CN111337440A - 一种心脑血管事件风险筛查的试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种心脑血管疾病筛查的试剂盒，包括任选的用于检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂。本发明试剂盒通过检测血清中脂蛋白残粒胆固醇浓度来预测待测人群患心脑血管疾病的风险；若脂蛋白残粒胆固醇浓度高，则患心脑血管疾病的风险高；若脂蛋白残粒胆固醇浓度低，则患心脑血管疾病的风险低。本发明试剂盒可用于临床心脑血管疾病的辅助诊断，临床应用前景良好。
Description
技术领域
本发明涉及心脑血管疾病筛查技术领域，尤其涉及一种心脑血管事件风险筛查的试剂盒及其检测方法。
背景技术
心脑血管疾病分为心血管疾病和脑血管疾病。它们是与循环系统有关的疾病，包括心脏病，高血压，高血糖症，中风，血栓形成和心肌梗塞，其病理基础是动脉粥样硬化。这些疾病容易导致全血管(特别是小动脉)的动脉硬化，血管的内膜损伤，脂质代谢异常和血液粘度升高。心血管和脑血管疾病是严重威胁人类健康的常见疾病，尤其是中老年人。他们有“发病率高，死亡率高，致残率高，复发率高，并发症多”——“四高一多”特点。心血管和脑血管疾病是目前世界上死亡率最高的，并且呈上升趋势。因此，心血管和脑血管疾病的早期诊断对其预防和治疗具有重要意义。
疾病的临床表现晚于其生化病理表现，标志物的检测可用于许多种疾病的早期诊断。心血管和脑血管标志物包括血管本身和凝血系统标志物(如血小板和纤维蛋白溶解)，脂代谢标志物和炎症标志物，动脉粥样硬化斑块钙化和非钙化脱落预测标志物以及RNA、DNA相关标志物等。其次是器官损伤标记，如心肌损伤标记和脑损伤标记。血脂和心肌酶的生化检测在心血管和脑血管疾病的临床诊断中具有不可替代的作用。目前临床上用于测量血清甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，脂蛋白a(Lp-a)，载脂蛋白B100(Apo B100)，肌钙蛋白，肌红蛋白，乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶，心室利钠肽(BNP)，肌酸激酶(CK-MB)及其同工酶浓度等，被用作评估心血管和脑血管功能。但这些方法只能客观地反映心脑血管功能，并且只有当心血管和脑血管严重受损时才能被检测出来，在早期的心血管和脑血管疾病中，这些指标不能反映心血管和脑血管功能的微妙变化，易误诊。
发明内容
为了解决目前无法及时筛查出心脑血管疾病的问题，本发明的目的是提供一种心脑血管事件风险筛查的试剂盒，通过检测血清中脂蛋白残粒胆固醇的浓度，来预测待测人群中发生心脑血管事件的风险；为此，本发明还提供一种采用该试剂盒进行脂蛋白残粒胆固醇浓度的检测方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供一种心脑血管疾病筛查的试剂盒，包括任选的用于检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂。
其中，所述用于检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂包括第一反应试剂和第二反应试剂，所述第一反应试剂主要由催化剂、稳定剂、第一表面活性剂、第一显色剂和Good’s缓冲液组成；所述第二反应试剂主要由第二显色剂、第二表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和Good’s缓冲液组成，所述Good’s缓冲液的pH值为6.0-8.0。
其中，所述的催化剂选自氯化钠、硫酸钠、氯化钾、硫酸钾、氯化镁、硫酸镁、醋酸镁、硝酸镁、氯化锂和醋酸钠中的任意一种。
其中，所述的稳定剂为环糊精、硫酸葡聚糖、海藻糖、葡萄糖中的任意一种。
其中，所述的第一表面活性剂为聚氧乙烯共聚物及其衍生物类非离子表面活性剂。
优选的是，所述的第一表面活性剂选自聚氧乙烯烃基酯、聚氧乙烯苯基烃基酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯(POE-POP)共聚物和聚氧乙烯-聚氧丁烯共聚物(POE-POB)中的任意一种。
其中，所述的第一显色剂选自N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐一水合物(MAOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOPS)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-琥珀酰乙二胺(EMSE)中的任意一种。
其中，所述的Good’s缓冲液包括MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、POPSO缓冲液、MES冲液和DIPSO缓冲液。
其中，所述的第二显色剂选自4-氨基安替比林、苯酚、4-氯苯酚中的任意一种。
第二显色剂为可在胆固醇反应中产生过氧化氢的物质。
其中，所述的第二表面活性剂为聚乙二醇烃基酯及其衍生物或聚乙二醇苯基烃基酯及其衍生物类非离子表面活性剂。
其中，所述Good’s缓冲液的浓度为50mmol/L-200mmol/L。
其中，所述第一表面活性剂的浓度为1％～5％(w/v)；所述第二表面活性剂的浓度为5％～10％(w/v)。
本发明的第二方面，提供一种检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的方法，包括如下步骤：
S1，将样本加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点样本A1；
S2，加入第二反应试剂，37℃孵育5分钟，读测第2点样本A2，△A样本＝A2-A1；
S3，将校准品加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点校准品a1；
S4，将校准品加入第二反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第2点校准品a2，△A校准品＝a2-a1；
脂蛋白残粒胆固醇浓度(mg/dL)＝△A样本/△A校准品×C校准品，△A样本为样本吸光度变化，△A校准品为校准品吸光度变化，C校准品为校准品浓度(mg/dL)；
上述测定的参数为：温度30-40℃，主波长为500-600nm，副波长600-700nm，样本或校准品用量为2-20μL，第一反应试剂与第二反应试剂的用量比例为2:1-5:1；
所述第一反应试剂主要由催化剂、稳定剂、第一表面活性剂、第一显色剂和Good’s缓冲液组成；所述第二反应试剂主要由第二显色剂、第二表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和Good’s缓冲液组成，所述Good’s缓冲液的pH值为6.0-8.0。
本发明的第三方面，提供检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂在制备心脑血管疾病筛查用试剂中的用途。
其中，所述检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂包括第一反应试剂和第二反应试剂，所述第一反应试剂主要由催化剂、稳定剂、第一表面活性剂、第一显色剂和Good’s缓冲液组成；所述第二反应试剂主要由第二显色剂、第二表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和Good’s缓冲液组成，所述Good’s缓冲液的pH值为6.0-8.0。
其中，所述Good’s缓冲液的浓度为50mmol/L-200mmol/L。
其中，所述第一表面活性剂的浓度为1％～5％(w/v)；所述第二表面活性剂的浓度为5％～10％(w/v)。
与现有技术相比，本发明实现的有益效果：本发明试剂盒通过检测血清中脂蛋白残粒胆固醇浓度来预测待测人群患心脑血管疾病的风险；若脂蛋白残粒胆固醇浓度高，则患心脑血管疾病的风险高；若脂蛋白残粒胆固醇浓度低，则患心脑血管疾病的风险低。本发明试剂盒可用于临床心脑血管疾病的辅助诊断，临床应用前景良好。
附图说明
以下结合附图和具体实施方式来进一步详细说明本发明：
图1为不同缓冲液体系下的散点图；
图2为△A随Good's缓冲液pH值(pH为4-8)的变化曲线；
图3为△A随Good's缓冲液浓度的变化曲线；
图4为脂蛋白残粒胆固醇浓度随第一表面活性剂浓度的变化曲线；
图5为△A随反应时间(1-15min)的变化曲线。
具体实施方式
实施例1脂蛋白残粒胆固醇浓度与心脑血管疾病的关系
一、临床资料
选取心内科80例冠心病患者(分别为男性40例，女性40例)，年龄：40～90岁，平均年龄61.2岁；100例健康对照(男性50例，女性50例)，年龄为40～90岁，平均年龄61.5岁。
二、脂蛋白残粒胆固醇浓度的检测
1)MOPS缓冲液的配制：称取MOPS 16.5g、无水醋酸钠0.656g溶解在800ml水中，再加入EDTA 0.5845g，溶解完全后加入2mol/L NaOH溶液，在pH计的监测下调节至pH为7.0，制得MOPS缓冲液的浓度为100mmol/L。
2)第一反应试剂的配制：用量筒量取500ml pH7.0的MOPS缓冲液，依次加入44g硫酸镁、0.5g硫酸葡聚糖，6g聚氧乙烯烃基酯，0.25g N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-琥珀酰乙二胺(EMSE)，过氧化物酶10KU(或过氧化氢酶10KU)。
3)第二反应试剂的配制：用量筒量取100ml pH7.0的MOPS缓冲液，依次加入0.05g4-氨基安替比林，2.5g聚乙二醇烃基酯，过氧化物酶2ku，胆固醇酯酶0.2KU，胆固醇氧化酶0.5KU和磷脂酶-D 1KU。
4)检测仪器：ADALITS Pchem1
5)检测方法
A)，分别抽取冠心病患者及健康对照的血清，作为检测样本；
B)，将检测样本加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点样本A1；
C)，加入第二反应试剂，37℃孵育5分钟，读测第2点样本A2，△A样本＝A2-A1；
D)，将校准品加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点校准品a1；
E)，加入第二反应试剂，37℃孵育5分钟，读测第2点校准品a2，△A校准品＝a2-a1；
脂蛋白残粒胆固醇浓度(mg/dL)＝△A样本/△A校准品×C校准品；
上述测定的参数为：温度37℃，主波长为600nm，副波长700nm，检测样本或校准品用量为5μL，第一反应试剂的用量为240μL，第二反应试剂的用量为80μL。
在37℃，pH＝7.0的条件下，第一表面活性剂表现出对极低密度脂蛋白残粒(VLDLR)和中密度脂蛋白(IDL)极佳的选择性。在胆固醇酯酶(CHER)存在的情况下，第一表面活性剂可以去除脂蛋白残粒以外的脂蛋白，用于后续的酶分析，添加磷脂酶-D增强了对脂蛋白残粒的反应性。
试剂中的第一表面活性剂和第二表面活性剂协同作用，选择性的修饰残粒样脂蛋白(RLPs)，使其溶于反应体系中，形成溶解态的残粒样脂蛋白，同时屏蔽其他脂蛋白不溶于反应体系中。溶解态的残粒样脂蛋白中的胆固醇酯(RLP-c ester)经胆固醇酯酶水解，形成游离胆固醇。生成的游离胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下，生成胆甾烯酮和双氧水，并经Trinder反应产生色源显色。
脂蛋白残粒胆固醇浓度(mg/dL)＝△A样本/△A校准品×C校准品，△A样本为样本吸光度变化，△A校准品为校准品吸光度变化，C校准品为校准品浓度(mg/dL)；
冠心病患者与健康对照血清中脂蛋白残粒胆固醇浓度检测结果如表1。
表1
由表1可知，冠心病患者的血清中脂蛋白残粒胆固醇浓度为15.23±3.74mg/dL，健康对照的血清中脂蛋白残粒胆固醇浓度为9.15±3.62mg/dL，脂蛋白残粒胆固醇在冠心病患者中的浓度显著升高，与健康对照组相比脂蛋白残粒胆固醇浓度差异具有统计学意义(p＜0.01)。
由以上结果可以看出，与健康人群相比，冠心病患者的脂蛋白残粒胆固醇浓度显著升高(p＜0.01)，说明心脑血管疾病与脂蛋白残粒胆固醇浓度呈正相关，脂蛋白残粒胆固醇的高浓度会显著提高患心脑血管疾病的可能性，因此，可以通过检测待测人群的脂蛋白残粒胆固醇浓度，将心脑血管疾病的易感人群筛查出来。
实施例2本发明检测血液中脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂盒组成及其使用方法
试剂盒包括：
1)第一反应试剂：0.05～0.5％(w/v)催化剂，0.01～0.5％(w/v)稳定剂、1～5％(w/v)第一表面活性剂、0.01～1％(w/v)第一显色剂、1～100U/ml过氧化物酶或过氧化氢酶、50mmol/L～200mmol/L Good’s缓冲液(pH＝6.0～8.0)；
2)第二反应试剂：0.02～2％(w/v)第二显色剂、2.5～10％(w/v)第二表面活性剂、1～100U/ml过氧化物酶、0.5～20U/ml胆固醇酯酶、1～50U/ml胆固醇氧化酶、5～20U/ml磷脂酶-D、50mmol/L～200mmol/L Good’s缓冲液(pH＝6.0～8.0)。
使用方法：
A)，分别抽取待测人群及健康对照的血清，作为检测样本；
B)，将检测样本加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点样本A1；
C)，加入第二反应试剂，37℃孵育5分钟，读测第2点样本A2，△A样本＝A2-A1；
D)，将校准品加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点校准品a1；
E)，加入第二反应试剂，37℃孵育5分钟，读测第2点校准品a2，△A校准品＝a2-a1；
脂蛋白残粒胆固醇浓度(mg/dL)＝△A样本/△A校准品×C校准品；
上述测定的参数为：温度30～40℃，主波长为500～600nm，副波长600～700nm，样本或校准品用量为2～20μL，第一反应试剂用量/第二反应试剂用量的比值为2:1～5:1。
本发明试剂盒通过检测脂蛋白残粒胆固醇浓度，可以筛查待检人群患心脑血管疾病的风险：若脂蛋白残粒胆固醇浓度低，则患心脑血管疾病的风险低；若脂蛋白残粒胆固醇浓度高，则患心脑血管疾病的风险高，可用于临床心脑血管疾病的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施提供有效的依据，具有较好的临床应用前景。
实施例3、采用试剂盒进行脂蛋白残粒胆固醇浓度检测时，各参数的选择
脂蛋白残粒胆固醇与水在胆固醇酯酶的作用下生成游离胆固醇和脂肪酸，游离胆固醇与氧气在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷-4-烯-3-酮和过氧化氢；过氧化氢与4-氨基安替比邻及酚在过氧化物酶的作用下生成红色的苯醌亚胺。通过测定红色苯醌亚胺在主波长600nm/副波长700nm吸光度的值可得脂蛋白残粒胆固醇的浓度。
1、缓冲体系的选择
分别配制100mmol/L的MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、POPSO缓冲液、MES冲液、DIPSO缓冲液、磷酸盐缓冲液和Tris-HCl缓冲液，在其他条件不变的情况下，依次测定3份不同血清中脂蛋白残粒胆固醇的浓度，重复测量6次，获得不同缓冲体系下吸光度变化差值(ΔA)。具体结果如表2和图1。
表2
由表2、图1可知，MOPS、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、POPSO缓冲液、MES缓冲液、DIPSO缓冲液的反应速度在不同血清中相当，均大于磷酸缓冲液和Tris-HCl缓冲液，故选择有机酸类Good’s缓冲液体系为较优缓冲体系。举例来说，但不限于MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、POPSO缓冲液、MES缓冲液。
2、缓冲体系中pH的选择
选取pH分别为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的MES缓冲液、PIPES缓冲液和MOPS缓冲液，浓度均为20mmol/L，在其他条件不变的情况下，分别测定混合血清中脂蛋白残粒胆固醇的浓度，重复测定6次，取平均值，获得不同pH值下吸光度变化值(ΔA)，具体数据如表3。测定结果以吸光度变化差值(ΔA)为纵坐标，pH值为横坐标作图，见图2。
表3
由表3、图2可知，在pH＝6.5-7.5时，吸光度变化差值(ΔA)最大。故选6.5～7.5为较优pH值范围。
3、缓冲体系浓度的选择
选取浓度分别为10mmol/L、30mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L、200mmol/L、300mmol/L和400mmol/L的MOPS缓冲液，在其他条件不变的情况下，分别测定混合血清中脂蛋白残粒胆固醇的浓度，重复测定6次，获得不同浓度下吸光度变化差值(ΔA)，如表5。测定结果以吸光度变化差值(ΔA)为纵坐标，缓冲液浓度值为横坐标作图，见图4。
表5
| 10 | 30 | 50 | 100 | 150 | 200 | 300 | 400 | |
| 1 | 0.0183 | 0.0435 | 0.0613 | 0.0622 | 0.0624 | 0.0622 | 0.0627 | 0.0628 |
| 2 | 0.0183 | 0.0441 | 0.0612 | 0.0618 | 0.0629 | 0.0620 | 0.0631 | 0.0625 |
| 3 | 0.0182 | 0.0451 | 0.0614 | 0.0619 | 0.0633 | 0.0620 | 0.0639 | 0.0623 |
| 4 | 0.0177 | 0.0452 | 0.0613 | 0.0618 | 0.0626 | 0.0619 | 0.0632 | 0.0621 |
| 5 | 0.0174 | 0.0450 | 0.0615 | 0.0617 | 0.0627 | 0.0625 | 0.0635 | 0.0625 |
| 6 | 0.0175 | 0.0441 | 0.0611 | 0.0620 | 0.0629 | 0.0620 | 0.0634 | 0.0622 |
| 平均值 | 0.0179 | 0.0445 | 0.0613 | 0.0619 | 0.0628 | 0.0621 | 0.0633 | 0.0624 |
由表5、图3可知，当浓度小于50mmol/L时，反应速度随着缓冲液浓度的增加而增加，当浓度介于50mmol/L～400mmol/L时，浓度对吸光度变化差值的影响较小，故选择50mmol/L为较优缓冲浓度。
4、第一表面活性剂浓度的选择
第一表面活性剂具有选择性屏蔽除脂蛋白残粒以外的其他脂蛋白的作用，因此，第一表面活性剂的浓度对反应影响很大。第一表面活性剂种类可选用聚氧乙烯共聚物及其衍生物，举例来说但不局限于此类的有聚氧乙烯烃基酯、聚氧乙烯苯基烃基酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯(POE-POP)共聚物和聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(POE-POB)等。
选取第一表面活性剂浓度分别为0.5％、1％、1.5％、2％、3％、4％，5％和6％，在其他条件不变的情况下，分别测定混合血清，重复测定10次，获得不同浓度下吸光度变化差值(ΔA)，如表6。测定结果以吸光度变化差值(ΔA)为纵坐标，第一反应试剂中的表面活性剂浓度值为横坐标作图，见图4。
表6
表6、图4可知，第一表面活性剂浓度小于1％时，脂蛋白残粒胆固醇检测浓度随第一表面活性剂浓度的升高而降低；当第一表面活性剂浓度达到1％时，脂蛋白残粒胆固醇检测浓度影响较低，表明血清中的非脂蛋白残粒被完全屏蔽，鉴于成本考虑且确保完全屏蔽其他脂蛋白，选择1.5％(w/v)为第一反应试剂中的表面活性剂的较优浓度。
5、反应时间的选择
测试样本加入第一反应试剂后，混合孵育5min，再加入第二反应试剂进行混合孵育，测试加入第一反应试剂后的15min内反应速度变化，每隔一分钟记录一次数据，获得不同时间点时的每分钟吸光度变化值(ΔA)，具体数据如表7。测定结果以吸光度变化差值(ΔA)为纵坐标，反应时间为横坐标作图，如图5。
表7
由表7、图5可知，第一反应试剂和样本混合孵育5min后，加入第二反应试剂，反应迅速进行，吸光度上升，趋于饱和，呈典型的S型反应曲线，故采用终点法，选择10min～20min为测试时间。
6、干扰实验
取10ml正常人群混合血清，分别加入胆红素、英脱利匹特、血红蛋白来判断其干扰性。即胆红素分别加入60、120、240、480、680μmol/L；英脱利匹特分别加入60、120、240、480、680mg/dL；血红蛋白分别加入1、2、3、4、5g/L，分别进行检测，结果如表8、9、10。
表8
表9
表10
由表8、9、10可知，胆红素、英脱利匹特、血红蛋白对RLP-C浓度的干扰率均低于5％，表明干扰较小，本发明的试剂盒测试结果较稳定。
7、精密度与稳定性试验
(1)稳定性试验
将本发明的试剂盒储存于37℃恒温箱，以每日新配的第一反应试剂、第二反应试剂作为对照，考察试剂盒中酶自然失活情况，一共记录十天，数据见表11。
表11
由表11可知，本发明的试剂盒储存10天后，测得血清样本中的吸光度由0.161降低至0.158，变化较小，表明本发明试剂盒在37℃下可存放10天，意味着在4℃下可稳定存储约1年以上，可用于临床试验。
(2)精密度试验
在相同条件下，分别采用同批次的试剂盒、不同批次的试剂盒对混合人群的血清进行脂蛋白残粒胆固醇浓度的测定，测定结果如表12、表13所示。
表12批内变异(CV％)
表13批间变异(CV％)
由表12、13可知，批内变异(CV％)为1.621，批间变异(CV％)为3.261，说明本发明的试剂盒差异性较小。
8、反复冻融试验
选取8份血清，封口后放置于-80℃冰箱中，冷冻30min后，置于25℃下融解，检测8份血清中RLP-C浓度值。重复上述操作，反复冻融4次，并分别进行RLP-C浓度的测定，测定结果如表14。
表14
如表14，1-8号血清样本平均每次冻融浓度下降相对值(％)分别为4.14、3.00、14.57、10.11、6.82、14.58、8.35、11.87，并使用SPSS 17统计学软件对8份RLP-C浓度的冻融次数分别进行配对T检验分析，P值均<0.05,具有统计学意义，即每次冻融均对RLP-C浓度的数值具有影响，对于RLP-C检测项目而言，标本不宜冻融，最好采血当天进行检测，否则结果的准确性会受到很大的影响。
上述的具体实施方式只是示例性的，是为了更好地使本领域技术人员能够理解本专利，不能理解为是对本专利包括范围的限制；只要是根据本专利所揭示精神的所作的任何等同变更或修饰，均落入本专利包括的范围。
Claims (10)
1.一种心脑血管疾病筛查的试剂盒，其特征在于，包括任选的用于检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂。
2.如权利要求1所述的心脑血管疾病筛查的试剂盒，其特征在于，所述用于检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂包括第一反应试剂和第二反应试剂，所述第一反应试剂主要由催化剂、稳定剂、第一表面活性剂、第一显色剂和Good’s缓冲液组成；所述第二反应试剂主要由第二显色剂、第二表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和Good’s缓冲液组成，所述Good’s缓冲液的pH值为6.0-8.0。
3.如权利要求2所述的心脑血管疾病筛查的试剂盒，其特征在于，所述Good’s缓冲液的浓度为50mmol/L-200mmol/L。
4.如权利要求2所述的心脑血管疾病筛查的试剂盒，其特征在于，所述第一表面活性剂为聚氧乙烯共聚物及其衍生物类非离子表面活性剂，所述第二表面活性剂为聚乙二醇烃基酯及其衍生物或聚乙二醇苯基烃基酯及其衍生物类非离子表面活性剂，所述第一显色剂为Trinder试剂，所述第二显色剂选自4-氨基安替比林、苯酚、4-氯苯酚中的任意一种。
5.如权利要求2所述的心脑血管疾病筛查的试剂盒，其特征在于，所述第一表面活性剂的浓度为1％～5％(w/v)；所述第二表面活性剂的浓度为5％～10％(w/v)。
6.一种检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，将样本加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点样本A1；
S2，加入第二反应试剂，37℃孵育5分钟，读测第2点样本A2，△A样本＝A2-A1；
S3，将校准品加入第一反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第1点校准品a1；
S4，将校准品加入第二反应试剂后，37℃孵育5分钟，读测第2点校准品a2，△A校准品＝a2-a1；
脂蛋白残粒胆固醇浓度(mg/dL)＝△A样本/△A校准品×C校准品，△A样本为样本吸光度变化，△A校准品为校准品吸光度变化，C校准品为校准品浓度(mg/dL)；
上述测定的参数为：温度30-40℃，主波长为500-600nm，副波长600-700nm，样本或校准品用量为2-20μL，第一反应试剂与第二反应试剂的用量比例为2:1-5:1；
所述第一反应试剂主要由催化剂、稳定剂、第一表面活性剂、第一显色剂和Good’s缓冲液组成；所述第二反应试剂主要由第二显色剂、第二表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和Good’s缓冲液组成，所述Good’s缓冲液的pH值为6.0-8.0。
7.检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂在制备心脑血管疾病筛查用试剂中的用途。
8.如权利要求7所述的用途，所述检测脂蛋白残粒胆固醇浓度的试剂包括第一反应试剂和第二反应试剂，所述第一反应试剂主要由催化剂、稳定剂、第一表面活性剂、第一显色剂和Good’s缓冲液组成；所述第二反应试剂主要由第二显色剂、第二表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和Good’s缓冲液组成，所述Good’s缓冲液的pH值为6.0-8.0。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述Good’s缓冲液的浓度为50mmol/L-200mmol/L。
10.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述第一表面活性剂的浓度为1％～5％(w/v)；所述第二表面活性剂的浓度为5％～10％(w/v)。
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