластыри обеспечивают непрерывную или прерывистую инфузию соединений настоящего изобретения в контролируемых количествах. Конструкция и использование трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны в фармацевтике, см., например, Ра!еп! И8 5023252, утвержденный 11 июня 1991 г. и включенный сюда по ссылке. Можно получить пластыри, обеспечивающие непрерывное, пульсирующее введение фармацевтических агентов или их доставку по требованию.
Часто бывает желательно или необходимо прямо или опосредованно ввести фармацевтическую композицию в мозг. Прямые технологии обычно предполагают помещение катетера по доставке лекарственного средства в вентрикулярную систему хозяина, что позволяет обойти гематоэнцефалический барьер. Одна из таких имплантируемых систем доставки, используемая для транспорта биологических факторов в специфические анатомические области тела, описана в патенте И8 5011472, который включен сюда по ссылке.
Обычно предпочтительны непрямые способы, они, как правило, предполагают такую форму композиции, чтобы обеспечить перевод лекарственного средства в латентное состояние путем превращения гидрофильных лекарственных средств в форму, растворимую в липидах. Обычно такая латенциация осуществляется путем блокирования гидроксильных, карбонильных, сульфатных и первичных аминогрупп лекарственного средства, которое делает его более растворимым в липидах и способным преодолеть гематоэнцефалический барьер. Альтернативно, доставку гидрофильных лекарственных средств можно усилить внутри артериальной инфузией гипертонических растворов, которые временно открывают гематоэнцефалический барьер.
Другие составы, пригодные для использования в настоящем изобретении можно найти в руководстве Кетт§1оп'8 Рйагтасеи11са1 8с1епсе§, Масе РиЬйзЫпд Сотрапу, РЫ1абе1рЫа, РА, 17111 еб. (1985).
Как уже отмечалось выше, описанные соединения удобны для использования в разнообразных системах доставки лекарственных средств, описанных выше. Кроме того, чтобы увеличить период полувыведения вводимых соединений из сыворотки, их можно инкапсулировать, заключив в полость липосомы, приготовить в виде коллоидного раствора или использовать другие традиционные методы, позволяющие увеличить период полувыведения соединений. Большое количество методов приготовления липосом описано в работе, например, 8/ока, е! а1., и.8. Ра!еп! № 4235871, 4501728 и 4837028, каждая из которых включена сюда по ссылке.
Конъюгаты настоящего изобретения представляют собой антагонисты УЬА-4 и предполагается, что они обеспечивают большее удержание т у1уо, по сравнению с неконъюгированными соединениями. Такое улучшенное удержание конъюгата в организме приводит к меньшей необходимой дозировке лекарственного средства, что, в свою очередь, приводит к меньшим побочным эффектам и уменьшению токсичности. Кроме того, это позволяет реже вводить лекарственные препараты пациенту, достигая того же или улучшенного терапевтического эффекта.
Предполагается, что конъюгаты настоящего изобретения демонстрируют т у1уо ингибирование адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам, опосредованной УЬА-4, путем конкуретного связывания с УЬА-4. Предпочтительно использовать соединения настоящего изобретения в составах для внутривенного введения с целью лечения заболеваний, опосредованных УЬА-4 или адгезией лейкоцитов. Такие заболевания включают воспалительные заболевания у млекопитающих, например астму, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, вызванную СПИДом деменцию, диабет (включая острый ювенильный приступ диабета), воспалительное заболевание кишечника (включая язвенные колиты и болезнь Крона), рассеянный склероз, ревматоидный артрит, последствия трансплантации тканей, метастазы опухолей, менингит, энцефалит, инсульт и другие травмы мозга, нефриты, ретиниты, атопический дерматит, псориаз, миокардиальную ишемию и острое опосредованное лейкоцитами повреждение легких, такое как бывает при синдроме дыхательной недостаточности у взрослых. Особенно эффективны соединения настоящего изобретения для лечения множественного склероза и ревматоидного артрита.
Подходящие т у1уо модели для демонстрации эффективности при лечении воспалительных заболеваний включают экспериментальный аллергический энцефаломиелит (ЭАЭ) у мышей, крыс, морских свинок или приматов, а также и другие воспалительные модели, зависимые от а4-интегринов.
Воспалительное заболевание кишечника представляет собой обобщенный термин, обозначающий две похожие болезни, называемые болезнью Крона и ульцеративным (язвенным) колитом. Болезнь Крона - идиопатическое хроническое язвенно-сократительное заболевание, характеризующееся
- 20 015388 четко оформленным и, как правило, трансмуральным вовлечением всех слоев стенки желудочнокишечного тракта в грануломатозный воспалительный процесс. Участвовать в этом процессе может любой сегмент желудочно-кишечного тракта, от рта до ануса, но чаще всего болезнь поражает терминальную часть подвздошной или толстую кишку. Ульцеративный (язвенный) колит представляет собой воспалительный ответ, ограниченный в основном слизистой или подслизистой оболочкой подвздошной или толстой кишки. В вызванных воспалительными заболеваниями повреждениях кишечника встречается много лимфоцитов и макрофагов, они вносят свой вклад в эти повреждения.
Астма - болезнь, характеризующаяся повышенной реакцией трахеобронхиального дерева на различные стимулы, усиливающие пароксизмальные сокращения бронхиальных дыхательных путей. Стимулы вызывают высвобождение различных медиаторов воспаления из покрытых 1дЕ тучных клеток, включая гистамин, эозинофильные и нейтрофильные хемотактические факторы, лейкотриены, простагландины и фактор активации тромбоцитов. Высвобождение этих факторов рекрутирует базофилы, эозинофилы и нейтрофилы, что вызывает воспалительное повреждение.
Атеросклероз - заболевание артерий (например, коронарной, сонной, аорты и подвздошной). Основное повреждение при этом, атерома, представляет собой фокальную бляшку на внутренней стенке сосуда (интиме) с липидным ядром и закрывающей шляпкой из фиброзной ткани. Атеромы мешают артериальному кровотоку и ослабляют пораженные артерии. Основным последствием данного заболевания являются миокардиальные и церебральные инфаркты. В атеромах рекрутируются макрофаги и лейкоциты, они вносят свой вклад в воспалительное повреждение.
Ревматоидный артрит представляет собой хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание, вызывающее, прежде всего, нарушение в работе и повреждения суставов. Обычно сначала ревматоидные артриты влияют на небольшие связки ладоней и ступней, но впоследствии могут распространяться на запястья, локти, лодыжки и колени. Артрит возникает в результате действия лейкоцитов на синовиальные клетки, причем лейкоциты проникают в синовиальную жидкость из кровотока, см., например, Раи1, 1ттипо1оду (3й ей., Кауеи Ргезз, 1993).
Еще одним показанием для использования соединений настоящего изобретения является лечение отторжения органов или трансплантатов, опосредованного УЪЛ-4. За последнее время эффективность хирургических методов трансплантации тканей и органов, таких как кожа, почка, печень, сердце, легкое, поджелудочная железа и костный мозг, значительно возросла. Возможно, основной проблемой теперь является отсутствие удовлетворительных агентов, вызывающих у реципиента иммунотолерантность к пересаженному органу или аллотрансплантату. Когда хозяину пересаживают аллогенные клетки или органы (т.е. донор и реципиент представляют собой различных индивидуумов того же вида), то, скорее всего, иммунная система хозяина вызовет иммунный ответ на внешние антигены трансплантата (хозяин против трансплантата) с последующим разрушением пересаженной ткани. В отторжении пересаженных тканей принимают участие клетки СЭ8'. СЭ4 и моноциты. Соединения настоящего изобретения, которые связывают а4-интегрин, эффективны, помимо прочего, для блокирования аллоантигениндуцированного иммунного ответа реципиента, что не позволяет этим клеткам участвовать в разрушении пересаженной ткани или органа, см., например, Раи1 е! а1., Тгаизр1аи! 1и1егиа11оиа1 9, 420-425 (1996); 6еогс7уи8к1 е! а1., 1ттиио1о§у 87, 573-580 (1996); 6еогсу7И8к1 е! а1., Тгаизр1аи!. 1ттиио1. 3, 55-61 (1995); Уаид е! а1., Тгаизр1аи!айои 60, 71-76 (1995); Аийегзои е! а1., ΆΡΜΙ8 102, 23-27 (1994).
Похожее использование связывающих УЪЛ-4 соединений настоящего изобретения - модулирование иммунного ответа, принимающего участие в заболевании трансплантат против хозяина (ОУНИ), см., например, 8ск1еде1 е! а1., 1. Iттиио1. 155, 3856-3865 (1995). ОУНИ представляет собой потенциально фатальное заболевание, возникающее, когда аллогенному реципиенту пересаживают иммунокомпетентные клетки. В такой ситуации эти клетки донора могут атаковать ткани реципиента. Распространенными мишенями являются ткани кожи, эпителия кишечника и печени, в ходе ОУНИ они могут быть разрушены. Особенно серьезные проблемы возникают, если пересаживается иммунная ткань, например костный мозг; менее интенсивное ОУНИ отмечено и в других случаях, включая пересадку сердца и печени. Терапевтические агенты настоящего изобретения эффективны, помимо прочего, для блокирования активации донорных Т-клеток, что уменьшает их способность лизировать клетки-мишени хозяина.
Еще одним вариантом применения соединений настоящего изобретения является ингибирование метастазирования опухолей. Сообщалось, что некоторые опухолевые клетки экспрессируют УЪЛ-4 и соединения, которые связываются с УЪЛ-4, блокируют адгезию таких клеток к эндотелиальным клеткам. 8!етЬаске! а1., Иго1. Кез. 23, 175-83 (1995); Ο1Ό3Ζ е! а1., Ш!. 1. Саисег 60, 867-71 (1995); Егеейтаи е! а1., Ъеик. Ъутркота 13, 47-52 (1994); Окакага е! а1., Саисег Кез. 54, 3233-6 (1994).
Обладающие требуемой биологической активностью соединения можно модифицировать, чтобы получить желаемые свойства, например улучшить фармакологические свойства (такие как стабильность 1и у1уо или биодоступность) или так изменить соединение, чтобы его можно было обнаружить в диагностических методах. Стабильность проверяют различными способами, такими как определение полураспада протеинов при инкубации с пептидазами или сывороткой или плазмой крови человека. Большое количество подобных анализов стабильности протеинов описано, например, в работе УегкоеГ е! а1., Еиг. 1. Эгид Ме!аЬ. Ркагтасокте!, 1990, 15(Т):83-93.
- 21 015388
Еще одним вариантом применения соединений настоящего изобретения является лечение рассеянного склероза. Рассеянный склероз представляет собой прогрессирующее неврологическое аутоиммунное заболевание, которым страдает приблизительно 250000-350000 человек в Соединенных Штатах. Полагают, что рассеянный склероз является результатом специфической аутоиммунной реакции, в которой определенные лейкоциты атакуют миелин, образующий изолирующее покрытие нервных волокон, и инициируют его разрушение. На животных моделях множественного склероза показано, что мышиные моноклинальные антитела против УЬА-4 блокируют адгезию лейкоцитов к эндотелию и тем самым предотвращают воспаление центральной нервной системы и последующий паралич у животных16.
Фармацевтические композиции изобретения подходят для использования в различных системах доставки лекарств. Подходящие для настоящего изобретения составы описаны в Кетшдбоп'к РНаттасеиЕса1 8с1еисе5, Масе РиЫЬЫпд Сотрапу, РН11абе1рН1а, РА, 17(Н еб. (1985).
Вводимая пациенту доза зависит от того, что именно вводят, от цели введения, например профилактика или лечение, от состояния пациента, от способа введения и т.д. В терапевтических вариантах использования композицию вводят пациенту, уже страдающему от заболевания, в количестве, эффективном для лечения или, хотя бы, частичного прекращения симптомов заболевания и его осложнений. Количество лекарственного средства, адекватное для достижения этой цели, называют терапевтически эффективной дозой. Эффективное в таком контексте количество зависит от состояния заболевания, которое предстоит лечить, и от мнения лечащего врача, на которое влияют такие факторы, как интенсивность воспалительного процесса, возраст, вес и общее состояние здоровья пациента, и подобные факторы. При этом необходимо учитывать данные, полученные на животных моделях, такие как представлены в настоящем описании. Методы оценки дозировки для людей, основанные на указанной информации, хорошо известны в фармацевтике (см., например, Уадпег, 6.6. РНаттасоктейск £ог (Не РНагтасеибса1 8аепШ1. ТесНпотю, Шс., Ьапсайет, РА 1993).
Вводимые пациенту композиции находятся в форме описанных здесь фармацевтических композиций. Их можно стерилизовать известными методами стерилизации, а можно стерильно отфильтровать. Полученные водные растворы можно упаковать для использования как они есть, а можно лиофилизировать, после чего смешать лиофилизированный препарат со стерильным водным раствором перед введением.
Терапевтическое дозирование соединений настоящего изобретения зависит, например, от конкретного применения, от режима введения соединения, от состояния здоровья пациента и от мнения лечащего врача. Например, в случае внутривенного введения доза, как правило, находится в интервале приблизительно от 20 до 2000 мкг на 1 кг веса тела, предпочтительно приблизительно от 20 до 500 мкг, более предпочтительно приблизительно от 100 до 300 мкг на 1 кг веса тела. Для интраназального введения предпочтительный интервал доз составляет, в общем случае, приблизительно от 0,1 пг до 1 мг на 1 кг веса тела. Эффективные дозы можно экстраполировать из кривых зависимости доза-ответ, полученных в тестовых системах ίη νίΙΐΌ или на животных моделях.
Соединения настоящего изобретения способны также связываться или проявлять антагонизм по отношению к α6βι-, α9βι-, α4β7-, α6β2-, а^-интегринам (хотя в настоящем изобретении предпочтительны α4βι- и α^βι-интегрины). Соответственно соединения изобретения эффективны также для профилактики или изменения симптомов, расстройств или заболеваний, индуцируемых связыванием этих интегринов с их соответствующими лигандами.
Например, международная публикация XVΟ 98/53817, опубликованная 3 декабря 1998 г. (содержание которого включено сюда по ссылке во всей своей полноте), и процитированные в ней работы описывают расстройства, опосредованные α4β7. В этих ссылках описан также анализ определения антагонизма а^-зависимого связывания с протеином сшивания УСАМбд.
Кроме того, соединения, связывающие α6β2- и а^-интегрины, особенно эффективны для лечения астмы и связанных с ней заболеваний легких, см., например, работу М.Н. Огаукоп е( а1., ί. Ехр. Меб. 1998, 188(11), 2187-2191. Соединения, ингибирующие α^-интегрин, эффективны также для лечения системной красной волчанки (см., например, АпНпШ КНеит. 1998, 41(8), 1456-1463); болезни Крона, язвенного колита и воспалительного заболевания кишечника (ΓΒΌ) (см., например, Ό. Е1е\уаи1 е( а1., 8сапб ί. 6а51гоеп1его1. 1998, 33(1) 743-748); синдрома Сьоргена (см., например, и. Кгопе1б е( а1., 8сапб I ОаЧгоеЩегоН 1998, 27(3), 215-218); и ревматоидного артрита (см., например, 8сапб I ОаМгоеШегоН 1996, 44(3), 293-298). Связывающие α6βι соединения могут быть эффективны также для профилактики фертилизации (см., например, Н. СНеп е( а1., СНет. Вю1. 1999, 6, 1-10).
В соответствии с другим аспектом изобретения описанные здесь соединения и композиции можно использовать для ингибирования миграции иммунных клеток из кровотока в центральную нервную систему в случае, например, множественного склероза, или в области, которые приводят к воспалительному разрушению миелина. Предпочтительно, чтобы эти реагенты ингибировали также миграцию иммунных клеток так, чтобы при этом ингибировалось разрушение миелинового слоя и усиливалась ремиелинизация. Реагенты могут также не допускать разрушение миелинового слоя и стимулировать ремиелинизацию центральной нервной системы для врожденных метаболических расстройств, при которых инфильт
- 22 015388 рация иммунных клеток влияет на развитие миелиновой оболочки в основном в ЦНС. Предпочтительно, чтобы реагенты уменьшали также паралич при введении субъекту, страдающему от паралича, индуцированного связанным с демиелинизацией заболеванием или состоянием.
Воспалительные заболевания, показанные для лечения описанными здесь композициями, соединениями и способами, включают общие состояния, относящиеся к демиелинизации. Гистологически, миелиновые нарушения бывают либо демиелинизирующими, либо дисмиелинизирующими. Димиелинизация означает разрушение миелина. Дисмиелинизация означает дефективное образование или поддержание миелина, вызванное дисфункцией олигодендроцитов. Предпочтительно, чтобы описанные здесь композиции и методы обеспечивали лечение заболеваний и состояний, связанных с демиелинизацией, и помощь при дисмиелинизации. Другие заболевания или состояния, показанные для лечения, включают менингит, энцефалит, повреждения спинного мозга и состояния, которые в общем индуцируют димиелинизацию в результате развития воспалительного ответа.
Описанные здесь композиции, соединения и коктейли предназначены для лечения состояний и заболеваний, связанных с демиелинизацией. Такие заболевания и состояния включают, но не ограничиваются, рассеянный склероз, врожденные метаболические расстройства (например, фенилкетонурия, болезнь Тея-Сакса, болезнь Ниманна-Пика, болезнь Гоше, болезнь Гурлера, болезнь Краббе и другие лейкодистрофии), невропатии с ненормальной миелинизацией (например, болезнь Гийена-Барре, хроническая иммунная демиелинизирующая полиневропатия (СГОР), мультифокальная СЮР, синдром антиМАО, синдром ОЛЬОР, синдром анти-сульфатидных антител, синдром анти-ОМ2 антител, синдром РОЕМ8, периневрит, синдром антител !дМ анти-ОО1Ь), связанную с действием лекарств демиелинизацию (например, вызванную введением хлорквина, ЕК506, пергексилина, прокаинамида и зимелдина), другие наследственные связанные с демиелинизацией состояния (например, углевод-дефицитный гликопротеин, синдром Коккейна, врожденная гипомиелинизация, врожденная мышечная дистрофия, болезнь Фарбера, синдром Маринеско-Шегрена, метахроматическая лейкодистрофия, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, болезнь Рефсума, состояния, связанные с прионами и болезнь Салла), а также другие связанные с демиелинизацией состояния (например, менингит, энцефалит или повреждения спинного мозга) или заболевания.
Для исследования этих заболеваний ίη νίνο существует множество моделей. Например, животные модели включают, но не ограничиваются, следующие._____________________________
Модель болезни
Экспериментальный аллергический энцефаломиелит (ЭАЭ)
Миелин -ол и годе н дроцитн ы й гликопротеин (МОГ) индуцированная ЭАЭ
ΤΝΕ-σ трансгенная модель демиелинизации
Животные
Мышь, крыса, морская свинка
Крыса
Мышь
Рассеянный склероз.
Наиболее распространенным демиелинизирующим заболеванием является рассеянный склероз, но к дефициту или нарушениям миелинизации приводит и множество других метаболических и воспалительных заболеваний. Рассеянный склероз (РС) представляет собой хроническое неврологическое заболевание, проявляющееся в ранней юности и с течением времени часто приводящее к инвалидности. Только в Соединенных Штатах насчитывается около 350000 случаев РС. Если не считать травм, то РС является наиболее частой причиной неврологической инвалидности у взрослых людей.
Причину РС еще предстоит определить. Заболевание характеризуется хроническим воспалением, демиелинизацией и глиозисом (рубцевание). Демиелинизация может приводить как к негативным, так и к позитивным эффектам на проводимость аксонов. Негативные нарушения проводимости включают замедленную проводимость аксонов, временную блокаду проводимости в присутствии высоко- но не низкочастотных последовательностей импульсов, а также полную блокаду проводимости. Позитивные нарушения включают эктопическую генерацию импульсов, спонтанную или после механического напряжения, а также ненормальные коммуникации между демиелинизованными экзонами.
Показано, что Т-клетки, реактивные против миелиновых белков, либо основного белка миелина (ОБМ), либо миелинового протеолипидного белка (ПЛП), опосредуют воспаление ЦНС в экспериментальном аллергическом энцефаломиелите. У пациентов также наблюдался повышенный уровень иммуноглобулина Дд) в ЦНС. Возможно также, что некоторые повреждения тканей, наблюдаемые при РС, опосредованы выработкой цитокинов активированными Т-клетками, макрофагами и астроцитами.
В настоящее время 80% пациентов с диагнозом РС живут еще 20 лет после начала болезни. Методы терапии, позволяющие взять ее под контроль, включают (1) лечение, направленное на модификацию хода болезни, включая лечение острого обострения, а также на долгосрочное подавление болезни; (2) лечение симптомов РС; (3) профилактика и лечение медицинских осложнений и (4) обслуживание сопровождающего персонала и решение социальных проблем.
- 23 015388
Начало РС может протекать драматично, а может быть таким незаметным, что пациент даже не обращается за медицинской помощью. Самые распространенные симптомы включают слабость в конечностях, вызванное невритом оптического нерва затуманивание зрения, сенсорные нарушения, диплопию и атаксию. В дальнейшем заболевание может протекать по трем общим направлениям: (1) рецидивирующий РС, (2) хронический прогрессирующий РС и (3) неактивный РС. Рецидивирующий РС характеризуется повторяющимися приступами неврологической дисфункции. Обычно они продолжаются несколько дней или недель, после чего может наступить полное, частичное восстановление или восстановления не происходит. Промежутки между приступами могут продолжаться от нескольких недель до месяцев между максимальными проявлениями симптомов, хотя в редких случаях продолжительность ремиссии может достигать двух или более лет. Хронический прогрессирующий РС протекает как постоянное прогрессирующее ухудшение состояния без периодов стабилизации или ремиссии. Такая форма развивается у пациентов, страдавших рецидивирующим РС, хотя у 20% таких больных рецидивов не было никогда. Острые рецидивы могут возникать также в ходе прогрессирующего ухудшения.
Третья форма представляет собой неактивный РС. Эта форма характеризуется фиксированным неврологическим дефицитом переменной степени выраженности. У большинства больных неактивным РС в прошлом имел место рецидивирующий РС.
Течение заболевания зависит также от возраста пациента. Например, к числу благоприятных прогностических факторов относятся раннее начало заболевания (исключая детство), рецидивирующий характер и незначительная остаточная инвалидность спустя 5 лет после начала болезни. Напротив, плохой прогноз связывают с поздним началом заболевания (т.е. в 40 лет или старше) и с его прогрессирующим развитием. Эти переменные взаимозависимы, и хронический прогрессирующий РС часто начинается в более позднем возрасте, чем рецидивирующий РС. Вызванная хроническим прогрессирующим РС инвалидность обычно связана с прогрессирующей параплегией или квадриплегией (параличом) и пациентов. В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения пациентов следует предпочтительно лечить в состоянии ремиссии, а не во время рецидива болезни.
Одним специфическим терапевтическим средством лечения пациентов с острым приступом РС является кратковременное применение адренокортикотропных гормонов или пероральных кортикостероидов (например, пероральное введение преднизолона или внутривенное введение метил преднизолона).
Более новые методы лечения РС включают лечение пациентов интерфероном бета-1Ь, интерфероном бета-1а и копаксоном (Сорахопе®, ранее назывался сополимером 1). Показано, что эти три лекарственных средства значительно снижают вероятность рецидива заболевания. Пациент самостоятельно вводит их внутримышечно или подкожно.
Однако ни один из существующих методов лечения не ингибирует демиелинизация, не говоря уже о стимулировании или поддержке спонтанного ремиелинирования или уменьшения паралича. Один из аспектов настоящего изобретения включает лечение РС описанными здесь агентами самостоятельно или совместно с другими стандартными методами лечения.
Врожденные метаболические расстройства.
Врожденные метаболические расстройства включают фенилкетонурию (РКИ) и другие аминоацидурии, болезнь Тея-Сакса, болезнь Ниманна-Пика, болезнь Гоше, болезнь Гурлера, болезнь Краббе и другие лейкодистрофии, влияющие на развитие изолирующей оболочки вокруг нервных волокон, как более подробно описано ниже.
РКИ представляет собой наследственное нарушение метаболизма, вызванное дефицитом фермента фенилаланингидроксилазы. Недостаток фермента приводит к задержке умственного развития, повреждению органов, необычной осанке и может, если РКИ наследуется от матери, сильно осложнить беременность. На мышах разработана модель исследования РКИ. Предпочтительно, чтобы младенцы с диагнозом РКИ находились на диете без фенилаланина (или обедненной этой аминокислотой). Один аспект настоящего изобретения заключается в комбинировании такой диеты с описанными здесь соединениями и композициями с целью профилактики демиелинизации и ремиелинизации клеток, поврежденных заболеванием.
Классическая болезнь Тея-Сакса проявляется приблизительно в возрасте 6 месяцев и приводит к смерти пациента в возрасте около 5 лет. Заболевание вызвано отсутствием фермента гексоаминидазы А (Нех А), который необходим для разложения некоторых содержащихся в жирах веществ в мозге и нервных клетках. В отсутствие фермента эта вещества накапливаются и ведут к разрушению нервных клеток. Еще одна форма дефицита фермента Нех А проявляется позже и называется ювенильной, хронической и взрослой формой этого заболевания. Симптомы болезни напоминают те, что характеризуют классическую болезнь Тея-Сакса. Иногда дефицит фермента проявляется и у взрослых. В настоящее время лечения заболевания/дефицита не существует, практикуется только превентивная мера внутриматочного тестирования зародыша на предмет наличия болезни. Так, описываемые здесь соединения и композиции могут быть эффективны для смягчения или профилактики процесса разрушения нервных клеток у таких пациентов.
Обычно болезнь Ниманна-Пика бывает трех типов: острая инфантильная форма, тип В (менее распространенная, хроническая, не неврологическая форма) и тип С (биохимически и генетически отли
- 24 015388 чающаяся форма заболевания). У нормального человека холестерин клеток поступает в лизосомы для обработки, после чего выделяется из клеток. Показано, что в клетках людей, больных болезнью Ниманна-Пика, вывобождение холестерина из лизосом нарушено. Это ведет к избыточному накоплению холестерина в лизосомах, в результате чего процесс его обработки также нарушается. Показано, что ΝΡί',Ί содержит определенные стерол-чувствительные участки, общие с другими протеинами, что наводит на мысль об их роли в регулировании обмена холестерина. Для типов А и С болезни Ниманна-Пика успешного лечения не существует. Больным формой С рекомендуют следовать низкохолестериновой диете. Таким образом, описанные здесь соединения и композиции могут быть эффективны для ослабления или профилактики процесса разрушения клеток.
Болезнь Гоше представляет собой наследственное заболевание, вызванное генетической мутацией. Обычно этот ген отвечает за фермент глюкоцереброзидазу, расщепляющий в организме жир глюкоцереброзид. У больных болезнью Гоше организм не может правильно генерировать этот фермент, и жир не разрушается. Как и в случае синдрома Тея-Сакса, болезнь Гоше значительно более распространена среди потомков евреев из Восточной Европы (Ашкенази), хотя может поражать представителей любой этнической группы. Среди популяции евреев Ашкенази болезнь Гоше является наиболее распространенным генетическим расстройством и наблюдается у одного человека из 450. В целом эта болезнь поражает приблизительно одного человека из 100000.
Впервые эффективное лечение болезни Гоше стало доступно в 1991 году с появлением заместительной терапии ферментами. Лечение представляет собой внутривенное введение модифицированной формы фермента глюкоцереброзидазы. Предполагается, что описанные здесь композиции и соединения можно использовать самостоятельно или, более предпочтительно, совместно с введением глюкоцереброзидазы, для лечения заболевания у страдающего им субъекта.
Синдром Гурлера, называемый также мукополисахаридозом типа I, включает целый класс похожих заболеваний. Общей характеристикой всех этих заболеваний является накопление мукополисахаридов в фибробластах клеток. Генетически эти заболевания неразличимы. Трансплантация фибробластов и костного мозга не помогает, так что необходимы соединения и композиции, способные ослабить тяжесть заболевания и его развитие. С этой целью субъекту можно вводить описанные здесь соединения и композиции соединений настоящего изобретения.
Болезнь Краббе (называемая также лейкодистрофией глобоидных клеток) представляет собой аутосомальное рецессивное состояние, вызванное дефицитом галактозилцерамидазы (или галактоцереброзидазы), лизосомального фермента, катаболизирующего основной липидный компонент миелина. Во Франции вероятность такого заболевания составляет приблизительно один случай на 150000 рождений. Заболевание приводит к демиелинизации центральной и периферической нервной системы. Обычно болезнь начинается в течение первого года жизни, после чего быстро прогрессирует, но сообщалось также и о детской, юношеской и взрослой формах заболевания с менее интенсивным развитием. Диагноз ставится по результатам ферментативного анализа (дефицит галактозилцерамидазы). Имеется несколько при родных животных моделей заболевания (мышь, собака, обезьяна). Как и у всех лейкодистрофий, у болезни Краббе не существует эффективных методов лечения. Один из аспектов настоящего изобретения связан с использованием описанных здесь соединений и композиций для лечения или ослабления болезни Краббе и других лейкодистрофий.
Лейкодистрофии представляют собой группу наследственных прогрессирующих заболеваний, затрагивающих головной, спинной мозг и периферическую нервную систему. Они включают адренолейкодистрофию (АЬЭ), адреномиелонефропатию (ΑΜΝ), синдром Айкарди-Гутье, болезнь Александера, САСН (т.е. детскую атаксию с гипермиелинизацией центральной нервной системы и утратой белого вещества), САЭА81Б (т.е. церебральную аутосомальную доминантную артериопатию с субкортикальными инфарктами и лейкоэнцефалопатией), болезнь Канавана (дегенерацию губчатого тела), церебральносухожильный ксантоматоз (СТХ), болезнь Краббе (обсуждалась ранее), метахроматическую лейкодистрофию (МЛД), неонатальную адренолейкодистрофию, синдром овариолейкодистрофии, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера (Х-связанную спастическую паралгию), болезнь Рефсума, синдром Ван дер Кнаапа (вакулирующая лейкодистрофия с субкортикальными кистами) и синдром Целлвегера. Не существует эффективного лечения ни для одного из перечисленных заболеваний, не говоря уже о полном выздоровлении. Таким образом, имеется выраженная потребность в средствах для лечения или облегчения симптомов заболевания, таких как описываемые здесь композиции и соединения.
- 25 015388
Невропатии с ненормальной миелинизацией.
Существует множество хронических иммунных полиневропатий, приводящих к демиелинированию у пациентов. Возраст начала заболевания зависит от его конкретного типа. Существует стандартное лечение указанных болезней, его можно сочетать с рассматриваемыми здесь композициями и соединениями. Альтернативно, рассматриваемые здесь композиции и соединения можно использовать самостоятельно. Существующие стандартные методы лечения включают следующие.
Таблица 5
Иммунотерапия Клинические признаки Лечение
Хроническая иммунная демиелинизирующая полиневропатия (СЮР) Начало в возрасте 1-80 лет. Характеризуется слабостью, утратой сенсорных ощущений и гипертрофией нервов. Иммуноподавление Т-клеток преднизоном, циклоспорином А или метотрексатом, иммуноглобулином человека (НЮ), замена плазмы.
Мультифокальная СЮР Начало в возрасте 28-58 лет. Характеризуется асимметричной слабостью, утратой сенсорных ощущений, болезнь медленно прогрессирует или протекает с ремиссией и рецидивами. Иммуноподавление Т-клеток преднизоном и иммуноглобулином человека (ИЮ).
Мультифокальная моторная невропатия (ΜΜΝ) Начало в возрасте 25-70 лет, у мужчин встречается в два раза чаще, чем у женщин. Характеризуется слабостью, атрофией мышц, фасцикуляцией и судорогами, прогрессирующими в течение 1-30 лет. ИЮ, иммуноподавление Т-клеток заменой плазмы, циклофосфамидом, ритуксаном.
Нейропатия со связыванием 1дМ с миелин-ассоциированным гликопротеином (МАС) Начало обычно в возрасте старше 50 лет. Характеризуется утратой сенсорных ощущений (100%), слабостью, нарушением походки, тремором, все эти симптомы медленно прогрессируют. Иммуноподавление В-клеток заменой плазмы, циклофосфамидом, ритуксаном, σ-интерфероном, кладрибином или флударабин преднизоном.
Синдром САЬОР (нарушение походки, аутоантитело, старший возраст, начало, полиневропатия) Нарушение походки с полиневропатией НЮ, замена плазмы, лечение циклофосфамидом.
Синдром РОЕРС (полиневропатия, органомегалия, эндокрмиопатия, М-протеин и изменения кожи), называется также синдромом Кроу-Фука са и болезнью Такатсуки Начало в возрасте 27-80 лет. Характеризуется слабостью, утратой сенсорных ощущений, уменьшением или отсутствием сухожильных рефлексов, нарушениями кожи и другими отклонениями. Остеосклеротические повреждения лечат облучением. Широко распространенные повреждения лечат химиотерапией (мелфалан и преднизон).
Демиелинизация, индуцированная лекарственными средствами и облучением.
Некоторые лекарственные средства и облучение могут вызывать демиелинизацию у субъектов. Лекарства, приводящие к демиелинизации, включают, но не ограничиваются, хлорквин, РК506, пергексилин, прокаинамид и зимелдин.
Облучение также может индуцировать демиелинизацию. Полагают, что обусловленный радиацией вред для центральной нервной системы вызван (1) повреждением структуры сосудов, (2) уничтожением предшественников олигодендроцит-2 астроцитов и взрослых олигодендроцитов, (3) гибелью популяции нервных стволовых клеток в гиппокампе, мозжечке и коре головного мозга, а также распространенными изменениями экспрессии цитокинов. Чаще всего вред от облучения связан с лучевой терапией, применяемой при лечении некоторых видов рака, см. обзор в работе Ве1ка с! а1., 2001, Вг, I. Сапсег 85: 1233-9. Однако значительному облучению могут подвергаться также астронавты (НоремюП, 1994, Αάν. 8расе Ке§. 14: 433-42) и персонал, работающий с радиоактивными веществами.
-26015388
Пациенты, принимающие лекарственные средства, а также случайно или намеренно подвергающиеся действию радиации, могут с пользой для себя принимать одно из соединений или композиций, раскрытых в настоящем изобретении, чтобы не допустить демиелинизацию или вызвать ремиелинизацию.
Состояния с участием демиелинизации.
Дополнительные наследственные синдромы/заболевания, которые приводят к демиелинизации, включают синдром Кокейна, врожденную гипомиелинизацию, болезнь Фабера, метахроматическую лейкодистрофию, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, болезнь Рефсума, состояния, связанные с действием прионов, а также болезнь Салла.
Синдром Кокейна (С8) представляет собой редкое наследственное заболевание, при котором люди оказываются чувствительны к солнечному свету, характеризуются маленьким ростом и проявляют признаки преждевременного старения. В классической форме синдрома Кокейна (типа I) симптомы прогрессируют и, как правило, становятся заметны в возрасте одного года. Синдром типа II характеризуется ранним началом, его признаки видны уже при рождении. Интересно, что в отличие от других связанных с повреждением ДНК заболеваний синдром Кокейна не связан с раком. С8 представляет собой мультисистемное расстройство, вызывающее глубокое нарушение роста тела и мозга, а также прогрессирующую кахексию, ретинальную, кохлеарную и неврологическую денегерацию, а также лейкодистрофию и демиелирующую невропатию без развития рака. После действия ультафиолетового излучения (например, солнечного света) больные синдромом Кокейна не способны на восстановление, сопряженное с транскрипцией. На данный момент идентифицированы два гена, дефективные при синдроме Кокейна, С8А и С8В. Ген С8А содержится в хромосоме 5. Оба гена кодируют протеины, взаимодействующие с компонентами механизма транскрипции и с протеинами, обеспечивающие восстановление ДНК.
В настоящее время не существует лечения или эффективной терапии больных этим синдромом. Таким образом, одним из аспектов настоящего изобретения является лечение указанного заболевания описанными здесь соединениями и композициями.
Врожденная гипомиелинизация имеет несколько названий, в том числе, врожденная дисмиелинизирующая невропатия, врожденная гипомиелинизирующая полиневропатия, врожденная гипомиелинизация (луковая головка), полиневропатия, врожденная невропатия, вызванная гипомиелинизацией, гипомиелинизирующая невропатия и СНЫ. Наследственные периферические невропатии находятся в ряду наиболее распространенных генетических нарушений у людей и представляют собой сложную, клинически и генетически гетерогенную группу заболеваний, приводящих к прогрессирующему разрушению периферической нервной системы. Врожденная гипомиелинизация - только одно заболевание из этой группы. В целом оно включает наследственную невропатию с предрасположенностью к компрессионному параличу, наследственную невральную амиотрофию, синдром Дежерина-Сотта и врожденную гипомиелинизирующую невропатию. Для этих заболеваний не известно способов терапии или эффективного лечения.
Болезнь Фарбера также имеет несколько названий, включая липогрануломатоз Фарбера, дефицит церамидазы, дефицит кислой церамидазы, дефицит АС, дефицит Ν-лаурилсфингозиндеацилазы и Νацилсфингозинамидогидролазы. Как видно из названий, заболевание вызвано дефицитом кислой церамидазы (называемой также Ν-ацилсфингозинамидогидролазой, А8АН). Отсутствие фермента приводит к накоплению несульфонированного кислого мукополисахарида в нейронах и глиальных клетках. Больные этим заболеванием обычно умирают, не дожив до двух лет.
Метахроматическая лейкодистрофия (МЛД) - наследственное заболевание, вызванное дефицитом фермента арилсульфотазы А. Оно входит в группу наследственных заболеваний, называемых лейкодистрофиями, которые влияют на развитие миелиновой оболочки. Существует три формы МЛД: поздняя младенческая, детская и взрослая. В наиболее распространенной поздней младенческой (инфантильной) форме симптомы проявляются в возрасте от 6 месяцев до 2 лет. При рождении младенец обычно выглядит нормальным, но затем утрачивает первоначально приобретенные способности. Симптомы включают гипотонию (низкий мышечный тонус), нарушения речи, утрату умственных способностей, слепоту, ригидность (т.е. неконтролируемое напряжение мышц), конвульсии, нарушения глотания, паралич и деменцию. Симптомы детской формы проявляются в возрасте от 4 до 14 лет и включают ухудшение успеваемости в школе, ухудшение умственных способностей, атаксию, судороги и деменцию. В случае взрослой формы симптомы проявляются после 16 лет, они включают нарушения способности сосредотачиваться, депрессию, психические расстройства, атаксию, тремор и деменцию. Во взрослой форме могут быть и судороги, но они менее распространены, чем в других формах. Во всех формах первым признаком обычно бывают ментальные нарушения.
Болезнь Пелицеуса-Мерцбахера (называемая также перинатальной суданофильной лейкодистрофией) представляет собой Х-связанное наследственное заболевание, вызывающее нарушения в строении протеолипидного протеина. Нарушения приводят к смерти младенца в возрасте приблизительно до года. Известных способов лечения заболевания не существует.
Болезнь Рефсума (также называемая дефицитом оксидазы фитановой кислоты, НегебораБна а1асБса ро1упеипШогш18 или наследственной моторной и сенсорной невропатией IV, ΗΡСN IV) вызвана мута
- 27 015388 циями гена, кодирующего фитаноил-СоА гидроксилазу (РАНХ или ΡΗΥΗ). Основными клиническими проявлениями является пигментная дегенерация сетчатки, хроническая полиневропатия и признаки повреждения мозжечка. Фитановая кислота представляет собой необычную разветвленную жирную кислоту (3,7,11,15-тетраметилгексадекановую кислоту), накапливающуюся в тканях и жидкостях организма пациентов вследствие невозможности ее метаболизма (из-за отсутствия РАНХ). Выполняемый один или два раза в месяц плазмафорез эффективно выводит кислоту из организма, что позволяет ослабить жесткие требования к диете пациентов, направленные на ограничение потребления фитановой кислоты.
Связанные с прионами состояния включают болезнь Герштмана-Штраусслера (Ο8Ό), болезнь Крейцфелдта-Якоба (СЮ), семейную фатальную бессонницу и аберрантные изоформы прионов, которые могут функционировать как инфекционные агенты в таких расстройствах, как куру и почесуха (болезнь овец). Термин прион означает протеиновый инфекционный агент (Рти8тег, 8с1еисе, 216: 136-44, 1982). Связанный с прионами протеин (РКР) подвергается протеолитическому расщеплению с получением амилоидогенного пептида, который полимеризуется с образованием нерастворимых фибрилл.
Болезнь Салла и сиалурии других типов представляют собой заболевания, связанные с нарушениями в хранении сиаловой кислоты. Это аутосомальные рецессивные аутодегенеративные заболевания, протекающие в тяжелых формах в младенческом возрасте (инфантильные формы, т.е. Ι88Ό), а также в виде слабо прогрессирующей формы у взрослых в основном в Финляндии (т.е. болезнь Салла). Основными симптомами являются гипотония, атаксия мозжечка и задержка умственного развития. Эти состояния и заболевания поддаются паллиативному (направленному на смягчение состояния) или мелиаративному лечению (направленному на улучшение состояния).
Другие приводящие к димиелинизации состояния включают постинфекционный энцефалит (называемый также острым диссеменирующим энцефаломиелитом, ΑΌΕΜ), менингит и повреждения спинного мозга. Описанные здесь соединения и композиции могут также использоваться для лечения и этих демиелинизирующих состояний.
Приведенные ниже примеры, демонстрирующие получение и биологические свойства соединений, предназначены для иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не ограничивают его объема. Если не указано иначе, все температуры выражены в градусах по Цельсию.
Примеры
В приведенных ниже примерах использованы следующие сокращения. Если сокращение не определено явным образом, используется общепринятое значение.
А - ангестремы;
Ьг 8 - Ьгоаб 81пд1е1 (широкий синглет);
Β8Α - Ьоуте 8егит а1Ьитш (бычий сывороточный альбумин);
б - боиЬ1е! (дублет);
бб - боиЬ1е! оГ боиЬ1е18 (дублет дублетов);
бс.| - боиЬ1е! оГ с|иаг(е(8 (дублет квартетов);
б8ех1е! - боиЬНе оГ 8ех1е18 (дублет секстетов);
ДМФ - б1те1Ьу1£оттат1бе (диметилформамид);
ЭДТА - е111епеб1атше 1е1гаасебс ас1б (этилендиаминтетрауксусная кислота);
ЕЮАс - е1Ьу1 асе!а!е (этилацетат);
ΕΜ - теауе1епд1Ь оГ ет188юп (длина волны эмиссии, нм);
ЕХ - \тауе1епд111 оГ ехсбаЬоп (длина волны возбуждения, нм);
г - грамм;
ΗΒ88 - Напк'8 Ьа1апсеб 8а11 8о1и1юп (сбалансированный солевой раствор Хенкса);
НЕРЕ8 - 4-(2-11убгохуе111у1)-1-р|рега/тее111апе5и1Гошс ас1б (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота);
ВЭЖХ (НРЬС) - высокоэффективная жидкостная хроматография;
ч - часы;
ί-РгОН - 18о-ргорапо1 (изопропанол);
кг - килограмм;
л - литры;
ЬС/РС - 1к|шб сЬтота1одтарЬу/та88 8рес1то8сору (жидкостная хроматорафия/масс-спектрометрия); т - ти1бр1е1 (мультиплет);
м - квадратные метры;
М - то1аг (молярная концентрация);
мбар - тПИЬаг (миллибар);
мг - миллиграмм;
МГц - мегагерц;
мин - минуты;
мл - миллилитры;
мм - миллиметры;
мМ - миллимолярная концентрация;
- 28 015388 ммоль - миллимоли;
ιηϋδΐη - ш1Шо8то1 (миллиосм);
т/ζ - та55 1о скагде тако (отношение массы к заряду);
Н - нормальная концентрация;
нг - нанограммы;
нм - нанометры;
ЯМР - ядерный магнитный резонанс;
РВ8 - р1ю5р1иИе ЬиГГегеб какие (фосфатно-солевой буферный раствор);
РВ8++ - РВ8 с кальцием и магнием;
ррт - рзг15 рег т111юп (частей на миллион);
р51 - роиибк рег 5С|иаге шск (фунтов на квадратный дюйм);
с.| - диаке! (квартет);
ВГ - ге1епйоп ГасЮг (фактор удержания отношения расстояния, пройденного веществом, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя);
об/мин - оборотов в минуту;
П - гоот 1етрегаШге (комнатная температура);
- 5шд1е! (синглет);
ΐ - 1г1р1е1 (триплет);
ТФУ - 1г1ПиогоасеИс ас1б (трифторуксусная кислота);
ТГФ - 1е1гакубгоГигап (тетрагидрофуран);
ТЬС - Ιΐιίπ 1ауег сктотаФдтарку (тонкослойная хроматография);
УФ - ультрафиолетовое излучение; вес./вес. - отношение веса к весу; вес./об. - отношение веса к объему; мкг - микрограммы;
мкм - микрометры;
мкМ - микромолярная концентрация.
Общие методы.
Флэш-хроматографию проводили на приборе Вю1аде Р1а5к 75Ь с использованием 800 г КР-8И кремнеземовые картриджи (32-63 мкМ, 60 А, 500-550 м2/г). Для аналитической ТЬС приводятся значения КГ, при этом использовались платы 250 мкМ ЕМ 8с1епсе5 8Шса Ое1 60 Е(254) толщиной 240 мкм для нормальной фазы. Спектры ЯМР получили на спектрометре Уалап Оетш1 300 МГц (300 МГц для спектров 'Н и 75 МГц для спектров 13С). Аналитическую ВЭЖХ проводили на хроматографе Адйеп! 1100 8ет1е5 НРЬС с колонкой Ркепотепех Ьипа, 3 мкм, С-18, 30x4,6 мм и с УФ-детекцией при длине волны 210 нм. При этом использовали растворители 0,1% ТФУ в воде и 0,1% ТФУ в ацетонитриле. Стандартная скорость потока составляла 1,5 мл/мин; в соответствии со стандартным способом градиент растворителя менялся от 20% ΟΗ3,ΟΝ до 70% СНзСЫ за 2,33 мин. В соответствии с альтернативным способом скорость потока составляла 2 мл/мин, градиент менялся от 20% СН3СИ до 70% СН3СИ за 1,75 мин. В соответствии с третьим способом скорость потока составляла 1,5 мл/мин, состав растворителя менялся от 20% СН3СИ до 70% СН3СИ за 10 мин, затем 2 мин удерживался на уровне 70%, за 1 мин поднимался до 95% и удерживался на этом уровне еще 2 мин. ЬС/РС проводили на приборе Адйеп! 1100 8еле5 НРЬС с детектором 8еле5 1100 РСЭ с ионизацией электрораспылением (если не указано, что была химическая ионизация). Колонка и условия соответствовали требованиям ВЭЖХ. Спектры 1Н ЯМР амидов, как правило, показывают наличие ротамеров, объединение нескольких пиков отображено в виде дробных значений протонов.
- 29 015388
Пример 1. Получение №-[2-диэтиламино-5-{№-этил-№-(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-Ь-4'- {(пирролидин-1 -ил) карбонилокси} фенилаланина
Этап 1. Получение трет-бутилового эфира №-[2-диэтиламино-5-(№-амино)пиримидин-4-ил]-Ь-4'(пирролидин-1 -ил)карбонилоксифенилаланина 2
Смесь нитропиримидин-карбамата 1 (160,25 г, 0,3035 моль; способ получения, как в публикации \\Ό 03/099809) и 5% Рб/С (15 г, 50/50 вес./вес. с Н2О, Педикка Е 101 В/\) в растворе ТГФ-воды (1 л ТГФ и 50 мл Н2О) перемешивали при комнатной температуре под давлением водорода 414 кПа (60 фунт-сила/дюйм2). 22 ч спустя хроматография ТЬС (50% ЕЮАс/гексан на силикагеле) показала 100% конверсию в продукт реакции. Реакционную смесь профильтровали через целит (200 мл). Колбу, в которой проводили гидрирование, и целитный фильтр промыли свежим безводным ТГФ (500 мл), получив зеленый раствор фильтрата. Фильтрат сконцентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта в виде зеленовато-черного вязкого масла. Роторный испаритель продули азотом, после чего добавили свежий безводный ТГФ (600 мл). Раствор еще раз сконцентрировали под вакуумом и продули азотом (процесс растворения в свежем безводном ТГФ и концентрирования повторили дважды, чтобы азеотропно удалить оставшуюся воду). Полученное вещество сразу же использовали на этапе 2 в связи с его очевидной чувствительностью к воздуху, т//=499,5 для [М+1]+ для желаемого продукта.
Этап 2. Получение трет-бутилового эфира №-[2-диэтиламино-5-{№-трифторацетиламино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина 3
Неочищенный аминопиримидинкарбамат 2, полученный на этапе 1, растворили в 600 мл безводного ТГФ. Раствор охладили до 0°С в атмосфере азота. К холодному раствору амина медленно через шприцевой насос добавили в течение 45 мин трифторуксусный ангидрид (45,5 мл, 1,51 г/мл, 327,3 ммоль). После этого раствору позволили нагреться до комнатной температуры и перемешивали одну ночь. По данным ТЬС (40% ЕЮАс в гексане, силикагель) реакция практически завершилась. Анализ методом ЬС/РС подтвердил завершение реакции и не показал наличия исходных веществ. Реакционную смесь разбавили этилацетатом (1,4 л) и промыли смесью воды (400 мл) и насыщенного водного раствора №аНСО3 (700 мл, 0°С). Органический слой промыли соляным раствором (700 мл) и высушили над Мд8О4 (105 г) с получением светло-коричневого раствора. Сухой раствор профильтровали через подушку из силикагеля (400 мл) с получением зеленовато-серого раствора (коричневые примеси остались на силикагеле). Затем силикагель промыли ЕЮАс (400 мл). Фильтрат сконцентрировали под вакуумом и продули колбу азотом, чтобы уменьшить воздействие кислорода. В систему добавили безводный толуол (600 мл). Раствор сконцентрировали под вакуумом и еще один раз азеотропно перегнали из безводного толуола (400 мл) с получением зеленовато-черного вязкого масла. Колбу продули азотом. Неочищенный продукт с т//=595,5 для [М+1]+ использовали на этапе 3.
- 30 015388
Этап 3. Получение трет-бутилового эфира №[2-диэтиламино-5-{№этил-№трифторацетиламино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси} фенилаланина 4
Полученный на этапе 2 сырой трифторацетамидопиримидин карбамат 3 растворили в ДМФ (350 мл). В систему добавили твердый безводный карбонат калия (79,6 г, 575,7 ммоль); в ступке его растолкли пестиком до мелкого порошка и на ночь оставили под вакуумом при температуре 110°С и давлении 95 кПа (28 дюймов рт.ст.). При комнатной температуре быстро добавили этилиодид (46,5 мл, 89,8 г, 575,7 ммоль). Реакционную колбу плотно закрыли и интенсивно перемешали. После 20-часового перемешивания при комнатной температуре провели проверку завершения реакции (ТЕС, ЬС/РС). Чтобы добиться ее полного завершения, смесь перемешивали еще 18 ч. Проверку провели еще раз, анализ ТЕС показал отсутствие исходных веществ. Смесь разбавили 2,7 л этилацетата и еще раз интенсивно перемешали. Шлам профильтровали через фильтровальную бумагу ШКа1тап № 1, чтобы удалить твердый К2СО3. Органический раствор поместили в 6 л разделительную воронку. В систему добавили воду (2,5 л) и перемешали. Слои разделялись слишком медленно и потому туда добавили еще 200 соляного раствора, чтобы разрушить эмульсию. Органический слой промыли еще 1 л воды и затем 2 л соляного раствора.
Затем органический слой высушили над Мд8О4 (50 г) и М128О.| (200 г). Сухой органический раствор профильтровали через силикагель (700 мл), получив нежно-оливковый зеленовато-коричневый раствор дымчатого оттенка (пурпурно-красные примеси удалили). Силикагель промыли ЕЮАс (800 мл). Органический раствор сконцентрировали, получив оливково-зеленый осадок (194,3 г, 103% неочищенного вещества). В систему добавили гексан (300 мл). Стенки колбы потерли металлическим шпателем, чтобы оттереть твердый продукт, и туда поместили магнитную мешалку. Смесь медленно перемешивали 30 мин, чтобы разрушить твердые частицы, а затем еще 30 мин перемешивали быстро, чтобы получить мелкодисперсную суспензию. Эту суспензию профильтровали через фильтровальную бумагу ШКа!тап № 1 и промыли осадок гексаном (1,2 л), получив белый твердый осадок (141 г, 74% выход, чистота 92% по данным ЬС/РС). Фильтрат сконцентрировали, получив зеленовато-коричневую смолу (33,3 г), которая по данным анализа ТЕС содержала желаемый продукт.
1Н ЯМР (СОС13, 300 МГц) δ, ррт: 7,80 (кажущийся б, 1Н), 7,18 (кажущийся б, АА'ХХ', 2Н), 7,03 (кажущийся бб, АА'ХХ', 2Н), 5,00 (кажущийся б, 1Н), 4,80 (кажущийся 6ς, 1Н), 3,95 (кажущийся дсекстет, 1Н), 3,4-3,7 (т, 8, 5Н), 3,0-3,3 (т, 3Н), 2,78 (секстет, 0,7Н), 1,93 (АА'ВВ', 4Н), 1,38 (кажущийся б, 9Н), 1,24-1,05 (т, 9Н).
В спектре 1Н ЯМР присутствуют ротамеры, что видно из удвоения большинства пиков.
13С ЯМР (СЭС13, 75 МГц) δ, ррт: 166,5; 166,3; 155,6; 152,7; 150,9; 146,0; 145,9; 128,7; 128,3; 125,44; 125,39; 117,18; 77,66 (72,82; 72,28; 71,97 - СВС13); 50,23; 49,74; 41,72; 41,64; 40,16; 39,90; 37,28; 32,60; 32,44; 23,24; 23,17; 21,05; 20,23; 8,50; 8,47; 7,32.
Этап 4. Получение №[2-диэтиламино-5-(№этиламино)пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин трет-бутилового эфира 5
Трифторацетамид 4 (140 г) суспендировали/растворили в метаноле (1,6 л). В систему добавили водный раствор карбоната калия (7% К2СО3) (480 мл) (при этом трифторацетамид частично выпал в осадок и сформировал гель). Реакционную колбу поместили на водяную баню (55°С). Раствор перемешивали при этой температуре, отслеживая ход реакции по ТЬС, в течение 9 ч. Смесь очень осторожно сконцентрировали под вакуумом, собрав 1,2 л метанола. Раствор разбавили водой (200 мл) и соляным раствором (600 мл) и проэкстрагировали Е!ОАс (2 л), получив оранжевый раствор. Слой Е!ОАс промыли водой (1 л) и соляным раствором (400 мл). Каждый из трех полученных после промывания водных слоев реэкстрагировали последовательно 1 л Е!ОАс, получив ярко-желтый раствор. Органические экстракты смешали и высушили над Мд8О4 (126 г). Сухой органический раствор профильтровали через слой основного алюмосиликата (300 мл) и сконцентрировали под вакуумом с получением коричневой смолы. После азеотропной перегонки из 600 мл толуола получили красноватый осадок (117,1 г).
- 31 015388
Этап 5. Получение трет-бутилового эфира \-|2-диэтиламино-5-!\-этил-\-(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси}фенилаланина 6
в
Аминопиримидин 5 (117,1 г, 222,2 ммоль) растворили в безводном ТГФ (1,5 л) и добавили основание Кунига, диизопропилэтиламин (115 мл, 3 экв., 666,6 ммоль). Раствор охладили в атмосфере азота до 0°С. Колбу закрыли воронкой с уравновешиванием давления, в нее поместили 3-фуроил хлорид (32 г; Уашашо1о & Магиока; Т Ат. СНет. 8ос., 1981, 103, 6133-6136) в ТГФ (90 мл). Этот раствор медленно в течение 2 ч добавили к холодному раствору амина. Реакционной смеси позволили медленно охладиться до комнатной температуры и перемешивали 36 ч. Затем смесь разбавили ЕЮАс (2 л) и промыли дважды 0,2 N лимонной кислоты (1,2 л и 1,0 л), один раз соляным раствором (1,8 л) и один раз насыщенным водным раствором ΝηΙΙΓ03 (1,3 л). Яркий оранжево-розовый органический раствор высушили над Νη3803 (250 г) и Мд8О4 (51 г). Сухой раствор профильтровали через силикагель (1 л), а затем промыли колбу и силикагель ЕЮАс (1 л). Раствор сконцентрировали под вакуумом. В процессе упаривания выпал белый кристаллический осадок. После полного концентрирования раствора получили осадок оранжевого, розового и белого цветов. К нему добавили эфир (400 мл) и гексан (500 мл). Суспензию тщательно перемешали и профильтровали через фильтровальную бумагу АЧштаи № 1, получив твердый осадок персиково-розового цвета и ярко-красный фильтрат. Осадок промыли гексаном (500 мл), эфиром (800 мл) и еще раз гексаном (400 мл), получив светлый оранжево-персиковый продукт. Фильтрат и промывные воды смешали, сконцентрировали и оставили для последующего использования. Твердый осадок высушили в вакуумной печи при температуре 60°С в течение 2 дней в вакууме под давлением 95 кПа (28 дюймов рт.ст., или 49 атм), получив 100 г продукта. По данным ЕС-РС чистота осадка составляла 92%. Сырой эфир 6 очистили хроматографией на 2 л (1 кг) силикагеля, который был предварительно разболтан с 3 л СН2С12. Полученный эфир персикового цвета растворили в СН2С12 (200 мл) и нанесли на 2 л колонку с силикагелем. Колонку элюировали СН2С12 (3л), 50% ЕЮАс в гексане (4 л) и 75% ЕЮАс в гексане (4л). Через несколько минут требуемый эфир начал кристаллизоваться из нескольких фракций ЕЮАс-гексан. Согласно данным ТЕС фракции были чистыми, после чего их сконцентрировали, получив белый твердый осадок (82,5 г, чистота >99% поданным ЬС/РС). Это чистое вещество подвергли заключительной стадии снятия защиты. Фракции, которые по данным ТЕС содержали примеси, смешали с остатком от первоначальных промывок фильтратом/гексаном и эфиром. Это вещество подвергли флэшхроматографии подобно тому, как было описано выше, и получили светлый твердый осадок персикового цвета (13,2 г; тА=621,5 для [М+1]+).
1Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δ, ррт: 7,58 (кажущийся ά, 1Н), 7,35-6,90 (кажущийся АВ перекрывается АВХ, 6Н), 6,45 (кажущийся ά, 1Н), 5,25 (кажущийся ά, 1Н), 4,85 (кажущийся άς, 1Н), 4,05 (кажущийся октет, 1Н), 3,7-3,4 (т, 8Н), 3,0-3,3 (т, 2,5Н), 2,90 (секстет, 0,5Н), 1,93 (АА'ВВ', 4Н), 1,38 (кажущийся ά, 9Н), 1,24-1,05 (т, 9Н).
Спектр 1Н ЯМР показывает наличие ротамеров, что видно из удвоения большинства пиков.
Этап 6. Получение №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]Е-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина.
К эфиру трет-бутила 6 этапа 5 (82,5 г, 132,7 ммоль) добавили муравьиную кислоту (2 л). Полученный раствор нагревали одну ночь при 50°С. Анализ ТЕС подтвердил завершение реакции и раствор сконцентрировали в вакууме. К сырому продукту добавили воды (~200 мл) и смесь сконцентрировали досуха. Затем добавили еще 150 мл воды, после чего неочищенный продукт опять сконцентрировали под вакуумом. Полученный белый осадок сконцентрировали из 1Рг0Н и дважды из безводного ТГФ, затем высушили на роторном испарителе при температуре 45°С и давлении 35-40 мбар (26-30 Тогг). Сушку проводили в течение ночи и получили 90 г белого твердого вещества. По данным ЬС/РС сырой продукт был чистым на 97,7%.
1Н ЯМР (СО3ОО, 300 МГц) δ, ррт: 7,65 (§, 0,55Н), 7,45 (§, 0,45Н), 7,38 (т, 2Н), 7,25(ά, 1,31-1), 7,18 (ά, 1Н), 7,05 (ά, 1,2Н), 6,90 (ά, 1Н), 6,55 (§, 0,55Н), 6,22 (широкий §, 0,45Н), 4,9-4,8 на пик образца накладывается остаточный пик растворителя, 4,10 (кажущийся септет, 1,1Н), 3,7 (гл, 3,3Н), 3,58 (т, 7Н), 3,452,9 (т, 6Н) 2,78 (кажущийся секстет, 0,7Н), 1,90 (АА'ВВ', 4,5Н), 1,85 (т 3,16Н), 1,23-1,0 (т, 10,3Н).
13С ЯМР ΟΕΌ30Ό, 75 МГц) δ, ррт: 169,6; 169,2; 160,8; 153,9; 153,6; 148,8; 145,8; 145,2; 145,1; 140,7; 140,5; 138,0; 137,9; 130,3; 130,2; 124,7; 124,6; 116,5; 116,4; 116,2; 116,1; 106,9; 106,6; 105,1; 105,0; 62,4; 50,7; 50,1; 41,0; 37,9; 37,2; 30,5; 20,2; 20,0; 19,4; 6,9; 68; 6,1; 5,9.
Соединения из описанных ниже примеров 2-7 были получены аналогично примеру 1.
- 32 015388
Пример 2. Получение (8)-2-(2-(диэтиламино)-5-(Н-этил-2,2,2-трифторацетамидо)пиримидин-4иламино)-3-(4-(пирролидин-1 -карбоксилоилокси)фенил)пропановой кислоты
1Н ЯМР (300 МГц, СПэОП) 51,03 (1,5Н, !, 1=7,2 Гц), 1,10-1,28 (7,5Н, т), 1,98 (4Н, т), 2,67-2,85 (0,5Н, т), 2,90-3,05 (0,5Н, т), 3,05-3,38 (2Н, т, наложение на пик СПэОП), 3,41 (2Н, т), 3,58 (6Н, т), 3,90-4,11 (1Н, т), 4,85-4,90 (1Н, наложение на пик СО3ОО), 7,02 (2Н, т), 7,26 (2Н, т), 7,66 (1Н, й, 1=8,7 Гц).
НРЬС/РС: МН+=567,1.
Пример 3. Получение Н-[2-диэтиламино-5-{Н-этил-Н-(тиен-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]Ь-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина
Этап 1.
1Н ЯМР (300 МГц, СОС1э) δ 1,09-1,17 (3Н, т), 1,23-1,26 (3Н, т), 1,47 (12Н, т), 1,87-1,99 (4Н, т), 2,80 (0,4Н, Ьгз), 3,10 (1,6Н, т), 3,20 (1Н, т), 3,44 (2Н, !, 1=6,0 Гц), 3,54 (2Н, !, 1=6,0 Гц), 3,88-4,15 (3Н, т), 4,80-4,85 (1Н, т), 6,48 (0,6Н, Ьг з), 6,75 (0,4Н, з), 6,69-7,08 (5Н, т), 7,41 (1Н, з), 7,50 (1Н3 з), 7,78 (0,4Н, Ьг з), 7,85 (0,6Н, Ьг з).
НРЬС/РС: МН+=637,2.
Этап 2.
1Н ЯМР (300 МГц, СБС1э) δ 0,90 (3Н, I, 1=6,9 Гц), 1,10-1,30 (6Н, т), 1,85-1,94 (4Н, т), 2,85-3,24 (2,4Н, т), 3,35 (8,6Н, т), 4,00-4,15 (1Н, т), 4,55 (0,4Н, Ьг з), 4,73 (0,6Н, Ьг з), 5,85 (0,6Н, й, 1=5,7 Гц), 5,87 (0,4Н, Ьг з), 6,60-7,12 (5,4Н, т), 7,39 (1Н, т), 7,60-7,68 (1,6Н, т).
НРЬС/РС: МН+=581,2.
Пример 4. Получение Н-[2-диэтиламино-5-{Н-этил-Н-(тиен-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]Ь-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина.
Этап 1.
1Н ЯМР (300 МГц, СПС13) δ 1,07-1,27 (9Н, т), 1,40 (9Н, з), 1,90 (4Н, т), 3,05-3,24 (3Н, т), 3,43-3,64 (8Н, т), 4,73-4,95 (1Н, т), 5,22 (1Н, т), 6,95-7,14 (7Н, т), 7,41 (0,4Н, з), 7,50 (0,6Н, з).
НРЬС/РС: МН+=637,2.
- 33 015388
Этап 2.
1Н ЯМР (300 МГц, СБС13), δ 0,70-1,4 (9Н, т), 1,81-2,08 (4Н, т), 2,62-4,10 (12Н, т), 4,95 (1Н, Ьг 8), 6,90-8,07 (8Н, т).
НРЬС/РС: МН+=581,2.
Пример 5. Получение К-[2-диэтиламино-5-{К-этил-К-(фуран-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-Ь-4'- {(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланина.
Этап 1.
1Н ЯМР (300 МГц, СЭС1з) δ 1,15-1,28 (9Н, т), 1,37 (3,6Н, 8), 1,42 (5,4Н, 8), 1,93-2,05 (4Н, т), 2,853,15 (2Н, т), 3,19-3,35 (1Н, т), 3,45-3,75 (8Н, т), 3,90-4,15 (1Н, т), 4,76-4,85 (0,4Н, т), 4,90-5,00 (0,6Н, т), 5,15-5,22 (1Н, т), 6,20-6,40 (2Н, т), 6,91-7,18 (4Н, т), 7,39 (1Н, 8), 7,58 (0,4Н, 8), 7,65 (0,6Н, 8).
НРЬС/РС: МН+=621,3.
Этап 2.
1Н ЯМР (300 МГц, СВ3ОО) δ 0,84-1,25 (9Н, т), 1,85-1,92 (4Н, т), 2,70-2,81 (0,5Н5 т), 2,92-3,30 (2,5Н, т, наложение на пик СВ3ОВ), 3,30-3,38 (2Н, т), 3,45-3,59 (6Н, т), 4,04-4,12 (1Н, т), 4,80-4,89 (1Н, наложение на пик СВ3ОВ), 6,18 (1Н, т), 6,58 (0,5Н, Ьг8), 6,78 (0,5Н, Ьг8), 6,83 (1Н, й, 1=8,1 Гц), 6,92 (1Н, й, 1=8,1 Ηζ), 7,06 (1Н, й, 1=8,1 Гц), 7,19 (1Н, й, 1=8,1 Гц), 7,38 (0,5Н, Ьг 8), 7,44 (0,5Н, 8), 7,47 (0,5Н, Ьг 8), 7,48 (0,5Н, 8).
НРЬС/РС: МН+=565,2.
Пример 6. Получение К-[2-диэтиламино-5-{К-этил-К-(трет-бутилкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-Ь-4'- {(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин
Этап 1.
1Н ЯМР (300 МГц, СВС13) δ 1,04-1,11 (18Н, т), 1,40 (4,5Н, 8), 1,42 (4,5Н, 8), 1,96 (4Н, т), 2,46-2,59 (0,5Н, т), 2,72-2,85 (0,5Н, т), 3,00-3,32 (2Н, т), 3,45-3,62 (8Н, т), 3,82-4,15 (1Н, т), 4,82-4,93 (1Н, т), 5,05 (0,5Н, й, 1=7,2 Гц), 5,15 (0,5Н, й, 1=7,2 Гц), 7,08-7,18 (4Н, т), 7,67 (1Н, 8).
НРЬС/РС: МН+=611,3.
- 34 015388
Этап 2.
1Н ЯМР (300 МГц, СВзОБ) δ 0,86-1,20 (18Н, т), 1,87 (4Н, т), 2,32-2,45 (0,5Н, т), 2,56-2,68 (0,6Н, т), 3,05-3,20 (2Н, т), 3,29-3,38 (2Н, т), 3,43-3,52 (6Н, т), 3,8-3,99 (1Н, т), 4,75-4,82 (1Н, наложение на пик СВ3ОВ), 6,90 (2Н, ά, 1=9,0 Гц), 7,15 (2Н, ά, 1=9,0 Гц), 7,43 (1Н, δ).
НРЬС/РС: МН+=555,2.
Пример 7. Получение №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(изопропилкарбонил)амино}пиримидин-4ил]-Ь-4'- {(пирролидин-1 -ил)карбонилокси} фенилаланина.
Этап 1.
1Н ЯМР (300 МГц, СБСГ) δ 0,90-1,21 (15Н, т), 1,38 (9Н, δ), 1,92 (4Н, т), 2,28-2,50 (1Н, т), 2,80-3,16 (3Н, т), 3,41-3,70 (8Н, т), 3,80-3,95 (1Н, т), 4,71-4,85 (1Н, т), 5,05-5,11 (1Н, т), 7,00-7,08 (2Н, т), 7,087,16 (2Н, т), 7,65 (1Н, ά, 1=5,0 Гц).
НРЬС/РС: МН+=597,3.
Этап 2.
1Н ЯМР (300 МГц, СВ3ОВ) δ 0,80-0,98 (9Н, т), 1,15-1,19 (6Н, т), 1,88 (4Н, т), 2,20-2,42 (1Н, т), 2,65-2,83 (1Н, т), 3,08-3,25 (2Н, т), 3,26-3,59 (8Н, т), 3,88-3,97 (1Н, т), 4,70-5,05 (1Н, наложение на пик СВ3ОВ), 6,92 (2Н, ά, 1=7,8 Гц), 7,17 (2Н, т), 7,63 (1Н, ά, 1=5,0 Гц).
НРЬС/РС: МН+=541,3.
Пример 8. Общий метод получения пиримидинил мочевин.
Этап 1.
Трет-бутиловый эфир №[2-диэтиламино-5-{№этиламино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланина (0,436 г, 0,83 ммоль) растворили в СН2С12 (0,35 мл) и насыщенном NаНСО3 (0,7 мл). Раствор охладили до 0°С и после этого интенсивно перемешивали 10 мин. После этого перемешивание прекратили и позволили разделиться несмешиваемым слоям. В нижний слой через шприц добавили фосген (0,52 мл, 4,97 ммоль). Смесь 3 ч перемешивали в атмосфере азота. По завершении реакции органическую фазу отделили и сконцентрировали в вакууме при комнатной температуре. После этого ее растворили в ЕЮАс и промыли деионизированной водой, а затем еще раз дважды проэкстрагировали. Органический слой высушили над №2ВО.| и сконцентрировали в вакууме. Неочищенное полученное масло использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
НРЬС/РС: МН+=589,0.
- 35 015388
Этап 2.
Неочищенный карбамилхлорид (1 экв.) и амин (5 экв.) растворили в ТГФ (0,2М) и одну ночь перемешивали в атмосфере азота. Реакционную смесь сконцентрировали под вакуумом и заново растворили в этилацетате. Органический слой промыли водой, высушили над Ыа28О4 и сконцентрировали в вакууме. Продукты очистили методом ВЭЖХ, а затем растворили в НСООН и выдержали там одну ночь при температуре 40°С.
Растворитель удалили при пониженном давлении, получив продукты реакции.
Соединения примеров 9-11 были получены аналогично примеру 8.
Пример 9. Получение К-[2-диэтиламино-5-{К-этил-Ы-(пиперидин-1-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1-ил)карбонилокси}фенилаланина
1Н ЯМР (300 МГц, СЭС13) δ 1,01 (3Н, ΐ, 1=7 Гц), 1,22 (6Н, ΐ, 1=7 Гц), 1,36 (4Н, т), 1,49 (2Н, т), 1,95 (4Н, т), 3,10-3,66 (16Н, т), 4,86-4,92 (1Н, т), 6,75 (1Н, ά, 1=7,2 Гц), 7,25 (2Н, ά, 1=8,4 Гц), 7,14 (2Н, ά, 1=8,4 Гц), 7,64 (1Н, з).
НРЬС/РС: МН+=582,3.
Пример 10. Получение К-[2-диэтиламино-5-{К-этил-К-(К-этил-Ы-изопропиламинокарбонил)амино } пиримидин-4-ил]-Г-4'- {(пирролидин-1-ил)карбонилокси } фенилаланина
1Н ЯМР (300 МГц, СОС13) δ 1,01 (9Н, Ьгз), 1,21 (9Н, т), 1,90-1,99 (4Н, т), 2,98 (2Н, т), 3,15 (3Н, т), 3,33 (1Н, т), 3,45 (2Н, т), 3,52-3,60 (6Н, т), 3,76 (1Н, т), 4,91-4,97 (1Н, Ьг з), 6,64 (1Н, Ьг з), 7,04 (2Н, ά, 1=8 Гц), 7,14 (2Н, ά, 1=8 Гц), 7,66 (1Н, з).
НРЬС/РС: МН+=584,4.
Пример 11. Получение К-[2-диэтиламино-5-{К-этил-Ы-(3-тиапирролидин-1-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Г-4'-{ (пирролидин-1 -ил)карбонилокси} фенилаланина
1Н ЯМР (300 МГц, СОС13) δ 1,03 (3Н, ΐ, 1=6,6 Гц), 1,21 (6Н, ΐ, 1=6,6 Гц), 1,90-1,99 (4Н, т), 2,84 (2Н, ΐ, 1=6 Гц), 3,09-3,63 (14Н, т), 4,06-4,14 (2Н, ц, 1=7,8 Гц), 4,91-4,97 (1Н, т), 6,64 (1Н, ά, 1=7 Гц), 7,04 (2Н, ά, 1=8,4 Гц), 7,13 (2Н, ά, 1=8,4 Гц), 7,75 (1Н, з).
НРЬС/РС: МН+=586,2.
Пример А. Исследование адгезии а4в1-интегрина: адгезия клеток Зигка!'1™ к фибронектину человеческой плазмы.
Процедура.
96-луночные планшеты (Созΐа^ 3590 Е1А р1а!ез) покрыли человеческим фибронектином, обработав их фибронектином (О1Ьсо/ВКЕ, са1. № 33016-023) в концентрации 10 мкг/мл в течение ночи при 4°С. Затем их блокировали раствором бычьего сывороточного альбумина (В8А; 0,3%) в физиологическом растворе. Клетки 1игка™ (находящихся в логарифмической фазе роста) пометили кальцеином Са1сет АМ в соответствии с инструкциями производителя и суспендировали в концентрации 2х106 клеток/мл в буфере Нерез/физиологический раствор/В8А. После этого клетки подвергали воздействию исследуемых
- 36 015388 и контрольных соединений в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем перенесли в индивидуальные лунки планшета, покрытого фибронектином. Адгезия происходила в течение 35 мин при температуре 37°С. Лунки промыли мягким пипетированием и отсасыванием через пипетку с использованием свежего физиологического раствора. Флуоресценцию, вызванную оставшимися закрепившимися клетками, количественно определяли с использованием флуоресцентного планшетного ридера ЕХ 485/ЕМ 530.
Для приготовления клеточных культур клетки 1игка1™ в стационарной фазе, прежде всего, разделили в соотношении 1:10 в первый день и в соотношении 1:2 на второй день, при этом анализ проводили на третий день. Если анализ проводили на четвертый день, то клетки, разделенные в соотношении 1:10 в первый день, были разделены в соотношении 1:4 на третий день.
Для приготовления планшетов анализа сначала был сделан рабочий раствор О1Ьсо/ВКЬ Нитап ΕίЬгопесЕп (са! № 33016-023) в РВ8++, в концентрации 10 мкг/мл.
Планшеты Сок1аг 3590 Е[А затем покрыли этим раствором 50 мкл/ячейку, процесс проводили 2 ч при комнатной температуре (хотя можно также проводить его в течение ночи при 4°С). Затем раствор из лунок отсосали пипеткой и блокировали буфером Нерек/8а1ше Вц££ег, 100 мкл/ячейку, в течение 1 ч при комнатной температуре с последующим трехкратным промыванием 150 мкл РВ8++.
Различные концентрации соединений были приготовлены путем последовательных разбавлений соединений в соотношении 1:3. Это делалось следующим образом. Для каждого планшета (4 соединения на планшет) в 4 пробирки В1о-Каб ТкегШЬек в держателе ТПегШЬе добавили по 600 мкл. Затем в каждую пробирку добавили достаточное количество соединения, чтобы получить его 2Х концентрацию, используя хорошо известные методы. С помощью Еа1соп Е1ех1р1а!ек в лунки рядов В-О добавили по 100 мкл буфера Нерек/физиологический раствор. Для дальнейшей работы использовали многоканальную пипетку, объем которой задали 180 мкл, а также 4 наконечника. Каждая группа из четырех пробирок была 5 раз перемешана, в первый ряд каждого соединения ввели по 180 мкл 2Х соединения. Начинали добавления с ряда В, а ряд А оставляли пустым. Затем в оставшиеся ячейки ряда А добавили 180 мкл. Чтобы выполнить последовательные разбавления, по 50 мкл раствора из ячейки переносили в ячейку следующей концентрации и 5 раз перемешивали там, меняя наконечники. Разбавления прекратили на ряде Ε. В ряду О соединений не было.
Раствор антитела 21/6 в концентрации 20 мкг/мл в буфере Нерек/физиологический раствор или в сыворотке человека представлял собой положительный контроль, его отложили, чтобы добавить в планшет с суспензией клеток.
Для мечения клеток сначала клетки 1шка!™ в логарифмической фазе роста центрифугировали в 50 мл пробирках (1100 об/мин в течение 5 мин). Затем клетки суспендировали в 50 мл РВ8++, разболтали и ресуспендировали в 20 мл РВ8++. Окрасили клетки, добавив к суспензии 20 мл Са1сет АМ и проинкубировав 30 мин при комнатной температуре. Объем довели до 50 мл буфером Нерек/физиологический раствор, клетки пересчитали, разболтали и ресуспендировали в концентрации 2х106 клеток/мл в буфере Нерек/физиологический раствор или в сыворотке человеческой крови.
Соединения инкубировали следующим образом. В ряды В-Н новой платы Р1ех1р1а!е добавили 65 мкл меченых клеток. После этого в соответствующие ряды добавили по 65 мкл соединений в 2Х концентрации и трижды перемешали. В лунки ряда Н добавили по 65 мкл антитела 2Х-21/6, после чего опять трижды перемешали. После этого платы инкубировали 30 мин при комнатной температуре.
Адгезию фибронектина определяли с помощью флуоресцентного планшетного ридера ЕХ485/ЕМ 530 после выполнения следующих действий. По завершении инкубации клетки перемешивали трижды и 100 мкл суспензии перенесли в покрытые фибронектином планшеты, после чего инкубировали приблизительно 35 мин при 37°С. Каждый планшет промыли, ряд за рядом, мягким пипетированием 100 мкл РВ8++ при комнатной температуре по сторонам каждой ячейки и отсасыванием раствора при наклоне планшета на 90°С. Промывание повторяли три раза. После промывания каждую ячейку заполнили 100 мкл раствора.
Для каждого соединения рассчитали Κ.'50 в присутствии и в отсутствие сыворотки человека. Κ.'50 представляет собой концентрацию, при которой рост или активность ингибированы на 50%. Обнаружено, что ^50 для всех описанных здесь соединений в указанном анализе составляет менее 10 мкМ.
Пример В. Адгезия клеток к фибронектину человеческой плазмы. Анализ насыщения ίη νίίΐΌ для определения связывания соединений-кандидатов с α4β1.
Ниже описано исследование ίη νίΐΐΌ для определения концентрации соединения в плазме, которое необходимо для проявления его активности в модели экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ), описанной в следующем примере, или в других моделях ίη νί\Ό.
Клетки Л.1гка1™ в логарифмической фазе роста промыли и ресуспендировали в нормальной плазме животных, содержащей 20 мкг/мл антитела 15/7 (Уебноск. е! а1., ί. Бю1. СНет. (1995), 270(48):28740).
Клетки 1игка!™ двукратно разбавили либо нормальной плазмой, содержащей известное количество тестируемого соединения, которое вводили в различных концентрациях от 66 до 0,01 мкМ (с использованием стандартного 12-точечного последовательного разбавления для получения стандартной кривой), либо плазмой, полученной из периферической крови животного, принимавшего тестируемое соединение.
- 37 015388
После этого клетки инкубировали 30 мин при комнатной температуре, дважды промыли физиологическим раствором, забуференным фосфатом (РВ8) и содержащим 2% фетальной бычьей сыворотки и по 1 мМ хлорида кальция и хлорида магния (среда для анализа), чтобы удалить несвязавшееся антитело 15/7.
После этого клетки подвергали воздействию фикоэритрин-конъюгированного !дС Рс козы Р(аЬ')2 против мыши ([ттипо1ес11. ^е^Ьгоок, МЕ), которое во избежание какой-либо неспецифической кроссреактивности было адсорбировано путем совместной инкубации с 5% сывороткой из исследуемого животного в отношении 1:200 и проинкубировано 30 мин в темноте при 4°С.
Клетки затем дважды промыли средой анализа и ресуспендировали в ней. После этого их проанализировали стандартным флуоресцентным сортировщиком активированных клеток (РАС8), как описано в работе УеБпоск е! а1., 1. Вю1. Скет., 1995, 270:28740.
Данные затем нанесли на график зависимости флуоресценции от дозы, например, получив обычный график зависимости доза-эффект. Для достижения эффекта в модели ίη у1уо необходима дозировка, которая приводила бы к достижению верхнего плато на кривой.
Данное исследование позволяет определить содержание в плазме, необходимое для насыщения сайтов связывания других интегринов, таких как α9β1, который наиболее сильно напоминает α4β1 (Ра1тег е! а1., 1993, 1 Се11. Вю., 123:1289). Такое связывание позволяет предсказать пригодность веществ ίη у1уо для лечения воспалительных заболеваний, опосредованных а9в1-интегрином, включая, например, гиперчувствительность дыхательных путей и окклюзию, наблюдаемую для хронической астмы, пролиферацию клеток гладкой мускулатуры при атеросклерозе, васкулярную окклюзию после ангиопластии, фиброз и гломерулярные шрамы после перенесенного заболевания почек, стеноз аорты, гипертрофию синовиальных мембран при ревматоидном артрите, а также воспаления и шрамы, возникающие при прогрессировании язвенного колита и болезни Крона.
Таким образом, описанный выше анализ определения связывания с а9в1-интегрином может быть выполнен для клеточной линии карциномы толстой кишки человека, 8ν 480 (АТТС № ССЬ228), трансфицированной кДНК, кодирующей а9-интегрин (Уоко§ак1 е! а1., 1994, к Вю1. Скет., 269:26691), а не с клетками Лика!. В качестве контроля при этом можно использовать клетки 8ν 480, которые экспрессируют как α, так и β1 субъединицы.
Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения направлен на способ лечения у пациентов-млекопитающих заболевания, опосредованного а9в1-интегрином, причем этот способ включает введение указанным пациентам терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения. Такие соединения предпочтительно вводить в виде описанной выше фармацевтической композиции. Эффективная дозировка зависит от возраста, веса и состояния пациента, а опытный врач легко сможет учесть эти факторы. Однако, в соответствии с предпочтительным аспектом, соединения вводят в дозе приблизительно от 20 до 500 мкг/кг в день.
Пример С. Кассетная дозировка и исследование сыворотки для определения биодоступности.
Для определения биодоступности крысы получали кассету, т. е. смесь, из 6 соединений за один раз. Кассета включала 5 тестируемых веществ и стандартное соединение, общая доза составляла 10 мг/кг. Каждое тестируемое и стандартное соединение превращали в натриевую соль добавлением эквимолярного количества 1Н №10Н и растворяли в воде в концентрации 2 мг/мл. При изготовлении кассеты смешивали равные объемы всех шести соединений. Растворы хорошо смешивались, затем их рН доводили до 7,5-9. Готовый раствор получали за день до начала эксперимента и всю ночь перемешивали при комнатной температуре.
Для эксперимента использовали самцов крыс 8ргадие Оа\\!еу (8Ό) из СЬаг1е§ К1уег ЬаЬогаФпек в возрасте 6-8 недель. Эти крысы содержались в условиях постоянного доступа к пище и воде, их держали на карантине не меньше суток. Однако в ночь перед введением кассеты крысам не давали есть приблизительно 16 ч.
Каждую кассету давали четырем крысам. При этом каждой крысе вводили раствор в виде однократной дозы. Объем дозы (5 мл/кг) и время введения регистрировали и крыс кормили через 2 ч после этого.
Образцы крови брали, выполняя пунктуру сердца в следующие моменты времени: 4, 8 и 12 ч. Непосредственно перед взятием крови крыс анестезировали газообразным С02, который им давали 10-20 с. После сбора 12-часового образца крыс подвергали эвтаназии, вызванной С02 асфиксией с последующим смещением шейных позвонков.
Образцы крови до их обработки держали в гепаринизированных пробирках-микроконтейнерах при температуре 4°С. Затем их центрифугировали (10000 об/мин в течение 5 мин), отделяли плазму и хранили в морозильной камере при -20°С до анализа на содержание в них соединений. Содержание исследуемых соединений в плазме определяли в соответствии со следующим протоколом, основанным на методе прямого осаждения плазмы.
Образцы плазмы ίη у1уо готовили в 96-луночном планшете с объемом лунки 1,5 мл, смешивая в указанной последовательности 100 мкл исследуемой плазмы, 150 мкл метанола, а затем перемешивая
- 38 015388 систему на миксере Вортекс в течение 10-20 с. После этого в лунки добавляли 150 мкл внутреннего стандарта концентрации 0,05 нг/мл в ацетонитриле, а затем раствор перемешивали на Вортексе еще 30 с.
Образцы для стандартных кривых готовили в 96-луночном планшете с объемом лунки 1,5 мл, смешивая в указанной последовательности 100 мкл контрольной мышиной плазмы, 150 мкл метанола, а затем перемешивая систему на миксере Вортекс в течение 10-20 с. После этого в лунки добавляли 150 мкл внутреннего стандарта концентрации 0,05 нг/мл в ацетонитриле, а затем раствор перемешивали на Вортексе еще 30 с. К образцам добавили по 0-200 нг (10 концентраций) исследуемых соединений в 50% растворе метанола, что позволяло получить стандартные кривые в диапазоне концентраций от 0,5 до 2000 нг/мл. Раствор затем также перемешивали на Вортексе еще 30 с.
Образцы затем центрифугировали 20-30 мин при 3000 об/мин на микрофуге ЕррепбогГ, после чего 80-90% супернатанта переносили в чистый 96-луночный планшет. Органический растворитель упаривали досуха (в атмосфере Ν2 при 40°С/30-60 мин (/утагкТигЬоуар)).
Осадок растворили в 200-600 мл подвижной фазы (50% СН3ОН/0,1% ТФУ). ЬС/РС/МЗ выполнили на тройном квадрупольном масс-спектрометре РЕ-8с1ехАР1-3000 (8Ν0749707), Регкт-Е1тег, с использованием автосэмплера 8епек200 и насоса ЗЫтаб/и 10 А. Данные собирали с помощью РЕ-8с1ех Апа1ук! (ν 1.1), анализ и количественное выражение данных также проводили на РЕ-8с1ех Апа1ук! (ν 1.1). Образцы объемом 5-50 мкл впрыскивали в колонку ТйегтоНурегкб ЭА8Н-18 с обратной фазой (Кеук!опе 20x20 мм, 5 мкм, Р№: 8823025-701). Использовалась мобильная фаза 25% СН3ОН, 0,1% ТФУ100% СН3ОН, 0,1% ТФУ. Время выполнения одного анализа (пробег) составлял около 8 мин при скорости около 300 мкл/мин.
Площадь под кривой (АИС) рассчитывалась с использованием линейного трапезоидного правила, начиная от !=0 до времени последнего взятия образца !х (см. НапбЬоок оГ Вак1с РйагтасоктеРск, \о1Гдапд А. В1!ксйе1 и Огедогу Ь. Кеагпк, 51Н еб, 1999).
АиС'*·’* = мс„ + Сп+1)/2))/(1п+1 - 1„) [(мкг/мл)ч]
В случае кассетной дозировки, при которой образцы брались на 4, 8 и 12 ч после введения, АИС рассчитывалась с момента времени !=0 до !=12 ч.
Пример Ώ. Модели астмы.
Воспалительные состояния, опосредованные а4(1-интегрином, включают, например, приток (инфлакс) эозинофилов, гиперчувствительность дыхательных путей и окклюзию при хронической астме. Ниже описаны животные модели астмы, используемые для изучения т \·ί\·ό эффектов соединений настоящего изобретения, позволяющих применять их для лечения этого заболевания.
Модель астмы на крысах.
Следующая процедура была описана в работе СРартап, е! а1., Ат I. Векр. Сп!. Саге Меб., 153-4, А219 (1996) и СРартап, е! а1., Ат. I. Векр. Сп!. Саге Меб. 155:4, А881 (1997), обе они включены сюда по ссылке по всей своей полноте.
Овальбумин (ОА; 10 мкг/мл) смешали с гидроксидом алюминия (10 мг/мл) и ввели инъекцией (1.р.) крысам линии Вгомп №огмау в день 0 эксперимента. Инъекции ОА совместно с адъювантом повторили в день 7 и 14. В день 21 сенсибилизированных животных поместили в пластиковые пробирки и обработали аэрозолем из ОА (время экспозиции 60 мин, доза 10 мг/кг) через систему назальной экспозиции. 72 ч спустя животных усыпили пентобарбиталом (250 мг/кг, 1.р.). Легкие были промыты через трахеальную канюлю тремя аликвотами (4 мл) раствора Хенкса (НВ88х10, 100 мл; ЭДТА 100 мМ, 100 мл; НЕРЕ8 1 М, 25 мл; доведено водой до объема 1 л); выделенные после каждого промыва клетки объединены и общий объем полученной жидкости доведен до 12 мл раствором Хенкса. Общее количество клеток пересчитали (8уктех т1сгосе11 соип!ег Р-500, ТОА Меб1са1 Е1ес!готск О!б., 1арап), и сделали мазки путем разбавления полученной жидкости (приблизительно до 106 клеток/мл) и внесения через пипетку ее аликвоты (100 мкл) в центрифугу (Су!окрт, Зйапбоп, и.К.). Мазки высушивали на воздухе, зафиксировали раствором малахитового зеленого в метаноле (2 мг/мл) в течение 5 с, а затем метили эозином О (5 с) и тиазином (5 с) (ЭШ^шск, Вгомпе Ь!б. и.К.), чтобы дифференцировать эозинофилы, нейтрофилы, макрофаги и лимфоциты. Методом световой микроскопии в условиях масляной иммерсии (х100) было определено общее количество клеток на мазок - оно составляло 500 клеток. Соединения настоящего изобретения можно приготовить в виде суспензии с 0,5% карбоксиметилцеллюлозы и 2% Тмееп 80 и ввести перорально крысам, сенсибилизированным к аллергену, овальбумину. Соединения, которые ингибируют аллерген-индуцированное накопление лейкоцитов вдыхательных путях, считаются в этой модели активными.
Модель астмы на мышах.
Соединения тестировались также на мышиной модели острого воспаления легких, соответствующая процедура описана в работах Кипд, е! а1., Ат I. Векр1г. Се11. Мо1. Вю1., 13:360-365 (1995) и 8сйпе1бег, е! а1. (1999). Ат I. Векр1г. Се11 Мо1. Вю1. 20:448-457 (1999), включенные сюда по ссылке во всей своей полноте. Самки мышей В1аск/6 (8-12 недель) были сенсибилизированы в первый день эксперимента внутрибрюшинной инъекцией (1.р.) 0,2 мл смеси ονа/а1ит, содержащей 20 мкг ονа (Огабе 4, З1дта) и 2 мг а1ит для инъекций (А1ит (Р1егсе)). Усиливающая инъекция делалась на 14 день. Астму у мышей вызы
- 39 015388 вали в дни 28 и 29, давая им аэрозоль 1% оуа (в 0,9% физиологическом растворе) в течение 20 мин. Мышей умерщвляли на 30-й день, через 48 ч после первого стимула, после чего собирали образцы бронховеолярных промывных вод (по 3 мл). Эозинофилы подсчитывали методом мечения ЕАСз/НТС. Соединения настоящего изобретения включали в суспензию 0,5% карбоксиметилцеллюлозы и 2% Т\тееп 80 и перорально вводили мышам, сенсибилизированным к аллергену, овальбумину. Соединения, которые ингибировали аллерген-индуцированное накопление лейкоцитов в дыхательных путях активно сенсибилизированных мышей С57ВЬ/6, в данной модели считались активными.
Модель астмы на овцах.
В этой модели реализована процедура, описанная в работе ЛЬгаКат, е! а1., I. С1т, 1пуе§1, 93:776-787 (1994) и ЛЬгаКат, е! а1., Ат I. Ке§р1г. Сп1. Саге Меб., 156:696-703 (1997), обе они включены сюда по ссылке во всей своей полноте. Соединения настоящего изобретения оценивались по результатам внутривенного (в физиологическом растворе), перорального (2% Т\тееп 80, 0,5% карбоксиметилцеллюлозы) и аэрозольного введения овце, гиперчувствительной к антигену Азеапз §иит. Соединения, уменьшающие ранний антиген-индуцированный бронхиальный ответ, и/или блокирующие поздний ответ дыхательных путей, например, оказывающие защитный эффект против антиген-индуцированного позднего ответа и гиперчувствительности дыхательных путей (АНК), считаются в данной модели активными.
Для исследования влияния изучаемых соединений на дыхательные пути брали овцу с аллергией, развивающую ранний и поздний бронхиальные ответы на вдыхаемый антиген Азеапз §иит. Под местной анестезией назальных путей 2% лидокаином в нижний эзофагус через одну ноздрю ввели катетер. После этого через другую ноздрю животным ввели манжетную эндотрахеальную трубку с гибким оптоволоконным бронхоскопом.
Плевральное давление определяли в соответствии с работой ЛЬгаКат (1994). Аэрозоли (состав см. ниже) получали с помощью одноразового медицинского небулайзера, дающего аэрозоль со средним аэродинамическим диаметром 3,2 мкм по данным каскадного импактора Андерсона. Небулайзер подключали к дозиметрической системе, содержащей соленоидный клапан и источник сжатого воздуха (138 кПа). Выход небулайзера был подключен к пластиковой Т-образной трубке, один конец которой присоединяли к инспираторному порту респиратора пистонного типа. Соленоидный клапан активировали в течение 1 с в начале дыхательного цикла респиратора. Аэрозоли вводили при УТ 500 мл и скорости 20 вдохов в минуту. В качестве контроля использовали раствор одного 0,5 бикарбоната натрия.
Для определения бронхиального ответа была сгенерирована кумулятивная кривая доза-ответ на карбахол в соответствии с работой ЛЬгаКат (1994). До и после начала лечения делали бронхиальные биопсии, ее делали также через 24 ч после действия антигена. Бронхиальные биопсии также выполняли в соответствии с работой ЛЬгаКат (1994).
В соответствии с работой ЛЬгаКат (1994) можно также выполнить исследование адгезии альвеолярных макрофагов ΐη νίίΓΟ и подсчитать процент связавшихся клеток.
Состав аэрозолей.
Раствор исследуемого соединения в 0,5% бикарбонате натрия/физиологическом растворе (вес./об.) в концентрации 30,0 мг/мл готовили следующим образом.
А. Приготовление 0,5% маточного раствора бикарбоната натрия в физиологическом растворе: 100 мл.
Ингредиент Грамм/100 мл Конечная концентрация
Бикарбонат натрия 0,5 г 0,5%
Физиологический раствор доведение до 100 мл Доведение до 100%
Процедура.
1. Поместить 0,5 г бикарбоната натрия в 100 мл мерную колбу.
2. Добавить около 90 мл физиологического раствора и сонировать до растворения.
3. Довести до 100 мл физиологическим раствором и тщательно перемешать.
В. Приготовление раствора исследуемого соединения в концентрации 30 мг/мл: 10 мл.
Ингредиент Грамм/10,0 мл Финальная концентрация
Исследуемое соединение 0,300 г 30,0 мг/мл
0,5% маточный раствор бикарбоната натрия в физиологическом растворе доведение до 10,0 мл доведение до 100%
Процедура.
1. Поместить 0,300 г исследуемого вещества в 10,0 мл мерную колбу.
2. Добавить около 9,7 мл 0,5% маточного раствора бикарбоната натрия в физиологическом растворе.
- 40 015388
3. Сонировать до полного растворения исследуемого соединения.
4. Довести до 10,0 мл маточным раствором бикарбоната натрия в физиологическом растворе и тщательно перемешать.
Пример Е. 10-Дневное исследование токсичности на мышах С57В6.
Целью проведенного 10-дневного исследования было определение токсичности соединений настоящего изобретения на самках мышей С57В6. Соединения вводились методом принудительного кормления в пяти различных концентрациях: 0 (контроль, содержащий только носитель), 10, 30, 100, 300 и 1000 мг/кг (трк), вещество в каждой концентрации вводили пяти мышам. Объем введения для всех концентраций составлял 10 мл/кг. Растворы и суспензии веществ готовили в 2% Тетееп 80 в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе (СМС), причем каждые два-три дня готовили свежие растворы или суспензии. Жизненные показатели, по которым проводили мониторинг, включали вес тела (в дни 1, 2, 3, 5, 7, 8 и 11), ежедневные клинические наблюдения (1-2 день) и периодически проводимую (в дни 1, 2 и 9) группу функциональных наблюдений.
В конце эксперимента образцы крови собирали методом пунктуры сердца и исследовали на предмет клинической патологии (гематология и клиническая химия) и содержания препаратов. Образцы крови с ЭДТА анализировали на общее количество белых кровяных клеток, красных кровяных клеток, гемоглобина, гематокрит, эритроцитарные срезы (МСУ, МСН, МСНС), на тромбоциты, а также проводили дифференциальный анализ на компоненты белых кровяных клеток: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы. Гепаринизированные образцы плазмы анализировали на наличие аланинтрансаминазы, аспартаттрансаминазы, щелочной фосфатазы, общее содержание билирубина, альбумина, протеина, кальция, глюкозы, азота мочи, креатинина, холестерина и триглицеридов.
После сбора крови труп вскрывали, и взвешивали органы (печень, селезенку, почки, сердце и тимус). Собирали и фиксировали в формалине образцы тканей; мозг, слюнные железы, тимус, сердце, легкие, печень, почки, надпочечники, селезенку, желудок, двенадцатиперстную кишку, подвздошную кишку, толстую кишку и матку/яичники. Ткани контрольных животных, получавших только носитель, а также животных из групп 300 и 1000 трк разрезали на Н & Е - окрашенные срезы и изучали на предмет появления гистопатологических повреждений.
Изменения веса тела, абсолютные и относительные веса органов и результаты клинических патологических исследований анализировали на предмет наличия статастически значимых различий по сравнению с контрольными животными. Для этого использовали множественный тест сравнения Дуннета и программное обеспечение РгЦш. Результаты группы функциональных наблюдений анализировали на наличие значимых различий точными тестами Дуннета и Фишера, а влияние соединений на тренды определяли корреляционным тестом Кохрана-Мантела-Хензеля с использованием программного обеспечения 8А8.
Соединения настоящего изобретения в составе обычных препаратов для перорального введения оказались активными в данной модели.
Пример Р. Индуцированный адъювантом артрит у крыс.
Индуцированный адъювантом артрит (А1А) представляет собой модель на животных, пригодную для исследования ревматоидного артрита (КА), который индуцируют введением М. ТиЬегси1о818 в основание хвоста крыс Ье\\15. На 10-15 день после инъекции у животных развивается тяжелый прогрессирующий артрит.
В общем случае, соединения тестируют на способность изменять опухание задних лап и повреждение костей, вызванное отеком у крыс, индуцированным адъювантом. Для количественного описания вызванного А1А ингибирования задних лап определили две фазы воспаления: (1) первичное и вторичное воспаление задней лапы, в которую делали инъекцию, и (2) вторичное воспаление задней лапы, в которую не делали инъекцию, оно обычно начинается приблизительно через 11 дней после индукции воспаления в лапе, в которую была сделана инъекция. Снижение воспалительного процесса последнего типа обычно является показателем иммуносупрессивной активности (способности подавлять иммунный ответ). С£. СКапд. АйЬ. ККеит., 20, 1135 1141 (1977).
Животные модели КА, такие как А1А, дают возможность исследовать клеточные процессы, принимающие участие в ранних стадиях заболевания. На ранних этапах развития адъювантного артрита усилена экспрессия СЭ44 макрофагами и лимфоцитами, а экспрессия ЬРА 1 усиливается на поздних этапах развития заболевания. Понимание взаимодействия между прилипающими к эндотелию молекулами и самим эндотелием на ранних этапах адъювантного артрита может привести к значительно прогрессу в разработке методов лечения КА.
Следующие ниже соединения характеризуются значением 1С50, меньшим приблизительно 10 мкМ, в фибронектиновом анализе, описанном в примере А:
№|2-диэтиламино-5-{№этил-№(трифторацетил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1 ил)карбонилокси}фенилаланин;
№|2-диэтиламино-5-{№этил-№(изопропилкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланин;
№|2-диэтиламино-5-{№этил-№(трет-бутилкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1
- 41 015388 ил)карбонилокси} фенилаланин; №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(пиперидин-1-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(№этил-№изопропиламинокарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-№этил-№(тиен-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланин;
N-[2-диэтиламино-5-{№этил-№(3 -тиапирролидин-1 -илкарбонил)амино } пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланина трет-бутиловый эфир;
№[2-диэтиламино-5-{№этил-№(трифторметилкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина трет-бутиловый эфир;
N-[2-диэтиламино-5-{№этил-№(трет-бутилкарбонил)амино } пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{ (пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир и №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланина трет-бутиловый эфир.
Выше были проиллюстрированы и описаны предпочтительные аспекты изобретения, однако необходимо понимать, что оно могут подвергаться различным модификациям, не выходя за рамки настоящего изобретения.

Claims (29)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Пиримидиниламидные соединения общей формулы I где К1 выбран из группы, включающей С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил, гетероарил- и -ΝΚ5Κ6, где К5 и К6 независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил, или К5 и К6 совместно с атомом азота, с которым они связаны, формируют гетероцикл;
    К2 представляет собой С1-С4-алкил;
    К3 и К4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл;
    или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры.
  2. 2. Соединения по п.1, у которых группа -ОС(О)НК.3К4 находится в пара-положении фенильного цикла.
  3. 3. Соединения по п.2, у которых К3 и К4 совместно с атомом азота, с которым они связаны, образуют пирролидинил.
  4. 4. Соединения по п.3, у которых К2 представляет собой этил.
  5. 5. Пиримидиниламидные соединения общей формулы II где К7 выбран из группы, включающей С1-С4-алкил, С1-С4-галогеналкил и гетероарил;
    - 42 015388
    К8 представляет собой С1-С4-алкил;
    К9 и К10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл; или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры.
  6. 6. Соединения по п.5, у которых группа -ОС(О)\1К91К10 находится в пара-положении фенильного цикла.
  7. 7. Соединения по п.6, у которых К9 и К10 совместно с атомом азота, с которым они связаны, обра зуют пирролидинил.
  8. 8. Соединения по п.7, у которых К8 представляет собой этил.
  9. 9. Соединения по п.8, у которых К7 представляет собой С1-С4-алкил.
  10. 10. Соединения по п.9, у которых К7 выбран из группы, включающей изопропил и трет-бутил.
  11. 11. Соединения по п.8, у которых К7 представляет собой С1-С4-галогеналкил.
  12. 12. Соединения по п.11, у которых К7 представляет собой трифторметил.
  13. 13. Соединения по п.8, у которых К7 представляет собой гетероарил.
  14. 14. Соединения по п.13, у которых К7 выбран из группы, включающей фуран-2-ил, фуран-3-ил, тиен-2-ил и тиен-3-ил.
  15. 15. Пиримидиниламидные соединения общей формулы ΙΙΙ
    О ш
    1112 1112 где К и К независимо представляют собой С1-С4-алкил или К и К совместно с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл;
    К13 представляет собой С1-С4-алкил;
    К14 и К15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл;
    или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры.
  16. 16. Соединения по п.15, у которых группа -ОС(О)КК.14К.15 находится в пара-положении фенильного цикла.
  17. 17. Соединения по п.16, у которых К14 и К15 совместно с атомом азота, с которым они связаны, образуют пирролидинил.
  18. 18. Соединения по п.17, у которых К13 представляет собой этил.
  19. 19. Соединения по п.18, у которых К11 и К12 независимо представляют собой С1-С4-алкил.
  20. 20. Соединения по п.19, у которых К11 представляет собой этил, а К12 - изопропил.
  21. 21. Соединения по п.18, у которых К11 и К12 совместно с атомом азота, с которым они связаны, об разуют гетероцикл.
  22. 22. Соединения по п.21, у которых указанный гетероцикл выбран из группы, включающей пиперидин-1-ил и 3-тиапирролидин-1-ил.
  23. 23. Пиримидиниламидные соединения, представляющие собой соединения, выбранные из группы, включающей
    N-[2-диэтиламино-5-{№этил-Ы-(трифторацетил)амино } пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
    N-[2-диэтиламино-5-{№этил-№(изопропилкарбонил)амино } пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
    N-[2-диэтиламино-5-{№этил-Ы-(трет-бутилкарбонил)амино } пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
    №[2-диэтиламино-5-{№этил-Ы-(фуран-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланин;
    Ν- [2-диэтиламино-5-{№этил-Ы-(пиперидин-1-илкарбонил)амино } пиримидин-4-ил ]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
    №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(№этил-№изопропиламинокарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси} фенилаланин;
    №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
    №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(тиен-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси} фенилаланин;
    №[2-диэтиламино-5-{№этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Е-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси} фенилаланин;
    - 43 015388 №[2-диэтиламино-5-Щ-этил-№(3-тиапирролидин-1-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1 -ил)карбонилокси } фенилаланин;
    №[2-диэтиламино-5-Щ-этил-№(тиен-2-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир;
    №[2-диэтиламино-5-Щ-этил-№(трифторметилкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'{(пирролидин-1-ил)карбонилокси} фенилаланина трет-бутиловый эфир;
    №[2-диэтиламино-5-Щ-этил-№(трет-бутилкарбонил)амино }пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин-1ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир и №[2-диэтиламино-5-Щ-этил-№(фуран-3-илкарбонил)амино}пиримидин-4-ил]-Ь-4'-{(пирролидин1-ил)карбонилокси}фенилаланина трет-бутиловый эфир, или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры.
  24. 24. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения по пп.1-23.
  25. 25. Способ лечения заболевания у людей или животных, опосредованного а4-интегринами, который включает введение человеку или животному фармацевтической композиции по п.24.
  26. 26. Способ по п.25, в котором а4-интегрины представляют собой УЬА-4.
  27. 27. Способ по п.25, в котором указанное заболевание выбрано из группы, включающей астму, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, вызванную СПИДом деменцию, диабет, острый ювенильный приступ диабета, воспалительное заболевание кишечника, язвенные колиты, болезнь Крона, рассеянный склероз, артрит, ревматоидный артрит, последствия трансплантации тканей, метастазы опухолей, менингит, энцефалит, инсульт, травмы мозга, нефрит, ретинит, атопический дерматит, псориаз, миокардиальная ишемия, острое опосредованное лейкоцитами повреждение легких и синдром дыхательной недостаточности у взрослых.
  28. 28. Способ по п.25, в котором указанное заболевание представляет собой воспалительное заболевание.
  29. 29. Способ по п.28, в котором воспалительное заболевание выбрано из группы, включающей узловатую эритему, аллергические конъюктивиты, оптический неврит, увеит, аллергический ринит, анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит, васкулит, синдром Рейтера, системную красную волчанку, прогрессирующий системный склероз, полимиозит, дерматомиозит, грануломатоз Вегнера, аортит, саркоидоз, лимфоцитопению, темпоральный артериит, перикардит, миокардит, застойную сердечную недостаточность, узловатый полиартериит, синдромы гиперчувствительности, аллергию, синдромы гиперэозинофилии, синдром Чурга-Страусса, хроническое обструктивное заболевание легких, пневмониты с гиперчувствительностью, хронический активный гепатит, интерстициальный цистит, аутоиммунную эндокринную недостаточность, первичный цирроз желчного пузыря, аутоиммунную апластическую анемию, стойкий хронический гепатит и тироидит.
EA200800975A 2005-09-29 2006-09-28 ПИРИМИДИНИЛАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ВКЛЮЧАЮЩАЯ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО α4-ИНТЕГРИНАМИ EA015388B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US72235805P 2005-09-29 2005-09-29
PCT/US2006/038009 WO2007041270A1 (en) 2005-09-29 2006-09-28 Pyrimidinyl amide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200800975A1 EA200800975A1 (ru) 2008-08-29
EA015388B1 true EA015388B1 (ru) 2011-08-30

Family

ID=37592431

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200800975A EA015388B1 (ru) 2005-09-29 2006-09-28 ПИРИМИДИНИЛАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ВКЛЮЧАЮЩАЯ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО α4-ИНТЕГРИНАМИ

Country Status (17)

Country Link
US (2) US7511052B2 (ru)
EP (1) EP1940826B1 (ru)
JP (1) JP5101512B2 (ru)
KR (1) KR20080059268A (ru)
CN (1) CN101273034B (ru)
AT (1) ATE493405T1 (ru)
AU (1) AU2006297220B8 (ru)
BR (1) BRPI0616687A2 (ru)
CA (1) CA2624450C (ru)
DE (1) DE602006019296D1 (ru)
DK (1) DK1940826T3 (ru)
EA (1) EA015388B1 (ru)
IL (1) IL190084A (ru)
NO (1) NO20082002L (ru)
NZ (1) NZ567270A (ru)
WO (1) WO2007041270A1 (ru)
ZA (2) ZA200803280B (ru)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4754693B2 (ja) * 1999-01-22 2011-08-24 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド Ｖｌａ−４関連障害を処置するアシル誘導体
AU2006297180A1 (en) * 2005-09-29 2007-04-12 Elan Pharmaceuticals, Inc. Carbamate compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
DK1940826T3 (da) * 2005-09-29 2011-04-18 Elan Pharm Inc Pyrimidinylamidforbindelser, der inhiberer leukocytadhæsion medieret gennem BLA-4
EA017110B1 (ru) * 2006-02-27 2012-09-28 Элан Фамэсьютикэлс, Инк. ПИРИМИДИНИЛСУЛЬФОНАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРИМИДИНИЛСУЛЬФОНАМИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (ВАРИАНТЫ), ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО ИНТЕГРИНОМ α4, СПОСОБ СНИЖЕНИЯ И/ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО КОМПОНЕНТА ЗАБОЛЕВАНИЯ ИЛИ АУТОИММУННОГО ОТВЕТА
HUE047230T2 (hu) * 2006-02-28 2020-04-28 Biogen Ma Inc Gyulladásos és autoimmun betegségek natalizumabbal való kezelésének módszerei
JP2009531304A (ja) * 2006-02-28 2009-09-03 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド α−４阻害剤化合物を用いて炎症性疾患および自己免疫疾患を治療する方法
EP1991267B1 (en) 2006-03-03 2017-12-20 Biogen MA Inc. Methods of treating inflammatory and autoimmune diseases with natalizumab
US8269009B2 (en) 2007-12-07 2012-09-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating liquid tumors
US8367836B2 (en) * 2009-04-27 2013-02-05 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyridinone antagonists of alpha-4 integrins
US20120258093A1 (en) 2009-08-20 2012-10-11 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Vla-4 as a biomarker for prognosis and target for therapy in duchenne muscular dystrophy
EP4152004A1 (en) 2010-01-11 2023-03-22 Biogen MA Inc. Assay for jc virus antibodies
US11287423B2 (en) 2010-01-11 2022-03-29 Biogen Ma Inc. Assay for JC virus antibodies
PL2590626T3 (pl) 2010-07-06 2016-04-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomy z lipidami o korzystnej wartości pka do dostarczania rna
ES2770335T3 (es) 2010-07-06 2020-07-01 Glaxosmithkline Biologicals Sa Administración de ARN para desencadenar múltiples vías inmunológicas
WO2012006369A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Immunisation of large mammals with low doses of rna
LT3981427T (lt) 2010-08-31 2022-08-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Pegilintos liposomos, skirtos imunogeną koduojančios rnr pristatymui
MX363307B (es) 2010-10-11 2019-03-20 Novartis Ag Star Plataformas para suministro de antigenos.
CA2840989A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic combination compositions and uses thereof
EP3004334A4 (en) 2013-05-28 2016-12-21 Biogen Ma Inc METHODS OF EVALUATION RISK OF DEVELOPMENT OF PML
WO2022162164A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of assessing the risk of developing progressive multifocal leukoencephalopathy in patients treated with vla-4 antagonists
WO2023171789A1 (ja) * 2022-03-11 2023-09-14 国立大学法人大阪大学 Ｖｌａ－４の阻害物質を含む、心筋炎を予防、又は治療するための組成物

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000043372A1 (en) * 1999-01-22 2000-07-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Acyl derivatives which treat vla-4 related disorders
WO2003099809A1 (en) * 2002-05-24 2003-12-04 Elan Pharmaceuticals, Inc. HETEROCYCLIC COMPOUNDS WHICH INHIBIT LEUKOCYTE ADHESION MEDIATED BY α4 INTEGRINS
WO2005111020A2 (en) * 2004-04-30 2005-11-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine hydantoin analogues which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
US20060013799A1 (en) * 2004-07-08 2006-01-19 Elan Pharmaceutical Inc. Multimeric VLA-4 antagonists comprising polymer moieties

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2525656A1 (de) 1974-06-19 1976-01-15 Sandoz Ag Verfahren zur herstellung neuer heterocyclischer verbindungen
US4041156A (en) * 1974-11-08 1977-08-09 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4073914A (en) 1974-11-08 1978-02-14 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4018915A (en) * 1976-01-05 1977-04-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4055636A (en) * 1974-11-08 1977-10-25 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4046876A (en) * 1974-11-08 1977-09-06 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4104392A (en) * 1974-11-08 1978-08-01 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof, and antithrombotic compositions and methods employing them
US4070457A (en) 1974-11-08 1978-01-24 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4055651A (en) * 1974-11-08 1977-10-25 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4096255A (en) * 1974-11-08 1978-06-20 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides, and pharmaceutical salts, compositions and methods
JPS5727454B2 (ru) * 1975-02-21 1982-06-10
US4018913A (en) * 1976-01-14 1977-04-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4036955A (en) * 1976-07-22 1977-07-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
CA1102316A (en) 1975-12-09 1981-06-02 Shosuke Okamoto N su2 xx-arylsulfonyl-l-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4070914A (en) * 1976-09-17 1978-01-31 Jack Reinhardt Hydraulic clutch-controlled transmission gear detent system
DE2742173A1 (de) * 1977-09-20 1979-03-29 Bayer Ag Phenoxy-pyridinyl(pyrimidinyl)-alkanole, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als fungizide
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
IT1211096B (it) * 1981-08-20 1989-09-29 Lpb Ist Farm Pirimidine e s.triazinici adattivita' ipolipidemizzante.
US4672065A (en) * 1982-11-19 1987-06-09 Chevron Research Company N-substituted phenoxyacetamide fungicides
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
CA1218655A (en) 1983-01-28 1987-03-03 Kathleen Biziere Process for the preparation of pyridazine derivatives having a psychotropic action
JPS59212480A (ja) 1983-05-17 1984-12-01 Nippon Soda Co Ltd ピリダジン誘導体及び除草剤
DE3322720A1 (de) * 1983-06-24 1985-01-03 Chemische Werke Hüls AG, 4370 Marl Verwendung von in 2-stellung mit (substituierten) aminogruppen substituierten 4-dl-alkylester-(alpha)-alaninyl-6-chlor-s-triazinen als herbizide, insbesondere gegen flughafer
US4505910A (en) * 1983-06-30 1985-03-19 American Home Products Corporation Amino-pyrimidine derivatives, compositions and use
NZ210669A (en) 1983-12-27 1988-05-30 Syntex Inc Benzoxazin-4-one derivatives and pharmaceutical compositions
PH22520A (en) * 1984-11-12 1988-10-17 Yamanouchi Pharma Co Ltd Heterocyclic compounds having 4-lover alkyl-3-hydroxy-2-lower alkyl phenoxy-lower alkylene-y-group, and process of producing them
US4959364A (en) * 1985-02-04 1990-09-25 G. D. Searle & Co. Method of treating inflammation, allergy, asthma and proliferative skin disease using heterocyclic amides
US5023252A (en) * 1985-12-04 1991-06-11 Conrex Pharmaceutical Corporation Transdermal and trans-membrane delivery of drugs
US4837028A (en) * 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPH0784424B2 (ja) 1987-04-15 1995-09-13 味の素株式会社 チロシン誘導体及びその用途
EP0330506A3 (en) 1988-02-26 1990-06-20 Dana Farber Cancer Institute Vla proteins
US5011472A (en) * 1988-09-06 1991-04-30 Brown University Research Foundation Implantable delivery system for biological factors
DE3904931A1 (de) * 1989-02-17 1990-08-23 Bayer Ag Pyridyl-substituierte acrylsaeureester
US5030644A (en) * 1989-07-31 1991-07-09 Merck & Co., Inc. Imidazole compounds and their use as transglutaminase inhibitors
US5260210A (en) 1989-09-27 1993-11-09 Rubin Lee L Blood-brain barrier model
US4992439A (en) * 1990-02-13 1991-02-12 Bristol-Myers Squibb Company Pyridazine carboxylic acids and esters
FR2679903B1 (fr) 1991-08-02 1993-12-03 Elf Sanofi Derives de la n-sulfonyl indoline portant une fonction amidique, leur preparation, les compositions pharmaceutiques en contenant.
NZ239846A (en) * 1990-09-27 1994-11-25 Merck & Co Inc Sulphonamide derivatives and pharmaceutical compositions thereof
DE4108029A1 (de) * 1991-03-13 1992-09-17 Bayer Ag Triazinyl-substituierte acrylsaeureester
WO1992016549A1 (de) 1991-03-18 1992-10-01 Pentapharm Ag Para-substituierte phenylalanin-derivate
IT1247509B (it) * 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5296486A (en) 1991-09-24 1994-03-22 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Leukotriene biosynthesis inhibitors
WO1993012809A1 (en) 1991-12-24 1993-07-08 Fred Hutchinson Cancer Research Center Competitive inhibition of high-avidity alpha4-beta1 receptor using tripeptide ldv
WO1993018006A1 (en) * 1992-03-11 1993-09-16 Narhex Limited Amine derivatives of oxo- and hydroxy-substitued hydrocarbons
US5518730A (en) 1992-06-03 1996-05-21 Fuisz Technologies Ltd. Biodegradable controlled release flash flow melt-spun delivery system
DE4227748A1 (de) * 1992-08-21 1994-02-24 Bayer Ag Pyridyloxy-acrylsäureester
JP2848232B2 (ja) * 1993-02-19 1999-01-20 武田薬品工業株式会社 アルデヒド誘導体
US5770573A (en) * 1993-12-06 1998-06-23 Cytel Corporation CS-1 peptidomimetics, compositions and methods of using the same
TW530047B (en) * 1994-06-08 2003-05-01 Pfizer Corticotropin releasing factor antagonists
US5510332A (en) * 1994-07-07 1996-04-23 Texas Biotechnology Corporation Process to inhibit binding of the integrin α4 62 1 to VCAM-1 or fibronectin and linear peptides therefor
JPH10506608A (ja) 1994-07-11 1998-06-30 アセナ ニューロサイエンシーズ，インコーポレイテッド 白血球接着のインヒビター
US6306840B1 (en) 1995-01-23 2001-10-23 Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
IL117659A (en) 1995-04-13 2000-12-06 Dainippon Pharmaceutical Co Substituted 2-phenyl pyrimidino amino acetamide derivative process for preparing the same and a pharmaceutical composition containing same
HU225226B1 (en) * 1995-09-29 2006-08-28 Sankyo Lifetech Company Ltd 13-substituted milbemycin 5-oxime derivatives, their use, and anthelmintic, acaricide and insecticide compositions containing these compounds
DE19536891A1 (de) 1995-10-04 1997-04-10 Basf Ag Neue Aminosäurederivate, ihre Herstellung und Verwendung
DE19548709A1 (de) 1995-12-23 1997-07-03 Merck Patent Gmbh Tyrosinderivate
KR100459978B1 (ko) 1996-06-21 2005-01-15 다께다 케미칼 인더스트리즈,리미티드 펩티드제조방법
DE19654483A1 (de) 1996-06-28 1998-01-02 Merck Patent Gmbh Phenylalanin-Derivate
AU3343097A (en) 1996-06-28 1998-01-21 Merck Patent Gmbh Phenylalamine derivatives as integrin inhibitors
DE19629817A1 (de) * 1996-07-24 1998-01-29 Hoechst Ag Neue Imino-Derivate als Inhibitoren der Knochenresorption und Vitronectinrezeptor-Antagonisten
DE19647317A1 (de) * 1996-11-15 1998-05-20 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Substituierte Stickstoff-Heterocyclen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel
KR20000069074A (ko) 1996-11-22 2000-11-25 진 엠. 듀발 Ｎ-(아릴/헤테로아릴아세틸) 아미노산 에스테르, 이를 함유한 약제학적 조성물 및 이를 사용한 β-아밀로이드 펩티드의 방출 및(또는) 합성 억제 방법
AU6264898A (en) 1997-02-04 1998-08-25 Versicor Inc Solid phase and combinatorial library syntheses of 3,1-benzoxazine-4-ones
DE19713000A1 (de) 1997-03-27 1998-10-01 Merck Patent Gmbh Adhäsionsrezeptor-Antagonisten
JP2002512625A (ja) 1997-05-29 2002-04-23 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド 細胞接着阻害薬としての複素環アミド化合物
CA2291762A1 (en) 1997-05-29 1998-12-03 Merck & Co., Inc. Biarylalkanoic acids as cell adhesion inhibitors
AR016133A1 (es) 1997-07-31 2001-06-20 Wyeth Corp Compuesto de carbamiloxi que inhiben la adhesion de leucocitos mediada por vla-4, compuestos que son prodrogas de dichos compuestos, composicionfarmaceutica, metodo para fijar vla-4 a una muestra biologica, metodo para el tratamiento de una condicion inflamatoria
EP1147091A2 (en) * 1999-01-22 2001-10-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. Fused ring heteroaryl and heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
JP4754693B2 (ja) * 1999-01-22 2011-08-24 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド Ｖｌａ−４関連障害を処置するアシル誘導体
US6436904B1 (en) * 1999-01-25 2002-08-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6544994B2 (en) * 2000-06-07 2003-04-08 Eprov Ag Pharmaceutical preparation for treating or preventing cardiovascular or neurological disorders by modulating of the activity of nitric oxide synthase
US6794506B2 (en) * 2000-07-21 2004-09-21 Elan Pharmaceuticals, Inc. 3-(heteroaryl) alanine derivatives-inhibitors of leukocyte adhesion mediated by VLA-4
AU2001278986A1 (en) * 2000-07-21 2002-02-05 Elan Pharmaceuticals, Inc. 3-amino-2-(4-aminocarbonyloxy)phenyl-propionic acid derivatives as alpha-4- integrin inhibitors
TW200307671A (en) * 2002-05-24 2003-12-16 Elan Pharm Inc Heteroaryl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by α 4 integrins
JP2007526230A (ja) * 2003-06-25 2007-09-13 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 関節リウマチを治療する方法および組成物
AU2006297180A1 (en) * 2005-09-29 2007-04-12 Elan Pharmaceuticals, Inc. Carbamate compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
DK1940826T3 (da) * 2005-09-29 2011-04-18 Elan Pharm Inc Pyrimidinylamidforbindelser, der inhiberer leukocytadhæsion medieret gennem BLA-4
EA017110B1 (ru) * 2006-02-27 2012-09-28 Элан Фамэсьютикэлс, Инк. ПИРИМИДИНИЛСУЛЬФОНАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРИМИДИНИЛСУЛЬФОНАМИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (ВАРИАНТЫ), ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО ИНТЕГРИНОМ α4, СПОСОБ СНИЖЕНИЯ И/ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО КОМПОНЕНТА ЗАБОЛЕВАНИЯ ИЛИ АУТОИММУННОГО ОТВЕТА

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000043372A1 (en) * 1999-01-22 2000-07-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Acyl derivatives which treat vla-4 related disorders
WO2003099809A1 (en) * 2002-05-24 2003-12-04 Elan Pharmaceuticals, Inc. HETEROCYCLIC COMPOUNDS WHICH INHIBIT LEUKOCYTE ADHESION MEDIATED BY α4 INTEGRINS
WO2005111020A2 (en) * 2004-04-30 2005-11-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine hydantoin analogues which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
US20060013799A1 (en) * 2004-07-08 2006-01-19 Elan Pharmaceutical Inc. Multimeric VLA-4 antagonists comprising polymer moieties

Also Published As

Publication number Publication date
US20070142416A1 (en) 2007-06-21
EA200800975A1 (ru) 2008-08-29
CA2624450C (en) 2014-02-04
US7511052B2 (en) 2009-03-31
AU2006297220A1 (en) 2007-04-12
DE602006019296D1 (de) 2011-02-10
US20090192181A1 (en) 2009-07-30
AU2006297220B8 (en) 2013-01-31
JP5101512B2 (ja) 2012-12-19
NZ567270A (en) 2011-06-30
EP1940826B1 (en) 2010-12-29
ZA200906610B (en) 2011-05-25
CN101273034A (zh) 2008-09-24
IL190084A0 (en) 2008-08-07
ATE493405T1 (de) 2011-01-15
CA2624450A1 (en) 2007-04-12
IL190084A (en) 2013-05-30
DK1940826T3 (da) 2011-04-18
AU2006297220C1 (en) 2012-11-29
WO2007041270A1 (en) 2007-04-12
EP1940826A1 (en) 2008-07-09
KR20080059268A (ko) 2008-06-26
AU2006297220B2 (en) 2012-04-26
ZA200803280B (en) 2009-11-25
JP2009510097A (ja) 2009-03-12
NO20082002L (no) 2008-06-03
US7763632B2 (en) 2010-07-27
BRPI0616687A2 (pt) 2011-06-28
CN101273034B (zh) 2011-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA015388B1 (ru) ПИРИМИДИНИЛАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ВКЛЮЧАЮЩАЯ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО α4-ИНТЕГРИНАМИ
TWI389904B (zh) 抑制由ｖｌａ-４所調節的白血球黏附之嘧啶磺醯胺化合物
EP1861388B1 (en) Potassium channel modulating agents and their medical use
US8367688B2 (en) Carbamate compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
MX2008004030A (en) Pyrimidinyl amide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
MX2008004136A (en) Carbamate compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
AU2012261691A1 (en) Pyrimidinyl sulfonamide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU