CN101120097B - 残粒样脂蛋白（rlp）中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂盒 - Google Patents

残粒样脂蛋白（rlp）中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种不需要试样的分离操作、可以简便且灵敏度良好地定量测定残粒样脂蛋白中的胆固醇的定量方法、试剂以及试剂盒。试样中的残粒样脂蛋白胆固醇的定量方法的特征在于，在含有试样的水性介质中，在特定的表面活性剂的组合以及水解磷脂质的酶的存在下，使试样中的残粒样脂蛋白胆固醇与胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶(氧化型辅酶共存)反应，然后定量测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶。

Description

残粒样脂蛋白(RLP)中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂盒
技术领域
本发明涉及在临床检查中被认为是动脉硬化症等的危险因子的残粒样脂蛋白(以下简称为RLP)中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂盒。
背景技术
血液中含有各种脂蛋白。根据比重不同，这些脂蛋白分类为乳糜微粒(以下简称为CM)、极低密度脂蛋白(以下简称为VLDL)、低密度脂蛋白(以下简称为LDL)、高密度脂蛋白(以下简称为HDL)。各种脂蛋白其胆固醇、甘油三酯、磷脂、蛋白质等构成成分的比例不同，在生物体内具有不同的作用。
在临床检查中，HDL中的胆固醇作为动脉硬化症的危险因素被认为是负因素，LDL中的胆固醇作为动脉硬化症的危险因素被认为是正因素，二者在临床检查领域中均被频繁地测定。
另外，与LDL中的胆固醇相比，起因于脂质代谢等而生成的脂蛋白质中的胆固醇作为动脉硬化症的危险因素是更为密切相关的指标。作为起因于脂质代谢等而生成的脂蛋白质，可列举出例如RLP。
最近，开发了利用免疫吸附法测定RLP中的胆固醇(以下简称为RLP-C)的定量法。在本定量法中，应用免疫亲合色谱从血清中分离RLP并定量测定在该分离出的RLP中所含有的胆固醇，所述免疫综合色谱使用含有抗apoA-I单克隆抗体和不识别apoB-48的特异抗apoB-100单克隆抗体的亲合性凝胶。适用于本定量法的RLP中的胆固醇定量用试剂，可从(株)日本抗体研究所购买(产品名：RLP-胆固醇“J IMRO”II)(参照非专利文献1、非专利文献2)。对于采用该免疫吸附法的RLP-C的定量法，由厚生劳动省赋予健康保险分数。
但是，因为该方法是应用一种使用了抗体的亲合色谱方法，所以必须进行试样的分离操作等，操作繁杂，花费时间。
另外，已知一种不需要试样的分离操作、可以简便且灵敏度良好地测定RLP-C的方法(参照专利文献1)。
专利文献1：特开2001-231597号公报
非专利文献1：动脉硬化、25(9，10)、371(1998)
非专利文献2：Clinical Chemistry、48(2)、217(2002)
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于提供一种不需要试样的分离操作、可以简便且灵敏度良好地定量测定RLP-C的定量方法、试剂以及试剂盒。
用于解决课题的手段
本发明人发现，在特定的表面活性剂的组合以及水解磷脂质的酶的存在下，胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对残粒样脂蛋白胆固醇具有特异性的作用，基于这一发现，从而完成了本发明。本发明涉及下述(1)～(20)。
(1)试样中的残粒样胆固醇的定量方法，其特征在于，在含有试样的水性介质中，在(a)(i)选自聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物、聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯长支链烷基醚中的一种或二种以上的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d1)]，与选自聚氧乙烯聚氧丙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯短支链烷基醚中的一种或二种以上的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d2)]的组合，或者，(ii)聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物[下文称为表面活性剂(d3)]，与选自聚氧乙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯短支链烷基醚中的一种或二种的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d4)]的组合，以及(b)水解磷脂质的酶的存在下，使(c)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶，或者，在(d)氧化型辅酶的存在下，使胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶，对试样中的残粒样脂蛋白胆固醇发生作用，生成过氧化氢或者还原型辅酶，然后定量测定所生成了的过氧化氢或者还原型辅酶。
(2)上述(1)中所述的方法，其中，过氧化氢的定量是通过在过氧化物酶的存在下，使生成的过氧化氢与氧化发色型色素原(chromogen)反应，然后定量所生成的色素来进行的。
(3)上述(1)中所述的方法，其中，还原型辅酶的定量是通过测定反应液的吸光度来进行的。
(4)上述(1)中所述的方法，其中，还原型辅酶的定量是通过使生成了的还原型辅酶与还原发色型色素原反应，然后定量所生成的色素来进行的。
(5)上述(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物为由通式(I)表示的表面活性剂：
RO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H    (I)
(式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数；R表示氢原子、直链或支链的烷基)。
(6)上述(1)～(5)中任一项所述的方法，其中，水解磷脂质的酶为磷脂酶D、磷脂酶C或者磷脂酶A2。
(7)试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂，其特征在于，其中含有：水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、以及表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合、或者表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合。
(8)上述(7)中所述的试剂，其中还含有过氧化氢定量用试剂。
(9)试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂，其特征在于，其中含有：水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶、以及表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合、或者表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合。
(10)上述(9)中所述的试剂，其中还含有还原型辅酶定量用试剂。
(11)上述(7)～(10)中任一项所述的试剂，其中，聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物为由通式(I)表示的表面活性剂：
RO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H　  (I)
(式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数；R表示氢原子、直链或支链的烷基)。
(12)上述(7)～(11)中任一项所述的试剂，其中，水解磷脂质的酶为磷脂酶D、磷脂酶C或者磷脂酶A2。
(13)试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂盒，其特征在于，其中含有：含有表面活性剂(d1)的第1试剂、以及含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的第2试剂；且在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有表面活性剂(d2)。
(14)试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂盒，其特征在于，其中含有：含有表面活性剂(d3)的第1试剂、以及含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的第2试剂；且在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有表面活性剂(d4)。
(15)上述(13)或(14)中所述的试剂盒，其中，在第1试剂、第2试剂的至少一个中还含有过氧化氢定量用试剂。
(16)试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂盒，其特征在于，其中含有：含有表面活性剂(d1)的第1试剂、以及含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶的第2试剂；在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有表面活性剂(d2)；且在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有氧化型辅酶。
(17)试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂盒，其特征在于，其中含有：含有表面活性剂(d3)的第1试剂、以及含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶的第2试剂；在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有表面活性剂(d4)；且在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有氧化型辅酶。
(18)上述(16)或(17)中所述的试剂盒，其中，在第1试剂、第2试剂的至少一个还含有还原型辅酶定量用试剂。
(19)上述(13)、(15)、(16)或(18)中所述的试剂盒，其中，聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物为由通式(I)表示的表面活性剂：
RO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H    (I)
(式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数；R表示氢原子、直链或支链的烷基)。
(20)上述(13)～(19)中任一项所述的试剂盒，其中，水解磷脂质的酶为磷脂酶D、磷脂酶C或者磷脂酶A2。
发明的效果
按照本发明，可以提供一种不需要试样的分离操作而可以简便且灵敏度良好地定量测定RLP-C的方法、试剂及试剂盒。
附图说明
图1表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例4的定量法的相关图。
图2表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例5的定量法的相关图。
图3表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例6的定量法的相关图。
图4表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与比较例2的定量法的相关图。
图5表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例11的定量法的相关图。
图6表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例12的定量法的相关图。
图7表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例13的定量法的相关图。
图8表示使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的定量法与实施例14的定量法的相关图。
具体实施方式
在本发明中，所谓“残粒样脂蛋白(RLP)”的术语，是指将VLDL残粒与CM残粒通称的脂蛋白。另外，所谓“残粒样脂蛋白胆固醇(RLP-C)”的术语，是指将RLP中的酯型胆固醇和游离型胆固醇通称的意思。因此，RLP-C包括VLDL残粒中的酯型胆固醇、VLDL残粒中的游离型胆固醇、CM残粒中的酯型胆固醇和CM残粒中的游离型胆固醇。
按照本发明的定量方法，可以定量分析全血、血浆、血清等试样中的RLP-C。
本发明的特征在于，在水解磷脂质的酶的存在下，作为可使用于胆固醇定量反应的酶特异地作用于RLP-C的表面活性剂是下述组合，这些组合具有优良的效果，所述组合为：由选自聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物(以下简称为POE·POB共聚物)、聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚(以下简称为POE苯乙烯化苯基醚)和聚氧乙烯聚氧丙烯长支链烷基醚(以下简称为POE·POP长支链烷基醚)中的一种或二种以上的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d1)]、与选自聚氧乙烯聚氧丙烯烷基芳基醚(以下简称为POE·POP烷基芳基醚)、聚氧乙烯烷基芳基醚(以下简称为POE烷基芳基醚)、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚(以下简称为POE·POP烷基醚)和聚氧乙烯聚氧丙烯短支链烷基醚(以下简称为POE·POP短支链烷基醚)中的一种或二种以上的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d2)]形成的组合，或者，由聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物(以下简称为POE·POP共聚物)[下文称为表面活性剂(d3)]，与选自聚氧乙烯烷基芳基醚(以下简称为POE烷基芳基醚)、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚(以下简称为POE·POP烷基醚)和聚氧乙烯聚氧丙烯短支链烷基醚(以下简称为POE·POP短支链烷基醚)中的一种或二种的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d4)]形成的组合。
即，这些表面活性剂的组合，在水解磷脂质的酶的存在下，能使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对RLP-C产生特异性作用。
根据本发明方法，试样中的RLP-C可以通过如下方法来定量：在水性介质中，在水解磷脂质的酶的存在下，在能使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对RLP-C产生特异性作用的表面活性剂的组合，即，(i)表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合、或者(ii)表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合的存在下，在(c)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶，或者在(d)氧化型辅酶的存在下，使胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶，对试样中的RLP-C发生作用，生成过氧化氢或还原型辅酶，然后定量生成的过氧化氢或还原型辅酶。
通过在氧的存在下，使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶作用于试样中的RLP-C，使得试样中的RLP中的酯型胆固醇由于胆固醇酯水解酶的作用而转变成游离型胆固醇，由该转变而生成的游离型胆固醇和RLP中的游离型胆固醇与氧，通过胆固醇氧化酶的作用，生成过氧化氢。
另外，通过在氧化型辅酶的存在下，使胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶作用于试样中的RLP-C，使得试样中的RLP中的酯型胆固醇由于胆固醇酯水解酶的作用而转变成游离型胆固醇，由该转变而生成的游离型胆固醇和RLP中的游离型胆固醇与氧化型辅酶，通过胆固醇脱氢酶的作用，生成还原型辅酶。
酶反应是在缓冲液等水溶液中进行的，所述缓冲液含有：表面活性剂(d1)和表面活性剂(d2)的组合、或者表面活性剂(d3)和表面活性剂(d4)的组合，以及在水解磷脂质的酶的存在下，用于胆固醇定量所必须的胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶(在使用胆固醇脱氢酶时，氧化型辅酶是必需的)。
在表面活性剂(d1)和表面活性剂(d2)的组合、以及表面活性剂(d3)和表面活性剂(d4)的组合中，作为表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)、表面活性剂(d3)、表面活性剂(d4)，可以使用构成表面活性剂(d1)～(d4)的表面活性剂中的一种或二种以上。
作为表面活性剂(d1)和表面活性剂(d2)的组合，可列举出表1～表7中所示的组合。
表1
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚
POE·POB共聚物 POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
表2
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
表3
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
表4
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚    
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚    
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚    
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE苯乙烯化苯基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
表5
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
表6
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚    
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚    
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚    
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
表7
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物、POE苯乙烯化苯基醚POE·POP长支链烷基醚 POE·POP烷基芳基醚POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
在表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合中，优选在水解磷脂质的酶的存在下促使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对残粒样脂蛋白胆固醇产生特异性作用的作用强的组合。
具体地说，优选表1中记载的POE·POB共聚物与表面活性剂(d2)的组合。
在POE·POB共聚物与表面活性剂(d2)的组合中，更优选表8中所示的以下组合。
表8
 
表面活性剂(d1) 表面活性剂(d2)
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POB共聚物 POE·POP烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
作为表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合，可列举出下述表9中所示的组合。
表9
 
表面活性剂(d3) 表面活性剂(d4)
POE·POP共聚物 POE烷基芳基醚
POE·POP共聚物 POE·POP烷基醚
POE·POP共聚物 POE·POP短支链烷基醚
POE·POP共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POP共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP共聚物 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
在表面活性剂(d3)和表面活性剂(d4)的组合中，优选在水解磷脂质的酶的存在下促使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对RLP-C产生特异性作用的作用强的组合。
具体地说，优选表10中所示的以下组合。
表10
 
表面活性剂(d3) 表面活性剂(d4)
POE·POP共聚物 POE·POP烷基醚
POE·POP共聚物 POE·POP短支链烷基醚
POE·POP共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP烷基醚
POE·POP共聚物 POE烷基芳基醚POE·POP短支链烷基醚
POE·POP共聚物 POE·POP烷基醚POE·POP短支链烷基醚
根据反应生成的过氧化氢或还原型辅酶的定量，按照其本身公知的方法来进行。
在酶反应的反应液中，根据需要，也可以在环糊精或其衍生物、白蛋白或脂蛋白凝聚剂的存在下进行。由于环糊精或其衍生物、白蛋白或脂蛋白凝聚剂可以抑制酶对残粒样脂蛋白以外的脂蛋白胆固醇所产生的作用，因此是优选的。
另外，根据需要，在不影响RLP-C定量反应的特异性的范围内，在酶反应的反应液中也可以共存下列物质：为了使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶活化而经常使用的酶活化剂、稳定剂、防腐剂、抗干扰剂，以及用于使生物试样中的球蛋白等蛋白质增溶的各种盐类。
胆固醇酯水解反应、游离胆固醇的氧化或脱氢反应，可以在水解磷脂质的酶、以及表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合、或者表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合的存在下依次进行。另外，也可以预先使试样与表面活性剂在水溶液中接触，然后向该溶液中添加水解磷脂质的酶以及参与胆固醇反应的酶，以进行胆固醇的反应。胆固醇的反应也可以在含有RLP-C定量所必需的全部成分的水溶液中进行，但也可以通过将RLP-C的定量所必需的成分分成2～3组，将分组的成分依次添加到反应液中来进行。RLP-C的定量优选使用下述的RLP-C定量用试剂盒来进行。
在水性介质中，胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶和胆固醇脱氢酶，通常按0.001～400U/mL、优选按0.01～200U/mL、更优选按0.05～100U/mL的浓度来使用。
水性介质中，水解磷脂质的酶的浓度没有特殊限制，优选为0.001～400U/mL，更优选为0.01～200U/mL，特别优选为0.05～100U/mL。
水性介质中，表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)、表面活性剂(d3)和表面活性剂(d4)的浓度，分别优选为0.001～5(w/v)％，更优选为0.005～2.5(w/v)％，特别优选为0.05～1(w/v)％。
酶反应通常在10～50℃、优选在20～40℃的温度下进行，通常在2～30分钟内结束。
生成的过氧化氢例如通过下列方法进行定量：在过氧化物酶的存在下，过氧化氢与可通过氧化而转换成色素的色素原反应生成色素，在生成的色素的吸收最大波长处测定反应液的吸光度的变化，由此进行定量。另外，用例如化学发光物质，例如鲁米诺、异鲁米诺、光泽精、吖啶鎓酯等与过氧化氢反应生成光子，通过定量生成的光子来定量生成的过氧化氢。
还原型辅酶例如可以通过在300～500nm、优选330～400nm、更优选340nm左右处通过测定由酶反应生成的含还原型辅酶的溶液的吸光度来定量。另外，生成的还原型辅酶可以通过例如在心肌黄酶或电子载体的存在下，使还原型辅酶与可通过还原而转换成色素的色素原反应生成色素，并在例如生成的色素的吸收最大波长处测定反应液的吸光度的变化，由此来定量。电子载体的例子为1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸甲酯。
使用例如预先已知浓度的含有RLP-C的试样，制成表示胆固醇浓度与过氧化氢或还原型辅酶的量之间的关系的校准曲线，就可以据此求出试样中的RLP-C的浓度。
作为胆固醇酯水解酶，可以使用那些能够水解胆固醇酯的酶，例如胆固醇酯酶、脂蛋白脂肪酶等，来自动物、植物或微生物或利用遗传工程的方法制备的酶、化学修饰过的酶等。作为化学修饰过的酶，包括那些被如下化学修饰基团例如以聚乙二醇或聚丙二醇为主要成分的基团、具有聚丙二醇和聚乙二醇的共聚物的基团、含有水溶性多糖类的基团、磺丙基、磺丁基、聚氨酯基、具有螯合功能的基团等修饰过的酶。特别优选是以聚乙二醇为主要成分的基团修饰过的酶。作为水溶性多糖类，包括例如葡聚糖、普鲁兰多糖、可溶性淀粉等。
用于化学修饰的试剂(化学修饰剂)，包括同时具有上述化学修饰基团和可以与酶中的氨基、羧基、巯基等反应的官能团或结构的化合物等。可以与酶中的氨基反应的官能团或结构的例子，包括例如羧基、活性酯基(N-羟基琥珀酰亚胺基等)、酸酐、酰基氯、醛、环氧基、1，3-丙烷磺内酯、1，4-丁烷磺内酯等。可以与酶中的羧基反应的官能团或结构的例子，包括例如氨基。与酶中的巯基具有反应性的基团或结构的例子，包括例如马来酰亚胺基、二硫化物、α-卤代酯(α-碘代酯等)等。
化学修饰剂的例子有：含有以聚乙二醇作为主要成分的基团和N-羟基琥珀酰亚胺基的Sunbright VFM-4101、Sunbright MEAC-50HS、Sunbright MEC-50HS(均为日本油脂公司制)、含有以聚亚烷基二醇作为主要成分的基团和酸酐结构的Sunbright AKM系列(例如Sunbright AKM-1510等)、Sunbright ADM系列、Sunbright ACM系列(均为日本油脂公司制)、含有以聚乙二醇作为主要成分的基团和环氧基的EPOX-3400、M-EPOX-5000(均为Sheawater Polymers公司制)、含有具有螯合功能的基团和酸酐结构的二亚乙基三胺-N，N，N’，N”，N”-五乙酸酐(DTPA酸酐；同仁化学研究所公司制)、聚氨酯修饰用的活化聚氨酯P4000(Boehringer Mannheim公司制)、葡聚糖修饰用的葡聚糖T40、活化TCT(Boehringer Mannheim公司制)等。
酶的化学修饰可以用例如以下方法来进行。
首先，将胆固醇酯水解酶溶解于pH8.0以上的缓冲液例如HEPES缓冲液中，在0～55℃下添加0.01～500倍摩尔量的化学修饰剂，然后搅拌5分钟～5小时。在实际的酶反应中，作为化学修饰过的胆固醇酯水解酶，不仅可使用该反应液本身，还可以根据需要，使用通过超滤膜等除去未反应的化学修饰剂等而获得的产品。
胆固醇氧化酶可以使用来自动物、植物或微生物的酶、按遗传工程方法制备的酶、化学修饰过的酶等。
化学修饰酶可以利用上述化学修饰方法来制备。
作为胆固醇脱氢酶，只要是在氧化型辅酶的存在下具有能够氧化胆固醇、生成还原型辅酶的能力的酶即可，可以使用来自动物、植物或微生物的酶、利用遗传工程的方法制备的酶、化学修饰过的酶。化学修饰过的酶，例如可以使用上述化学修饰剂通过上述化学修饰方法来制备。
作为水解磷脂质的酶，只要是具有分解磷脂质的能力的酶，就没有特殊限制。可列举出例如能够分解来自动物、植物和微生物的磷脂质的酶。作为具体的可以分解磷脂质的酶，可列举出例如磷脂酶D、磷脂酶C、磷脂酶A2、溶血磷脂酶等。
在本发明使用胆固醇脱氢酶的定量法中使用的氧化型辅酶的例子，可列举出NAD、NADP、硫代-NAD、硫代-NADP。
当将本发明中使用的表面活性剂(d1)与本发明中使用的表面活性剂(d2)组合起来使用时，在水解磷脂质的酶的存在下，具有能使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对RLP-C产生特异性作用的功能。在分别单独地使用表面活性剂(d1)和表面活性剂(d2)时，不一定要具有很高的使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶特异性地作用于RLP-C的功能。
当将本发明中使用的表面活性剂(d3)与本发明中使用的表面活性剂(d4)组合起来使用时，在水解磷脂质的酶的存在下，具有能使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对RLP-C产生特异性作用的功能。在分别单独地使用表面活性剂(d3)和表面活性剂(d4)时，不一定要具有很高的使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶特异性作用于RLP-C的功能。
POE·POB共聚物包括聚氧乙烯与聚氧丁烯的无规聚合物、嵌段聚合物，可列举出例如由通式(I)表示的化合物[下文称为化合物(I)]等。
RO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H    (I)
(式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数；R表示氢原子、直链或支链的烷基)
通式(I)中，R优选为氢原子。
化合物(I)中的直链或支链的烷基，包括碳原子数1～30的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、庚基、异庚基、辛基、异辛基、壬基、异壬基、癸基、异癸基、十一烷基、异十一烷基、十二烷基、异十二烷基、十三烷基、异十三烷基、十四烷基、异十四烷基、十五烷基、异十五烷基、十六烷基、异十六烷基、十七烷基、异十七烷基、十八烷基、异十八烷基、十九烷基、异十九烷基、二十烷基、异二十烷基、二十一烷基、异二十一烷基、二十二烷基(山萮基)、异二十二烷基、二十三烷基、异二十三烷基、二十四烷基、异二十四烷基、二十五烷基、异二十五烷基、二十六烷基、异二十六烷基、二十七烷基、异二十七烷基、二十八烷基、异二十八烷基、二十九烷基、异二十九烷基、三十烷基、异三十烷基等。
作为聚氧丁烯部分的分子量，优选在700以上，更优选在1000以上，特别优选在1500以上。
化合物(I)的具体例，包括Pronon B-204、Pronon B-208(以上为日本油脂公司制)。
POE苯乙烯化苯基醚的例子，包括BLAUNON DSP-9、BLAUNONDSP-12.5、BLAUNON DSP-20、BLAUNON DSP-10、BLAUNON TSP-5、BLAUNON TSP-7.5、BLAUNON TSP-16、BLAUNON TSP-20、BLAUNON TSP-50(以上为青木油脂公司制)等，市场上有售。
作为POE·POP长支链烷基醚中的长支链烷基，可列举出例如碳原子数20～30的支链烷基，例如异二十烷基、辛基十二烷基、异二十一烷基、异二十二烷基、异二十三烷基、异二十四烷基、癸基十四烷基、异二十五烷基、异二十六烷基、十二烷基十四烷基、异二十七烷基、异二十八烷基、异二十九烷基、异三十烷基等。作为POE·POP长支链烷基醚的具体例，包括UNILUB MT-0620B(日本油脂公司制)等，市场上有售。
作为POE·POP烷基芳基醚和POE烷基芳基醚中的烷基，可列举出例如碳原子数为8以上的烷基，例如辛基、壬基等，作为芳基，可列举出例如苯基、萘基等。作为芳基，优选苯基。
作为POE·POP烷基醚中的烷基，可列举出碳原子数为6～30的烷基，例如己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鲸蜡基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山萮基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等。
作为POE·POP短支链烷基醚中的短支链烷基，可列举出碳原子数为6～19的支链烷基，例如异己基、异庚基、异辛基、异壬基、异癸基、异十一烷基、异十二烷基、异十三烷基、异十四烷基、异十五烷基、异十六烷基、异十七烷基、异十八烷基、异十九烷基等。
作为POE·POP烷基芳基醚，可列举出例如聚氧乙烯聚氧丙烯烷基苯基醚等。作为具体例，包括Emulgen L-40(花王公司制)、AcronecesKP-189R(日本油脂公司制)等，市场上有售。
作为POE烷基芳基醚，可列举出例如聚氧乙烯烷基苯基醚等。作为具体例，包括Emulgen911、Emulgen810(以上为花王公司制)、Nonion HS-210、Nonion HS-215、Nonion NS-208.5、Nonion HS-208(以上为日本油脂公司制)等，市场上有售。
作为POE·POP烷基醚和POE·POP支链烷基醚，优选亲水性-亲油性平衡(HLB)为9～20的POE·POP烷基醚和POE·POP支链烷基醚。作为POE·POP烷基醚的具体例，包括Wondersurf RL-100、WondersurfS-1000(以上为青木油脂公司制)等，市场上有售。作为POE·POP短支链烷基醚的具体例，包括Wondersurf ID-70、Wondersurf ID-90(以上为青木油脂公司制)等，市场上有售。
作为POE·POP共聚物，包括聚氧乙烯与聚氧丙烯的无规聚合物、嵌段聚合物，可列举出例如由通式(II)表示的化合物等。
RO-(C2H4O)A-(C3H6O)B-(C2H4O)C-H     (II)
(式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数；R表示氢原子、直链或支链的烷基)。
通式(II)中，R优选为氢原子。
化合物(II)中的直链或支链的烷基，可列举出与上述化合物(I)中的直链或支链的烷基相同的烷基。
作为本化合物中的聚氧丙烯部分的分子量，优选为2050以上，更优选为2750以上，特别优选为3250以上。
作为具体例，包括PluronicF-108、PluronicL-121、PluronicL-122、PluronicL-101、PluronicL-103(以上为旭电化工业公司制)、Pronon102、Pronon104、Pronon201、Pronon204、Pronon208、Pronon202B(以上为日本油脂公司制)等，市场上有售。
水性介质包括例如去离子水、蒸馏水、缓冲液等，优选缓冲液。作为缓冲液中使用的缓冲剂的例子，可列举出三(羟甲基)氨基甲烷缓冲剂、磷酸缓冲剂、硼酸缓冲剂、Good氏缓冲剂等。
作为Good氏缓冲剂，包括例如2-吗啉代乙磺酸(MES)、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺)亚氨基二乙酸(ADA)、哌嗪-N，N’-二(2-乙磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙磺酸(ACES)、3-吗啉代-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、N，N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、3-吗啉代丙磺酸(MOPS)、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸(TES)、2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)、3-[N，N-二(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸(DIPSO)、N-[三(羟甲基)甲基]-2-羟基-3-氨基丙磺酸(TAPSO)、哌嗪-N，N’-二(2-羟基丙磺酸)(POPSO)、3-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-2-羟基丙磺酸(HEPPSO)、3-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]丙磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N，N-二(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、N-环己基-2-氨基乙磺酸(CHES)、N-环己基-3-氨基-2-羟基丙磺酸(CAPSO)、N-环己基-3-氨基丙磺酸(CAPS)。
缓冲液所使用的pH值通常为4～10，优选为5～9，所使用的浓度通常为0.001～0.5mol/L，优选为0.005～0.2mol/L，更优选为0.01～0.1mol/L。
作为过氧化氢定量中使用的色素原，可以使用那些例如在过氧化物酶的存在下可以被过氧化氢氧化而转变成色素的色素原。其例子包括无色型(leuco-type)色素原、氧化偶合型(oxidativecoupling-type)色素原。无色型色素原是一种可以在过氧化氢和过氧化物酶等的过氧化活性物质的存在下，单独转变成色素的物质。
无色型色素原的例子有：10-N-羧甲基氨基甲酰基-3，7-双(二甲氨基)-10H-吩噻嗪(CCAP)、10-(N-甲基氨基甲酰基)-3，7-双(二甲氨基)-10H-吩噻嗪(MCDP)、N-(羧甲基氨基羰基)-4，4’-双(二甲氨基)二苯基胺钠盐(DA-64)、4，4’-双(二甲氨基)二苯基胺、双[3-双(4-氯苯基)甲基-4-二甲氨基苯基]胺(BCMA)。
氧化偶合型色素原是一种可以在过氧化氢和过氧化物酶等过氧化活性物质的存在下，通过2个化合物被氧化而发生偶合，从而转变成色素的色素原。2个化合物的组合的例子包括偶合剂与苯胺类的组合、偶合剂与苯酚类的组合。
偶合剂的例子为：4-氨基安替比林(4-AA)、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮肼。苯胺类的例子包括N-(3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3，5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N，N-二甲基-3-甲基苯胺、N，N-二(3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-琥珀酰乙二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-乙酰基乙二胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-4-氟-3，5-二甲氧基苯胺(F-DAOS)。苯酚类的例子包括苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羟基-2，4，6-三碘苯甲酸(HTIB)。
过氧化物酶通常按1～100kU/L的浓度使用。色素原通常按0.01～10g/L的浓度使用。
作为还原型辅酶的定量中使用的色素原，使用那些例如可以在心肌黄酶或者电子载体的存在下被还原型辅酶还原而转变成色素的色素原。其例子包括3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物(MTT)、2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓一钠盐(WST-1)、2-(4-碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯基)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓一钠盐(WST-3)。
心肌黄酶和电子载体，通常按1～100kU/L的浓度来使用。色素原通常按0.01～10g/L的浓度来使用。
环糊精或其衍生物的例子为环糊精、二甲基环糊精、三甲基环糊精、羟乙基环糊精、羟丙基环糊精、羧甲基环糊精、糖基环糊精、麦芽糖基环糊精、环糊精硫酸酯、环糊精聚合物，优选羟乙基环糊精和羟丙基环糊精。
环糊精的例子为α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精。
二甲基环糊精的例子为二甲基-α-环糊精、二甲基-β-环糊精、二甲基-γ-环糊精。
三甲基环糊精的例子为三甲基-α-环糊精、三甲基-β-环糊精、三甲基-γ-环糊精。
羟乙基环糊精的例子为羟乙基-α-环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟乙基-γ-环糊精。
羟丙基环糊精的例子为羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精。
羧甲基环糊精的例子为羧甲基-α-环糊精、羧甲基-β-环糊精、羧甲基-γ-环糊精。
糖基环糊精的例子为糖基-α-环糊精、糖基-β-环糊精、糖基-γ-环糊精。
麦芽糖基环糊精的例子为麦芽糖基-α-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精、麦芽糖基-γ-环糊精。
环糊精硫酸酯的例子为α-环糊精硫酸酯、β-环糊精硫酸酯、γ-环糊精硫酸酯。
环糊精聚合物的例子为β-环糊精聚合物。也可以将2种以上的环糊精或其衍生物组合使用。
在水性介质中，环糊精或其衍生物的浓度优选为0.001～5(w/v)％，更优选为0.005～2.5(w/v)％，特别优选为0.01～1(w/v)％。
白蛋白的例子包括来自牛、马、羊、人的白蛋白，优选牛血清白蛋白(BSA)。也可以使用通过遗传工程方法制备的白蛋白。也可以将2种以上的白蛋白组合使用。在水性介质中，白蛋白的浓度优选为0.001～5(w/v)％，更优选为0.005～2.5(w/v)％，特别优选为0.01～1(w/v)％。
作为脂蛋白凝聚剂，可列举出磷钨酸盐、葡聚糖硫酸盐、肝素等聚阴离子；镁、钙、钴等2价金属盐。在水性介质中，脂蛋白凝聚剂的浓度各自独立地优选为0.001～5(w/v)％，更优选为0.005～2.5(w/v)％，特别优选为0.01～1(w/v)％。
酶活化剂的例子包括胆汁酸类、烷基磺酸盐等阴离子型表面活性剂。胆汁酸类的例子包括胆酸、脱氧胆酸、牛磺胆酸、鹅脱氧胆酸。烷基磺酸盐的例子包括1-戊磺酸盐、1-己磺酸盐、1-庚磺酸盐、1-辛磺酸盐。烷基磺酸盐中的盐的例子包括铵盐、锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐。
稳定剂的例子包括乙二胺四乙酸(EDTA)、蔗糖、氯化钙。
防腐剂的例子包括叠氮化钠、抗生素。
抗干扰剂的例子包括，用于抑制抗坏血酸影响的抗坏血酸氧化酶、用于抑制胆红素影响的亚铁氰化钾。
盐类的例子包括氯化锂、硫酸锂、氯化钠、硫酸钠、氯化钾、硫酸钾、氯化镁、硫酸镁、乙酸镁、氯化铵、硫酸镁、硝酸镁、硝酸钙。
作为本发明的RLP-C的定量方法，可以示例以下的具体方式。
定量方法1
(1)在水性介质中，在试样、水解磷脂质的酶、表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)、胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的存在下，进行酶反应；
(2)测定生成的过氧化氢；
(3)从(2)中测得的值和预先制成的校准曲线，判定试样中的RLP-C浓度的方法。
定量方法2
(1)在水性介质中，在试样、水解磷脂质的酶、表面活性剂(d3)、表面活性剂(d4)、胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的存在下，进行酶反应；
(2)测定生成的过氧化氢；
(3)从(2)中测得的值和预先制成的校准曲线，判定试样中的RLP-C浓度的方法。
定量方法3
(1)在水性介质中，在试样、水解磷脂质的酶、表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的存在下，进行酶反应；
(2)测定生成的还原型辅酶；
(3)从(2)中测得的值和预先制成的校准曲线，判定试样中的RLP-C浓度的方法。
定量方法4
(1)在水性介质中，在试样、水解磷脂质的酶、表面活性剂(d3)、表面活性剂(d4)、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的存在下，进行酶反应；
(2)测定生成的还原型辅酶；
(3)从(2)中测得的值和预先制成的校准曲线，判定试样中的RLP-C浓度的方法。
(RLP-C定量用试剂)
本发明的RLP-C定量用试剂，含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、以及表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合或者表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合。该试剂可以含有过氧化氢定量用试剂。作为过氧化氢定量用试剂的例子，可列举出含有过氧化物酶以及上述的可以在过氧化物酶的存在下被过氧化氢氧化而转变成色素的色素原的试剂。
另外，本发明的其他RLP-C定量用试剂，含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶、以及表面活性剂(d1)与表面活性剂(d2)的组合或者表面活性剂(d3)与表面活性剂(d4)的组合。该试剂可以含有还原型辅酶定量用试剂。作为还原型辅酶定量用试剂的例子，可列举出含有心肌黄酶或电子载体以及上述的可以在心肌黄酶或电子载体的存在下被还原型辅酶还原而转变成色素的色素原的试剂。
作为本发明的RLP-C定量用试剂，可列举出以下的具体方式。
试剂1
含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂2
含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、表面活性剂(d3)、表面活性剂(d4)以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂3
含有胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶、表面活性剂(d1)以及表面活性剂(d2)的试剂。
试剂4
含有胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶、表面活性剂(d3)以及表面活性剂(d4)的试剂。
试剂5
含有胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶、表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂6
含有胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶、表面活性剂(d3)、表面活性剂(d4)以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
(RLP-C定量用试剂盒)
本发明的RLP-C定量用试剂，优选以试剂盒的形式保存、流通和使用。试剂盒的形式使用两种试剂和三种试剂，但优选两种试剂的试剂盒。
在具有第1试剂和第2试剂的双试剂系列的试剂盒中，胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶可以被含有在各自不同的试剂中，但优选是被含有在同一种试剂中的试剂盒，特别优选是被含有在第2试剂中的试剂盒。水解磷脂质的酶可以被含有在第1试剂、第2试剂的任一方中或者被含有在双方中，但优选是被含有在第2试剂中。
表面活性剂(d1)和表面活性剂(d2)可以被含有在第1试剂、第2试剂的任一方或者双方中，但优选是表面活性剂(d1)被含有在第1试剂中。表面活性剂(d3)和表面活性剂(d4)可以被含有在第1试剂、第2试剂的任一方或者双方中，但优选是表面活性剂(d3)被含有在第1试剂中。
氧化型辅酶可以被含有在第1试剂、第2试剂的至少一个中。过氧化氢定量用试剂可以被含有在第1试剂、第2试剂的至少一个中，但当该试剂含有氧化偶合型色素原时，氧化偶合型色素原的各化合物优选被含有在各自不同的试剂中。还原型辅酶定量用试剂被含有在第1试剂、第2试剂的至少一个中。
作为本发明的RLP-C定量用试剂盒，可列举出以下的具体方式。
试剂盒1
第1试剂
含有表面活性剂(d1)以及过氧化氢定量用试剂的一部分的试剂。
第2试剂
含有表面活性剂(d2)、水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢定量用试剂的其余部分的试剂。
试剂盒2
第1试剂
含有表面活性剂(d3)以及过氧化氢定量用试剂的一部分的试剂。
第2试剂
含有表面活性剂(d4)、水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢定量用试剂的其余部分的试剂。
试剂盒3
第1试剂
含有表面活性剂(d1)的试剂。
第2试剂
含有表面活性剂(d2)、水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶的试剂。
试剂盒4
第1试剂
含有表面活性剂(d3)的试剂。
第2试剂
含有表面活性剂(d4)、水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶的试剂。
试剂盒5
第1试剂
含有表面活性剂(d1)的试剂。
第2试剂
含有表面活性剂(d2)、水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶以及还原型辅酶定量用试剂的试剂。
试剂盒6
第1试剂
含有表面活性剂(d3)的试剂。
第2试剂
含有表面活性剂(d4)、水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶以及还原型辅酶定量用试剂的试剂。
本发明的RLP-C定量用试剂和试剂盒，可以用于试样中的RLP-C的定量。
在本发明的RLP-C定量用试剂和试剂盒中的各种成分，可以使用在上述RLP-C定量方法中记载的水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶、表面活性剂(d1)、表面活性剂(d2)、表面活性剂(d3)、表面活性剂(d4)、过氧化氢定量用试剂以及还原型辅酶定量用试剂。
本发明的RLP-C定量用试剂和试剂盒中，也可以根据需要含有上述的水性介质、环糊精或其衍生物、白蛋白、脂蛋白凝聚剂、酶活化剂、稳定剂、防腐剂、抗干扰剂、以及用于使生物试样中的球蛋白等蛋白质增溶的各种盐类等。
本发明的RLP-C定量用试剂和试剂盒中的酶、2种表面活性剂，按照溶解在水性介质中的状态存在，其含量达到在RLP-C定量方法一项中所记载的浓度。
下面，用实施例更详细地说明本发明，但这些实施例并不限定本发明的范围。应予说明，在本实施例中，使用下述生产厂的试剂和仪器。
MOPS(Good氏缓冲剂；同仁化学研究所公司制)、TOOS[Trinder试剂(氧化偶合型色素原)；同仁化学研究所公司制]、4-氨基安替比林(半井化学公司制)、硫酸钠(和光纯药工业公司制)、PrononB-208{POE·POB共聚物[表面活性剂(d1)]；日本油脂公司制}、PrononB-204{POE·POB共聚物[表面活性剂(d1)]；日本油脂公司制}、WondersurfRL-100{POE·POP烷基醚[表面活性剂(d2)]；青木油脂公司制}、WondersurfID-70{POE·POP短支链烷基醚[表面活性剂(d2)]；青木油脂公司制}、WondersurfID-90{POE·POP短支链烷基醚[表面活性剂(d2)]；青木油脂公司制}、EmulgenL-40{POE·POP烷基芳基醚[表面活性剂(d2)]；花王公司制}、PluronicF-108(POE·POP共聚物；旭电化工业公司制)、磷脂酶D(旭化成公司制)、胆固醇氧化酶(CHOD；協和发酵工业公司制)、胆固醇酯水解酶(CHER；东洋纺织公司制)、过氧化物酶(POD)(东洋纺织公司制)、抗坏血酸氧化酶(AOD))(旭化成公司制)。
实施例1
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)　　　          　　　　　　　　　　　20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-208                                      8g/L
Wondersurf RL-100                                1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
WondersurfRL-100                                 1g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
实施例2
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-204                                      8g/L
WondersurfID-70                                  1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
WondersurfID-70                                  1g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5U/mL
实施例3
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-208                                      8g/L
EmulgenL-40　                                    2g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
EmulgenL-40 　                                   3g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
比较例1
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。该配方是在特开2001-231597号公报的实施例1中记载的配方。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PluronicF-108　　　                              1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
EmulgenL-40　                                    2g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               2U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
实施例4
RLP-C的定量
使用实施例1的试剂盒，对人新鲜血清64个样品，用日立7170型自动分析仪，按照以下的方法定量分析各样品中的RLP-C。
(1)校准曲线的制作
将通过使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)测定已确定RLP-C浓度为32.4mg/d1的血清标准液用作标准品，将该血清标准液适宜稀释而配制的稀释血清作为校准曲线制作用的样品。
作为测定用试剂盒，使用实施例1的试剂盒，按照以下的顺序，用日立7170型自动分析仪测定各稀释血清中的RLP-C浓度，制成校准曲线。
向反应池中添加稀释血清(3.8μL)和第1试剂(0.18mL)，在37℃下加温5分钟，在主波长600nm、副波长700nm的条件下测定反应液的吸光度(E1)(测光点：16)，接着，向该反应液中添加预先加温至37℃的第2试剂(0.06mL)，进一步在37℃下加温5分钟，在主波长600nm、副波长700nm的条件下测定反应液的吸光度(E2)(测光点：32)。根据反应中的吸光度变化(E2-E1)与稀释血清中的RLP-C浓度的关系制作校准曲线。
(2)人新鲜血清64样品中的RLP-C的定量
使用人新鲜血清64样品代替血清标准液，采用与(1)同样的方法，分别使该64样品进行反应，根据反应后反应液的吸光度和在(1)中制作的校准曲线，定量各样品中的RLP-C浓度。
实施例5
RLP-C的定量
使用实施例2的试剂盒代替实施例1的试剂盒，除此之外，与实施例4的定量法同样地进行，用日立7170型自动分析装置，对在实施例4的定量中使用的人新鲜血清64样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
实施例6
RLP-C的定量
使用实施例3的试剂盒代替实施例1的试剂盒，除此之外，与实施例4的定量法同样地进行，用日立7170型自动分析装置，对在实施例4的定量中使用的人新鲜血清64样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
比较例2
RLP-C的定量
使用比较例1的试剂盒代替实施例1的试剂盒，除此之外，与实施例4的定量法同样地进行，用日立7170型自动分析装置，对在实施例4的定量中使用的人新鲜血清64样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
试验例1
与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的测定的相关性
对于上述的人新鲜血清64样品，使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)，对各样品中的RLP-C浓度进行定量。
对于各个样品，按照相关系数对实施例4～6和比较例2的定量法与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法的相关性进行评价。其结果示于表11中。另外，相关图示于图1～图4中。
表11
 
定量法 与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法的相关性中的相关系数
实施例4 0.9513
实施例5 0.9447
实施例6 0.9319
比较例2 0.9253
如表11所示，可以看出，与比较例2(使用在特开2001-231597号公报的实施例1中记载的试剂盒进行定量)相比，本发明的方法均为与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法具有良好相关性的方法。
试验例2
III型高脂血症样品中的RLP-C的定量
使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)、实施例1～3和比较例1的试剂盒，测定了III型高脂血症患者的血清样品中的RLP-C浓度。应予说明，将通过使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)测定已确定其RLP-C浓度为32.4mg/d1的血清标准液用作标准品，将该血清标准液适宜稀释而配制的稀释血清作为校准曲线制作用的样品。其结果示于表12中。
表12
 
试剂盒 III型高脂血症样品中的RLP-C浓度(mg/dL)
实施例1 28.6
实施例2 31.4
实施例3 26.5
比较例1 20.0
J IMRO 18.8
在III型高脂血症患者的血清中，已知存在特别多的VLDL残粒。因此，从表12的结果看出，与比较例1的试剂盒(特开2001-231597号公报的实施例1中记载的试剂盒)相比，在本发明的定量法中，VLDL残粒中的胆固醇的反应性提高。另外，即便与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法相比，也可以看出，在本发明的定量法中，对RLP-C的反应性提高。
实施例7
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-208                                      8g/L
EmulgenL-40                                      1g/L
WondersurfID-70                                  1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
WondersurfID-70 　　                    　　　   1g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
实施例8
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-208                                      8g/L
EmulgenL-40                                      1g/L
WondersurfID-70                                  1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
WondersurfID-70                                  1g/L
EmulgenL-40                                      1g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
实施例9
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-208                                      8g/L
EmulgenL-40                                      1g/L
WondersurfID-90                                  1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
WondersurfID-90　　　　　　　　　　　　　　　　　1g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
实施例10
RLP-C定量用试剂盒
制作含有下面的第1试剂和第2试剂的RLP-C定量用试剂盒。
·第1试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
TOOS                                             0.3g/L
硫酸钠                                           2g/L
PrononB-208                                      8g/L
EmulgenL-40                                      1g/L
WondersurfID-90                                  1g/L
过氧化物酶(POD)                                  10U/mL
抗坏血酸氧化酶(AOD)                              2U/mL
·第2试剂
MOPS(pH6.8)                                      20mmol/L
4-氨基安替比林                                   0.5g/L
WondersurfID-90                                  1g/L
EmulgenL-40                                      1g/L
过氧化物酶                                       10U/mL
胆固醇酯水解酶(CHER)                             1U/mL
胆固醇氧化酶(CHOD)                               3U/mL
磷脂酶D                                          5U/mL
实施例11
RLP-C的定量
作为定量用试剂盒，使用实施例7的试剂盒代替实施例1的试剂盒；作为样品，使用人新鲜血清35样品代替在实施例5～8中使用的人新鲜血清64样品，除此之外，采用与实施例4的定量法同样的方法，用日立7170型自动分析装置，对该35样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
实施例12
RLP-C的定量
使用实施例8的试剂盒代替实施例7的试剂盒，除此之外，采用与实施例11的定量法同样的方法，用日立7170型自动分析装置，对人新鲜血清35样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
实施例13
RLP-C的定量
使用实施例9的试剂盒代替实施例7的试剂盒，除此之外，采用与实施例11的定量法同样的方法，用日立7170型自动分析装置，对人新鲜血清35样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
实施例14
RLP-C的定量
使用实施例10的试剂盒代替实施例7的试剂盒，除此之外，采用与实施例11的定量法同样的方法，用日立7170型自动分析装置，对人新鲜血清35样品的各样品中的RLP-C浓度进行定量。
试验例3
与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)的测定的相关性
对于在实施例11～14中使用的人新鲜血清35样品，使用RLP-胆固醇“J IMRO”II(日本抗体研究所公司制)，对各样品中的RLP-C浓度进行定量。
对于各个样品，按照相关系数对实施例11～14的定量法与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法的相关性进行评价。其结果示于表13中。另外，相关图示于图5～图8中。
表13
 
定量法 与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法的相关性中的相关系数
实施例11 0.9764
实施例12 0.9826
实施例13 0.9756
实施例14 0.9745
如表13所示，可以确认：作为表面活性剂(d2)，既使使用2种表面活性剂的试剂盒，也与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法之间具有良好的相互关系。另外，通过与表11所示的实施例4～6的比较可以确认，与使用1种表面活性剂(d2)的试剂盒相比，使用2种表面活性剂的试剂盒的定量方法显示出与使用RLP-胆固醇“J IMRO”II的定量法之间具有更好的相关性。
产业上的可利用性
根据本发明，提供了对动脉硬化性疾病的诊断有用的RLP-C的定量方法、试剂以及试剂盒。

Claims (15)

1.试样中的残粒样脂蛋白胆固醇的定量方法，其特征在于，在含有试样的水性介质中，在从下述通式(I)所示的聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物、
HO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H         (I)
上式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数，聚氧丁烯部分的分子量在700以上，
与选自聚氧乙烯聚氧丙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯壬基苯基醚的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基苯基醚、
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9～20、具有碳原子数为6～30的烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、以及
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9-20、碳原子数为6～19的支链烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯支链烷基醚
中的一种或二种以上的表面活性剂的组合，
以及水解磷脂质的酶的存在下，使试样中的残粒样脂蛋白胆固醇
(1)与胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶相作用，生成过氧化氢，定量生成的过氧化氢，或者，
(2)在氧化型辅酶的存在下，与胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶相作用，生成还原型辅酶，然后定量所生成的还原型辅酶。
2.权利要求1中所述的方法，其中，过氧化氢的定量是通过在过氧化物酶的存在下，使生成了的过氧化氢与氧化发色型色素原反应，然后定量所生成的色素来进行的。
3.权利要求1中所述的方法，其中，还原型辅酶的定量是通过测定反应液的吸光度来进行的。
4.权利要求1中所述的方法，其中，还原型辅酶的定量是通过使生成了的还原型辅酶与还原发色型色素原反应，然后定量所生成的色素来进行的。
5.权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，水解磷脂质的酶为磷脂酶D、磷脂酶C或者磷脂酶A2。
6.试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂，其特征在于，其中含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、以及从下述通式(I)所示的聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物、
HO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H         (I)
上式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数，聚氧丁烯部分的分子量在700以上，
与选自聚氧乙烯聚氧丙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯壬基苯基醚的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基苯基醚、
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9～20、具有碳原子数为6～30的烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、以及
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9-20、碳原子数为6～19的支链烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯支链烷基醚
中的一种或二种以上的表面活性剂的组合。
7.权利要求6中所述的试剂，其中还含有过氧化氢定量用试剂。
8.试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂，其特征在于，其中含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶、以及从下述通式(I)所示的聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物、
HO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H        (I)
上式中，A、B和C相同或不同，表示1～200的整数，聚氧丁烯部分的分子量在700以上，
与选自聚氧乙烯聚氧丙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯壬基苯基醚的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基苯基醚、
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9～20、具有碳原子数为6～30的烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、以及
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9-20、碳原子数为6～19的支链烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯支链烷基醚
中的一种或二种以上的表面活性剂的组合。
9.权利要求8中所述的试剂，其中还含有还原型辅酶定量用试剂。
10.权利要求6～9中任一项所述的试剂，其中，水解磷脂质的酶为磷脂酶D、磷脂酶C或者磷脂酶A2。
11.试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂盒，其特征在于，其中含有：
通式(I)HO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H      (I)
上式中，A、B和C相同或不同、表示1～200的整数，聚氧丁烯部分的分子量在700以上，
所示的聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物的第1试剂、以及含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的第2试剂；且所述试剂盒进一步在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有
选自聚氧乙烯聚氧丙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯壬基苯基醚的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基苯基醚、
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9～20、具有碳原子数为6～30的烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、以及
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9-20、碳原子数为6～19的支链烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯支链烷基醚
中的一种或二种以上的表面活性剂。
12.权利要求13中所述的试剂盒，其中，在第1试剂、第2试剂的至少一个中还含有过氧化氢定量用试剂。
13.试样中的残粒样脂蛋白胆固醇定量用试剂盒，其特征在于，其中含有：
通式(I)HO-(C2H4O)A-(C4H8O)B-(C2H4O)C-H      (I)
上式中，A、B和C相同或不同、表示1～200的整数，聚氧丁烯部分的分子量在700以上，
所示的聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物的第1试剂、以及含有水解磷脂质的酶、胆固醇酯水解酶和胆固醇脱氢酶的第2试剂；所述试剂盒进一步在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有选自
聚氧乙烯聚氧丙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯壬基苯基醚的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基苯基醚、
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9～20、具有碳原子数为6～30的烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、以及
亲水性-亲油性平衡(HLB)为9-20、碳原子数为6～19的支链烷基的聚氧乙烯聚氧丙烯支链烷基醚
中的一种或二种以上的表面活性剂；且在第1试剂和第2试剂的至少一个中含有氧化型辅酶。
14.权利要求13中所述的试剂盒，其中，在第1试剂、第2试剂的至少一个还含有还原型辅酶定量用试剂。
15.权利要求11～14中任一项所述的试剂盒，其中，水解磷脂质的酶为磷脂酶D、磷脂酶C或者磷脂酶A2。
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101065495B (zh) * 2004-11-29 2011-05-04 大塚制药株式会社 残粒样脂蛋白中胆固醇的测定方法
US20090170139A1 (en) * 2005-12-09 2009-07-02 Kyowa Medex Co., Ltd. Method, reagent and kit for measurement of cholesterol in remnant-like particles
WO2008143159A1 (ja) * 2007-05-18 2008-11-27 Kyowa Medex Co., Ltd. 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法及び測定用キット
CA2702172C (en) * 2007-10-10 2018-04-24 Denka Seiken Co., Ltd. Method and kit for quantitatively determining small, dense ldl cholesterol
EP2653551B1 (en) 2010-12-13 2018-02-07 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for measuring component to be measured
WO2012118017A1 (ja) * 2011-02-28 2012-09-07 デンカ生研株式会社 高密度リポタンパク質２中のコレステロールの定量方法およびそのための試薬キット
JP6022165B2 (ja) * 2012-01-25 2016-11-09 デンカ生研株式会社 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
JP6829009B2 (ja) * 2016-05-24 2021-02-10 デンカ株式会社 トリグリセリドリッチリポ蛋白中のコレステロールの定量方法及び定量試薬
US20200392558A1 (en) * 2017-09-01 2020-12-17 Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. Method for measuring cholesterol in low-density lipoprotein, measurement reagent, and measurement kit
CN108333175B (zh) * 2018-01-18 2021-06-29 青岛汉唐生物科技有限公司 一种总胆固醇检测方法
CN111337440A (zh) * 2018-12-18 2020-06-26 上海底物生化科技有限公司 一种心脑血管事件风险筛查的试剂盒及其检测方法
CN112904011A (zh) * 2019-12-04 2021-06-04 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种血清C1q补体的检测试剂盒及制备方法
WO2023190714A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 富士フイルム株式会社 リゾホスホリパーゼｄの活性測定方法、リゾホスホリパーゼｄ活性測定用感度向上剤、組成物、及び、キット

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000043537A1 (fr) * 1999-01-20 2000-07-27 Kyowa Medex Co., Ltd. Methode pour mesurer un triglyceride dans une lipoproteine
EP1132482A2 (en) * 2000-02-28 2001-09-12 Kyowa Medex Co., Ltd. Method and reagent for determination of cholesterol in remnant-like lipoprotein particles
WO2003104486A1 (ja) * 2002-06-10 2003-12-18 株式会社シノテスト トリグリセライドの選択的測定方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2653755B2 (ja) 1994-03-08 1997-09-17 協和メデックス株式会社 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法
JP2600065B2 (ja) 1994-03-08 1997-04-16 協和メデックス株式会社 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法
JP2799835B2 (ja) * 1995-01-31 1998-09-21 第一化学薬品株式会社 コレステロールの定量方法
US5807696A (en) 1995-03-16 1998-09-15 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for determination of cholesterol in low-density lipoprotein
JPH09285298A (ja) * 1996-04-22 1997-11-04 Iatron Lab Inc Ｈｄｌ−コレステロールの測定方法及び測定用試薬
DE69920937T2 (de) * 1998-09-18 2006-02-23 Kyowa Medex Co. Ltd. Verfahren zur quantifizierung von cholesterol in lipoproteinen und quantifizierungsreagenzien
ATE446378T1 (de) 2000-06-07 2009-11-15 Sysmex Corp Verfahren zur analyse von komponenten biologischer proben
JP3686326B2 (ja) * 2000-11-08 2005-08-24 アークレイ株式会社 高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片
US7153494B2 (en) * 2002-10-21 2006-12-26 L'oreal Dibenzoylmethane sunscreen compositions photostabilized with amphiphilic block copolymers
CN1914333A (zh) * 2004-01-29 2007-02-14 协和梅迪克斯株式会社 极低密度脂蛋白残粒(vldl残粒)中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000043537A1 (fr) * 1999-01-20 2000-07-27 Kyowa Medex Co., Ltd. Methode pour mesurer un triglyceride dans une lipoproteine
EP1132482A2 (en) * 2000-02-28 2001-09-12 Kyowa Medex Co., Ltd. Method and reagent for determination of cholesterol in remnant-like lipoprotein particles
WO2003104486A1 (ja) * 2002-06-10 2003-12-18 株式会社シノテスト トリグリセライドの選択的測定方法

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