JPS62195299A - 酵素活性測定用乾式分析要素の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は液体中の酵素活性、特にアミノトランスフェラ
ーゼ活性測定に適する乾式液体分析要素の製造方法に関
する。

［従来技術］ 少なくとも一つの水浸透性層にα−ケトゲルタール酸と
、アスパラギン酸またはその塩（以下、ＡＳＰと略記す
る）を含む乾式液体分析要素は、液体中のアスパラギン
アミノトランスフェラーゼ活性測定に適する。このよう
な乾式液体分析要素を製造するには、α−ゲトグルター
ル酸と、ＡＳＰを含む液組成物を用いてそれらを含む水
浸透性層を形成すればよい０例えば、そのような組成物
を用いて水浸透性層を塗布するか、多孔性層に塗布する
か、多孔性層を液組成物に浸漬すればよい。

ＡＳＰを含む水浸透性層に酸化チタン粒子を含ませるこ
とが有利なことがある１例えば、水浸透性層の少なくと
も一つが多孔性液体展開層であり、この層にＡＳＰを含
むと同時に酸化チタンを含むようにすると、酸化チタン
を含む光反射層を多孔性液体展開層の下に殊更に設けな
くてもよいと言う利点が有る。しかし、ＡＳＰと同時に
酸化チタンを含む液組成物を用いて塗布（または浸漬）
すると、塗布（または浸漬）続行中に液中に凝集がおこ
り、塗布不可能になる。塗布が可能であっても、出来上
がった分析要素が性能の不均一なものになる。

［発明の目的コ 本発明の目的は、少なくとも二つの水浸透性層を有し、
水浸透性層の少なくとも一つは多孔性液体展開層であり
、水浸透性層の少なくとも一つにはアスパラギン酸また
はその塩を含み、水浸透性層の少なくとも一つに酸化チ
タン粒子を含み、液体中のアスパラギンアミノトランス
フェラーゼ活性測定に適する乾式液体分析要素の製造に
おいて、酸化チタンを含む液組成物を用いて塗布（また
は浸漬）続行中に起こる′ａ集を防止し、均一な乾式液
体分析要素をＷＡ造することである。

［発明の構成］ 本発明の上記目的は、前記乾式液体分析要素の製造方法
であって、酸化チタン粒子を含んでアスパラギン酸また
はその塩を含まない液組成物を用゛いて酸化チタン粒子
を含む層を形成し、アスパラギン酸またはその塩を含み
酸化チタン粒子を含まない液組成物を用いてアスパラギ
ン酸またはその塩を含む層を形成することを特徴とする
製造方法によって、達成された。

本発明の上記目的は、前記乾式液体分析要素の製造方法
であって、酸化チタン粒子を含んでアスパラギン酸また
はその塩を含まない液組成物で多孔性液体展開層に塗布
または浸漬し、前記液体展ｒＷ４眉の被検液が供給され
る面から遠い側に、隣接または他の層を介して、アスパ
ラギン酸またはその塩を含み酸化チタン粒子を含まない
液組成物を用いてアスパラギン酸またはその塩を含む層
を形成することを特徴とする方法によって、好ましく達
成された。

水浸透性層の少なくとも一つにアスパラギン酸まなはそ
の塩を含み、液体中のアスパラギンアミノトランスフェ
ラーゼ活性測定に適する乾式液体分析要素において、広
く利用される反応は、アスパラギン酸およびα−ケトゲ
ルタール酸を基質として生成するオキザロ酢酸を、オキ
ザロ酢酸説炭酸酵素によってピルビン酸に変換し、ピル
ビン酸を生成させ、生成したピルビン酸とピルビン酸オ
キシダーゼの作用により過酸化水素を発生させ、過酸化
水素に感応（通常ペルオキシダーゼの存在下で）する呈
色指示薬の発色を測定するものである。

これらの反応成分、基質あるいは酵素は、多孔性展間層
に含んでも良く、また他の層に含んでもよい、しかし、
α−ケＩ・ゲルタール酸とオキザロ６１：酸脱炭酸酵素
は、多孔性Ｉｆｊ＆開層に含み、ピルビン酸オキシダー
ゼと、ペルオキシダーゼと、過酸化水素に感応する呈色
指示薬とは多孔性展開層以外の層に含むのが好ましい。

前記呈色指示薬としては、例えば、特開昭４９−５３８
８８号、同５１−４０１９１号、同５３−１３１０８９
号、ｖ′４５５−１２４４９９号に記載されたものを適
用することができる。

ｆ？開昭５３−２６１８８号、同５９−１９３３５２号
に記載されたロイコ色素は有用である。その他特公昭５
８−２８２７７号に引用されているトラインダー試薬、
特開昭５９−５４９６２号に記載された指示薬組成物も
用いることができる。

ペルオキシダーゼは、例えば特開昭５０−１３７１９２
等に記載されたものを用いることができる。

本発明に用いられるピルビン酸オキシダーゼ（以下、Ｐ
ＯＰと略記する）はピルビン酸、ｙ！Ｆｃｆｉリン酸お
よび酸素からア七チルリン酸、二酸化炭素および過酸化
水素を生じる反応を触媒する酵素であれば何でもよいが
、ベディオコックス属、ストレプトコックス属、アエロ
コックスエにそれぞれ工する菌を培養して得られるもの
が好ましい１例えば、特開昭５５−１３０６８号に開示
されている。特開昭５９−１６２８フフ号に記載された
ＰＯＰも有用である。

リン酸源としてはリン酸イオンｐｏ、”’、酸性リン酸
イオン（Ｈｒ’Ｏ，”　、Ｈ２ＰＯ４’　）を、酸また
は塩の形で、用いることができる。加水分解してそれら
を生成し得るリン酸エステルまたは錯体も用いることが
できる。リン酸塩緩衝液をリン酸源としてもよい、リン
酸源は、多孔性展間層に含んでも良く、また他の層に含
んでもよい、ＰＯＰのＩＵに対してＱ、ｌ、ｕ鍮ｏ１ｅ
からｌＱμａｏｌｅの範囲で用いることができる。

本発明により製造される分析要素には、補酵素、例えば
チアミンピロリン酸（ＴＰＰ）や、フラアビンアデニン
ジヌクレオチド（ＦＡＤ）を、Ｐ。

Ｐと共存させることが好ましい、ＴＰＰとしてはチアミ
ンニリン酸が好ましく、ＰＯＰのＩＵに対して５　ｎ　
＋５ｏｌｅから５００　ｎ　５ｏｌｅ　、好ましくは１
０　ｎ　＋ｍｏｌｅから３００　ｎ　ｍｏｌｅ含む。

本発明により製造される分析要素には、２価または３価
の金属イオン（例えば、Ｃａ−、Ｍｇ−。

Ｃｏ−、Ｍｎ−、Ａｌコ＋）をｐｏｐと共存させること
が好ましい０例えば、塩化マンガン、リン酸マンガン、
リン酸水素マンガン、塩化マグネシウム、リン酸水素マ
グネシウム、共存させる金属イオンは　ＰｏＰのＩＵに
対し、５　ｎ　ｍｏｌｅから２００）ｔ　ｍｏｌｅ　、
好ましくは１０　ｎ　ｍｏｌｅから１００μ輪ｏｌｅで
ある。

多孔性展開層には、基質としてα−ケトゲルタール酸を
含むことができる。α−ケトグルクール酸は＠ｒｊｆ４
ＰＩＪ以外の層（例えば、試薬層、接着層）にも含ませ
ることができる。

本発明により製造される分析要素の多孔性展開層には、
親水性ポリマー、界面活性剤（非イオン、例えばポリオ
キシエチレン系、アニオン、例えばアルキルスルホン酸
、カチオン、例えば第四級アンモニウム塩）を含むこと
ができる。

本発明により製造される分析要素の多孔性展開層以外の
水浸透性層にも、親水性ポリマー、界面活性剤（非イオ
ン、例えばポリオキシエチレン系、アニオン、例えばア
ルキルスルホン酸、カチオン、例えば第四級アンモニウ
ム塩）を含むことができる。

ピルビン酸オキシダーゼの活性に適するｐＨは６．５〜
８．０で、本発明により製造される分析要素の多孔性展
開層または他の水浸透性層には、このＰＨを実現する＃
ＩｉＷ剤を含むことができる。

例えば、リンａ桜街液、トリス−塩酸＆ＩＷｉ液、Ｇｏ
ｏｄの緩衝液等に相当する組成物を用いることができる
。

本発明は公知の多種の乾式分析要素に適用することが出
来る。？８に自己ｍ色性基質と被検液がいずれも透過し
得る固体担体を含む要素に適用することが出来る。要素
は支持体、検出層、光道へい層のほかに反応試薬層、多
孔性液体展開層、接着層、ろ過層、吸水層、下塗り層お
よび公知のその他の層を含む多ｍｓであってもよい、か
ような分析要素として、米国特許第３．９９２．１５８
号、同４，０４２，３３５号および特開昭５５−１６４
３５６号各明細書に開示されたものがある。

支持体を用いる場合、本発明で製造される乾式分析要素
の実用的に採りうる構成は （１）支持体上に試薬層、その上に液体展間層を有する
もの、この場合、試薬層にアスパラギン酸、液体展１７
ＭＪｌ！Ｉに酸化チタンを含む。

（２）支持体上に検出層、試薬層、液体展開層をこの順
に有するもの、この場合、試薬層にアスパラギン酸、液
体ｒｘ開層に酸ｆヒチタンを含むか、または検出層もし
くは試薬層に酸化チタン、液体展開層にアスパラギン酸
を含む。

（３）支持体上に検出層、第二試薬層、第−試薬層、液
体展開層をこの順に有するもの、この場合、第二試薬層
にピルビン酸オキシダーゼ、第一試薬層にアスパラギン
酸を含むか、第一試薬層にピルビン酸オキシダーゼ、液
体展開層にアスパラギン酸をよむ。

（４）支持体上に検出層、その上に光道へい層、その上
に液体展開層を有するもの、この場合好ましくは、液体
展開層にアスパラギン酸を含み、光道へい層に酸化チタ
ンを含む。

（５）支持体上に検出層、試薬層、光道へい層、液体展
開層をこの順に有するもの、この場合好ましくは、液体
展ｒＷｉ層または試薬層にアスパラギン酸を含み、光道
へい層に酸化チタンを含む、。

（６）支持体上に検出層、光道へい層、試薬層、液体展
開層をこの順に有するもの、この場合好ましくは、試薬
層または液体展ｒＭＭ１にアスパラギン酸を含み、光道
へい層に酸化チタンを含む。

（７）支持体上に検出層、第二試薬層、光道へい層、第
一試薬層、液体展開層をこの順に有するもの、このｊ９
６好ましくは、茅−試薬層にアスパラギン酸を含み、光
道へい層に酸化チタンを含む。

本発明で好ましいのは上記（２）または（４）の層構成
である。上記（１）ないしく３）において検出層と試薬
層または液体展開層の間、試薬層と液体展開層の間、ま
たは第二試薬層と第一試薬層の間に、ろ過層を設けても
よい、上記（４）ないしく７）において検出層と試薬層
または液体展開層の間、試薬層と液体展ｒＭ層の間、ま
たは第二試薬層と第一試薬層の間に、さらにろ過層を設
けてもよい。

本発明により製造される乾式分析要素において基質は二
つ以上のＪｌ！！（例えば　試薬層と液体展開層、検出
層と試薬層、あるいは第二試薬層と第一試薬層、第一試
薬層と液体展開層）に含有されてもよい、この場合に、
基質のそれぞれ一方を支持体から遠い層か支持体に近い
層のいずれかに、より多く分布させることもできる０本
発明においてピルビン酸オキシダーゼも二つ以上の層に
含有されてもよく（例えば試薬層と液体展開層、検出層
と試薬層、あるいは第二試薬層と第一試薬層、第一試薬
層と液体展開層）、この場合支持体から遠い層か支持体
に近い層のいずれかにより多く分布させることもできる
。

本発明で製造される乾式分析要素に用いることができる
光透過性・水不透過性支持体の例としては、ポリエチレ
ンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボネー
ト、ポリスチレン、セルロースエステル（例、セルロー
ストリアセテート、セルロースアセテート１０ビオネー
ト等）等のポリマーからなる厚さ約５０μｌから約Ｌｘ
ａ、好ましくは約　８０ＡＡＩＩから約３００μｌの範
囲のフィルムもしくはシート状の透明支持体を挙げるこ
とができる。　これら支持体の表面には必要により下塗
層を設けて、支持体の上に設けられる検出層あるいはそ
の他の層と支持体との接着を強固なものにすることがで
きる。また、下塗層の代りに、支持体の表面に物理的（
たとえばグロー放電、コロナ放電）あるいは化学的な活
性化処理を施して接着力の向上を図ってもよい。

本発明で製造される一体型多層分析要素には、光透過性
・水不透過性支持体の上に（場合によっては下塗層等の
他の層を介して）検出層が設けられる０本発明で製造さ
れる乾式分析要素に備えられる検出層は親水性結合剤よ
りなる層、すなわち水を吸収して膨潤する親水性ポリマ
ーを層形成成分とする層であることが好ましい。

検出層に用いることができる親水性ポリマーは、一般に
は水吸収時のＶ１５潤率が３０℃で約１．５から２０、
好ましくは約２．５から１５の範囲の天然または合成親
水性ポリマーである。そのような親水性ポリマーの例と
しては、ゼラチン（例、アルカリ処理ゼラチン、酸処理
ゼラチン、脱イオンゼラチン等）、ゼラチン誘導体（Ｐ
Ａ、フタル１ヒゼラチン等）、アガロース、プルラン、
プルラン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン等をあげることができる
。

検出層の乾燥時の厚さは約１μ肩から約１００μｌの範
囲であることが好ましく、より好ましくは約３μｌから
約３０μｓの範囲である。さらに検出層には、必要に応
じて界面活性（カチオン性、両性、又は、非イオン性や
緩衝剤を含有させることもできる。

検出層の上には、場合によっては光道へい層、ｙ’３１
４Ｎ、試薬層等の層を介して、展ｒＭ層を接着し債層す
るための接着層を設けてもよい、接着層は水で湿潤して
いるとき、または水を含んで膨潤したときに展開層を接
着することができるような親水性ポリマーからなること
が好ましい、接着層に用いることができる親水性ポリマ
ーの例としては、検出層に用いられると同様な親水性ポ
リマーがあげられる。これらのうちではゼラチン、ゼラ
チン誘導体、ポリアクリルアミド専が好ましい、接着層
の乾燥！厚は一般に約０．５μｌから約２０μｌ、好ま
しくは約１μｌから約１０μｌの範囲である。

なお、接着層は検出層上以外にも、他の眉間の接着力を
向上させるため所望の層上に設けてもよい。

接−１１は親水性ポリマーと、必要によって加えられる
界面活性剤等を含む水溶液を公知の方法で、検出層や試
薬、Ｉ！！１等の上に塗布する方法などにより設けるこ
とができる。

本発明で製造される乾式分析要素の試薬層には、親水性
ポリマー、緩衝剤あるいは光遮蔽性（反射性または吸収
性）微粒子等を必要に応じて含有させることができる。

本発明で製造される乾式分析要素の試薬層に含有させる
ことができる親水性ポリマーの例としては、澱粉、セル
ロース、アガロース、ゼラチンおよびこれらの誘導体（
例、ヒドロキシメチル１ヒおよびヒドロキシプロピル化
等）、アクリルアミド重合体、アクリルアミドと各種ビ
ニル性モノマーとの共重合体、ポリビニルアルコール、
ビニルピロリドンと各種ビニル性モノマーとの共重合体
、アクリレート重合体およびアクリレ−１〜と各種ビニ
ル性モノマーとの共重合体等を挙げることができる。上
記親水性ポリマーのうちではポリビニルアルコール、ビ
ニルピロリドンｆｆｌα体、アクリルアミド重合体また
はセルロース誘導体が好ましい。

本発明で製造される乾式分析要素の試薬層に含有させる
ことができる＆１衝剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩
、燐酸塩やグツド（Ｇｏｏｄ）の緩衝剤などの公知のＭ
街剤を挙げることができる。

これらのｇｗ剤はｒ蛋白質・酵素の基礎実験法１（堀尾
武−他著、甫江堂、１９８１）等の公知文献を参考にし
て選択し、使用することができる。

本発明で製造される乾式分析要素の検出層または試薬層
にはさらに後述する光遮蔽性粒子を含有させることもで
きる（ただし、アスパラギン酸をこの層の塗布組成物に
は含まない）。

光遮蔽層は、皮膜形成能を有する親水性ポリマーをバイ
ンダーとして、光反射性微粒子が分散されている水浸透
性の層であることが好ましい、光反射性微粒子は、検出
層に生じた検出可能な変化（色変化、発色等）を光透過
性を有する支持体側から反射測光する際に、ｌ１ＪｔＩ
７ｒＩ層に点着供給された水性液体の色、特に試料が全
血である場合のヘモグロビンの赤色笠を遮蔽するととも
に光反射層または背景層としてもｉ能する。

光反射性を有する微粒子の例としては、顔ｒ＃微粒子た
とえば二酸化チタン微粒子（ルチル型、アナターゼ型ま
たはブルツカイト型の、粒子径が約０．１μｌから約１
．２μｌの微結晶粒子等）、硫酸バリウム微粒子や、ア
ルミニウム微粒子等を挙げることができる。これらのう
ちでは二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子が好ま
しい、特に。

好ましいのは、ルチル型二酸化チタン微粒子である。

皮膜形成能を有する親水性ポリマーバインダーの例とし
ては、前述の検出層の製造に用いられる親水性ポリマー
のほかに弱視水性の再生セルロース、セルロースアセテ
ート等を挙げることができ、これらのうちではゼラチン
、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好ましい、
なお、ゼラチン、ゼラチン誘導体には公知の硬膜剤を添
加することができる。

光遮蔽層は、光遮蔽性微粒子と親水性ポリマーとの水性
分散液を公知の方法により検出層、試薬層等の上に塗布
し屹殻することにより設けることができる（ただし、ア
スパラギン酸をこの層の塗布組成物には含まない）。

本発明において、必要に応じ展開層中にも上記のごとき
光遮蔽性微粒子を含有させてもよい（ただし、アスパラ
ギン酸をこの層の塗布組成物には含まない）。

展開層は、液体計量作用を有する展開層であることが好
ましい、液体計量作用を有するとは、その表面に点着供
給された液体試料を、その中に含有している部分を実質
的に偏在させることなく、横（水平）方向に単位面積当
りほぼ一定星の割合で広げる作用を有することである。

展開層の７トリツクスを構成する材料としては、２紙、
不織布、！ａ物生地（例、ブロード、ボブリン等の平＆
１等）、編物生地（例、トリコット編、ダブルトリコッ
ト編、ミラニーズ編等）、ガラス繊維ｒ紙、プラッシュ
ポリマーより形成されるメンブランフィルタ−１あるい
はポリマーミクロビーズ等からなる三次元格子状構造物
等を用いることができる。これらのうちでは、試薬類の
保持性の点て、織物生地および編物生地に代表される繊
維質層を用いることが好ましい、これらの詳細について
は特開昭５５−１６ノ１３５６号、同５７−６６３５９
号および同６０−２２２７６９号を参照すればよい。

本発明で製造される乾式分析要素に用いることができる
織物生地または編物生地は水洗等の脱脂処理により少な
くとも糸、Ｑ物あるいは編物の製造時に付着した油脂類
が実質的に除去されていることが好ましい。

本発明で′！Ａ遺される一体Ｍ１多層分析要素は、−通
約１５Ｊ１１から約３０Ｊ１１の正方形またはほぼ同サ
イズ円形等の小片に裁断し、特開昭５７−６３４５２号
、特開昭５４−１５６０７９号、実開昭５６−１２５４
２４号、実開昭５８−３２３５０号および特表昭５８−
５０１１４４号各公報等に開示のスライド枠等に納めて
分析スライドとして用いるのが製造、包装、輸送、保存
および測定操体等の全ての観点で好ましい。

本発明で製造される乾式分析要素は、約５μｌから約３
０μｌ、好ましくは約８μｌから約１５μｌの水性液体
試料を展開層に点着供給し、必要に応じて約　２０℃か
ら約４５℃の範囲の実質的に一定の温度でインキュベー
ションする。その後。

一方の側から（一体型多層分析要素においては光透過性
支持体側から）乾式分析要素内の色変化、発色等の検出
可能な変化を反射測光し比色法の原理により液体試料中
の測定対象成分を分析する。

以下に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

［実施例１コ ゼラチン下塗りされている厚さ１８０μｍのポリエチレ
ンテレフタシー１〜無色透明平滑フィルム上に下記の組
成（ａ）の水溶液を乾燥後の厚さが１５μｍになるよう
に塗布（１５６ｃｃ／ｍ２）　Ｌ、屹燥する（試薬層）
。

（ａ） ゼラチン　　　　　　　　　　　１９０ｇ界面活性剤　
　　　　　　　　　　１５ｇ（オリン社製５ｕｒｆａｃ
ｔａｎｔ　１０Ｇ　）ペルオキシダーゼ　　　　　　　
１５万ＩＵＦＡＤ　　　　　　　　　　　　　２２０ｍ
ｇＴ　Ｐ　Ｐ　　　　　　　　　　　　　９３０　ｍ　
ｇピルビン酸オキシダーゼ　　　　１３万ＩＵ色素（下
記構造）　　　　　　　　　　２．８ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　１３６０ｇ（希Ｎ　ａ　Ｏ１１
溶液でｐｌ（を７，５に調整する）色素： ２−（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４−ｈｙｄｒｏｘ
ｙｐｈｅｎｙｌ）−４−ｂｅｎｚｙｌ−５−（４−ｄｉ
ｍｅｔｈｙａｍｉｎｏｐｌｔｅｎｙｌ）ｉｏ＋１ｄａｚ
ｏｌｅ 次に上記試薬層上に下記の組成（ｂ）の水溶液を乾燥後
の厚さが３μｍになるように塗布しく６３ＣａＪｔａ２
）　、乾燥する。（接着層）（ｂ） ゼラチン　　　　　　　　　　　　３０ｇ界面活性剤　
　　　　　　　　　　　３．２ｇ（オリン社製５ｕｒｆ
ａｃｔａｎｔ　ＩＯＧ　）Ｌ−アスパラギン酸ナトリウ
ム　　　１．９ｇ水　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　６００ｇ次に上記ゼラチン層上に約３０１７ｍ２
の割合で水を全面に供給して湿潤させた後、ポリエステ
ル製のブロード織物（空げき偉績９，８μｌ／ｍ２）を
軽く圧力をかけてラミネートし、乾燥させた。

次にこの布に下記のｍ成（（）の水溶液３１００　ｃｃ
／　ｍ　２の割合でほぼ均一に塗布し、乾燥させ、ＡＳ
Ｔ活性測定用一体型多層分析要素を作製した。

（ｃ） トリスヒドロキシメチルアミノメタン ３．７ｇ リン酸１カリウム　　　　　　　　　　４．４ｇα−ケ
トゲルタールｌｉ！２４．０ｇ ヒドロキシプロピルメチルセルロース＊８．７ｇ 界面活性剤木本　　　　　　　　　　　２７　ｇ酸化チ
タン（ルチル型）７３ｇ 塩化マグネシウム　　　　　　　　　　２．３ｇオキザ
ロＰｔｌ：酸デカルボキシラーゼ　２０万ＩＵアスコル
ビン酸オキシダーゼ　　　１８万ＩＵ水　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　８８０　ｇ（希Ｎ　ａ　Ｏ
Ｈ溶液でｐ　Ｈを７．５に調：する）＊信越化学（株）
製　メトローズ９０３Ｈ１００車車ポリオキシエチレン
オクチルフエニルエーテル比較のために、上記組成（ｂ
）の溶液の代わりに下記組成（ｌＩ’　）の溶液を、上
記組成（ｃ）の溶液の代わりに下記組成（Ｃｏ）の溶液
を用いて、ＡＳＴ活性測定用分析要素を作製した。

（ｂｏ） ゼラチン　　　　　　　　　　　　３０ｇ界面活性剤　
　　　　　　　　　　　３．２ｇ（オリン社製Ｓｕｒｆ
ａｃｔａｎｔ　ＩＯＧ　）水　　　　　　　　　　　　
　　　　　　６００ｇ（希ＮａＯＨ溶液でＪ）Ｈを７．
０に．ＦＩｍする）（Ｃｏ） １へリスヒドロキシメチルアミノメタン３、７ｇ リン酸１カリウム　　　　　　　　　　４．４ｇαーク
トグルタール酸　　　　　　　４．０　ｇし一アスパラ
ギン酸ナトリウム　　　１９ｇヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース１８．７ｇ界面活性剤＊京　・　　　　　
　　　　２７ｇ酸化チタン（ルチル型）７３ｇ 塩化マグネシウム　　　　　　　　　　２．３ｇオキザ
ロ酢酸デカルボキシラーゼ　２０万ＩＵアスコルビン酸
オキシダーゼ　　　１８万ＩＵ水　　　　　　　　　　
　　　　　　　　８８０　ｇ（希ＮａＯＨ溶液でｐＨを
７．５に調整する）＊信越化学（株）製　メトローズ９
０　Ｓ　０　１００車車ポリオキシエチレンオクチルフ
エニルエーテル本発明の実施例および比較用の分析要素
に第１表に示すごとく＾ＳＴ活性値の異なるコントロー
ル血清（市販コントロール血清またはそれに必要に応じ
てＡＳＴを添加したもの）を、１０ｇ１点着し、分析要
素を密閉容器中で３７℃に保った際の、２、５分後から
４分後の間の反射濃度を波長６４０ｎｍで測定し、１分
あたりの反射濃度変化を求め、あらかじめ作成しておい
た検量線からＡＳＴ活性を算出した．この操作をそれぞ
れ２０回繰り返し、￥；：動係数（％）を求めた．その
結果を第１表に示す。

第１表 第１表から明らかなごとく、本発明の分析要素は比較用
の分析要素に比べて、ＡＳＴ活性測定値の変動が小さく
、経つ返し再現性が良い。

［実施例２］ 実施例１および比軟例に従って本発明および比較用の分
析要素を作製する際に、展開層をラミネートした後に液
（ｃ）および（Ｃ′）を調製後０分、７分または１５分
互いたものを用いた以外、実施例１および比軟例と同様
にして、本発明および比較用の分析要素を作製した（そ
れぞれ実施例２および比軟例２とする）、実施例２およ
び比軟例２のＡＳＴ活性分析要素に、第２表に示すごと
く活性値の異なる管理血清を１０μρ点着し、密閉容コ
＝中で３７℃に保った際の、２．５分段から４分後の間
の１分あたりの反射濃度（波長６４０ｎｍ）変化を測定
し、あらかじめ作成しておいた検量線からＡＳＴ活性を
算出しな、その結果を第２表に示す。

第２表から明らかなごとく、本発明の製造方法によると
、比軟例２の場合に比べて、展開層塗布液の放置による
Ｍ’Ｓを受けにくい。

出願人　　富士写真フィルム株式会社 昭和ｊ／年参月７ρ日 １、事件の表示　　　　昭和４７年待願第３４８１１号
２、発明の名称　　酵素活性測定用乾式分析要素の製造
方法 ３、補正をする者 事件との関係　　　　　　　得許出願人晩 ４、補正の対象　　明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ５、補正の内容 ／）明細８第７は−ジ第１行の 「Ｐ０４″′」を ｒＰＯ＋−Ｊ に訂正する。

２）同第７ページ第λ行の ｒＨＰＯ４”　　　Ｊ　　　ｔ ｒＨＰＯ４Ｊに、 ｒ　Ｈ２Ｐ　Ｏ４’　Ｊを ｒＨ２ＰＯ４Ｊ に訂正する。

３）同第７に一ジ第ｉｔ行の ［Ｃａ”　、　Ｍｇ”　Ｊを 「Ｃａ＋＋９Ｍｇ＋＋」 に訂正する。

４Ｌ）同第７に−ジ第７９’行の ［Ｃｏ”　、Ｍｎ”　Ｊを 「ｃｏ＋＋１Ｍｎ＋＋」 に訂正する。

ｊ）同第１ｊｋ−ジ第λ行 「界面活性」の仮に 「削」 を補う。

６）同第１！ページ第３行 「非イオン性」の後に 「）」 を補う。

７）同第２−ページ第１り行 「７．ｊＪを １Ｍ、　ｊＪ に訂正する。

、ｒ）　同第２３に一ジ第３行 ｒｔｈｙＪの後に 「ｔ」 ？挿入する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも二つの水浸透性層を有し、水浸透性層
   の少なくとも一つは多孔性液体展開層であり、水浸透性
   層の少なくとも一つにはアスパラギン酸またはその塩を
   含み、水浸透性層の少なくとも一つに酸化チタン粒子を
   含み、液体中のアスパラギンアミノトランスフェラーゼ
   活性測定に適する乾式液体分析要素の製造方法であって
   、酸化チタン粒子を含んでアスパラギン酸またはその塩
   を含まない液組成物を用いて酸化チタン粒子を含む層を
   形成し、アスパラギン酸またはその塩を含んで酸化チタ
   ン粒子を含まない液組成物を用いてアスパラギン酸また
   はその塩を含む層を形成することを特徴とする、液体中
   のアミノトランスフェラーゼ活性測定に適する乾式液体
   分析要素の製造方法。
2. （２）乾式液体分析要素の少なくとも二つの水浸透性層
   のうち少なくとも一つが多孔性液体展開層であることを
   特徴とする特許請求の範囲（１）の製造方法。