KR20110010648A

KR20110010648A - 프로 바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20110010648A
Application number: KR1020107028712A
Authority: KR
Inventors: 비바느 클로제; 게르트 슈아츠마이르; 에바 마리아 빈더; 사비느 헤니클
Original assignee: 에르버 악티엔게젤샤프트
Priority date: 2008-05-23
Filing date: 2009-05-20
Publication date: 2011-02-01
Also published as: RU2010152685A; MX2010012786A; CN102159224A; ATE531380T1; WO2009140708A1; EP2296677A1; EP2296677B1; CA2723957A1

Abstract

본 발명은 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애(Brachyspira hyodysenteriae) 균주를 경쟁적으로 억제하기 위해 하나 이상의 미생물을 포함하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 보충물에 관한 것으로서, 상기 하나 이상의 미생물은 비피도박테리움 써모필리움(Bifidobacterium thermophilium), 락토바실루스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) 및 락토바실루스 소브리우스(Lactobacillus sobrius)로 구성된 군으로부터 선택된다.

Description

프로 바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제 및 이의 용도{PRO BIOTIC FOODSTUFF AND/OR DRINKING WATER ADJUNCT AND USE THEREOF}

본 발명은 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애(Brachyspira hyodysenteriae) 균주를 경쟁적으로 억제하기 위해 하나 이상의 미생물을 함유하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제, 및 이의 용도에 관한 것이다.

미생물 또는 미생물들의 혼합물을 함유하는 사료 및/또는 음용수 첨가제는, 병원균에 의한 감염, 예를 들어 살모넬라 또는 대장균, 캄필로박터, 클로스트리디아 등에 의한 감염을 가능한 한 억제하기 위해 사람 및 동물 적용 둘 모두에서 점점 더 많이 사용되고 있다. 이러한 미생물들의 혼합물을 사용하는 것은 이른바 경쟁적 배제(competitive exclusion, CE)을 기초로 하는데, 이는 소위 "유익한" 세균에 의해 병원성 또는 질병유발성 세균, 즉, 유해하거나 건강을 손상시키는 세균을 억제하거나 제거하고자 하는 것이다. 이렇게 하는 경우, 유익한 세균의 증식은, 예를 들어 증식과 관련하여 소화관의 환경을 이용함으로써, 병원성 또는 질병유발성 세균의 증식을 억제시키고, 이에 따라 보다 신속히 증식한다. 구체적으로는, 소화관으로부터 또한 분리될 수 있는 특정한 세균 또는 특정한 세균 혼합물이 사용되지만, 요망되는 적용 분야에 미치도록 가능한 한 넓은 범위의 장내 세균 또는 고도로 특이적인 장내 세균을 투여하고자 의도된다. 그러나, 특정되지 않은 가능한 한 넓은 범위의 장내 세균을 사용하는 것은 문제가 있는 것으로 판명되었는데, 이는 한편으로는 항생제 내성 또는 질병의 전달과 같은 규명되지 않은 혼합물과 관련된 가능한 문제가 거의 회피될 수 없고, 다른 한편으로는 규명되지 않은 혼합물의 투여는 그러한 혼합물의 투여로 초래되는 예상치 못한 또는 요망되지 않는 결과를 방지하기 위한 지역 또는 국제 법규 및 법률에 의해 제약을 받기 때문이다. 따라서, 예상치 못한 효과를 방지하고 법률을 준수하기 위해, 규명된 혼합물 그리고 특히 1개 또는 수 개의 균주를 포함하는 규명된 프로바이오틱 배양물이 사용될 필요가 있다.

AT-B 501 919로부터, 동물을 위한 건강 및 성장률(performance) 증진용 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제가 이미 공지되었는데, 이러한 사료 및/음용수 첨가제는 미생물들의 혼합물을 함유하며 포유동물 및/또는 농장 조류(farm bird)의 소화계에서 작용하여 살모넬라, 대장균, 클로스트리디아 등과 같은 바람직하지 않은 세균의 유해한 효과를 방지하거나 적어도 감소시킨다.

최근, 돼지 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애가 특히 강조되었다. 이러한 돼지 병원균은 스피로키트(spirochaete) 과에 속하고 동물 생산에서 돼지 적리(swine dysenteria)의 병원체로서 중요한 역할을 한다. 적리는 전세계적으로 돼지 비육장(fattening stock)에서 가장 빈번하고 가장 비용이 많이 드는 감염성 질병으로 평가되는데, 이는 통상적으로 돼지 가축 집단에서 설사를 동반하는 잠행성 감염(insidious infection)으로서 나타난다. 돼지 적리의 발병률은 약 90%에 달하고, 사망률은 30%에 이를 수 있다. 상기 질병의 발병 원인은 배설물과 함께 분비된 병원체를 후속하여 새끼돼지가 입으로 다시 먹는다는 사실 뿐만 아니라 어린 동물들이, 예를 들어 젖떼기(weaning) 또는 리스테이블링(restabling) 동안, 매우 빈번하게 스트레스에 노출되는 것을 포함한다. 실험 연구 과정에서, 돼지 적리는 브라키스피라 하이오디센테리애와, 다른 혐기성 세균, 예를 들어 푸소박테리움 네크로포룸(Fusobacterium necrophorum), 클로스트리디움 페르프링겐스(Clostridium perfringens) 또는 호기성 또는 미호기성(microaerophilic) 병원체, 예를 들어 대장균, 캄필로박테리 제주니(Campylobacteri jejuni) 사이의 상승적 감염(synergistic infection)인 것으로 밝혀졌다. 그러나, 브라키스피라 하이오디센테리애가 장의 가시적 손상을 발생시키므로, 이러한 세균이 주된 병원체인 것으로 간주된다. 이러한 병원체는 질병이 치료되고 이로부터 회복된 후에 장에 남아있거나 존속할 수 있으므로, 병에 걸린 동물의 사망 뿐만 아니라 현저히 감소된 1일 체중 증가, 늘어난 비육 기간 및 항생제의 사용으로 인해 사육 사업에서 막대한 손실이 발생할 수 있다.

본 발명의 목적은 동물을 위한 건강 및 성장률 증진용 사료 및/또는 음용수 첨가제를 제공하는 데에 있고, 이러한 첨가제는 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주를 경쟁적으로 억제함으로써 사육 및/또는 비육 사업의 효율을 증가시킬 수 있다.

상기 목적은 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주를 경쟁적으로 억제하는 하나 이상의 미생물을 포함하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제에 의해 달성되며, 여기서 상기 하나 이상의 미생물은 실질적으로 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286, 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21285로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 한다. 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286, 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21285로 구성된 군으로부터 하나 이상의 미생물을 선택함으로써 동물, 특히 새끼돼지의 소화관에서, 특히 경쟁적인 방식으로, 브라키스피라 하이오디센테리애를 억제하는 것이 가능하다. 브라키스피라 하이오디센테리애에 의한 감염 뿐만 아니라 브라키스피라 하이오디센테리애와 다른 병원체들 사이의 상승적 감염이 새끼돼지 비육 사업에서 통상적으로 발생한다는 사실을 유념한 결과, 특히 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286과 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21285를 사용하는 것이 특히 성공적인 것으로 판명되었는데, 이는 이러한 두 군이 브라키스피라 하이오디센테리애에 대한 활성에 더하여 대장균에 대해 현저히 증가된 효과를 나타내기 때문이며, 대장균은 상기 이미 언급된 바와 같이 보통 브라키스피라와 상승적으로 작용하므로, 이에 따라 상기 확인된 군의 미생물을 투여하는 것만으로도 어린 동물들의 질병 발생률 그리고 특히 질병의 중증도 그리고 무엇보다도 이환율이 현저히 감소될 수 있게 되는데, 상기 확인된 군의 미생물로부터 선택된 균주는 브라키스피라와 대장균에 대해 특히 효율적인 것으로 판명되었고 향상된 사료 전환비가 새끼돼지 비육 사업에서 관찰되었다.

둘 이상의 미생물이 사용되고 추가로 사용되는 미생물들 중 하나 이상이 엔테로코쿠스 패시움(Enterococcus faecium), 락토바실루스 루테리(Lactobacillus reuteri) 또는 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 구성된 군으로부터 선택되는 경우, 본 발명에 따른 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이, 다양한 프로바이오틱 균주가 또한 다양한 작용 메커니즘을 이용하므로 다양한 세균 균주를 조합하여 사용하면 가치 부가적 특성들의 효과적인 상승적 사용을 일으킨다고 가정하는 소위 다중균주(multi-strain) 개념이 적용되는 경우, 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주가 억제된다는 사실에 더하여 사망에 의해 경제적 손실이 빈번히 발생함으로 인해 특히 관련이 있는 대장균과 같은 추가의 미생물 군을 안전하게 억제할 수 있다. 상기 확인된 군으로부터의 하나 이상의 추가로 사용되는 미생물을 투여하면, 대장균에 더하여 클로스트리디움 페르프링겐스, 캄필로박테리 제주니 및 살모넬라 콜레래수이스(Salmonella choleraesuis)를 또한 억제할 수 있다.

본 발명에 따르면, 바람직하게는 추가로 사용되는 미생물이 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 3530, DSMZ 19764 또는 DSMZ 16211, 락토바실루스 루테리 DSMZ 21288 또는 바실루스 서브틸리스 DSMZ 21287로 구성된 군으로부터 선택되는 경우 특히 효율적인 활성이 수득된다. 상기 확인된 군으로부터 선택되는 미생물을 추가로 사용함으로써, 브라키스피라 하이오디센테리애를 억제하는 것에 더하여 많은 병원성 대장균을 억제하는 것이 또한 가능해진다. 병원성 대장균은 동물에서, 특히 젖을 뗀 후에, 심각한 수양성 설사(watery diarrhoea)를 유발하고, 허탈(prostration) 또는 탈수로 인해 빈번하게 동물을 치사시킨다. 어린 동물, 특히 돼지의 경우, 대장균의 병원성 혈청형이 또한 존재하며, 이는 부종성 질병(oedematous disease)을 일으킴으로써 어린 동물의 사망률을 추가로 증가시킨다. 브라키스피라와 병원성 대장균 둘 모두 뿐만 아니라 어린 동물의 장에 존재하는 다른 병원균을 경쟁적으로 억제하는 미생물들의 조합물을 가공함으로써, 어린 동물의 사망률을 현저히 감소시킬 뿐만 아니라 개선된 사육 결과 그리고 특히 짧은 기간내에서의 개선된 체중 증가를 달성하는 것이 가능해진다.

비피도박테리움 아니말리스(Bifidobacterium animalis) DSMZ 16284를, 예를 들어 비피도박테리움 써모필리움(Bifidobacterium thermophilium) DSMZ 19765 및/또는 락토바실루스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) DSMZ 21286와 조합하여 사용함으로써, 어린 동물에서 다수의 병원성 장내 세균이 또한 억제된다.

에리트로마이신 또는 테트라사이클린에 대한 임의의 전염성 항생제 내성이 없는 미생물들만을 사용함으로써, 본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이, 어린 동물의 사육 과정에서 여하한 임의의 방식으로 항생제를 투여하는 것이 필요한 경우 더욱이 이는 적절하고 약화되지 않은 효과를 나타낸다는 것이 보장된다.

담체로서 사용될 수 있고 올리고사카라이드, 인슐린, 락티톨, 락토수크로오스, 락툴로오스, 피로덱스트린, 효모 및 효모 유도체, 비타민, 특히 비타민 E로부터 선택되는, 영양 물질 및/또는 프리바이오틱(prebiotic) 물질이 사료 및/또는 음용수 첨가제에 추가로 함유되는 경우, 본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이, 사용되는 미생물들의 소화관내 생존 조건이 현저히 개선되고, 사용되는 미생물(들)은 소화관에서 신속하고 신뢰할 만하게 증식할 수 있지만 동시에 병원균의 증식은 경쟁적 배제에 의해 감소하거나 억제됨이 특히 보장된다. 사용되는 영양 물질 및/또는 프리바이오틱 물질로 인해, 병원균이 아니라 사용되는 미생물(들)에 증식 이점이 제공된다.

본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이 제올라이트, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 트레할로오스, 키토산, 알루미늄 실리케이트, 특히 과립형 벤토나이트, 전분, 탈지 우유 분말, 유청(sweet-whey) 분말, 말토덱스트린, 락토오스, 인슐린, 덱스트로오스, 식물성 오일, 또는 물 또는 생리적 식염수 용액으로부터 선택되는 용매로부터 선택되는 추가의 담체가 함유됨에 따라, 한편으로는 미생물들이 소화관에 균일하게 분포될 수 있게 하고, 다른 한편으로는 경쟁적 배제를 위해 추가로 도움을 제공할 수 있다.

추가의 바람직한 구체예에 따르면, 대장, 소장 등과 같은 요망되는 사용 위치에 따라 미생물의 활성을 정확하고 선택적으로 방출시킬 수 있도록, 본 발명에 따른 사료 및/또는 음용수 첨가제를 현탁된 형태, 분말 형태 또는 캡슐화된 형태로 사용하는 것이 특히 유리한 것으로 판명되었다. 또한, 처리하려는 동물의 전체 소화계에 걸쳐 활성을 보장할 수 있도록, 현탁된 사료 및/또는 음용수 첨가제와 캡슐화된 사료 및/또는 음용수 첨가제의 혼합 형태를 사용하는 것이 물론 가능하다.

추가의 바람직한 구체예에 따르면, 사료 첨가제 및/또는 음용수 첨가제는 1% 내지 99%, 특히 50% 내지 95%의 담체 또는 천연 물질을 추가로 함유한다. 담체 또는 천연 물질이 추가로 함유된다는 사실로 인해, 사용되는 미생물의 증식을 보조하거나 촉진함으로써 소화관으로부터 병원균을 추가로 제거하는 것이 가능해진다.

본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이 사료가 사료 kg 당 0.01 g 내지 10 g, 특히 사료 kg 당 0.025 g 내지 2.5 g의 양의 사료 첨가제를 수성 현탁액으로서 함유함에 따라, 한편으로는 사료 첨가제가 사료와 함께 동물에 의해 용이하게 섭취되고 다른 한편으로는 사료 섭취 전에 사료의 표면에 이미 존재하는 병원균이 사료 첨가제에 의해 공격을 받거나 제거되거나 분해됨이 보장된다.

사료에 대해 그리고 동물의 소화관에서 사료 첨가제의 특히 양호한 효과를 달성하기 위해, 사료는 바람직하게는 사료 첨가제를 20 g/t 내지 20 kg/t, 특히 100 g/t 내지 2.5 kg/t의 양으로 함유함으로써, 한편으로는 충분한 양의 미생물을 제공하고 다른 한편으로는 위장관 환경으로부터의 병원균의 안전한 분해 또는 제거를 보장한다.

본 발명은 또 다른 목적에 따르면 하나 이상의 특정한 미생물을 선택적으로 사용함으로써 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주를 경쟁적으로 억제하고 또한 대장균과 같은 다수의 다른 병원균을 가능한 한 경쟁적으로 억제하고자 한다.

이러한 목적을 달성하기 위해, 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주를 경쟁적으로 억제하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제로서 비피도박테리움 써모필리움, 락토바실루스 살리바리우스 및 락토바실루스 소브리우스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 미생물이 본 발명에 따라 사용된다. 이렇게 사용되면 특히 동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주를 경쟁적으로 억제하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제의 제조를 가능하게 함과 동시에 사료 전환비를 증가시킬 수 있고 참조 기간 동안 체중 증가를 향상시킬 수 있는데, 상기 브라키스피라 하이오디센테리애 균주는 동물, 특히 새끼돼지의 사육에서 특히 위험한 것으로 판명되었다.

결과의 추가 개선은 본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286, 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21285로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 미생물이 사용되는 경우에 달성된다. 선택적으로 선택된 균주들을 사용함으로써 브라키스피라 하이오디센테리애의 억제가 보다 잘 이루어질 수 있다.

본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이, 둘 이상의 미생물이 사용되고 추가로 사용되는 미생물들 중 하나 이상이 엔테로코쿠스 패시움, 락토바실루스 루테리 또는 바실루스 서브틸리스로 구성된 군으로부터 선택되는 경우, 동물의 소화관에서 브라키스피라 하이오디센테리애에 더하여 특히 대장균, 살모넬라 콜레래수이스, 클로스트리디움 페르프링겐스 및 캄필로박테리 제주니를 또한 경쟁적으로 억제하고, 이러한 미생물들의 유해한 효과를 저해하는 것이 가능한데, 특히 양호한 효과는 본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서와 같이 추가로 사용되는 미생물이 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 3530, DSMZ 19764 또는 DSMZ 16211, 락토바실루스 루테리 DSMZ 21288 또는 바실러스 서브틸리스 DSMZ 21287로 구성된 군으로부터 선택되는 경우에 달성된다. 임의로, 비피도박테리움 아니말리스 DSMZ 16284가 사용되는 경우 유리한 효과가 또한 달성된다.

하기에서, 본 발명은 예시적인 실시예와 도면에 의해 보다 상세히 설명되는데, 여기서 한편으로는 검출된 억제 영역을 기초로 한 다양한 병원체에 대한 프로바이오틱 생성물의 억제 활성이 한천 확산 시험 (mm)으로 평가되고, 시험 2 내지 4에 따른 브라키스피라 하이오디센테리애를 제어하고 동물의 성장률을 증가시키는 것에 대해 본 발명에 따른 사료 및/또는 음용수 첨가제를 사용하는 프로바이오틱 화합물 사료의 효율을 결정하기 위한 사료공급 시험이 수행되었다.

시험 1

한천 확산 시험 (mm)에서의 검출된 억제 영역을 기초로 한 다양한 병원체에 대한 프로바이오틱 생성물 균주의 억제 활성

본 시험에서, 필터 플레이틀릿(filter platelet)상에 스폿팅된(spotted), 조사하려는 세균들을 한천 플레이트상에서 인큐베이션시킨 후, 전체 플레이트를, 반고형 한천을 사용하여 수득된 조사하려는 병원균의 희석물로 코팅하였다. 각각의 세균에 대해 최적화된 인큐베이션 시간 후에, 억제구역(inhibition areola)을 측정하였다. 한편, 결과는 하기 표 1에 제시되어 있는데, 이는 사용된 미생물 및 조사된 병원균 둘 모두에 대한 억제 영역 (내부 영역에서 외부 영역까지)의 거리를 나타낸다. 다른 한편, 억제 활성에 대한 시험 결과는 블록 다이어그램의 형태로 도면에 도시되어 있는데, 여기서 사용된 미생물은 가로좌표상에 나타나 있고 프로바이오틱-병원체의 거리는 세로좌표에 플롯팅되어 있으며, 병원균에 대한 사용된 개별 미생물의 활성이 도시되어 있다.

이러한 억제 시험으로부터, 비피도박테리움 써모필리움, 락토바실루스 살리바리우스, 엔테로코쿠스 패시움 및 바실루스 서브틸리스가 브라키스피라 하이오디센테리애에 대해 특히 양호한 활성을 나타내고, 특히 락토바실루스 살리바리우스와 락토바실루스 루테리가 다양한 대장균 균주에 대해 극히 양호한 활성을 나타낸다는 것이 명백해진다.

표 1

시험 2

한천 확산 시험에서의 검출된 억제 영역을 기초로 한 브라키스피라 하이오디센테리애에 대한 선택된 분리주(isolate)의 억제 활성

본 시험에서, 필터 플레이틀릿상에 스폿팅된, 조사하려는 세균들을 한천 플레이트상에서 인큐베이션시킨 후, 전체 플레이트를, 반고형 한천을 사용하여 수득된 조사하려는 병원균의 희석물로 코팅하였다. 각각의 세균에 대해 최적화된 인큐베이션 시간 후에, 억제구역을 측정하였다. 결과는 하기 표 2에 제시되어 있는데, 이는 한편으로는 브라키스피라 하이오디센테리애를 억제하는 능력을 나타내고 다른 한편으로는 각각의 균주가 관련 항생제 내성을 지니는 지의 여부를 나타낸다.

이러한 억제 시험으로부터, 특히 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286과 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765가 매우 양호한 활성을 나타내며 관련 항생제 내성을 나타내지 않는다는 것이 명백해진다. 더욱이, 엔테로코쿠스 패시움, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 16351, 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21286, 바실루스 서브틸리스 DSMZ 21287 종의 수 가지 균주가 뚜렷한 억제 활성을 나타내었고, 바실루스 서브틸리스 DSMZ 21287을 제외하고는 항생제 내성을 나타내지 않았다는 것이 입증될 수 있다.

시험 3

브라키스피라 하이오디센테리애와 대장균을 제어하고 성장률을 증가시키는 것에 대해 프로바이오틱 혼합물의 효과를 측정하는 사료공급 시험

각각 10마리 동물이 수용된 14개의 구획(stall)을 사용하여 시험 스테이블(test stable)에서 시험을 수행하였다. 스테이블은 슬랫 바닥(slatted floor), 팬 트로프(pan trough) 및 컴퓨터 제어되는 사료공급 시스템을 갖추고 있었다. 오토맷(automat)이 구획 벽을 따라 배치되어 있었다. 스테이블 상황(climate)이 매일 자동적으로 기록되었고, 온도는 새끼돼지 사육을 위한 표준 권고방침에 따라 설정되었다.

이러한 시험을 위해, 약 4주령이고 평균 고정 체중이 8.11 kg인 133마리의 젖을 뗀 암수 혼합된 돼지를 사용하였다. 각각의 새끼돼지에 귀표(earmark)를 하고, 개별적으로 칭량하고, 총 13마리의 동물을 시험으로부터 배제시켰다. 나머지 120마리의 새끼돼지를 12개의 구획에 무작위로 분포시켰다. 모든 새끼돼지는 오스트리안 브리딩 프로그램(Austrian Breeding Program)

로부터 유래된 것이었는데, 즉, (라지 화이트(large white) x 랜드레이스(landrace)) x 피에트레인(Pietrain) 이었다.

젖을 뗀 직후, 새끼돼지에게 2일간 개시 사료(starting feed)를 공급하고, 이러한 적응 기간 후에 시험 사료로 전환하였다. 사료공급은 2단계, 즉, 1일째 내지 14일째의 젖떼기 단계와 15일째 내지 26일째의 사육 단계로 이루어졌다. 시험 사료를 하나의 사료공급 설비를 통해 구획마다 개별적으로 혼합하고, 새끼돼지수, 체중 발달 및 사료 소비량에 따라 하루에 두 번 건조 형태로 분배하였다. 물은 자유롭게 먹을 수 있게 하였다.

4개의 그룹을 사용하여 각각 3회 반복하여 시험을 수행하였다.

사용된 그룹은 다음과 같았다:

A - 첨가제가 없는 대조표준;

B - 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765;

C - 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 19764, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286 및 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765;

D - 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 19764, 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21285.

프로바이오틱 혼합물의 전체 세균수(bacterial count)는 각각 사료 kg 당 약 2.5 x 10⁵ CFU였다.

그룹내의 산포도(spread)를 가능한 한 낮게 유지시키기 위해, 한배새끼(littermate)와 초기 체중 특징을 그룹 분포를 위해 고려하였다. 각각의 암퇘지(sow)로부터, 동일한 4마리새끼(quadruplet)가 가능한 한 많이 형성되었고, 그룹 또는 구획 사이에 균일하게 분포되었다.

시험의 시작시에, 14일째, 42일째에, 그리고 시험의 종료시에, 동물들을 개별적으로 칭량하고, 그로부터 1일 체중 증가를 개별 시험 섹션에서 측정하였다. 사료의 분배량을 컴퓨터를 통해 날마다 각각의 구획에 대해 개별적으로 기록하였다. 또한, 상황 데이터를 컴퓨터를 통해 매일 기록하였다. 동물들을 하루에 적어도 두 번 체크하고, 모든 사건을 스테이블 북(stable book)에 기입하였다.

표 3: 생체중(Live weight) (kg) 및 중도탈락(dropout) (동물수)

표 4: 사료 전환비 (FCR; kg/kg)

이러한 시험으로부터, 본 발명에 따른 미생물이 투여된 모든 시험 그룹은 임의의 중도탈락없이 56일간 사육될 수 있었고, 이들의 체중 증가는 대조 그룹 보다 분명히 높았고, 게다가 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765가 투여된 동물이 가장 우수한 사료 전환비를 나타냈다는 것이 명백해진다.

모든 시험 그룹의 동물들의 대변 배설물을 브라키스피라 하이오디센테리애와 대장균에 대해 분석하였다. 프로바이오틱 첨가제가 공급된 그룹에서 브라키스피라의 농도는 대조 그룹에 비해 현저히 감소하였고, 3개의 프로바이오틱 균주의 혼합물이 공급된 그룹 (시험 그룹 C)의 경우 브라키스피라의 농도는 검출 한계치 미만임을 알 수 있었다. 대장균의 경우, 모든 시험 그룹에서 대장균 세균수가 현저히 감소하였고, 실제로 시험 그룹은 대조 그룹 보다 적어도 100배 낮았다.

시험 4

브라키스피라 하이오디센테리애를 제어하고 성장률을 증가시키는 것에 대해 프로바이오틱 혼합물의 효과를 측정하는 사료공급 시험

각각 10마리 동물이 수용된 24개의 구획을 사용하는 시험 스테이블에서 시험을 수행하였다. 스테이블은 슬랫 바닥, 팬 트로프 및 컴퓨터 제어되는 사료공급 시스템을 갖추고 있었다. 오토맷이 구획 벽을 따라 배치되어 있었다. 스테이블 상황이 매일 자동적으로 기록되었고, 온도는 새끼돼지 사육을 위한 표준 권고방침에 따라 설정되었다.

이러한 시험을 위해, 약 4주령이고 평균 고정 체중이 8.02 kg인 240마리의 젖을 뗀 암수 혼합된 돼지를 사용하였다. 각각의 새끼돼지에 귀표를 하고, 개별적으로 칭량하고, 24개의 구획에 무작위로 분포시켰다. 모든 새끼돼지는 오스트리안 브리딩 프로그램

로부터 유래된 것이었는데, 즉, (라지 화이트 x 랜드레이스) x 피에트레인 이었다.

젖을 뗀 직후, 새끼돼지에게 2일간 개시 사료를 공급하고, 이러한 적응 기간 후에 시험 사료로 전환하였다. 사료공급은 2단계, 즉, 1일째 내지 14일째의 젖떼기 단계와 15일째 내지 26일째의 사육 단계로 이루어졌다. 물은 자유롭게 먹을 수 있게 하였다.

7개의 그룹을 사용하여 각각 3회 반복하여 시험을 수행하였다.

사용된 그룹은 다음과 같았다:

A - 첨가제가 없는 대조표준;

B - 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286

C - 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21284

D - 비피도박테리움 아니말리스 DSMZ 16351

E - 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 3530

F - 락토바실루스 루테리 DSMZ 21288, 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286

G - 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 19764, 바실루스 서브틸리스 DSMZ 21287

프로바이오틱 혼합물의 전체 세균수는 각각 사료 kg 당 약 1 x 10⁵ CFU/kg 였다.

결과:

성장률 데이터 (체중 발달)의 현저한 개선 뿐만 아니라, 브라키스피라가 시험 그룹의 대변에서 검출되지 않은 반면에 대조 그룹은 브라키스피라에 대해 양성으로 시험되었음이 PCR 분석에 의해 입증될 수 있었다.

이러한 시험 결과로부터, 단지 하나의 프로바이오틱 균주를 포함하는 프로바이오틱 첨가제가 투여된 동물이 대조 또는 비교 그룹 보다 뚜렷하게 높은 체중 증가를 나타내고, 수 가지 프로바이오틱 균주의 혼합물을 투여함으로써 추가의 체중 증가가 달성될 수 있는 것으로 결론내려질 수 있다.

시험 5

각각 10마리 동물이 수용된 14개의 구획을 사용하는 시험 스테이블에서 시험을 수행하였다. 스테이블은 슬랫 바닥, 팬 트로프 및 컴퓨터 제어되는 사료공급 시스템을 갖추고 있었다. 오토맷이 구획 벽을 따라 배치되어 있었다. 스테이블 상황이 매일 자동적으로 기록되었고, 온도는 새끼돼지 사육을 위한 표준 권고방침에 따라 설정되었다.

이러한 시험을 위해, 약 4주령이고 평균 고정 체중이 8.11 kg인 133마리의 젖을 뗀 암수 혼합된 돼지를 사용하였다. 각각의 새끼돼지에 귀표를 하고, 개별적으로 칭량하고, 총 13마리의 동물을 시험으로부터 배제시켰다. 나머지 120마리의 새끼돼지를 12개의 구획에 무작위로 분포시켰다. 모든 새끼돼지는 오스트리안 브리딩 프로그램

젖을 뗀 직후, 새끼돼지에게 2일간 개시 사료를 공급하고, 이러한 적응 기간 후에 시험 사료로 전환하였다. 사료공급은 2단계, 즉, 1일째 내지 14일째의 젖떼기 단계와 15일째 내지 26일째의 사육 단계로 이루어졌다. 시험 사료를 하나의 사료공급 설비를 통해 구획마다 개별적으로 혼합하고, 새끼돼지수, 체중 발달 및 사료 소비량에 따라 하루에 두 번 건조 형태로 분배하였다. 물은 자유롭게 먹을 수 있게 하였다.

사용된 그룹은 다음과 같았다:

A - 첨가제가 없는 대조표준;

B - 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 16211 및 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286;

C - 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 3530, 락토바실루스 살라바리우스 DSMZ 21286 및 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765;

D - 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 19764.

전체 세균수는 각각 사료 kg 당 약 5 x 10⁵ CFU였다.

그룹내의 산포도를 가능한 한 낮게 유지시키기 위해, 한배새끼와 초기 체중 특징을 그룹 분포를 위해 고려하였다. 각각의 암퇘지로부터, 동일한 4마리새끼가 가능한 한 많이 형성되었고, 그룹 또는 구획 사이에 균일하게 분포되었다.

시험의 시작시에, 14일째, 42일째에, 그리고 시험의 종료시에, 동물들을 개별적으로 칭량하고, 그로부터 1일 체중 증가를 개별 시험 섹션에서 측정하였다. 사료의 분배량을 컴퓨터를 통해 날마다 각각의 구획에 대해 개별적으로 기록하였다. 또한, 상황 데이터를 컴퓨터를 통해 매일 기록하였다. 동물들을 하루에 적어도 두 번 체크하고, 모든 사건을 스테이블 북에 기입하였다.

표 5: 생체중 (kg) 및 중도탈락 (동물수)

표 6: 1일 체중 증가 (g)

표 7: 사료 전환비 (FCR; kg/kg)

3개의 프로바이오틱 균주의 혼합물이 공급된 동물들은 2주 후에 이미 경향적으로(tendentially) 개선된 수치를 나타내었다. 추가의 시험 과정 동안, 최초 2주의 경향이 여전히 관찰될 수 있었다. 모든 시험 그룹은 대조 그룹 보다 높았는데, 2개의 균주가 투여된 그룹이 거의 0.5 kg 높은 최종 체중에 도달하였고 3개의 프로바이오틱 미생물이 투여된 그룹의 경우에는 대조표준과 비교하여 +1.5 kg의 차이가 있었다. 또한, 엔테로코쿠스 패시움이 투여된 그룹은 대조 그룹 보다 약간 높았다.

1일 체중 증가과 관련하여, 유사한 점이 관찰될 수 있었는데, 2개 균주 혼합물이 첨가되면 성장률이 473에서 478g으로 증가할 수 있었고, 3개 균주를 사용하는 그룹에서는 501 g까지 증가할 수 있었다. 특히, 최종 시험 단계 (43일째 - 56일째)에서, 3개 균주를 사용하는 그룹은, 1개 균주를 사용하는 그룹과 비교한 경우 1일 체중 증가의 현저한 증대 (+104 g)를 나타내었고, 대조 그룹 및 2개 균주를 사용하는 그룹과 비교한 경우 성장률 증대는 82 g 및 85 g 이었다. 시험에서 유일한 2마리의 중도탈락 동물은 대조 그룹에서 기록되었다. 사료 전환비에 관해서는, 모든 시험 그룹이 대조 그룹에 비해 개선되었음이 관찰될 수 있었다.

모든 시험 그룹의 동물들의 대변 배설물을 브라키스피라 하이오디센테리애와 대장균에 대해 분석하였다. 프로바이오틱 첨가제가 공급된 그룹에서 브라키스피라의 농도는 대조 그룹에 비해 현저히 감소하였고, 3개의 프로바이오틱 균주의 혼합물이 공급된 그룹 (시험 그룹 C)의 경우 브라키스피라의 농도는 검출 한계치 미만임을 알 수 있었다.

DSMZ

000021287

20080314

DSMZ

000021288

20080314

DSMZ

000019765

20071005

DSMZ

000021286

20080314

DSMZ

000021285

20080314

DSMZ

000019764

20071005

DSMZ

000003530

19851001

DSMZ

000016211

20040206

DSMZ

000016284

20040310

Claims

동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애(Brachyspira hyodysenteriae) 균주를 경쟁적으로 억제하기 위해 하나 이상의 미생물을 함유하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제로서, 상기 하나 이상의 미생물이 비피도박테리움 써모필리움(Bifidobacterium thermophilium) DSMZ 19765, 락토바실루스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) DSMZ 21286, 락토바실루스 소브리우스(Lactobacillus sobrius) DSMZ 21285로 구성된 군으로부터 선택되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항에 있어서, 둘 이상의 미생물이 사용되고, 추가로 사용되는 미생물 중 하나 이상이 엔테로코쿠스 패시움(Enterococcus faecium), 락토바실루스 루테리(Lactobacillus reuteri) 또는 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 구성된 군으로부터 선택되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 추가로 사용되는 미생물이 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 3530, DSMZ 19764 또는 DSMZ 16211, 락토바실루스 루테리 DSMZ 21288 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DSMZ 21287로 구성된 군으로부터 선택되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 3항에 있어서, 에리트로마이신 또는 테트라사이클린에 대해 전염성(contagious) 항생제 내성이 없는 미생물만이 사용되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 담체로서 사용될 수 있고 올리고사카라이드, 인슐린, 락티톨, 락토수크로오스, 락툴로오스, 피로덱스트린, 효모 및 효모 유도체, 비타민, 특히 비타민 E로부터 선택되는, 영양 물질 및/또는 프리바이오틱(prebiotic) 물질이 추가로 함유되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 제올라이트, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 트레할로오스, 키토산, 알루미늄 실리케이트, 특히 과립형 벤토나이트, 전분, 탈지 우유 분말, 유청(sweet-whey) 분말, 말토덱스트린, 락토오스, 인슐린, 덱스트로오스, 식물성 오일, 또는 물 또는 생리적 식염수 용액으로부터 선택되는 용매로부터 선택되는 추가의 담체가 함유되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물이 현탁된 형태, 분말 형태 또는 캡슐화된 형태로 함유되는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사료 첨가제가 1% 내지 99%, 특히 50% 내지 95%의 담체 또는 천연 물질을 추가로 함유하는, 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제를 함유하는 사료로서, 이러한 사료가 사료 kg 당 0.01 g 내지 10 g, 특히 사료 kg 당 0.025 g 내지 2.5 g의 양의 상기 사료 첨가제를 수성 현탁액으로서 함유하는, 사료.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제를 함유하는 사료로서, 이러한 사료가 사료 t 당 20 g 내지 20 kg, 특히 사료 t 당 100 g 내지 2.5 kg의 양의 상기 사료 첨가제를 함유하는, 사료.
동물의 소화관에서 병원균인 브라키스피라 하이오디센테리애 균주를 경쟁적으로 억제하는 프로바이오틱 사료 및/또는 음용수 첨가제로서의, 비피도박테리움 써모필리움, 락토바실루스 살리바리우스 및 락토바실루스 소브리우스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 미생물의 용도.
제 11항에 있어서, 비피도박테리움 써모필리움 DSMZ 19765, 락토바실루스 살리바리우스 DSMZ 21286, 락토바실루스 소브리우스 DSMZ 21285로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 미생물이 사용되는, 용도.
제 11항 또는 제 12항에 있어서, 둘 이상의 미생물이 사용되고, 추가로 사용되는 미생물 중 하나 이상이 엔테로코쿠스 패시움, 락토바실루스 루테리 또는 바실루스 서브틸리스로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도.
제 11항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 사용되는 미생물이 엔테로코쿠스 패시움 DSMZ 3530, DSMZ 19764 또는 DSMZ 16211, 락토바실루스 루테리 DSMZ 21288 또는 바실러스 서브틸리스 DSMZ 21287로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도.