KR20080100271A - Ｖｌａ-4에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 피리미디닐 술폰아미드 화합물 - Google Patents

Ｖｌａ-4에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 피리미디닐 술폰아미드 화합물 Download PDF

Info

Publication number
KR20080100271A
KR20080100271A KR1020087023333A KR20087023333A KR20080100271A KR 20080100271 A KR20080100271 A KR 20080100271A KR 1020087023333 A KR1020087023333 A KR 1020087023333A KR 20087023333 A KR20087023333 A KR 20087023333A KR 20080100271 A KR20080100271 A KR 20080100271A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
compound
formula
disease
diethylamino
phenyl
Prior art date
Application number
KR1020087023333A
Other languages
English (en)
Inventor
제니퍼 엘. 스미스
크리스토퍼 셈코
잉지 슈
안드레이 더블유. 콘라디
Original Assignee
엘란 파마슈티칼스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 엘란 파마슈티칼스, 인크. filed Critical 엘란 파마슈티칼스, 인크.
Publication of KR20080100271A publication Critical patent/KR20080100271A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/50—Three nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/06—Anti-spasmodics, e.g. drugs for colics, esophagic dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00—Anaesthetics
    • A61P23/02—Local anaesthetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

VLA-4와 결합하는 화합물이 개시된다. 특정의 이들 화합물은 또한 백혈구 부착, 특히 VLA-4로 매개되는 백혈구 부착을 억제한다. 이러한 화합물을 인간 또는 동물 환자에서 천식, 알츠하이머병, 아테롬성 동맥 경화증, AIDS 치매, 당뇨병, 염증성 장 질환, 크론병, 류마티스성 관절염, 조직 이식, 암 전이 및 허혈성 변화와 같은 염증성 질병의 치료에 유용하다. 화합물은 또한 다발성 경화증과 같은 염증성 뇌 질환의 치료를 위해 투여될 수 있다.
Figure 112008067163656-PCT00050
VLA-4, 백혈구 부착, 염증성 질환

Description

ＶＬＡ-4에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 피리미디닐 술폰아미드 화합물{PYRIMIDINYL SULFONAMIDE COMPOUNDS WHICH INHIBIT LEUKOCYTE ADHESION MEDIATED BY VLA-4}
본 출원은 본원에서 그 전체가 참고로서 인용되는 2006년 2월 27일에 출원된 미국의 가출원 US 특허출원번호 60/777,595호에 의거하여 우선권을 주장한다.
본 발명은 백혈구 부착, 특히 α4 인테그린에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 화합물에 관한 것이며, α4 인테그린은 바람직하게는 VLA-4이다. 본 발명은 또한 이러한 화합물을 포함하는 약학 조성물 뿐 아니라, 예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 약학 조성물의 사용하여 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
참고문헌
하기의 문헌은 본 출원에서 윗첨자로서 인용된다:
1 Hemler and Takada, European Patent Application Publication No.330,506, published August 30, 1989
2 Elices, et al, Cell, 60:577 584 (1990)
3 Springer, Nature, 346:425 434 (1990)
4 Osborn, Cell, 62:3 6 (1990)
5 Vedder, et al., Surgery, 106:509 (1989)
6 Pretolani, et al., J. Exp. Med., 180:795 (1994)
7 Abraham, et al., J. Clin. Invest., 93:776 (1994)
8 Mulligan, et al, J. Immunology, 150:2407 (1993)
9 Cybulsky, et al., Science, 251 :788 (1991)
10 Li, et al., Arterioscler. Thromb., 13:197 (1993)
11 Sasseville, et al., Am. J. Path., 144:27 (1994)
12 Yang, et al, Proc. Nat. Acad. Science (USA), 90:10494 (1993)
13 Burkly, et al., Diabetes, 43:529 (1994)
14 Baron, et al, J. Clin. Invest., 93:1700 (1994)
15 Hamann, et al., J. Immunology, 152:3238 (1994)
16 Yednock, et al., Nature, 356:63 (1992)
17 Baron, et al., J. Exp. Med., 177:57 (1993)
18 van Dinther-Janssen, et al., J. Immunology, 147:4207 (1991)
19 van Dinther-Janssen, et al., Annals. Rheumatic Dis., 52:672 (1993)
20 Elices, et al., J. Clin. Invest., 93:405 (1994)
21 Postigo, et al., J. Clin. Invest., 89:1445 (1991)
22 Paul, et al., Transpl. Proceed., 25:813 (1993)
23 Okarhara, et al., Can. Res., 54:3233 (1994)
24 Paavonen, et al., Int. J. Can., 58:298 (1994)
25 Schadendorf, et al., J. Path., 170:429 (1993)
26 Bao, et al., Diff., 52:239 (1993)
27 Lauri, et al., British J. Cancer, 68:862 (1993)
28 Kawaguchi, et al., Japanese J. Cancer Res., 83:1304 (1992)
29 Konradi, et al., PCT/USOO/01686, filed, January 21, 2000
상기 모든 문헌은 각각의 문헌이 구체적이고 개별적으로 그것 전체가 참고로 포함되는 것과 같이 그것 전체가 동일한 정도로 본원에 참고로써 포함된다.
헴러 및 타카다(Hemler and Takada)1에 의해 최초로 확인된 VLA-4 (또한 α4β1 인테그린 및 CD49d/CD29로서 언급됨)는 세포 표면 수용체의 β1 인테그린 패밀리의 구성요소이며, 이들 각각은 α 사슬과 β 사슬인 두 개의 서브유니트를 포함한다. VLA-4는 α4 사슬과 β1 사슬을 함유한다. 적어도 9개의 β1 인테그린이 있으며, 모두는 동일한 β1 사슬을 공유하고 각각 별개의 α 사슬을 가진다. 이들 9개의 수용체는 모두 피브로넥틴, 라미닌, 및 콜라겐과 같은 다양한 세포 기질 분자의 다른 보체에 결합한다. VLA-4는 또한 내피 및 다른 세포에 의해 발현되는 비-기질 분자에 결합한다. 이들 비-기질 분자는 배양에서 시토킨-활성화된 인간 제대정맥 내피세포 상에서 발현되는 VCAM-1을 포함한다. VLA-4의 별개의 에피토프는 피브로넥틴 및 VCAM-1 결합 활성에 책임이 있으며, 각각의 활성은 독립적으로 억제되는 것으로 보여졌다.2
VLA-4 및 다른 세포 표면 수용체에 의해 매개되는 세포간 부착은 많은 염증 반응과 관련된다. 손상 또는 다른 염증 자극의 부위에서, 활성화된 혈관 내피 세포는 백혈구에 부착하는 분자를 발현한다. 내피 세포에서 백혈구 부착의 기전은 부분적으로 내피 세포의 대응하는 세포 표면 분자에 백혈구의 세포 표면 수용체의 인식과 결합을 포함한다. 일단 결합되면, 백혈구는 혈관 벽을 가로질러 상처 부위로 이동하고, 화학적 매개자를 방출하여 감염과 싸운다. 면역 반응의 부착 수용체에 대한 검토는, 예를 들어, 스프린저(Springer)3 및 오스본(Osborn)4을 참조.
실험적 자가 면역성 수막염(EAE), 다발성경화증(MS) 및 수막염과 같은 염증성 뇌 질환은, 내피/백혈구 부착 메커니즘으로 다른 건강한 뇌 조직의 파괴를 야기하는 중추 신경계 질환의 예이다. 이들 염증 질환을 가지는 환자에서 다수의 백혈구는 혈액 뇌 장벽(BBB)을 가로질러 이동한다. 백혈구는 손상된 신경 전도 및 마비를 야기하는 심각한 조직 손상의 원인이 되는 독성 매개물질을 방출한다.
다른 기관계에 있어서, 조직 손상은 또한 백혈구의 이동 또는 활성을 야기하는 부착 메커니즘을 통해 발생한다. 예를 들어, 이는 심장 조직에서 최초의 손상 후 심근 허혈은 더욱 더 추가 손상을 야기하는 손상된 조직으로의 백혈구 유입에 의해 추가로 악화될 수 있음을 보여주었다(Vedder, et al.).5 부착 메커니즘에 의해 매개되는 다른 염증 또는 의학적 질병은, 예로써, 천식,6-8 알츠하이머병, 아테롬성 동맥 경화증,9-10 AIDS 치매,11 당뇨병12 -14(급성 유년 발병형 당뇨병을 포함), 염증성 장 질환15(궤양성 대장염 및 크론병을 포함), 다발성 경화증16 -17, 류마티스성 관절 염,18-21 조직 이식, 암 전이,23-28 수막염, 뇌염, 뇌졸중, 및 기타 대뇌외상, 신장염, 망막염, 아토피 피부염, 건선, 심근허혈 및 성인 호흡 장애 증후군에서 발생하는 바와 같은 급성 백혈구-매개 폐 손상을 포함한다.
하나의 계열로서, 치환된 아미노피리미딘은 VLA-4가 VCAM-1에 결합하는 것을 억제하는 것으로 드러났으며, 따라서, 항-염증 특성을 나타내는 것으로 개시되었다.29 이들 화합물이 이러한 결합에 대해 길항 특성을 보유하고, 이들 화합물의 향상된 생체이용가능성은 이들의 효능을 증가시킬 것이다.
발명의 개요
본 발명은 화합물, 그것의 약학적으로 허용가능한 염 및 에스테르, 그것의 조성물, 그것의 합성물, 및 VLA-4 매개 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 이렇게 평가된 본 발명의 이들 화합물에 대한 생체 내 데이터에 기초하여, 이들 화합물은 보통의 곡선하 면적(AUC) 분석으로 측정되는 바와 같이 경구적으로 전달될 때 향상된 생체이용가능성을 나타내는 것으로 생각된다.
한 구체예에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물:
Figure 112008067163656-PCT00001
(상기식에서:
R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4 할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다;)
또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르를 제공한다.
일부 구체예에서, R1은 C1 내지 C2 알킬이다. 다른 구체예에서, R1은 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 또 다른 구체예에서, R1은 메틸이다.
일부 구체예에서, R2는 C1 내지 C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R2는 C1 내지 C3 알킬이다. 또 다른 구체예에서, R2는 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 n-프로필이다. 다른 구체예에서, R2는 메틸 또는 에틸이고, 또 다른 구체예에서, R2는 이소프로필이다.
일부 구체예에서, R2는 C3 내지 C6 시클로알킬이다. 다른 구체예에서, R2는 시클로펜틸이다.
일부 구체예에서, R2는 C2 내지 C4 알케닐이다. 다른 구체예에서, R2는 알릴이다.
일부 구체예에서, R2는 C2 내지 C4 알키닐이다. 다른 구체예에서, R2는 프로파르길이다.
본 발명의 화합물의 예는 표 1에 열거된 R1 및 R2 기(약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르)를 가지는 것들을 포함한다.
Figure 112008067163656-PCT00002
R 1 R 2
트리플루오로메틸 에틸
메틸 이소프로필
메틸 시클로펜틸
메틸 메틸
메틸 프로파르길
메틸 에틸
메틸 알릴
부틸 에틸
3-클로로프로필 에틸
3-클로로프로필 메틸
3,3,3-트리플루오로프로필 에틸
프로필 에틸
이소프로필 에틸
다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 II의 화합물:
Figure 112008067163656-PCT00003
(상기식에서:
R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4 할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다)
또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르를 제공한다.
일부 구체예에서, R1은 C1 내지 C2 알킬이다. 다른 구체예에서, R1은 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 또 다른 구체예에서, R1은 메틸이다.
일부 구체예에서, R1은 C1 내지 C2 알킬이다. 다른 구체예에서, R1은 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 또 다른 구체예에서, R1은 메틸이다.
일부 구체예에서, R2는 C1 내지 C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R2는 C1 내지 C3 알킬이다. 또 다른 구체예에서, R2는 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 n-프로필이다. 다른 구체예에서, R2는 메틸 또는 에틸이고, 또 다른 구체예에서, R2는 이소프로필이다.
일부 구체예에서, R2는 C3 내지 C6 시클로알킬이다. 다른 구체예에서, R2는 시클로펜틸이다.
일부 구체예에서, R2는 C2 내지 C4 알케닐이다. 다른 구체예에서, R2는 알릴이다.
일부 구체예에서, R2는 C2 내지 C4 알키닐이다. 다른 구체예에서, R2는 프로파르길이다.
본 발명의 화합물의 예는 표 2에 열거된 R1 및 R2 기를 가지는 것들을 포함한다(그것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르를 포함).
Figure 112008067163656-PCT00004
R1 R2
트리플루오로메틸 에틸
메틸 이소프로필
메틸 시클로펜틸
메틸 메틸
메틸 프로파르길
메틸 에틸
메틸 알릴
부틸 에틸
3-클로로프로필 에틸
3-클로로프로필 메틸
3,3,3-트리플루오로프로필 에틸
프로필 에틸
이소프로필 에틸
페닐환에서 피롤리디닐카르보닐옥시기의 오르소 및 메타 치환은 또한 본 발명의 범주 내이다.
본 발명은 또한 표 3의 화합물 및 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르를 제공한다.
구조식 명칭
3-1
Figure 112008067163656-PCT00005
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸-1,1,1-트리플루오로메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-2
Figure 112008067163656-PCT00006
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-이소프로필메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-3
Figure 112008067163656-PCT00007
 (S)-2-(5-(N-시클로펜틸메틸술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-4
Figure 112008067163656-PCT00008
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-메틸메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-5
Figure 112008067163656-PCT00009
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-(프로프-2-인일)메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)-프로판산
3-6
Figure 112008067163656-PCT00010
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)-프로판산
3-7
Figure 112008067163656-PCT00011
 (S)-2-(5-(N-알릴메틸술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-8
Figure 112008067163656-PCT00012
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸부틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)-프로판산
3-9
Figure 112008067163656-PCT00013
 (S)-2-(5-(3-클로로-N-에틸프로필술폰아미도)-2-(디에틸아미노)-피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-10
Figure 112008067163656-PCT00014
 (S)-2-(5-(3-클로로-N-메틸프로필-술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-11
Figure 112008067163656-PCT00015
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸-3,3,3-트리플루오로프로필술폰아미도)-피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산
3-12
Figure 112008067163656-PCT00016
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸프로필술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)-프로판산
3-13
Figure 112008067163656-PCT00017
 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸-2-메틸프로필술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)-페닐)프로판산
다른 양태에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체 및 본원에 정의된 치료적으로 유효한 양의 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
방법 양태 중 하나에서, 본 발명은 α4 인테그린, 바람직하게는 VLA-4에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 질병을 치료하는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 약학적으로 허용가능한 담체 및 치료적으로 유효한 양의 하나 이상의 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 화합물 및 약학 조성물은 α4 인테그린에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 질병 질환을 치료하는데 유용하며, α4 인테그린은 바람직하게는 VLA-4 또는 백혈구 부착이다. 이러한 질병 질환은 예로써, 천식, 알츠하이머병, 아테롬성 동맥 경화증, AIDS 치매, 당뇨병(급성 유년 발병형 당뇨병을 포함), 염증성 장 질환(궤양성 대장염 및 크론병을 포함), 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 조직 이식, 암 전이, 수막염, 뇌염, 뇌졸중, 및 기타 대뇌외상, 신장염, 망막염, 아토피 피부염, 건선, 심근허혈 및 성인 호흡 장애 증후군에서 발생하는 바와 같은 급성 백혈구-매개 폐 손상을 포함한다.
기타 질병 질환은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 결절성홍반, 알레르기성 결막염, 시신경염, 포도막염, 알레르기성 비염, 강직성 척추염, 건선 관절염, 혈관염, 라이터 증후군, 전신 홍반성 루프스, 전신성 경피증, 다발성 근염, 피부근염, 베게너육아종증, 대동맥염, 사르코이드증, 림프구감소증, 측두동맥염, 심막염, 심근염, 울혈성 심부전, 결절성 다발성 동맥염, 과민 증후군, 알레르기, 호산백혈구증가증후군, 척-스트라우스 증후군, 만성폐쇄성폐질환, 과민성 폐렴, 만성 활동성 간염, 간질성방광염, 자가면역 내분비 부전, 원발성 담즙성 경화, 자가면역성 재생불량성빈혈, 만성지속성간염 및 갑상선염과 같은 염증성 질환을 포함한다.
한 구체예에서, α4 인테그린에 의해 매개되는 질병 질환은 염증성 질환이다.
다른 구체예에서, 질병 질환은 자가면역성 질환이다.
일부 구체예에서, 질환은 천식, 다발성경화증 및 염증성 장 질환으로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 질환은 크론병이다. 또 다른 구체예에서, 질환은 류마티스 관절염이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물:
(화학식 I)
Figure 112008067163656-PCT00018
(상기식에서:
R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4 할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다)
또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르를 제조하는 방법을 제공하며,
이 방법은:
a) 화학식 III의 화합물을
Figure 112008067163656-PCT00019
(상기식에서 Pg는 카르복실 보호기이다);
C1 내지 C4 알데히드 또는 케톤, C2 내지 C4 알케닐 알데히드 또는 케톤, C2 내지 C4 알키닐 알데히드 또는 케톤, C3-C6 시클로알킬 케톤 및 벤즈알데히드와 환원성 아미노화 조건하에서 접촉하여 화학식 IV의 화합물을 제공하는 단계:
Figure 112008067163656-PCT00020
b) 화합물 IV를 Z가 할로인 화학식 R1SO2Z의 술포닐 할로겐화물과 조건하에서 접촉하여 화학식 V의 화합물을 형성하는 단계:
Figure 112008067163656-PCT00021
및
c) 카르복실 보호기를 제거하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물
(화학식 I)
Figure 112008067163656-PCT00022
(상기식에서:
R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4 할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다);
또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르를 제조하는 방법을 제공하며,
이 방법은:
a) 화학식 VI의 화합물과
Figure 112008067163656-PCT00023
(상기식에서 Pg는 카르복실 보호기이다);
과량의 R'SO2X를 접촉하여 화학식 VII의 화합물을 제공하는 단계:
Figure 112008067163656-PCT00024
b) 화학식 VII의 화합물로부터 단일의 -SO2R'기를 선택적으로 제거하여 화학식 VIII의 화합물을 제공하는 단계:
Figure 112008067163656-PCT00025
c) 화합물 VIII과 X가 할로인 화학식 R2-X를 가지는 알킬화제 또는 R이 메틸인 디메틸술페이트를 접촉하여 화학식 IX의 화합물을 형성하는 단계:
Figure 112008067163656-PCT00026
및
d) 카르복실 보호기를 제거하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계를 포함 한다.
발명의 상세한 설명
상기 언급한 바와 같이, 본 발명은 백혈구 부착, 특히α4 인테그린, 바람직하게는 VLA-4에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 화합물에 관한 것이다. 그러나, 본 발명을 설명하기에 앞서 추가 상세에서, 하기의 용어가 우선 정의될 것이다.
정의
달리 언급되지 않는다면, 본 명세서 및 청구항에 사용되는 하기의 용어는 하기의 주어진 의미를 가진다:
본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 정의되지 않는다면, "알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자 및 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 가지는 1가의 직선 및 분지의 히드로카르빌기를 언급한다. 본 용어는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸 및 t-부틸과 같은 기로 예시된다.
"알케닐"은 2 내지 4개의 탄소 원자 및 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자 및 적어도 1개 바람직하게는 1개의 비닐(>C=C<) 불포화 자리를 가지는 직선 또는 분지의 1가의 히드로카르빌기를 언급한다. 이러한 알케닐 기의 예는 비닐(-CH=CH2), 알릴(-CH2CH=CH2), n-프로펜-1-일(-CH=CHCH3), n-부텐-2-일(-CH2CH=CHCH3) 등을 포함한다. 이 용어에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물이 포함된다.
"알키닐"은 2 내지 4개의 탄소 원자 및 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자이며 적어도 1개 및 바람직하게는 1개의 아세틸렌 -C≡C- 불포화 자리를 가지는 직선 또는 분지의 1가의 히드로카르빌기를 언급한다. 이러한 알키닐 기의 예는 아세틸렌일 (-C≡CH), 프로파르길(-CH2C≡CH), n-프로핀-1-일(-CH≡CHCH3) 등을 포함한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 언급하며, 바람직하게는 플루오로 또는 클로로이다.
"할로알킬"은 1 내지 5개의 할로기를 가지는 알킬기를 언급한다. 바람직하게는, 이러한 기는 1 내지 3개의 할로기 및 1 내지 2개의 탄소 원자를 가진다. 예시적인 할로알킬기는 할로메틸(예를 들어, 플루오로메틸), 디할로메틸(예를 들어, 디플루오로메틸), 트리할로메틸(예를 들어, 트리플루오로메틸), 할로에틸(예를 들어, 2-클로로에트-1-일), 트리할로에틸(예를 들어, 2,2,2-트리플루오로에트-1-일), 할로프로필(예를 들어, 3-클로로프로피-1-일) 및 트리할로프로필(예를 들어, 3,3,3-트리플로오프로프-1-일)을 포함한다.
"약학적으로 허용가능한 담체"는 일반적으로 안전하고 비-독성이고 생물학적으로도 다른 원치않는 것도 아닌 약학 조성물을 제조하는데 유용한 담체를 의미하며, 수의학 용도 및 인간 약학 용도로 허용가능한 담체를 포함한다. 본 명세서 및 청구항에 사용된 바와 같은 "약학적으로 허용가능한 담체"는 한 가지 이상의 이러한 담체를 포함한다.
"약학적으로 허용가능한 염"은 본 발명 화합물의 생물학적 효능 및 특성을 보유하며, 생물학적으로 또는 기타 바람직하지 않은 것이 아닌 염을 언급한다. 많은 경우에, 본 발명의 화합물은 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 그것과 유사한 기들의 존재 때문에 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
약학적으로-허용가능한 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 무기 염기로부터 유도되는 염들은, 단지 예로써, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암노늄, 칼슘, 및 마그네슘 염을 포함한다. 유기 염기로부터 유도된 염들은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 1차, 2차 및 3차 아민의 염들을 포함한다. 예로써, 알킬 아민, 디알킬 아민, 트리알킬 아민, 치환된 알킬 아민, 디(치환된 알킬) 아민, 트리(치환된 알킬) 아민, 알케닐 아민, 디알케닐 아민, 트리알케닐 아민, 치환된 알케닐 아민, 디(치환된 알케닐) 아민, 트리(치환된 알케닐) 아민, 시클로알킬 아민, 디(시클로알킬) 아민, 트리(시클로알킬) 아민, 치환된 시클로알킬 아민, 디치환된 시클로알킬 아민, 트리치환된 시클로알킬 아민, 시클로알케닐 아민, 디(시클로알케닐) 아민, 트리(시클로알케닐) 아민, 치환된 시클로알케닐 아민, 디치환된 시클로알케닐 아민, 트리치환된 시클로알케닐 아민, 아릴 아민, 디아릴 아민, 트리아릴 아민, 헤테로아릴 아민, 디헤테로아릴 아민, 트리헤테로아릴 아민, 헤테로고리 아민, 디헤테로고리 아민, 트리헤테로고리 아민, 혼합된 디- 및 트리-아민을 포함하며, 아민 상의 적어도 2개의 치환기는 다르며 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로고리 등으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 또한 2 또는 3 개의 치환기가 아미노 질소와 함께 헤테로고리 또는 헤테로아릴기를 형성하는 아민이 포함된다.
적절한 아민의 예는, 단지 예로써, 이소프로필아민, 트리메틸 아민, 디에틸 아민, 트리(이소-프로필) 아민, 트리(n-프로필) 아민, 에탄올아민, 2-디메틸아미노에탄올, 트로메타민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 히드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌디아민, 글루코사민, N-알킬글루카민, 테오브로민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, N-에틸피페리딘 등을 포함한다. 또한 예를 들어, 카르복실산 아미드를 포함하는 기타 카르복실산 유도체는 본 발명의 실행에 유용한 것으로 이해되어야 한다.
약학적으로 허용가능한 산 부가 염은 무기 및 유기산으로부터 제조될 수 있다. 무기산으로부터 유도된 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다. 유기산으로부터 유도된 염은 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔-술폰산, 살리실산 등을 포함한다.
용어 "약학적으로-허용가능한 양이온"은 약학적으로-허용가능한 염의 양이온을 언급한다.
본원에 정의된 모든 치환된 기에서, 자체에 추가의 치환기를 가지는 치환기를 정의함으로써 도달되는 중합체(예를 들어, 치환된 아릴기로 그것 자신이 치환된 치환기로서 치환된 아릴기를 가지는 치환된 아릴 등)는 본원에 포함되는 것으로 의 도되지 않음이 이해된다. 이러한 경우에, 이러한 치환의 최대 수는 3이다. 즉, 각각의 상기 정의는, 예를 들어, 치환된 아릴기는 -치환된 아릴-(치환된 아릴)-(치환된 아릴)로 제한되는 것으로 제한된다.
질병을 "치료하는" 또는 "치료"는:
(1) 질병을 예방하는 것, 즉, 질병에 노출되거나 병에 걸릴 수 있지만 아직 질병의 증상을 경험 또는 나타내지 않는 포유 동물에서 질병의 임상적 증상이 발생하지 않도록 야기하는 것,
(2) 질병을 억제하는 것, 즉, 질병의 발생 또는 그것의 임상적 증상을 억제 또는 감소시키는 것, 또는
(3) 질병을 완화하는 것, 즉 질병 또는 그것의 임상적 증상의 퇴보를 야기하는 것을 포함한다.
"치료적으로 유효한 양"은 질병을 치료하기 위해 포유동물에 투여될 때, 질병에 대한 이러한 치료를 달성하기에 충분한 화합물의 양을 의미한다. "치료적으로 유효한 양"은 화합물, 질병 및 그것의 중증도 및 투여되는 포유동물의 연령, 체중 등에 의존하여 다양할 것이다.
인테그린은 대부분의 세포 밖 기질 단백질, 예로써, 콜라겐, 피브로넥틴 및 라미닌을 결합하기 위한 동물 세포상의 주된 수용체인 동종 막 통과 링커 단백질의 광범위한 패밀리이다. 인테그린은 α 사슬과 β 사슬로 구성되는 이종이합체이다. 오늘까지, 9개의 다른 α서브유닛과 12개의 다른 β서브유닛으로 만들어지는 20가지의 다른 인테그린 이종이합체가 확인되었다. 용어 "α4 인테그린"은 어떤 β서브 유닛과 짝지어진 α4 서브유닛을 함유하는 효소-연결된 세포-표면 수용체인 이종이합체의 종류를 언급한다. VLA-4는 α4 인테그린의 예이며, α4과 β1 서브유닛의 이종이합체이고, 또한 α4β1 인테그린으로서 언급된다.
화합물 제조
본 발명의 화합물은 하기의 일반적 방법 및 공정을 사용하여 용이하게 이용가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 전형적 또는 바람직한 공정 조건(즉, 반응 온도, 시간 반응물의 몰 비, 용매, 압력 등)이 주어지며, 다른 공정 조건은 달리 언급되지 않는다면 사용될 수 있는 것으로 인식될 것이다. 최적의 반응 조건은 사용되는 특정 반응물 또는 용매와 함께 다양할 수 있지만, 이러한 조건은 통상의 최적화 과정에 의해 당업자에 의해 결정될 수 있다.
추가적으로, 당업자에게 명백한 바와 같이, 통상적인 보호기는 특정 작용기가 원치않는 반응을 받는 것으로부터 예방할 수 있다. 특정의 작용기를 보호 및 탈보호하기 위한 다양한 작용기에 대한 적당한 보호기 및 적당한 조건은 당업계에서 공지되어 있다. 예를 들어, 다수의 보호기는 T. W. Greene and G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second Edition, Wiley, New York, 1991에 기재되며, 이는 본원에 참고로 인용된다.
추가로, 본 발명의 화합물은 전형적으로 하나 이상의 키랄 중심을 함유할 것이다. 따라서, 원한다면, 이러한 화합물은 순수한 입체이성질체, 즉 개개의 광학이성질체 또는 부분입체이성질체 또는 입체이성질체가 풍부한 혼합물로서 제조 또는 분리될 수 있다. 모든 이러한 입체이성질체(및 풍부한 혼합물)은 달리 언급되지 않 는다면 본 발명의 범주에 포함된다. 순수한 입체이성질체(또는 풍부한 혼합물)은 예를 들어, 광학적으로 활성인 출발 물질 또는 당업계에 공지된 입체선택적 시약을 사용하여 제조될 수 있다. 또 다르게는, 이러한 화합물의 라세미 혼합물은 예를 들어, 키랄 컬럼 크로마토그래피, 키랄 분할제 등을 사용하여 분리될 수 있다.
본 발명의 대부분의 화합물은 ChemDraw v. 10.0(100 Cambridge Park Drive, Cambridge, MA 02140의 Cambridgesoft로부터 이용가능)를 사용하여 명명된다.
한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 단지 예시적인 목적을 위해 하기 반응식 1에서 기재되는 바와 같이 제조될 수 있으며, R1은 메틸이고 R2는 이소프로필이다.
Figure 112008067163656-PCT00027
Pg는 벤질, t-부틸 등과 같은 카르복실 보호기이다.
반응식 1은 R2가 알킬 또는 시클로알킬인 화합물의 제조에서 특히 유용하다.
반응식 1에서, 출발의 5-아미노피리미딘 중간체, 화합물 1.1은 미국 특허 US 7,026,328 Bl호에서 상세하기 기재되고, 단지 예시의 목적을 위해, 4-치환된 페닐알라닌 유도체로서 본 반응식에서 보여진다. 물론, 2- 및 3-치환된 페닐알라닌 유도체는 유사한 반응 경로를 따르는 것으로 이해된다.
구체적으로, 반응식 1에서, 5-아미노-2-디에틸아미노-4-치환된 피리미딘, 화합물 1.1 (5중량% Pd/C 또는 5중량% PtO2와 함께 환원에 의해 대응하는 5-니트로-피리미딘에 의해 제조됨)은 반응식 1에서 아세톤으로 예시되는 약간 과량의 C1-C4 알데히드 또는 케톤과 함께 통상적인 환원성 아미노화 조건 하에서 반응된다. 반응식 1에서, 화합물 1.1의 5-아미노기는 PtO2등과 같은 적당한 촉매 이상의 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 보로하이드라이드, 수소와 같은 통상적인 환원제에 의해 대응하는 아민, 화합물 1.2로 인시츄 환원된 중간체 이민(나타나지 않음)을 형성한다. 반응은 테트라히드로푸란, 메틸렌 클로라이드 등과 같은 적당한 불활성 희석제에서 수행된다. 반응은 반응이 실질적으로 완료될 때까지 약 0℃ 내지 약 30℃에서 유지되며, 이는 전형적으로 약 0.5 내지 16시간 내에 발생한다. 반응의 완료에서, 화합물 1.2는 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상적인 방법으로 회수되며, 또는 또 다르게는 정제 및/또는 분리 없이 다음 단계에서 사용된다.
화합물 1.2에서 아민기의 대응하는 알킬술포닐아미도기, 화합물 1.3으로의 변환은 통상의 방법을 통해 진행한다. 예를 들어, 한 방법에서, 화합물 1.2는 발생된 산을 제거하기 위해서 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 등과 같은 적당한 염기의 존재에서 메탄술포닐 클로라이드와 같은 알칼술포닐 할로겐화물의 약간 과량과 접촉된다. 반응은 바람직하게는 테트라히드로푸란, 디옥산, 클로로포름 등과 같은 적당한 불활성 용매에서 수행된다. 반응은 바람직하게는 약 -5°내지 -30℃에서 수행되며 실질적으로 완료될 때까지 계속되며 이는 전형적으로 0.5 내지 16시간 안에 일어난다. 반응의 완료에서, 화합물 1.3은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상적인 방법으로 회수될 수 있고, 또 다르게는 정제 및/또는 분리 없이 다음 단계에서 사용된다.
알킬술포닐 할로겐화물은 보통의 합성 과정으로 제조될 수 있는 공지된 화합물이다. 이러한 화합물은 대응하는 술폰산, 즉 R1이 상기 정의된 바와 같은 화학식 R1-SO3H의 화합물로부터 포스포러스 트리클로라이드 및 포스포러스 펜타클로라이드를 사용하여 전형적으로 제조된다. 반응은 일반적으로 술폰산을 2 내지 5 몰 당량의 포스포러스 트리클로라이드 또는 포스포러스 펜타클로라이드와 접촉함으로써, 약 1 내지 약 48 시간 동안 0℃ 내지 약 80℃ 범위의 온도에서 니트(neat) 또는 디클로로메탄과 같은 불활성 용매에서 수행되어 술포닐 클로라이드가 얻어진다. 또 다르게는, 술포닐 클로라이드는 대응하는 티올 화합물, 즉 R1이 상기 정의한 바와 같은 화학식 R1-SH의 화합물로부터 티올을 염소(Cl2) 및 물과 함께 처리함으로써 보통의 반응 조건하에서 제조될 수 있다.
본 발명에서 사용을 위한 술포닐 클로라이드의 예는 이에 제한되는 것은 아 니지만, 메탄술포닐 클로라이드, 에탄술포닐 클로라이드, 2-프로판술포닐 클로라이드, 1-부탄술포닐 클로라이드, 트리플루오로메탄술포닐 클로라이드, 2,2,2-트리플루오로에탄술포닐 클로라이드 등을 포함한다.
화합물 1.3의 카르복실 보호기는 그 다음에 보통의 조건으로 제거되어 화합물 1.4, 화학식 I의 화합물을 제공한다. 한 구체예에서, t-부틸 보호기는 포름산과 접촉하여 제거될 수 있다. 다른 구체예에서, 벤질 보호기는 상승된 수소 압력하에서 전형적으로 메탄올과 같은 프로톤성 용매 중 팔라듐/탄소 촉매의 존재에서 수소와 접촉하여 제거될 수 있다. 반응의 완료에서, 화합물 1.4는 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 보통의 방법에 의해 회수될 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 반응식 2에서 기재되는 바와 같이 제조될 수 있다:
Figure 112008067163656-PCT00028
상기식에서 R1 및 R2는 본원에 정의된 바와 같고; Pg는 카르복실 보호기이고 X는 할로이다.
반응식 2에서, 출발 5-아미노피리미딘 중간체, 화합물 1.1은 미국 특허 US 7,026,328 B1호에서 상세하게 기재되며, 단지 예시의 목적으로, 본 반응식은 4-치환된 페닐알라닌 유도체로서 보여진다. 물론, 2- 및 3-치환된 페닐알라닌 유도체는 유사한 반응 경로를 따르는 것으로 이해된다.
구체적으로, 반응식 2에서, 5-아미노-2-디에틸아미노-4-치환된 피리미딘, 화합물 1.1(5중량% Pd/C 또는 5중량% PtO2와 함께 대응하는 5-니트로-피리미딘으로부터 환원에 의해 제조됨)은 발생된 산을 제거하기 위하여 트리에틸아민, 디이소프로 필에틸아민 등과 같은 적당한 염기의 존재에서 약간 과량의 메탄술포닐 클로라이드와 같은 R1-술포닐 할로겐화물과 반응된다. 반응은 바람직하게는 테트라히드로푸란, 디옥산, 디클로로메탄, 클로로포름 등과 같은 적당한 불활성 용매에서 수행된다. 반응은 바람직하게는 약 -5°내지 30℃에서 수행되고 반응이 실질적으로 완료될 때까지 계속되며, 이는 전형적으로 0.5 내지 16시간 내에 일어난다. 반응의 완료시, 화합물 1.5는 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상의 방법으로 회수될 수 있고, 또 다르게는, 정제 및/또는 분리 없이 다음 단계에서 사용된다.
화합물 1.5로부터 단일 R1SO2-기의 선택적 제거는 통상의 조건하에서 진행한다. 예를 들어, 선택적으로 THF 등의 존재에서 메탄올, 에탄올, 또는 물과 같은 프로톤성 용매, 예를 들어, 메탄올/테트라히드로푸란의 1:1 혼합물 또는 물/테트라히드로푸란의 1:1 혼합물에서 화합물 1.5와 염기의 반응은 화합물 1.6을 제공한다. 반응 혼합물은 탄산 칼륨, 탄산 나트륨 등과 같은 과량의 적당한 염기를 포함하고 반응은 바람직하게는 20°내지 60℃와 같은 상승된 온도에서 유지된다. 반응은 실질적으로 완료될 때까지 계속되며 24-144 시간 안에 전형적으로 일어난다. 반응의 완료 시, 화합물 1.6은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상적인 방법으로 회수할 수 있고, 또는 또 다르게는, 정제 및/또는 분리없이 다음 단계에서 사용된다.
화합물 1.6과 과량의 알킬 할로겐화물, 디알킬 술페이트, 알케닐 할로겐화 물, 알키닐 할로겐화물, 또는 시클로알킬 할로겐화물(즉, X-R2- "할로겐화물 화합물")의 반응은 통상의 조건하에서 진행하여 화합물 1.7을 제공한다. 반응은 반응 동안 발생된 산을 제거하기 위해 탄산 칼륨, 트리에틸아민 등과 같은 염기의 존재에서 화합물 1.6을 아세톤, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드 등과 같은 불활성 희석제에서 할로겐화물 화합물의 약 1.1 내지 20 당량과 접촉함으로써 전형적으로 수행된다. 반응은 약 20°내지 60℃에서 바람직하게 수행되고 반응이 실질적으로 완료될 때까지 계속되며 전형적으로 0.1 내지 16 시간에 발생한다. 반응의 완료시, 화합물 1.6은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 보통의 방법으로 회수될 수 있고, 또 다르게는 정제 및/또는 분리 없이 다음 단계에서 사용된다.
화합물 1.7의 카르복실 보호기는 그 후 통상의 조건으로 제거되어 화합물 1.8, 화학식 I의 화합물을 제공한다. 한 구체예에서, t-부틸 보호기는 포름산과 접촉함으로써 제거될 수 있다. 다른 구체예에서, 벤질 보호기는 상승된 수소 압력 하에서 전형적으로 메탄올과 같은 프로톤성 용매 중 팔라듐/탄소 촉매의 존재에서 수소와 접촉함으로써 제거될 수 있다. 반응의 완료 시, 화합물 1.8은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상적인 방법으로 회수될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 반응식 3에서 기재되는 바와 같이 제조될 수 있다:
Figure 112008067163656-PCT00029
R1은 상기 정의한 바와 같고, Pg는 벤질, t-부틸 등과 같은 카르복실 보호기이고, R2는 요오도 기에 부착되는 CH2 부분을 가지는 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 페닐알킬렌기이다.
반응식 1에서, 출발 5-아미노피리미딘 중간체, 화합물 1.1은 미국 특허 7,026,328 B1에서 상세하게 기재되었고, 단지 예시의 목적으로, 본 반응식에서 4-치환된 페닐알라닌 유도체로서 보여진다. 2- 및 3-치환된 페닐알라닌 유도체는 유사한 반응 경로를 따르는 것으로 이해된다.
구체적으로, 반응식 1에서, 1,5-아미노-2-디에틸아미노-4-치환된 피리미딘, 화합물 1.1 (5중량% Pd/C 또는 5중량% PtO2와 함께 환원에 의해 대응하는 5-니트로-피리미딘으로부터 제조됨)은 통상적인 방법에 의해 대응하는 트리플루오로아세트아미드, 화합물 1.8로 변환된다. 예를 들어, 약간 과량의 트리플루오로아세트산 무수물은 테트라히드로푸란, 메틸렌 클로라이드, 피리딘 등과 같은 적당한 불활성 희석제에서 화합물 1.1과 결합된다. 반응은 반응이 실질적으로 완료될 때까지 약 0℃ 내지 약 30℃에서 유지되며, 전형적으로 약 0.5 내지 24 시간 내에 발생한다. 반응의 완료시, 화합물 1.8은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상의 방법으로 회수되며, 또 다르게는 정제 및/또는 분리없이 다음 단계에서 사용된다.
화합물 1.8의 대응하는 N(R2), N-트리플루오로아세트아미도-피리미딘, 화합물 1.9로의 변환은 또한 보통의 방법을 통해 진행한다. 예를 들어, 과량의 할로겐화물, R2'-I는 탄산칼륨과 같은 적당한 염기의 과량의 존재에서 DMF와 같은 적당한 불활성 희석제에서 화합물 1.8과 결합된다. 한 구체예에서, 대략 2 당량의 R2'-I 및 탄산 칼륨이 사용된다. 반응은 밀봉된 용기에서 주변 조건하에 유지되고 반응이 실질적으로 완료될 때까지 계속되는데 이는 전형적으로 20-72 시간 안에 일어난다. 반응의 완료시, 화합물 1.9는 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상의 방법으로 회수되며, 또 다르게는 정제 및/또는 분리 없이 다음 단계에서 사용된다.
트리플루오로아세틸기는 그 후 제거되어 대응하는 아민, 화합물 1.10을 제공한다. 본 구체예에서, 트리플루오로아세틸기는 아민 보호기로서 작용한다. 상기와 같이, 본 반응은, 예를 들어, 화합물 1.9를 물 및 메탄올과 같은 프로톤성 용매의 혼합물에서 탄산 칼륨과 같은 적당한 과량의 염기와 접촉함으로써 통상적으로 진행한다. 반응은 40°내지 60℃와 같은 상승된 온도에서 수행되며, 반응이 실질적으로 완료될 때까지 계속된다. 반응의 완료시, 화합물 1.10은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 보통의 방법으로 회수되고, 또 다르게는 정제 및/또는 분리없이 다음 단계에서 사용된다.
다음에, 화합물 1.10의 아민기의 대응하는 알킬술포닐아미도기, 화합물 1.11로의 변환은 통상적인 방법을 통해 진행한다. 예를 들어, 한 방법에서, 화합물 1.10은 발생된 산을 제거하기 위해 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 등과 같은 적당한 염기의 존재에서 알킬술포닐 할로겐화물의 약간 과량과 접촉된다. 반응은 바람직하게는 테트라히드로푸란, 디옥산, 클로로포름 등과 같은 적당한 불활성 용매에서 수행된다. 반응은 약 0°내지 30℃에서 바람직하게 수행되고 반응이 실질적을 완료될 때까지 계속되는데 이는 전형적으로 2-48시간에 일어난다. 반응의 완료시, 화합물 1.11은 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 통상의 방법으로 회수될 수 있고, 또 다르게는 정제 및/또는 분리없이 다음 단계에서 사용된다.
화합물 1.11의 카르복실 보호기는 보통의 조건으로 제거되어 화합물 1.12, 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다. 한 구체예에서, t-부틸 보호기는 포름산과 접촉하여 제거될 수 있다. 다른 구체예에서, 벤질 보호기는 상승된 수소 압력하에서 전형적으로 메탄올과 같은 프로톤성 용매 중 팔라듐/탄소 촉매의 존재에서 수소화 접촉함으로써 제거될 수 있다. 반응의 완료시, 화합물 1.12는 중화, 증발, 추출, 침전, 크로마토그래피, 여과 등을 포함하는 보통의 방법으로 회수될 수 있다.
반응은 또한 본 발명의 화합물의 에스테르를 포함한다. 에스테르의 제조는 반응식 1에서,(화합물 1.3) 반응식 2에서(화합물 1.7) 및 반응식 3에서(화합물 1.11)와 같은 상기 기재한 다양한 반응식에서 예시된다. 추가로, 실시예 1은 (S)-4-(3-tert-부톡시-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-이소프로필메틸술폰아미도)-피리미딘-4-일아미노)-3-옥소프로일)페닐 피롤리딘-1-카르복실레이트의 제조를 기재하고, 실시예 4는 (S)-4-(3-tert-부톡시-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-(프로프-2-인일)메틸-술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-옥소프로필)페닐 피롤리딘-1-카르복실레이트의 제조를 기재한다. 본 발명의 산의 에스테르는 당업계에서 공지된 방법에 의해 산으로부터 제조될 수 있다. 예를 들어, 아미노산 메틸 에스테르는 Brenner and Huber, HeIv. Chim. Acta 1953, 36, 1109의 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
약학 제형
제제로서 사용될 때, 본 발명의 화합물은 보통 약학 조성물의 형태로 투여된다. 이들 화합물은 경구, 직장, 경피, 피하, 정맥 내, 근육 내 및 비강 내를 포함하는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 이들 화합물은 주사용 및 경구 조성물 두 가지 모두로서 효과적이다. 이러한 조성물은 약학계에서 공지된 방법으로 제조되며 적어도 하나의 활성 화합물을 포함한다.
본 발명은 또한 약학적으로 허용가능한 담체와 관련되는 상기 화학식 I-II의 화합물 중 한 가지 이상을 활성 성분으로서 함유하는 약학 조성물을 포함한다. 본 발명의 조성물을 제조하는데, 활성 성분은 보통 부형제와 혼합되고, 부형제로 희석되거나 캡슐, 사쉐(sachet), 종이 또는 다른 용기의 형태에 있을 수 있는 이러한 담체 내에 동봉된다. 사용된 부형제는 전형적으로 인간 환자 또는 다른 포유동물에 투여를 위해 적당한 부형제이다. 부형제가 희석제로서 사용될 때, 이는 고체, 반-고체, 또는 액체 물질일 수 있으며, 활성 성분에 대해 비히클, 담체 또는 매질로서 작용한다. 따라서, 조성물은 정제, 알약, 분말, 로젠지, 사쉐, 교갑(cachet), 엘리시르, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸(고체로서 또는 액체 매질에서), 예를 들어, 활성 화합물의 10중량% 까지 함유하는 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사용액 및 멸균 패키지 분말의 형태일 수 있다.
제형의 제조에서, 다른 성분과 합하기 전에 활성 화합물을 분쇄하여 적절한 입자 크기를 제공하는 것이 필요할 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성이라면, 보통 200 메쉬 미만의 입자 크기로 분쇄된다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성이라면, 입자 크기는 분쇄에 의해 정상적으로 조절되어, 예를 들어, 약 40 메쉬제형에서 실질적으로 균일한 분포를 제공한다.
적당한 부형제의 일부 예들은 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 녹말, 검 아카시아, 칼슘 포스페이트, 알지네이트, 트래거캔스, 젤라틴, 규산칼슘, 결절성셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽 및 메틸 셀룰로오스를 포함한다. 제형은 추가적으로, 활석, 마그네슘 스테아레이트 및 미네랄 오일과 같은 윤활제; 습윤제; 에멀젼화 및 현탁화제; 메틸- 및 프로필히드록시-벤조에이트와 같은 보존제; 당미제; 및 향미제를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 당업계에서 공지된 과정을 사용하여 환자에게 투여 후 제형으로 되어 활성 성분의 신속방출성, 서방성 또는 지연 방출성을 제공할 수 있다.
정맥 내 제형에 의하는 치료제의 투여는 약학 업계에 공지되어 있다. 정맥 내 제형은 치료제가 가용성인 조성물인 것은 별도로 하고 특정 품질을 가져야만 한다. 예를 들어, 제형은 활성 성분(들)의 전반적인 안정성을 촉진시켜야 하며, 또한 제형의 제조는 비용이 효과적이어야 한다. 이들 인자는 모두 궁극적으로 정맥 내 제형의 전반적인 성공 및 유용성을 결정한다.
본 발명의 화합물의 약학 제형에 포함될 수 있는 다른 부속 첨가물은 하기와 같다: 용매: 에탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜; 안정화제: 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA), 시트르산; 항균 보존제: 벤질 알코올, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤; 완충제: 시트르산/시트르산 나트륨, 말레산/말레산 나트륨, 프탈산 수소 나트륨, 인산/인산이수소칼륨, 인산/제이인산나트륨; 및 장성 조절제: 염화 나트륨, 만니톨, 덱스트로오스.
완충제의 존재는 약 4 내지 약 8의 범위에서 및 더 바람직하게는 약 4 내지 약 6의 범위에서 수성 pH를 유지하는데 필요할 수 있다. 완충 시스템은 일반적으로 약산과 그것의 가용성 염, 예를 들어, 시트르산 나트륨/시트르산; 또는 2염기산의 1가 양이온 또는 2가 양이온 염, 예를 들어 타르타르산 수소 칼륨; 타르타르산 수소 나트륨, 인산/인산수소2나트륨의 혼합물이다.
사용된 완충 시스템의 양은 (1) 원하는 pH; 및 (2) 약물의 양에 의존한다. 일반적으로 사용되는 완충제의 양은 제형의 완충제:약물의 0.5:1 내지 50:1 몰 비(완충제의 몰 수는 완충제 성분, 예를 들어, 시트르산 나트륨 및 시트르산의 합쳐진 몰 수로서 취해진다)로 pH는 4 내지 8의 범위에서 유지하며 일반적으로, 완충제(합쳐짐) 대 약물 존재의 몰 비는 1:1 내지 10로 사용된다.
본 발명에서 한 가지 유용한 완충제는 조성물의 수성 pH 4-6을 유지하기에 충분한 시트르산의 mL 당 1 내지 15mg에 대해 시트르산 나트륨의 mL 당 5 내지 50mg의 범위에 있는 시트르산 나트륨/시트르산이다.
완충제는 또한 유리 용기 또는 고무 마개로부터 용해되어 나오거나 또는 보통의 수돗물에서 있을 수 있는, 용해된 금속 이온, 예를 들어, Ca, Mg, Fe, Al, Ba과 함께 가용성 금속 착화합물 형성을 통한 약물의 침전을 예방하기 위해 존재할 수 있다. 약제는 약물과 경쟁적 착화제로서 작용할 수 있고 가용성 금속 착화합물을 생성하여 원치않는 미립자의 존재에 이를 수 있다.
게다가, 인간 혈액의 동일한 값에 대해 장성을 조절하기 위한 약제, 예를 들어, 약 1-8mg/mL의 양으로 염화나트륨의 존재는 메스꺼움 또는 설사와 같은 원치않는 부작용 및 가능하게는 관련된 혈관 질환을 이끄는 정맥 내 제형의 투여시 적혈구의 팽창 또는 수축을 피하도록 요구될 수 있다. 일반적으로, 제형의 장성은 282 내지 288 mOsm/kg, 및 일반적으로 285 mOsm/kg의 범위에서 인간 혈액의 그것에 부합하는데, 이는 0.9%의 염화나트륨 용액에 대응하는 삼투압과 동등하다.
정맥 내 제형은 직접 정맥 주사, 정맥 볼루스(i.v. bolus)로 투여될 수 있 고, 또는 0.9% 염화 나트륨과 주사액 또는 기타 적합한 주입용액과 같은 적절한 수액의 첨가에 의한 주입에 의해 투여될 수 있다.
조성물은 바람직하게는 경구 단위 투약 형태로 제형으로 되며, 각 투약은 약 1 내지 약 250mg, 더욱 일반적으로는 약 5 내지 약 100mg, 예를 들어, 약 10 내지 약 30mg의 활성 성분을 함유한다. 용어 "단위 투약 형태"는 인간 환자 및 다른 포유동물에 대한 단일 투약으로서 적당한 물리학적으로 분리된 단위를 말하며, 미리 결정된 양의 활성 물질을 함유하는 각 단위는 적당한 약학적 부형제에 관련하여 원하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된다.
활성 화합물은 넓은 투약 범위에 걸쳐 효과적이며 일반적으로 약학적으로 유효한 양으로 투여된다. 그러나, 실제로 투여되는 화합물의 양은 치료되어야 하는 질환, 투여의 선택 경로, 투여되는 실제 화합물, 환자 개개의 연령, 체중 및 반응, 환자 증상의 중증도 등을 포함하는 상대적 환경을 고려하여 임상의에 의해 결정될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
정제와 같은 고체 조성물을 제조하기 위해, 주된 활성 성분은 약학 부형제와 혼합되어 본 발명의 화합물의 균질한 혼합물을 함유하는 고체 예비제형(preformulation)을 형성한다. 이들 예비제형 조성물을 균질함으로서 언급할 때, 이는 활성 성분이 조성물을 전체로 고르게 분산되어 조성물이 정제, 알약 및 캡슐과 같은 동등하게 유효한 단위 투약 형태로 용이하게 나누어질 수 있음을 의미한다. 그 후 이 고체 예비제형은, 예를 들어, 0.1 내지 약 500mg의 본 발명의 활성 성분을 함유하는 상기 기재된 형태의 단위 투약 형태로 세분화된다.
장기적 작용의 이점을 주는 투약 형태를 제공하기 위하여 본 발명의 정제 또는 알약은 코팅 또는 다른 방식으로 합성될 수도 있다. 예를 들어, 정제 또는 알약은 내부 투약 및 외부 투약 성분을 포함할 수 있고, 후자는 전자를 감싸는 외피의 형태이다. 두 성분은 위에서의 분해를 저지하는데 기능하고 내부 성분이 손상되지 않고 십이지장으로 통과할 수 있게 하거나 방출이 지연되도록 하는 장용 층으로 분리될 수 있다. 다양한 물질이 이러한 장용 층 또는 코팅제용으로 사용될 수 있는데, 이러한 물질들은 다수의 고분자 산 및 고분자 산과 쉘락(shellac), 세틸 알콜 및 셀룰로오스 아세테이트 등의 물질과의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 신규 조성물에서 액체 형태들은 경구적으로 또는 주사에 의한 투여를 위해 포함될 수 있는데, 적절하게 면실유, 참깨 오일, 코코넛 오일, 또는 땅콩 오일로서 식용유와 함께 가향된 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 가향된 에멀션뿐 아니라 엘릭시르 및 유사한 약학적 비히클을 포함한다.
흡입 또는 주입을 위한 조성물은 약학적으로 허용가능한 수성 또는 유기 용매, 또는 이들의 혼합물로서의 용액 및 현탁액, 및 분말이 있다. 액상 또는 고형 조성물은 상기 기술한 바와 같은 적당한 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수도 있다. 바람직하게는 국소 또는 전신 효과를 위하여, 조성물을 구강 또는 비강 호흡 경로로 투여한다. 바람직하게 약학적으로 허용가능한 용매에서 조성물은 불활성 기체의 사용으로 네뷸라이징될 수 있다. 네뷸라이징된 용액은 네뷸라이징 장치로부터 직접 흡입될 수 있고 또는 네뷸라이징 장치가 페이스 마스크 텐트(face masks tent), 또는 간헐성 양압 호흡 치료기에 부착될 수 있다. 용액, 현탁액, 또 는 분말 조성물은 적절한 방식으로 제형을 전달하는 장치로부터 바람직하게는 경구 또는 비강으로 투여될 수 있다.
하기의 제형 실시예는 본 발명의 약학 조성물을 예시한다.
제형 실시예 1
하기의 성분을 함유하는 경질 젤라틴 캡슐이 제조된다:
성분 양( mg /캡슐)
활성 성분 30.0
녹말 305.0
마그네슘 스테아레이트 5.0
하기 성분은 혼합되어 340mg 양으로 경질 젤라틴 캡슐에 채워진다.
제형 실시예 2
정제 제형은 하기 성분을 사용하여 제조된다:
성분 양( mg /정제)
활성 성분 25.0
셀룰로오스, 미정질 200.0
콜로이드성 이산화규소 10.0
스테아르산 5.0
성분은 혼합되고 압축되어 각각 240 mg인 정제를 형성한다.
제형 실시예 3
건조 분말 흡입기 제형은 하기 성분을 함유하여 제조된다:
성분 중량%
활성 성분 5
락토오스 95
활성 성분은 락토오스와 함께 혼합되고 혼합물은 건조 분말 흡입 장치에 첨가된다.
제형 실시예 4
각각 30mg의 활성 성분을 함유하는 정제는 하기와 같이 제조된다:
성분 양( mg /정제)
활성 성분 30.0mg
녹말 45.0mg
미정질 셀룰로오스 35.0mg
폴리비닐피롤리돈 4.0mg
(멸균수에서 10% 용액으로서)
나트륨 카르복시메틸 녹말 4.5mg
마그네슘 스테아레이트 0.5mg
활석 1.0mg
활성 성분, 녹말 및 셀룰로오스는 No. 20 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과되고 완전히 혼합된다. 폴리비닐피롤리돈의 용액은 결과 분말과 함께 혼합되고, 그 후 16 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과되었다. 이렇게 제조된 미립자는 50℃ 내지 60℃에서 건조되고 16 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과된다. 나트륨 카르복시메 녹말, 마그네 슘 스테아레이트 및 활석은 사전에 No. 30 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과되었고, 그 다음에 미립자에 첨가되었으며, 이는 혼합 후, 정제(tablet) 장치에서 압축되어 각각 120mg인 정제를 얻었다.
제형 실시예 5
40mg의 약제를 함유하는 캡슐은 하기와 같이 만들어진다:
성분 양( mg /캡슐)
활성 성분 40.0mg
녹말 109.0mg
마그네슘 스테아레이트 1.0mg
총 150.0mg
활성 성분, 녹말 및 마그네슘 스테아레이트는 혼합되고 No. 20 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과되고, 150mg 양으로 경질 젤라틴 캡슐에 채워진다.
제형 실시예 6
각각 25mg의 활성 성분을 함유하는 좌약은 하기와 같이 제조된다:
성분 양
활성 성분 25mg
포화된 지방산 글리세리드 2,000mg
활성 성분은 No. 60 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과되고 최소의 필요한 열을 사용하여 사전에 녹인 포화된 지방산 글리세리드에서 현탁된다. 혼합물은 그 후 아주 적은 2.0g 용량의 좌약 몰드에 부어지고 냉각된다.
제형 실시예 7
5.0ml 용량마다 50mg의 약제를 각각 함유하는 현탁액은 하기와 같이 제조된다:
성분 양
활성 성분 50.0mg
쟁탄검 4.0mg
나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스
(11%)
미세결정질 셀룰로오스 (89%) 50.0mg
수크로오스 1.75g
벤조산나트륨 10.0mg
향 또는 색 적당량
정제수 5.0mL
활성 성분, 수크로오스 및 쟁탄검은 섞여지고, No. 10 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과된 후, 물에서 미세결정질 셀룰로오스 및 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스의 사전에 제조한 용액과 혼합된다. 벤조산 나트륨, 향 및 색은 약간의 물로 희석되었고 교반과 함께 첨가된다. 충분한 물이 그 후 첨가되어 필요한 부피가 만들어진다.
제형 실시예 8
성분 양
( mg /캡슐)
활성 성분 15.0 mg
녹말 407.0mg
마그네슘 스테아레이트 3.0mg
총 425.0mg
활성 성분, 녹말 및 마그네슘 스테아레이트는 혼합되고, No. 20 메쉬 U.S. 시브를 통해 통과되고, 425.0 mg 양으로 경질 젤라틴 캡슐에 채워진다.
제형 실시예 9
피하 제형은 하기와 같이 제조될 수 있다:
성분 양
활성 성분 5.0 mg
옥수수 오일 1.O mL
제형 실시예 10
정맥 주사 제형은 하기와 같이 제조될 수 있다:
성분 양
활성 성분 250 mg
등장성 식염수 100O mL
본 발명의 방법에서 사용되는 다른 제형은 경피적 전달 장치("패치")를 사용한다. 이러한 경피 패치는 조절된 양으로 본 발명의 화합물의 연속적 또는 불연속적 주입을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 약학적 약제의 전달의 위한 경피적 패치 의 구조 및 사용은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참고로써 포함되는 1991년 6월 11일 공개된 미국 특허 5,023,252호를 참조. 이러한 패치는 약학적 제제의 연속적, 규칙적 또는 전달 요구에 따라 구성될 수 있다.
빈번하게, 직접 또는 간접적으로 뇌에 약학 조성물을 도입하는 것이 희망되고 필요로 되어질 것이다. 직접적인 기술은 보통 혈액-뇌 장벽을 우회하기 위해 숙주의 뇌실계 안으로 약물 전달 카테터의 장착과 연관된다. 생물학적 인자를 신체의 특정 해부학적 부위로 전달하기 위해 사용되는 하나의 이러한 이식 전달 시스템은 본원에 참고로써 포함되는 미국 특허 5,011,472에 기재된다.
간접 기술은, 대개 친수성 약물의 지용성 약물로의 전환에 의해 약물 잠복성(latentiation)을 제공하기 위한 조성물을 제형하는 것을 포함한다. 잠복성은 일반적으로 약물에 존재하는 히드록실, 카르보닐, 설페이트, 및 1차 아민기의 차단을 통해 약물이 더 지용성이 되게 하여 혈액 뇌 장벽을 가로질러 수송이 가능하게 하여 달성된다. 또 다르게는, 친수성 약물의 전달은 일시적으로 혈액 뇌 장벽을 개방할 수 있는 고장액의 혈관 내 주입에 의해 향상될 수 있다.
본 발명에서 사용을 위한 다른 적당한 제형은 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985)에서 찾을 수 있다.
상기 주목한 바와 같이, 본원에 기재한 화합물은 상기 기재한 다양한 약물 전달 시스템에서 사용에 적당하다. 추가적으로, 투여된 화합물의 생체 내 혈청 반감기를 향상시키기 위해, 화합물은 캡슐화되거나, 리포좀의 루멘에 유입되고, 콜로 이드로서 제조될 수 있고, 또는 화합물의 혈청 반감기를 연장시키는 다른 통상적인 기술이 사용될 수도 있다. 각각 본원에 참고문헌으로써 인용되는 Szoka, et al, 미국 특허 Nos. 4,235,871, 4,501,728 및 4,837,028에서 설명되는 바와 같은 다양한 방법이 리포좀을 제조하기 위해 이용가능하다.
원하는 생물학적 활성을 가지는 화합물은 필요와 같이 변형되어 개선된 약물학적 특성과 같은 원하는 특성(예를 들어, 생체 내에서 안정성, 생체이용가능성) 또는 진단적 용도로 검출되는 능력을 제공할 수 있다. 안정성은 펩티다제 또는 인간 혈장 또는 혈청과 함께 배양하는 동안 단백질의 반감기를 측정하는 것과 같은 다양한 방법으로 분석될 수 있다. 다수의 이러한 단백질 안정성 분석이 기재되었다(예를 들어, Verhoef et al., Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 1990. 15(2):83-93 참조).
본 발명의 접합체는 VLA-4 길항제이며 비접합 화합물과 비교하여 향상된 생체 내 보유를 제공하는 것으로 생각된다. 생체 내 접합체의 이러한 개선된 보유는 더 낮게 요구되는 약물의 투약을 야기하며, 더 적은 부작용 및 감소된 독성의 가능성을 야기할 것이다. 게다가, 약물 제형은 유사한 또는 개선된 치료적 효과를 이루는 동안 환자에게 더 적은 빈도로 투여될 수 있다.
본 발명의 접합체는 VLA-4에 경쟁적 결합을 함으로써 VLA-4에 의해 매개되는 내피 세포로의 백혈구 부착의 생체 내 억제를 나타내도록 기대된다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물은 VLA-4 또는 백혈구 부착에 의해 매개되는 질병의 치료를 위한 정맥주사 제형에 사용될 수 있다. 이러한 질병은 포유동물 환자에서 염증성 질병, 예로써, 천식, 알츠하이머병, 아테롬성 동맥 경화증, AIDS 치매, 당뇨병(급성 유년 발병형 당뇨병을 포함), 염증성 장 질환(궤양성 대장염 및 크론병을 포함), 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 조직 이식, 암 전이, 수막염, 뇌염, 뇌졸중, 및 기타 대뇌외상, 신장염, 망막염, 아토피 피부염, 건선, 심근허혈 및 성인 호흡 장애 증후군에서 발생하는 바와 같은 급성 백혈구-매개 폐 손상을 포함한다. 본 발명의 제형은 크론병 다발성 경화증 및 류마티스 관절염과 같은 염증성 장 질환의 치료에 특히 유용하다.
염증성 질환을 치료하는 효능을 증명하기 위한 적합한 생체 내 모델은 마우스, 래트, 기니아 피그 또는 영장류에서 EAE(실험적 자가 면역성 수막염) 뿐 아니라 α4 인테그린에 의존하는 다른 염증성 모델을 포함한다.
염증성 장 질병 또는 "IBD"는 장에 염증이 생기도록 야기하며, 일반적으로 비정상적 경련 및 통증, 설사, 체중 감소 및 장 출혈을 포함하는 증상이 나타나는 질환의 군을 언급한다. IBD는 두 개의 유사한 질병 궤양성 대장염("UC") 및 크론병("CD")에 대한 집합적인 용어이다.
크론병("CD")은 위장(GI) 관의 염증을 야기하는 만성 자가면역 질환이다. 비록 GI 관의 어떤 부분이 포함될 수 있다고 하더라도, CD는 소장 및/또는 결장에 가장 흔하게 영향을 미친다. 크론병에는, 모든 층의 장이 포함될 수 있는데, 질병에 걸린 장의 패치들 사이에 정상의 건강한 장이 있을 수 있다. CD는 질병 부분과 인접한 구조(즉, 방광, 다른 장 부분, 피부) 사이의 섬유증, 협착증 및 갈라짐, 샛 길(fistulae) 및 농양과 관련된다. CD 환자는 전형적으로 설사, 비정상적 통증 및 체중 감소를 나타낸다. 비정상적 통증은 보통 잠행성이며, 압통성, 염증성 종괴와 관련된다. 열, 체중 감소, 구내염, 항문주위 샛길(perianal fistulae) 및/또는 열창, 관절염 및 결절성 홍반은 모두 흔히 보여진다. CD과 관련된, 특히 현재 이용가능한 약물로 조절되지 않는 질병을 가지는 환자에서 상당한 사망률이 있다. 환자의 75%는 중증의 질병을 완화하기 위해 외과적 수술을 필요로 하며 이들 환자의 75%는 10년 이내에 수술 후 질병 재발을 경험할 것이며 50%는 20년 이내에 반복적 수술을 겪을 것이다. 이런 높은 재발률은 활성 질병에 대한 새로운 효과적인 치료 및 질병 완화의 유지에 대한 필요를 보여준다.
궤양성 대장염 또는 "UC"는 혈변을 특징으로 하는 대장 및 직장의 만성, 일시적, 염증성 질환이다. 궤양성 대장염은 광범위하게 결장 점막 및 점막하층으로 제한되는 염증성 반응이다. 궤양성 대장염은 위치에 따라서 분류될 수 있다: "직장염"은 직장만을 포함하며, "항문에스상결장염(proctosigmoiditis)"은 직장 및 에스상결장(sigmoid colon)에 영향을 주고, "좌측 대장염"은 대장의 좌측을 포함하고, "직장항문염(pancolitis)"은 전체 결장에 염증을 일으킨다. 림프구 및 대식 세포는 염증성 장 질환의 병변에 많이 있으며 염증성 손상에 기여할 수 있다. 염증성 장 질환(IBD)의 대표적인 동물 모델은 HLA-B27 유전자변환 래트로 수행된다. 이들 래트는 척추 관절염, 골격에 영향을 미치는 염증성 질환의 군과 관련되는 인간 HLA-B27 분자(중사슬 및 베타 글로불린 유전자)를 과발현한다. 골격 염증성 변화의 개시에 앞서 이들 동물은 소장에서 비-육아종성 염증을 진행하며 결장에서 음와종양 을 퍼뜨리는데, 병상은 인간의 크론병과 유사하다. 효능 연구는 하기 실시예 J에서 기재되는 바와 같은 본 발명의 화합물과 함께 HLA-B27 유전자 변환 래트 IBD 모델에서 수행되었다.
천식은 기관지 기도의 발작성 수축을 강력하게 하는 다양한 자극에 대한 기관기관지 나무의 증가된 반응을 특징으로 하는 질병이다. 자극은 히스타민, 호산성 및 호중성 주화성 인자, 류코트린, 프로스타글란딘 및 혈소판 활성 인자를 포함하는 IgE-코팅 대식 세포로부터 염증의 다양한 매개자의 방출을 야기한다. 이들 인자의 방출은 염증성 손상을 야기하는 호염기성, 호산구 및 호중구를 보충한다.
천식의 생체 내 연구를 위한 일부 적합한 동물 모델은 실시예 E에 기재되는 바와 같은 래트 천식 모델, 마우스 천식 모델 및 양 모델을 포함한다.
아테롬성동맥경화증은 동맥(예를 들어, 관상동맥, 경동맥, 대동맥 및 장골)의 질환이다. 기초 병변, 죽종(atheroma)은 지질의 코어를 가지며 섬유성 뚜껑(fibrous cap)을 덮는 내막 내의 높아진 병소 플라그로 구성된다. 죽종은 동맥 혈류량을 손상시키며 영향받은 동맥을 약화시킨다. 심근 및 뇌경색은 이 질병의 주된 결과이다. 대식세포 및 백혈구는 죽종에 보충되며 염증성 손상에 기여한다.
류마티스 관절염은 주로 관절의 기능장애 및 파괴를 야기하는 만성이며, 재발성의 염증성 질환이다. 류마티스 관절염은 보통 손과 발의 소 관절에 우선 영향을 미치지만, 그 다음에 손목, 팔꿈치 및 무릎을 포함할 수 있다. 관절염은 순환으로부터 관절의 활막 경계로 스며드는 백혈구와 윤활 세포의 상호작용으로부터 기인한다. 예를 들어, Paul, Immunology (3d ed., Raven Press, 1993)을 참조. 시간에 걸쳐, 골 침식, 연골의 파괴 및 관절 완전성의 완전 손실이 일어날 수 있다. 결국, 다발성 장기 시스템이 영향을 받을 수 있다. 류마티스 관절염 중 관절 손상은 발병 후 윤활 대식세포 및 섬유아세포의 증식과 함께 시작한다. 림프구는 혈관주위 영역에 침투하고, 내피 세포를 증식시킨다. 그 후 신혈관형성이 일어난다. 영향받은 관절 내 혈관은 염증 세포의 작은 덩어리로 막히게 된다. 시간이 지나면, 염증을 일으킨 조직은 불규칙적으로 성장하게 되고, 침습성 판누스(pannus) 조직을 형성한다. 판누스는 연골 및 뼈를 침입하고 파괴한다. 복합 사이토카인, 인터류킨, 프로테이나아제 및 성장 인자를 방출하여, 추가의 관절 파괴 및 전신 합병증의 발생을 야기한다. Firestein G. S. Etiology and pathogenesis of rheumatoid arthritis, Ruddy S, Harris ED, Sledge CB, Kelley WN, eds. Kelley's Textbook of Rheumatology, 7th ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 2005:996-1042 참조.
류마티스 관절염의 연구를 위한 적절한 동물 모델은 본원의 실시예 G 및 H에기재되는 바와 같은 면역보강제 유도 관절염(Adjuvant Induced Arthritis ("AIA")) 및 콜라겐 유도 관절염("CIA")을 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물의 다른 징후는 VLA-4로 매개되는 기관 또는 거부반응의 치료에 있다. 최근 몇 년에 걸쳐, 피부, 신장, 간, 심장, 폐, 췌장 및 골수와 같은 조직 및 기관을 이식하기 위한 외과적 기술의 효능에서 상당한 개선이 있었다. 어쩌면 주된 두드러진 문제는 이식된 동종이식편 또는 기관에 대한 수증자의 면역관용을 유발하기 위한 충분한 약제의 부족이다. 동종 세포 또는 기관이 숙주로 이식될 때(즉, 기증자와 수증자는 동일한 종의 다른 개체이다), 숙주 면역 체계는 이식 된 조직의 파괴를 이끄는 이식에서 외래 항원에 대한 면역 반응을 시작할 가능성이 있다. CD8+ 세포, CD4 세포 및 단핵세포는 모두 이식 조직의 거부에 포함된다. 알파-4 인테그린에 결합되는 본 발명의 화합물은 유용하며, 특히, 수증자의 동종항원-유발된 면역 반응을 차단하는 것에 의해 이러한 세포가 이식된 조직 또는 기관의 파괴에 참여하는 것을 예방한다. 예를 들어, Paul et al., Transplant International 9, 420-425 (1996); Georczynski et al., Immunology 87, 573-580 (1996); Georcyznski et al., Transplant . Immunol. 3, 55-61 (1995); Yang et al., Transplantation 60, 71-76 (1995); Anderson et al, APMIS 102, 23-27 (1994) 참조.
VLA-4에 결합하는 본 발명의 화합물과 관련된 사용은, "이식편대숙주(graft versus host)" 질환("GVHD")에 포함된 면역 반응을 조절하는 것이다. 예를 들어, Schlegel et al., J. Immunol. 155, 3856-3865 (1995) 참조. GVHD는 면역세포(immunologically competent cell)가 동종 수증자에게 전달될 때 발생하는 잠재적으로 치명적인 질병이다. 이 상황에서, 기증자의 면역능 세포(immunocompetent cell)는 수증자의 조직을 공격할 수 있다. 피부, 장 상피 및 간의 조직은 상습적인 표적이며 GVHD의 과정 동안 파괴될 수 있다. 질병은 골수 이식처럼 면역 조직이 이식될 때 특히 심각한 문제를 나타내지만; 덜 심각한 GVHD는 심장 및 간 이식을 포함하는 다른 경우도 마찬가지로 보고되었다. 본 발명의 치료제는, 특히, 기증자 T-세포의 활성을 차단함으로써 숙주 내 표적 세포를 용해하기 위한 그것의 능력을 방해하는데 사용된다.
본 발명의 화합물의 추가 사용은 암 전이를 억제하는 것이다. 몇몇의 종양 세포는 VLA-4 및 내피 세포에 이러한 세포의 부착을 차단하는 VLA-4를 결합하는 화합물을 발현하는 것으로 보고되었다. Steinback et al., Urol . Res . 23, 175-83 (1995); Orosz et al., Int. J. Cancer 60, 867-71 (1995); Freedman et al., Leuk. Lymphoma 13, 47-52 (1994); Okahara et al., Cancer Res. 54, 3233-6 (1994).
본 발명의 화합물의 추가 사용은 다발성 경화증을 치료하는 것이다. 다발성 경화증은 미국에서 250,000 내지 350,000 명으로 추정되는 사람들에게 영향을 주는 진행성 신경 자가면역 질환이다. 다발성 경화증은 특정 백혈구 공격에서 특이적 자가면역 반응의 결과로 생각되며, 미엘린의 파괴를 개시하고, 절연체는 신경 섬유를 덮는다. 다발성 경화증의 동물 모델에서, 뮤린 단일클론 항체는 VLA-4가 내피에 백혈구의 부착을 차단하는 것으로 나타난 것에 대해 지시되었고, 따라서, 동물에서 중추신경 시스템의 염증 및 이후의 마비를 예방한다.16
본 발명의 약학 조성물은 다양한 약물 전달 시스템의 사용에 적합하다. 본 발명에서 사용에 적당한 제형은 Remington's Pharmaceutical Sciences , Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed(1985)에서 발견된다.
환자에 투여되는 양은 투여되는 것, 예방 또는 치료와 같은 투여의 목적, 환자의 상태, 투여의 방법 등에 의존하여 다양할 것이다. 치료 용도에서, 조성물은 적어도 부분적으로 질병의 증상 또는 그것의 합병증을 치료 또는 저지하기에 충분 한 양으로 이미 질병으로 고통받는 환자에게 투여된다. 이를 달성하기에 적합한 양은 "치료적으로 유효한 용량"으로서 정의된다. 이러한 사용에 유효한 양은 본원에 제공된 바와 같은 적절한 동물 모델 데이터에 관해서 치료되어야 하는 질병 상태 및 염증의 중증도, 환자의 연령, 체중 및 일반적 상태와 같은 인자에 의존하여 담당의의 판단에 의존할 것이다. 적절한 인간 투약을 추정하기 위한 방법은, 이러한 데이터에 기초하여, 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Wagner, J. G. Pharmacokinetics for the Pharmaceutical Scientist. Technomic, Inc., Lancaster, PA 1993 참조).
환자에게 투여되는 조성물은 상기 기재된 약학 조성물의 형태이다. 이러한 조성물은 보통의 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있고, 또는 멸균 여과될 수 있다. 결과 수성 용액은 있는 그대로 사용을 위해 패키징되거나 동결건조될 수 있고, 동결건조 제제는 투여에 앞서 멸균 수성 담체와 함께 합쳐진다.
원하는 생물학적 활성을 가지는 화합물은 개선된 약학 특성과 같은 원하는 특성(예를 들어, 생체 내 안정성, 생체-이용가능성) 또는 진단적 용도로 검출되는 능력을 제공하기 위한 필요로서 변형될 수 있다. 안정성은 펩티다아제 또는 인간 혈장 또는 혈청으로 배양하는 동안 단백질의 반감기를 측정하는 것과 같은 다양한 방법으로 분석될 수 있다. 많은 이러한 단백질 안정성 분석이 기재되었다(예를 들어, Verhoef et al., Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 1990, 15(2):83-93 참조).
본 발명의 화합물의 치료 투약은, 예를 들어, 치료되기 위한 특정 사용, 화 합물의 투여 방식, 환자의 건강 및 상태, 및 처방하는 의사의 판단에 따라서 다양할 것이다. 예를 들어, 정맥주사 투여를 위해, 용량은 전형적으로 킬로그램 체중 당 약 20 μg 내지 약 2000 μg, 바람직하게는 약 20 μg 내지 약 500 μg, 더 바람직하게는 킬로그램 체중 당 약 100 μg 내지 약 300 μg의 범위일 것이다. 비강내 투여에 적당한 투약 범위는 일반적으로 킬로그램 체중 당 약 0.1pg 내지 1mg이다. 유효량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도되는 용량-반응 커브로부터 추정될 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 α4β1, 및 α4β7 인테그린의 작용을 결합 또는 길항할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 또한 그것 각각의 리간드에 이들 인테그린의 결합으로 유발되는 증상, 장애 또는 질병을 예방 또는 역전시키기에 유용하다.
본 발명의 다른 양태에서, 본원에 기재된 화합물 및 조성물은, 예를 들어, 다발성 경화증의 경우에 혈류로부터 중추신경계로의, 또는 미엘린의 염증-유도된 파괴를 일으키는 영역으로의 면역 세포의 이동을 억제하는데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이들 시약은 수초 탈락을 억제하고 추가로 수초재형성을 촉진할 수 있는 방식으로 면역 세포의 이동을 억제한다. 또한, 시약은 주로 CNS에서 침윤성 면역 세포가 수초의 발생에 영향을 미치는 선천성 대사 장애와 관련하여 중추 신경계의 수초탈락을 예방하고 수초재형성을 촉질할 수 있다. 또한, 시약은 바람직하게는 수초탈락 질병 또는 질환에 의해 유도된 마비를 갖는 환자에 투여될 때 마비를 감소 시킨다.
본원에 기재된 조성물, 화합물 및 방법에 의한 치료를 위해 포함되는 염증성 질병은 일반적으로 수초탈락과 관련된 질환을 포함한다. 조직학적으로, 수초 비정상은 수초탈락 또는 수초이상이다. 수초탈락은 미엘린의 파괴를 의미한다. 수초이상성은 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)의 기능장애로부터 초래되는 미엘린의 불완전한 형성 또는 유지를 의미한다. 바람직하게는, 본원에 기재된 조성물 및 방법은 수초탈락과 관련되는 질병 및 질환을 치료하고 수초재형성에 도움을 주는 것으로 생각된다. 치료를 위해 생각되는 추가 질병 또는 질환은 수막염, 뇌염 및 척수 상해 및 일반적으로 염증성 반응의 결과로서 수초탈락을 유발하는 질환을 포함한다.
본원에 개시되는 조성물, 화합물 및 혼합물은 수초탈락과 관련되는 질환 및 질병을 치료하는데 사용을 위한 것으로 생각된다. 수초탈락을 포함하는 질병 및 질환은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 다발성 경화증, 선천적 대사 장애(예를 들어, 페닐케토우레아(PKU), 테이-삭스병, 니만-피크병, 고셰병, 헐러 증후군, 크라베 병 및 발생 수초에 영향을 주는 기타 백색질형성장애), 비정상 수초를 가지는 신경장애(예를 들어, 길랑바레, 만성 염증성 수초탈락 다발신경병증(CIDP), 다초점성 CIDP, 다초점성 운동신경병증(MMN), 항-MAG(미엘린-연합당단백질) 증후군, GALOP(보행 장애, 자가항체, Late-age, 발병, 다발성신경병증) 증후군, 항-술파티드 항체 증후군, 항-GM2 항체 증후군, Crow-Fukase 증후군 및 타카츠키(Takatsuki)병으로 알려진 POEMS(다발성신경병증, 장기비대증, 내분비계 질환, M-단백질 및 피 부 변화) 증후군, 신경주위염, IgM 항-GD1b 항체 증후군), 약물 관련 수초탈락(예를 들어, 클로로퀴논, FK506, 퍼헥실린, 프로카이나마이드 및 지멜딘의 투여에 의해 야기됨), 기타 유전성 수초탈락 질환(예를 들어, 탄수화물결핍당단백증후군, 코케인 증후군(Cockayne's syndrome), 선천적 하이포미엘린화(congenital hypomyelinating), 선천적 근육성이영양증, 화버병, 마리네스코-쇄그렌 증후군, 이염백질이영양증, 펠리제우스-메르츠바하병, 레프숨병, 프리온 관련 질환 및 살라병) 및 기타 수초탈락 질환(예를 들어, 수막염, 뇌염(또한 급성산재성뇌척수염(ADEM)) 또는 척수 상해) 또는 질병을 포함한다.
생체 내 이들 질병을 연구하는데 사용될 수 있는 다양한 질병 모델이 있다. 예를 들어, 동물 모델은 이에 제한되는 것은 아니지만 하기를 포함한다:
질병 모델 종
EAE 마우스, 래트, 기니아 피그
미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG) 유발된 EAE 래트
수초탈락의 TNF-α유전자변환 모델 마우스
가장 흔한 수초탈락 질병은 다발성경화증("MS")이지만, 많은 다른 대사성 및 염증성 질환은 결핍성 또는 비정상 수초화를 야기한다. MS는 성인초기에 나타나고 대부분의 경우에 상당한 장애로 진행하는 만성 신경학적 질병이다. 미국에서만 대략 350,000명의 MS 환자가 존재한다. 외상을 제외하고는, MS가 초기 내지 중기 성인기에서 가장 빈번한 신경학적 장애의 원인이다.
MS의 원인은 현재 결정되고 있다. MS는 만성 염증, 수초탈락 및 신경아교증(흉터형성)을 특징으로 한다. 수초탈락은 축색 전도에서 네거티브 또는 포지티브 효과를 야기할 수 있다. 포지티브 전도 이상은 느린 축색 전도, 저주파가 아닌 고주파의 연속 충격의 존재에서 일어나는 가변적 전도 또는 완전한 전도 차단을 포함한다. 포지티브 전도 비정상은 수초탈락된 엑손 사이의 비정상적 "혼선(cross-talk)" 및 기계적 응력과 동시적이거나 이들에 후속하는 이소성 충격 생성을 포함한다.
미엘린 염기성 단백질(MBP) 또는 미엘린 단백지질 단백질(PLP)인 수초 단백질에 대해 반응성인 T 세포는 실험적 알레르기성 뇌척수염에서 CNS 염증을 매개하는 것으로 관찰되었다. 또한, 환자들은 상승된 수준의 CNS 면역글로불린(Ig)을 갖는 것으로서 관찰되었다. 또한, MS에서 관찰된 조직 상해의 일부가 활성화된 T 세포, 대식구 또는 성상세포의 사이토카인에 의해 매개되는 것이 가능하다.
오늘날, MS로 진단된 환자의 80%는 발병 개시 후 20년간 생존한다. MS를 다루기 위한 치료법은 (1) 급성 악화의 치료를 포함하는 질병 과정의 변화를 목표로 하고 질병의 장기간 억제와 관련되는 치료; (2) MS의 증상의 치료; (3) 의학적 합병증의 예방 및 치료; 및 (4) 2차적인 개인적 및 사회적 문제의 관리를 포함한다.
MS의 발병은 극적이거나, 너무 경증이어서 환자로 하여금 치료받을 생각을 가지게 하지 않는다. 가장 흔한 증상은 수족 중 한 가지 이상의 쇠약, 시신경염에 기인하는 시야 혼탁(visual blurring), 감각장애, 복시증 및 운동실조증을 포함한다. 질병 경과는 (1) 재발성 MS, (2) 만성 진행성 MS 및 (3) 비활성 MS의 세 가지 일반적 범주로 분류될 수 있다. 재발성 MS는 신경학적 기능장애의 반복적 발작을 특징으로 한다. MS 발작은 일반적으로 수 일 내지 수 주에 걸쳐 진행되고, 이어서 완전히 회복되거나, 부분적으로 회복되거나, 회복되지 않을 수도 있다. 회복 기간이 드물게는 2년 이상 지속 될 수 있음에도 불구하고, 발작으로부터의 회복은 일반적으로 증상의 절정으로부터 수 주 내지 수 개월 내에 이루어진다.
만성 진행성 MS는 안정화 또는 완화 기간없이 점진적으로 진행성인 악화를 일으킨다. 이러한 형태는 재발성 MS의 과거 병력을 지닌 환자에서 나타나지만, 환자들 중 20%에서는 재발이 일어나지 않을 수 있다. 또한 급성 재발은 진행 과정 동안 일어날 수도 있다.
세번째 형태는 불활성 MS이다. 불활성 MS는 가변성 크기의 고정된 신경학적 결함을 특징으로 한다. 불활성 MS를 지닌 대부분의 환자는 재발성 MS의 과거 병력을 가진다.
질병 과정은 또한 환자의 연령에 의존한다. 예를 들어, 유리한 예후 인자는 초기 발병(아동기를 제외), 재발성 과정 및 발병 5년 후 잔류 장애가 거의 없다는 사실이 있다. 대조적으로, 불리한 예후는 발병의 늦은 연령(즉, 40세 이상) 및 진행성 과정과 관련된다. 만성 진행성 MS는 고령에 재발성 MS로 시작하는 경향이 있기 때문에 이들 변수들은 서로 의존적이다. 만성 진행성 MS로부터의 장애는 보통 환자의 진행성 하반신마비(paraplegia) 또는 사지마비(quadriplegia)(마비)에 기인한다. 본 발명의 한 양태에서, 환자는 바람직하게는 질병의 재발 단계에 있을 때보다 오히려 환자가 완화 단계에 있을 때 치료될 것이다.
부신피질 자극호르몬 또는 경구 코르티코스테로이드(예를 들어, 경구 프레드니손 또는 정맥 내 메틸 프레드니솔론)의 단-기간 사용은 MS의 급성 악화를 지닌 환자를 치료하기 위한 유일한 특이적 치료적 기준이다.
MS에 대한 신규한 요법은 인터페론-베타-1b, 인터페론-베타-1a 및 Copaxone®(전에 공중합체 1로서 알려짐)으로 환자를 치료하는 것을 포함한다. 이들 3가지 약물은 질병의 재발률을 상당하게 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 이들 약물은 근육내 또는 피하 내에 자가투여된다.
그러나, 현재 치료 방식 중 어떤 것도 수초탈락을 억제하지 못할 뿐 아니라, 자발적인 수초재형성을 촉진 또는 이것이 일어나게 못하게 하거나 또는 마비를 감소시키지 못한다. 본 발명의 한 양태는 본원에 개시된 약제를 단독으로 사용하거나 다른 표준 치료 방식과 병용하여 MS를 치료하는 것을 고려한다.
또한 방사선은 수초탈락을 유발할 수 있다. 방사선으로 인한 중추 신경계(CNS) 독성은 (1)혈관 구조에 대한 손상, (2) 희소돌기아교세포-2 성상세포 원종 및 성숙한 희소돌기아교세포의 결실, (3) 해마, 소뇌 및 피질에서 신경 줄기 세포 집단의 결실 및 사이토카인 발현의 전신적 변화에 의해 야기되는 것으로 믿어진다. 대부분의 방사선 상해는 특정 암의 치료 동안 투여되는 방사선요법으로부터 유래된다. Belka et al, 2001 Br. J. Cancer 85: 1233-9에 대한 검토를 참조. 그러나, 방사능 노출은 또한 우주비행사(Hopewell, 1994 Adv. Space Res. 14: 433-42)및 방사능활성 물질에 대한 노출의 사건에 대한 이슈일 수 있다.
이들 질환 및 질병은 또한 경감 또는 완화하는 치료로 생각된다.
하기의 합성 및 생물학적 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로 제공되며 본 발명의 범주를 어떤 방법으로 제한하는 것으로서 해석되는 것은 아니다. 달리 언급되지 않는다면, 모든 온도는 섭씨이다. 하기 실시예에서, 하기의 약어는 하기의 의미를 가진다. 약어가 정의되지 않는다면, 그것의 일반적으로 받아들여지는 의미를 가진다.
Å = 옹스트롬
br s = 넓은 단일선(broad singlet)
BSA = 우혈청 알부민
d = 이중성
dd = 이중선의 이중선
dq = 사중선의 이중선
dsextet = 육중선의 이중선
DMF = 디메틸포름아미드
EC50 = 모집단의 50%에 대해 존재하는 원하는 반응에서 투약
EDTA = 에틸렌디아민 테트라아세트산
EtOAc = 에틸 아세테이트
EtOH = 에탄올
Et3N = 트리에틸아민
EM = 방출의 파장 (nm)
EX = 여기의 파장 (nm)
g = 그램
HBSS = 행크 균형 염 용액(Hank's balanced salt solution)
HEPES = 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산
HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피
hrs 또는 h = 시간
IC50 = 시험관내 효소의 50% 억제에 요구되는 억제제의 농도
in. = 인치
i.p. = 복강내
i-PrOH = iso-프로판올
kg = 킬로그램
L = 리터
LC/MS = 액체 크로마토그래피/질량 분석법
m = 다중선
m2 = 평방미터
M = 몰농도
mbar = 밀리바
mg = 밀리그램
MHz = 메가헤르츠
min. = 분
mL = 밀리리터
mm = 밀리미터
mM = 밀리몰농도
mmol = 밀리몰
mOsm = 밀리오스몰
MTBE = 메틸 tert-부틸에테르
m/z 또는 M/Z = 질량 대 전하 비
N = 노르말
ng = 나노그램
nm = 나노미터
NMR = 핵자기공명
PBS = 인산완충식염수
PBS++ = 칼슘 및 마그네슘을 가지는 PBS
ppm = 백만분율
psi = 평방인치 당 파운드
p.o. = 경구영양을 포함하는, 경구로, 문자그대로 "경구로(by mouth)"
q = 4중선
q.s. = 충분량
Rf = 체류 인자(물질에 의해 이동한 거리/용매 선단에 의해 이동한 거리의 비)
rpm = 분 당 회전
rt 또는 RT = 실온
Rt = 보유 시간
s = 단일선
t = 삼중선
TFA = 트리플루오로아세트산
THF = 테트라히드로푸란
TLC = 얇은막 크로마토그래피
UV = 자외선
wt/wt = 중량 대 중량 비
w/v = 중량 대 부피 비
μg = 마이크로그램
μm = 마이크론
μM = 마이크로몰농도
실시예 1
(S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N- 이소프로필메틸술폰아미도 )피리미딘-4- 일아미노 )-3-(4-( 피롤리딘 -1- 카르보닐옥시 ) 페닐 ) 프로판산의 제조
실시예 1에서 사용된 합성 프로토콜을 하기 예시되는 반응식 4에 요약한다:
Figure 112008067163656-PCT00030
반응식 4에서, 화합물 4는 5-니트로피리미딘 화합물 1로부터 3개의 포트 서열로 제조하였다. 반응식 4의 합성 프로토콜은 하기 중 하나 이상에 의해 본 화합물의 제조를 상당히 단순화한다:
1) 니트로기 환원 단계를 실질적으로 가속화한다;
2) 간결한 환원/환원성 아미노화 서열을 동일한 용매 및 동일한 촉매와 함께 동일한 플라스크에서 수행하여, 조작을 감소하고 공기에 대한 산소 민감성 생성물의 노출을 최소화한다;
3) 환원성 아미노화 단계를 위한 조건은 비스-이소프로필아미노 피리미딘 부산물의 생성을 최소화하여 화합물 3의 크로마토그래피 정제를 위한 필요를 제거한다;
4) 기재된 조건으로 모노-이소프로필아미노피리미딘 중간체, 화합물 2를 대 응하는 L-타르타르산염의 분쇄로 정제하는 것이 가능하다(화합물 2의 이런 개별 정제에 대한 필요가 환원성 아미노화 단계에서 개선에 의해 불필요하게 제공되었음에도 불구하고), 그리고
5) MTBE-헥산 또는 MTBE-시클로헥산으로부터 결정화에 의한 화합물 3의 개별 정제를 위한 조건을 확인하였다.
반응식 4의 반응 단계에서, 플래쉬 크로마토그래피를 800 g KP-Sil 실리카 카트리지(32-63 μM, 60 옹스트롬, 500-550 m2/g)을 사용하는 Biotage Flash 75L를 사용하여 수행하였다. Rf를 EM Sciences Silica Gel 60 F(254), 정상층에 대해 250 μM 후판을 사용하는 분석적 얇은 막 크로마토그래피로 보고하였다. NMR 스펙트럼을 Varian Gemini 300 MHz 스펙트로미터(1H 스펙트럼에 대해 300 MHz 및 13C 스펙트럼에 대해 75 MHz)에서 획득하였다. 분석적 HPLC를 Phenomenex Luna, 3 μm, C-18, 30 x 4.6 mm 컬럼을 가지는 Agilent 1100 시리즈 HPLC에서 수행하였다. 검출기는 210nm에서 UV이었다. 용매는 수 중 0.1% TFA 및 아세토니트릴 중 0.1% TFA이었다. 표준 유속은 1.5mL/분이었고, 표준 방법은 2.33분에 걸쳐 20% CH3CN 내지 70% CH3CN로 변화하는 용매 기울기를 가지는 M1을 가리킨다. 또 다른 방법은 2mL/분의 유속 및 1.75분에 걸쳐 20% CH3CN 내지 70% CH3CN로 변하는 기울기를 가지는 M2를 가리킨다. 방법 M15는 10분에 걸쳐 20% CH3CN 내지 70% CH3CN으로 변화하는 용매 조성물과 함께 1.5ml/min의 유속을 가지며, 2분 동안 70%를 유지한 후 1분에 걸쳐 95%로 진 입하고 2분 동안 95%에서 유지하였다. LC/MS를 전자분사이온화(화학적 이온화로서 달리 표시되지 않는다면)를 가지는 시리즈 1100 MSD와 함께 Agilent 1100 Series HPLC에서 수행하였다. 컬럼 및 상태를 프리스탠딩 HPLC와 매칭하였다.
단계 1: (S)-4-(3- tert - 부톡시 -2-(2-( 디에틸아미노 )-5-( 이소프로필아미노 )피리미딘-4- 일아미노 )-3- 옥소프로필 ) 페닐 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (2)의 제조
Figure 112008067163656-PCT00031
니트로피리미딘-카르바메이트 1 (100 g, 189 mmol) 및 PtO2 (6.33 g, 27.85 mmol)를 젖은 360mL의 THF (5% H2O)에서 현탁하였다. 혼합물을 실온에서 수소하에(60 psi) 교반하였다. 3시간 후, TLC (실리카겔 상에서 50% EtOAc/헥산)는 니트로기의 완전한 환원을 나타내었다(EtOAc로 실리카에서 TLC 분석은 아미노-피리미딘에 대해 Rf = 0.2(줄무늬) 및 출발 니트로피리미딘-카르바메이트에 대해 Rf = 0.86을 보였다). 이러한 점에서, 이 두-단계 과정에서 두 단계 모두에 대한 PtO2의 사용은 니트로기의 환원 속도가 극적으로 가속화되는 특징이 더해진 1-포트 반응을 허용한다. 어떤 경우에는, 아미노피리미딘 부산물이 산화되는 경향이 있기 때문에 공기/산소에 노출을 최소화하도록 관리된다.
에탄올(200 mL), 아세톤(21 mL, 1.5 eq.), 및 빙초산(3.0 mL, 0.28 eq.)을 수소화 플라스크 중 아미노피리미딘 용액에 첨가하였다. 이베큐에이트 및 퍼지 후 플라스크를 H2로 압력을 가하였다(60 psi). 반응성 아미노화를 밤새 진행시켰다. 용리제로서 EtOAc를 사용하는 실리카 상의 TLC로 이소프로필아미노-피리미딘에 대해 Rf= 0.41 (줄무늬) 및 출발 아미노피리미딘 카르바메이트에 대해 Rf = 0.11를 얻었다. TLC와 LC/MS 두 가지 모두는 사실상 어떤 비스-이소프로필아미노피리미딘도 생성되지 않은 완전한 반응을 확인하였다. 필요하다면, HPLC는 반응의 진행을 모니터링하기 위한 또 다른 수단으로서 사용될 수 있다. 미정제 반응 용액을 EtOAc (1 L)로 희석하였고 염기성 알루미나(400mL)의 패드를 통해 여과하였다. 알루미나를 EtOAc (200mL) 및 EtOH (200 mL)로 헹구었고 합한 유기 용액을 진공에서 농축하였다. 플라스크를 N2하에서 벤팅하였다. 점성의 오일을 무수 톨루엔(700mL)에서 재용해하였고 농축하였다. 질소 하에서 플라스크를 벤팅한 후, 생성물을 다른 400mL의 톨루엔의 공비 제거로 다시 건조시켰다. 점성의 적갈색 오일을 얻었다.
LC/MS로 증명되는 바와 같이, 매우 적은 비스-이소프로필아미노피리미딘 카르바메이트 불순물을 앞선 방법들과 비교되는 바와 같은 본 과정으로 생성하였으며, 비스-이소프로필아미노 피리미딘 카르바메이트 불순물은 크로마토그래피에 의한 제거를 필요로 한다.
모노-이소프로필아미노 피리미딘 2 단계의 앞선 정제가 요구된다면, (L)-타르타르산염으로서 THF/에테르로부터 침강되고 분쇄될 수 있다. 소규모의 실시예는 하기와 같다: (5.09 g, 99.6% 수율) L-타르타르산 (1.42 g)을 뜨거운 THF(45mL)에 용해시켰다. 뜨거운 타르타르산 용액을 이소프로필아미노-피리미딘 2(5.1g)의 검에 첨가하였다. 혼합물을 스월링하고 균질해질 때까지 가온하였다. 용액은 색이 핑크-퍼플에서 탠 색으로 변화하였다. 용액을 진공에서 농축하여 탠색의 검을 얻었다. 에테르(~150mL)를 오일이 관찰될 때까지 첨가하였다. 에테르 혼합물을 진공에서 농축하였다. 아세톤(~20mL) 및 그 다음에 에테르(~200mL)를 첨가하였고, 고무성 오일의 형성을 다시 관찰하였다. 혼합물을 3번째 시간 동안 농축하였다. 메틸렌 클로라이드(5-10 mL)를 첨가한 후 에테르(~80mL)를 첨가하였다. 탠색의 침전물을 밝은 오렌지-핑크 상청액 하에서 형성하는 것을 관찰하였다. 혼합물을 여과하였다. 침전물을 에테르(50mL)로 헹군 후 다시 아세톤과 에테르(1:1)의 혼합물(~60mL)로 헹구었다. 침전물을 진공하에서 밤새 건조하여 크림색의 고체를 얻었다(4.9 g, 76% 수율). 고체 타르타르산 염의 작은 알리쿼트를 i-PrOH 및 EtOH에 용해시켰고 염기성 알루미나의 작은 플러그를 통해 통과시켜 유리 염기를 얻었다. 유리 염기의 알리쿼트를 TLC 및 LC/MS로 분석하였다. 남은 염을 CH2Cl2 (250 mL) 및 1N NaHCO3 (150 mL)의 혼합물에서 현탁하였다. 혼합하고 일부는 버블링하면서, 고체를 용해시켰고 유리 염기 아민을 유기층으로 추출하였다. 수층을 EtOAc (150 mL)로 한번 더 추출하였고, 유기층을 합하고 MgSO4 (~150g)로 건조시켰다. 건조시킨 유기 용액을 염기성 알루미나(~100 g)의 플러그를 통해 통과시켜 밝은 핑크색의 용액을 얻어 진공에서 농축시키고 탠색/핑크색 검을 얻었다(3.28 g, 출발 니트로카르바메이트로부터 64% 수율).
몇몇의 다른 산들이 모노-이소프로필아미노피리미딘 카르바메이트 2와 함께 염을 형성하기 위해 연구되었다. p-톨루엔술폰산 및 메탄술폰산은 오일을 제공하였다. 고체 염을 HCl 및 H3PO4와 함께 형성할 수 있었지만, 타르타르산은 가장 바람직한 가용성 특징을 제공하는 것으로 나타났다. HCl 및 인산염은 CH2Cl2, i-PrOH, 및 아세톤에서 용이하게 용해되는 것으로 나타났지만, 반면, 타르타르산염은 대부분 CH2Cl2에서 불용성이며 다른 용매에서 단지 부분적으로 가용성인 것으로 보였다.
단계 2: (S)-4-(3- tert - 부톡시 -2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N- 이소프로필메틸술폰아미도 )피리미딘-4- 일아미노 )-3- 옥소프로필 ) 페닐 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (3)의 제조
Figure 112008067163656-PCT00032
단계 1로부터 이소프로필아미노피리미딘 카르바메이트 2(189 mmol로 추정)을 피리딘(680mL)에 용해하였고 용액을 N2하에서 0℃로 냉각하였다. 메탄술포닐 클로라이드(44 mL, 3.0 eq.)를 시린지 펌프를 통해 이소프로필아미노피리미딘 카르바메이트의 차가운 피리딘 용액에 20분에 걸쳐 첨가하였다. 빙욕을 제거하였고 용액을 실온으로 가온하였다. 용액을 6시간 동안 교반하였다. 작은 알리쿼트를 제거하였고 미니-워크업을 수행하였다(EtOAc로 희석, 5% KH2PO4, 식염수로 세척 후 MgSO4로 건조). TLC에 의한 분석은 반응이 완전하고 일반적으로 깨끗해짐을 보여주었다(잔여 피리딘으로부터 베이스라인 스팟을 제외하고는 단지 하나의 스팟). 괴상 반응 용액 을 농축하였다. 650mL의 증류액을 수집했을때, 혈액 붉은 오일을 EtOAc (2 L)로 희석하였다. 유기 용액을 5% KH2PO4 (1 L 및 750 mL), 0.2 N 시트르산(1 L), 및 식염수(1 L)로 세척하였다. 유기 용액을 MgSO4 (150 g)로 건조하였다. 건조시킨 유기 용액을 실리카겔(1L)의 패드를 통해 여과하여 그린-블랙 용액을 얻었다. 플라스크 및 실리카겔을 EtOAc (1.5 L)로 헹구어 유기 용액의 총 부피가 3.5L가 되었다. 용액을 염기성 알루미나(300mL)의 패드를 통해 여과하여 진한 녹색 용액을 얻었다. 용액을 진공에서 농축하였다. 붉은 빛의 검(150g)을 획득하였다.
플라스크를 질소로 플러쉬하였고, 뚜껑을 씌워 냉장고에 두었으며 그 후 적갈색 고체가 형성되었다. LC/MS는 허용가능한 순도를 나타내었지만, TLC 분석은 밝은 적색의 베이스라인 스팟 뿐 아니라 2 내지 3개의 매우 희미한 불순물을 나타내었다. 피리딘의 냄새도 여전히 존재하였다. 적갈색 고체를 CH2Cl2 (100 mL), THF (200 mL), 및 에테르 (800 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 용액을 실리카겔(1L)의 패드를 통해 여과/용리하였고 실리카를 에테르(3L)로 헹구었다. 대부분의 색이 있는 베이스라인 불순물을 실리카겔에서 보유하였다. 용액을 농축하여 적색 오일을 얻었고 핑크색의 거품 고체로 건조시켜 94.7%로 순수한 LC/MS로 분석하였다. 물질을 그 후 CH2Cl2 (3 L), CH2Cl2 및 에테르 (1:1; 4 L), 에테르(4 L), 에테르:THF (1:1; 4 L), 및 5% Et3N 및 2% EtOH (4 L)를 가지는 EtOAc로 용리하는 실리카겔(2L)에서 크로마토그래피하였다. CH2Cl2: 에테르 용리액으로 혼합된 분획의 적색 오일을 제공하 였고(12.4 g; 분획 A) 에테르 용리액은 일반적으로 순수한 탠 색의 오일(13g; 분획 B)을 제공하였다. 물질의 대부분은 컬럼에 남아있었고 이는 원하는 생성물이 컬럼에서 결정화된 것을 보여주었다. 에테르: THF 및 EtOAc (5% Et3N 및 2% EtOH와 함께)을 가지는 용리는 생성물을 재용해하였고 농축된 플러그(분획 C)에서 용리하여 분획 A와 분획 B를 합치고 함께 농축하였다. 분획 C를 각각 농축하였다. 농축 및 건조시, 결정은 분획 둘 다에서 형성되었다. 추가 연구는 고체가 메틸 tert-부틸 에테르(MTBE), 시클로헥산, 에테르-헥산(1:1), MTBE-헥산, 또는 시클로헥산-헥산으로부터 재결정화될 수 있었다. 합쳐진 분획 A 및 B 및 분획 C를 각각 MTBE-헥산으로부터 재결정화하여 tert-부틸 에스테르 3을 백색 고체(전체 >99%의 순도로 57.75g ) 및 적색 여과물/모액으로서 얻었다. 모액을 농축하여 적색 오일(24g)을 얻었다. 모액 오일을 Biotage 75에서 크로마토그래피하고 CH2Cl2 (12 L) 중 4% THF로 용리하여 그 후 농축된 풍부한 분획을 얻었고 재결정하여 추가 14 g의 정제된 tert-부틸 에스테르를 얻었다.
방법 M2에 의한 LC/MS로 원하는 생성물에 대해 [M+1]+ 에 대한 M/Z = 619과 함께 tR=1.97 min.을 얻었다.
방법 M15에 의한 LC/MS로 원하는 생성물에 대해 [M+1]+ 에 대한 M/Z = 619과 함께 tR=6.09 min.을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ, ppm: 0.88 (d, j = 6 Hz, 1.4H), 1.04 (d, j = 6 Hz, 2H), 1.20 (m, 10H), 1.37 (s, 4.8H), 1.39 (s, 4.8H), 1.93 (AA'BB', 4H), 2.80 (s, 1.7H), 2.9 (s, 1.6H), 3.18 (m, 2.4H), 3.4-3.7 (2개의 명확한 삼중선과 중복되는 m, 8.3H), 4.40 (sextet, j = 6 Hz, 1.1H), 4.8 (sextet, 1H), 5.64 (d, j = 6.5 Hz, 0.5H), 5.70 (d, j = 6.5 Hz, 0.5H), 7.03 (m, 2H), 7.18 (명백한 dd, 2H), 7.80 (d, j = 4 Hz, 1H). 1H NMR은 로타머를 보여준다.
메탄술포닐 클로라이드로 치료는 염기가 거의 없거나 어떤 추가도 없는 THF에서 하는 것으로 생각된다. 염기가 사용된다면, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민과 같은 염기가 사용되어야한다.
단계 3: (S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N- 이소프로필메틸 - 술폰아미도 )피리미딘-4- 일아미노 )-3-(4-( 피롤리딘 -1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산(4)의 제조
Figure 112008067163656-PCT00033
단계 2로부터 t-부틸 에스테르(57.75 g, 0.093 mol)의 포름산 (1.5L)용액을 50℃로 밤새 가열한 후 진공에서 농축하였다. 또 다르게는, 반응을 또한 70°또는 80°에서 60-90 분 동안 수행할 수 있다.
물(~100mL)를 미정제 생성물에 첨가하였고 혼합물을 농축건조하였다. 잔여물을 고진공하에서 건조하였다. 미정제 생성물을 용해시켰고 1.0N HCl (250 mL 및 200 mL)로부터 두 번 농축하였다. 생성물을 두 번 뜨거운 THF에 용해하였고 농축건조하여 거품이 이는 고체를 얻었다. 거품이 이는 고체를 고진공하에 65℃에서 2시간 동안 건조시켰다. 이 고체를 플라스크로부터 긁어내어 진공오븐에서 밤새 건조시켜(60℃, 28 in. Hg) (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-이소프로필메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산-5 (50.9 g; 98.3% 순도)의 염산염을 얻었다.
방법 M15에 의한 LC/MS로 M/Z = 563인 tR=1.96 min을 얻었다.
방법 M2에 의한 LC/MS로 M/Z = 563인 tR=1.43 min을 얻었다.
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ, ppm: 0.80 (d, j = 6 Hz, 1.4H), 1.02 (d, j = 6 Hz, 1.6H), 1.23 (m, 9.2H), 1.80-2.0 (AA'BB' + m, 5.2H), 2.99 (d, 3.2H), 3.2-3.45 (m, 4.5H), 3.45-3.8 (m, 7.6H), 4.40 (sextet, IH), 4.90 (m, 3H), 7.00 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.60 (d, 0.25H), 7.75 (d, IH), 7.83 (d, 0.25H).
13C NMR (CD3OD, 75 MHz) δ, ppm: 6.5, 14.7, 14.8,15.4, 15.5, 19.4, 20.0, 20.2, 29.91, 30.44, 33.95, 34.15, 41.03, 41.08, (41.71, 41.99, 42.28, 42.6, 42.8, 43.1 - 용매 피크), 47.21, 47.36, 50.01, 50.42, 62.43, 102.11, 102.23, 116.78, 124.9, 125.19, 128.54, 129.01, 138.49, 139.02, 145.53, 145.60, 145.78, 148.68, 156.77, 156.86, 166.91, 167.07.
실시예 2
(S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N- 에틸메틸술폰아미도 )피리미딘-4- 일아미노 )-3-(4-(피롤리딘-1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산 (7)의 제조
Figure 112008067163656-PCT00034
단계 1: (S)-4-(3- tert - 부톡시 -2-(2-( 디에틸아미노 )-5- 니트로피리미딘 -4- 일 아미노)-3- 옥소프로필 ) 페닐 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (6)의 1-포트 환원/환원성 에틸화
Figure 112008067163656-PCT00035
니트로-카르바메이트(화합물 5, 10.8 g, 20 mmol)를 THF (35 mL;)에서 슬러링하고 물(1 mL, 3 vol%)을 첨가하였다. 용액을 교반하고, 아담스 촉매(0.360 g, 6 mole %)를 첨가하고 용액을 이베큐에이션(50 mm Hg)의 3주기로 산소를 제거하였고 건조 질소(10 psi)로 다시 채웠다. 최종적으로, 반응 용기를 수소(60 psi)로 압력을 가하였고 반응 혼합물을 90분 동안 격렬하게 교반하였다. 필요하거나 원한다면, 수소화 반응의 과정을 TLC(실리카겔, 디클로로메탄 메탄올(95:5)로 용리)로 모니터링할 수 있다. 니트로카르바메이트의 Rf는 0.95이며, 주로 아민=0.16이다.
수소를 건조 질소로 대체하였다(3주기의 이베큐에이션 및 질소로 리필). 에탄올(25mL), 아세트산(0.3mL) 및 아세트알데히드(1.2 mL, 21 mmol, 1.05 eq)를 첨 가하였고, 용기를 휘발성 알데히드의 손실을 최소화하기 위해 부분적으로 낮은 압력(ca. 150 mm Hg)에서 배출시켰고, 질소(10 psi)로 채우고 반응 혼합물을 격렬하게 50분 동안 교반하였다. 이 시기의 마지막에, 부분적인 이베큐에이션 및 수소로 2회 다시 압력을 가하여 질소를 수소로 대체하였다. 혼합물을 다른 45분 동안 교반하였다. 환원성 아미노화의 진행을 TLC(실리카겔, 디클로로메탄:메탄올(95:5)로 용리)로 모니터링할 수 있다. 1차 아민의 Rf = 0.16, 2차 아민 -0.32 및 3차 아민 = 0.43. 과정의 마지막에, 수소를 3주기의 이베큐에이션에 의해 플러쉬하고 수소로 재충전하였고, 촉매를 메탄올을 사용하여 린스하는 셀라이트의 베드에서 여과하였고, 여과물을 제거 건조하여 호박색을 오일을 얻었다(11.9 g). 생성물은 산소에 민감하여, 상당한 어두움 및 TLC에서 낮은 Rf 물질의 출현을 야기하였다. 모든 핸들링은 적절한 예방 조치를 하여야 한다.
반응 생성물을 0.3%의 수산화암모늄을 함유하는 디클로로-메탄 메탄올 혼합물(97:3)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. N-에틸 생성물을 함유하는 분획을 합하여 호박색 오일로서 7.9 g의 화합물 6을 얻었다(98.5% 순도; 73% 수율). 미정제 생성물의 순도는, 특히, 이후에 예상되는 반응이 결정이 되는 것으로 알려진다면, 많은 목적에 적합한 것으로 나타난다.
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.60 (s, 1H), 7.17 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.05 (d, J=8.4Hz, 2H), 5.75 (d, J=7.5Hz, 1H), 4.84 (q, J=6.6Hz, 1H), 3.64-3.46 (m, 8H), 3.19 (d, J=6.3Hz, 2H), 2.86 (q, J=7.2Hz, 2H), 1.94 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.20-1.11 (m, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 171.7, 157.7, 157.5, 153.1, 150.3, 145.8, 133.7, 130.2, 121.5, 117.4, 81.8, 54.7, 46.4, 46.3, 42.4, 41.7, 37.4, 28.0, 25.8, 24.9, 15.5, 13.5.
MS (m/z): 527.3 [M+1].
단계 2 및 3: (S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N- 에틸메틸술폰아미도 )-피리미딘-4-일 아미 노)-3-(4-( 피롤리딘 -1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산 7
실시예 1의 단계 2 및 3에 따라, 화합물 6을 대응하는 (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산 7로 변환하였고, 이는 하기를 특징으로 한다:
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.17 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.26-7.23 (m, 2H), 7.00-6.98 (d, 2H), 4.85-4.82 (m, 1H), 3.58-3.51 (m, 6H), 3.43-3.39 (m, 3H), 2.96-2.84 (m, 3H), 2.01-1.91 (m, 4H), 1.29-0.97 (m, 9H);
13C-NMR, CDCl3, (δ):175.6, 165.7, 157.2, 155.2, 152.0, 151.8, 151.7, 151.3, 136.0, 135.9, 131.5, 123.0, 110.5, 56.7, 43.8, 39.4, 39.2, 37.4, 26.7, 25.8, 14.4, 13.3; 및
MS: M(+H) 549
실시예 3
(S)-2-(5-(N- 시클로펜틸메틸술폰아미도 )-2-
( 디에틸아미노 )피리미딘-4- 일아미노 )-3-(4-( 피롤리딘 -1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산 (8)의 제조
Figure 112008067163656-PCT00036
실시예 1의 과정에 따라 그리고 아세톤(실시예 1) 또는 아세트알데히드(실시예 2) 대신에 시클로펜타논을 사용하여, (S)-2-(5-(N-시클로펜틸메틸술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산 8 을 제조하였으며 하기를 특징으로 한다:
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.74-7.71 (d, 1H), 7.28-7.24 (m, 2H), 7.04-7.00 (m, 2H), 5.00-4.95 (m, 1H), 4.37-4.27 (m, 1H), 3.60-3.37 (m, 9H), 3.00-2.97 (d, 3H), 2.03-1.78 (m, 6H), 1.67-1.40 (m, 6H), 1.31-1.23 (m, 6H);
13C-NMR, CDCl3, (δ): 173.6, 173.4, 163.1, 155.1, 152.4, 152.0, 145.3, 144.7, 135.5, 135.1, 131.6, 131.4, 123.2, 109.6, 109.4, 62.5, 62.3, 56.7, 56.5, 48.1, 40.3, 40.1, 36.8, 36.4, 31.2, 30.5, 26.7, 25.8, 23.2, 23.1, 12.7; 및
MS: M(+H) 589.
실시예 4
(S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N-( 프로프 -2- 인일) 메틸술폰아미도 )피리미딘-4-일아미노)-3-(4-( 피롤리딘 -1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산 (13)의 제조
실시예 4에서 사용된 합성 프로토콜은 하기 예시하는 반응식 6에서 요약한다:
Figure 112008067163656-PCT00037
단계 1 : (S)-4-(3- tert - 부톡시 -2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N-( 메틸술포닐 )- 메틸술폰아미도 )피리미딘-4- 일아미노 )-3- 옥소프로필 ) 페닐 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (10)의 제조
아미노피리미딘 (2.0 g, 4.0 mmol - 화합물 9) (화합물 V의 환원에 의해 제조)을 디클로로메탄(10mL)에 용해하였다. THF (10 mL) 및 트리에틸아민(2.8 mL, 20 mmol)을 첨가하였고, 반응을 빙욕에서 냉각시켰다. 메탄술포닐 클로라이드 (1.1 mL, 14 mmol)를 첨가하였고, 반응을 실온으로 18시간 이상 가온하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 흡수하였다. 용액을 0.2 N 시트르산, 물, 포화 NaHCO3, 및 식염수로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과 및 진공에서 농축하여 갈색의 거품으로서 미정제 생성물을 얻었다. 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(2:3 에틸 아세테이트/헥산) 황색 거품으로서 2.2 g (73%)의 디-술폰화된 물질(화합물 10)을 얻었다.
단계 2 : (S)-4-(3- tert - 부톡시 -2-(2-( 디에틸아미노 )-5-( 메틸술폰아미도 )-피리미딘-4- 일아미노 )-3- 옥소프로필 ) 페닐 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (11)
화합물 10 (2.2 g, 3.4 mmol)을 메탄올(5mL) 및 THF (5 mL)에 용해시켰다. 1.0 M K2CO3 (10 mL)를 첨가하였고 반응 혼합물을 40℃에서 96시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 2N HCl로 pH 3까지 산성화하였고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 식염수로 세척하였고, Na2SO4로 건조시키고, 여과 및 진공에서 농축시켜 베이지색 거품으로서 1.68 g (86%)의 생성물, 화합물 11을 얻었다. 미정제 물질을 정제없이 사용하였다.
단계 3:(S)-4-(3- tert - 부톡시 -2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N-( 프로프 -2-인일) 메틸 - 술폰아미도 )피리미딘-4- 일아미노 )-3- 옥소프로필 ) 페닐 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (12)
화합물 11 (0.20 g, 0.35 mmol), K2CO3 (0.073 g, 0.53 mmol), 및 아세 톤(3mL)를 밀봉된 튜브에 넣고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 프로파르길 클로라이드(0.26 mL, 3.5 mmol)를 첨가하였고 반응을 밀봉하고 48시간 동안 환류에서 가열하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고 잔여물을 에틸 아세테이트에서 흡수하였다. 용액을 물 및 식염수로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과 및 진공에서 농축하여 오렌지색 필름으로서 미정제 생성물을 얻었다. 잔여물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여(1:1 에틸 아세테이트/헥산) 0.11 g (51%)의 투명한 필름으로서 화합물 12를 얻었다.
MS (m/z) 615, (M+H)+.
단계 4 : (S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N-( 프로프 -2-인일) 메틸술폰아미도 )-피리미딘-4- 일아미노 )-3-(4-( 피롤리딘 -1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산 (13)
포름산(2 mL)을 t-부틸 에스테르(100 mg)에 첨가하였고 40℃에서 밤새 교반하였다. 포름산을 감압하에서 제거하여 화합물 13을 정량적 수율로서 얻었으며 하기를 특징으로 한다:
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.13 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.26-7.24 (d, 2H), 7.02-6.99 (d, 2H), 4.59-4.44 (m, 1H), 4.04-3.79 (m, 1H), 3.64-3.53 (m, 6H), 3.45-3.39 (t, 3H), 3.08-2.84 (m, 4H), 2.84-1.89 (m, 4H)1.22-1.17 (t, 6H);
13C-NMR, CDCl3, (δ): 165.3, 155.3, 151.8, 136.1, 131.5, 123.0, 76.1, 76.0, 56.8, 49.9, 48.1, 43.8, 41.2, 40.2, 37.4, 26.7, 25.9, 13.3; 및
MS:M(+H) 559.
실시예 5
(S)-2-(2-( 디에틸아미노 )-5-(N- 메틸메틸술폰아미도 )-피리미딘-4- 일아미노 )-3-(4-(피롤리딘-1- 카르보닐옥시 ) 페닐 )프로판산(14)의 제조
Figure 112008067163656-PCT00038
실시예 4의 과정에 따라서 그리고 프로파르길 클로라이드 대신에 디메틸 술페이트를 사용하여, 표제 화합물을 제조하였고 이는 하기를 특징으로 한다:
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.14 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.26-7.23 (d, 2H), 7.01-6.98 (d, 2H), 4.84-4.81 (m, 1H), 3.60-3.53 (m, 6H), 3.43-3.38 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.00-1.91 (m, 4H), 1.22-1.18 (t, 6H);
13C-NMR, CDCl3, (δ):175.5, 165.4, 160.7, 156.3, 155.3, 151.8, 149.1, 136.0, 131.6, 123.0, 113.4, 56.9, 43.9, 38.8, 38.1, 37.4, 26.7, 25.8, 13.2; 및
MS:M(+H) 535.
실시예 A
α4β1 인테그린 부착 분석: 인간 혈장 피브로넥틴에 Jurkat TM 세포 부착
과정
96 웰 플레이트(Costar 3590 EIA plates)를 4℃에서 밤새 10 μg/mL의 농도에서 인간 피브로넥틴(Gibco/BRL, cat #33016-023)으로 코팅하였다. 플레이트를 그 후 식염수에서 우혈청알부민(BSA; 0.3%)의 용액으로 차단하였다. JurkatTM 세포(대수기(log phase) 성장으로 유지됨)를 제조업자의 설명서에 따라서 칼세인 AM으로 라벨링하였고, 헤페스/식염수/BSA에서 2 x 106 세포/mL의 농도로 현탁하였다. 세포를 그 후 실온에서 30분 동안 실험군 및 대조군 화합물에 대해 노출한 후 피브로넥틴 코팅된 플레이트의 개개의 웰에 전달하였다. 35분 동안 37℃에서 부착이 일어나도록 하였다. 웰을 그 후 약한 흡입 및 신선한 식염수로 피펫팅하여 세척하였다. 남은 부착 세포와 관련되는 형광성을 EX 485/EM 530에서 형광 플레이트 판독기를 사용하여 정량화하였다.
세포 배양을 제1일에 정지기 JurkatTM 세포를 1:10으로 먼저 분리하고, 제3일에 측정하기 위해 제2일에 1:2로 나누어 준비하였다. 제1일에 1:10으로 나눈 세포는 제4일에 분석을 위해 제3일에 1:4로 나누었다.
분석 플레이트를 우선 10 μg/mL, Gibco/BRL 인간 피브로넥틴(cat # 33016-023)의 PBS++ 실험 용액의 제조로 준비하였다.
다음으로 코스타(Costar) 3590 EIA 플레이트를 2시간 동안 실온에서 50 μL/웰로 코팅하였다(이것을 통해 4℃에서 밤새 남길 수도 있다). 최종적으로 플레이트는 흡입되고 1시간 동안 실온에서 100μL/웰로 헤페스/식염수 완충제로 차단한 후 150 μL의 PBS++ 로 3회 세척하였다.
화합물 희석을 다음과 같이 화합물의 1:3 연속 희석을 제조함으로써 달성하였다. 각 플레이트(4 화합물/플레이트)에 대해 600μL를 Titertube rack에서 4 개의 Bio-Rad Titertube에 첨가하였다. 충분한 화합물을 각각의 적당한 튜브에 첨가하여 당업계에서 공지된 방법을 사용하여 2X 농도를 얻었다. Falcon Flexiplate를 사용하여, 100μL의 Hepes/Saline 버퍼 또는 인간 혈청을 열 B 내지 G까지 첨가하였다. 180μL로 세팅된 멀티-채널 피펫터를 피펫터 상에 동등하게 위치하는 4개의 팁과 함께 사용하였다. 4개 튜브의 각 세트를 5회 혼합하였고, 180μL의 2X 화합물을 열 A를 비워두고 열 B의 각 화합물 희석의 제1 컬럼으로 전달하였다. 180 μL를 열 A에서 다른 웰에 첨가하였다. 연속적인 희석을 다음 희석까지 50μL를 전달함으로써 풀래이트 아래로 수행하였고, 5회 혼합하고, 혼합 후 매 번 팁을 변경하였다. 희석을 열 F에서 멈추었다. 열 G는 어떤 화합물도 존재하지 않았다. 21/6 항체의 헤페스/식염수 완충제 또는 인간 혈청에서 20 μg/ml 용액은 양성 대조군이었고 세포 현탁 플레이트에 첨가하기 위해 시약통에 따로 보관하였다.
50 mL 튜브에서 원심분리(5분동안 1100 rpm)에 의해 대수기 JurkatTM 세포를 우선 수확함으로써 세포 염색을 달성하였다. 세포를 50 mL PBS++로 재현탁하고, 원심분리하고, 20mL PBS++에서 재현탁하였다. 세포를 실온에서 30분 동안 20μL 칼세인 AM을 첨가하여 염색하였다. 부피를 헤페스/식염수 완충제와 함께 50 mL가 되도록 하였고 세포를 카운팅하고, 원심분리하고, 헤페스/식염수 완충제 또는 인간 혈 청에서 2 x 106 세포/mL로 재현탁하였다.
화합물을 하기의 과정을 사용하여 배양하였다. 새로운 플렉시플레이트에서, 65 μL 의 염색 세포를 열 B 내지 H에 첨가하였다. 그 후 65 μL의 2X 화합물을 플레이트를 준비한 후 적절한 열에 첨가하였고, 3X 혼합하였다. 65 μL의 2X-21/6 항체를 H 열에 첨가하였고 3회 혼합하였다. 최종적으로 플레이트를 실온에서 30분 동안 배양하였다.
피브로넥틴 부착을 다음의 워크업 과정 후에 EX 485/EM 530에서 형광 플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. 배양 후, 세포를 3회 혼합하였고, 100μL 를 피브로넥틴 코팅 플레이트로 이동시키고, 37℃에서 약 35분 동안 배양하였다. 각 플레이트를 실온에서 열에 따라 100μL의 약한 피펫팅으로 세척하였다. PBS++를 웰의 측면 하부에 놓고 흡입을 위해 플레이트를 90도 돌렸다. 이 과정을 총 3회의 세척으로 반복하였다. 각 웰을 웰의 측면 하부를 피펫팅하여 세척한 후 100μL로 채웠다.
IC50 값을 인간 혈청의 존재와 인간 혈청의 부존재하에서 각 화합물에 대해 계산하였다. IC50은 성장 또는 활성이 50%로 억제되는 농도이다. 피브로넥틴 분석에 따라 실험될 때 본원에 개시된 화합물은 모두 10μM 보다 적은 IC50을 갖도록 발견된다.
실시예 B
α4β1에 대한 후보자 화합물의 결합을 결정하기 위한 시험관 내 포화 분석
대수-증식기(Log-growth) JurkatTM 세포를 세척하였고 20μg/mL의 15/7 항체를 함유한 정상 동물 혈장에서 재현탁하였다(Yednock, et al., J. Biol. Chem., (1995) 270(48):28740).
JurkatTM 세포를 표준 곡선에 대해 표준 12 포인트 연속 희석을 사용하여 66 μM 내지 0.01 μM 범위의 다양한 농도에서 공지된 후보자 화합물 양을 함유하는 정상혈장으로 또는 후보자 화합물-처리된 동물의 말초혈액으로부터 획득된 혈장 샘플로 2-배 희석하였다.
세포를 그 후 실온에서 30분 동안 배양하고, 2% 우태혈청을 함유하는 인산완충식염수("PBS") 및 각각 1mM의 염화칼슘 및 염화마그네슘(분석 배지)으로 2회 세척하여 결합되지 않은 15/7 항체를 제거하였다.
그 후 세포를 연구되는 동물 종으로부터 5% 혈청으로 동시-배양함으로써 어떤 비-특이적 교차반응을 위해 흡수된 피코에리트린-접합 염소 F(ab')2 항-마우스 IgG Fc(Immunotech, Westbrook, ME)에 1:200으로 노출시켰고, 4℃에서 30분 동안 암실에서 배양하였다.
세포를 분석 매질과 함께 2회 세척하였고 동일하게 재현탁하였다. 그것들을 그 후 Yednock et al, J. Biol. Chem., 1995, 270:28740에 기재된 바와 같은 표준 형광활성세포선별기("FACS") 분석으로 분석하였다.
데이터를 그 후 형광 대 용량, 예를 들어, 정상 투여량-반응 형식으로 그래프를 그렸다. 곡선 상부 평탄역으로 결과되는 투여량 수준은 생체내 모델에서 효능 을 발휘하는데 필요한 수준을 나타낸다.
시험관내 효능 분석에서 α4-의존의 결과는 본 분석에서 시험될 때 본 발명의 특정 화합물이 20 μg/mL 이하의 EC50에서 α4β1 인테그린의 억제를 보여주는 것을 나타낸다.
실시예 C
VLA -4에 대한 화합물의 결합을 결정하기 위한 시험관내 분석
시험관내 분석을 α4β1 인테그린에 대한 후보자 화합물의 결합을 평가하는데 사용하였다. 본 분석에 결합하는 화합물은 통상적인 분석(예를 들어, 경쟁적 분석)으로 생물학적 샘플 내 VCAM-1 수준을 평가하는데 사용할 수 있다. 이 분석은 약 1 μM 만큼 낮은 IC50값에 민감하다.
α4β1 인테그린의 활성을 JurkatTM 세포(예를 들어, 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection) Nos. TIB 152, TIB 153, 및 CRL 8163)를 가지는 가용성 VCAM-1, α4β1 인테그린의 높은 수준을 발현하는 인간 T-셀 라인의 상호작용으로 측정하였다. VCAM-1은 α4β1 인테그린-의존성 방식(Yednock, et al. J. Biol. Chem., 1995, 270:28740)에서 세포 표면과 상호작용한다.
재조합 가용성 VCAM-1을 N-말단에서 VCAM-1의 7개의 세포 밖 도메인과 C-말단에서 인간 IgG1 중사슬 불변부를 함유하는 키메릭 융합 단백질로서 발현하였다. VCAM-1 융합 단백질을 만들었고 Yednock, supra에 기재된 방법으로 정제하였다.
JurkatTM 세포를 Yednock, supra에 기재된 바와 같은 10% 우태 혈청, 페니실린, 스트렙토마이신 및 글루타민으로 보충한 RPMI 1640에서 성장시켰다.
JurkatTM 세포를 1.5 mM MnCl 및 5 μg/mL 15/7 항체와 함께 30분 동안 얼음에서 배양하였다. Mn+2는 리간드 결합을 향상시키기 위한 수용체를 활성화하고, 15/7은 α4β1 인테그린의 활성화된/리간드 점유된 입체구조를 인식하는 단일클론 항체이며 이 입체구조로 가두어 VCAM-1/α4β1 인테그린 상호작용을 안정화한다. Yednock, et al., supra. 15/7 항체와 유사한 항체들은 다른 연구자들에 의해 제조되었고(Luque, et al, 1996, J. Biol. Chem. 271 :11067) 본 분석에서 사용될 수 있다.
세포를 그 후 후보자 화합물과 함께 실온에서 30분 동안, 표준 5-포인트 연속 희석을 사용하여 66 μM 내지 0.01 μM 범위의 다양한 농도로 배양하였다. 15 μL 가용성 재조합 VCAM-1 융합 단백질을 그 후 JurkatTM 세포에 첨가하였고 30분 동안 얼음에서 배양하였다. Yednock et al., supra.
세포를 그 후 2회 세척하였고 1:200에서 PE-접합된 염소 F(ab')2 항-마우스 IgG Fc (Immunotech, Westbrook, Me.)에서 재현탁하였고, 얼음에서, 어둠 중에 30분 동안 배양하였다. 세포를 2회 세척하였고 Yednock, et al., supra.에 기재된 바 와 같이 형광활성세포선별기("FACS") 분석으로 분석하였다.
약 15μM 미만의 IC50을 가지는 화합물을 α4β1에 결합 친화도를 소유한다.
본 분석에서 시험될 때, 상기 실시예에서 제조되는 화합물은 15 μM 미만의 IC50을 가지거나 가지는 것으로 기대된다(또는 생체내에서 활성인 것으로 기대된다). 본 분석의 특정 화합물은 5 μM 미만의 IC50을 가진다.
실시예 D
생체이용가능성의 결정을 위한 카세트 용량 및 혈청 분석
경구 생체이용가능성을 카세트, 즉 투여 용액마다 6개 화합물의 혼합물과 함께 래트에 투약함으로써 스크리닝하였다. 카세트는 총 10 mg/kg 투여를 위한 5개의 검사 항목 및 표준 화합물을 포함한다. 각 화합물/검사 항목을 등몰의 1N NaOH와 함께 나트륨 염으로 변환하였고 2mg/mL에서 물에 용해시켰다. 카세트를 각각 6개 용액의 동일한 부피와 혼합함으로써 제조하였다. 카세트 투약 용액을 웰에서 혼합한 후 pH를 7.5 내지 9로 조절하였다. 투여 용액을 연구 전날 제조하고 밤새 실온에서 교반하였다.
찰스 리버 래버러토리즈(Charles River Laboratories)로부터, 6-8주령의 수컷 스프라그-도올리(Sprague-Dawley(SD)) 래트를 이 스크린에서 사용하였다. 래트를 적어도 하루 동안 격리시키고 음식과 물에 지속적으로 접근시켰다. 카세트의 투여 전날 밤에, 래트를 대략 16시간 동안 절식시켰다.
4마리의 SD 래트를 각 카세트에 할당하였다. 투약 용액의 단일 용량을 각 래 트에 경구적으로 투여하였다. 투약 부피(5 mL/kg) 및 시간을 기록하였고 래트를 투약 2시간 후 먹이를 먹였다.
혈액 샘플을 4시간, 8시간, 및 12시간 지점에서 심장천자를 통해 수집하였다. 혈액 수집 바로 전에, 래트를 10-20초 안에 CO2 기체로 마취시켰다. 12시간 후 샘플을 수집하였고, 래트는 CO2 질식 후 경추탈골로 안락사시켰다.
혈액 샘플을 그것을 가공하기 전에 상온 이하의 온도(4℃)하에서 헤파린화된 마이크로테이너(microtainer) 튜브에 넣었다. 혈액 샘플을 원심분리(5분 동안 10000 rpm)하였고 혈장 샘플을 제거하고 약물 수준을 분석할 때까지 -20℃ 냉동고에 저장하였다. 혈장 내 약물 수준을 직접 혈장 침전을 위한 다음의 프로토콜을 사용하여 분석하였다.
생체 내 혈장 샘플을 1.5 mL 96-웰 플레이트에서 제조하였다. 순서대로 100 μL의 시험 혈장, 150 μl의 메탄올을 첨가한 후 10-20초 동안 볼텍싱하였다. 아세토니트릴에서 내부표준의 0.05 ng/μL의 150 μL를 첨가하였고 30초 동안 볼텍싱하였다.
표준 곡선 샘플을, 차례로 100 μL의 대조군 마우스 혈장을 첨가한 후 150 μL의 메탄올을 첨가하고 10-20초 동안 볼텍싱함으로써 1.5 mL 96-웰 플레이트에서 제조하였다. 아세토니트릴에서 150μL의 0.05 ng/μL의 내부표준을 첨가하고 30초 동안 볼텍싱하였다. 샘플을 50% 메탄올에서 0-200 ng (10 농도)의 관심의 화합물을 첨가하여 0.5 ng/mL 내지 2,000 ng/mL 범위의 표준 곡선을 얻었다. 다시, 샘플을 30초 동안 볼텍싱한다.
그 후 샘플을 그 후 80-90%의 상청액이 깨끗한 96-웰 플레이트로 전달되기 전에 에펜도르프 마이크로퓨즈(Eppendorf microfuge)에서 3,000 rpm으로 20-30분 동안 원심분리하였다. 유기 용매를 그 후 샘플이 건조될 때까지 증발시킨다(40℃에서 N2하에/ 30-60 min. (ZymarkTurbovap)).
잔여물을 그 후 200-600L 이동상(50% CH3OH/0.1% TFA)에 용해시킨다. LC/MS/MS를 그 후 PE-Sciex API-3000 트리플 쿼드로폴 질량 분석기(SN0749707), Perkin-Elmer, Series200auto-sampler, 및 Shimadzu 1OA 펌프를 사용하여 가동하였다. 수득은 PE-Sciex Analyst (v 1.1)로 행하였고, 데이터 분석 및 정량은 PE-Sciex Analyst (v 1.1)를 사용하여 이루어졌다. 5-50 μl 샘플 부피를 25% CH3OH, 0.1% TFA-100% CH3OH, 0.1% TFA의 이동상을 사용하여 역상 ThermoHypersil DASH-18 컬럼 (Keystone 2.0 x 20 mm, 5 μm, PN: 8823025-701)에 주입하였다. 작동 시간은 약 300 μL/분의 유속에서 약 8분이었다.
곡선하 면적(AUC)을 선상 사다리꼴 공식을 사용하여 t=0으로부터 최종 혈장 농도 샘플링 시간 tx까지 계산하였다(Handbook of Basic Pharmacokinetics, Wolfgang A. Ritschel and Gregory L. Kearns, 5th ed, 1999 참조).
AUC0 - tx = ∑0-n((Cn + Cn +1)/2))ㆍ(tn +1 - tn) [(μg/mL)h에서]
혈관의 투여 후 4, 8 및 12h에서의 샘플의 카세트 투여예에 있어서, AUC를 t=0 부터 t=12h까지 계산하였다.
상기 실시예 1-5의 각 화합물을 본 분석에서 시험하였을 때 10 mg/kg 용량에서 투여를 위해 정상화될 때 적어도 5 μgh/mL의 AUC를 제공하였다.
실시예 E
천식 모델 ( E1 )
α4β1 인테그린에 의해 매개되는 염증성 질환은 예를 들어, 호산구 유입, 기도 과민반응 및 만성천식과 함께 발생하는 폐색을 포함한다. 하기는 천식을 치료하는데 사용을 위한 본 발명의 화합물의 생체 내 효과를 연구하는데 사용되는 천식의 동물 모델을 기술한다.
래트 천식 모델 ( E2 )
본 모델은 그것 전체가 참고로써 인용되는 Chapman, et al., Am J. Resp. Crit. Care Med., 153-4, A219 (1996) 및 Chapman, et al., Am. J. Resp. Crit. Care Med. 155:4, A881 (1997)에 의해 설명된 과정을 따른다.
오발부민(OA; 10 μg/mL)을 수산화 알루미늄(10 mg/mL)과 혼합하였고 제0일에 브라운 노르웨이 래트에 주사한다(i.p.). 보조제와 함께 OA의 주사를 제7일 및 제14일에 반복하였다. 제21일에 감작된 동물들을 플라스틱 튜브에 두고 코 부위만 노출되는 시스템에서 OA(10 mg/kg)의 에어노졸에 노출시킨다(60분). 동물을 펜토바르비탈(250 mg/kg, i.p.)로 72 시간 후에 죽인다. 폐를 행크스 용액(HBSS x 10, 100 ml EDTA 100 mM, 100 mL; HEPES 1 M, 25 mL; H2O로 1 L 까지 제조) 3 알리쿼트 를 사용하여 기관삽입을 통해 세척하고; 회수한 세포를 모으고 회수한 체액의 총 부피를 행크스 용액의 첨가로 12mL까지 조절하였다. 전체 세포를 카운팅하고(시스멕스 마이크로셀 카운터(Sysmex microcell counter) F-500, TOA Medical Electronics Otd., Japan) 도말표본을 회수한 체액을 희석하여 만들고(대략 106 세포/mL) 알리쿼트(100 μl)를 원심분리(Cytospin, Shandon, U.K.)로 피펫팅하였다. 도말표본을 에어건조시키고, 메탄올(2 mg/mL)에서 fast green 용액을 사용하여 5초 동안 고정하였고, 호산구, 호중구, 대식세포 및 림프구를 분별하기 위하여 에오신 G(5초) 및 티아진(5초)(Diff-Quick, Browne Ltd. U.K.)으로 염색하였다. 도말 표본마다 총 500개의 세포들을 오일 침투(x 100) 하에서 광현미경으로 카운팅한다. 본 발명의 화합물을 0.5% 카르복시메틸셀룰로오스 및 2% 트윈 80 현탁액으로 제형으로 하고 알레르겐, 오발부민에 민감한 래트에 경구적으로 투여할 수 있다. 적극적으로 감작된 브라운 노르웨이 래트의 기도에 알레르겐-유도된 백혈구 축적을 억제하는 화합물은 본 모델에서 활성이 있는 것으로 생각된다.
마우스 천식 모델 ( E3 )
화합물을 또한, 그것 전체가 각각 참고로써 포함되는 Kung, et al., Am J. Respir. Cell Mol. Biol, 13:360-365, (1995) and Schneider, et al, (1999) Am J. Respir. Cell Mol. Biol. 20:448-457, (1999)에 기재된 과정에 따라서 급성 폐 염증의 마우스 모델에서 평가된다. 암컷 블랙/6마리 마우스(8-12 주령)를 제1일에 20 μg의 ova (Grade 4, Sigma) 및 2 mg 주사 알륨(Pierce)을 함유하는 0.2 mL 오발부 민 혼합물의 복강내 주사로 감작한다. 추가접종을 제14일에 투여한다. 마우스를 제28일 및 제29일에 에어로졸화된 1% ova (0.9% 식염수에서)로 20분 동안 자극하였다. 마우스를 안락사시키고, 기관지폐포 세척 샘플(3mL)을 제30일에 제1 자극 후 48시간에 수집한다. 호산구는 FACS/FITC 염색법에 의해 정량한다. 본 발명의 화합물은 0.5% 카르복시메틸셀룰로오스 및 2% 트윈 80 현탁액으로 제형으로 되고 알레르겐, 오발부민으로 감작된 마우스에 경구적로 투여된다. 적극적으로 감작된 C57BL/6 마우스의 기도에서 알레르겐-유도 백혈구 축적을 억제하는 화합물은 본 모델에서 활성인 것으로 생각된다.
양 천식 모델 ( E4 )
본 모델은 그것 전체가 참고로써 포함되는 Abraham, et al., J.Clin, Invest, 93:776-787 (1994) 및 Abraham, et al., Am J. Respir. Crit. Care Med., 156:696-703 (1997)에서 기재되는 과정을 사용한다. 본 발명의 화합물을 돼지회충 항원에 감수성인 양에 대해 정맥주사(식염수용액), 경구(2% 트윈 80, 0.5% 카르복시메틸셀룰로오스) 및 에어로졸 투여로 평가한다.
항원-유도된 기관지 반응을 감소 및/또는 후기-단계 기도 반응을 차단하는, 예를 들어, 항원-유도된 후기 반응 및 기도 과민성("AHR")에 대한 보호 효과를 가지는 화합물은 본 모델에 활성인 것으로 생각된다.
흡입된 돼지회충 항원에 대한 초기와 후기 기관지 반응의 발달을 나타내는 것으로 보이는 알레르기성 양을 후보자 화합물의 기도 효과를 연구하는데 사용한다. 2% 리도카인으로 비강 통로의 국소 마취에 이어서, 풍선 카테터를 한 개의 콧 구멍을 통해 하부 식도 안으로 넣었다. 그 후 동물을 가이드로서 광섬유 기관지경으로 다른 콧구멍을 통해 커프 기관내 튜브로 배양한다.
늑막의 압력을 Abraham (1994)에 따라서 추정한다. 에어로졸(하기 제형을 참조)을 안데르센 캐스케이드 임팩터로 결정되는 바와 같은 3.2 μm의 공기역학 중간 질량 직경을 가지는 에어로졸을 제공하는 1회용 의료용 네뷸라이저를 사용하여 생성하였다. 네뷸라이저를 솔레노이드 밸브 및 압축기체원(20 psi)으로 구성되는 도시미터 시스템에 연결한다. 네뷸라이저의 배출물을 플라스틱 T-부분으로 연결되며, 이것의 한 쪽 끝은 피스톤 인공 호흡기의 흡입 부분에 연결된다. 솔레노이드 밸브는 인공호흡기의 흡기순환의 초기에 1초 동안 활성화된다. 에어로졸은 500 mL의 VT 및 20 호흡/분로 전달된다. 0.5% 탄산수소나트륨 용액을 유일하게 대조군으로서 사용한다.
기관지 반응을 평가하기 위해, 카르바콜(carbachol)에 대한 점증적 농도-반응 곡선을 Abraham (1994)에 따라서 산출한다. 기관지 생검을 처리의 개시 전 및 후에 하고 항체 적용 후 24 시간에 행하였다. 기관지 생체검사를 Abraham (1994)에 따라 수행한다.
또한 탐식세포(alveolar macrophage)의 시험관 내 부착 연구를 Abraham (1994)에 따라 행하였고, 부착 세포의 백분율을 계산하였다.
에어로졸 제형
0.5% 탄산수소나트륨/식염수 (w/v)의 화합물의 용액을 30.0 mg/mL의 농도로 하기 과정을 사용하여 제조한다:
A. 0.5% 탄산수소나트륨/식염수 저장 용액의 제조: 100.0 mL
성분 그램/100.0mL 최종 농도
탄산수소나트륨 0.5g 0.5%
식염수 100.0mL 까지 적당량 100%까지 적당량
과정:
1. 0.5g 탄산수소나트륨을 100mL의 볼륨메트릭 플라스크에 첨가.
2. 대략 90.0mL 식염수를 첨가하고 용해될 때까지 초음파 처리.
3. 식염수로 100mL 까지 적정량을 완전히 혼합.
B. 30.0 mg / mL 화합물의 제조: 10.0 mL
성분 그램/10.0mL 최종 농도
화합물 0.300g 30.0mg/mL
0.5% 나트륨 중탄산염/식염수 저장 용액 10.0mL까지 적정량 100%까지 적정량
과정:
1. 0.300g의 화합물을 10.0 mL 볼류메트릭 플라스크에 첨가.
2. 대략 9.7 mL의 0.5% 탄산수소나트륨/식염수 저장 용액을 첨가.
3. 화합물이 완전히 용해될 때까지 초음파처리.
4. 0.5% 탄산수소나트륨/식염수 저장 용액으로 10.0mL까지 적당량을 완전히 혼합.
실시예 F
래트에서 보조제-유발 관절염
보조제 유발 관절염(Adjuvant induced arthritis ("AIA"))은 류마티스 관절염("RA")의 연구에 유용한 동물 모델이며, 이는 루이스 래트의 꼬리의 기부에 결핵 균을 주사함으로써 유발된다. 주사 후 10 내지 15일에, 동물들은 중증의, 진행성 관절염으로 발전한다.
일반적으로, 화합물을 래트에서 보조제 유도된 부종으로부터의 결과인 뒷발 부종 및 골 손상을 변화시키는 그들의 작용에 대해 검사하였다. AIA로부터 초래되는 뒷발 부종의 억제를 평가하기 위해, 2상의 염증을 정의하였다: (1) 제1차 및 제2차 주사한 뒷발, 및 (2) 주사한 발에서 염증의 유도로부터 약 11일에 진행을 시작하는 제2차 비주사된 뒷발. 후자 형태의 염증의 감소는 면역억제 활성의 지시이다. Cf. Chang, Arth. Rheum., 20, 1135-1141 (1977).
AIA와 같은 RA의 동물 모델을 사용하여 질병의 초기 단계에 연관되는 세포성 기작을 연구할 수 있다. 대식세포 및 림프구 상의 CD44 발현은 보조제 관절염의 초기 진행 동안 상향조절되는 반면, LFA 1 발현은 질병 진행의 후기에 상향 조절된다. 보조제 관절염의 초기 단계에서 부착 분자와 내피 사이의 상호작용을 이해하는 것은 RA의 치료에 사용되는 방법에서 중요한 진전을 이끌 수 있었다.
실시예 G
래트에서 콜라겐 유발된 관절염
목적: 본 발명의 대표적인 화합물("화합물 A")의 효능을 결정하기 위해 래트에서 II형 콜라겐 관절염이 진행하는데 발생하는 염증, 연골 파괴 및 뼈 재흡수의 억제를 위한 po bid 투약((-1)-20 일)으로 투여한다.
동물: 125-150g의 무게에 달하는 54마리의 암컷 루이스 래트(Harlan)(10개의 군 중 6개는 제10, 11, 12일에 50마리를 콜라겐으로 주사하여 50개의 반응을 얻는 다). 4-5마리/케이지로 수용된 동물(관절염에 대해 10마리/군, 정상 대조군에 대해 4마리/군)을 4-8일에 순응시켰다. 동물을 po3mg/kg bid, po10mg/kg bid, 및 po30mg/kg bid로 투약하였다.
물질: 비히클에서 약제 또는 약물, II형 콜라겐, 프로인트 불완전보조제, 메토트렉사트(Sigma), 화합물 A
일반적 연구 설계
투약을 마이너스 1일에 개시하였다.
순응시킨 동물을 이소풀루란으로 마취시켰고 콜라겐 주사(DO)를 주었다. 제6일에 그것들을 다시 제2 콜라겐 주사를 위해 마취시켰다. 콜라겐을 0.01 N 아세트산에서 4 mg/mL 용액을 만듦으로써 제조하였다. 동일한 부피의 콜라겐과 프로인트 불완전 보조제를 이 물질의 비드가 물에 놓았을 때 그것의 형태를 유지할 때까지 핸드 믹싱으로 에멀젼화하였다. 각 동물은 등에서 각 시점에 3 군데의 자리에 펼쳐진 혼합물의 300 μL를 받았다.
정상(전질병단계) 우 및 좌 발목 관절의 캘리퍼스 측정을 제9일에 하였다. 제10-12일에, 관절염의 발병이 일어났다.
래트를 연구의 (-) 1, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20 일에 무게를 달았고 발목의 캘리퍼스 측정을 제9일에 시작하여 매일 하였다. 최종 체중을 제20일에 측정했다. 최종 체중의 측정 후, 동물을 최종 혈장 수집을 위해 마취시킨 후 안락사시켰다.
뒷발과 무릎을 모두 제거하였다. 뒷발의 무게를 달았고, 포르말린에 넣은 후(무릎과 함께) 현미경 사용을 위해 처리하였다.
관절의 처리
고정액에서 1-2일 후속하여 석회제거기에서 4-5일 후, 발목 관절을 가로로 절반을 절단하고, 무릎을 전두절단면에서 절반 절단하고, 약품 처리하고, 묻고, 절개하고 톨루이딘 블루로 염색하였다.
화합물 A는 발목 염증의 어떤 처리도 받지 않은 대조군과 시험된 용량(3.0mg/kg, 10.0 mg/kg 및 30.0 mg/kg)에서 발목 조직의 병적변화 비교하여 상당한 억제를 증명하였다.
실시예 H
HLA -B27 래트에서 대장염의 유발
대장염을 역전하는데 본 발명의 화합물의 효능을 HLA-B27 유전자변환 래트에서 결정하였다. HLA-B27 유전자변환 래트를 인간의 크론병을 모방하는 염증성 장질환의 동물 모델로서 이용하였다. 래트는, 결장의 염증을 포함하는 다양한 자가면역 질병을 유발하는 인간 MHC 클래스 I HLA-B27 중사슬 및 베타-2 마이크로글로불린 단백질을 과발현한다.
대장염을 치유하는데 본 발명의 화합물 A의 치료적 효과를 HLA-B27 유전자변형 래트에서 평가하였다. 병에 걸린 래트를 16일 동안 1일 2회 본 발명의 화합물 A를 lOOmg/kg으로 피하에 투여하였다. 동물 샘플을 대장염의 임상적 및 조직학적 해결을 보여주고, 항-알파 4 항체 GG5/3으로 처리한 포지티브 대조군과 유사한 효과를 모방한 본 발명의 화합물 A의 100mg/kg으로 투약하였다.
질병 활성 지표(DAI) 스코어는 비히클이 투약된 래트보다 100mg/kg의 본 발명의 화합물 A 및 10mg/kg의 GG5/3(포지티브 대조군)가 투약된 래트에 대해 전반적으로 개선된 스코어를 나타내었다. 화합물 A 및 GG5/3가 투약된 래트에 대한 분변 굳기 및 FOB 스코어는 비히클 군과 통계적으로 다르다.
대장염의 유발
20 HLA-B27 (6-9 주령) 유전자변환 래트를 타코닉(Taconic)으로부터 주문하였다. 래트를 10주 동안 동물 시설에서 순응시켰다. 동물 깔집을 1주일에 한 번 다른 케이지와 혼합하여 "더러운" 환경 식물상에 대해 조절하였다.
치료
래트를 명부에 기입하고 중량 및 DAI 스코어 (FC ≥3, FOB ≥2)에 기초한 4개의 군으로 무작위로 나누었다. 실험군을 16일 동안 1일 2회 화합물 A 100mg/kg (pH 2.8)으로 피하에 투약하였고 저점에서 종결하였다. 비히클-처리 (pH 3.2)군 및 GG5/3 (마우스 항-래트 알파-4 인테그린 항체) 포지티브 대조군이 포함된 대조군은 d0, d3, 및 d6에 10mg/kg (5 mL/kg)으로 피하에 투약되고 d8 (표 H1) 상의 저점에서 종결되었다. 화합물 A 및 비히클 처리를 5일마다 제형으로 하였다.
IBD 에 대한 연구 설계
처리 N 투약(mg/kg/일) 투약 부피 (mL/kg) 경로 빈도 제형
비히클 5 0 0 SC b.id 0.9% 식염수, 10N NaOH로 pH 3.3
화합물 A 5 100 5 SC b.id 0.9% 식염수, 10N NaOH로 pH 2.8
GG 5/3 5 30 5 SC 제 0, 3 및 6일 1x PBS
SC = 피하
종말점 판독
질병 활성 지표 스코어, 분변굳기검사 및 대변잠혈검사를 1주일에 4회 실시하여 살아있는 동안 임상 스코어를 산출하였다. 연구에 대한 제1 판독은 맹장, 근위부 결장, 횡행-결장, 및 원위부 결장의 병리조직학적 분석이었다. IBD 스코어링 시스템을 사용하였다(표 H2).
IBD 스코어링 시스템
복합 종말점
A 상피 및 분비기관의 파괴
B 샘움의 비대
C 배상세포의 고갈 및 손실
D 염증 세포 침투
E 부종
F 혈관의 울혈
G 음와 농양
H 위축증
질병 활성 지표(DIA) 스코어는 비히클 군보다 화합물 A 및 GG5/3(포지티브 대조군)가 투약된 래트가 더 낮았다. 화합물 A 및 GG5/3 (포지티브 대조군) 투약 군에 대한 분변굳기 및 대변잠혈검사 AUC 스코어는 또한 비히클과 통계적으로 달랐다.
본 발명의 일부 구체예가 예시되고 기재되는 동안, 본 발명의 정신과 범주로부터 벗어남이 없이 만들어질 수 있는 다양한 변화를 인식할 것이다.

Claims (38)

  1. 화학식 I의 화합물:
    (화학식 I)
    Figure 112008067163656-PCT00039
    (상기식에서:
    R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4 할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다);
    또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르.
  2. 제1항에 있어서, R1은 C1 내지 C2 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R1은 메틸 또는 트리플루오로메틸인 것을 특징으로 하는 화 합물.
  4. 제1항에 있어서, R1은 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R2는 C1 내지 C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R2는 C1 내지 C3 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 제6항에 있어서, R2는 메틸 또는 에틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  8. 제6항에 있어서, R2는 이소프로필인 것을 특징으로 하는 화합물.
  9. 제1항에 있어서, R2는 C3 내지 C6 시클로알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  10. 제9항에 있어서, R2는 시클로펜틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  11. 제1항에 있어서, R2는 C2 내지 C4 알케닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  12. 제11항에 있어서, R2는 알릴인 것을 특징으로 하는 화합물.
  13. 제1항에 있어서, R2는 C2 내지 C4 알키닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 제13항에 있어서, R2는 프로파르길인 것을 특징으로 하는 화합물.
  15. 화학식 II의 화합물:
    (화학식 II)
    Figure 112008067163656-PCT00040
    (상기식에서:
    R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다);
    또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르.
  16. 제15항에 있어서, R1은 C1 내지 C2 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  17. 제15항에 있어서, R1은 메틸 또는 트리플루오로메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  18. 제15항에 있어서, R1은 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  19. 제15항에 있어서, R2는 C1 내지 C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  20. 제15항에 있어서, R2는 C1 내지 C3 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  21. 제20항에 있어서, R2는 메틸 또는 에틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  22. 제20항에 있어서, R2는 이소프로필인 것을 특징으로 하는 화합물.
  23. 제16항에 있어서, R2는 C3 내지 C6 시클로알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  24. 제23항에 있어서, R2는 시클로펜틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
  25. 제15항에 있어서, R2는 C2 내지 C4 알케닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  26. 제25항에 있어서, R2는 알릴인 것을 특징으로 하는 화합물.
  27. 제15항에 있어서, R2는 C2 내지 C4 알키닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 제27항에 있어서, R2는 프로파르길인 것을 특징으로 하는 화합물.
  29. 하기로 구성되는 군으로부터 선택되는 화합물:
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸-1,1,1-트리플루오로메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-이소프로필메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(5-(N-시클로펜틸메틸술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-메틸메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3 -(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-(프로프-2-인일)메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸메틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3 -(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(5-(N-알릴메틸술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸부틸술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3 -(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)-프로판산;
    (S)-2-(5-(3-클로로-N-에틸프로필술폰아미도)-2-(디에틸아미노)-피리미딘- 4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(5-(3-클로로-N-메틸프로필-술폰아미도)-2-(디에틸아미노)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸-3,3,3-트리플루오로프로필술폰아미도)- 피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)프로판산;
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸프로필술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)페닐)-프로판산; 및
    (S)-2-(2-(디에틸아미노)-5-(N-에틸-2-메틸프로필술폰아미도)피리미딘-4-일아미노)-3-(4-(피롤리딘-1-카르보닐옥시)-페닐)프로판산; 및
    그것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르.
  30. 약학적으로 허용가능한 담체 및 하나 이상의 제1항에서 설명한 바와 같은 화합물의 치료적으로 유효한 양을 포함하는 약학 조성물.
  31. 환자에서 α4 인테그린에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 질병을 치료하는, 제30항에 따르는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  32. 포유동물 환자에서 질병의 염증 성분을 감소 및/또는 예방하는, 제30항의 약학 조성물을 상기 포유동물에 투여하는 것을 포함하는 방법.
  33. 포유동물 환자에서 자가면역 반응을 감소 및/또는 예방하는, 제30항의 약학 조성물을 상기 포유동물에 투여하는 것을 포함하는 방법.
  34. 제31항에 있어서, 질병은 천식, 다발성경화증 및 염증성 장 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제31항에 있어서, 질병은 크론병인 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제31항에 있어서, 질병은 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 방법.
  37. a) 화학식 III의 화합물을
    (화학식 III)
    Figure 112008067163656-PCT00041
    (상기식에서 Pg는 카르복실 보호기이다)
    C1 내지 C4 알데히드 또는 케톤, C2 내지 C4 알케닐 알데히드 또는 케톤, C2 내지 C4 알키닐 알데히드 또는 케톤, C3-C6 시클로알킬 케톤 및 벤즈알데히드와 환원성 아미노화 조건하에서 접촉하여 화학식 IV의 화합물을 제공하는 단계;
    (화학식 IV)
    Figure 112008067163656-PCT00042
    b) 화합물 IV를 Z가 할로인 화학식 R1SO2Z의 술포닐 할로겐화물과 조건하에서 접촉하여 화학식 V의 화합물을 형성하는 단계:
    (화학식 V)
    Figure 112008067163656-PCT00043
    c) 카르복실 보호기를 제거하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계를 포함하는,
    화학식 I의 화합물:
    (화학식 I)
    Figure 112008067163656-PCT00044
    (상기식에서,
    R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클 로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다);
    또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르를 제조하는 방법.
  38. a) 화학식 VI의 화합물과
    (화학식 VI)
    Figure 112008067163656-PCT00045
    (상기식에서 Pg는 카르복실 보호기이다)
    과량의 R'SO2X를 접촉하여 화학식 VII의 화합물을 제공하는 단계:
    (화학식 VII)
    Figure 112008067163656-PCT00046
    b) 화학식 VII의 화합물로부터 단일의 -SO2R'기를 선택적으로 제거하여 화학식 VIII의 화합물을 제공하는 단계:
    (화학식 VIII)
    Figure 112008067163656-PCT00047
    c) 화합물 VIII과 X가 할로인 화학식 R2-X를 가지는 알킬화제 또는 R이 메틸인 디메틸술페이트를 접촉하여 화학식 IX의 화합물을 형성하는 단계: 및
    (화학식 IX)
    Figure 112008067163656-PCT00048
    d) 카르복실 보호기를 제거하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계를 포함하는,
    화학식 I의 화합물:
    (화학식 I)
    Figure 112008067163656-PCT00049
    (상기식에서:
    R1은 C1 내지 C4 알킬 및 C1 내지 C4할로알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    R2는 C1 내지 C4 알킬, C2 내지 C4 알케닐, C2 내지 C4 알키닐, 및 C3-C6 시클로알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다);
    또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 에스테르를 제조하는 방법.
KR1020087023333A 2006-02-27 2007-02-26 Ｖｌａ-4에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 피리미디닐 술폰아미드 화합물 KR20080100271A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US77759506P 2006-02-27 2006-02-27
US60/777,595 2006-02-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20080100271A true KR20080100271A (ko) 2008-11-14

Family

ID=38215011

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020087023333A KR20080100271A (ko) 2006-02-27 2007-02-26 Ｖｌａ-4에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 피리미디닐 술폰아미드 화합물

Country Status (20)

Country Link
US (2) US7579466B2 (ko)
EP (1) EP1996559A1 (ko)
JP (1) JP5135235B2 (ko)
KR (1) KR20080100271A (ko)
CN (1) CN101389611B (ko)
AR (1) AR059671A1 (ko)
AU (1) AU2007220068B2 (ko)
BR (1) BRPI0708331A2 (ko)
CA (1) CA2643838A1 (ko)
EA (1) EA017110B1 (ko)
EC (1) ECSP088701A (ko)
IL (1) IL193425A (ko)
MA (1) MA30318B1 (ko)
MX (1) MX2008010988A (ko)
MY (1) MY151045A (ko)
NO (1) NO20083743L (ko)
NZ (1) NZ570679A (ko)
TW (1) TWI389904B (ko)
WO (1) WO2007101165A1 (ko)
ZA (1) ZA200807188B (ko)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60043692D1 (de) * 1999-01-22 2010-03-04 Elan Pharm Inc Acyl derivate zur behandlung von krankheiten die in zusammenhang mit vla-4 stehen
MXPA06013482A (es) * 2004-05-27 2007-03-01 Crucell Holland Bv Moleculas de enlace capaces de neutralizar el virus de la rabia y sus usos.
CN101273035A (zh) * 2005-09-29 2008-09-24 伊兰制药公司 抑制由vla-4介导的白细胞粘附的氨基甲酸酯化合物
BRPI0616687A2 (pt) * 2005-09-29 2011-06-28 Elan Pharm Inc compostos de pirimidinil amida que inibem a adesão leucocitária mediada por vla-4
JP5135235B2 (ja) 2006-02-27 2013-02-06 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド Ｖａｌ−４によって媒介される白血球の接着を阻害するピリミジニルスルホンアミド化合物
PL2676967T3 (pl) 2006-02-28 2019-12-31 Biogen Ma Inc. Metody leczenia chorób zapalnych i autoimmunologicznych za pomocą natalizumabu
CA2641160A1 (en) * 2006-02-28 2007-09-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating inflammatory and autoimmune diseases with alpha-4 inhibitory compounds
EA016626B1 (ru) 2006-03-03 2012-06-29 Элан Фамэсьютикэлс, Инк. Способ лечения натализумабом воспалительного и/или аутоиммунного заболевания (варианты)
WO2009075806A1 (en) * 2007-12-07 2009-06-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating liquid tumors
JP2012525336A (ja) * 2009-04-27 2012-10-22 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド α−４インテグリンのピリジノンアンタゴニスト
US20120258093A1 (en) 2009-08-20 2012-10-11 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Vla-4 as a biomarker for prognosis and target for therapy in duchenne muscular dystrophy
US11287423B2 (en) 2010-01-11 2022-03-29 Biogen Ma Inc. Assay for JC virus antibodies
DK3339865T5 (da) 2010-01-11 2023-03-20 Biogen Ma Inc Assay for jc-virus-antistoffer
EP3004334A4 (en) 2013-05-28 2016-12-21 Biogen Ma Inc METHODS OF EVALUATION RISK OF DEVELOPMENT OF PML
US20180193003A1 (en) 2016-12-07 2018-07-12 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
KR20190095936A (ko) 2016-12-14 2019-08-16 프로제너티, 인크. 인테그린 저해제로의 위장관 질환의 치료
WO2019246455A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an integrin inhibitor
CN112969687A (zh) 2018-10-30 2021-06-15 吉利德科学公司 作为α4β7整合素抑制剂的喹啉衍生物
CN112969700A (zh) 2018-10-30 2021-06-15 吉利德科学公司 作为α4β7整合素抑制剂的咪唑并吡啶衍生物
EP3873897A1 (en) 2018-10-30 2021-09-08 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of alpha 4 beta 7 integrin
JP7189369B2 (ja) 2018-10-30 2022-12-13 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド アルファ４β７インテグリンの阻害のための化合物
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
WO2021030438A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of alpha 4 beta 7 integrin
EP3870261B1 (en) 2019-12-13 2024-01-31 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
EP4284947A1 (en) 2021-01-29 2023-12-06 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods of assessing the risk of developing progressive multifocal leukoencephalopathy in patients treated with vla-4 antagonists

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US742628A (en) * 1898-03-29 1903-10-27 Robert W Gormly Feed-circle for circular-knitting machines.
US654994A (en) * 1900-03-27 1900-07-31 Leopold May Centrifugal machine.
DE2525656A1 (de) 1974-06-19 1976-01-15 Sandoz Ag Verfahren zur herstellung neuer heterocyclischer verbindungen
US4046876A (en) 1974-11-08 1977-09-06 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4070457A (en) 1974-11-08 1978-01-24 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4055636A (en) 1974-11-08 1977-10-25 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4096255A (en) 1974-11-08 1978-06-20 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides, and pharmaceutical salts, compositions and methods
US4018915A (en) 1976-01-05 1977-04-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4073914A (en) 1974-11-08 1978-02-14 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4104392A (en) 1974-11-08 1978-08-01 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof, and antithrombotic compositions and methods employing them
US4041156A (en) 1974-11-08 1977-08-09 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4055651A (en) 1974-11-08 1977-10-25 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
JPS5727454B2 (ko) 1975-02-21 1982-06-10
CA1102316A (en) 1975-12-09 1981-06-02 Shosuke Okamoto N su2 xx-arylsulfonyl-l-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4036955A (en) 1976-07-22 1977-07-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4018913A (en) 1976-01-14 1977-04-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
DE2742173A1 (de) 1977-09-20 1979-03-29 Bayer Ag Phenoxy-pyridinyl(pyrimidinyl)-alkanole, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als fungizide
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
JPS57153844A (en) * 1981-03-05 1982-09-22 Sato Co Ltd Device for printing and pasting label
IT1211096B (it) 1981-08-20 1989-09-29 Lpb Ist Farm Pirimidine e s.triazinici adattivita' ipolipidemizzante.
US4672065A (en) 1982-11-19 1987-06-09 Chevron Research Company N-substituted phenoxyacetamide fungicides
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4565814A (en) 1983-01-28 1986-01-21 Sanofi Pyridazine derivatives having a psychotropic action and compositions
JPS59212480A (ja) 1983-05-17 1984-12-01 Nippon Soda Co Ltd ピリダジン誘導体及び除草剤
DE3322720A1 (de) 1983-06-24 1985-01-03 Chemische Werke Hüls AG, 4370 Marl Verwendung von in 2-stellung mit (substituierten) aminogruppen substituierten 4-dl-alkylester-(alpha)-alaninyl-6-chlor-s-triazinen als herbizide, insbesondere gegen flughafer
US4505910A (en) 1983-06-30 1985-03-19 American Home Products Corporation Amino-pyrimidine derivatives, compositions and use
NZ210669A (en) 1983-12-27 1988-05-30 Syntex Inc Benzoxazin-4-one derivatives and pharmaceutical compositions
PH22520A (en) 1984-11-12 1988-10-17 Yamanouchi Pharma Co Ltd Heterocyclic compounds having 4-lover alkyl-3-hydroxy-2-lower alkyl phenoxy-lower alkylene-y-group, and process of producing them
US4959364A (en) 1985-02-04 1990-09-25 G. D. Searle & Co. Method of treating inflammation, allergy, asthma and proliferative skin disease using heterocyclic amides
US5023252A (en) 1985-12-04 1991-06-11 Conrex Pharmaceutical Corporation Transdermal and trans-membrane delivery of drugs
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPH0784424B2 (ja) 1987-04-15 1995-09-13 味の素株式会社 チロシン誘導体及びその用途
EP0330506A3 (en) 1988-02-26 1990-06-20 Dana Farber Cancer Institute Vla proteins
US5011472A (en) 1988-09-06 1991-04-30 Brown University Research Foundation Implantable delivery system for biological factors
DE3904931A1 (de) 1989-02-17 1990-08-23 Bayer Ag Pyridyl-substituierte acrylsaeureester
US5030644A (en) 1989-07-31 1991-07-09 Merck & Co., Inc. Imidazole compounds and their use as transglutaminase inhibitors
US5260210A (en) 1989-09-27 1993-11-09 Rubin Lee L Blood-brain barrier model
US4992439A (en) 1990-02-13 1991-02-12 Bristol-Myers Squibb Company Pyridazine carboxylic acids and esters
FR2679903B1 (fr) 1991-08-02 1993-12-03 Elf Sanofi Derives de la n-sulfonyl indoline portant une fonction amidique, leur preparation, les compositions pharmaceutiques en contenant.
NZ239846A (en) 1990-09-27 1994-11-25 Merck & Co Inc Sulphonamide derivatives and pharmaceutical compositions thereof
DE4108029A1 (de) 1991-03-13 1992-09-17 Bayer Ag Triazinyl-substituierte acrylsaeureester
AU1354292A (en) 1991-03-18 1992-10-21 Pentapharm Ag Parasubstituted phenylalanine derivates
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5296486A (en) 1991-09-24 1994-03-22 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Leukotriene biosynthesis inhibitors
WO1993012809A1 (en) 1991-12-24 1993-07-08 Fred Hutchinson Cancer Research Center Competitive inhibition of high-avidity alpha4-beta1 receptor using tripeptide ldv
WO1993018006A1 (en) 1992-03-11 1993-09-16 Narhex Limited Amine derivatives of oxo- and hydroxy-substitued hydrocarbons
US5518730A (en) 1992-06-03 1996-05-21 Fuisz Technologies Ltd. Biodegradable controlled release flash flow melt-spun delivery system
DE4227748A1 (de) 1992-08-21 1994-02-24 Bayer Ag Pyridyloxy-acrylsäureester
JP2848232B2 (ja) 1993-02-19 1999-01-20 武田薬品工業株式会社 アルデヒド誘導体
US5770573A (en) 1993-12-06 1998-06-23 Cytel Corporation CS-1 peptidomimetics, compositions and methods of using the same
TW530047B (en) 1994-06-08 2003-05-01 Pfizer Corticotropin releasing factor antagonists
US5510332A (en) 1994-07-07 1996-04-23 Texas Biotechnology Corporation Process to inhibit binding of the integrin α4 62 1 to VCAM-1 or fibronectin and linear peptides therefor
AU2964295A (en) 1994-07-11 1996-02-09 Athena Neurosciences, Inc. Inhibitors of leukocyte adhesion
US6306840B1 (en) 1995-01-23 2001-10-23 Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
IL117659A (en) 1995-04-13 2000-12-06 Dainippon Pharmaceutical Co Substituted 2-phenyl pyrimidino amino acetamide derivative process for preparing the same and a pharmaceutical composition containing same
AU707152B2 (en) 1995-09-29 1999-07-01 Novartis Animal Health K.K. 13-substituted milbemycin 5-oxime derivatives, their preparation and their use against insects and other pests
DE19536891A1 (de) 1995-10-04 1997-04-10 Basf Ag Neue Aminosäurederivate, ihre Herstellung und Verwendung
DE19548709A1 (de) 1995-12-23 1997-07-03 Merck Patent Gmbh Tyrosinderivate
DK0910575T3 (da) 1996-06-21 2003-02-03 Takeda Chemical Industries Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af peptider
DE19654483A1 (de) 1996-06-28 1998-01-02 Merck Patent Gmbh Phenylalanin-Derivate
AU3343097A (en) 1996-06-28 1998-01-21 Merck Patent Gmbh Phenylalamine derivatives as integrin inhibitors
DE19629817A1 (de) 1996-07-24 1998-01-29 Hoechst Ag Neue Imino-Derivate als Inhibitoren der Knochenresorption und Vitronectinrezeptor-Antagonisten
DE19647317A1 (de) 1996-11-15 1998-05-20 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Substituierte Stickstoff-Heterocyclen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel
IL129238A0 (en) 1996-11-22 2000-02-17 Elan Pharm Inc N-(aryl/heteroarylacetyl) amino acid esters pharmaceutical compositions comprising same and methods for inhibiting b-amyloid peptide release and/ or its synthesis by use of such compounds
AU6264898A (en) 1997-02-04 1998-08-25 Versicor Inc Solid phase and combinatorial library syntheses of 3,1-benzoxazine-4-ones
DE19713000A1 (de) 1997-03-27 1998-10-01 Merck Patent Gmbh Adhäsionsrezeptor-Antagonisten
ES2257808T3 (es) 1997-05-29 2006-08-01 MERCK &amp; CO., INC. (A NEW JERSEY CORP.) Acidos biarilalcanoicos como inhibidores de adhesion celular.
CA2291778A1 (en) 1997-05-29 1998-12-03 Merck & Co., Inc. Heterocyclic amide compounds as cell adhesion inhibitors
AR016133A1 (es) 1997-07-31 2001-06-20 Wyeth Corp Compuesto de carbamiloxi que inhiben la adhesion de leucocitos mediada por vla-4, compuestos que son prodrogas de dichos compuestos, composicionfarmaceutica, metodo para fijar vla-4 a una muestra biologica, metodo para el tratamiento de una condicion inflamatoria
DE60043692D1 (de) 1999-01-22 2010-03-04 Elan Pharm Inc Acyl derivate zur behandlung von krankheiten die in zusammenhang mit vla-4 stehen
WO2000043372A1 (en) * 1999-01-22 2000-07-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Acyl derivatives which treat vla-4 related disorders
US6545003B1 (en) 1999-01-22 2003-04-08 Elan Pharmaceuticals, Inc. Fused ring heteroaryl and heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6436904B1 (en) 1999-01-25 2002-08-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6544994B2 (en) 2000-06-07 2003-04-08 Eprov Ag Pharmaceutical preparation for treating or preventing cardiovascular or neurological disorders by modulating of the activity of nitric oxide synthase
US6689781B2 (en) 2000-07-21 2004-02-10 Elan Pharmaceuticals, Inc. Phenylalanine derivatives as alpha 4 integrin inhibitors
US6794506B2 (en) 2000-07-21 2004-09-21 Elan Pharmaceuticals, Inc. 3-(heteroaryl) alanine derivatives-inhibitors of leukocyte adhesion mediated by VLA-4
TW200307671A (en) 2002-05-24 2003-12-16 Elan Pharm Inc Heteroaryl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by α 4 integrins
TWI281470B (en) 2002-05-24 2007-05-21 Elan Pharm Inc Heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by alpha4 integrins
NZ588839A (en) 2004-07-08 2012-09-28 Elan Pharm Inc Multivalent vla-4 antagonists comprising polyethylene glycol moieties
BRPI0616687A2 (pt) 2005-09-29 2011-06-28 Elan Pharm Inc compostos de pirimidinil amida que inibem a adesão leucocitária mediada por vla-4
CN101273035A (zh) 2005-09-29 2008-09-24 伊兰制药公司 抑制由vla-4介导的白细胞粘附的氨基甲酸酯化合物
JP5135235B2 (ja) 2006-02-27 2013-02-06 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド Ｖａｌ−４によって媒介される白血球の接着を阻害するピリミジニルスルホンアミド化合物

Also Published As

Publication number Publication date
AU2007220068B2 (en) 2012-09-13
IL193425A (en) 2013-02-28
CA2643838A1 (en) 2007-09-07
CN101389611B (zh) 2012-07-18
IL193425A0 (en) 2009-05-04
ECSP088701A (es) 2008-11-27
JP5135235B2 (ja) 2013-02-06
MX2008010988A (es) 2008-10-20
US7820687B2 (en) 2010-10-26
BRPI0708331A2 (pt) 2011-05-24
MY151045A (en) 2014-03-31
ZA200807188B (en) 2009-12-30
EA017110B1 (ru) 2012-09-28
MA30318B1 (fr) 2009-04-01
WO2007101165A1 (en) 2007-09-07
AU2007220068A1 (en) 2007-09-07
EA200801906A1 (ru) 2009-02-27
JP2009528296A (ja) 2009-08-06
NZ570679A (en) 2011-01-28
NO20083743L (no) 2008-11-19
TW200811142A (en) 2008-03-01
US7579466B2 (en) 2009-08-25
US20080058357A1 (en) 2008-03-06
AR059671A1 (es) 2008-04-23
TWI389904B (zh) 2013-03-21
CN101389611A (zh) 2009-03-18
US20100016345A1 (en) 2010-01-21
EP1996559A1 (en) 2008-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20080100271A (ko) Ｖｌａ-4에 의해 매개되는 백혈구 부착을 억제하는 피리미디닐 술폰아미드 화합물
CA2624450C (en) Pyrimidinyl amide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
US7427628B2 (en) Heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by α4 integrins
US7335663B2 (en) Heteroaryl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by α4 integrins
KR20080022552A (ko) Ｖｌａ―４ 길항제로서의 이미다졸론 페닐알라닌 유도체
AU2012261691A1 (en) Pyrimidinyl sulfonamide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
EP2497768B1 (en) Novel 2, 4-pyrimidine derivatives and use thereof
MX2008004030A (en) Pyrimidinyl amide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application