CN101107521A - 干式分析元件 - Google Patents

干式分析元件 Download PDF

Info

Publication number
CN101107521A
CN101107521A CNA2006800026700A CN200680002670A CN101107521A CN 101107521 A CN101107521 A CN 101107521A CN A2006800026700 A CNA2006800026700 A CN A2006800026700A CN 200680002670 A CN200680002670 A CN 200680002670A CN 101107521 A CN101107521 A CN 101107521A
Authority
CN
China
Prior art keywords
analysis element
dry analysis
reagent layer
amount
reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2006800026700A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101107521B (zh
Inventor
村谷浩二
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujifilm Corp
Original Assignee
Fujifilm Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujifilm Corp filed Critical Fujifilm Corp
Publication of CN101107521A publication Critical patent/CN101107521A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101107521B publication Critical patent/CN101107521B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/7703—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator using reagent-clad optical fibres or optical waveguides
    • G01N2021/7706—Reagent provision
    • G01N2021/773—Porous polymer jacket; Polymer matrix with indicator
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
    • G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种干式分析元件，其在透明的支持体上具有试剂层，该试剂层具有包含至少一种吸水性聚合物的凝胶薄膜。所述干式分析元件能够迅速、简便地分析(例如)液体样品中的生物物质，并且不需要在所述干式分析元件中设置铺展层。

Description

干式分析元件
技术领域
本发明涉及能够迅速/简便地测定痕量样品溶液中的生化物质的干式分析元件。
背景技术
作为用于测定活体内的生化物质、酶和其它物质的干式分析元件(包括多层分析元件、干式分析元件以及多层分析装置所有这些)，例如，在专利文献1和专利文献2中描述了这些技术。这些技术涉及用于对生物样品(例如血液、淋巴液、脑脊髓液或尿)中所含有的成分进行定量分析的干式分析元件。
然而，在活体内或活体外的极大量的生物合成反应(不仅涉及生物样品中的常规生化物质、酶等)中，都涉及焦磷酸的释放和焦磷酸的分解。鉴于此，当从热力学角度研究生物合成反应时，对焦磷酸进行测定是有效的。例如，由DNA聚合酶催化脱氧核苷三磷酸聚合来合成核酸。在该步骤中，焦磷酸作为核酸合成的副产物被释放。在核酸合成过程中，从能量角度而言，焦磷酸的释放是很重要的。此外，通过检测焦磷酸来确认核酸合成是否进行也是重要的。例如，对于核酸扩增反应后的反应溶液，还通常实施以下的处理。通过测定焦磷酸来确认扩增反应是否实际上发生。
用于测定活体内或活体外的此类液体样品中的焦磷酸的干式分析元件技术在(例如)专利文献3中有所描述。该技术如下所述。在干式分析元件中，焦磷酸(PPi)在无机焦磷酸酶(PPase)的作用下被转化为无机磷酸(Pi)。无机磷酸(Pi)通过嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)与黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷反应。所产生的黄嘌呤或次黄嘌呤被黄嘌呤氧化酶(XOD)氧化，从而形成尿酸。利用在该氧化过程中产生的过氧化氢(H2O2)、通过过氧化物酶(POD)的作用使成色剂(染料前体，例如隐色染料)显色，并通过比色法测定该色度。
另外，作为用于测定焦磷酸的反应体系，以下的过程也是已知的。在生成黄嘌呤或次黄嘌呤的反应过程中和反应之后，例如，可以使用心肌黄酶(DI)和在黄嘌呤脱氢酶(XDH)作用下生成的NADH使成色剂(例如，甲
Figure A20068000267000051
型染料，如硝基四唑蓝)显色，并通过比色法测定该色度。
本文中可用的干式分析元件以这样的方式构建：将一层或多层功能性层设置在透明的支持体上。使检测试剂被包含在至少一层(或多层)中。由此，在滴加既定量的液体样品之后，通过分析元件外部的反射光或透射光对层中反应所得的染料进行比色法测定。
在滴加既定量的液体样品之后，将干式分析元件保持在既定的温度下(温育)，以便使显色反应充分进行。然后，(例如)照明光从透明支持体一侧进行辐照。由此，测量特定波长区域的反射光的量或透射光的量，从而确定反射光密度或透射光密度。然后，根据先前测定的标准曲线进行定量分析。
在(例如)专利文献3所述的焦磷酸测定用的干式分析元件或专利文献4所述的干式分析元件中，在相关技术领域中，所述干式分析元件除了具有包含显色反应所需的试剂(如酶、显色物质或基质)的层和透明支持体以外，还设置有铺展层，从而达到容纳所滴加的液体样品、并使该液体样品迅速铺展的目的。在这种情况下，作为铺展层，可以使用膜过滤器(刷状聚合物)、三维网格颗粒状结构物、织物等，其中，所述的三维网格颗粒状结构物含有通过在水的作用下不会发生溶胀的聚合物粘合剂以点接触方式彼此接触而形成的聚合物珠子。
专利文献1：JP-A-60-82859
专利文献2：JP-A-60-222770
专利文献3：JP-A-2004-156983
专利文献4：JP-A-2003-270249
发明内容
本发明待解决的问题
然而，当按照专利文献3和4的方式设置含有所述物质的铺展层、并对其进行透射光光度测定时，入射到干式分析元件内部的光会受到衰减/散射等的影响。这会妨碍进行精确的测定。另一方面，取出铺展层对透射光光度测定是有利的。然而，此时被滴加到功能性层中的液体样品的液体渗透速率降低，这不适于进行快速的定量分析。
本发明的目的是提供这样的干式分析元件：能够迅速、简便地分析(例如)液体样品中的生物材料，并且不需要设置铺展层。解决所述问题的方法
为了解决以上问题，本发明人进行了密切的研究。结果，他们获得以下发现。通过使凝胶薄膜中含有吸水性聚合物，使得液体样品进入凝胶薄膜的渗透速度即使在不设有铺展层的条件下也会加快。由此，可以提供能够实施快速分析的干式分析元件。从而完成本发明。
即，本发明为如下所述：
(1)一种干式分析元件，该干式分析元件在透明支持体上具有试剂层，该试剂层具有包含至少一种吸水性聚合物的凝胶薄膜。
(2)以上(1)所述的干式分析元件，
其中，在所述的试剂层中，在每单位面积上，所述吸水性聚合物的量为凝胶的量的至多10质量％。
(3)以上(1)或(2)所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层中的凝胶含量为2g/m2到100g/m2。
(4)以上(1)到(3)中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含至少一种表面活性剂。
(5)以上(4)所述的干式分析元件，
其中，在所述的试剂层中，在每单位面积上，所述表面活性剂的量为凝胶的量的至多80质量％。
(6)以上(4)或(5)所述的干式分析元件，
其中，所述表面活性剂包括含硅化合物。
(7)以上(1)到(6)中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述吸水性聚合物为选自以下物质中的至少一种聚合物化合物：聚丙烯酸盐类、支链淀粉类、聚乙烯醇类、醋酸乙烯酯共聚物、马来酐共聚物、羧甲基纤维素类和聚环氧乙烷类。
(8)以上(1)到(7)中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含：用于将焦磷酸转化为无机磷酸的试剂；和试剂群，该试剂群用于进行与所转化的无机磷酸的量相关的显色反应。
(9)以上(8)所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含：黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷、无机焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶和成色剂。
(10)以上(9)所述的干式分析元件，
其中，所述成色剂为隐色型染料。
(11)以上(8)所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含：黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷、无机焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤脱氢酶、心肌黄酶和成色剂。
(12)以上(11)所述的干式分析元件，
其中，所述成色剂为甲
Figure A20068000267000071
型染料。
(13)以上(8)到(12)中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述的试剂层包含镁离子。
(14)以上(1)到(13)中任意一项所述的干式分析元件，该分析元件通过利用反射光光度测定或透射光光度测定的比色法对生物物质进行测定，在该比色法中，将含有生物物质的液体样品滴加到所述试剂层上，以使该试剂层显色。
本发明的优点
根据本发明，所述试剂层具有包含至少一种吸水性聚合物的凝胶薄膜。因此，液体样品在吸水性聚合物的作用下迅速地渗透到凝胶薄膜中。由此，可以迅速、简便地对(例如)液体样品中的生物物质进行定量分析。
实施本发明的最佳方式
对本发明的干式分析元件的待测对象没有特别限定，只要其是生物物质即可。待测对象的例子包括：焦磷酸、葡萄糖、GPT、GOT、尿酸、总胆固醇、中性脂肪和白蛋白。
当焦磷酸为待测定对象时，可以利用(例如)以下反应式1或反应式2所示的反应原理。在下式(1)或式(2)所示的反应体系中，焦磷酸(PPi)在无机焦磷酸酶(PPase)的作用下被转化为无机磷酸(Pi)。无机磷酸(Pi)通过嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)与黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷反应。所产生的黄嘌呤或次黄嘌呤被黄嘌呤氧化酶(XOD)氧化，从而形成尿酸。利用在该氧化过程中产生的过氧化氢(H2O2)，通过过氧化物酶(POD)的作用使成色剂显色，并通过比色法测定该色度。
顺便提及，作为成色剂，可以举出N，N-二取代苯胺(例如4-氨基安替比林)、苯酚或萘酚和隐色染料。在这些物质中，染料前体(例如隐色染料)是优选的。
或者，如式3所示，以下的方法也是可行的。在生成黄嘌呤或次黄嘌呤的反应过程中和反应之后，例如，可以使用心肌黄酶(DI)和由NAD在黄嘌呤脱氢酶(XDH)作用下还原生成的NADH使成色剂显色，并通过比色法测定该色度。
顺便提及，作为成色剂，可以举出甲
Figure A20068000267000081
型染料。在该甲
Figure A20068000267000082
型染料中，硝基四唑蓝等是优选的。
式1
Figure A20068000267000083
式2
式3
Figure A20068000267000092
或者，用于测定焦磷酸的其它显色反应也是可用的。例如，在用无机焦磷酸酶使焦磷酸转化为无机磷酸之后，可以使用用于测定无机磷酸的已知的显色反应。对于在转化为无机磷酸之后的反应步骤中和反应步骤之后，如专利文献3所述，可以采用生物化学检测领域中已知的无机磷酸的测定方法进行与无机磷酸的量相关的显色反应。
而且，对于除了焦磷酸以外的其它生物物质而言，可以通过将用于测定各种物质的已知的显色反应与本发明的干式分析元件相结合，来进行简便/快速的测定。至于除了焦磷酸以外的其它生物物质，以下文献可以作为参考。
葡萄糖：JP-A-1-231897
GPT：JP-A-57-144996
GOT：JP-A-62-195299
尿酸：JP-A-63-219400
总胆固醇：JP-A-2-181656
中性脂肪：JP-A-63-119695
白蛋白：JP-A-62-137564
对于本发明的干式分析元件，使用干式方法。将元件保存/贮存在干燥状态下直到进行分析时为止。因此，不需要如所谓的湿法那样在使用试剂之前对试剂进行制备。此外，试剂在干燥状态下通常更安全，因此，干法在简便性/快速性方面优于湿法。另外，干法作为能够对痕量液体样品快速地进行高精确度的检测的方法也是优异的。
本发明的干式分析元件可以采用与已知的多种干式分析元件相同的层结构。干式分析元件可以是多层结构，该多层结构除了具有含有用于测定生物物质的试剂群(包括诸如酶和基质之类的试剂)的试剂层以外，还具有：透明支持体、检测层、粘合层、吸水层、底涂层、透气层、缓冲层和其它层。在(例如)JP-A-49-53888(对应于美国专利No.3,992,158)、JP-A-51-40191(对应于美国专利No.4,402,335)、JP-A-55-164356(对应于美国专利No.4,292,272)和JP-A-61-4959(对应于EPC No.0166365A)的各自说明书中批露的那些作为此类干式分析元件。
当所述的干式分析元件使用透光不透水的支持体时，其实际上可以采用以下结构。但是，本发明的内容不限于此。
(1)在支持体上具有试剂层的结构；
(2)在支持体上依次具有检测层和试剂层的结构；
(3)在支持体上依次具有第二试剂层和第一试剂层的结构；或是
(4)在支持体上依次具有检测层、第二试剂层和第一试剂层的结构。
如(3)项或(4)项所述，试剂层可具有多个不同的层。例如，当以焦磷酸作为待测对象时，可以在第一试剂层上进行焦磷酸酶的反应和PNP反应，在第二试剂层上进行XOD反应和POD反应。可供选用的另外一种方式是，可以在第一试剂层上进行焦磷酸酶的反应、PNP反应和XOD反应，在第二试剂层上进行POD反应。
下文中，将详细地对各层进行描述。但是，本发明不限于此。
支持体：任何材料都是可用的。但是，透光不透水的支持体为优选。用于透光不透水的支持体的优选材料为聚对苯二甲酸乙二醇酯和聚苯乙烯。为了使亲水层牢固地粘附在支持体上，通常在支持体的表面上设置底涂层，或者对支持体进行亲水化处理。对支持体的厚度并没有特别限定。但是，合适的厚度为约10μm到1000μm、优选为50μm到300μm。
检测层：检测层含有至少一种成色剂。当待测对象为焦磷酸时，显色反应是对应于焦磷酸的量进行的。检测层和试剂层可以互相分开。但是，检测层和试剂层也可以是一体的。此外，除了成色剂以外，检测层可以含有用于实现显色反应的试剂群(例如酶)。对形成检测层的材料没有特别限定。但是，凝胶是优选合适的。对检测层的厚度没有特别限定。但是，当将检测层设置为涂层形式时，其合适的厚度为约1μm到约500μm、优选为约10μm到约100μm。在通过涂敷以外的其它方法形成多层结构(例如通过层叠来形成多层结构)的情况下，其厚度可在几十微米到几百微米的范围内发生较大的变化。检测层中的凝胶的量为2g/m2到100g/m2、优选为5g/m2到50g/m2。
试剂层：试剂层具有包含至少一种吸水性聚合物的凝胶薄膜。试剂层含有(例如)：上述用于将焦磷酸转化为无机磷酸的试剂；以及试剂群，该试剂群用于进行与所转化的无机磷酸的量相关的显色反应。
作为试剂层中所包含的凝胶，还可以使用衍生物(例如邻苯二甲酸酯化凝胶)。对试剂层的厚度没有特别限定。然而，当将试剂层设置为涂层形式时，其合适的厚度为约1μm到约500μm、优选为约10μm到约100μm。在通过涂敷以外的其它方法形成多层结构(例如通过层叠来形成多层结构)的情况下，其厚度可在几十微米到几百微米的范围内发生较大的变化。
试剂层中的凝胶的量为2g/m2到100g/m2、优选为5g/m2到50g/m2。
将吸水性聚合物加入试剂层中，使得试剂层一旦保持有所滴加的液体样品，接着就能使液体样品迅速地渗透到试剂层中。鉴于此，使用本发明的干式分析元件，即使在试剂层上不设有可以使上述含有生物样品的液体样品扩散/渗透的铺展层时，也可以快速地进行测定。关于吸水性聚合物，可以使用通常可使用的聚合物，例如聚丙烯酸盐类、支链淀粉类、聚乙烯醇类、醋酸乙烯酯共聚物、马来酐共聚物、羧甲基纤维素类和聚环氧乙烷类。然而，尤其优选聚丙烯酸盐类聚合物。另外，可以使用由聚合方法和研磨方法中的一种方法制备的任何吸水性聚合物。
关于吸水性聚合物的粒径，优选使用中心粒径为约10μm到约800μm的吸水性聚合物，更优选的是中心粒径为约10μm到约100μm的吸水性聚合物。此外，经改性等处理的高度交联型吸水性聚合物、或耐盐性增强型吸水性聚合物也是可用的。
在试剂层中，在每单位面积上，吸水性聚合物的用量为凝胶的量的至多10质量％。然而待加入的吸水性聚合物的量优选为0.1质量％或更多。在每单位面积上，待使用的吸水性聚合物的更优选的量为凝胶的量的1质量％到5质量％。
为了增强吸水性聚合物在本发明中的效果(即，为了进一步增强一旦保持有液体样品、接着就能使液体样品迅速地渗透到试剂层中的效果)，可以将表面活性剂加入到试剂层中。具体而言，优选含硅的表面活性剂。此外，优选非反应性的聚醚改性的硅油作为表面活性剂。可以使用H.L.B.值为4到16的表面活性剂。然而，尤其优选H.L.B.值为7到12的表面改性剂。在试剂层中，在每单位面积上，表面活性剂的用量为凝胶的量的至多80质量％。然而待加入的表面活性剂的量优选为1质量％或更多。在每单位面积上，待使用的表面活性剂的更优选的量为凝胶的量的5质量％到50质量％。
顺便提及，还可以将含硅表面活性剂和其它表面活性剂组合使用。
然而，在本发明中，试剂层中含有镁离子是优选的，这是因为镁离子会产生这样的效果：在滴加样品后的第一阶段中，使焦磷酸酶的反应平稳地进行。为了将镁离子引入试剂层中，通常，只需将镁盐(例如MgCl2)和水包含在试剂层中即可。在试剂层中，在每单位面积上，镁离子的含量优选为凝胶的量的1质量％到75质量％、更优选为凝胶的量的5质量％到55质量％。
为了达到改善诸如涂敷性能、扩散性化合物的扩散性、以及反应性和耐贮性之类的各种性能的目的，除了所述的各种成分外，可以向试剂层中加入酶的活化剂和稳定剂、辅酶、表面活性剂、pH缓冲剂组合物、细粉末、抗氧化剂以及各种添加剂(包括有机物质或无机物质)。可以包含在试剂层中的缓冲剂的实例包括以下文献所述的pH缓冲剂体系，所述文献为：由日本化学会编辑的《化学便覧基礎》(由丸善株式会社于1966年出版)，1312到1320页；由R.M.C.Dawson等人编辑的Data for Biochemical Research，第二版(由牛津大学的Clarendon出版社在1969年出版)，476到508页；Biochemistry，5，467到477页(1966)；和Analytical Biochemistry，104，300到310页(1980)。pH缓冲剂体系的具体实例包括：含有硼酸盐的缓冲剂、含有柠檬酸或柠檬酸盐的缓冲剂、含有甘氨酸的缓冲剂、含有N-二(羟乙基)甘氨酸的缓冲剂、含有HEPES的缓冲剂和Good’s缓冲剂(如含有MES的缓冲剂)。顺便提及，不能将含有磷酸盐的缓冲剂用于检测焦磷酸的干式分析元件。
可以按照以下方式设置试剂层：根据在JP-B-53-21677(对应于美国专利No.3,992,158)、JP-A-55-164356(对应于美国专利No.4,292,272)和JP-A-54-101398(对应于美国专利No.4,132,528)的各自说明书中所述的方法，将含有本发明中各种试剂的水溶液或水分散液涂敷在支持体或其它层上(例如检测层)，并使其干燥。顺便提及，如上所述，试剂层可以包含多个不同的层。
顺便提及，根据本发明的干式分析元件可以设有铺展层或不设有铺展层。但是，不设置铺展层是所需要的，这是因为这样有利于透射光光度测定。当设置铺展层时，铺展层可以由膜过滤器(刷状聚合物)、三维网格颗粒状结构物、织物等形式，其中，所述的三维网格颗粒状结构物含有通过在水的作用下不会发生溶胀的聚合物粘合剂以点接触方式彼此接触而形成的聚合物珠子。
可以通过在上述各专利说明书中所述的已知方法来制备本发明的干式分析元件。将该干式分析元件切成各边长为约5mm到约30mm的正方形或具有大致相同尺寸的圆形等的既定的小片。将得到的小片存放于在JP-B-57-28333 1(对应于美国专利No.4,169,751)、JP-UM-A-56-142454(对应于美国专利No.4,387,990)、JP-A-57-63452、JP-UM-A-58-32350、JP-T-58-501144(本文所用的术语“JP-T”是指公开的PCT专利申请的日文翻译)(对应于WO83/00391)等中所述的分析片(スライド)框等内，并用作化学分析用分析片。可供选用的另外一种方式是，可采用以下的方式使用干式分析元件：将其容纳在市售可得的96孔板(或孔数更多的板)的各孔的底部。
此外，作为本发明的干式分析元件，上述分析片形式的干式分析元件是优选的。然而，根据预期目的，所述的干式分析元件可以为小片形式或长的带状形式。另外，对于本发明的干式分析元件，其切片可以以原样形式使用。但是，它们也可以以这样的形式被使用：将其存放在盒子、存放箱或具有开口的容器中，或将它们贴附在或附着在外露的卡片上。
本发明的干式分析元件可以按照与所述的各个专利说明书中所述的操作方法相同的操作方法来检测和测定液体样品中的测试对象。例如，将约2μL到约30μL(优选为4μL到15μL)的液体样品水溶液滴加(点滴施加)到试剂层上。将经点滴施加的分析元件在约15℃到45℃(优选为约20℃到40℃)的恒温下温育1分钟到30分钟。从透明支持体一侧对分析元件中的显色程度或变色程度进行反射光光度测定或透射光光度测定。由此，采用先前制作的标准曲线、根据比色法的原理可以测定测试对象的量。通过使待点滴施加的液体样品的量、以及温育时间和温育温度保持恒定，就可以高精确度地进行定量分析。
对于测定操作方法，可以借助于在JP-A-60-125543、JP-A-60-220862、JP-A-61-294367、JP-A-58-161867(对应于美国专利No.4,424,191)等中所述的化学分析装置和市售可得的平板读取器，以很简单的操作方式实施高精确度的定量分析。顺便提及，根据目的或所需的精确度，通过目视判断显色程度来进行半定量的测定也是可以接受的。
实施例
通过以下实施例来更具体地描述本发明。但是，本发明不限于以下的实施例。
(1)用于测定焦磷酸的干式分析元件
将具有表1所示的组成(a)的水溶液涂敷到180μm厚的无色透明聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的光滑膜片(支持体)  (其上设有凝胶底涂层)上，从而得到以下所示的覆盖率，然后使该涂层干燥，进而形成试剂层。为了进行对比，将含有表2所示组成(b)的水溶液以相同的方式进行涂敷，并使其干燥，进而形成试剂层。
表1
试剂层水溶液的组成(a)
凝胶对壬基苯氧基聚缩水甘油(缩水甘油单元：平均含有10个单元)(C9H19-Ph-O-(CH2CH(OH)-CH2-O)10H)吸水性聚合物(AQUALIC CA ML-10，由日本触媒株式会社制造)次黄嘌呤核苷过氧化物酶黄嘌呤氧化酶嘌呤核苷磷酸化酶无机焦磷酸酶双甲酮(5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮)隐色染料(2-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯基)-4，5-二(4-二甲基氨基苯基)咪唑)   18.9g/m20.5g/m20.44g/m21.6g/cm215200U/m24600U/m22300U/m2500U/m20.07g/m20.28g/m2
MgCl2·6H2O聚醚改性的硅油(KF-618，由信越化学株式会社制造)水用NaOH/HCl稀溶液调节pH为6.5     6.8g/m28.0g/m297.3g/m2
注)作为吸水性聚合物的AQUALIC CA ML-10是聚丙烯酸盐类吸水性聚合物，并且其平均粒径为10μm。
表2
试剂层水溶液的成(b)
凝胶对壬基苯氧基聚缩水甘油(缩水甘油单元：平均含有10个单元)(C9H19-Ph-O-(CH2CH(OH)-CH2-O)10H)次黄嘌呤核苷过氧化物酶黄嘌呤氧化酶嘌呤核苷磷酸化酶焦磷酸酶双甲酮隐色染料(2-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯基)-4，5-二(4-二甲基氨基苯基)咪唑)MgCl2·6H2O水用NaOH/HCl稀溶液调节pH为6.5  18.9g/m20.5g/m21.6g/cm215200U/m24600U/m22300U/m2500U/m20.07g/m20.28g/m26.8g/m297.3g/m2
将这些分析元件切成直径为约6 mm的圆形，并将其粘结在市售可得的96孔板的底部。
测定例1：液体样品中焦磷酸的浓度与用于测定焦磷酸的干式分析元件的显色之间的关系
采用具有确定纯度的焦磷酸钾(由和光纯药株式会社制造)制备成各自浓度分别为0、0.05、0.10和0.15(mM)的焦磷酸盐水溶液，并以每点滴5μL的量施加到实施例中所制备的干式分析元件中。将该干式分析元件在25℃下温育10分钟。然后，借助于平板读取器(GENios Pro，由TECAN公司制造)从支持体那一侧测定650nm波长处的透射光密度(ODt)。结果示于表3和图1中。结果表明使用本发明的干式分析元件可以定量地测定液体样品中焦磷酸的量。
表3
液体样品中焦磷酸的浓度与10分钟后的透射光密度之间的关系
    焦磷酸浓度(mM)    10分钟后的透射光密度(ODt)
    00.050.100.15    0.150.310.400.44
测定例2：加入吸水性聚合物和含硅表面活性剂的效果
就本发明的例子而言，使用具有组成(a)的干式分析元件和作为对照而制备的具有组成(b)的干式分析元件实施以下的过程。采用具有确定纯度的焦磷酸钾(由和光纯药株式会社制造)制备各自浓度分别为0、0.05、0.10(mM)的焦磷酸盐水溶液，并以每点滴5μL的量施加到实施例中所制备的干式分析元件中。将该干式分析元件在25℃下温育10分钟。然后，借助于平板读取器(GENios Pro，由TECAN公司制造)从支持体那一侧测定650nm波长处的透射光密度(ODt)。将显色反应时间进程的结果以ODt的方式示于表4中。组成(b)是通过从组成(a)中除去吸水性聚合物和含硅表面活性剂而得到的。
组成(a)和组成(b)的比较如下所示。对于组成(b)而言，在0分钟时的噪声较高，此外，在点滴施加5μL的测试溶液(焦磷酸盐水溶液)以后，即使过去5分钟或更长时间，测试溶液也没有完全渗透。与其形成对比的是，对于具有组成(a)的干式分析元件，在点滴施加5μL的测试溶液以后，在15秒内测试溶液就完全渗透。将渗透速率的提高会改善显色反应的时间进程这一实际情况用第3分钟和第10分钟之间的ΔODt差值来表示。
表4：点滴施加焦磷酸盐水溶液之后的显色反应的时间进程(在各测定时间的ODt)
    组成(a)     0分钟   3分钟     10分钟     ΔODt(10分钟-3分钟)
    0.00mM0.05mM0.10mM     0.0690.0880.094   0.1220.2790.379     0.1510.3110.398     0.0290.0320.019
    组成(b)     0分钟   3分钟     10分钟     ΔODt(10分钟-3分钟)
    0.00mM0.05mM0.10mM     0.1440.1600.197   0.1750.2520.339     0.1980.3100.396     0.0230.0580.057
附图说明
图1示出液体样品中焦磷酸浓度和10分钟后透射光密度(ODt)之间的关系的图。

Claims (14)

1.一种干式分析元件，该干式分析元件在透明的支持体上具有试剂层，该试剂层具有包含至少一种吸水性聚合物的凝胶薄膜。
2.根据权利要求1所述的干式分析元件，
其中，在所述的试剂层中，在每单位面积上，所述的吸水性聚合物的量为凝胶的量的至多10质量％。
3.根据权利要求1或2所述的干式分析元件，
其中，所述的试剂层中的凝胶含量为2g/m2到100g/m2。
4.根据权利要求1到3中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含至少一种表面活性剂。
5.根据权利要求4所述的干式分析元件，
其中，在所述的试剂层中，在每单位面积上，所述表面活性剂的量为凝胶的量的至多80质量％。
6.根据权利要求4或5所述的干式分析元件，
其中，所述表面活性剂包括含硅化合物。
7.根据权利要求1到6中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述吸水性聚合物为选自以下物质中的至少一种聚合物化合物：聚丙烯酸盐类、支链淀粉类、聚乙烯醇类、醋酸乙烯酯共聚物、马来酐共聚物、羧甲基纤维素类和聚环氧乙烷类。
8.根据权利要求1到7中任意一项所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含：用于将焦磷酸转化为无机磷酸的试剂；和试剂群，该试剂群用于进行与所转化的无机磷酸的量相关的显色反应。
9.根据权利要求8所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含：黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷、无机焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶和成色剂。
10.根据权利要求9所述的干式分析元件，
其中，所述成色剂为隐色型染料。
11.根据权利要求8所述的干式分析元件，
其中，所述试剂层包含：黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷、无机焦磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤脱氢酶、心肌黄酶和成色剂。
12.根据权利要求11所述的干式分析元件，其中，所述成色剂为甲
Figure A2006800026700003C1
型染料。
13.根据权利要求8到12中任意一项所述的干式分析元件，其中，所述的试剂层包含镁离子。
14.根据权利要求1到13中任意一项所述的干式分析元件，该分析元件通过利用反射光光度测定或透射光光度测定的比色法对生物物质进行测定，在该比色法中，将含有生物物质的液体样品滴加到所述试剂层上，以使该试剂层显色。
CN2006800026700A 2005-02-28 2006-02-21 干式分析元件 Expired - Fee Related CN101107521B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005052947 2005-02-28
JP052947/2005 2005-02-28
PCT/JP2006/303014 WO2006092980A1 (ja) 2005-02-28 2006-02-21 乾式分析要素

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101107521A true CN101107521A (zh) 2008-01-16
CN101107521B CN101107521B (zh) 2012-04-18

Family

ID=36941015

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006800026700A Expired - Fee Related CN101107521B (zh) 2005-02-28 2006-02-21 干式分析元件

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP1852700B1 (zh)
JP (1) JP4866839B2 (zh)
CN (1) CN101107521B (zh)
DE (1) DE602006008276D1 (zh)
WO (1) WO2006092980A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107271500A (zh) * 2016-04-08 2017-10-20 北京德鲁伊医疗器材有限公司 一种尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6288669B2 (ja) * 2014-02-18 2018-03-07 独立行政法人国立高等専門学校機構 環境汚染物質の検出材およびその製造方法、ならびに環境汚染の評価方法
EP3312291B1 (en) * 2015-06-19 2020-03-11 Shino-Test Corporation Substrate solution for measuring lipase activity, and method and reagent for measuring lipase activity in sample

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2332760C3 (de) 1972-06-30 1982-03-04 Eastman Kodak Co., 14650 Rochester, N.Y. Material für die quantitative spektrophotometrische Analyse einer Flüssigkeit
US3992158A (en) 1973-08-16 1976-11-16 Eastman Kodak Company Integral analytical element
FR2280081A1 (fr) 1974-07-23 1976-02-20 Kodak Pathe Produit composite unitaire pour l'analyse chimique ou biologique
US4132528A (en) 1978-01-03 1979-01-02 Eastman Kodak Company Analytical element for the analysis of liquids under high pH conditions
US4169751A (en) 1978-05-30 1979-10-02 Eastman Kodak Company High frequency bonding with concentrators
JPS55164356A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Fuji Photo Film Co Ltd Multi-layer analysis sheet for liquid sample analysis
JPH0131957Y2 (zh) 1980-03-28 1989-10-02
JPS56142454A (en) 1980-04-09 1981-11-06 Nippon Kokan Kk <Nkk> Steel pipe's upset flaw inspecting device
DE3017321C3 (de) 1980-05-06 1994-08-04 Samson Ag Dämpfungsvorrichtung für Meß- oder Regelgeräte
JPS5763452A (en) 1980-10-02 1982-04-16 Fuji Photo Film Co Ltd Slide frame for chemical analysis
JPS57144996A (en) 1981-02-27 1982-09-07 Fuji Photo Film Co Ltd Film for quantitative analysis
US4440301A (en) 1981-07-16 1984-04-03 American Hospital Supply Corporation Self-stacking reagent slide
JPS5832350A (ja) 1981-08-19 1983-02-25 Hitachi Ltd 高圧ナトリウムランプ
US4424191A (en) 1982-03-04 1984-01-03 Eastman Kodak Company Analyzer featuring loading and unloading means for a storage chamber, and common drive means
JPS6082859A (ja) 1983-10-13 1985-05-11 Fuji Photo Film Co Ltd 一体型多層化学分析要素
JPS60125543A (ja) 1983-12-12 1985-07-04 Fuji Photo Film Co Ltd 分析装置
JPS60220862A (ja) 1984-04-18 1985-11-05 Fuji Photo Film Co Ltd 化学分析装置
JPS60222770A (ja) 1984-04-19 1985-11-07 Fuji Photo Film Co Ltd 一体型多層分析要素
JPS614959A (ja) 1984-06-19 1986-01-10 Fuji Photo Film Co Ltd 一体型多層分析要素
JPS61294367A (ja) 1985-06-21 1986-12-25 Fuji Photo Film Co Ltd 化学分析装置
JPS62137564A (ja) 1985-12-11 1987-06-20 Fuji Photo Film Co Ltd 乾式分析要素
JPS62195299A (ja) 1986-02-20 1987-08-28 Fuji Photo Film Co Ltd 酵素活性測定用乾式分析要素の製造方法
JPS6332499A (ja) * 1986-07-24 1988-02-12 Fuji Photo Film Co Ltd クレアチンキナ−ゼ活性測定用分析要素
JPS63119695A (ja) 1986-11-06 1988-05-24 Fuji Photo Film Co Ltd 中性脂肪定量用一体型多層分析要素
JPS63219400A (ja) 1987-03-09 1988-09-13 Fuji Photo Film Co Ltd 尿酸分析用一体型多層分析要素
JPH01231897A (ja) 1988-03-11 1989-09-18 Fuji Photo Film Co Ltd 乾式グルコース分析要素
JPH0833393B2 (ja) * 1988-03-14 1996-03-29 富士写真フイルム株式会社 乾式分析要素
JP2514087B2 (ja) 1989-01-06 1996-07-10 富士写真フイルム株式会社 総コレステロ―ル分析要素
JPH0599927A (ja) * 1991-10-09 1993-04-23 Dainippon Printing Co Ltd 水溶性被酸化呈色指示薬を用いたブドウ糖検出用印刷 インキ組成物及びその適用法
ATE176821T1 (de) * 1992-12-22 1999-03-15 Johnson & Johnson Clin Diag Immunoassay-elemente, die eine getrennte rezeptorschicht haben
US5686254A (en) * 1995-06-07 1997-11-11 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Reduction in first slide bias and improved enzyme stability by the incorporation of diaryl tellurides in thin-film immunoassay elements
JP3446796B2 (ja) * 1995-10-30 2003-09-16 アークレイ株式会社 試験片
CN1103919C (zh) * 1995-10-30 2003-03-26 株式会社京都第一科学 物质的测定方法及试片
JP4219491B2 (ja) * 1999-06-18 2009-02-04 富士フイルム株式会社 乾式分析方法及び乾式分析要素
JP3821773B2 (ja) * 2002-11-06 2006-09-13 富士写真フイルム株式会社 ピロ燐酸定量用乾式分析素子
JP2002369698A (ja) * 2001-06-14 2002-12-24 Fuji Photo Film Co Ltd ピロ燐酸定量用試薬及び乾式分析素子
JP4189140B2 (ja) * 2001-09-07 2008-12-03 富士フイルム株式会社 乾式免疫分析要素
JP2003270249A (ja) 2002-03-14 2003-09-25 Fuji Photo Film Co Ltd グロブリンの影響を回避した乾式分析要素
JP3910102B2 (ja) * 2002-04-25 2007-04-25 富士フイルム株式会社 乾式分析要素及び分析キット

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107271500A (zh) * 2016-04-08 2017-10-20 北京德鲁伊医疗器材有限公司 一种尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2006092980A1 (ja) 2008-08-07
EP1852700B1 (en) 2009-08-05
DE602006008276D1 (de) 2009-09-17
EP1852700A1 (en) 2007-11-07
CN101107521B (zh) 2012-04-18
WO2006092980A1 (ja) 2006-09-08
JP4866839B2 (ja) 2012-02-01
EP1852700A4 (en) 2008-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101763119B1 (ko) 미세유체 임상 분석기
US6511814B1 (en) Method and device for detecting analytes in fluids
JPS6269139A (ja) 反応性表面上に液体試料を施すための計量用毛細間隙装置及び計量方法
CN101107521B (zh) 干式分析元件
Wang et al. polymer composite devices with minimal fluorescence background
Sausen et al. Thin-layer chromatography and real-time coupled assays to measure ATP hydrolysis
US8999662B2 (en) Method for producing dry reagent, dry reagent, and analysis tool using same
JP2013165709A5 (zh)
JPH04210599A (ja) 体液中の二酸化炭素の定量アッセイのための方法及び要素
US6130054A (en) Test strip for creatine kinase activity measurement
JP2002369698A (ja) ピロ燐酸定量用試薬及び乾式分析素子
CN1918472B (zh) 多层分析元件
EP0239222B1 (en) Analytical element containing photosensitive compound and filter layer and method of use
JPS62103542A (ja) 一体型多層分析要素
EP0629705B1 (en) Reagent composition for quantitative analysis of inorganic phosphorus and dry analysis element utilizing the same
EP1435393A1 (en) Method for analyzing gene expression levels by quantification of pyrophosphoric acid
JP3821773B2 (ja) ピロ燐酸定量用乾式分析素子
JP2513509B2 (ja) 尿素分析用試薬組成物及びそれを含む一体型多層分析要素
US20090269838A1 (en) Dry analysis element
JP4185763B2 (ja) ターゲット核酸の定量方法
JP3705499B2 (ja) ターゲット核酸断片の分析方法及びターゲット核酸断片の分析キット
JP3532907B2 (ja) ターゲット核酸断片の分析方法及びターゲット核酸断片の分析キット
JPH0394698A (ja) アンモニア測定試薬組成物を含む一体型多層分析要素
JP2004321127A (ja) ターゲット核酸断片の検出方法
JP4819789B2 (ja) 多層分析要素

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20120418

Termination date: 20170221

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee