JPS5920853A - 多層分析材料 - Google Patents
多層分析材料Info
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- JPS5920853A JPS5920853A JP13175082A JP13175082A JPS5920853A JP S5920853 A JPS5920853 A JP S5920853A JP 13175082 A JP13175082 A JP 13175082A JP 13175082 A JP13175082 A JP 13175082A JP S5920853 A JPS5920853 A JP S5920853A
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
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- G01N33/526—Multi-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
本発明は多層分析材料に関し、ｌ庁に液体試料中の過酸
化水素の定器を実施する場合、′！Ｌｌこけ特定の成分
をオキシダーゼ酵素反応系に導入し生成した過酸化水素
の定ターにより液体試料中の特定の成分の斧用を実施す
る場合に有効なペルオキシダーゼを含む過酸化水素検出
呈色指示薬系を含む多層分析月別の改良に関するもので
ある。 オキシダーゼ酵素を用い、被検物質又Ｖ、Ｊその反応生
成物を酸化すると同時に生成されるＩ■２０□を適当な
手段により定ｍする定用が、目１．近年まず甘す重要に
なってきている。その理１山はペルオキシダーゼを用い
て色素の生成反応に導き、比色的にｌ−１２０２を足部
する方法をｄ、じめとして、電極反応などの手段によシ
Ｉ■２０□を定んする方法など１１２０□の定珀は確実
に実施できるからである。 このような原理に基づく、比色定ｍ法としては。 トラインダ＝（Ｐ 、Ｔｒ １ｎ（ｌｅ ｒ ）が導入
した試薬糸を用いる方法１１Ａｎｎ、ＣＩ ｉｎ、Ｂｉ
ｏｃｌ＋ｃｍ、Ｊｌ。 、２＆ −，２７（／りｔり））がよく知られている。 この方法は、オキシダーゼ酵素によって生成する■−］
２０□にペルオキシダーゼをｆｌｉ用させ、４ｔ−アミ
ノアンチピリン（寸たけその随縁体）とフェノール類（
またはナフトール顛）との酸化力ツノリング反応を起さ
せ、生成した色素を足出するものである。この反応系の
利点は、メキゾターゼ酵累の稍ρを変えても向し検出系
を利用することができる点にあり、広く、各種の分析項
目への応用が検削されている。これらのうち、臨床化学
検査上特に重要なものｉ、Ｊ：、グルコース刊キシダー
ゼ、コレステロールオギシダーゼ、ウリカーゼ、グリセ
ロールオキシダーセ、フオスフォグルコースオキシダー
ゼなどである。 これらのオキシダーゼ酵素と生成する■ｌ２ｏ２の検出
系とを一体型の多層分析フィルムや、Ｐ紙片等への含浸
ストリソプスの形体とした臨床検査用分析利料も広く実
用化されている。 これらの分析月料は、被検物ａの検出に直接間んする試
薬層を含有する組成物が、支持体となるｐ紙状物や、フ
ィルム上の支持体に、含浸あるいは塗布された型体をし
ている。 一体型の多Ｈマ分ＩＪｉンイルノ、は種々の（１１ν成
をしており、必要に応じて、各錘の機能層が、積層され
７ｈ形で組み込凍れている。これらの機能層として公知
のものとしてＶｉ、液体試別の均一展開の目的とした展
開層（特公昭ｊ３−．２／ 、４７７．１時１（４昭Ｊ
＃−／＆グ３ｔＡ１．反反射短足白色敗乱面及び、土層
にある有色成分と生成された横出用色累とを光学的に隔
離する為の光ｄ Ｗ＋ｘＲ＃ （’Ｆｂ公昭ｊ？−，ａ
／１７７、勃開閉！ｒ／−１ＬｔＯ／９／、ｌ持開昭３
３−．２乙り、２ｇ、的開閉Ｊ−Ｊ−−λｚ１ぴ、ｔす
もｒｊＦ〕ｌｌ（”＋ ｒ Ｊ−７６グ３５乙等）、物
質の選択的な拡散を目的としたバリヤ一層（特［Ｇｉ９
昭！、２−３４＃ざ）才だ１ｌ−１：＠体遮断層（特願
昭ｊ乙−／７乙Ｊ７グ、特願昭、５’＆−／７乙、２７
Ｊ）、生成色素の媒染による効率的な検出を目的とし
た検出層（特開昭ｊ／−４１０／７／、特開昭、ｔ３−
／３１０どり）。 生成色素の他層への移動の防止を目的としたマイグレー
ンヨン防止層（ｌ特開昭、ｔ４’−，２９７００）。 層間の接着団改良を目的とした接着層（特開昭ｊｊ−１
ｔｔＩ−３ｊ６等）などがある。 血液（全血、血漿、−または血清）試料の保恒剤として
弗化ナトリウム（ＮａＦｌが用いられており、これによ
シ血液試利は約７０日はどの長時間にわたシ保存するこ
とができる。ＮａＦ は血液試料／ｍＪ ”４り約λＩ
］】７から約１０ｓｎｆ／の範囲で含有されていること
が多い。ＮａＦ が含有されている血液試料を米国特
許第３タタ、２／！♂号明細■実施例３に開示のクルコ
ース定角用多層分析フィルムを用いて定縫したところ、
血清”Ｊｌ ’３リク゛ルコース含有創、２００ ｍｆ
’のレベルの試料についてＮａＦ が血清／ｓｎｌ当シ
ー、θ１１】２添加された場合、測定されたグルコース
濃度が、２０ ｍＶ／ｄｉないし３０ ｍ ｒ／ｄ ｌ
低い値になる干渉作用の出現が見出された。このＮ、Ｉ
Ｆ による測定ｆｌＨの低下という干渉作用を解決す
るために特公昭ｊ７−２１．２７７で提案されたグルコ
ース定律用一体型多層分析フィルムにおいては、試薬層
のｐｉｌを使用条件下においてｊ、Ｏないしょ、乙に維
持するｉ’ ｆｆ＋酸として３．３−ジメチルグルタル
酸、こはく酸。 咬だはりんご酸をグルコースオキシグーゼ、ベルオキシ
ダーゼ、グーアミノアンチピリンおよび１７−シヒドロ
キシナフクレンを生成、分として含有する試薬層に配合
した多層分街フィルムの具体例（実施例／、 、２．＆
ないし／／ｌがあげられている。 本発明者らは／ｌ’ケ公昭ｊ７−．２Ｊ、２７７で提案
された前述の具体例について、また提案されたｐ Ｈ調
節された試薬層を織物展開層を有する特開昭ｊｊ−／１
，４／３夕２で提案されたグルコース定量用多層分析フ
ィルム、および特願昭Ｋ１−９３ｔ３１で提案されてい
る織物展開層を有しグルコースオキシダーゼを接着層重
たは光遮蔽層に配合したクルコース定ｍ用多層分析フィ
ルムに適用したものについて調べたところ、血欣中に保
恒剤とし−Ｃ添加されるＮａＦ が約＜ｉｒｎ ｆ ７
ｍ ７３以下の場合には前述の測定値の低下という干渉
作用は比較的少ないが、ＮａＦ が約！ ｍ ７７ｍ
／をこえる領域では両足値の低下という干渉作用が相
変らず著しいことを見出した。さらにこの多層分析フィ
ルムにおいてｔよＮａＦ 無添加寸たは約コｍｒ／ｍＪ
以下のＮａＦ添加阜の場合に測定値がバラつき不安定で
あるという新たな問題が見出された。さらにＮａｌ”
による測定値の低下という干渉作用はクルコースオキ
シターゼとペルオキシダーゼを含むクルコース定帛用多
層分析フィルムのみに生じる問題ではなく。 −・般にペルオキシダーゼを含む多層分析フィルム全般
に生じる問題であることも見出された。 本発明者らは血液試料に保恒剤として添加されるＮａＦ
による測定（直の低下という干渉作用を解消するよ
りよい方法を鋭意研究したところ、グルコース定ｔＡ用
多層分析フィルムにおいてペルオキシダーゼを含む試薬
層に酢酸カルシウムを添加することによりＮａＦ に
よる干渉作用が広範囲のＮ、ｌｌｒ 添加にに対して有
効に解消されることを見出し１本発明に到達した。 本発明の目的はペルオキシダーゼを含むＨ２０２検出呈
色試薬組成物を含む試薬層を有する多層分析利料におい
て、ＮａＦ による測定値の低下として現われる干渉
作用がなくかつペルオキシダーゼの活性が高い、改良さ
れた多層分析月料を提供することである。 本発明の他の目的はオキ／ダーゼおよびベルオキンター
士を含むＩ−１２０２検出呈色試薬組成物を含む試樺り
ｉ′４＋を有する多層分ｖ１月別において、ＮａＩ”に
よる測定値の低下どして」われる干渉作用がなくかつオ
キ／ダーゼおよびベルオキシダーゼの活性が高い、改良
された多層分析拐料を提供することである。 本発明の他の目的はオキ／ダーゼおよびベルメキンクー
七を含むＨ２０２検出呈色試薬絹成物を含む試薬層を有
する多層分析ｔ」旧において、ＮａＦによるσ１り定値
の低下として坊われる干渉作用がなく、測定領域が拡大
され、かつオキ／ダーゼおよびベル側キ／クーセの活１
ｉｔ−か高い、改良された多層分’＝ｈＩＡｇ料を提供
すること１′ある。 本発明の他の目的はクルコースメキ／ターセおよ０ペル
メ八′ンター七を含む■１２０２杉１出呈色試薬絹成物
を含む試薬層庖南するグルコース定聞用多層分枦月別に
おいて、ＮａＦ による測定値の低下どして世われる
干渉作用がなく、測定領域が拡大され、かつグルコース
刊キシターゼおよびペルオキシダーゼの活性が高い、改
良されたグルコース定地用多層分析フィルムを提供する
ことである。 本発明は。 （１） 水不浸透註光透過ロミ支持体の上に、少なく
ともベルオキン〉−ゼを含む試薬層、および多孔１牛展
開層の二つの層を少々くとも有し、この順に積層されで
なる多層分析拐料においで、前記支持体以外の少なくと
も一つの鳩にＦＣ）イオンとの間に、２ｒ０Ｃにおりる
水１ｏｏ１に対するＭ Ｍ ＩｆｆがＯ，，２９以下の
水に餌Ｃ溶殴の塩を形成しうる陽イオンを包む化合物か
ｏ 、／ｍｅｑ／ｍ から／ｅｑ／＋ｒ＋２の範凹の
割侶で含有されていることを行ωとする多層分析イＡオ
ーｌであり、子の好寸し７い火ｈｌｕ態様として Ｊ３ａＳ１６■からなる群から選ばれた少なくとも７種
である（１）に記載の多層分析月別。 （３）前記試薬層にペルオキシダーゼとともに少なくと
もグーアミノアンチピリン甘たはその誘導体が名市沁れ
る（ｏ−ｉたは（２）に記載の多ル１分析月利。 （４）１１１Ｊ紀試薬層またり、他のいずれか一つの層
にメキシダーゼが含有されている（１）ないしく３）に
配： ｉｉ＆。 の多Ｊｉり分析利料。 （ω 前８己オキシダーセがクリコし・−トメキシダー
ゼ、マレートオキ７ダーゼ、グルコース刊キノダーゼ、
ヘギソースオキシダーゼ、コレステロールオキシター−
ゼ、Ｌグルコノラタトンメキシターセ、カラクト−スメ
キシダーゼ、虚−リンチンメキゾダーゼ、ピルベートオ
Ｗシダーゼ、ウリカーゼ。 アスコルベートオ牒ンダーゼ、ラクテートオキシグー七
、グリシンオキシクー−ゼ、グリセロール刊キソダーゼ
からなる群から選ばれた７種である（４）に記載の多層
分析相打。 （６）前０己オ片ンダーゼがグルコースオキシダーゼで
ある（４）に記載の多層分析月利。 （７） 前記オキシダーゼがコレステロールオキ７り
−ゼである（４）に記載の多層分り１制料がある。 本発明の多層分析月イ・１における元透過四水不浸透注
支持体ｉＩＪ、ｅ、長約、２００．１ 、ｌ］から約５
’ ００ ｎ ｍの範囲の少々くともあるＩｌｉα囲の
波長領域の１［Ｌ磁波（紫外紳、近紫外゛線、可視光、
または近赤外線）を約９０％以上、１１１才しくは約ｔ
、ｓ′％以上透過させっことができ、実質的に水をその
内部に浸透込せるヒがなく、かつその表面に設けられる
後述の試？、ｑ層止たけ下塗層に含有沁れるバせンダー
ポリマー甘た（・ま他の成分と実質的に化学反応を生じ
８せない素イシ１からなる。前述の規準にあうかきり支
１１１一体として１１４いることができる累月は何でも
よい。 支持体どじ−〔ｔよ、ポリエチレンテレノタレー）・。 ヒスフェノールＡのポリカルボネート、ボーリメグール
メタク！Ｊ Ｖ −ト、ホＩＪスチレン、セルロースエ
ステル（例、セルロースジアセテート、セルローストす
°アセデート、セルロースアセテートプロビネ−１・）
などのポリマーからなる透明シートｔたはフィルムや透
明ガラス板などで厚さ約ｊ ＯノＩ Ｉｌｌから約λＩ
ｎ’ｌｌｌ、好ましくは約７０μ口１から約Ｏｊ ｍ
ｍ （７）範囲のものを用いることができる。 支持体の表面には試薬層（または他の機能層）を支持体
に一体に接着することを容易にする目的で公知の下塗層
を・設りるか、あるいは支持体の表面を公知の化学的処
理（例、酸処理、アルカリ処理）または物理化学的処理
（例、コロナ放１ｉ、処理。 グロー放電処理、紫外線照射処卯、火陥処理）を施すこ
とができる。 ′Ａ″−，発明の多層分析′Ａ７３別に用いられる少な
くともベルオキシターゼを含むｖＣ桑層とは少なくとも
ベルメキ／ダーゼを含む過酸化水紫検出用呈色指示薬組
成物（以下、Ｉ−１２０２呈色試条という。）を含む試
薬組成物が親、水四バイジターポリマーのマトリクスの
中に分散または溶解されてなる試薬層である。 Ｈ２Ｏ２呈色試薬はペルオキシダーゼ、およびペルオキ
シダーゼと過酸化水素の育在下で検出可能な変化（一般
に色濃度の変化またｔユ色相の変化）を起すインジケー
タ（７種類の化＠物またはｄ利τ以上の化合物の相合ぜ
からなるインジケータ）とからなる。インジケータとし
て （１） 「、７’１ｎｎ、Ｃ１ｉｎ、Ｄｉｏｃｈｅｍ
、Ｊ 、Ａ 、、２４ｔ−，２７（／Ｐ４り）、米国性
［Ｊ ｙ ｙ ａ ／ ｓ ｇ。 特公昭ｊ＜−グ！ｊタタ、特開昭、ｔ Ｊ／／、Ｆ ３
ｊに、 ％開閉！ｔ−／、２ｊｔ３７３．特願昭Ｊ−７
−ｔ、 、＜ ｏ を等に開示の１色原体としてグーア
ミノアンチピリン寸たけその誘導体とカプラーとしてフ
ェノール、ヲ＝フトール、ｔたけそれらのｉ！ｉ ｅＷ
１本の糸目−６贋せ。 グーアミノアンチピリン（ｔ−アミンーー、３−ジメチ
ルー／−フェニル−３−ビラソリンーｊ−オン）の誘導
体の例として、＜ｚ−アミノ−λ。 ３−ジメチル−／−（３−クロロフェニル）−３−ピラ
ゾリン−！−オン；ｔ−アミノー、２．３−ジメチル−
１−（、ｘ、ｔｘ、ｔ−ト’）クロロフェニル）−３−
ピラゾリン−３−オン；ゲーアミノーλ−メチル−３−
フェニル−／−（＋２，１．ｔ、＆−１−’Ｊ クロロ
フェニル） −３−ヒラソＩＪ ７− 、ｔ −オン、
グーアミノ−７−（４ｔ−アミノフェニル）＝２．３−
ジメチル−３−ピラゾリン−！−オン。 グーアミノ−ｌ−〔グー（ジエチルアミノ）フエニル）
−，２，Ｊ−ジメチル−３−ピラゾリン−ｊ−オン、Ｉ
ｌ−アミノ−７−（ｐ−アセトアミドフェニル）−一、
３−ジメチルー３−ビラプリン−よ−オン、４１−−ア
ミノ−／−（アミノーーーエチルフェニル）−一、３−
ジメチル−Ｊ −ヒフ ソリンーｊ−オン、４ｔ−アミ
ノ−／−（アミノ−グーメチルフェニル）−２，３−’
；メチルー３−ピラゾリンーｊ−オンをあけることがで
きる。グーアミノアンチピリンおよびそのｇｌ導１本は
いす′れもその酸伺加塩（例、塩化水素酸塩）としても
用いることができる。 ナフトールとして、／−ナフト−ル１．２−ナフトール
をあげることができる。 フェノール誘導体としてカテコール、レゾルシン、ピロ
ガロール、フロログルシン、Ｑ−，Ｈ１−。 捷たはｐ−クレゾール、 ０− 、 Ｈｌ −、または
ｐ−メトキシフェノール、ｏ−、ｍ−、ｔたはｐ−スル
ホフェノール％ ０−またはｐ−クロロフェノールをあ
けることができる。 ナフトール誘導体として、ｌ、７−シヒドロキシナフタ
レン、Ｖ−メトキシ−／−ナフトールをあげることがで
きる。 フェノール誘導体およびナフトール誘導体としてとれら
の他にＣ−Ｅ 、Ｋ −Ｍｅｅ ｓ＋ 、’ｌ’ 、Ｈ
。 ＪａｌｎｅＦｉ ＪＩＢ Ｉ’Ｔｂｅ ’Ｉ’ｈｅｏｒ
ｙ ｏｒ ｔｂｅｐｈｏｔｏｇｒａｐ＋＋！ｃ ｐ
ｒｏｃｅｓｓＪ’ｌ”ｂｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃ
ｍｉｌｌａｎ Ｃｏ、、 Ｎｅｗ ’１’ｏｒｋ。 １５’７４年発行）第３１７−３Ｙｔページに記載の化
合物も用いることができる。 これらの組合せのうちで好ましい組合ぜはグーアミノア
ンチピリンと／、７−シヒドロキシナフタレンの組合せ
、グーアミノ−λ、３−ジメヂルー／ −（，２，４ｔ
Ａ−）リクロロフェニル）−３−ピラゾリン−３−オン
と／、７−シヒドロキシナフタレンの組合せである。 （２） ＩＦＶ公昭！ｒｊ＋−，２ｊざグＯに開示の
色原体としてｔ−ピラゾロン訴動体またはＦ−、、ｌキ
ザゾロン誘導体と、カプラーとしてフェノール類、ナフ
トール類型たはその誘導体との組合せ。 （３）特開昭ゲタ−７１４ｔりｇ７に開示の色原体とし
でのグーアミノピラゾロン肋導体（例、／−（４７−ス
ルホフェニル）−，２−メチル−３−フェニル−グーア
ミノ−３−ピラゾリン−よ−メン）とカプラーとしての
フェノール、フェノール訪導体１寸たりよ多価フェノー
ル（例、カテコール、レソ゛ルシン′、ヒドロキノン、
クレソ゛−ル、グアヤコール、ピロガロール、オルシノ
ール、没食子酸）との組合せ。 （４）特公昭Ｊ′７−Ｊｔ！ｒｌ？に開示の染料形成物
質トシてｌ）−トルエンスルホニルヒドラジノ−ベンゾ
チアゾリウム、キノリウム、寸たはピリジニウム肋導体
と、カプラーとしてフェノール顛、ナフ１−ル類、ぞれ
らの誘導体、芳香族アミン随または反応上メチレン化合
物との絹合せ、“または染料前駆体としてトリアリール
イミダゾールｈロ坪ン体（単独で用いられる）。 （５）を特願昭！１−２１／、！ｒｌｆに開示の水素供
力、７体（色原体）としてＶ−アミノアンチピリンｐ。 １１、−１紅換アンチピリン類、Ｎ、Ｎ−ジ置換−〇−
またばｐ−フェニレンジアミン類、、２−ヒドラジノベ
ンゾチアゾリン類またはｐ−か
化水素の定器を実施する場合、′！Ｌｌこけ特定の成分
をオキシダーゼ酵素反応系に導入し生成した過酸化水素
の定ターにより液体試料中の特定の成分の斧用を実施す
る場合に有効なペルオキシダーゼを含む過酸化水素検出
呈色指示薬系を含む多層分析月別の改良に関するもので
ある。 オキシダーゼ酵素を用い、被検物質又Ｖ、Ｊその反応生
成物を酸化すると同時に生成されるＩ■２０□を適当な
手段により定ｍする定用が、目１．近年まず甘す重要に
なってきている。その理１山はペルオキシダーゼを用い
て色素の生成反応に導き、比色的にｌ−１２０２を足部
する方法をｄ、じめとして、電極反応などの手段によシ
Ｉ■２０□を定んする方法など１１２０□の定珀は確実
に実施できるからである。 このような原理に基づく、比色定ｍ法としては。 トラインダ＝（Ｐ 、Ｔｒ １ｎ（ｌｅ ｒ ）が導入
した試薬糸を用いる方法１１Ａｎｎ、ＣＩ ｉｎ、Ｂｉ
ｏｃｌ＋ｃｍ、Ｊｌ。 、２＆ −，２７（／りｔり））がよく知られている。 この方法は、オキシダーゼ酵素によって生成する■−］
２０□にペルオキシダーゼをｆｌｉ用させ、４ｔ−アミ
ノアンチピリン（寸たけその随縁体）とフェノール類（
またはナフトール顛）との酸化力ツノリング反応を起さ
せ、生成した色素を足出するものである。この反応系の
利点は、メキゾターゼ酵累の稍ρを変えても向し検出系
を利用することができる点にあり、広く、各種の分析項
目への応用が検削されている。これらのうち、臨床化学
検査上特に重要なものｉ、Ｊ：、グルコース刊キシダー
ゼ、コレステロールオギシダーゼ、ウリカーゼ、グリセ
ロールオキシダーセ、フオスフォグルコースオキシダー
ゼなどである。 これらのオキシダーゼ酵素と生成する■ｌ２ｏ２の検出
系とを一体型の多層分析フィルムや、Ｐ紙片等への含浸
ストリソプスの形体とした臨床検査用分析利料も広く実
用化されている。 これらの分析月料は、被検物ａの検出に直接間んする試
薬層を含有する組成物が、支持体となるｐ紙状物や、フ
ィルム上の支持体に、含浸あるいは塗布された型体をし
ている。 一体型の多Ｈマ分ＩＪｉンイルノ、は種々の（１１ν成
をしており、必要に応じて、各錘の機能層が、積層され
７ｈ形で組み込凍れている。これらの機能層として公知
のものとしてＶｉ、液体試別の均一展開の目的とした展
開層（特公昭ｊ３−．２／ 、４７７．１時１（４昭Ｊ
＃−／＆グ３ｔＡ１．反反射短足白色敗乱面及び、土層
にある有色成分と生成された横出用色累とを光学的に隔
離する為の光ｄ Ｗ＋ｘＲ＃ （’Ｆｂ公昭ｊ？−，ａ
／１７７、勃開閉！ｒ／−１ＬｔＯ／９／、ｌ持開昭３
３−．２乙り、２ｇ、的開閉Ｊ−Ｊ−−λｚ１ぴ、ｔす
もｒｊＦ〕ｌｌ（”＋ ｒ Ｊ−７６グ３５乙等）、物
質の選択的な拡散を目的としたバリヤ一層（特［Ｇｉ９
昭！、２−３４＃ざ）才だ１ｌ−１：＠体遮断層（特願
昭ｊ乙−／７乙Ｊ７グ、特願昭、５’＆−／７乙、２７
Ｊ）、生成色素の媒染による効率的な検出を目的とし
た検出層（特開昭ｊ／−４１０／７／、特開昭、ｔ３−
／３１０どり）。 生成色素の他層への移動の防止を目的としたマイグレー
ンヨン防止層（ｌ特開昭、ｔ４’−，２９７００）。 層間の接着団改良を目的とした接着層（特開昭ｊｊ−１
ｔｔＩ−３ｊ６等）などがある。 血液（全血、血漿、−または血清）試料の保恒剤として
弗化ナトリウム（ＮａＦｌが用いられており、これによ
シ血液試利は約７０日はどの長時間にわたシ保存するこ
とができる。ＮａＦ は血液試料／ｍＪ ”４り約λＩ
］】７から約１０ｓｎｆ／の範囲で含有されていること
が多い。ＮａＦ が含有されている血液試料を米国特
許第３タタ、２／！♂号明細■実施例３に開示のクルコ
ース定角用多層分析フィルムを用いて定縫したところ、
血清”Ｊｌ ’３リク゛ルコース含有創、２００ ｍｆ
’のレベルの試料についてＮａＦ が血清／ｓｎｌ当シ
ー、θ１１】２添加された場合、測定されたグルコース
濃度が、２０ ｍＶ／ｄｉないし３０ ｍ ｒ／ｄ ｌ
低い値になる干渉作用の出現が見出された。このＮ、Ｉ
Ｆ による測定ｆｌＨの低下という干渉作用を解決す
るために特公昭ｊ７−２１．２７７で提案されたグルコ
ース定律用一体型多層分析フィルムにおいては、試薬層
のｐｉｌを使用条件下においてｊ、Ｏないしょ、乙に維
持するｉ’ ｆｆ＋酸として３．３−ジメチルグルタル
酸、こはく酸。 咬だはりんご酸をグルコースオキシグーゼ、ベルオキシ
ダーゼ、グーアミノアンチピリンおよび１７−シヒドロ
キシナフクレンを生成、分として含有する試薬層に配合
した多層分街フィルムの具体例（実施例／、 、２．＆
ないし／／ｌがあげられている。 本発明者らは／ｌ’ケ公昭ｊ７−．２Ｊ、２７７で提案
された前述の具体例について、また提案されたｐ Ｈ調
節された試薬層を織物展開層を有する特開昭ｊｊ−／１
，４／３夕２で提案されたグルコース定量用多層分析フ
ィルム、および特願昭Ｋ１−９３ｔ３１で提案されてい
る織物展開層を有しグルコースオキシダーゼを接着層重
たは光遮蔽層に配合したクルコース定ｍ用多層分析フィ
ルムに適用したものについて調べたところ、血欣中に保
恒剤とし−Ｃ添加されるＮａＦ が約＜ｉｒｎ ｆ ７
ｍ ７３以下の場合には前述の測定値の低下という干渉
作用は比較的少ないが、ＮａＦ が約！ ｍ ７７ｍ
／をこえる領域では両足値の低下という干渉作用が相
変らず著しいことを見出した。さらにこの多層分析フィ
ルムにおいてｔよＮａＦ 無添加寸たは約コｍｒ／ｍＪ
以下のＮａＦ添加阜の場合に測定値がバラつき不安定で
あるという新たな問題が見出された。さらにＮａｌ”
による測定値の低下という干渉作用はクルコースオキ
シターゼとペルオキシダーゼを含むクルコース定帛用多
層分析フィルムのみに生じる問題ではなく。 −・般にペルオキシダーゼを含む多層分析フィルム全般
に生じる問題であることも見出された。 本発明者らは血液試料に保恒剤として添加されるＮａＦ
による測定（直の低下という干渉作用を解消するよ
りよい方法を鋭意研究したところ、グルコース定ｔＡ用
多層分析フィルムにおいてペルオキシダーゼを含む試薬
層に酢酸カルシウムを添加することによりＮａＦ に
よる干渉作用が広範囲のＮ、ｌｌｒ 添加にに対して有
効に解消されることを見出し１本発明に到達した。 本発明の目的はペルオキシダーゼを含むＨ２０２検出呈
色試薬組成物を含む試薬層を有する多層分析利料におい
て、ＮａＦ による測定値の低下として現われる干渉
作用がなくかつペルオキシダーゼの活性が高い、改良さ
れた多層分析月料を提供することである。 本発明の他の目的はオキ／ダーゼおよびベルオキンター
士を含むＩ−１２０２検出呈色試薬組成物を含む試樺り
ｉ′４＋を有する多層分ｖ１月別において、ＮａＩ”に
よる測定値の低下どして」われる干渉作用がなくかつオ
キ／ダーゼおよびベルオキシダーゼの活性が高い、改良
された多層分析拐料を提供することである。 本発明の他の目的はオキ／ダーゼおよびベルメキンクー
七を含むＨ２０２検出呈色試薬絹成物を含む試薬層を有
する多層分析ｔ」旧において、ＮａＦによるσ１り定値
の低下として坊われる干渉作用がなく、測定領域が拡大
され、かつオキ／ダーゼおよびベル側キ／クーセの活１
ｉｔ−か高い、改良された多層分’＝ｈＩＡｇ料を提供
すること１′ある。 本発明の他の目的はクルコースメキ／ターセおよ０ペル
メ八′ンター七を含む■１２０２杉１出呈色試薬絹成物
を含む試薬層庖南するグルコース定聞用多層分枦月別に
おいて、ＮａＦ による測定値の低下どして世われる
干渉作用がなく、測定領域が拡大され、かつグルコース
刊キシターゼおよびペルオキシダーゼの活性が高い、改
良されたグルコース定地用多層分析フィルムを提供する
ことである。 本発明は。 （１） 水不浸透註光透過ロミ支持体の上に、少なく
ともベルオキン〉−ゼを含む試薬層、および多孔１牛展
開層の二つの層を少々くとも有し、この順に積層されで
なる多層分析拐料においで、前記支持体以外の少なくと
も一つの鳩にＦＣ）イオンとの間に、２ｒ０Ｃにおりる
水１ｏｏ１に対するＭ Ｍ ＩｆｆがＯ，，２９以下の
水に餌Ｃ溶殴の塩を形成しうる陽イオンを包む化合物か
ｏ 、／ｍｅｑ／ｍ から／ｅｑ／＋ｒ＋２の範凹の
割侶で含有されていることを行ωとする多層分析イＡオ
ーｌであり、子の好寸し７い火ｈｌｕ態様として Ｊ３ａＳ１６■からなる群から選ばれた少なくとも７種
である（１）に記載の多層分析月別。 （３）前記試薬層にペルオキシダーゼとともに少なくと
もグーアミノアンチピリン甘たはその誘導体が名市沁れ
る（ｏ−ｉたは（２）に記載の多ル１分析月利。 （４）１１１Ｊ紀試薬層またり、他のいずれか一つの層
にメキシダーゼが含有されている（１）ないしく３）に
配： ｉｉ＆。 の多Ｊｉり分析利料。 （ω 前８己オキシダーセがクリコし・−トメキシダー
ゼ、マレートオキ７ダーゼ、グルコース刊キノダーゼ、
ヘギソースオキシダーゼ、コレステロールオキシター−
ゼ、Ｌグルコノラタトンメキシターセ、カラクト−スメ
キシダーゼ、虚−リンチンメキゾダーゼ、ピルベートオ
Ｗシダーゼ、ウリカーゼ。 アスコルベートオ牒ンダーゼ、ラクテートオキシグー七
、グリシンオキシクー−ゼ、グリセロール刊キソダーゼ
からなる群から選ばれた７種である（４）に記載の多層
分析相打。 （６）前０己オ片ンダーゼがグルコースオキシダーゼで
ある（４）に記載の多層分析月利。 （７） 前記オキシダーゼがコレステロールオキ７り
−ゼである（４）に記載の多層分り１制料がある。 本発明の多層分析月イ・１における元透過四水不浸透注
支持体ｉＩＪ、ｅ、長約、２００．１ 、ｌ］から約５
’ ００ ｎ ｍの範囲の少々くともあるＩｌｉα囲の
波長領域の１［Ｌ磁波（紫外紳、近紫外゛線、可視光、
または近赤外線）を約９０％以上、１１１才しくは約ｔ
、ｓ′％以上透過させっことができ、実質的に水をその
内部に浸透込せるヒがなく、かつその表面に設けられる
後述の試？、ｑ層止たけ下塗層に含有沁れるバせンダー
ポリマー甘た（・ま他の成分と実質的に化学反応を生じ
８せない素イシ１からなる。前述の規準にあうかきり支
１１１一体として１１４いることができる累月は何でも
よい。 支持体どじ−〔ｔよ、ポリエチレンテレノタレー）・。 ヒスフェノールＡのポリカルボネート、ボーリメグール
メタク！Ｊ Ｖ −ト、ホＩＪスチレン、セルロースエ
ステル（例、セルロースジアセテート、セルローストす
°アセデート、セルロースアセテートプロビネ−１・）
などのポリマーからなる透明シートｔたはフィルムや透
明ガラス板などで厚さ約ｊ ＯノＩ Ｉｌｌから約λＩ
ｎ’ｌｌｌ、好ましくは約７０μ口１から約Ｏｊ ｍ
ｍ （７）範囲のものを用いることができる。 支持体の表面には試薬層（または他の機能層）を支持体
に一体に接着することを容易にする目的で公知の下塗層
を・設りるか、あるいは支持体の表面を公知の化学的処
理（例、酸処理、アルカリ処理）または物理化学的処理
（例、コロナ放１ｉ、処理。 グロー放電処理、紫外線照射処卯、火陥処理）を施すこ
とができる。 ′Ａ″−，発明の多層分析′Ａ７３別に用いられる少な
くともベルオキシターゼを含むｖＣ桑層とは少なくとも
ベルメキ／ダーゼを含む過酸化水紫検出用呈色指示薬組
成物（以下、Ｉ−１２０２呈色試条という。）を含む試
薬組成物が親、水四バイジターポリマーのマトリクスの
中に分散または溶解されてなる試薬層である。 Ｈ２Ｏ２呈色試薬はペルオキシダーゼ、およびペルオキ
シダーゼと過酸化水素の育在下で検出可能な変化（一般
に色濃度の変化またｔユ色相の変化）を起すインジケー
タ（７種類の化＠物またはｄ利τ以上の化合物の相合ぜ
からなるインジケータ）とからなる。インジケータとし
て （１） 「、７’１ｎｎ、Ｃ１ｉｎ、Ｄｉｏｃｈｅｍ
、Ｊ 、Ａ 、、２４ｔ−，２７（／Ｐ４り）、米国性
［Ｊ ｙ ｙ ａ ／ ｓ ｇ。 特公昭ｊ＜−グ！ｊタタ、特開昭、ｔ Ｊ／／、Ｆ ３
ｊに、 ％開閉！ｔ−／、２ｊｔ３７３．特願昭Ｊ−７
−ｔ、 、＜ ｏ を等に開示の１色原体としてグーア
ミノアンチピリン寸たけその誘導体とカプラーとしてフ
ェノール、ヲ＝フトール、ｔたけそれらのｉ！ｉ ｅＷ
１本の糸目−６贋せ。 グーアミノアンチピリン（ｔ−アミンーー、３−ジメチ
ルー／−フェニル−３−ビラソリンーｊ−オン）の誘導
体の例として、＜ｚ−アミノ−λ。 ３−ジメチル−／−（３−クロロフェニル）−３−ピラ
ゾリン−！−オン；ｔ−アミノー、２．３−ジメチル−
１−（、ｘ、ｔｘ、ｔ−ト’）クロロフェニル）−３−
ピラゾリン−３−オン；ゲーアミノーλ−メチル−３−
フェニル−／−（＋２，１．ｔ、＆−１−’Ｊ クロロ
フェニル） −３−ヒラソＩＪ ７− 、ｔ −オン、
グーアミノ−７−（４ｔ−アミノフェニル）＝２．３−
ジメチル−３−ピラゾリン−！−オン。 グーアミノ−ｌ−〔グー（ジエチルアミノ）フエニル）
−，２，Ｊ−ジメチル−３−ピラゾリン−ｊ−オン、Ｉ
ｌ−アミノ−７−（ｐ−アセトアミドフェニル）−一、
３−ジメチルー３−ビラプリン−よ−オン、４１−−ア
ミノ−／−（アミノーーーエチルフェニル）−一、３−
ジメチル−Ｊ −ヒフ ソリンーｊ−オン、４ｔ−アミ
ノ−／−（アミノ−グーメチルフェニル）−２，３−’
；メチルー３−ピラゾリンーｊ−オンをあけることがで
きる。グーアミノアンチピリンおよびそのｇｌ導１本は
いす′れもその酸伺加塩（例、塩化水素酸塩）としても
用いることができる。 ナフトールとして、／−ナフト−ル１．２−ナフトール
をあげることができる。 フェノール誘導体としてカテコール、レゾルシン、ピロ
ガロール、フロログルシン、Ｑ−，Ｈ１−。 捷たはｐ−クレゾール、 ０− 、 Ｈｌ −、または
ｐ−メトキシフェノール、ｏ−、ｍ−、ｔたはｐ−スル
ホフェノール％ ０−またはｐ−クロロフェノールをあ
けることができる。 ナフトール誘導体として、ｌ、７−シヒドロキシナフタ
レン、Ｖ−メトキシ−／−ナフトールをあげることがで
きる。 フェノール誘導体およびナフトール誘導体としてとれら
の他にＣ−Ｅ 、Ｋ −Ｍｅｅ ｓ＋ 、’ｌ’ 、Ｈ
。 ＪａｌｎｅＦｉ ＪＩＢ Ｉ’Ｔｂｅ ’Ｉ’ｈｅｏｒ
ｙ ｏｒ ｔｂｅｐｈｏｔｏｇｒａｐ＋＋！ｃ ｐ
ｒｏｃｅｓｓＪ’ｌ”ｂｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃ
ｍｉｌｌａｎ Ｃｏ、、 Ｎｅｗ ’１’ｏｒｋ。 １５’７４年発行）第３１７−３Ｙｔページに記載の化
合物も用いることができる。 これらの組合せのうちで好ましい組合ぜはグーアミノア
ンチピリンと／、７−シヒドロキシナフタレンの組合せ
、グーアミノ−λ、３−ジメヂルー／ −（，２，４ｔ
Ａ−）リクロロフェニル）−３−ピラゾリン−３−オン
と／、７−シヒドロキシナフタレンの組合せである。 （２） ＩＦＶ公昭！ｒｊ＋−，２ｊざグＯに開示の
色原体としてｔ−ピラゾロン訴動体またはＦ−、、ｌキ
ザゾロン誘導体と、カプラーとしてフェノール類、ナフ
トール類型たはその誘導体との組合せ。 （３）特開昭ゲタ−７１４ｔりｇ７に開示の色原体とし
でのグーアミノピラゾロン肋導体（例、／−（４７−ス
ルホフェニル）−，２−メチル−３−フェニル−グーア
ミノ−３−ピラゾリン−よ−メン）とカプラーとしての
フェノール、フェノール訪導体１寸たりよ多価フェノー
ル（例、カテコール、レソ゛ルシン′、ヒドロキノン、
クレソ゛−ル、グアヤコール、ピロガロール、オルシノ
ール、没食子酸）との組合せ。 （４）特公昭Ｊ′７−Ｊｔ！ｒｌ？に開示の染料形成物
質トシてｌ）−トルエンスルホニルヒドラジノ−ベンゾ
チアゾリウム、キノリウム、寸たはピリジニウム肋導体
と、カプラーとしてフェノール顛、ナフ１−ル類、ぞれ
らの誘導体、芳香族アミン随または反応上メチレン化合
物との絹合せ、“または染料前駆体としてトリアリール
イミダゾールｈロ坪ン体（単独で用いられる）。 （５）を特願昭！１−２１／、！ｒｌｆに開示の水素供
力、７体（色原体）としてＶ−アミノアンチピリンｐ。 １１、−１紅換アンチピリン類、Ｎ、Ｎ−ジ置換−〇−
またばｐ−フェニレンジアミン類、、２−ヒドラジノベ
ンゾチアゾリン類またはｐ−か
【コゲノフェノールと、
カプラーとしてＮ、Ｎ−ジ置換アニリン類との組合せ。 （６） ％開明ｚ７− ｙ＜ｔｔＪ′３．％開Ｍ３ｓ
ｙ−ｙ４’ Ａ’４’、 １ｒｔｌＪｌ］Ｌｔ７−タ＜
ｔｔｒｊ、 ｑｌ開１＋（３６７−タ１ｌｔｊ乙に開示
のｏ−ｔたハ１）−アミノブエ／ｌ−ル化合物捷たは〇
−甘たばｐ−フェニレンジアミン化合物と耐拡散性フェ
ノール化合物、耐拡散に七ナフト−ル化合物、耐拡散肚
アシルアセトアミド化は物寸たは耐拡散１／１−ピラゾ
ロン化合物どの組合せ。 （７） ／ｌ￥公昭、ｔＡ−１１．ｊ！７２に開示の
ペルオキシダーゼの呈色基質（ｃｏｌ ｏｒ−ｆｏｒｎ
ｔ目］ｇｓｕｌ）ｓｔｒａｔｅ） （心髄な場合カプ
ラーも含む）。 などがあげられる。これらのインジケータのうちでは、
４７−アミノアンチピリン捷たはその誘導体とナフトー
ルまだはその誘導体の舶合せが好ましく、そのうちでグ
ーアミノアンチピリンと／、７−シヒドロキンナフクＬ
／ンのわ］合ぜ、グーアミノ−，２，Ｊ−ジメチル−／
−（，２，グ、を−トリクロロフェニル）−３−ビラソ
リンーオ、−珂ント／。 ７−シヒドロキンナフタレンの組合ぜが最も奸オレい。 ペルオキシダーゼとして特公昭ｔｇ−グＪ′ｊタタ、
ｌｔ’＆公１１（Ｊ ｊ ７− ！ ！ｒ 、２０ 等
ニ１ＷＦＪ示）ｌｌ＆’１ｔｌｕ帥オよび動物起ｄ６の
ベル刊キソダーゼ（ＥＣ／、／／。 ７）、および１時開昭！７−？りｌり、２等に所Ｊ示の
微生物起源のペルオキシダーゼ（ＥＱ／、／／。 ７）のうちから適πに７種また釦−てΦ以上を組合せて
用いることができる。 植物起源のペルオキシダーゼの例として、西汀わさひ、
じゃがいも、いちじ＜ Ｉｆ ｉ？ｔ、かぶ、だいこん
から抽出されたペルオキシダーゼに、動物１起源のベル
メキンダーゼの例として、牛乳から抽出恣れたラクトペ
ルオキシター−ゼ、白血球から抽出されたベルドペルオ
キシダーゼを、微生物起源のペルオキシダーゼとしてＡ
１ｔｅｒｒ＋ａｒｉａ 屈。 Ｃｏｃｌ＋ｌ１ｏｂｏｌｕｓｉ、 Ｃｕｒｖｕｌａｒｉ
；＋ ｆ４゜１）ｅ４：１ｌｃｕｌａｒｉａ 属に丸し
非特異的ペルオキシダーゼ生産能をイ」する微生物起源
のベルメキシターセを・、（′れぞれあげることができ
る。 その他ＶＣ特公昭ｊ乙−１７−ｊ！タタ、１１・１云昭
３７− Ｊ−、、！、２ｏ ＜〒に開示のヂオ・／アン
酸鉄、り／ニン酸ε′（、フエロンアン化鉄（いずれも
鉄（→−１２）化合物）、りＩＪム硫酸カリウム、沃化
す１リウム。 沃化カリウム、モリブデン酸アンモニウム、モリブテン
酸カリウム等のペルオキシダーゼ活１生を有−１′４る
無機化合物を用いることもＣきる。 これらのうちで植物起源捷たは微生物起源の非特異的ペ
リオ・〜・ンダーゼがＱ！寸しい。 Δ・発明の多層分析Ｈ料においてに１．少なくともべ／
Ｌオキソダーゼを含む試薬層はペルオキシダーゼおよび
インシイｒ−りが靭、水性ポリマーバインダーの中に溶
庁ｆ′ま／ｃシ」−分散され−Ｃなるものである。 バインダーとして用いることができる親水性ポリマー１
ｒ［ペルオキシダーゼおよびインジケータと実質的に相
互作用を生ずることがなく、被膜形成能を市するもので
あれば伺でもよい６親水匪ポリマーの例としてゼラチン
、酸処理ゼラチン、脱イオン化ゼラグーン、ゼラチン誘
導体（例、アンル化ゼラグーン）、ポリヒニルアルコー
ノし、ポリビニルピロリドン、ポリビニルベン′−ヒン
スルΣｊ；ンｆｉｌ−１・’Ｊウム、カルン】・ハーン
ノナル十ルロース、す１リウムカルホキノメチルセルロ
ース、ヒドロキシコニチルセルロース、ノグルセルロー
ス、プルラン、フルラン誘導体、ポリアクリルアミド、
アクリルアミドコポリマー（例、アクリルアミド−Ｎ−
ビニルヒ゛ロリ１゛ノコポリマー、アクリル・アミド−
２−を二ドロキンエチルアクリルアミドコポリマー）、
諦あげることができる６試薬層のＪｊ、−さく乾燥Ｊｌ
ｊｉさ）は約ｊμｌ＋１から約１００μ！１１．好捷し
くけ約ｌθノＬ Ｉｎから約Ｊ−Ｏｐ ｍの範囲である
。 試鈷層におけるペルオキシダーゼの含有角は約Ｊ 千ｌ
Ｊ’／ｍ２カラ約／ ’万ＩＪ／ｍ２． Ｑｒ’４ Ｌ
＜ ｉ、ｌ：約／万υ／ｍ２から約６万ｖ／ｒ１１２の
範囲である。 インジケータの含有部は液体試別に含有されると予想さ
れる被検成分の最大含有に１に対応する化掌箭論による
Ｍ′ｇたけそれよシ多い童が必要であり。 この−Ｉ？１は尚業者が実験により決めることができる
・ベルメ・）′−ンダーゼを含む■１２０２呈色試桑と
ともに用いられるＦＯイオンとの間に、２ｔ’（Ｊにお
ける水１ｏｏｙに対する溶解度がθ１．２２以下の水に
離溶ヒの塩（以下、 １Ｉ７４溶殴Ｆ塩という。）を形
成しうる陽イオンを含む化合物（以下、蔚１１溶目゛Ｆ
塙形成性化合物という。）について説明する。朔溶ロニ
Ｆ塙形成跣化合物は本発明の多層分析月別の支持体以外
の少なくとも一つの層に含有されていればよく、親水ｈ
ｂバインダーポリマーを含む層の中にバ有されている」
ハ合には親水にＬバインク゛−にＣマ解Ｊたけ分散し７
て金型れていることが好せしい。 甘だ１１６酊江Ｆ塩形成ヒ（ミ化合物を親水性バインダ
ーポリマーを含む層の中に含有させるには多くの場合親
水陰バインダーポリマーを含む本則塗布液に難ｍ註Ｆ塩
形成にロヒ自物を溶解寸たは分散さ→むた塗布液を塗布
することによるので、難溶匪工２塩彫成四化合物は水に
溶′Ｍせたは分散するものが奸才しい。 ｉｖ溶匪Ｆ塩形成匪化合物中に含まれる陽イオンとして
は、ベルオキシクーゼ、および必要に応じて多層分析材
料のいずれの層に含有されるベルオキシター−ゼ、それ
ぞれの酵素を実質的に附＠寸たＩＪ、茗しく減少ネぜな
い陽イオンが選択される。陽イオンの例としてアルカリ
土類金属の２価陽イオン１例えｉｊｌ、Ｍｇ２■ｃａ２
■’ｓ ｓ ｒ２ ｅ、 ｎ ａ２■；他の金属の１価
寸たはそれ以上の価数の陽イオン。 例えば、ＦＬＹ”○）、■パｅ２■ｃ ｕ２■、 Ｂ、
３（！Ｅ）、 、、、ｅ３（す。 ■ ；多原子多価陽イオン、例えばＮａ５Ａ１６■。 １′ｌ（’ｊｙ”） ■（２Ｓｉ６■、Ｃａ５ｉ６■、ＢａＳ、６（４−）を
あげることができる。陽イオンは水和した陽イオンであ
ってもよい。これらの陽什ンのうちで、Ｃａ２（Ａ）、
Ｍ、２Ｑ）イオ７によ４２．オギ、、−−−叶ヨヤ、ダ
ーー５等の酵素の安定化作用を有するのでθｒ１、しい
陽イオンである。 員（１俗匪Ｆ塩形成し化合物に含まれる対陰イオンとし
ては前記の陽イオンと結合した化合物が水に不市匪ｉた
は水に離溶目ユでなく、かつ多層分ｖ１材１１に含有さ
れるベルオギシダーゼ、および必要に応じて含有される
オキシダーゼ、それぞ！Ｌの酵素活註を実質的にｌ！ｌ
’ｉ害または著しく減少させない陰イオンであれば何で
あってもよい。 対陰イオンの例として、低級脂肪族モノカルボン酸陰イ
オン（例、蟻酸イオン、酢酸イオン、ブｒ＋ヒオン酸イ
オン、酪酸イオン、イソ：酪酸イオン。 吉草酸イオン、イソ吉草酸イ捜ン、ピノぐル酸イ（オン
、フェニル酢酸イオン、低級脂肪族ジカルボン酸陰イオ
ン（例、−蓚酸イオン、マロン酸イオン。 こけく酸イオ′ン、メチルこはく酸イオン、グルタル酸
イオン、α−メチルグルクル酸イメン、β−メチルグル
クル酸イオン、α、α′−ジメチルグルタル酸イオン、
３１３−ジメチルグルタル酸イオン、アジピン酸イオン
、ピメリン酸イオン）。 脂肪族ポリカルボン酸陰イオン（例、カンホロン酸イオ
ン、プロパン−／、、２．ｊ−）リカルアＩ（°ン酸イ
オン）、炭１環式カルボン酸陰イオン（しょうのう酸イ
オン、カンホ酸イオン、安息香酸イオン５フタル酸イオ
ン、イソフタル酸イメン、テレフタル酸イオン）、ヒド
ロキシカルボン酸陰イオン（例、グリコール酸イオン、
乳酸イオン、グリセリン酸イオン、タルトロン酸イオン
、りんご酸イ牙ン、酒石酸イオン、くえん酸イオン、ベ
ンジル酸イオン、ザリチル酸イオン）、／・ロゲン陰イ
オン（塩素イオン、臭素・ｒオン）、硼酸イオン。 硝酸イメン、燐酸イオン、値酸イオン、チオ硫酸イオン
、亜硝酸イオン、アジド陰イオン（Ｎ３０）をあげるこ
とができる。これらのうちで、低級脂肪族モノカルボン
酸陰イオン、低級１１Ｆｆ肪族ジカルボン４．２陰イオ
ン、ヒドロキシカルボン酸陰イオン。 ハロゲン１姦イオン、燐酸イオン、（１肖Ｃｉ＆イオン
、硫酸イメンが奸才しく、酢酸イオン、プロピオン酸イ
オン、グルタル酸イオン、α−メチルタルタル酸イオン
、β−メチルグルタル酸イオン、α、α′−ジメヂルグ
ルタル酸イオン、３，３−ジメチルグルタル酸イオン、
りんご酸イオン、酒石酸イオン、くえん醇イオン、塩素
陰イメン、燐酸陰イオンが最も奸・才しい。多価の対陰
イメンはすべてのプロトンが存在しない多価陰イオンお
よびプロトンが１個寸たはそれ以上残存している酸１２
１：陰１オンのいずれをも用いることができる。 難溶匪Ｆ塩形成ｔｕｂ化合物は前記の陽イオンと対陰イ
メンが結合した化合物ｔたはさらに結晶水油たは結晶ア
ルコールを含む化合物であり、そのうちで好ましい化合
物は、蟻酸力ルシウノ１、酢酸カルシウム、プロピ刊ン
酸カルシウム、こはく酸カルシラノ・、メチルこはく酸
カルシラノ・、クルクル酸カルンウム、α−メチルグル
タル酸カルシウノ１、β−メチルグルクル酸カルシウム
、α、α１−ジメチルグルクル酸カルシウム、３．３−
ジノチルグルクル酸カルシウム、安息香酸カルシウム、
りんご酸カルシウム、酒石酸カルシウム、くえん酸カル
シウム、塩化カルシウム、燐酸二水素カルシウム、硝酸
刀ルシウム、蟻酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、プ
ロピ、ｌン酸マグネシウム、こしよく酸マグネシウム、
メチルこはく酸マグネシウム、グルタル酸マグネシウム
、α−メヂルグルタル酸マグネシウム、β−メグ−ルグ
ルタル酸マグネシウム、α、α１−ジメチルグルタル酸
マグネシウム、３．３− ジメチルグルタル酸マグネシ
ウム、りんご酸マグネシウム、酒石酸マグネシウム、く
えん酸マグネシウム、ザリチル酸マグネ／ウム、塩化マ
グネシウム、硝酸マグネゾウＡ、Ｊ’ｆ酸二水素マグ乞
／ウム、硫百貨マクネシウム、耐−Ｑ貨バリウム、酊酸
錨ｊ （２＋ｌ 。 ｎ１酸鉄（２＋）である。 離溶１９ＥＦ塩Ｊ［ツ成訃化合物）ｔｔ：Ｌ使用条件に
おいて。 ベルオキソターセが触媒するインジケータの呈色反応が
進行するときに、ベルオキソター−ヒが作用ＦＧ）イオ
ンとともに水に珪溶匪のＪｒＡＡ形ｈ１４シうるように
多層分析材料に含有されればよい。すなわち、離溶性Ｆ
地形成性化ａ物は少なくともペルオキシダーゼを含む試
薬層に含有いれてもよく、あるいは少なくともペルオキ
シダーゼを含む試薬層よりも」二側ｊの（ずなわら、少
なくともベルメキゾダーゼを含む試薬層に関して支持体
と逆の１１１ｊの）いずＩ］かの層または多孔ａ展開層
のいずれかに含有されてもよく、あるいｔ」、さらしこ
少なくともペルオキシダーゼを含むｉｒ’：、 薬層と
それよりも」こ伯１］の八☆ｉたｌ−、ｊ Ｕ５５層と
に含有されてもよい。Ｆ’Ｉｆ ｈ−ン訃Ｊ２塩形成医
化合物の陽イオン址たは陰イオンがペルオキシダーゼ寸
たはメキシターゼの活［を明害する場合にｔよ、が１０
醇ヒ１″Ｊパ塩形成団化合物をペルオキシダーゼ筐たは
オ・Ｙシダーゼを含む屑と別の層に含有さ一ヒ、間に中
Ｉ′ｌｌＪ層を介在させて用いることができる場合があ
る。 難溶性Ｆ塩形成性化合′吻の多層分析材料中における含
有量は液体試料中に添加されるＮａＦ の非凡および多
層分析相別の展ｅＥｊ層に定石１分価操作の際に点着さ
れる液体試料の卵に依存し、多層分析拐、Ｆ・１に戸、
着される液部中に含有されると予想されるＮａＦ 刑の
ん大館に対応する什学Ｍ１偏によるすδ寸たけそれよシ
多い月が、液体試ネ・１が展υト１され浸透する領域に
イＪ存する必要があることが理解されよう。前述の化学
量論による幻は推定用能であるが１．金裕を見て実用的
には難溶性Ｆ塩形成化上物の含有■は多層分析材料／ｌ
１１２につきｏ 、 ／ｍｅｑカニら／ ｅｑ 、 ｔ
ｊＪ４しくは０ 、．２ｍｅｑ ７Ｊ）ら０．ｊＣｑ
被検物質が過酸化水素でなく、化学反応により過酸化水
素を生成する反応系に組みこむことができる場合には、
被検物質が酸素と相互作用して過酸化水素を生成するた
めの触媒としてオキシダーゼを試薬層または他の層に含
有させておくことができる。オキシダーゼは被検物質に
応じて選択される必要がある。オキシダーゼとしては７
種のオキシダーゼを用いられることはもちろん、一連の
連続反応を進行させる複数種の酵素の組合せ（その中の
７種はオキシダーゼである。）を用いることもできる。 さらに必要な場合にはオキシダーゼとともにそのオキシ
ダーゼの補因子および／捷たは補酵素を組合せて用いる
ことはいうまでもない。 オキ／ダーゼ（必要な場合には補酵素もともに）ｔ」ペ
ルオキシダーゼおよびインジケータを含む試薬層に含有
させるか、あるいｔま試薬層よりも上側の層に含有させ
るか、さらにはペルオキシダーゼおよびインジケータを
含む試薬とそれよりも上側の層（７層または複数の層）
の両方（または合計３層以上）に含有させることができ
る。ここで試薬層より上側の層という表現には多孔性展
開層をも含めることができる。オキシダーゼが触ｆｔ’
にする基質の反応には酸素の存在が必須であシ、多層分
析材料においては酸素は空気中から展開層を経て他の層
内へ拡散するので、オキシダーゼが触媒する酸化反応の
効率的な進行にとっては酸素の層中への拡散の効率的な
達成を目的とした特願昭！ｔ−９３ｔＪ／ＶＣ開示した
、オキシダーゼをペルオキシダーゼおよびインジケータ
を含む試薬層より上側の層、ことに多孔性展開層または
多孔性展開層に隣接する層に含有させた構成の多層分析
材料とすることが好ましい。甘たコレステロールエステ
ルのように親油性物質が被検物質である場合には、親水
性バインダーポリマーを有する層へは被検物質が浸透し
にくいので、ことに多孔性展開層の内部にオキシダーゼ
を含有させることが好ましい、 本発明の多層分析材料に含有させることができるオキシ
ダーゼとして酸素（ｏ２）をアクセプタとするオキシダ
ーゼがあげられ、その例として次の酵素をあげることが
できる。０内はＥＣＮｕｒｎｂｅｒを表わず。 グリコレートオキシダーゼ （／、／、３゜リマ
レートオキゾダーゼ （／、／、 ３． ｊ
）グルコースオキシダーゼ （／、 ／、Ｊ、
リヘキソースオキシダーゼ （／、／、３．ｊ
）コレステロールオキシダーゼ （／、 ／、 ３
． Ａ）アリールアルコールオキシダーゼ （／、 ／
、 Ｊ、 ７）Ｌ−グルコノラクトンオキシダーゼ（／
、 ／、 ３゜Ｊ）ガラクトースオキシダーゼ
（／、 ／、 ３．９）アルコールオキシダーゼ
（／、 ／、 ３． ／ｊ）Ｌ−λ−ヒドロキシ酸
オキシダーゼ（／、 ／、 ３． ／Ｊ）アルデヒドオ
キシダーゼ （／１．２゜３．リキーリンチン
オキゾダーゼ （八、２．３．．２）ピルベー
トオキシダーゼ （ム！、 ３． ｊ）ピルベ
ートオキシダーゼ（ＣｏＡアセチル化） （／。λ。３
．６）ラドステロールオキシダーゼ （／、 Ｊ、
Ｊ、 、２）Ｄ−アスパルテートオキシダーゼ （八≠
、 ３． ／）Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ （へ
先３゜、２）Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ （／、
４ｔ、 ３．３）アミンオキシダーゼ（クラビニ４有
） （／、 ｔ、ｔ。３．リビリドキナミンポス
フエートオキシダーゼ（／。≠。３゜Ｊ）アミンオキシ
ダーゼ（銅含有） （ｉ、ａ、 ３．ｔ）Ｄ−
グルタメートオキシダーゼ （／、／、１．。３．
７）サルコシンオキシダーゼ （／。Ｊ、Ｊ
、 ／）Ｎ−メチルアミシ酸オキシダーゼ （／、
ｊ、 ３゜→Ｎ −メヂルーし一リシンオキシダーゼ（
／、ハ３．リウリカーゼ（ウレートオギシダーゼ） （
／、 ７． Ｊ。３）スルフィトオキシダーゼ
（／、 ｆ、 ３． ／）アスパルテートオキシダ
ーゼ （／。／（７，３，３）？−ヒドロキシア
ントラニレートオキシダーゼ（／、／θ。３゜乃アルギ
ニンｄ−モノメ°キシゲナーゼ （／、 ／３． ／、
２．リソシン２−モノオキシゲナーゼ （八／３．
／、！。→トリプトファンλ−モノオキシゲナーゼ
（／、 ／３． ／、２゜３）ラクテートオキシダーゼ （シクテートλ−至ノオキシゲナーセプ （／、
／３． ／、２． Ｐ）ジメチルアニリンモノオキシゲ
ナーゼ（ｙ、 ｉ４ｔ、 ／３゜リコレステロール７α
−モノオギシゲナーゼ（／、 ／４Ｚ、 ／３． ／７
）Ｆｌａｖｏｐｒｏｔｅｉｎ−１１ｎｋｅｄｍｏｎｏｏ
ｘｙｇｅｎａｔｅ （／、／１１．／
４ｔ、／）フェニルアラニンモノオキシゲナーセ（／。 ＃、 ／Ａ、 ／）グリセロール同ギシダーゼ（東洋醗
造から販売）グリシンオキシダーゼ（化学大辞典第３巻
（／ ９ ｔｙ ｏ年ｑ ７Ｂ６行）Ｋ記載）オキシダ
ーゼを含む複数種の酵素の組合せの例として以下のもの
がある。 グリセロールキナーゼ（２゜７．／、３０）およびＬ−
α−グリセロ燐酸オキシダーゼ（ｌ。 ／、９９゜ｊ：寸たけ特開昭３３−７．２Ｆ？コ、１時
開昭ｔ３−．２≠Ｉ’？３に開示）の組合せ（ｌ持開閉
！３−おりデ３に開示） トリグリセリド加水分解活性をもつリパーゼ、グリセロ
ールキナーゼ（，２，７，／、３０）およびＬ−α−グ
リセロ燐酸メキシダーゼ（／。 ／、９９．、ｔ；またはｌｔ’を開閉ｊｊ−７，２ｆ９
．２．１時開昭ｔ ３−．２ ａ ｌｒ ？ ｊ Ｋｔ
ｉＮ示） （Ｄ組合せ（ｉｔｓ？開昭、開閉３−．２
ｔ、ｔ ｔｒ ｙ ｙＫ１ｍ示）エステラーゼ作用をも
つリパーゼ、プロテアーゼおよびコレステロールオキシ
ダーゼ（／・ １０３．６）の組合せ（Ｉｎ開開閉Ｏ−
／３７／９Ｊ。 に開示） グルタミルピルベートトランスアミナーゼ（アラニンア
ミノトランスフェラーゼと同じ、１゜ｔ、ｉ、、：ｚ）
およびピルベートオキシダーゼ（ハＪ・３・ ３）の組
合せ（特願１１６Ｊに一９ｊ４Ｊ、２［開示） グルクミルオキザロアセデートトランスアミナーゼ（グ
ルタミン−オキソ酸アミノトランスフェラーゼと同じ。 λ。乙。１．／ｊ）、オキザロアセテートデカルボキシ
ラーゼ（４ｔ、 ハハ３）およびピルベートオキシダー
ゼ（／０．、ｚ。 ３．３）の組合せ（特願昭ｔ７−９３Ａ３．２に開示） これらのオキシダーゼのうちで、本発明の多層分析材料
において好′ましいのは、グリコレートオキシダーゼ、
マレートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキ
ソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、Ｌ
−グルコノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオキシ
ダーゼ、キザンテンオキシダーゼ、ピルベートオキシダ
ーゼ、つリカーゼ、アスコルベートオキシダーゼ、ラク
テートオキンクーゼ、グリシンオキシダーゼ、グリセロ
ールオキシダーゼなど、およびオキシダーゼを含む複数
種の酵素の組合せとして例示した組合せがあげられる。 オキシダーゼの多層分析材料中における含有量は、主と
して液体試料に含有される過酸化水素を生成する被検物
質の予想される最大址とオキシダーゼおよびペルオキシ
ダーゼの活性値の比により決めることができ、これは当
業者が実験により決めることができるが、おおよその含
有量として約／千て一／ｍ２から約１０万−ＩＪ−／／
ｍ２、好ましくは約３千″Ｖ／ｍ２から約ｊ万１／ｍ２
の範囲である。オキシダーゼがグルコースオキシダーゼ
の場合には、その含有用−は約コ千′ＴＪ／ｒｎ ２が
ら約グ万′ｔ／；／／ｍ２、好１しくは約グ千υ／ｍ
２から約Ｊ万一’Ｃｆ／ｍ ２の範囲である。 ペルオキシダーゼ、およびオキシダーゼはそれぞれの活
性が最大になる最適りＨ値があり、さらにはそれぞれの
活性はイオＸ強度や近傍に共存する陽イオンや陰イメン
の補力１による影響を・もうける。従って多ノー分析材
料においてをよ、第一にペルオキシダーゼを汀む試薬層
、オキシダーゼを含む層、またはベルオキシダーゼとオ
キシダーゼをともに含む試ｊ・Δ１それぞれのｐ Ｈ値
を、ついで必要に応じてイア１−ン強度や共存するイオ
ン、個などの因子をＪｉ＆適に設定することが、よい分
析結果（定Ｗ１．４Ｗ度、くりかえし再現性などについ
て）を得るためニハきわめて重要である。かかる目的の
為に多孔性展開層、試薬層、光速ＶＺ層その他の機能層
中に酸、アルカリ、塩、緩衝剤、１ｒト離剤、界面活性
剤などを含有させておくことは本１＾明の実施に当って
ｌｉ芋に重要なことである。これら反応栄件設定の為の
試薬類の種類、１１など＆；ｉ： 、分析の目的その他
によって大きく変化するので、目的に向って■庫室、選
択する必要がある。 ベルオキシダーゼおよびインジケーターを含む試薬層に
酸、アルカリまたは緩衝剤を含有させて過酸化水素の存
在下で検出可能な変化を起させるには、ペルオキシダー
ゼの最適ｐＨ値であるｐ■■７．０を中心にし−１−’
ｐ ＩＩ約！、０から約９．０１好ましくは約４゜Ｏ
からＩ、０の範囲のｐ １−１値範囲の下で変化を生じ
させることが好ましい。 オキシダーゼはぞの般適ｐＩＩ値は酵素の種類により異
なるが、例示すれば、グルコースオキシダーゼ：ｐｌ（
約ｊ、６：ヘキソースオ六シダーゼ：ｐ Ｈ約ｔ、３：
コレステロールオキゾダーゼ：ｐＩ（約３．に；ガラク
ト−スオキシダーゼ： ｐ １１約乙Ｏ；アルコールオ
キノダーゼ：ｐ、ＴＩ約７６ｊ；ウリカーゼ：ｐＪ（７
，Ｊ′〜に、オ；アスコルベートオキシダーゼ：ｐＨ約
、ｔ、７；、［、−α−グリ七ロ燐酸オキシダーゼ：ｐ
）Ｊ７．ｊ〜７．７である。 オキシダーゼを含む層ｄオキシダーゼの種類によシそれ
ぞれの最適ｐ １−１値またはその近傍のｐ Ｈ値範囲
に調整することが好ましい。ベルオキシダーゼの最適ｐ
Ｈ値と異なる最適ｐＨ値をもつオキシダーゼはそれ故に
別々の層に含有させることが好ましい。例えばグルコー
スオキシダーゼを多孔性展開層または後述する接着層に
含有させる場合には、多孔性展開１０または接着層に使
用Φ件下においてグルコースオキシダーゼの最適ｐ Ｈ
値であるｐ ｌ（！。ｔを中心としてｐ Ｈ７゜乙から
ｐＨ７゜ｔ１好寸しくは１１ Ｈ≠。ＯからＩ） Ｉ−
１７，０の範囲に＃（Ｉｉ持することができる酸または
緩衝剤を加えることができる。 試薬層、他の層、または多孔性展開層に含有させること
ができる酸、アルカリまたは緩衝剤として脂肪族ヒドロ
キシカルボン酸（例、グリコール酸、乳酸、α−ヒドロ
ギシ酪酸、グリセリン酸、タルトロン酸、シんご酸、酒
石酸、くえん酸）、脂肪族ジカルボン酸（例、マロン酸
、こケ＜酸、グルクル酸、α−メチルグルタル酸、β−
メチルグルタル酸、３，３−ジメチルグルタル酸、α。 αｌ−ジメチルグルタル酸）、脂肪族モノカルボン酸（
例、酢酸、プロピオン酸、酪酸）、水酸化リチウム、水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、日本化学会編「化学
便覧 基礎編」 （東京、丸善（床、／９６に年発行）
／ ３／、２−／ ３．２０ページに記載の緩衝剤（例
、くえん酸水素カリウム−くえん酸、ｆｒ酸二水素カリ
ウム−燐酸水素二ナトリラム） ）「Ｂｊｏｃｂｅｍｉ
ｓｔｒｙＪ ＋ 、ｊ（＋２） 、”４７−１７７ （
／＃＆）のＮｏｒｍａｎ ｇＧｏｏｄら著［Ｈｙｄｒｏ
ｇｅｎ Ｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ８ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌＲｏｓｅｎ、ｒｃｈ Ｊ Ｒ，Ｍ、 Ｃ，Ｄａ
ｗｓｏｎ ｅ ｔ ａ ｌ 編Ｉ Ｄａｔｅ ｆ
ｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｌｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ第
５ｅａｒｃｈＪ第λ ａｔ ｔｈｅ Ｃ１ａｒｅｎｄ
ｏｎ Ｐｒｅｓｓ、／ ９ Ａ９年発行）Ｉ／−７ｔ−
ＪＯＫページ、ｒＡｎａｌｙｔＩｃａ１１３１ｏｃｈｅ
ｍｌｓｔｒｙＪ 、 ／ 、０１１）３０θ−３１０
（／９ＫＯ）等に記載の緩衝剤（例、！−（Ｎ−モルホ
リノ）エタンスルポンＨ１Ｎ ’−ヒドロギンエチル
ピペラジンーＮ’−λ−ヒドロキシプロパンー３−スル
ポン酸（Ｈｅｐｐｓｏ ） ナトリウノ、塩廿たはカ
リウム塩、Ｎ−λ−ヒドロキシエチルピペラジンーＮ′
−３−プロパンスルポンＩ’ｉ’ｌ （Ｅｐｐ８）ナト
リウム塩またはカリウｌ、塩）、その他の緩衝剤（例、
マレイン酸モノナナトリウムまたはモノカリウム塩、３
，３−ジメチルグルタル酸モノナトリウムまたはモノカ
リウム塩）、無機酸（（Ｉｔ Ｉ＃、燐酸）がある。こ
れらのうちではくえん酸、酒石酸、りんご酸、ブールタ
ル酸、α−メチルグルタル酸、β−メチルグルタル酸、
α、α′−ジメチルグルタル酸、３，３−ジメチルグル
タル酸、水酸化リチウム、Ｈｅｐｐｓｏ Ｎａ塩または
に塩、Ｅｌ）Ｉ）［Ｉ Ｎａ塩またはに塩が好ましい。 本発明の多層分析材料においては、ベルオキシダーゼイ
〔含む試薬層を使用Φ件においてペルオキシダーゼの最
適ｐ■■値ｊ、Ｊ近傍に、オキシダーゼを含む層はそれ
ぞれのオキシダーゼの最適ｐ Ｉ（値近傍になるように
ｐＨ調節し、調節されたｐ Ｈ値とは無関係に離溶性Ｆ
塩形成性化合物をペルオキシダーゼを含む試薬層または
それより上側の層に含有させることにより、被検成分の
比色測定または螢光測定するだめの反応が最も短時間に
高効率で進行させる条件下で被検試料に添加されたＮａ
Ｆによる測定値の低下として現れる干渉作用を解消でき
るという著しい効果が達成される。 本発明の多層分析材料における多孔性展開層（以下、展
開層ということがある。）は分析材料の最外面に位置し
くすなわち、分析利料において試薬層に関して支持体と
反対側の最外面に位置する。）て、被検体液が点着され
る面であり、その作用は点着された被検体液が被検体を
含んだまオ液体の各版には無関係に単位面積当りほぼ一
定容量−の被検体液を試薬層に供給する機能を果すこと
である。この作用（展開作用）により少なくともペルオ
キシダーゼを含む試薬層（以下、試薬層ということがあ
る。）に供給される被検体液の容量、さらには被検体液
に含咬れる被検体の容量は単位面積当りほぼ等しいこと
になり、またこの作用が存在するゆえに、定量分析に際
して被検体液を正確に秤取しなくても定量分析が実施で
きることを意味する。当然のことであるが被検体液を正
確に秤取して定量分析を実施することを排除するもので
もないし、被検体液を正確に秤取することにより定−１
１１の精度が高する場合がある。 本発明の分析材料における多孔性展開層として、１１開
昭＜／、 ９−、ｊ ３ ｆｆ ｆ 、１’ （ｌｆ！
ｊ公昭！３−．２／Ａ７７）、米国特許第Ｊ ｑ９．２
／ １１号に開示さノｔている非繊維等方向多孔性層（
例、メンブランフィルタ−寸たはプラッシュポリマ一層
、微小球体−まだは粒子を接着剤で結合することによシ
製造された球体または粒子間の相互結合空間により等方
面多孔性が形成されている層）、特開昭ｊｆｊ−９０ｔ
ｚｑに開示されている微小球状ビーズが水により膨潤し
ない接着剤により点接触状に接着されて形成された三次
元格子構造物からなる連続空隙含有等方向多孔性構造物
層、特開昭ｒｔ−ｉｔａｉ！ｔに開示されている水洗さ
れた織物または親水化処理織物からなる繊維質異方性多
孔性展開層、特開昭ｊ７−１ｔ３Ｊ９に開示されている
物理的活性化処理された表面を有する織物からなる繊維
質異方性多孔性展開層、特願昭ｊに′−３≠３７０に開
示されている合成ポリマー繊維パルプを含む抄造紙、抄
造Ｆ紙または不織布からなる繊維質異方性多孔性展開層
を用いることができ、かつこれらの展開層はここにあげ
たｌｒｔ許明細四に開示の方法により設けることができ
る。またｌ持開閉弘９−ｊ３１１１に開示されているご
とく、二酸化チタン、酸化亜鉛、または（Ｎｆ酸バリウ
ムの微粉末を含有するメンブランフィルタ−寸たけブラ
ッシュポリマーＩｌｉ＋１は後述する光遮蔽層（輻射線
ブロッキング層、白色背景層ま）ζは光反射層）をかね
る展開層として本発明に分いて用いることができる。さ
らにカーボンブラックを含有するメンブランフィルタ−
′またはプラノ／ユボリマ一層を後述する光遮蔽層をか
ねる展開層として用いることができる。 被検体液が全血の場合、好ましい展開層として前述の三
次元格子構造物からなる連続空隙含有等方面多孔性１１
１１造物）堵および前述の繊維質異方性多孔性展開層が
あげられる。 本発明の多層分析材料においては試薬層と展開層の間に
水および被検体透過性の光、訊藪層（色遮蔽層、輻射線
ブロッキング層、背景層または光反射１１１ｉともいう
、、）を設けることができる。光遮蔽層は、たとえば、
赤血球を含む全血の如く、被検体液が着色粒子を含む場
合に有用な１９′！でちる。即ち光遮蔽層の片側にある
着色粒子の色はこの層によってさえき゛られて反対側、
すなわち透明支持体側からｌｄ着色粒子の色は全く見え
ず、従って比色定−１ｒｅ−！たは螢光６１１１光定皿
に当って着色粒子が定駄の妨害をしない。光遮蔽層は、
二酸化チタンｖＩＩ粉末、（ｌｌｌｆｉ酸バリウム微粉
末、酸化ｌＩＥ鉛微粉末、アルミニウム微粉末寸たｔま
カーボンブラック（７１１＋ 如＠ ＣＩ粉体を水およ
び被検体透過性の親水性ポリマーバインダー中に分散し
た層で、！μＩｌ＋から１１００ｐ。 好まし７くはｊμＴｉから３０μｍの範囲の厚さがあり
、被検体液および被検体は通過しうるものである、光遮
蔽層のポリマーバイングーとしては試薬層に用いたのど
同じ種類の親水性ポリマーの中から適宜に選択して用い
ることができる。 光遮蔽層としては二酸化チタン微粉末酸化亜鉛微粉、硫
酸バリウム倣粉末才たはカーボンブラックなとの光遮蔽
能を有する微粒子を含んだメンブランフィルタ−（ブラ
ツノユボリマ一層）を多孔質光遮蔽層として用いること
ができる。多孔質光遮蔽層は特開昭４Ｌ９−、、ｔ、？
ｆ ｇ ｆ （ｆｉｇ公昭ｊ＋３−２／に７７）ま
／Ｃはキヶ開閉ｊ弘−コ９７００に開示の方法により設
りることかできる、 本発明の多層分析材料においては展開層を試薬層、光遮
蔽層、または必要によシ設けら１ｔ７ｒ曲の層の上に接
木ｆｌｕ六層して一体化するだめの接着を強化する目的
で接着層を設けることができる。ことに展開層として多
孔性のシート状、フィルム状ＪたＶま膜状の累イ」を用
いる場合にｔ、Ｊ接着層を設けることが好ましい。 接／／ソ削としては試薬層のバインダーとして用いられ
ている水および被検体透過性″６１水性ポリマーを用い
ることができ、この場合には接着層の親水性ポリマーが
半乾きの状態のとき、咬たけ親水性ポリマーを水または
界面活性剤を含む水で湿潤させておいて、展開層として
用いる多孔性のノート状、フィルム状捷たけ膜状の素セ
を適当な圧力をかけて接着層に接着することができる。 接着層の厚さｉＪ、’ ０ ＊ 、ｔ ７＋ ｍから／
！ｐｒｎ、好寸しくは０゜５μｍｎ１からｊμ７ｎの範
囲である、本発明の多層分析材料には前記の諸層のほか
に必要に応じて、特開昭ｊ、２−３弘にｇ、特願昭ｊｔ
−／７乙Ｊ、７４ｔＸ特願昭！に一／７乙λ７ｊに開示
のバイヤ一層′または液体遮断層、ｒｒｇ開１［３ｔ／
−’、’０／９／、特開昭、ｔ３−／３／θｇ９等に開
示の検出層または媒染層、特開昭、＋４’−，２９７０
０に開示のマイグレーション阻止層 ７Ｒ，、開閉ｔ＜
／−２４７９３（特公昭タフ−，２に、２７７）、／待
開閉オ／−グＯ１９／等に開示の中間層、ｌＩ￥開昭開
閉−／３１０１ｆ？Ｘ特開昭ｔ７−４ｔＯｔグ？、１時
開昭Ｊ ７−ｓｏＡ Ａ ｏ、１１’テ題昭３７−１．
／９３１゜等に開示の蛋白質を通過させることができる
親水性バインダーポリマーを用いた層、１時開１１ｒ（
夕に−に！ｒ４Ｉ−９に開示の試薬含有微粒子分散層、
実開昭ｊ７−グ２９！／に開示の一定面積の液体試別点
着供給用ポーラス体（パッチ）、特願昭ｊＡ−９３４３
２に開示の酵素等の試薬を含む定面積多孔性層を設ける
ととができる。 本発明の多層分析材Ｆ１はここ呼での説明から明らかな
とおり、透明支持体の上に順にベルオ・＼′ノダーゼを
含む試薬層および展開層が設けらノまた１１ツ成を有す
るが、好ましい実ｒｒ１！ｉ９ｑ様として、透明支持体
の上に順にペルオキシダーゼを含む試薬層、光遮鮎層お
よび展開層が設けられた構成を有するもの、透明支持体
の上に順にペルオキシダーゼを含む試薬層、光遮蔽層、
接眉層および展開層が設けられた構成を有するもの、透
明支持体の上に順ニベルオキゾダーゼを含む試薬層、刊
キンダーゼを含む光遮蔽ｊ１４および展開ｊ燐が設けら
ｈ７’こ構成を有するもの、透明支持体の上に順にベル
オキ／ダーゼを含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを
庁む接着層、および展開層が設けられた（１・Ｙ成を有
するもの、銹明支時体の上に順にベル刊ギ／ダー（二を
含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含む接着層、お
よびオキシダーゼを含む展開層が設けられた＋７＃Ｉ成
を有するもの、透明支持体の上に順にベルオキシターセ
ラ含む試薬層、オキシダーゼヲ含む光遮蔽層、オキシダ
ーゼを含む接着層、および展１５；〕層が設けらｉｌ、
た構成を有するもの、透明支持体の上に順にペルオキシ
ダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬層、光遮蔽１〜、
および展開層が設けられた構成を有するもの、透明支持
体の上に順にペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含
む試薬層、オキシダーゼを含む光遮蔽層、接着層、およ
び展［４１１層が設けられた構成を有するもの、透明支
持体の上に順にペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを
きむ試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含む試薬層、お
よび展開層が設けられた１イヴ成を有するもの、さらに
とｈもの層構成のバリエーション、などがおる。 本発明の多層分析材料は前述の特許明細店に開示の方法
に従って製造することができ、その具体例ｄ後記する実
施例に詳細に説明されている。寸だ本発明の蛋白質定量
用多層分析利料は前述の特Ｗ「明イｌ］省に開示の操作
手順と同様にして被検体液中の蛋白質を定量することが
できる。本発明の多層分析材料は実開昭！グー／ Ａ
２２９ ’Ｉ、 ％ｌ；！１ＨＩＧ ’ＫＩ１．−／
！ｒ１．０７９、実開昭ｊに一／グｊ＜ｊｊ≠、１１テ
バｒｔｉ昭ｓｓ’−１３ｇ１ｏｏに開示のスライド枠に
収めて化学分析スライド基、たけ特カＪ１昭、ｔ４−７
７９．２ ＜ｔに開示の液体試料展開補助材を一多孔性
展開層の上に設けた構造の化学分析スライドとし、て用
いるのが製造、輸送、保管、測定操作などの全ての面で
好寸しい。 実施例 ゼラチン下塗りが施されである厚さ／にｊμ市の透明ポ
リエヂレンデレフタレー１− （１）Ｅ’ｌ’）フィ
ルム」二に、下記れ１成から成る血中グルコース濃度定
用、用の試薬層を乾燥後の膜厚がおよそ／ｊμη１にな
るように塗布、乾燥し７た。 ペルオキシダーゼ 、２ｊｏｏｏＩＵ／、
７−シヒドロキシナフクレン ３ｇグー−
アミノアンチピリン ！ Ｉゼラチン
、２．００ ９ノニオンＪ’
［８，２１０（日本油脂化１′Ｊ製活而活姓剤；ポリオ
キ／エチレン。 ノニルフェニルエーテル）＋２９ この上に、ｏ、 、２ｇのノニオンｌｌ５２１０及びグ
ルコースオキシダーゼ、ｔｏ、 ｏ ｏ ｏ Ｉ Ｕ
ｉ含ｔｒ二酸化チタン粉末ｒ重川用をゼラチン１重ｈ１
部に混合分散したものより成る光遮蔽層を乾燥膜厚がお
よそ／ 、ｔ ｐ ｒｎになるように塗布、乾燥した。 この」二に水／θＯｍｌ中にゼラチン４／−２と酢酸力
ルシウ１．−ｚ ｇの割合で溶解し、更にこすしにノニ
オンＨ，Ｓ 、２ ／ ０をｏｌ、ｚｇを加えて、塗布
液とした。 とれ？【、光遮蔽層の上に乾燥膜厚がＶμｍとなるよう
に塗布、乾燥し接着層を形成させた。次に、接着層に３
０７７／ηＩ２の割合で水を湿し水として供給、湿潤さ
せたのち、綿ノ００係のブロード（東洋紡製１００双子
ブロード）を圧着ラミネートシ、乾燥させ１多孔性展開
層を設け、グルコース定量用の多層分析材料を完成させ
た。 この利料を１．ｊα×７゜、ｔｃｍの正方形のチップと
したのち、特開昭！７−４Ｊ４ｔｔ、２に開示のプラス
チックマウントに収めてグルコース定量用化学鋒析スラ
イドとした。このスライドを用いて、ＮａＦの干渉作用
に対する緩和効果を調べた。ヘパリン採血したのち遠心
分離によって調製したヒト血漿（グルコース含有量、２
３６ ｍＷｌｄｌ 中に異なる凧のＮａＦを添加し、検
査用検体とした。その７０μ）を上記の分析スライドの
展開層の上に点着し、３７°Ｃでｔ分間インクベーゾヨ
ンしたのち、ｒ ｏ ｏ ｎｍの測定光で反射光学濃度
を測定した。 結果は第１表に示した。ＮａＦ量が０〜／ Ｏｍｇ／ｄ
ｌの範囲にわたって、発色光学濃度がほぼ一定に保たれ
ていることが明らかである、 比較例１ 接着層中に酢酸カルシウムを含有さぜない他は実施例１
と全く同じ方法により比較用の化学分析スライドを作製
した。実施例１と同様にＮａＦの含有酸が異なるヒト血
漿を点着、発色光学濃度を測定した。結果を第１表に比
較例として示した。 ＮａＦの添加に伴いＮａＦ低濃度城では光学濃度が上昇
し、ついでＮａＦｉ度が大きくなるに従い光学濃度が低
下する＃ｌ向が強く見られる。なお、発色光学濃度値は
測定値からカブリ光学濃度値（被検液としてヒト血漿を
点着しインクペーンヨン後の発色光学濃度値）をさしひ
いた値である。 実施例２ 実施例１の酢酸カルシウムのかわりに塩化カルシウム、
２Ｍをゼラチンｐｇに対して加えたほかは実施例１と同
様にして（従ってＣａ２■イオンの含有１（は実施例１
の場合の約７ 、４’ ｆＦ￥）グルコース定磨用多層
分析拐料を調製した。 実施例１と同様の方法で測定した結果、第２表のような
結果をイ１すた。、ＮａＦの干渉はよく緩和されている
。 比較例２ 実施例２と同様の実験において接着層中に塩化力ルノウ
ムを添加しないで作）１曝シた。この比較用の分析スラ
イドを用いた測定結果を第２表に比較例として示した。 比較例１と同様顕著なＮａＦの干実施例３ 実施例１の酢酸カルシウムにかえて、塩化バリウムを用
いたほか（−Ｊ、実施例１と同様にして（従ってＢａ２
（ト）イオンの即位面積幽シの当爪比は実施例１の多増
分析月料の約０．２倍）グルコース定預用多層分析月料
を調製した。実施例１と同様にして測定しだところ、実
施例１と同様のＮａＦ の干渉作用の緩和か観６１１
−ｄれた。 実施例４ 酢酸カルシウムを接着層のかわりにつ゛Ｃ遮触層に７、
ｓＹ／ｍ２割合で含有させたほかは実施ｐｈｉと同様に
してグルコース定景用多層分析月料を調製した。実施例
１と同様にしてＮ ａ Ｆ の干渉作用の緩和効果を調
べたところ、実施例１と同様の良好な結果金得た。 実施例５ 酢酸カルシウムを接Ｎ層中に添加する〃・わシに酢酸カ
ルシウムの１０％水沼液を湿し水として用いてグルコー
ス定量用多層分析旧料金調製した。 実施例１と同様にして測定したところ、実施例１と同様
のＮａＦ の干渉作用の緩和効果が観測された。 実施例６ グルコースオキシダーゼのがわシにコレステロールオキ
シダーゼを同じ単位用いて光遮蔽層に含有させたほかは
実施例１と同様にしてコレステロール定光用多層分析材
料を調製し、スライド枠に収めてコレステロール定量用
化学分相スライドを作製した。このもののＮ ａ Ｆ
の干渉作用を実施例１と同様の方法によシ調べた。ｔ７
ヒ比較例１と同様にして、酢酸カルシウムを含まないス
ライドを作製してその緩和効果を調べた。酢敵カルシウ
ムを含むステイトでは明瞭な緩和効果（ＮａＦ の干渉
作用が現れない）がみられた。 実施例７ 実施例１及び比較例１で作製したスライドについて、以
下の実験を行い反応中のｐ Ｈを測定した。 ｐ Ｈ測定には東亜電波社製ｐＨメーター１−ＩＭ／ｊ
に、表面ｐ Ｈ測足用電極ＧＳ−／ｘｊＦを接続した測
定器を用い７こ。グルコース分析スライドに１０ ／ｌ
ｌの蒸溜水、管理血清新鮮ヒト血漿などの検液を点着
し、検液が展開された後に多層分析月料の多孔性展開層
を剥離除去し、接λｇ層側からｐ Ｉ−１電極を表面に
あてて展＃ｉ」／脅除去後／分後カ・らり分後にわたっ
て７分ごとにｐＩＩを１ｌｌｌｌ ｆした。なお、電極
の校正には、ｐ Ｈｕ 、 ０ ／及び６１ｇ６の燐酸
標準６１（−２−ｔ’ｃ）ｆｆｉ、Ｐ Ｅ Ｔ フィル
ム−Ｌに／Ｊμｌを採取し、■「極を直接フィルムに密
着させる方法により測定した。新鮮ヒト１１１１漿（Ａ
）−および蒸留水（１３）をそれぞれ検液として用いた
場合の反応中のｐＨ値副足結果を第１図に示す。 いずれの場ばもｐ ＩＩは、２〜３分で平衡値に到達す
ることが明らかである。 実施例９ 接着層中に加える酢酸力ルンウムの’；ｒｔ ｆｒ：’
、 ０？ ／ ｍ ２に保っておきこれに３．３−ジ
メチルグルタル酸を加えてｐ Ｈを釉々の値に変化させ
たほかは実施例１と同様にしてグルコース’ｊｉ’ Ｊ
’ｉ２−用多層分伯利料金媚製し、スライド枠に収めて
分析スライド全調製した。接着層のｐ Ｉ−１値の測ン
７は実施例７と同様の方法によｐ、点Ｍ液としてはヒト
血漿１０μｌを用いた。 あら力・じめ、ＮａＦ 含有Ｎが異なる試験管中に、ヘ
パリン採血し直ちに遠心分１ｉ７１Ｇ Ｌで得たヒト血
漿を採取、血漿中のＮａＦ 濃度がそれぞれ０（含イ了
せず）；／、Ｏ；３．Ｏキ／Ｔｎｌであるような検液を
１．１１製した。このような血漿の各１０μｌを前記の
スライドの多孔性展開層に点着し、３７°Ｃで６分間イ
ンキュベーションしたのちの発色光学濃をＪ’ ００
Ｉｔ ｍの波長で反射＋１１１ｊ光し／こところ、結果
は第３表の通りであった。ＮａＦ による干渉作用に対
する酢酸カルシウムの緩和効果はｒ） Ｈに殆ん
カプラーとしてＮ、Ｎ−ジ置換アニリン類との組合せ。 （６） ％開明ｚ７− ｙ＜ｔｔＪ′３．％開Ｍ３ｓ
ｙ−ｙ４’ Ａ’４’、 １ｒｔｌＪｌ］Ｌｔ７−タ＜
ｔｔｒｊ、 ｑｌ開１＋（３６７−タ１ｌｔｊ乙に開示
のｏ−ｔたハ１）−アミノブエ／ｌ−ル化合物捷たは〇
−甘たばｐ−フェニレンジアミン化合物と耐拡散性フェ
ノール化合物、耐拡散に七ナフト−ル化合物、耐拡散肚
アシルアセトアミド化は物寸たは耐拡散１／１−ピラゾ
ロン化合物どの組合せ。 （７） ／ｌ￥公昭、ｔＡ−１１．ｊ！７２に開示の
ペルオキシダーゼの呈色基質（ｃｏｌ ｏｒ−ｆｏｒｎ
ｔ目］ｇｓｕｌ）ｓｔｒａｔｅ） （心髄な場合カプ
ラーも含む）。 などがあげられる。これらのインジケータのうちでは、
４７−アミノアンチピリン捷たはその誘導体とナフトー
ルまだはその誘導体の舶合せが好ましく、そのうちでグ
ーアミノアンチピリンと／、７−シヒドロキンナフクＬ
／ンのわ］合ぜ、グーアミノ−，２，Ｊ−ジメチル−／
−（，２，グ、を−トリクロロフェニル）−３−ビラソ
リンーオ、−珂ント／。 ７−シヒドロキンナフタレンの組合ぜが最も奸オレい。 ペルオキシダーゼとして特公昭ｔｇ−グＪ′ｊタタ、
ｌｔ’＆公１１（Ｊ ｊ ７− ！ ！ｒ 、２０ 等
ニ１ＷＦＪ示）ｌｌ＆’１ｔｌｕ帥オよび動物起ｄ６の
ベル刊キソダーゼ（ＥＣ／、／／。 ７）、および１時開昭！７−？りｌり、２等に所Ｊ示の
微生物起源のペルオキシダーゼ（ＥＱ／、／／。 ７）のうちから適πに７種また釦−てΦ以上を組合せて
用いることができる。 植物起源のペルオキシダーゼの例として、西汀わさひ、
じゃがいも、いちじ＜ Ｉｆ ｉ？ｔ、かぶ、だいこん
から抽出されたペルオキシダーゼに、動物１起源のベル
メキンダーゼの例として、牛乳から抽出恣れたラクトペ
ルオキシター−ゼ、白血球から抽出されたベルドペルオ
キシダーゼを、微生物起源のペルオキシダーゼとしてＡ
１ｔｅｒｒ＋ａｒｉａ 屈。 Ｃｏｃｌ＋ｌ１ｏｂｏｌｕｓｉ、 Ｃｕｒｖｕｌａｒｉ
；＋ ｆ４゜１）ｅ４：１ｌｃｕｌａｒｉａ 属に丸し
非特異的ペルオキシダーゼ生産能をイ」する微生物起源
のベルメキシターセを・、（′れぞれあげることができ
る。 その他ＶＣ特公昭ｊ乙−１７−ｊ！タタ、１１・１云昭
３７− Ｊ−、、！、２ｏ ＜〒に開示のヂオ・／アン
酸鉄、り／ニン酸ε′（、フエロンアン化鉄（いずれも
鉄（→−１２）化合物）、りＩＪム硫酸カリウム、沃化
す１リウム。 沃化カリウム、モリブデン酸アンモニウム、モリブテン
酸カリウム等のペルオキシダーゼ活１生を有−１′４る
無機化合物を用いることもＣきる。 これらのうちで植物起源捷たは微生物起源の非特異的ペ
リオ・〜・ンダーゼがＱ！寸しい。 Δ・発明の多層分析Ｈ料においてに１．少なくともべ／
Ｌオキソダーゼを含む試薬層はペルオキシダーゼおよび
インシイｒ−りが靭、水性ポリマーバインダーの中に溶
庁ｆ′ま／ｃシ」−分散され−Ｃなるものである。 バインダーとして用いることができる親水性ポリマー１
ｒ［ペルオキシダーゼおよびインジケータと実質的に相
互作用を生ずることがなく、被膜形成能を市するもので
あれば伺でもよい６親水匪ポリマーの例としてゼラチン
、酸処理ゼラチン、脱イオン化ゼラグーン、ゼラチン誘
導体（例、アンル化ゼラグーン）、ポリヒニルアルコー
ノし、ポリビニルピロリドン、ポリビニルベン′−ヒン
スルΣｊ；ンｆｉｌ−１・’Ｊウム、カルン】・ハーン
ノナル十ルロース、す１リウムカルホキノメチルセルロ
ース、ヒドロキシコニチルセルロース、ノグルセルロー
ス、プルラン、フルラン誘導体、ポリアクリルアミド、
アクリルアミドコポリマー（例、アクリルアミド−Ｎ−
ビニルヒ゛ロリ１゛ノコポリマー、アクリル・アミド−
２−を二ドロキンエチルアクリルアミドコポリマー）、
諦あげることができる６試薬層のＪｊ、−さく乾燥Ｊｌ
ｊｉさ）は約ｊμｌ＋１から約１００μ！１１．好捷し
くけ約ｌθノＬ Ｉｎから約Ｊ−Ｏｐ ｍの範囲である
。 試鈷層におけるペルオキシダーゼの含有角は約Ｊ 千ｌ
Ｊ’／ｍ２カラ約／ ’万ＩＪ／ｍ２． Ｑｒ’４ Ｌ
＜ ｉ、ｌ：約／万υ／ｍ２から約６万ｖ／ｒ１１２の
範囲である。 インジケータの含有部は液体試別に含有されると予想さ
れる被検成分の最大含有に１に対応する化掌箭論による
Ｍ′ｇたけそれよシ多い童が必要であり。 この−Ｉ？１は尚業者が実験により決めることができる
・ベルメ・）′−ンダーゼを含む■１２０２呈色試桑と
ともに用いられるＦＯイオンとの間に、２ｔ’（Ｊにお
ける水１ｏｏｙに対する溶解度がθ１．２２以下の水に
離溶ヒの塩（以下、 １Ｉ７４溶殴Ｆ塩という。）を形
成しうる陽イオンを含む化合物（以下、蔚１１溶目゛Ｆ
塙形成性化合物という。）について説明する。朔溶ロニ
Ｆ塙形成跣化合物は本発明の多層分析月別の支持体以外
の少なくとも一つの層に含有されていればよく、親水ｈ
ｂバインダーポリマーを含む層の中にバ有されている」
ハ合には親水にＬバインク゛−にＣマ解Ｊたけ分散し７
て金型れていることが好せしい。 甘だ１１６酊江Ｆ塩形成ヒ（ミ化合物を親水性バインダ
ーポリマーを含む層の中に含有させるには多くの場合親
水陰バインダーポリマーを含む本則塗布液に難ｍ註Ｆ塩
形成にロヒ自物を溶解寸たは分散さ→むた塗布液を塗布
することによるので、難溶匪工２塩彫成四化合物は水に
溶′Ｍせたは分散するものが奸才しい。 ｉｖ溶匪Ｆ塩形成匪化合物中に含まれる陽イオンとして
は、ベルオキシクーゼ、および必要に応じて多層分析材
料のいずれの層に含有されるベルオキシター−ゼ、それ
ぞれの酵素を実質的に附＠寸たＩＪ、茗しく減少ネぜな
い陽イオンが選択される。陽イオンの例としてアルカリ
土類金属の２価陽イオン１例えｉｊｌ、Ｍｇ２■ｃａ２
■’ｓ ｓ ｒ２ ｅ、 ｎ ａ２■；他の金属の１価
寸たはそれ以上の価数の陽イオン。 例えば、ＦＬＹ”○）、■パｅ２■ｃ ｕ２■、 Ｂ、
３（！Ｅ）、 、、、ｅ３（す。 ■ ；多原子多価陽イオン、例えばＮａ５Ａ１６■。 １′ｌ（’ｊｙ”） ■（２Ｓｉ６■、Ｃａ５ｉ６■、ＢａＳ、６（４−）を
あげることができる。陽イオンは水和した陽イオンであ
ってもよい。これらの陽什ンのうちで、Ｃａ２（Ａ）、
Ｍ、２Ｑ）イオ７によ４２．オギ、、−−−叶ヨヤ、ダ
ーー５等の酵素の安定化作用を有するのでθｒ１、しい
陽イオンである。 員（１俗匪Ｆ塩形成し化合物に含まれる対陰イオンとし
ては前記の陽イオンと結合した化合物が水に不市匪ｉた
は水に離溶目ユでなく、かつ多層分ｖ１材１１に含有さ
れるベルオギシダーゼ、および必要に応じて含有される
オキシダーゼ、それぞ！Ｌの酵素活註を実質的にｌ！ｌ
’ｉ害または著しく減少させない陰イオンであれば何で
あってもよい。 対陰イオンの例として、低級脂肪族モノカルボン酸陰イ
オン（例、蟻酸イオン、酢酸イオン、ブｒ＋ヒオン酸イ
オン、酪酸イオン、イソ：酪酸イオン。 吉草酸イオン、イソ吉草酸イ捜ン、ピノぐル酸イ（オン
、フェニル酢酸イオン、低級脂肪族ジカルボン酸陰イオ
ン（例、−蓚酸イオン、マロン酸イオン。 こけく酸イオ′ン、メチルこはく酸イオン、グルタル酸
イオン、α−メチルグルクル酸イメン、β−メチルグル
クル酸イオン、α、α′−ジメチルグルタル酸イオン、
３１３−ジメチルグルタル酸イオン、アジピン酸イオン
、ピメリン酸イオン）。 脂肪族ポリカルボン酸陰イオン（例、カンホロン酸イオ
ン、プロパン−／、、２．ｊ−）リカルアＩ（°ン酸イ
オン）、炭１環式カルボン酸陰イオン（しょうのう酸イ
オン、カンホ酸イオン、安息香酸イオン５フタル酸イオ
ン、イソフタル酸イメン、テレフタル酸イオン）、ヒド
ロキシカルボン酸陰イオン（例、グリコール酸イオン、
乳酸イオン、グリセリン酸イオン、タルトロン酸イオン
、りんご酸イ牙ン、酒石酸イオン、くえん酸イオン、ベ
ンジル酸イオン、ザリチル酸イオン）、／・ロゲン陰イ
オン（塩素イオン、臭素・ｒオン）、硼酸イオン。 硝酸イメン、燐酸イオン、値酸イオン、チオ硫酸イオン
、亜硝酸イオン、アジド陰イオン（Ｎ３０）をあげるこ
とができる。これらのうちで、低級脂肪族モノカルボン
酸陰イオン、低級１１Ｆｆ肪族ジカルボン４．２陰イオ
ン、ヒドロキシカルボン酸陰イオン。 ハロゲン１姦イオン、燐酸イオン、（１肖Ｃｉ＆イオン
、硫酸イメンが奸才しく、酢酸イオン、プロピオン酸イ
オン、グルタル酸イオン、α−メチルタルタル酸イオン
、β−メチルグルタル酸イオン、α、α′−ジメヂルグ
ルタル酸イオン、３，３−ジメチルグルタル酸イオン、
りんご酸イオン、酒石酸イオン、くえん醇イオン、塩素
陰イメン、燐酸陰イオンが最も奸・才しい。多価の対陰
イメンはすべてのプロトンが存在しない多価陰イオンお
よびプロトンが１個寸たはそれ以上残存している酸１２
１：陰１オンのいずれをも用いることができる。 難溶匪Ｆ塩形成ｔｕｂ化合物は前記の陽イオンと対陰イ
メンが結合した化合物ｔたはさらに結晶水油たは結晶ア
ルコールを含む化合物であり、そのうちで好ましい化合
物は、蟻酸力ルシウノ１、酢酸カルシウム、プロピ刊ン
酸カルシウム、こはく酸カルシラノ・、メチルこはく酸
カルシラノ・、クルクル酸カルンウム、α−メチルグル
タル酸カルシウノ１、β−メチルグルクル酸カルシウム
、α、α１−ジメチルグルクル酸カルシウム、３．３−
ジノチルグルクル酸カルシウム、安息香酸カルシウム、
りんご酸カルシウム、酒石酸カルシウム、くえん酸カル
シウム、塩化カルシウム、燐酸二水素カルシウム、硝酸
刀ルシウム、蟻酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、プ
ロピ、ｌン酸マグネシウム、こしよく酸マグネシウム、
メチルこはく酸マグネシウム、グルタル酸マグネシウム
、α−メヂルグルタル酸マグネシウム、β−メグ−ルグ
ルタル酸マグネシウム、α、α１−ジメチルグルタル酸
マグネシウム、３．３− ジメチルグルタル酸マグネシ
ウム、りんご酸マグネシウム、酒石酸マグネシウム、く
えん酸マグネシウム、ザリチル酸マグネ／ウム、塩化マ
グネシウム、硝酸マグネゾウＡ、Ｊ’ｆ酸二水素マグ乞
／ウム、硫百貨マクネシウム、耐−Ｑ貨バリウム、酊酸
錨ｊ （２＋ｌ 。 ｎ１酸鉄（２＋）である。 離溶１９ＥＦ塩Ｊ［ツ成訃化合物）ｔｔ：Ｌ使用条件に
おいて。 ベルオキソターセが触媒するインジケータの呈色反応が
進行するときに、ベルオキソター−ヒが作用ＦＧ）イオ
ンとともに水に珪溶匪のＪｒＡＡ形ｈ１４シうるように
多層分析材料に含有されればよい。すなわち、離溶性Ｆ
地形成性化ａ物は少なくともペルオキシダーゼを含む試
薬層に含有いれてもよく、あるいは少なくともペルオキ
シダーゼを含む試薬層よりも」二側ｊの（ずなわら、少
なくともベルメキゾダーゼを含む試薬層に関して支持体
と逆の１１１ｊの）いずＩ］かの層または多孔ａ展開層
のいずれかに含有されてもよく、あるいｔ」、さらしこ
少なくともペルオキシダーゼを含むｉｒ’：、 薬層と
それよりも」こ伯１］の八☆ｉたｌ−、ｊ Ｕ５５層と
に含有されてもよい。Ｆ’Ｉｆ ｈ−ン訃Ｊ２塩形成医
化合物の陽イオン址たは陰イオンがペルオキシダーゼ寸
たはメキシターゼの活［を明害する場合にｔよ、が１０
醇ヒ１″Ｊパ塩形成団化合物をペルオキシダーゼ筐たは
オ・Ｙシダーゼを含む屑と別の層に含有さ一ヒ、間に中
Ｉ′ｌｌＪ層を介在させて用いることができる場合があ
る。 難溶性Ｆ塩形成性化合′吻の多層分析材料中における含
有量は液体試料中に添加されるＮａＦ の非凡および多
層分析相別の展ｅＥｊ層に定石１分価操作の際に点着さ
れる液体試料の卵に依存し、多層分析拐、Ｆ・１に戸、
着される液部中に含有されると予想されるＮａＦ 刑の
ん大館に対応する什学Ｍ１偏によるすδ寸たけそれよシ
多い月が、液体試ネ・１が展υト１され浸透する領域に
イＪ存する必要があることが理解されよう。前述の化学
量論による幻は推定用能であるが１．金裕を見て実用的
には難溶性Ｆ塩形成化上物の含有■は多層分析材料／ｌ
１１２につきｏ 、 ／ｍｅｑカニら／ ｅｑ 、 ｔ
ｊＪ４しくは０ 、．２ｍｅｑ ７Ｊ）ら０．ｊＣｑ
被検物質が過酸化水素でなく、化学反応により過酸化水
素を生成する反応系に組みこむことができる場合には、
被検物質が酸素と相互作用して過酸化水素を生成するた
めの触媒としてオキシダーゼを試薬層または他の層に含
有させておくことができる。オキシダーゼは被検物質に
応じて選択される必要がある。オキシダーゼとしては７
種のオキシダーゼを用いられることはもちろん、一連の
連続反応を進行させる複数種の酵素の組合せ（その中の
７種はオキシダーゼである。）を用いることもできる。 さらに必要な場合にはオキシダーゼとともにそのオキシ
ダーゼの補因子および／捷たは補酵素を組合せて用いる
ことはいうまでもない。 オキ／ダーゼ（必要な場合には補酵素もともに）ｔ」ペ
ルオキシダーゼおよびインジケータを含む試薬層に含有
させるか、あるいｔま試薬層よりも上側の層に含有させ
るか、さらにはペルオキシダーゼおよびインジケータを
含む試薬とそれよりも上側の層（７層または複数の層）
の両方（または合計３層以上）に含有させることができ
る。ここで試薬層より上側の層という表現には多孔性展
開層をも含めることができる。オキシダーゼが触ｆｔ’
にする基質の反応には酸素の存在が必須であシ、多層分
析材料においては酸素は空気中から展開層を経て他の層
内へ拡散するので、オキシダーゼが触媒する酸化反応の
効率的な進行にとっては酸素の層中への拡散の効率的な
達成を目的とした特願昭！ｔ−９３ｔＪ／ＶＣ開示した
、オキシダーゼをペルオキシダーゼおよびインジケータ
を含む試薬層より上側の層、ことに多孔性展開層または
多孔性展開層に隣接する層に含有させた構成の多層分析
材料とすることが好ましい。甘たコレステロールエステ
ルのように親油性物質が被検物質である場合には、親水
性バインダーポリマーを有する層へは被検物質が浸透し
にくいので、ことに多孔性展開層の内部にオキシダーゼ
を含有させることが好ましい、 本発明の多層分析材料に含有させることができるオキシ
ダーゼとして酸素（ｏ２）をアクセプタとするオキシダ
ーゼがあげられ、その例として次の酵素をあげることが
できる。０内はＥＣＮｕｒｎｂｅｒを表わず。 グリコレートオキシダーゼ （／、／、３゜リマ
レートオキゾダーゼ （／、／、 ３． ｊ
）グルコースオキシダーゼ （／、 ／、Ｊ、
リヘキソースオキシダーゼ （／、／、３．ｊ
）コレステロールオキシダーゼ （／、 ／、 ３
． Ａ）アリールアルコールオキシダーゼ （／、 ／
、 Ｊ、 ７）Ｌ−グルコノラクトンオキシダーゼ（／
、 ／、 ３゜Ｊ）ガラクトースオキシダーゼ
（／、 ／、 ３．９）アルコールオキシダーゼ
（／、 ／、 ３． ／ｊ）Ｌ−λ−ヒドロキシ酸
オキシダーゼ（／、 ／、 ３． ／Ｊ）アルデヒドオ
キシダーゼ （／１．２゜３．リキーリンチン
オキゾダーゼ （八、２．３．．２）ピルベー
トオキシダーゼ （ム！、 ３． ｊ）ピルベ
ートオキシダーゼ（ＣｏＡアセチル化） （／。λ。３
．６）ラドステロールオキシダーゼ （／、 Ｊ、
Ｊ、 、２）Ｄ−アスパルテートオキシダーゼ （八≠
、 ３． ／）Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ （へ
先３゜、２）Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ （／、
４ｔ、 ３．３）アミンオキシダーゼ（クラビニ４有
） （／、 ｔ、ｔ。３．リビリドキナミンポス
フエートオキシダーゼ（／。≠。３゜Ｊ）アミンオキシ
ダーゼ（銅含有） （ｉ、ａ、 ３．ｔ）Ｄ−
グルタメートオキシダーゼ （／、／、１．。３．
７）サルコシンオキシダーゼ （／。Ｊ、Ｊ
、 ／）Ｎ−メチルアミシ酸オキシダーゼ （／、
ｊ、 ３゜→Ｎ −メヂルーし一リシンオキシダーゼ（
／、ハ３．リウリカーゼ（ウレートオギシダーゼ） （
／、 ７． Ｊ。３）スルフィトオキシダーゼ
（／、 ｆ、 ３． ／）アスパルテートオキシダ
ーゼ （／。／（７，３，３）？−ヒドロキシア
ントラニレートオキシダーゼ（／、／θ。３゜乃アルギ
ニンｄ−モノメ°キシゲナーゼ （／、 ／３． ／、
２．リソシン２−モノオキシゲナーゼ （八／３．
／、！。→トリプトファンλ−モノオキシゲナーゼ
（／、 ／３． ／、２゜３）ラクテートオキシダーゼ （シクテートλ−至ノオキシゲナーセプ （／、
／３． ／、２． Ｐ）ジメチルアニリンモノオキシゲ
ナーゼ（ｙ、 ｉ４ｔ、 ／３゜リコレステロール７α
−モノオギシゲナーゼ（／、 ／４Ｚ、 ／３． ／７
）Ｆｌａｖｏｐｒｏｔｅｉｎ−１１ｎｋｅｄｍｏｎｏｏ
ｘｙｇｅｎａｔｅ （／、／１１．／
４ｔ、／）フェニルアラニンモノオキシゲナーセ（／。 ＃、 ／Ａ、 ／）グリセロール同ギシダーゼ（東洋醗
造から販売）グリシンオキシダーゼ（化学大辞典第３巻
（／ ９ ｔｙ ｏ年ｑ ７Ｂ６行）Ｋ記載）オキシダ
ーゼを含む複数種の酵素の組合せの例として以下のもの
がある。 グリセロールキナーゼ（２゜７．／、３０）およびＬ−
α−グリセロ燐酸オキシダーゼ（ｌ。 ／、９９゜ｊ：寸たけ特開昭３３−７．２Ｆ？コ、１時
開昭ｔ３−．２≠Ｉ’？３に開示）の組合せ（ｌ持開閉
！３−おりデ３に開示） トリグリセリド加水分解活性をもつリパーゼ、グリセロ
ールキナーゼ（，２，７，／、３０）およびＬ−α−グ
リセロ燐酸メキシダーゼ（／。 ／、９９．、ｔ；またはｌｔ’を開閉ｊｊ−７，２ｆ９
．２．１時開昭ｔ ３−．２ ａ ｌｒ ？ ｊ Ｋｔ
ｉＮ示） （Ｄ組合せ（ｉｔｓ？開昭、開閉３−．２
ｔ、ｔ ｔｒ ｙ ｙＫ１ｍ示）エステラーゼ作用をも
つリパーゼ、プロテアーゼおよびコレステロールオキシ
ダーゼ（／・ １０３．６）の組合せ（Ｉｎ開開閉Ｏ−
／３７／９Ｊ。 に開示） グルタミルピルベートトランスアミナーゼ（アラニンア
ミノトランスフェラーゼと同じ、１゜ｔ、ｉ、、：ｚ）
およびピルベートオキシダーゼ（ハＪ・３・ ３）の組
合せ（特願１１６Ｊに一９ｊ４Ｊ、２［開示） グルクミルオキザロアセデートトランスアミナーゼ（グ
ルタミン−オキソ酸アミノトランスフェラーゼと同じ。 λ。乙。１．／ｊ）、オキザロアセテートデカルボキシ
ラーゼ（４ｔ、 ハハ３）およびピルベートオキシダー
ゼ（／０．、ｚ。 ３．３）の組合せ（特願昭ｔ７−９３Ａ３．２に開示） これらのオキシダーゼのうちで、本発明の多層分析材料
において好′ましいのは、グリコレートオキシダーゼ、
マレートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキ
ソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、Ｌ
−グルコノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオキシ
ダーゼ、キザンテンオキシダーゼ、ピルベートオキシダ
ーゼ、つリカーゼ、アスコルベートオキシダーゼ、ラク
テートオキンクーゼ、グリシンオキシダーゼ、グリセロ
ールオキシダーゼなど、およびオキシダーゼを含む複数
種の酵素の組合せとして例示した組合せがあげられる。 オキシダーゼの多層分析材料中における含有量は、主と
して液体試料に含有される過酸化水素を生成する被検物
質の予想される最大址とオキシダーゼおよびペルオキシ
ダーゼの活性値の比により決めることができ、これは当
業者が実験により決めることができるが、おおよその含
有量として約／千て一／ｍ２から約１０万−ＩＪ−／／
ｍ２、好ましくは約３千″Ｖ／ｍ２から約ｊ万１／ｍ２
の範囲である。オキシダーゼがグルコースオキシダーゼ
の場合には、その含有用−は約コ千′ＴＪ／ｒｎ ２が
ら約グ万′ｔ／；／／ｍ２、好１しくは約グ千υ／ｍ
２から約Ｊ万一’Ｃｆ／ｍ ２の範囲である。 ペルオキシダーゼ、およびオキシダーゼはそれぞれの活
性が最大になる最適りＨ値があり、さらにはそれぞれの
活性はイオＸ強度や近傍に共存する陽イオンや陰イメン
の補力１による影響を・もうける。従って多ノー分析材
料においてをよ、第一にペルオキシダーゼを汀む試薬層
、オキシダーゼを含む層、またはベルオキシダーゼとオ
キシダーゼをともに含む試ｊ・Δ１それぞれのｐ Ｈ値
を、ついで必要に応じてイア１−ン強度や共存するイオ
ン、個などの因子をＪｉ＆適に設定することが、よい分
析結果（定Ｗ１．４Ｗ度、くりかえし再現性などについ
て）を得るためニハきわめて重要である。かかる目的の
為に多孔性展開層、試薬層、光速ＶＺ層その他の機能層
中に酸、アルカリ、塩、緩衝剤、１ｒト離剤、界面活性
剤などを含有させておくことは本１＾明の実施に当って
ｌｉ芋に重要なことである。これら反応栄件設定の為の
試薬類の種類、１１など＆；ｉ： 、分析の目的その他
によって大きく変化するので、目的に向って■庫室、選
択する必要がある。 ベルオキシダーゼおよびインジケーターを含む試薬層に
酸、アルカリまたは緩衝剤を含有させて過酸化水素の存
在下で検出可能な変化を起させるには、ペルオキシダー
ゼの最適ｐＨ値であるｐ■■７．０を中心にし−１−’
ｐ ＩＩ約！、０から約９．０１好ましくは約４゜Ｏ
からＩ、０の範囲のｐ １−１値範囲の下で変化を生じ
させることが好ましい。 オキシダーゼはぞの般適ｐＩＩ値は酵素の種類により異
なるが、例示すれば、グルコースオキシダーゼ：ｐｌ（
約ｊ、６：ヘキソースオ六シダーゼ：ｐ Ｈ約ｔ、３：
コレステロールオキゾダーゼ：ｐＩ（約３．に；ガラク
ト−スオキシダーゼ： ｐ １１約乙Ｏ；アルコールオ
キノダーゼ：ｐ、ＴＩ約７６ｊ；ウリカーゼ：ｐＪ（７
，Ｊ′〜に、オ；アスコルベートオキシダーゼ：ｐＨ約
、ｔ、７；、［、−α−グリ七ロ燐酸オキシダーゼ：ｐ
）Ｊ７．ｊ〜７．７である。 オキシダーゼを含む層ｄオキシダーゼの種類によシそれ
ぞれの最適ｐ １−１値またはその近傍のｐ Ｈ値範囲
に調整することが好ましい。ベルオキシダーゼの最適ｐ
Ｈ値と異なる最適ｐＨ値をもつオキシダーゼはそれ故に
別々の層に含有させることが好ましい。例えばグルコー
スオキシダーゼを多孔性展開層または後述する接着層に
含有させる場合には、多孔性展開１０または接着層に使
用Φ件下においてグルコースオキシダーゼの最適ｐ Ｈ
値であるｐ ｌ（！。ｔを中心としてｐ Ｈ７゜乙から
ｐＨ７゜ｔ１好寸しくは１１ Ｈ≠。ＯからＩ） Ｉ−
１７，０の範囲に＃（Ｉｉ持することができる酸または
緩衝剤を加えることができる。 試薬層、他の層、または多孔性展開層に含有させること
ができる酸、アルカリまたは緩衝剤として脂肪族ヒドロ
キシカルボン酸（例、グリコール酸、乳酸、α−ヒドロ
ギシ酪酸、グリセリン酸、タルトロン酸、シんご酸、酒
石酸、くえん酸）、脂肪族ジカルボン酸（例、マロン酸
、こケ＜酸、グルクル酸、α−メチルグルタル酸、β−
メチルグルタル酸、３，３−ジメチルグルタル酸、α。 αｌ−ジメチルグルタル酸）、脂肪族モノカルボン酸（
例、酢酸、プロピオン酸、酪酸）、水酸化リチウム、水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、日本化学会編「化学
便覧 基礎編」 （東京、丸善（床、／９６に年発行）
／ ３／、２−／ ３．２０ページに記載の緩衝剤（例
、くえん酸水素カリウム−くえん酸、ｆｒ酸二水素カリ
ウム−燐酸水素二ナトリラム） ）「Ｂｊｏｃｂｅｍｉ
ｓｔｒｙＪ ＋ 、ｊ（＋２） 、”４７−１７７ （
／＃＆）のＮｏｒｍａｎ ｇＧｏｏｄら著［Ｈｙｄｒｏ
ｇｅｎ Ｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ８ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌＲｏｓｅｎ、ｒｃｈ Ｊ Ｒ，Ｍ、 Ｃ，Ｄａ
ｗｓｏｎ ｅ ｔ ａ ｌ 編Ｉ Ｄａｔｅ ｆ
ｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｌｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ第
５ｅａｒｃｈＪ第λ ａｔ ｔｈｅ Ｃ１ａｒｅｎｄ
ｏｎ Ｐｒｅｓｓ、／ ９ Ａ９年発行）Ｉ／−７ｔ−
ＪＯＫページ、ｒＡｎａｌｙｔＩｃａ１１３１ｏｃｈｅ
ｍｌｓｔｒｙＪ 、 ／ 、０１１）３０θ−３１０
（／９ＫＯ）等に記載の緩衝剤（例、！−（Ｎ−モルホ
リノ）エタンスルポンＨ１Ｎ ’−ヒドロギンエチル
ピペラジンーＮ’−λ−ヒドロキシプロパンー３−スル
ポン酸（Ｈｅｐｐｓｏ ） ナトリウノ、塩廿たはカ
リウム塩、Ｎ−λ−ヒドロキシエチルピペラジンーＮ′
−３−プロパンスルポンＩ’ｉ’ｌ （Ｅｐｐ８）ナト
リウム塩またはカリウｌ、塩）、その他の緩衝剤（例、
マレイン酸モノナナトリウムまたはモノカリウム塩、３
，３−ジメチルグルタル酸モノナトリウムまたはモノカ
リウム塩）、無機酸（（Ｉｔ Ｉ＃、燐酸）がある。こ
れらのうちではくえん酸、酒石酸、りんご酸、ブールタ
ル酸、α−メチルグルタル酸、β−メチルグルタル酸、
α、α′−ジメチルグルタル酸、３，３−ジメチルグル
タル酸、水酸化リチウム、Ｈｅｐｐｓｏ Ｎａ塩または
に塩、Ｅｌ）Ｉ）［Ｉ Ｎａ塩またはに塩が好ましい。 本発明の多層分析材料においては、ベルオキシダーゼイ
〔含む試薬層を使用Φ件においてペルオキシダーゼの最
適ｐ■■値ｊ、Ｊ近傍に、オキシダーゼを含む層はそれ
ぞれのオキシダーゼの最適ｐ Ｉ（値近傍になるように
ｐＨ調節し、調節されたｐ Ｈ値とは無関係に離溶性Ｆ
塩形成性化合物をペルオキシダーゼを含む試薬層または
それより上側の層に含有させることにより、被検成分の
比色測定または螢光測定するだめの反応が最も短時間に
高効率で進行させる条件下で被検試料に添加されたＮａ
Ｆによる測定値の低下として現れる干渉作用を解消でき
るという著しい効果が達成される。 本発明の多層分析材料における多孔性展開層（以下、展
開層ということがある。）は分析材料の最外面に位置し
くすなわち、分析利料において試薬層に関して支持体と
反対側の最外面に位置する。）て、被検体液が点着され
る面であり、その作用は点着された被検体液が被検体を
含んだまオ液体の各版には無関係に単位面積当りほぼ一
定容量−の被検体液を試薬層に供給する機能を果すこと
である。この作用（展開作用）により少なくともペルオ
キシダーゼを含む試薬層（以下、試薬層ということがあ
る。）に供給される被検体液の容量、さらには被検体液
に含咬れる被検体の容量は単位面積当りほぼ等しいこと
になり、またこの作用が存在するゆえに、定量分析に際
して被検体液を正確に秤取しなくても定量分析が実施で
きることを意味する。当然のことであるが被検体液を正
確に秤取して定量分析を実施することを排除するもので
もないし、被検体液を正確に秤取することにより定−１
１１の精度が高する場合がある。 本発明の分析材料における多孔性展開層として、１１開
昭＜／、 ９−、ｊ ３ ｆｆ ｆ 、１’ （ｌｆ！
ｊ公昭！３−．２／Ａ７７）、米国特許第Ｊ ｑ９．２
／ １１号に開示さノｔている非繊維等方向多孔性層（
例、メンブランフィルタ−寸たはプラッシュポリマ一層
、微小球体−まだは粒子を接着剤で結合することによシ
製造された球体または粒子間の相互結合空間により等方
面多孔性が形成されている層）、特開昭ｊｆｊ−９０ｔ
ｚｑに開示されている微小球状ビーズが水により膨潤し
ない接着剤により点接触状に接着されて形成された三次
元格子構造物からなる連続空隙含有等方向多孔性構造物
層、特開昭ｒｔ−ｉｔａｉ！ｔに開示されている水洗さ
れた織物または親水化処理織物からなる繊維質異方性多
孔性展開層、特開昭ｊ７−１ｔ３Ｊ９に開示されている
物理的活性化処理された表面を有する織物からなる繊維
質異方性多孔性展開層、特願昭ｊに′−３≠３７０に開
示されている合成ポリマー繊維パルプを含む抄造紙、抄
造Ｆ紙または不織布からなる繊維質異方性多孔性展開層
を用いることができ、かつこれらの展開層はここにあげ
たｌｒｔ許明細四に開示の方法により設けることができ
る。またｌ持開閉弘９−ｊ３１１１に開示されているご
とく、二酸化チタン、酸化亜鉛、または（Ｎｆ酸バリウ
ムの微粉末を含有するメンブランフィルタ−寸たけブラ
ッシュポリマーＩｌｉ＋１は後述する光遮蔽層（輻射線
ブロッキング層、白色背景層ま）ζは光反射層）をかね
る展開層として本発明に分いて用いることができる。さ
らにカーボンブラックを含有するメンブランフィルタ−
′またはプラノ／ユボリマ一層を後述する光遮蔽層をか
ねる展開層として用いることができる。 被検体液が全血の場合、好ましい展開層として前述の三
次元格子構造物からなる連続空隙含有等方面多孔性１１
１１造物）堵および前述の繊維質異方性多孔性展開層が
あげられる。 本発明の多層分析材料においては試薬層と展開層の間に
水および被検体透過性の光、訊藪層（色遮蔽層、輻射線
ブロッキング層、背景層または光反射１１１ｉともいう
、、）を設けることができる。光遮蔽層は、たとえば、
赤血球を含む全血の如く、被検体液が着色粒子を含む場
合に有用な１９′！でちる。即ち光遮蔽層の片側にある
着色粒子の色はこの層によってさえき゛られて反対側、
すなわち透明支持体側からｌｄ着色粒子の色は全く見え
ず、従って比色定−１ｒｅ−！たは螢光６１１１光定皿
に当って着色粒子が定駄の妨害をしない。光遮蔽層は、
二酸化チタンｖＩＩ粉末、（ｌｌｌｆｉ酸バリウム微粉
末、酸化ｌＩＥ鉛微粉末、アルミニウム微粉末寸たｔま
カーボンブラック（７１１＋ 如＠ ＣＩ粉体を水およ
び被検体透過性の親水性ポリマーバインダー中に分散し
た層で、！μＩｌ＋から１１００ｐ。 好まし７くはｊμＴｉから３０μｍの範囲の厚さがあり
、被検体液および被検体は通過しうるものである、光遮
蔽層のポリマーバイングーとしては試薬層に用いたのど
同じ種類の親水性ポリマーの中から適宜に選択して用い
ることができる。 光遮蔽層としては二酸化チタン微粉末酸化亜鉛微粉、硫
酸バリウム倣粉末才たはカーボンブラックなとの光遮蔽
能を有する微粒子を含んだメンブランフィルタ−（ブラ
ツノユボリマ一層）を多孔質光遮蔽層として用いること
ができる。多孔質光遮蔽層は特開昭４Ｌ９−、、ｔ、？
ｆ ｇ ｆ （ｆｉｇ公昭ｊ＋３−２／に７７）ま
／Ｃはキヶ開閉ｊ弘−コ９７００に開示の方法により設
りることかできる、 本発明の多層分析材料においては展開層を試薬層、光遮
蔽層、または必要によシ設けら１ｔ７ｒ曲の層の上に接
木ｆｌｕ六層して一体化するだめの接着を強化する目的
で接着層を設けることができる。ことに展開層として多
孔性のシート状、フィルム状ＪたＶま膜状の累イ」を用
いる場合にｔ、Ｊ接着層を設けることが好ましい。 接／／ソ削としては試薬層のバインダーとして用いられ
ている水および被検体透過性″６１水性ポリマーを用い
ることができ、この場合には接着層の親水性ポリマーが
半乾きの状態のとき、咬たけ親水性ポリマーを水または
界面活性剤を含む水で湿潤させておいて、展開層として
用いる多孔性のノート状、フィルム状捷たけ膜状の素セ
を適当な圧力をかけて接着層に接着することができる。 接着層の厚さｉＪ、’ ０ ＊ 、ｔ ７＋ ｍから／
！ｐｒｎ、好寸しくは０゜５μｍｎ１からｊμ７ｎの範
囲である、本発明の多層分析材料には前記の諸層のほか
に必要に応じて、特開昭ｊ、２−３弘にｇ、特願昭ｊｔ
−／７乙Ｊ、７４ｔＸ特願昭！に一／７乙λ７ｊに開示
のバイヤ一層′または液体遮断層、ｒｒｇ開１［３ｔ／
−’、’０／９／、特開昭、ｔ３−／３／θｇ９等に開
示の検出層または媒染層、特開昭、＋４’−，２９７０
０に開示のマイグレーション阻止層 ７Ｒ，、開閉ｔ＜
／−２４７９３（特公昭タフ−，２に、２７７）、／待
開閉オ／−グＯ１９／等に開示の中間層、ｌＩ￥開昭開
閉−／３１０１ｆ？Ｘ特開昭ｔ７−４ｔＯｔグ？、１時
開昭Ｊ ７−ｓｏＡ Ａ ｏ、１１’テ題昭３７−１．
／９３１゜等に開示の蛋白質を通過させることができる
親水性バインダーポリマーを用いた層、１時開１１ｒ（
夕に−に！ｒ４Ｉ−９に開示の試薬含有微粒子分散層、
実開昭ｊ７−グ２９！／に開示の一定面積の液体試別点
着供給用ポーラス体（パッチ）、特願昭ｊＡ−９３４３
２に開示の酵素等の試薬を含む定面積多孔性層を設ける
ととができる。 本発明の多層分析材Ｆ１はここ呼での説明から明らかな
とおり、透明支持体の上に順にベルオ・＼′ノダーゼを
含む試薬層および展開層が設けらノまた１１ツ成を有す
るが、好ましい実ｒｒ１！ｉ９ｑ様として、透明支持体
の上に順にペルオキシダーゼを含む試薬層、光遮鮎層お
よび展開層が設けられた構成を有するもの、透明支持体
の上に順にペルオキシダーゼを含む試薬層、光遮蔽層、
接眉層および展開層が設けられた構成を有するもの、透
明支持体の上に順ニベルオキゾダーゼを含む試薬層、刊
キンダーゼを含む光遮蔽ｊ１４および展開ｊ燐が設けら
ｈ７’こ構成を有するもの、透明支持体の上に順にベル
オキ／ダーゼを含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを
庁む接着層、および展開層が設けられた（１・Ｙ成を有
するもの、銹明支時体の上に順にベル刊ギ／ダー（二を
含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含む接着層、お
よびオキシダーゼを含む展開層が設けられた＋７＃Ｉ成
を有するもの、透明支持体の上に順にベルオキシターセ
ラ含む試薬層、オキシダーゼヲ含む光遮蔽層、オキシダ
ーゼを含む接着層、および展１５；〕層が設けらｉｌ、
た構成を有するもの、透明支持体の上に順にペルオキシ
ダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬層、光遮蔽１〜、
および展開層が設けられた構成を有するもの、透明支持
体の上に順にペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含
む試薬層、オキシダーゼを含む光遮蔽層、接着層、およ
び展［４１１層が設けられた構成を有するもの、透明支
持体の上に順にペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを
きむ試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含む試薬層、お
よび展開層が設けられた１イヴ成を有するもの、さらに
とｈもの層構成のバリエーション、などがおる。 本発明の多層分析材料は前述の特許明細店に開示の方法
に従って製造することができ、その具体例ｄ後記する実
施例に詳細に説明されている。寸だ本発明の蛋白質定量
用多層分析利料は前述の特Ｗ「明イｌ］省に開示の操作
手順と同様にして被検体液中の蛋白質を定量することが
できる。本発明の多層分析材料は実開昭！グー／ Ａ
２２９ ’Ｉ、 ％ｌ；！１ＨＩＧ ’ＫＩ１．−／
！ｒ１．０７９、実開昭ｊに一／グｊ＜ｊｊ≠、１１テ
バｒｔｉ昭ｓｓ’−１３ｇ１ｏｏに開示のスライド枠に
収めて化学分析スライド基、たけ特カＪ１昭、ｔ４−７
７９．２ ＜ｔに開示の液体試料展開補助材を一多孔性
展開層の上に設けた構造の化学分析スライドとし、て用
いるのが製造、輸送、保管、測定操作などの全ての面で
好寸しい。 実施例 ゼラチン下塗りが施されである厚さ／にｊμ市の透明ポ
リエヂレンデレフタレー１− （１）Ｅ’ｌ’）フィ
ルム」二に、下記れ１成から成る血中グルコース濃度定
用、用の試薬層を乾燥後の膜厚がおよそ／ｊμη１にな
るように塗布、乾燥し７た。 ペルオキシダーゼ 、２ｊｏｏｏＩＵ／、
７−シヒドロキシナフクレン ３ｇグー−
アミノアンチピリン ！ Ｉゼラチン
、２．００ ９ノニオンＪ’
［８，２１０（日本油脂化１′Ｊ製活而活姓剤；ポリオ
キ／エチレン。 ノニルフェニルエーテル）＋２９ この上に、ｏ、 、２ｇのノニオンｌｌ５２１０及びグ
ルコースオキシダーゼ、ｔｏ、 ｏ ｏ ｏ Ｉ Ｕ
ｉ含ｔｒ二酸化チタン粉末ｒ重川用をゼラチン１重ｈ１
部に混合分散したものより成る光遮蔽層を乾燥膜厚がお
よそ／ 、ｔ ｐ ｒｎになるように塗布、乾燥した。 この」二に水／θＯｍｌ中にゼラチン４／−２と酢酸力
ルシウ１．−ｚ ｇの割合で溶解し、更にこすしにノニ
オンＨ，Ｓ 、２ ／ ０をｏｌ、ｚｇを加えて、塗布
液とした。 とれ？【、光遮蔽層の上に乾燥膜厚がＶμｍとなるよう
に塗布、乾燥し接着層を形成させた。次に、接着層に３
０７７／ηＩ２の割合で水を湿し水として供給、湿潤さ
せたのち、綿ノ００係のブロード（東洋紡製１００双子
ブロード）を圧着ラミネートシ、乾燥させ１多孔性展開
層を設け、グルコース定量用の多層分析材料を完成させ
た。 この利料を１．ｊα×７゜、ｔｃｍの正方形のチップと
したのち、特開昭！７−４Ｊ４ｔｔ、２に開示のプラス
チックマウントに収めてグルコース定量用化学鋒析スラ
イドとした。このスライドを用いて、ＮａＦの干渉作用
に対する緩和効果を調べた。ヘパリン採血したのち遠心
分離によって調製したヒト血漿（グルコース含有量、２
３６ ｍＷｌｄｌ 中に異なる凧のＮａＦを添加し、検
査用検体とした。その７０μ）を上記の分析スライドの
展開層の上に点着し、３７°Ｃでｔ分間インクベーゾヨ
ンしたのち、ｒ ｏ ｏ ｎｍの測定光で反射光学濃度
を測定した。 結果は第１表に示した。ＮａＦ量が０〜／ Ｏｍｇ／ｄ
ｌの範囲にわたって、発色光学濃度がほぼ一定に保たれ
ていることが明らかである、 比較例１ 接着層中に酢酸カルシウムを含有さぜない他は実施例１
と全く同じ方法により比較用の化学分析スライドを作製
した。実施例１と同様にＮａＦの含有酸が異なるヒト血
漿を点着、発色光学濃度を測定した。結果を第１表に比
較例として示した。 ＮａＦの添加に伴いＮａＦ低濃度城では光学濃度が上昇
し、ついでＮａＦｉ度が大きくなるに従い光学濃度が低
下する＃ｌ向が強く見られる。なお、発色光学濃度値は
測定値からカブリ光学濃度値（被検液としてヒト血漿を
点着しインクペーンヨン後の発色光学濃度値）をさしひ
いた値である。 実施例２ 実施例１の酢酸カルシウムのかわりに塩化カルシウム、
２Ｍをゼラチンｐｇに対して加えたほかは実施例１と同
様にして（従ってＣａ２■イオンの含有１（は実施例１
の場合の約７ 、４’ ｆＦ￥）グルコース定磨用多層
分析拐料を調製した。 実施例１と同様の方法で測定した結果、第２表のような
結果をイ１すた。、ＮａＦの干渉はよく緩和されている
。 比較例２ 実施例２と同様の実験において接着層中に塩化力ルノウ
ムを添加しないで作）１曝シた。この比較用の分析スラ
イドを用いた測定結果を第２表に比較例として示した。 比較例１と同様顕著なＮａＦの干実施例３ 実施例１の酢酸カルシウムにかえて、塩化バリウムを用
いたほか（−Ｊ、実施例１と同様にして（従ってＢａ２
（ト）イオンの即位面積幽シの当爪比は実施例１の多増
分析月料の約０．２倍）グルコース定預用多層分析月料
を調製した。実施例１と同様にして測定しだところ、実
施例１と同様のＮａＦ の干渉作用の緩和か観６１１
−ｄれた。 実施例４ 酢酸カルシウムを接着層のかわりにつ゛Ｃ遮触層に７、
ｓＹ／ｍ２割合で含有させたほかは実施ｐｈｉと同様に
してグルコース定景用多層分析月料を調製した。実施例
１と同様にしてＮ ａ Ｆ の干渉作用の緩和効果を調
べたところ、実施例１と同様の良好な結果金得た。 実施例５ 酢酸カルシウムを接Ｎ層中に添加する〃・わシに酢酸カ
ルシウムの１０％水沼液を湿し水として用いてグルコー
ス定量用多層分析旧料金調製した。 実施例１と同様にして測定したところ、実施例１と同様
のＮａＦ の干渉作用の緩和効果が観測された。 実施例６ グルコースオキシダーゼのがわシにコレステロールオキ
シダーゼを同じ単位用いて光遮蔽層に含有させたほかは
実施例１と同様にしてコレステロール定光用多層分析材
料を調製し、スライド枠に収めてコレステロール定量用
化学分相スライドを作製した。このもののＮ ａ Ｆ
の干渉作用を実施例１と同様の方法によシ調べた。ｔ７
ヒ比較例１と同様にして、酢酸カルシウムを含まないス
ライドを作製してその緩和効果を調べた。酢敵カルシウ
ムを含むステイトでは明瞭な緩和効果（ＮａＦ の干渉
作用が現れない）がみられた。 実施例７ 実施例１及び比較例１で作製したスライドについて、以
下の実験を行い反応中のｐ Ｈを測定した。 ｐ Ｈ測定には東亜電波社製ｐＨメーター１−ＩＭ／ｊ
に、表面ｐ Ｈ測足用電極ＧＳ−／ｘｊＦを接続した測
定器を用い７こ。グルコース分析スライドに１０ ／ｌ
ｌの蒸溜水、管理血清新鮮ヒト血漿などの検液を点着
し、検液が展開された後に多層分析月料の多孔性展開層
を剥離除去し、接λｇ層側からｐ Ｉ−１電極を表面に
あてて展＃ｉ」／脅除去後／分後カ・らり分後にわたっ
て７分ごとにｐＩＩを１ｌｌｌｌ ｆした。なお、電極
の校正には、ｐ Ｈｕ 、 ０ ／及び６１ｇ６の燐酸
標準６１（−２−ｔ’ｃ）ｆｆｉ、Ｐ Ｅ Ｔ フィル
ム−Ｌに／Ｊμｌを採取し、■「極を直接フィルムに密
着させる方法により測定した。新鮮ヒト１１１１漿（Ａ
）−および蒸留水（１３）をそれぞれ検液として用いた
場合の反応中のｐＨ値副足結果を第１図に示す。 いずれの場ばもｐ ＩＩは、２〜３分で平衡値に到達す
ることが明らかである。 実施例９ 接着層中に加える酢酸力ルンウムの’；ｒｔ ｆｒ：’
、 ０？ ／ ｍ ２に保っておきこれに３．３−ジ
メチルグルタル酸を加えてｐ Ｈを釉々の値に変化させ
たほかは実施例１と同様にしてグルコース’ｊｉ’ Ｊ
’ｉ２−用多層分伯利料金媚製し、スライド枠に収めて
分析スライド全調製した。接着層のｐ Ｉ−１値の測ン
７は実施例７と同様の方法によｐ、点Ｍ液としてはヒト
血漿１０μｌを用いた。 あら力・じめ、ＮａＦ 含有Ｎが異なる試験管中に、ヘ
パリン採血し直ちに遠心分１ｉ７１Ｇ Ｌで得たヒト血
漿を採取、血漿中のＮａＦ 濃度がそれぞれ０（含イ了
せず）；／、Ｏ；３．Ｏキ／Ｔｎｌであるような検液を
１．１１製した。このような血漿の各１０μｌを前記の
スライドの多孔性展開層に点着し、３７°Ｃで６分間イ
ンキュベーションしたのちの発色光学濃をＪ’ ００
Ｉｔ ｍの波長で反射＋１１１ｊ光し／こところ、結果
は第３表の通りであった。ＮａＦ による干渉作用に対
する酢酸カルシウムの緩和効果はｒ） Ｈに殆ん
第１図は実施例７における時間の経過とともに接着層側
からｐ Ｉ−１測定電極をあてて測定した反応中のｐＨ
値の変化を示すグラフである。八はヒト新ｆ１１′血漿
、Ｂは蒸留水をそれぞｉｔ検液どして用いた場合ＱｐＨ
ｐＨ比変化曲線る。
からｐ Ｉ−１測定電極をあてて測定した反応中のｐＨ
値の変化を示すグラフである。八はヒト新ｆ１１′血漿
、Ｂは蒸留水をそれぞｉｔ検液どして用いた場合ＱｐＨ
ｐＨ比変化曲線る。
Claims (6)
- （１）水不浸透性光透過性支持体の一ヒに、少なくとも
ペルオキシダーゼを含む試薬層、および多孔性展開層の
二つの層を少なくとも有し、この順に積層されてなる多
層分析材料において、前記支持体以外の少なくとも一つ
の１６ Ｋ ＦＯイオンとの間に、２ｊ’Ｃにおける水
１ｏｏｙに対するｍＭ度が０１．２１７’以下の水に難
溶性の塩を形成しうる陽イオンを含む化合物がｏ 、
ｉ ｍｅｑ／ｍ から’ ｅｑ／ｉ’；＋２の範囲の
割合で含有さｉｐていることを特徴とする多層分４ブｉ
材料。 - （２）前記陽イオンがＭｇ２（１→、Ｃａ２（＋’）、
５ｒｚ（：＋４゜１、２（３）、 Ｐ、、 ２宍Ｆｅ
２（＋＞、 ｃｕ２に−’＋、 ■、 、 ３（−１）
、 Ｆｅ ３■。 ａ（ｉ） ａ■ ６（＋） ｅ（＋
９Ｖ 、Ｎａ Ａｌ 、Ｋ Ｓｌ 、Ｃ
ａＳｉ および２ Ｂａ３ｉ６■からなる群から選ばれた少〃くとも７種で
ある特許請求の範囲／に記載の多層分４１１月料。 - （３）前配試θト層にペルオキシダーゼとともに少なく
ともグーアミノアンチピリン寸たけその誘導体が含有さ
れるＩＦ！ｉ才ｒｉｉｎ求の範囲／ｌたー１．２に記載
の多層分析材料。 - （４）前記試薬層または他のいずれか一つの層にオキシ
ダーゼが含有されている特許請求の範囲ｌないしｊＫｆ
ｆｃ戦の多層分析材料。 - （５） 前ａ己オキシダーゼがグリコレートオキンダ
ーセ、マレート牙キシダーゼ、グルコースオキシダー七
、ヘキンースオキシダーゼ、コレスプロールオキシダー
ゼ、Ｌ−クルコノラタトンオキシダーゼ、ガラクトース
オギゾターゼ、キザンチンオキシターゼ、ヒルベートオ
キシダーセ、ウリカーゼ、アノコルベートオキシダーゼ
、ラクテートオキシダーセ、グリシンオキシダーゼ、グ
リセロールオキシダーゼ、からなる群から選ばれた７種
である７１ｆｉ［Ｒｉ求の範囲グに記載の多層分析材料
。 - （６）前ｉ己オキシダーゼがグルコースオキシダーゼで
ある特許請求の範囲グに記載の多層分析材料。 （力 ｈＩＪ記オキシダーゼがコレステロールオキシ
ダーゼである特許請求の範囲４’に記載の多層分析材料
。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13175082A JPS5920853A (ja) | 1982-07-28 | 1982-07-28 | 多層分析材料 |
| DE8383107440T DE3365663D1 (en) | 1982-07-28 | 1983-07-28 | Multilayer analytical element |
| EP19830107440 EP0101945B1 (en) | 1982-07-28 | 1983-07-28 | Multilayer analytical element |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13175082A JPS5920853A (ja) | 1982-07-28 | 1982-07-28 | 多層分析材料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5920853A true JPS5920853A (ja) | 1984-02-02 |
| JPH04636B2 JPH04636B2 (ja) | 1992-01-08 |
Family
ID=15065309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13175082A Granted JPS5920853A (ja) | 1982-07-28 | 1982-07-28 | 多層分析材料 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0101945B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5920853A (ja) |
| DE (1) | DE3365663D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1984004930A1 (en) * | 1983-06-13 | 1984-12-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Process for decomposing ascorbic acid |
| WO2014157705A1 (ja) * | 2013-03-29 | 2014-10-02 | 味の素株式会社 | 改変グリシン酸化酵素 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5954962A (ja) * | 1982-09-22 | 1984-03-29 | Fuji Photo Film Co Ltd | 多層分析材料 |
| JPS6082859A (ja) * | 1983-10-13 | 1985-05-11 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層化学分析要素 |
| JPS60108753A (ja) * | 1983-11-18 | 1985-06-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | 多層化学分析要素 |
| JPS60222769A (ja) * | 1984-04-19 | 1985-11-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
| JPS60222770A (ja) * | 1984-04-19 | 1985-11-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
| US4806478A (en) * | 1984-10-17 | 1989-02-21 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Dry enzyme formulations containing D-amino acid oxidase |
| JPS63196849A (ja) * | 1987-02-12 | 1988-08-15 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
| US5358852A (en) * | 1992-12-21 | 1994-10-25 | Eastman Kodak Company | Use of calcium in immunoassay for measurement of C-reactive protein |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4098574A (en) * | 1977-08-01 | 1978-07-04 | Eastman Kodak Company | Glucose detection system free from fluoride-ion interference |
| US4255384A (en) * | 1978-08-14 | 1981-03-10 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Multilayered integral element for the chemical analysis of the blood |
| US4303408A (en) * | 1980-02-05 | 1981-12-01 | Eastman Kodak Company | Removal of interferents in analytical assays in a two phase interferent-removal zone |
-
1982
- 1982-07-28 JP JP13175082A patent/JPS5920853A/ja active Granted
-
1983
- 1983-07-28 DE DE8383107440T patent/DE3365663D1/de not_active Expired
- 1983-07-28 EP EP19830107440 patent/EP0101945B1/en not_active Expired
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO1984004930A1 (en) * | 1983-06-13 | 1984-12-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Process for decomposing ascorbic acid |
| WO2014157705A1 (ja) * | 2013-03-29 | 2014-10-02 | 味の素株式会社 | 改変グリシン酸化酵素 |
| CN105102620A (zh) * | 2013-03-29 | 2015-11-25 | 味之素株式会社 | 经修饰的甘氨酸氧化酶 |
| KR20150135321A (ko) * | 2013-03-29 | 2015-12-02 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 변형된 글리신 옥시다제 |
| JPWO2014157705A1 (ja) * | 2013-03-29 | 2017-02-16 | 味の素株式会社 | 改変グリシン酸化酵素 |
| US9976126B2 (en) | 2013-03-29 | 2018-05-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Modified glycine oxidase |
| CN105102620B (zh) * | 2013-03-29 | 2021-03-16 | 味之素株式会社 | 经修饰的甘氨酸氧化酶 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3365663D1 (en) | 1986-10-02 |
| JPH04636B2 (ja) | 1992-01-08 |
| EP0101945B1 (en) | 1986-08-27 |
| EP0101945A1 (en) | 1984-03-07 |
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