CN101262779B - 益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其包含微生物的混合物，其中包含至少两种选自屎肠球菌(Enterococcus faecium)DSM 16211、路氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)DSM 16350、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivariusssp. salivarius)DSM 16351、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)DSM 16210和动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)DSM 16284的微生物。本发明还涉及所述食品、饲料和/或饮用水添加剂特别地用于预防哺乳动物和/或家禽的消化系统中许多不希望的微生物的有害效应的用途。
Description
本发明涉及涉及益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其包含微生物的混合物，以及涉及这样的益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂的用途。
越来越多地，在人和动物的应用范围中使用包含微生物混合物的食品、饲料和/或饮用水添加剂，以尽可能防止由病原菌例如沙门氏菌(Salmonella)或大肠杆菌(E.coli)、弯曲杆菌(Campylobacter)、梭菌(Clostridia)等引起的感染。这样的微生物混合物的使用基于所谓的“竞争性排斥(CE)”，其中试图用所谓的“好”细菌排挤或排除“坏或恶”细菌即损害或影响健康的细菌。在此，好细菌的生长抑制坏细菌的生长，例如通过它们在消化道的环境中具有生长优势从而更快速地增殖。具体地，在此使用也可以从消化道中分离的细菌的特定混合物，其中设法施用尽可能广谱的肠细菌以获得广泛的应用范围。然而，使用尽可能广谱的未明确说明的肠细菌经证明是有问题的，因为一方面，几乎不能避免不确定的混合物的可能的问题例如抗生素抗性或疾病的转移，和另一方面，为了不产生由施用这样的混合物导致的意外或不希望的结果，施用不确定的混合物受到地区或国际规章和法规的限制。因而，为了避免意外效应和遵守法规，必须使用具有确定成分的混合物，特别是具有确定成分的由一种或多种菌株组成的益生菌培养物。
考虑到法律规定和希望获得尽可能具体的结果，近年来许多出版物逐渐为人所知，其中例如US-A 5 372 810描述了用于在有用动物中预防和治疗腹泻的制剂和方法，其中使用经灭菌的细菌细胞、它们的匀浆物或细胞壁组分，所述细菌细胞经需氧培养的。在此所使用的细菌属于短杆菌属(Brevibacterium)和/或棒杆菌属(Corynebacterium)。
美国公开号2004-0115308描述了包含新鲜的益生菌配料的消费品，其中所述益生菌由酵母、曲霉菌(Aspergilla)、乳杆菌(Lactobacilil)、双歧杆菌(Bifidobacteria)、链球菌(Streptococci)、肠球菌(Enterococci)和其混合物组成。在此所用的细菌不进行干燥或以任何方式浓缩，而是以所获得的形式进行使用，从而在稳定性、适用性等方面产生问题。
从EP 1 037 964中获知，用于在猪中控制或抑制沙门氏菌的确定的益生菌或者厌氧菌的制剂，其中所述细菌包括粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、梭状梭菌(Clostridium clostridiforme)、共生梭菌(Clostridiumsymbiosum)、多枝梭菌(Clostridium ramosum)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、吉氏拟杆菌(Bacteroides distasonis)、普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)、多形拟杆菌(Bacteroidesthetaiotamicron)和粪拟杆菌(Bacteroides caccae)，并且在所述产品中必须包含至少7个不同组的微生物。
最后，WO 03/054168描述了用于制备肠微生物制剂的方法，所述肠微生物能够排除病原菌。在该方法中，从特定的动物物种的肠中获得微生物样品，并将其暴露于有氧条件下，然后进行冷冻，和再次融化。选择性地培养单个微生物群体，并在抑制测试中就它们抗病原微生物的作用对其进行测试，最后将其进行发酵和使用。
然而，在该文献中描述的所述方法一方面存在如下问题，即通过使用单种特定的细菌或其组合只能获得抗一种特定病原菌的作用。不能获得抗在消化道中含有的不同病原菌的作用。最后，在该文献中描述的所述方法大部分还遇到下列情况：所述施用的细菌谱的广泛程度不足以获得病原菌的尽可能完全的抑制。其他已知的产品使用不从肠中获得的细菌，从而不能获得完全特异的作用。
本发明目的在于，提供益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其包含微生物的混合物，所述微生物基本上在哺乳动物和/或家禽的整个消化道内发挥其作用，从而预防或至少减少大量不希望的微生物例如沙门氏菌、大肠杆菌、梭菌等的有害效应。
为实现这些目的，根据本发明使用益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其包含微生物的混合物，其中包含至少两种选自屎肠球菌(Enterococcus faecium)DSM 16211、路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)DSM 16351、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)DSM 16210和动物双岐杆菌(Bifidobacterium animalis)DSM 16284的微生物。通过使用选自屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284的微生物，由于所述微生物来源于消化道的各种各样的区域例如盲肠、空肠、回肠或膆囊(Kropf)，因而基本上成功覆盖了整个消化道特别是胃肠区域，因此能够卓有成效地防止病原菌在整个消化道中的作用。
除了DSM 16284动物双岐杆菌(其应当称为新的物种)外，保藏的微生物是已知物种的新菌株，因为它们通常显示出超过99％的与已知菌株的同一性。
保藏的菌株的各自序列如下：
乳酸片球菌，DSM 16210
CCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAACTTCCGT
TAATTGATTATGACGTGCTTGCACTGAATGAGATTTTAACACGAAGTGAGTGGCGGACGG
GTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAGAAGCAGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTA
ATACCGTATAACAGAGAAAACCGCCTGGTTTTCTTTTAAAAGATGGCTCTGCTATCACTT
CTGGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGATGAT
GCGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCT
ACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGTGCACGCCGCG
TGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGTTAAAGAAGAACGTGGGTGAGAG
TAACTGTTCACCCAGTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAG
CCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAG
GCGGTCTTTTAAGTCTAATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATTGGAAACT
GGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGATAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
TATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTC
GAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGATT
ACTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGTAATCCGCC
TGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAAGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGT
GGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTCTG
CCAACCTAAGAGATTAGGCGTTCCCTTCGGGGACAGAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTC
GTCAGCTCGTGTCG
测序引物： 341正向，530反向
来自2个部分序列的重叠群： 341f530r
序列长度： 总共1094个碱基
与已知菌株的同一性： 99.6％
路氏乳杆菌，DSM 16350
GGATGAACGCCGGCGGTGTGCCTAATACATGCAAGTCGTACGCACTGGCCCAACTGATTG
ATGGTGCTTGCACCTGATTGACGATGGATCACCAGTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACAC
GTAGGTAACCTGCCCCGGAGCGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAA
CAACAAAAGCCACATGGCTTTTGTTTGAAAGATGGCTTTGGCTATCACTCTGGGATGGAC
CTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCGATGATGCATAGCCGA
GTTGAGAGACTGATCGGCCACAATGGAACTGAGACACGGTCCATACTCCTACGGGAGGCA
GCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGCAAGCCTGATGGAGCACACCGCGTGAGTGAAGA
AGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGTTGGAGAAGAACGTGCGTGAGAGTAACTGTTCA
YGCAGTGACGGTATCCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAT
ACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTGCTT
AGGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACCGGGCGACTTG
AGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAG
AACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGG
GTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGTGT
TGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTA
CGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAAGCATG
TGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTGCGCTAACCTT
AGAGATAAGGCGTTCCCTTCGGGGACGCAATGACAGGTGGTGCATG
GTCGTCGTCAGCTCGTG
测序引物： 341正向，530反向
来自2个部分序列的重叠群： 341f530r
序列长度： 总共1083个碱基
与已知菌株的同一性： 99.7％
唾液乳杆菌唾液亚种，DSM 16351
ACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAAACTTTCTTACACCGAATGCTTG
CATTCACTCGTAAGAAGTTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTAA
AAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGTATATCTNTAAGGATCGCATGA
TCCTNAGATGAAAGATGGTTCTGCTATCGCTTNTAGATGGACCCGCGGCGTATTANCTAG
TTGGTGGGGTAACGGCNTACCAAGGNGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGNTGATCGGC
CACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCA
CAATGGACGCAAGTCTGATGGTGCCCGCCGCGAGAGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAA
ACTCTGTTGTTAGAGAAGAACACGAGTGAGAGTAACTGTTCATTCGATGACGGTATCTAA
CCAGCAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTT
GTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGAACGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCC
TTCGGCTTAACCGGAGTAGTGCATTGGAAACTGGAAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGT
GGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAAGC
GGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGTTCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGA
TACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTC
AGTGCCGCAGCTAACGCAATAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACT
CAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG
CGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACCTAAAAAATTAGGTTTCCCTTCG
GGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGT
测序引物： 341向，530反向
来自2个部分序列的重叠群： 341f530r
序列长度： 总共1066个碱基
与已知菌株的同一性： 99.5％
屎肠球菌，DSM 16211
CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGCTTCTTTT
TCCACCGGAGCTTGCTCCACCGGAAAAAGAGGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGG
GTAACCTGCCCATCAGAAGGGGATAACACTTG
GAAACAGGTGCTAATACCGTATAACAATCAAAACCGCATGGTTTTGATTTGAAAGGCGC
TTTCGGGTGTCGCTGATGGATGGACCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGC
TCACCAAGGCCACGATGCATAGCCGACCTGAG
AGGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGT
AGGGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGG
TTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAA
GAACAAGGATGAGAGTAACTGTTCATCCCTTGACGGTATCTAACCAGAAAGCCACGGCT
AACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGG
GCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGG
GGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTG
TAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTC
TGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAG
TCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAG
CTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAAT
TGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAAC
CTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGCTTCCCCTTC
测序引物： 341正向，530反向
来自2个部分序列的重叠群： 341f530r
序列长度： 总共1033个碱基
与已知菌株的相似性： 99.9％
动物双岐杆菌，DSM 16284
TTGCCATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGCGGGATGGAGGCCTTCGGGTTG
TAAACCGCTTTTGTTCAAGGGCAAGGCACGGTTTCGGGCCGTGTTGAGTGGATTGTTCGA
ATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATC
CGGATTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCAT
CGCCTAACGGTGGATCTGCGCCGGGTACGGGCGGGCTGGAGTGCGNTAAGGGAGACTGGA
ATTCCCGGTGTAACGNTGGAATGTGTANATATCGGGAAGAACACCAATGGNNAANGNAGG
TCTCTGGGCCGTTACTGACGCTGACGATNNAAAGACGTGAACCAGCGANCNCNATAANAT
ACCCTGACTACGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGT
GGGGCCCTTTCCACGGGTCCTGTGTCGGAGCCAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGT
ACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATG
CGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTGCCGGATCGCCG
TGGAAACACGGTTTCCCTTCGGGGCCGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCG
TGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCGCATGTTGCCAGC
GGGTGATGCCGGGAACTCATGTGGGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGA
CGTCAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAA
CGCGATGCGACACGGTGACGTGGGGCGGATCGCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGCA
GTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAACGCCGCG
GTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGAAAGTGGGTAGCACC
GGAAGCCGGTGGCCCGACCCTCGTGGGGCGGACCGTCTAATGGTGAGACTCGTGATTGG
测序引物： 341正向，1492反向
来自2个部分序列的重叠群： 341f1492r
序列长度： 总共1139个碱基
与已知菌株的同一性： 98.9％-新种
根据本发明的进一步形式，在所述食品、饲料和/或饮用水添加剂中包含至少三种微生物，从而能够实现更完全地覆盖整个消化道，此外，可以检测出所述三种所用的微生物抗病原菌的协同效应。
在此，已证明其中包含屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351的混合物是用于食品、饲料和/或饮用水添加剂的特别优选的混合物。这样的混合物不仅经证明在抑制病原菌特别是大肠杆菌方面是有益的，而且还由于其强烈的降低pH的潜能和高的酸(例如乳酸)的生产率，其还强烈地限制病原菌的生存环境，从而另外还能够强烈地抑制其他不同病原体的繁殖。
此外，其中包含屎肠球菌DSM 16211、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284的食品、饲料和/或饮用水添加剂是特别优选的。这样的食品、饲料和/或饮用水添加剂特别地显示出对几乎所有通常存在的病原菌特别是大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholeraesuis)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的一致得到改善的抑制作用，所述抑制作用相对于在混合物中所包含的微生物的单一效应来说如此强烈地得到增强，即能够获得抗许多病原菌的所述三种微生物的协同效应。此外，该混合物还显示出强的降低pH的潜能(特别地由于所形成的乳酸和乙酸的相对高的量)，从而这反过来强烈地不利地影响病原菌的生存条件。
如相应于本发明的优选的进一步形式，通过在所述食品、饲料和/或饮用水添加剂中另外还包含能够用作载体的选自低聚果糖、菊粉、低聚异麦芽糖、拉克替醇、低聚乳果糖(Lactosucrose)、乳果糖、焦糊精、大豆低聚糖、反式低聚半乳糖(Transgalacto-oligosaccharide)、低聚木糖、维生素特别是维生素E的营养物质和/或益生物质，所使用的微生物在消化道内的生存环境得到显著改善，并特别地将确保，所使用的微生物能够在消化道内快速且可靠地增殖，而且同时通过“竞争性排斥”阻止或防止病原菌的增殖。由于所使用的营养物质和/或益生酸，实现了所使用的微生物相对于病原菌的生长优势。
如相应于本发明的优选的进一步形式，通过包含选自沸石、碳酸钙、碳酸镁、海藻糖、壳聚糖、紫胶、白蛋白、淀粉、脱脂奶粉、甜乳清粉末(Süβ molkenpulver)、麦芽糖糊精、乳糖、菊粉、葡萄糖、植物油的其他载体，或选自水或生理盐水的溶剂，一方面能够在消化道中获得微生物的均匀分布，和另一方面能够获得对于“竞争性排斥”的进一步支持。
如相应于本发明的优选的进一步形式，通过另外还包含包衣材料，其选自麦芽糖糊精，瓜尔豆种子粉，阿拉伯树胶，藻酸盐，改性淀粉和淀粉衍生物，糊精，纤维素衍生物如纤维素酯和醚，蛋白质如明胶、白蛋白、酪蛋白、谷蛋白，金合欢胶，黄蓍胶，脂质如蜡、石蜡、硬脂酸、甘油单酯和甘油二酯，成功地将所述微生物与任选包含的载体材料一起进行包被，从而确保所述微生物能够只在其使用目的部位即在消化道内发挥其作用。此外，通过使用这样的包衣材料，例如可能通过所谓的凝胶或颗粒剂应用，将食品、饲料和/或饮用水添加剂直接应用于在运输箱内的待用其进行处理的动物例如一日龄雏鸡，从而为幼小动物提供预防或治疗性处理以抵抗由病原微生物引起的感染。因为，由于幼小动物与其母亲缺乏直接接触，从而不再相应地传递关于完整肠内菌群的基础，所以这样的应用在现代动物育种中特别重要。
为了获得所述食品、饲料和/或饮用水添加剂抗病原菌的更加完全的作用，优选地如下进一步发展所述添加剂，即另外还包含至少一种选自双岐杆菌属物种(Bifidobacterium sp.)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、乳杆菌属物种(Lactobacillus sp.)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)和粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)的微生物。通过将本身已知的其他微生物与所述食品、饲料和/或饮用水添加剂相混合，可以定向地增强抗一种或多种在各个动物中预期的病原菌的作用，从而可以进一步降低感染的风险。
根据优选的进一步形式，已证明特别有利的是，以最大直径为2000μm的悬浮的、粉末状的或经包囊的形式使用所述食品、饲料和/或饮用水添加剂，从而根据所希望的使用部位例如膆囊、胃、小肠等，能够精确且定向地释放所述微生物的作用。此外，不言而喻，为了能够确保在整个消化系统中的作用，也可以使用由悬浮的和经包囊的食品、饲料和/或饮用水添加剂组成的混合形式。
根据本发明的优选的进一步形式，提供了饲料添加剂，其特别地用于家禽和/或猪以增强所述有用动物的性能，所述饲料添加剂由1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，和1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350组成。通过这样地选择所使用的微生物的量，特别地成功制备了显示出优异的抗大多数大肠杆菌细菌的作用的饲料添加剂。
根据本发明的优选的进一步形式，提供了饲料添加剂，其特别地用于家禽和/或猪以增强所述有用动物的性能，所述饲料添加剂由1×107至1×1014，特别是1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1×107至1×1014，特别是1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，和1×107至1×1014，特别是1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的动物双歧杆菌DSM 16284组成。使用这样的饲料添加剂，特别地，成功地强烈或一致强烈地抑制了猪霍乱沙门氏菌和产气荚膜梭菌的作用以及大肠杆菌的作用，此外，由于所使用的微生物以高产量产生酸即乙酸和乳酸，因而如此强烈地降低了用其饲喂的动物的消化道中的pH，从而强有力地阻止其他病原菌生长。
为增强所述饲料添加剂的作用，优选地如此进一步发展饲料添加剂，即所述饲料添加剂由1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，和1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351组成。通过这样地选择所使用的微生物的量，特别地成功制备了显示出优异的抗大肠杆菌细菌的作用的饲料添加剂，此外，由于高的降低pH的潜能，使得能够获得强的对几乎所有其他病原菌的生长的抑制。
根据本发明的优选的进一步的形式，特别地用于家禽和/或猪以增强所述有用动物的性能的饲料添加剂由1×107至1×1014，特别是1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1×106至1×1014，特别是1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351，1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的动物双岐杆菌DSM 16284，和1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1012CFU/kg饲料添加剂的双岐杆菌属物种2组成。这样的饲料添加剂混合物特别地显示出显著增强的抗病原菌空肠弯曲杆菌以及猪霍乱沙门氏菌的作用。此外，还强烈地改善了抗常见大肠杆菌的作用，并且总体上大大超过单个菌株的作用。此外，这样的饲料添加剂的代谢反应已证明，一定存在所述细菌的协同效应。因而，由五种微生物组成的本混合物尤其能够利用所述混合物中的单种微生物所不能利用的木糖醇。该现象的原因是，例如，降解木糖醇需要多种酶，并且通过根据本发明的5种微生物的组合才能够一起提供所必需的酶，从而能够利用待如此复杂地进行降解的碳水化合物。
根据优选的进一步的形式，所述饲料添加剂另外还包含1％至95％，特别地20％至98％的载体或天然物质。通过额外包含载体或天然物质，通过支持或促进所使用的微生物的选择性生长，成功地进一步从胃肠环境中排除病原菌。
如相应于本发明的优选的进一步形式，通过以0.01g/kg至10g/kg饲料，特别地0.025g/kg至2.5g/kg饲料的量，将细菌水性悬浮液施加至饲料或其丸粒(Pellet)上，确保了，一个方面所述饲料添加剂可以毫无问题地被动物摄入，另一方面在饲料摄入之前已存在于饲料表面上的病原菌可以被所述饲料添加剂控制或排除或者降解。为了获得特别好的饲料添加剂的作用，优选地将所述饲料添加剂以20g/t至20kg/t，特别地100g/t至2.5kg/t的量混合入饲料中，从而一方面提供足够量的微生物，和另一方面可以确保从胃肠环境中安全地降解或排除病原菌。
根据本发明的优选的进一步形式，将微生物或微生物的混合物用作饮用水添加剂，其中，根据优选的进一步的形式，所述饮用水添加剂包含1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，和1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350。这样的饮用水添加剂对于抑制病原菌，在此特别是抑制大肠杆菌，是特别有利的。此外，由于形成乳酸、乙酸和丙酸，这样的混合物能够强烈地降低胃肠道中的pH，从而一方面产生对病原菌不利的生存条件，和另一方面所形成的酸还以其非解离形式发挥杀菌作用(这是广为人知的)，从而能够达到抗许多病原菌的总体上良好的作用。
根据优选的进一步的形式，使用由1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，和1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351组成的饮用水添加剂。已证明这样的饮用水添加剂对于抑制大肠杆菌以及猪霍乱沙门氏菌特别有利，此外，还显示出在代谢特性方面的协同效应。因而，该混合物例如能够降解不能被所包含的任何单种菌株单独地降解的D-塔格糖。因此，这三种菌株在代谢特性方面的协同效应是可检测的。
根据优选的进一步的形式，本发明如下进一步发展，即所述饮用水添加剂由1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，和1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的动物双岐杆菌DSM 16284组成。已证明这样的微生物混合物特别地对于抑制选自猪霍乱沙门氏菌、空肠弯曲杆菌和产气荚膜梭菌的病原菌是特别有利的，此外，由于所述来自胃肠道的微生物的各种不同来源，所述微生物混合物还能够在整个胃肠道上发挥作用，从而可以达到几乎完全排除在整个胃肠道中的有害病原菌。
根据优选的进一步的形式，使用由1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351，1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的乳酸片球菌DSM16210，1×107至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的动物双岐杆菌DSM 16284，和1×106至1×1014，特别地1×1010至1×1013CFU/kg饮用水添加剂的双岐杆菌属物种组成的饮用水添加剂。通过使用这样的饮用水添加剂，以大大超过单种微生物的作用之和的程度成功地抑制了几乎所有的经常出现的病原菌特别是大肠杆菌、沙门氏菌、梭菌和弯曲杆菌，从而可以获得抗病原菌的巨大协同效应。此外，通过使用这样的微生物，成功地强烈且极其快速地降低了动物消化道中的pH，从而进一步增强该作用，特别是对其他病原菌生长的抑制作用。
为了特别地促进希望的微生物在胃肠道内的生长，从而进一步增强排除作用，根据优选的进一步的形式，所述饮用水添加剂另外还包含1％至95％，特别地20％至92％的载体或营养物质。
根据进一步的目的，本发明的目标在于通过定向地使用微生物或微生物混合物来选择性地增强哺乳动物和/或家禽的免疫系统，从而从消化道中尽可能完全排除病原菌。
为实现这些目的，根据本发明，使用至少两种微生物的混合物用作益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂，所述微生物选自屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284。通过这样的使用，成功地通过所谓的“竞争性排挤”几乎完全从哺乳动物或家禽的消化道中排除了病原菌，因为特别地通过这些微生物的定向混合物能够极其快速和强烈地降低消化道中的pH，其中通过本发明的用途能够定向地抑制病原菌的扩展。除此以外，在该使用过程中，即使在更长时间且同时施用至少一种抗生素时，所述微生物都不显示出丝毫的抗生素抗性。
根据优选的进一步的形式，根据本发明，使用屎肠球菌DSM16211、路氏乳杆菌DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351的混合物。通过这样的使用，特别地成功抑制了对病原菌即大肠杆菌的作用，并且由于极快地降低了消化道内的pH值，因而使病原菌的生存条件本身恶化至这样的程度，即所有其他有害微生物的生长也被强烈地阻止或抑制，从而显著地降低已提供了所述混合物的哺乳动物和/或家禽对疾病的易感性。
根据本发明的进一步的形式，优选地使用由屎肠球菌DSM 16211、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284组成的混合物，通过使用所述混合物，特别地使得能够抑制猪霍乱沙门氏菌、空肠弯曲杆菌和产气荚膜杆菌，和此外还强烈地恶化其他病原菌的生存条件，从而能够总体上检测出所使用的混合物的益生效应，该益生效应大大超过当使用单种微生物时的效应之和。
根据本发明的优选的进一步的形式，将由屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350组成的混合物与选自乳杆菌、链球菌和/或双岐杆菌的其他菌株一起使用，其中通过额外使用选自乳杆菌、链球菌和/或双歧杆菌的菌株，使得能够定向地使用或定向地抑制胃肠道的定向区域内的特定微生物，从而特别地能够抑制由病原菌引起的特定疾病的发生。
根据本发明的优选的进一步的形式，使用微生物的混合物来增强免疫防御。特别地，这样的使用特别地通过如下方式是可能的：通过定向选择所使用的微生物以及它们来自消化道的各种各样的区域的来源，可以确保所使用的微生物在消化系统的整个长度范围内发挥其作用，并从而事实上可以显著增强经如此处理的哺乳动物或家禽抗整个消化道中的特定病原菌的免疫防御。
根据优选的进一步的形式，将微生物的混合物与选自麦芽糖糊精、瓜尔豆种子粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、改性淀粉和淀粉衍生物、糊精、纤维素衍生物、蛋白质、金合欢胶、黄蓍胶、脂质的至少一种胶凝剂或成粒剂或者包衣材料一起使用。通过与胶凝剂或成粒剂一起使用所述微生物混合物，成功地作为所谓的颗粒剂或凝胶应用进行了使用，从而特别地能够为非常幼小的动物安全且可靠地提供对于增强免疫防御所需的必需微生物，所述非常幼小的动物不再能够通过它们的母亲获得相应的免疫增强物质。在进行这样的凝胶或颗粒剂应用时，用胶凝剂覆盖所述微生物混合物或将其进行包囊，并将该混合物直接喷雾至或施加至待提供所述混合物的幼小动物上，或者例如在雏鸡的情况下将所述混合物导入运输箱中，从而可以确保为幼小动物提供对于它们来说至关重要的微生物。可通过如下方式来获得类似的优选的使用：以喷雾混悬液的形式将所述微生物混合物与液体载体一起直接施加于待用其处理的幼小动物上。通过用所述微生物的混合物对幼小动物进行喷雾，该喷雾混合物的一部分通过它们本身存在的皮毛护理或与其他幼小动物的接触而被摄入消化道中，由此再次确保提供基本上对于增强免疫防御所必需的微生物。
在下面，通过实施方案更详细地解释本发明。其中，实施例1显示了在琼脂平板测试模型中通过使用分离的受试细菌的病原菌抑制；实施例2显示了饲喂试验，在所述试验中，向一日龄雏鸡给予包含5种、3种或0种微生物的饲料添加剂和饮用水添加剂；实施例3显示了现场试验，在所述试验中向一日龄雏鸡给予包含5种微生物的饮用水添加剂；实施例4显示了饲喂试验，其中一日龄雏鸡在指定的时间点接受包含5种微生物的饮用水添加剂；实施例5显示了在一日龄雏鸡中的沙门氏菌攻击，所述微生物在指定的时间点通过饮用水或通过饲料进行施用，其中使用了3种或5种微生物的混合物；和实施例6显示了在断奶小猪中的饲喂试验。
实施例1
在琼脂平板测试模型中，使用本发明的分离的“CE-受试细菌”(“竞争性排挤”-受试细菌)进行的病原菌的抑制
在MRS琼脂平板上进行该试验。通过接种将菌株施加在琼脂平板上，其中直接从冷却瓶中取出菌株。在缺氧条件下，孵育平板48小时。在相应的培养基中培养病原性菌株后，将大约9ml包含该病原性菌株的半固体培养基小心地倾倒在平板上。对于大肠杆菌和猪霍乱沙门氏菌，使用半固体的VL培养基，对于空肠弯曲杆菌，使用半固体的“脑心浸液培养基”，和对于产气荚膜梭菌，使用半固体的“强化梭菌培养基”。
然后在各病原性菌株的各自培养条件下孵育平板。通过测量受试细菌和抑制区的直径以及从中计算抑制区对受试细菌的比率，来对平板进行评估。基于抑制区/受试细菌比率，可进行对受试细菌的抑制作用的估量。下面的表1显示了关于单独和混合使用的菌株的结果。
表1
| 分离株 | 菌株 | 大肠杆菌 | 大肠杆菌 | 猪霍乱沙门氏菌 | 空肠弯杆菌 | 产气荚膜梭菌 |
| DSM 16211 | 屎肠球菌 | 2.11 | 1.44 | 1.37 | 1.28 | 1.43 |
| DSM 16284 | 动物双歧杆菌 | 0.45 | 0.85 | 0.84 | 0.33 | 1.85 |
| DSM 16210 | 乳酸片球菌 | 1.52 | 1.38 | 1.34 | 1.47 | 1.51 |
| DSM 16351 | 唾液乳杆菌唾液亚种 | 1.49 | 2.26 | 1.46 | 1.50 | 2.05 |
| DSM 16350 | 路氏乳杆菌 | 2.53 | 1.42 | 1.60 | 1.36 | 2.12 |
| 范围 | 0.45-2.5 | 0.85-2.26 | 0.84-1.37 | 0.33-1.5 | 1.01-2.12 | |
| NCIMB 10415 | 屎肠球菌 | 1.37 | 1.35 | 1.20 | 1.22 | 1.31 |
| DSM 20104 | 动物双歧杆菌 | 0.41 | 0.79 | 0.65 | 0.31 | 1.42 |
| DSM 20284 | 乳酸片球菌 | 1.41 | 1.20 | 1.10 | 1.32 | 1.35 |
| DSM 20555 | 唾液乳杆菌唾液亚种 | 1.40 | 2.19 | 1.09 | 1.41 | 1.63 |
| DSM 20016 | 路氏乳杆菌 | 2.14 | 1.30 | 1.20 | 1.35 | 1.54 |
| 单种菌株的平均作用 | 1.48 | 1.56 | 1.11 | 0.92 | 1.57 | |
| DSM 16211，DSM 16210，DSM 16284 | 1.70 | 1.70 | 1.90 | 1.30 | 1.60 |
| DSM 16211，DSM 16350，DSM 16351 | 2.50 | 1.80 | 1.60 | 1.30 | 1.80 |
| DSM 16210，DSM 16211，DSM 16350，DSM 16351，DSM 16284 | 2.60 | 1.90 | 2.10 | 1.70 | 1.90 |
根据保藏的微生物(以粗体书写的)与相关菌株(以斜体书写的)的比较，可以清楚地看出，保藏的微生物(以粗体书写的)能够以大大高于已知菌株(以斜体书写的)的程度抑制病原菌。
实施例2
在施用了由所有5种保藏的微生物组成的混合物或由3种保藏的微生物组成的混合物的一日龄雏鸡中进行的饲喂试验，其中在初始阶段通过饮用水来施用所述混合物和另外在整个试验过程中通过饲料来施用所述混合物
试验参数：
将600只一日龄雏鸡(品种：Ross 308)分成3组：
组1：不使用添加剂的对照
组2：5种微生物；在第1至21天以饮用水的形式施用；在第1至42天通过饲料施用
组3：DSM 16210、DSM 16211、DSM 16284；在第1至21天以饮用水的形式施用；在第1至42天通过饲料施用
动物可随意获得水和饲料以便摄取。
所考虑的性能参数：
活体重，日增重，饲料摄入量，饲料利用率(＝FCR)，死亡率，欧洲生产效率因子(European Production Efficiency Factor，EPEF)。
表2：饲养试验的性能数据的概述
| 组 | 活体重(g) | 日增重(g) | 饲料摄入量(g/动物) | FCR | 死亡率％ | EPEF |
| 对照 | 2588a | 60.7 | 91.0 | 1.68 | 6.4 | 343 |
| DSM 16210，DSM 16211，DSM 16284 | 2657ab | 62.4 | 91.3 | 1.68 | 5.0 | 357 |
| DSM 16211，DSM 16284，DSM 16210，DSM 16351，DSM 16350 | 2689b | 63.1 | 92.3 | 1.69 | 3.3 | 366 |
a，b显著差异(P＜0.05)
*EPEF(欧洲生产效率因子)
通过使用所述产品，可以显著改善受试组中的动物的活体重。在接受所有5种微生物的产品组中，可以少量增加饲料的摄入，然而在饲料利用率方面没有观察到差异。因为在仲夏进行该试验，而且动物面临非常高的环境温度，因此死亡率普遍较高。尽管存在该额外的应激因素，但能够在该产品组中观察到显著的性能增加。
实施例3
在现场试验中，在实际条件下在一日龄雏鸡中测试由所有5种微生物组成的混合物，在整个实验过程中以饮用水的形式施用所述微生物混合物
试验参数：
将大约53,000只一日龄雏鸡等分成2层。
第一层：不使用添加剂的对照
第二层：在饮用水中的所有5种微生物
动物可随意获得水和饲料。
所考虑的性能参数：
活体重，死亡率
如可从下面表3中看出的，可以显著增加动物的性能，首先还与表4中所列的之前的生产周期相比；以及可以控制以前发生的大肠杆菌问题。
表3：性能数据的概述
| 活体重(g) | 死亡率％ | |
| 第一层 | 2282 | 3.38 |
| 第二层 | 2328 | 3.03 |
表4：农场的最后6个生产周期的性能
| 动物数目 | 死亡率(％) | 活体重(g) | |
| 1 | 51000 | 5.55 | 2109 |
| 2 | 49990 | 6.46 | 2228 |
| 3 | 49000 | 2.65 | 2043 |
| 4 | 50592 | 5.41 | 1627 |
| 5 | 48450 | 5.09 | 1785 |
| 6* | 53244 | 3.20 | 2305 |
*...具有所有5种微生物
实施例4
在饲喂试验中，在指定的时间点通过饮用水给一日龄的雏鸡施用由所有5种微生物组成的混合物。
试验参数：
根据随机原则，将400只一日龄雏鸡(品种：Ross 308)分成2组：
组1：对照；不使用添加剂
组2：在饮用水中的5种微生物，第1、2、3、7、8、9和14、15、16天
动物可随意获得水和饲料以便摄确。
所考虑的性能参数：
活体重增量、饲料摄入量、饲料利用率(＝FCR)、死亡率、欧洲生产效率因子(EPEF)。
结果概括于表5中。
表5：性能数据的概述
| 对照 | 5种微生物 | |
| 活体重(g) | 2320.66a | 2392.19b |
| 体重增量(g) | 54.17 | 55.87 |
| 饲料消耗(g) | 4365 | 4482 |
| 饲料利用率(＝FCR) | 1.92 | 1.90 |
| 死亡率(％) | 1 | 1.5 |
| EPEF* | 285 | 295 |
a，b显著差异(P＜0.05)
*EPEF(欧洲生产效率因子)
通过添加所述微生物，可显著增加动物的活体重。在饲料的摄入量和饲料利用率方面，两组相互之间是相当的。产品组中的生产力质量数(Produktivit
tsmassezahl)(＝EPEF)明显高于对照组。
实施例5
在一日龄雏鸡中的沙门氏菌攻击
在整个试验期过程中在饲料中，和在初始阶段通过饮用水，施用由所有5种微生物组成的产品和由3种微生物组成的产品。
试验参数：
将304只一日龄雏鸡(品种：Cobb)分成4组：
组1：负对照；不使用添加剂和不进行沙门氏菌攻击
组2：正对照；不使用添加剂；进行沙门氏菌攻击
组3：进行沙门氏菌攻击+由5种微生物组成的产品：第1-21天在饮用水中；第1-42天通过饲料
组4：进行沙门氏菌攻击+由3种微生物(DSM 16211、DSM 16210、DSM 16284)组成的产品：第1-21天在饮用水中；第1-42天通过饲料
动物可随意获得水和饲料以便摄取。
在第5天，通过口服途径用6×105cfu肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)的剂量接种组2、3和4的所有动物。同时进行负对照以获得正常性能数据的对照。
所考虑的性能参数：
活体重增重、饲料摄入量、饲料利用率(＝FCR)、发病率(测量为腹泻的动物的数目)、死亡率、EPEF(欧洲生产效率因子)
结果概括于表6中。
表6：性能数据的概述
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| 总体重增量(g) | 2847.29a | 2632.39b | 2716.49ab | 2702.18 |
| 饲料消耗(g) | 4790.07a | 4559.11b | 4534.30b | 4527.02 |
| 饲料利用率(FCR) | 1.68 | 1.73 | 1.67 | 1.67 |
| ％发病率 | 6.34a | 19.14b | 15.65b | 16.79b |
| ％死亡率 | 0.96 | 0.47 | 0.72 | 0.669 |
| EPEF* | 422 | 385 | 416 | 412 |
a，b显著差异(P＜0.05)
*EPEF(欧洲生产效率因子)
关于总体重增量，由于肠炎沙门氏菌感染，导致与对照组相比获得显著的性能损失，该性能损失可通过加入本发明的产品而得到改善。在此显示，通过加入由3种微生物组成的产品和由5种微生物组成的产品都可获得显著的改善。同样，感染也不利地影响饲料摄入量，然而，通过加入本发明的产品可显著地提高饲料利用率。此外，与未处理组相比，通过加入所述产品还可以明显地减少发病率，所述发病率测量为观察到患腹泻的动物的数目。
实施例6
一日龄雏鸡中的饲喂试验-沙门氏菌攻击
将各由36只一日龄雏鸡组成的3个组经历使用沙门氏菌攻击的饲喂试验。第一组不施用产品，第二组施用由所有5种保藏的菌株组成的混合物，第三组接受商购可得的由下列微生物组成的益生产品：乳杆菌属物种、乳杆菌属物种、双岐杆菌属物种和屎肠球菌。
试验方法：
在隔离的房间中，将一日龄雏鸡保持的笼子中。在生命的第1、2和3天通过雏鸡可随意获得的饮用水施用益生产品。在生命的第3天，对所有雏鸡口服施用1.0ml肠炎沙门氏菌悬浮液。沙门氏菌溶液的浓度为1.0×106CFU/ml。所有雏鸡另外还随意获得饲料和水。测量在动物粪便中的沙门氏菌的浓度。
评价：
| 组 | 粪便中的沙门氏菌浓度(CFU log 10) |
| 商购可得的益生产品 | 2.43b |
| 产品混合物 | n.d.(＜2,00)a |
| 对照 | 3.62 |
结果证明，只有5种保藏的微生物的组合能够显著地将沙门氏菌的生长降低至这样的程度，即沙门氏菌的数目低于检测极限。
实施例7
使用由5种微生物组成的混合物和由3种微生物组成的混合物，在断奶小猪中的饲喂试验
在饲喂试验中，就其对断奶小猪的性能的影响来测试本发明的微生物。在整个47天的试验期中通过饲料施用所述产品。
试验参数：
将101只断奶小猪(品种：
HYB
)分成3组：
组1：不使用添加剂的对照
组2：5种微生物(C5)；在第1-47天通过饲料；
组3：3种微生物(C3)，由DSM 16211、DSM 16350、DSM 16351组成；在第1-47天通过饲料；
动物可随意获得水和饲料以便摄取。
所考虑的性能参数：
活体重，日增量，饲料摄入量，饲料利用率(＝FCR)，死亡率结果概括于表7中。
表7：性能数据的概述
| 对照 | C5 | C5和对照之间的差异 | C3 | C3和对照之间的差异 | |
| 动物数目 | 34 | 33 | 33 | ||
| 初始重量(kg) | 7.75 | 7.76 | 7.75 | ||
| 第13天的重量(kg) | 11.89 | 12.26 | +3.1％ | 12.09 | +1.7％ |
| 最终重量(kg) | 31.67 | 33.00 | +4.2％ | 32.5 | +2.6％ |
| 第1-13天的日增量(g) | 321 | 350 | +9.0％ | 334 | +4.0％ |
| 第14-47天的日增量(g) | 582 | 610 | +4.8％ | 600 | +3.09％ |
| 第1-47天的日增量(g) | 509 | 537 | +5.5％ | 527 | +3.5％ |
| 死亡率(数目) | 2 | 2 |
通过使用所述产品，试验组中的动物的活体重得到显著改善，即在前13天后分别增加3％和1.7％，和在试验结束时，分别增加4％和2.6％。通过加入所述产品还可获得日增量的显著增加。
在下面的表8中，概括了饲料数据。
表8：饲料数据的概述
饲料摄入量在产品组中可以少量增加，在饲料利用率方面，首先在第一试验期中出现改善。然而，在进一步的过程中可确定饲料利用率无差异。
根据专利合作条约实施细则第13条之二第4款的列表
所有在本申请中提及的微生物都保藏在DSMZ-DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(德意志微生物保藏中心)，Mascheroder Weg 1b，38124 Braunschweig，Deutschland(DE)。
| 记录号 | 记录日期 |
| DSM 16284 | 10.03.2004 |
| DSM 16211 | 06.02.2004 |
| DSM 16210 | 06.02.2004 |
| DSM 16350 | 15.04.2004 |
| DSM 16351 | 15.04.2004 |
实施例8
肉用鸡中的肠内菌群的正移动
4组肉用鸡经历饲喂试验，其中给2组施用由5种保藏的微生物组成的产品混合物，1组为不使用任何添加剂的负对照，1组为加入抗生素性质的性能促进剂即阿维霉素(Avialmycin)的正对照，1组通过饮用水接受由5种微生物组成的混合物，和1组通过饲料接受微生物的混合物。
在检查过程中，证明在需氧菌(大肠杆菌)的总菌数和厌氧菌(拟杆菌)的总菌数方面，单个组之间没有统计学上显著的差异。与正对照和负对照(NK，PK)相比，接受了由5种微生物组成的混合物的那些组在双岐杆菌属物种、乳杆菌属物种和革兰氏阳性球菌(例如肠球菌(Enterococcus)、片球菌(Pediococcus))方面具有显著更多的细菌数目。
在附图中描述了该比较的流程图。
在附图的该流程图中，在加黑色外框的部分中显示，通过饮用水或饲料接受了由5种微生物组成的混合物的那些组具有显著更多的“好”细菌的数目。在附图的图表中，以黑色柱表示负对照组，以带阴影线的柱表示正对照，用带点的柱表示通过饲料施用了由5种微生物组成的组，和以纯灰色的柱表示通过饮用水施用了由5种微生物组成的混合物的组。
实施例9
肉用鸡中的饲喂试验
将性别混合的4,500只肉用鸡(Ross 308)分成2组，其中两组中的各组再分成3个进一步的亚组以方便观察。两个组都接受标准的饲料，受试组以1×109CFU/kg饲料的剂量接受由5种保藏的微生物组成的混合物。以相同的剂量给对照组施用商购可得的益生产品。通过饲料进行所述物质的施用。
在38天后可以确定，受试组的性能参数在活体重、日增量和饲料利用率方面显著更好。此外，相对于比较组，死亡率显著下降。结果显示于下面的表9中。
表9：38天后的结果
| 商购可得的益生产品 | C5-产品混合物 | |
| 动物数目 | 2250 | 2250 |
| 活体重(g) | 1875 | 2034 |
| 日增量(g) | 52 | 56.5 |
| 饲料利用率 | 1.66 | 1.61 |
| 死亡率(％) | 1.15 | 0.40 |
实施例10
在实验室试验中，研究所述5种保藏的微生物的抗生素抗性，并且如果可获得，将其与相近的双歧杆菌的抗生素谱(Antibiogrammen)进行比较。只有对于动物双歧杆菌菌株，在文献中没有发现比较菌株，或者由于困难的培养条件，可获得比较菌株的可靠数据。针对常用抗生素的抗性试验的结果，以及如果存在的比较菌株显示在下面的表中。
| 乳酸片球菌，DSM 16210 | 乳酸片球菌，参照株 | |
| β-内酰胺-氨苄青霉素 | S | S |
| 氨基糖苷 | ||
| 链霉素 | S | R |
| 卡那霉素 | S | R |
| 新霉素 | S | R |
| 庆大霉素 | S | R |
| 酰胺醇(Amphenicol)-氯霉素 | S | S |
| 大环内酯-红霉素 | S | S |
| 安沙霉素-利福平 | S | S |
| 链阳菌素-奎奴普丁/达福普汀 | S | R |
| 氟喹诺酮-恩氟沙星 | S | n.a. |
 |
S | R |
| 屎肠球菌，DSM16211 | 屎肠球菌，参照株1 | 屎肠球菌，参照株2 |
| β-内酰胺-氨苄青霉素 | S | S | S |
| 氨基糖苷 | |||
| 链霉素 | S | R | S |
| 卡那霉素 | S | R | R |
| 新霉素 | S | R | R |
| 庆大霉素 | S | R | S |
| 酰胺醇-氯霉素 | S | S | S |
| 四环素 | S | R | S |
| 大环内酯-红霉素 | S | R | R |
| 安沙霉素-利福平 | S | S | S |
| 链阳菌素-奎奴普丁/达福普汀 | S | R | n.a. |
 |
S | S | n.a. |
| 叶酸抑制剂-甲氧苄啶 | S | R | n.a. |
| 糖肽-万古霉素 | S | S | S |
| 唾液乳杆菌唾液亚种，DSM 16351 | 唾液乳杆菌，参照株1 | 唾液乳杆菌，参照株2 | |
| β-内酰胺-氨苄青霉素 | S | S | S |
| 酰胺醇-氯霉素 | S | S | S |
| 四环素 | S | S | R |
| 大环内酯-红霉素 | S | S | S |
| 安沙霉素-利福平 | S | S | S |
| 链阳菌素-奎奴普丁/达福普汀 | S | R | S |
 |
S | S | S |
| 叶酸抑制剂-甲氧苄啶 | S | R | R |
| 路氏乳杆菌，DSM16350 | 路氏乳杆菌，参照株 | |
| 酰胺醇-氯霉素 | S | S |
| 大环内酯-红霉素 | S | R |
| 安沙霉素-利福平 | S | S |
| 链阳菌素-奎奴普丁/达福普汀 | S | R |
| 唑烷酮-利奈唑胺 | S | S |
| 动物双岐杆菌，DSM 16284 | ||
| β-内酰胺-氨苄青霉素 | S | |
| 氨基糖苷 |
| 新霉素 | S | |
| 庆大霉素 | S | |
| 酰胺醇-氯霉素 | S | |
| 四环素 | S | |
| 大环内酯-红霉素 | S | |
| 安沙霉素-利福平 | S | |
| 链阳菌素-奎奴普丁/达福普汀 | S | |
| 氟喹诺酮-恩氟沙星 | S | |
 |
S | |
| 叶酸抑制剂-甲氧苄啶 | S | |
| 糖肽-万古霉素 | S |
S... 敏感，R... 抗性
从这些比较试验中可见，没有一种所述保藏的微生物对于任何已知的受试抗生素具有抗性，它们都保持敏感性和易感性。
PCT申请的附件
申请者：Erber Aktiengesellschaft等人
根据专利合作条约实施细则第13条之二第4款的列表
在本PCT申请的权利要求1中提及的微生物保藏在DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(德意志微生物保藏中心)，Mascheroder Weg 1b，38124Braunschweig，Deutschland(DE)。
| 记录号 | 记录日期 |
| DSM 16284 | 10.03.2004 |
| DSM 16211 | 06.02.2004 |
| DSM 16210 | 06.02.2004 |
| DSM 16350 | 15.04.2004 |
| DSM 16351 | 15.04.2004 |
Claims (50)
1.益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其包含微生物的混合物，其特征在于，包含至少两种选自屎肠球菌(Enterococcus faecium)DSM 16211、路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)DSM 16350、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)DSM 16351、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)DSM 16210和动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)DSM 16284的微生物。
2.权利要求1的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，包含至少三种微生物。
3.权利要求1或2的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，包含屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351。
4.权利要求1或2的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，包含屎肠球菌DSM 16211、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284。
5.权利要求1或2的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，另外还包含能够用作载体的营养物质和/或益生物质，选自低聚果糖、菊粉、低聚异麦芽糖、拉克替醇、低聚乳果糖、乳果糖、焦糊精、大豆低聚糖、反式低聚半乳糖、低聚木糖、维生素。
6.权利要求5的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，所述维生素为维生素E。
7.权利要求5的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，包含选自沸石、碳酸钙、碳酸镁、海藻糖、壳聚糖、紫胶、白蛋白、淀粉、脱脂奶粉、甜乳清粉末、麦芽糖糊精、乳糖、菊粉、葡萄糖、植物油的其他载体，或选自水或生理盐水的溶剂。
8.权利要求1或2的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，另外还包含包衣材料，选自麦芽糖糊精，瓜尔豆种子粉，阿拉伯树胶，藻酸盐，改性淀粉和淀粉衍生物，糊精，纤维素衍生物，蛋白质，金合欢胶，黄蓍胶，脂质。
9.权利要求8的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，所述纤维素衍生物为纤维素酯或醚。
10.权利要求8的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，所述蛋白质为明胶、白蛋白、酪蛋白或谷蛋白。
11.权利要求8的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，所述脂质为蜡、石蜡、硬脂酸、甘油单酯或甘油二酯。
12.权利要求1或2的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，另外还包含至少一种选自双岐杆菌属物种(Bifidobacterium sp.)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、乳杆菌属物种(Lactobacillus sp.)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的微生物。
13.权利要求1或2的食品、饲料和/或饮用水添加剂，其特征在于，以最大直径为2000μm的悬浮的、粉末状的或经包囊的形式包含所述微生物。
14.权利要求1的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂由1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，和1x106至1x1014CFU/kg饲料添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350组成。
15.权利要求1的饲料添加剂，其特征在于，包含1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，和1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的动物双歧杆菌DSM 16284。
16.权利要求1的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂由1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1x106至1x1014CFU/kg饲料添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，和1x106至1x1014CFU/kg饲料添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351组成。
17.权利要求1的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂由1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1x106至1x1014CFU/kg饲料添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，1x106至1x1014CFU/kg饲料添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351，1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，1x107至1x1014CFU/kg饲料添加剂的动物双岐杆菌DSM 16284，和1x106至1x1014CFU/kg饲料添加剂的双岐杆菌属物种2组成。
18.权利要求15、16或17的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂另外还包含1％至95％的载体或天然物质。
19.权利要求18的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂另外还包含20％至98％的载体或天然物质。
20.权利要求15、16或17的饲料添加剂，其特征在于，以0.01g/kg至10g/kg饲料的量，以水性悬浮液的形式将所述饲料添加剂施加至饲料。
21.权利要求20的饲料添加剂，其特征在于，以0.025g/kg至2.5g/kg饲料的量，以水性悬浮液的形式将所述饲料添加剂施加至饲料。
22.权利要求14至17中任一项的饲料添加剂，其特征在于，以20g/t至20kg/t的量，将所述饲料添加剂混合入饲料中。
23.权利要求22的饲料添加剂，其特征在于，以100g/t至2.5kg/t的量，将所述饲料添加剂混合入饲料中。
24.权利要求14-17中任一项的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂用于家禽和/或猪以增强这些动物的性能。
25.权利要求14-17中任一项的饲料添加剂，其特征在于，屎肠球菌DSM 16211的含量为1x1010至1x1012CFU/kg饲料添加剂。
26.权利要求14、16和17中任一项的饲料添加剂，其特征在于，路氏乳杆菌DSM 16350的含量为1x1010至1x1012CFU/kg饲料添加剂。
27.权利要求15或17的饲料添加剂，其特征在于，乳酸片球菌DSM 16210的含量为1x1010至1x1012CFU/kg饲料添加剂。
28.权利要求15或17的饲料添加剂，其特征在于，动物双岐杆菌DSM 16284的含量为1x1010至1x1012CFU/kg饲料添加剂。
29.权利要求16或17的饲料添加剂，其特征在于，唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351的含量为1x1010至1x1012CFU/kg饲料添加剂。
30.权利要求17的饲料添加剂，其特征在于，双岐杆菌属物种2的含量为1x1010至1x1012CFU/kg饲料添加剂。
31.权利要求1的饮用水添加剂，其特征在于，所述饮用水添加剂包含1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，和1x106至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350。
32.权利要求1的饮用水添加剂，其特征在于，所述饮用水添加剂由1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1x106至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，和1x106至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351组成。
33.权利要求1的饮用水添加剂，其特征在于，所述饮用水添加剂由1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，和1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的动物双岐杆菌DSM 16284组成。
34.权利要求1的饮用水添加剂，其特征在于，所述饮用水添加剂由1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的屎肠球菌DSM 16211，1x106至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的路氏乳杆菌DSM 16350，1x106至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351，1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的乳酸片球菌DSM 16210，1x107至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的动物双岐杆菌DSM 16284，和1x106至1x1014CFU/kg饮用水添加剂的双岐杆菌属物种2组成。
35.权利要求31至34中任一项的饮用水添加剂，其特征在于，所述饮用水添加剂另外还包含1％至95％的载体或营养物质。
36.权利要求35的饮用水添加剂，其特征在于，所述饮用水添加剂另外还包含20％至92％的载体或营养物质。
37.权利要求31-34中任一项的饮用水添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂用于家禽和/或猪以增强这些动物的性能。
38.权利要求31-34中任一项的饮用水添加剂，其特征在于，屎肠球菌DSM 16211的含量为1x1010至1x1013CFU/kg饮用水添加剂。
39.权利要求31、32和34中任一项的饮用水添加剂，其特征在于，路氏乳杆菌DSM 16350的含量为1x1010至1x1013CFU/kg饮用水添加剂。
40.权利要求32或34的饮用水添加剂，其特征在于，唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351的含量为1x1010至1x1013CFU/kg饮用水添加剂。
41.权利要求33或34的饮用水添加剂，其特征在于，乳酸片球菌DSM 16210的含量为1x1010至1x1013CFU/kg饮用水添加剂。
42.权利要求33或34的饮用水添加剂，其特征在于，动物双岐杆菌DSM 16284的含量为1x1010至1x1013CPU/kg饮用水添加剂。
43.权利要求34的饮用水添加剂，其特征在于，双岐杆菌属物种2的含量为1x1010至1x1013CFU/kg饮用水添加剂。
44.至少两种微生物的混合物用作益生的促进健康和性能的食品、饲料和/或饮用水添加剂的用途，所述微生物选自屎肠球菌DSM16211、路氏乳杆菌DSM 16350、唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284。
45.权利要求44的用途，其特征在于，使用屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350和唾液乳杆菌唾液亚种DSM 16351。
46.权利要求44的用途，其特征在于，使用屎肠球菌DSM 16211、乳酸片球菌DSM 16210和动物双岐杆菌DSM 16284。
47.权利要求44的用途，其特征在于，将屎肠球菌DSM 16211、路氏乳杆菌DSM 16350与选自乳杆菌、链球菌和/或双岐杆菌的其他菌株一起使用。
48.权利要求44至47中任一项的用途，其特征在于，使用所述微生物的混合物来增强免疫防御。
49.权利要求44至47中任一项的用途，其特征在于，将所述微生物的混合物与至少一种选自麦芽糖糊精、瓜尔豆种子粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、改性淀粉和淀粉衍生物、糊精、纤维素衍生物、蛋白质、金合欢胶、黄蓍胶、脂质的胶凝剂一起使用。
50.权利要求44至47中任一项的用途，其特征在于，以喷雾悬浮液的形式，将所述微生物的混合物与液体载体一起使用。
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