JPH0431675B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はペルオキシダーゼを含んだ保存安定性
が改良された過酸化水素検出呈色指示薬組成物お
よびこの組成物を含有する乾式分析操作可能な過
酸化水素検出定量分析フイルムに関する。さらに
詳しくは過酸化水素の定量分析を、過酸化水素を
基質としてペルオキシダーゼ及び酸化反応的に色
素を形成する化合物との相互作用で検出可能な化
学種の定量によつて実施するための組成物に実質
的に定量を妨害・阻害する事なしに組成物中のペ
ルオキシダーゼ力価の失活を防止するピロガロー
ル誘導体を含む事を特徴とする保存性の改良され
た過酸化水素検出呈色指示薬組成物およびこの組
成物を含有する保存性の改良された乾式分析操作
可能な過酸化水素検出定量分析フイルムに関す
る。 ペルオキシダーゼが触媒しあるいは関与する過
酸化水素を比色法により定量するための乾式の定
量分析フイルムが種々提案されており、実用され
ているものもある。それらのうちには体液中のグ
ルコース、尿酸、コレステロール、コリンエステ
ラーゼ、クレアチン、クレアチニンを乾式に測定
するために、その酸化酵素を作用させて生成した
過酸化水素を、または酵素反応の過程で生成した
反応物に酸化酵素を作用させて生成した過酸化水
素を呈色指示薬と反応させて発色させ、その発色
を測定して比色法により過酸化水素を定量するこ
とにより目的物を定量する方法に用いられる定量
分析フイルムがある。ことに臨床検査の分野にお
いて検査スピードを高め、煩雑な操作を排除し、
コストを低下させるために乾式の定量分析フイル
ムへの要望が強く、従来から単層や二層の検査紙
タイプの定量分析フイルムや分析精度が高い多層
の定量分析フイルムが導入され、顕著な発展をと
げてきた。 とくに特開昭49−53888においてはじめて開示
された多層一体型定量分析フイルムは従来の単層
や二層の検査紙タイプの定量分析フイルムに比べ
て著しく分析精度が向上しており、この多層一体
型定量分析フイルムにおいてもさらに分析精度の
向上と被測定物質に応じて検出感度の高い過酸化
水素検出指示薬の導入がなされており、その例と
して特開昭51−40191、特開昭53−131089、特開
昭54−29700、特開昭55−124499各明細書に開示
されている過酸化水素検出指示薬や多層分析フイ
ルムの層構成がある。 これらの乾式の定量分析フイルムの過酸化水素
検出指示薬は従来の湿式での定量分析に用いる過
酸化水素検出指示薬に基づいていて、その本質は
同じである。特に臨床検査の分野では、各種の生
体成分を特異的な化学反応で特に特異性の高い酵
素反応を利用して、共通な中間体に経由させ定量
している。この共通の中間体として過酸化水素が
古くから数多くの測定方法において利用されてお
り、また過酸化水素を基質とするヒドロペルオキ
シダーゼ及び関連試薬との組合せで、安価で精度
の高い比色法が数多く開発されている。 ヒドロペルオキシダーゼとしてはカタラーゼ、
ペルオキシダーゼ（POD）が数多く使用され、
特にペルオキシダーゼのペルオキシ反応を利用し
た過酸化水素検出指示薬との併用例は数多くあ
る。過酸化水素検出指示薬としては、(a)還元型色
原体(b)水素供与体（現像薬）とカプラーの組合せ
の２種類に分類される。前者はKeston，A.S.等
により始められ（Keston，A.S.「Specific
Colorimetric Enzymatics Analytical Reagents
for Glucose」Abstracts of Papers 129th
Meeting Am.Chem.Soc.P.31C，April（1956））、
後者はP.Trinder（Ann.Cli.Biochem.，６，24
（1969）およびJ.Clin.Pathol.，22，246（1969））
により開始された。その改良方法として、特公昭
47−33798、特公昭54−16235、特公昭51−37555、
特公昭53−44834、特公昭54−12360、特公昭55−
24879、特公昭54−3394、特開昭52−86392、特開
昭53−26188、特開昭49−50991、特開昭50−
11892、特開昭53−40585、特開昭55−110897、特
開昭54−25892、特開昭55−20471、特開昭55−
101861、特公昭55−2960等ではこれらの還元型色
原体や水素供与体、カプラーの改良が数多く開示
されている。 これら酵素法を用いる分析組成物、試験紙、多
層分析フイルムは、酵素を反応試薬として用いて
いる事より酵素に由来する長所と短所とを有す
る。 生体中で多種の酵素が複雑な生命現象を誤なり
なく駆動している要因は酵素の基質特異性にあ
り、これにより酵素は複雑な組成物中より目的の
化学物質（被検物質）を分離する事なしに選択的
に反応系へと導いてくれる。この様な高度の選択
性は一般の化学試薬では真似のできない極めて有
利な点である。 一方酵素は生体中の数多くの反応をおだやかな
条件で触媒するが、化学工業、製造業等で用いら
れる化学触媒と異なり組成が蛋白質である事に由
来する欠点をも内在する。最大の欠点は熱的変
質、活性化学種の不可逆反応に基く蛋白質の変質
等による酵素活性の失活が起り易い点である。す
なわち酵素活性は複雑な蛋白質の１次、２次更に
高次構造に基くデリケートな活性位の存在によつ
て生み出されているが、外部から反応性化学種の
化学反応物理吸着等によつてこれらの構造に変形
を生じさせれば酵素は失活する。定量分析組成物
中の酵素が失活すると期待される反応進行が低下
し、設計通りの働きをしないので誤つた分析値を
与えてしまう。 酵素を反応試薬とする分析組成物、試験紙、多
層分析フイルム等においては熱安定性が悪く、ま
た化学的に活性な化学種によつて失活し易い酵素
本来の性質がこれらの分析組成物の性能を決定し
通常長期保存が困難となつている。それ故通常は
冷蔵保存、冷凍保存、防湿保存等によつて分析材
料としての保存性をかろうじて保つている。 本発明の目的はペルオキシダーゼを用いる保存
安定性が改良された過酸化水素検出呈色指示薬組
成物を提供する事である。 本発明の他の目的は実質的に酵素反応を阻害し
ないピロガロール誘導体から成るペルオキシダー
ゼ劣化防止剤を提供する事である。 本発明の他の目的は過酸化水素検出呈色反応を
阻害しないピロガロール誘導体を含有した過酸化
水素検出呈色指示薬組成物を提供する事である。 本発明の他の目的は前記の改良された過酸化水
素検出呈色指示薬組成物を含む保存安定性が改良
された過酸化水素検出用定量分析フイルムを提供
することである。 本発明は、 １ ペルオキシダーゼ作用をする物質、過酸化水
素とペルオキシダーゼ作用をする物質との存在下
に検出可能な変化をおこす水素供与体とカプラー
との組合せとを含む過酸化水素検出呈色指示薬組
成物において、該組成物に一般式〔１〕で表わさ
れるピロガロール誘導体が含有されることを特徴
とする過酸化水素検出呈色指示薬組成物。 一般式〔１〕においてQ¹はアルキル基または
−COOQ²基を表わし、Q²はアルキル基を表わす。 ２ ペルオキシダーゼ作用をする物質、過酸化水
素とペルオキシダーゼ作用をする物質との存在下
に検出可能な変化を起こす水素供与体とカプラー
との組合せとを含む過酸化水素検出呈色指示薬組
成物を含有する試薬層を有する定量分析フイルム
において、該組成物に一般式〔１〕で表わされる
ピロガロール誘導体が含有されることを特徴とす
る定量分析フイルム。 一般式〔１〕においてQ¹はアルキル基または
−COOQ²基を表わし、Q²はアルキル基を表わす。 ３ 前記試薬層が呈色反応層と染料固定層を有す
る２に記載の定量分析フイルム。 ４ 前記試薬層が単一の層である２に記載の定量
分析フイルム。 である。本発明の好ましい実施態様として次の態
様５から１５がある。 ５ 前記水素供与体が４−置換アンチピリン、２
−ヒドラジノベンゾチアゾリン類、ｐ−ハロゲノ
フエノールおよび一般式〔２〕で表わされるＮ，
Ｎ−ジ置換−ｐ−フエニレンジアミンからなる群
から選ばれた少なくとも一化合物である１に記載
の組成物。 一般式〔２〕においてR⁵およびR⁶はそれぞれ
アルキル基、アルコキシアルキル基、ヒドロキシ
アルキル基、シアノアルキル基、ハロゲノアルキ
ル基またはアシルアミノアルキル基を表わし、
R⁵とR⁶は同じでも異なつてもよい。R⁷は水素原
子、アルキル基、アルコキシ基またはハロゲン原
子を表わす。 ６ 前記カプラーがナフトール類、フエノール
類、ピラゾロン類および一般式〔３〕で表わされ
るＮ，Ｎ−ジ置換アニリンからなる群から選ばれ
た少なくとも一化合物である１に記載の組成物。 一般式〔３〕においてR¹およびR²はそれぞれ
水素原子、アルキル基またはアルコキシ基を表わ
し、R¹とR²は同じでも異なつてもよい。R³およ
びR⁴はそれぞれアルキル基、アルコキシアルキ
ル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル
基、シアノアルキル基、ハロゲノアルキル基また
はアシルアミノアルキル基を表わし、R³とR⁴は
同じでも異なつてもよい。 ７ 前記水素供与体が４−アミノアンチピリンで
ある５に記載の組成物。 ８ 前記水素供与体が４−置換アンチピリン、２
−ヒドラジノベンゾチアゾリン類、ｐ−ハロゲノ
フエノールおよび一般式〔２〕で表わされるＮ，
Ｎ−ジ置換−ｐ−フエニレンジアミンからなる群
から選ばれた少なくとも一化合物である２ないし
６に記載の定量分析フイルム。 一般式〔２〕においてR⁵およびR⁶はそれぞれ
アルキル基、アルコキシアルキル基、ヒドロキシ
アルキル基、シアノアルキル基、ハロゲノアルキ
ル基またはアシルアミノアルキル基を表わし、
R⁵とR⁶は同じでも異なつてもよい。R⁷は水素原
子、アルキル基、アルコキシ基またはハロゲン原
子を表わす。 ９ 前記カプラーがナフトール類、フエノール
類、ピラゾロン類および一般式〔３〕で表わされ
るＮ，Ｎ−ジ置換アニリンからなる群から選ばれ
た少なくとも一化合物である２ないし４に記載の
定量分析フイルム。 一般式〔３〕においてR¹およびR²はそれぞれ
水素原子、アルキル基またはアルコキシ基を表わ
し、R¹とR²は同じでも異なつてもよい。R³およ
びR⁴はそれぞれアルキル基、アルコキシアルキ
ル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル
基、シアノアルキル基、ハロゲノアルキル基また
はアシルアミノアルキル基を表わし、R³とR⁴は
同じでも異なつてもよい。 １０ 前記水素供与体が４−アミノアンチピリン
である２ないし４に記載の定量分析フイルム。 １１ 前記試薬層が支持体と多孔性層の間に設け
られており、前記多孔性層と前記試薬層が流体接
触している一体に接着されている２ないし４に記
載の定量分析フイルム。 １２ 前記組成物がポリマーバインダーの中に含
有されている２ないし４に記載の定量分析フイル
ム。 １３ 前記試薬層にアニオン性ポリマーまたはカ
チオン性ポリマーからなる媒染剤が含有されてい
る２ないし４に記載の定量分析フイルム。 １４ 前記染料固定層にアニオン性ポリマーまた
はカチオン性ポリマーからなるポリマー媒染剤が
含有されている３に記載の定量分析フイルム。 １５ 前記組成物が多孔性支持体に含浸されてい
る２に記載の定量分析フイルム。 本発明の過酸化水素検出呈色指示薬組成物（以
下、過酸化水素検出指示薬ということがある。）
は過酸化水素の存在下に化学的相互作用により可
視光、近紫外光または近赤外光によつて検出可能
な化合物（以下、染料という。）を形成しうる組
成物である。また本発明の過酸化水素検出指示薬
は過酸化水素を検色・定量できるばかりでなく、
必要により過酸化水素を生成しうる化合物（前駆
体という。）と化学的相互作用して過酸化水素を
形成する試薬組成物を併用することにより、前駆
体をも検出・定量できる。 ペルオキシダーゼ作用をもつ物質としては特開
昭50−137192に開示されている諸種の生物から抽
出されたペルオキシダーゼ、合成ペルオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ様作用を示す生物から抽出
された他の化学物質をあげることができ、これら
のうちではペルオキシダーゼが好ましい。 ペルオキシダーゼ作用を持つ物質、過酸化水素
とペルオキシダーゼ作用を持つ物質との存在下に
検出可能な変化を起す物質とを含む過酸化水素検
出指示薬組成物としては古くから知られているベ
ンジジンやフエニレンジアミン、特開昭51−
89491に開示されている３，3′，５，5′−テトラ
メチルベンジジン、特開昭53−26188に開示され
ているトリアリールイミダゾール等のそれ自身の
酸化により検出可能な呈色化合物を与える色原体
や従来カラー写真法で広範囲に研究されている水
素供与体とカプラーとの酸化カプリング反応によ
り検出可能な呈色化合物を与える組合せ等を本発
明に用いる事ができる。 過酸化水素検出呈色指示薬に含まれる水素供与
体としては特開昭48−52158に開示されている４
−置換アンチピリン（４−置換−２，３−ジメチ
ル−１−フエニル−３−ピラゾリン−５−オン）
およびその他の公知の４−置換アンチピリン、特
開昭50−137192に開示されているＮ，Ｎ−ジ置換
オルト−またはパラ−フエニレンジアミンおよび
その他の公知のＮ，Ｎ−ジ置換オルト−またはパ
ラーフエニレンジアミン、特開昭55−20471に開
示されている２−ヒドラゾノベンゾチアゾリンお
よびその他の公知の２−ヒドラゾノベンゾチアゾ
リン、特開昭55−148100に開示されているｐ−ハ
ロゲノフエノールおよびその他のｐ−ハロゲノフ
エノール、および前述の一般式〔２〕で表わされ
るＮ，Ｎ−ジ置換−ｐ−フエニレンジアミンのう
ちから選択して用いることができる。 ４−置換アンチピリンの具体例としては４−ア
ミノアンチピリン（CAS Registry Number〔83
−07−８〕）、４−（ジメチルアミノ）アンチピリ
ン（ピラミドン〔58−15−１〕）、４−（エチルア
ミノ）アンチピリン〔15166−10−６〕、４−（メ
チルアミノ）アンチピリン（ノラミドピリン、
〔519−98−２〕）、４−（ナトリウムスルホナトメ
チルアミノ）アンチピリン（スルフアミピリン、
〔129−89−５〕）、４−〔（ナトリウムスルホナトメ
チル）（イソブチル）アミノ〕アンチピリン（ジ
ブピロン、〔1046−17−９〕）、４−〔（ナトリウム
スルホナトメチル）（メチル）アミノ〕アンチピ
リン（メタムピロン、〔5907−38−０〕）、４−イ
ソプロピルアンチピリン（プロピフエナゾン、
〔479−92−５〕）がある。その他に構造類似の化
合物として４−アミノ−２，３−ジメチル−１−
ｐ−トリル−３−ピラゾリン−５−オン〔56430
−10−５〕、４−アミノ−１，３−ジフエニル−
２−メチル−３−ピラゾリン−５−オン〔52744
−73−７〕、がある。その他に２−（ジメチルアミ
ノ）−５−フエニル−２−オキサゾリン−４−オ
ン（トザリノン、〔1046−17−９〕）も用いること
ができる。 一般式〔２〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換−ｐ
−フエニレンジアミンにおける置換基R⁵および
R⁶がアルキル基の場合、アルキル基としては炭
素原子数１乃至５の直鎖状または分岐状の低級ア
ルキル基で、その具体例としてはメチル基、エチ
ル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、イソ
プロピル基、イソブチル基、イソアミル基、ｔ−
ブチル基、ネオペンチル基がある。アルコキシア
ルキル基の場合、アルコキシアルキル基としては
炭素原子数１乃至３の低級アルコキシ基が置換し
た炭素原子数１乃至３の低級アルキル基で、その
具体例としてはメトキシメチル基、２−メトキシ
エチル基、１−メトキシエチル基、３−メトキシ
プロピル基、２−メトキシプロピル基、エトキシ
プロピル基、２−エトキシエチル基がある。ヒド
ロキシアルキル基の場合、ヒドロキシアルキル基
としてはヒドロキシル基が置換した炭素原子数１
乃至５の直鎖状または分岐状の低級アルキル基
で、その具体例としてはヒドロキシメチル基、２
−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシエチル
基、３−ヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシ
プロピル基、４−ヒドロキシブチル基、５−ヒド
ロキシペンチル基がある。シアノアルキル基の場
合、シアノアルキル基としてはシアノ基が置換し
た炭素原子数１乃至５の直鎖状または分岐状の低
級アルキル基で、その具体例としてはシアノメチ
ル基、２−シアノエチル基、１−シアノエチル
基、３−シアノプロピル基、２−シアノプロピル
基、５−シアノペンチル基がある。ハロゲノアル
キル基の場合、ハロゲノアルキル基としてはハロ
ゲン原子として弗素、塩素、臭素または沃素原子
が置換した炭素原子数１乃至５の直鎖状または分
岐状の低級アルキル基で、その具体例としてはフ
ルオロメチル基、クロロメチル基、ブロモメチル
基、２−フルオロエチル基、１−クロロエチル
基、２−クロロエチル基、２−ブロモエチル基、
３−クロロプロピル基がある。アシルアミノアル
キル基の場合、アシルアミノアルキル基としては
アシルアミノ基としてアセトアミド基、プロピオ
ンアミド基、ベンズアミド基、トルアミド基、メ
タンスルホンアミド基、エタンスルホンアミド
基、プロパンスルホンアミド基、ベンゼンスルホ
ンアミド基、トルエンスルホンアミド基が置換し
た炭素原子数１乃至５の直鎖状または分岐状の低
級アルキル基で、その具体例としてはアセトアミ
ドメチル基、プロピオンアミドメチル基、ベンズ
アミドメチル基、ｐ−トルアミドメチル基、メタ
ンスルホンアミドメチル基、エタンスルホンアミ
ドメチル基、ベンゼンスルホンアミドメチル基、
ｐ−トルエンスルホンアミドメチル基、２−アセ
トアミドエチル基、２−プロピオンアミドエチル
基、２−ベンズアミドエチル基、２−ｐ−トルア
ミドエチル基、２−メタンスルホンアミドエチル
基、２−（エタンスルホンアミド）エチル基、２
−（ベンゼンスルホンアミド）エチル基、２−（ｐ
−トルエンスルホンアミド）エチル基、３−アセ
トアミドプロピル基、３−ベンズアミドプロピル
基がある。 R⁵またはR⁶として好ましい置換基はアルキル
基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシアルキル
基、アシルアミノアルキル基、ハロゲノアルキル
基、シアノアルキル基であり、好ましい置換基の
具体例としてメチル基、エチル基、メトキシメチ
ル基、２−メトキシエチル基、エトキシメチル
基、２−エトキシエチル基；ヒドロキシメチル
基、２−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシエ
チル基、２−ヒドロキシプロピル基；アセトアミ
ドメチル基、２−アセトアミドエチル基、メタン
スルホンアミドエチルメチル基、２−メタンスル
ホンアミドエチル基；クロロメチル基、２−クロ
ロエチル基；シアノメチル基、２−シアノエチル
基がある。 一般式〔２〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換−ｐ
−フエニレンジアミンにおける置換基R⁷がアル
キル基の場合、その具体例は前述のR⁵またはR⁶
がアルキル基の場合の具体例と同じである。R⁷
がアルコキシ基の場合、アルコキシ基としては炭
素原子数１乃至５の直鎖状または分岐状の低級ア
ルキル基を有するアルコキシ基で、その具体例と
してはメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、
イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ
基、ペンチルオキシ基、イソアミルオキシ基があ
る。R⁷がハロゲン原子の場合、その具体例とし
て弗素原子、塩素原子、臭素原子、沃素原子があ
る。 R⁷として好ましい置換基は水素原子、アルキ
ル基、ハロゲン原子であり、アルキル基の具体例
としてメチル基、エチル基、プロピル基、ハロゲ
ン原子の具体例として弗素原子、塩素原子があ
る。 一般式〔２〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換−ｐ
−フエニレンジアミンの具体例としては次の化合
物がある。 Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｐ−フエニレンジアミン Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フエニレンジアミン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）−ｐ
−フエニレンジアミン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−エトキシエチル）−ｐ−
フエニレンジアミン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−メタンスルホニルアミ
ノエチル）−３−メチル−４−アミノアニ リン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）−３
−メチル−４−アミノアニリン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−シアノエチル）−ｐ−フ
エニレンジアミン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−クロロエチル）−ｐ−フ
エニレンジアミン Ｎ−エチル−Ｎ−（β−エトキシエチル）−ｐ−
フエニレンジアミン Ｎ，Ｎ−ジエチル−３−クロロ−４−アミノア
ニリン Ｎ，Ｎ−ビス（β−シアノエチル）−ｐ−フエ
ニレンジアミン 水素供与体としては４−置換アンチピリンおよ
び一般式〔２〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換−ｐ
−フエニレンジアミンが好ましく、そのうちで特
に４−アミノアンチピリン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−
ｐ−フエニレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｐ
−フエニレンジアミンが好ましい。 一般式〔３〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換アニ
リンにおける置換基R¹およびR²がアルキル基ま
たはアルコキシ基の場合、その具体例は前述の一
般式〔２〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換−ｐ−フ
エニレンジアミンにおける置換基R⁵またはR⁶が、
それぞれアルキル基またはアルコキシ基の場合の
具体例に同じである。 R³およびR⁴がアルキル基、アルコキシアルキ
ル基、ヒドロキシアルキル基、シアノアルキル
基、ハロゲノアルキル基またはアシルアミノアル
キル基の場合、その具体例は前述のR⁵またはR⁶
が、それぞれアルキル基、アルコキシアルキル
基、ヒドロキシアルキル基、シアノアルキル基、
ハロゲノアルキル基またはアシルアミルアルキル
基の場合の具体例に同じである。R³およびR⁴が
アミノアルキル基の場合、アミノアルキル基とし
てはアミノ基が置換した炭素原子数１乃至５の直
鎖状または分岐状の低級アルキル基で、その具体
例としてはアミノメチル基、２−アミノエチル
基、１−アミノエチル基、３−アミノプロピル
基、２−アミノプロピル基がある。 R¹またはR²として好ましい置換基は水素原子、
アルキル基、アルコキシ基であり、アルキル基の
具体例としてメチル基、エチル基、プロピル基、
アルコキシ基としてメトキシ基、エトキシ基があ
る。 R³またはR⁴として好ましい置換基はアルキル
基、アルコキシアルキル基、ヒドロキシアルキル
基、シアノアルキル基、ハロゲノアルキル基で、
その具体例としてはメチル基、エチル基、プロピ
ル基；メトキシメチル基、２−メトキシエチル
基、３−メトキシプロピル基、エトキシメチル
基、２−エトキシエチル基；ヒドロキシメチル
基、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエ
チル基、２−ヒドロキシプロピル基、３−ヒドロ
キシプロピル基；シアノメチル基、２−シアノエ
チル基；クロロメチル基、１−クロロエチル基、
２−クロロエチル基、２−クロロプロピル基、３
−クロロプロピル基、ブロモメチル基、２−ブロ
モメチル基、フルオロメチル基、２−フルオロエ
チル基がある。 一般式〔３〕で表わされるＮ，Ｎ−ジ置換アニ
リンの具体例としての次の化合物がある。 Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン Ｎ−メチル−Ｎ−ヒドロキシメチルアニリン Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ア
ニリン Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ア
ニリン Ｎ−メチル−Ｎ−（２−メトキシエチル）アニ
リン Ｎ−エチル−Ｎ−（２−メトキシエチル）アニ
リン Ｎ−エチル−Ｎ−（２−エトキシエチル）アニ
リン Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−トルイジン Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルイジン Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシメチル）−ｍ−トル
イジン Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−ｍ−
トルイジン Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシプロピル）−ｍ
−トルイジン Ｎ，Ｎ−ビス（３−ヒドロキシプロピル）−ｍ
−トルイジン Ｎ−メチル−Ｎ−ヒドロキシメチル−ｍ−トル
イジン Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシエチル−ｍ−
トルイジン Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロキシメチル−ｍ−トル
イジン Ｎ−メチル−Ｎ−メトキシメチル−ｍ−トルイ
ジン Ｎ−エチル−Ｎ−メトキシメチル−ｍ−トルイ
ジン Ｎ−エチル−Ｎ−２−メトキシエチル−ｍ−ト
ルイジン Ｎ−シアノメチル−Ｎ−ヒドロキシメチル−ｍ
−トルイジン Ｎ−メチル−Ｎ−２−クロロエチル−ｍ−トル
イジン Ｎ−エチル−Ｎ−２−クロロエチル−ｍ−トル
イジン Ｎ−２−シアノエチル−Ｎ−２−ヒドロキシエ
チル−ｍ−トルイジン Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−アニシジン Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−アニシジン Ｎ−メチル−Ｎ−ヒドロキシメチル−ｍ−アニ
シジン Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシエチル−ｍ−
アニシジン これらの化合物のうちで好ましいＮ，Ｎ−ジ置
換アニリンは次の化合物である。 Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−ｍ−
トルイジン Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシエチル−ｍ−
トルイジン Ｎ−２−シアノエチル−Ｎ−２−ヒドロキシエ
チル−ｍ−トルイジン Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−アニシジン Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−アニシジン フエノール、ナフトール、５−ピラゾロン系カ
プラーは写真化学の分野で数多くの化合物が公知
であり、それらはT.H.James編「The Theory
of the Photographic Process」4th Edition
（Macmillan Publishing Co.Inc.，New York，
1977年発行）の第12章（Principles and
Chemistry of Color Photography，335〜372
頁）に記されている。 具体的な化合物を例示する。 フエノール、ナフトール系カプラー： フエノール、２，４−ジクロロフエノール、
２，６−ジクロロフエノール、ｐ−ヒドロキシ安
息香酸、ｍ−ヒドロキシ安息香酸、ｏ−ブロモフ
エノール、４，６−ジクロロ−ｏ−クレゾール、
２，４−ジブロモフエノール、Ｎ−オクチル−４
−メトキシサリチルアミド、４−アセトアミノ−
Ｎ−ヒドロキシエチルサリチルアミド、α−ナフ
トール、β−ナフトール、１，７−ジヒドロキシ
ナフタレン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−ヒドロキシ
−２−ナフトアミド、Ｎ−プロピル−１−ヒドロ
キシ−２−ナフトアミド、１−ナフトール−２−
スルホン酸、１，８−ジヒドロキシナフタレン−
３，６−ジスルホン酸、１−ナフトール−３−ス
ルホン酸、１−ナフトール−８−スルホン酸、
２，３−ジヒドロキシナフタレン−６−スルホン
酸、ｐ−ヒドロキシジフニエル、１，５−ジヒド
ロキシナフタレン、３，５−ジヒドロキシ−２−
ナフトエ酸−５−ピラゾロンカプラー： ３−メチル−１−フエニル−５−ピラゾロン、
３−メチル−１−（ｐ−スルホフエニル）−５−ピ
ラゾロン、１，３−ジフエニル−５−ピラゾロ
ン、３−アセトアミノ−１−（2′，4′，6′−トリク
ロロフエニル）−５−ピラゾロン、３−アニリノ
−１−（ｐ−スルホフエニル）−５−ピラゾロン 本発明のメカニズムは未だ明確に説明されない
が、実験結果よりの推論は次の通りである。 或る種の化合物の酸化体、特に含窒素化合物の
一電子酸化体等はペルオキシダーゼを失活させ、
特に水素供与体の酸化生成物は失活させる作用が
著しかつた。そこで各種酸化防止剤を各種添加
し、水素供与体の酸化防止を試みた所、１，２−
ジヒドロキシナフタレン、ナフトール誘導体にペ
ルオキシダーゼを失活させず水素供与体の酸化を
も防止する作用がある傾向を見い出した。これら
のうちで、ピロガロール誘導体は顕著な効果が見
い出された。 ピロガロール誘導体のうちで更に水素供与体と
酸化カツプリングをしないすなわち５位に離脱不
能な置換基を有する化合物群は好しくない（比色
分析の妨害となる）副発色を抑え、ペルオキシダ
ーゼの安定化作用はきわめて顕著であつた。 ペルオキシダーゼ含有過酸化水素検出呈色指示
薬組成物に含まれるピロガロール誘導体のペルオ
キシダーゼ作用安定化効果は組成物の保存中に空
気中の酸素、水、組成物中のペルオキシダーゼ、
水素供与体、残存水分等の相互作用で生成するペ
ルオキシダーゼを失活させる酸化物の生成を防止
している。このピロガロール誘導体による酸化防
止能が特異的である事は、詳細な機構は不明であ
るがピロガロール誘導体の酸化体がペルオキシダ
ーゼを失活させないという特異性が存在するため
であろう。 好ましいピロガロール誘導体として次の化合物
があげられる。没食子酸メチル、没食子酸エチ
ル、没食子酸プロピル、没食子酸イソプロピル、
没食子酸ブチル、没食子酸イソブチル、没食子酸
ペンチル、没食子酸イソアミル、没食子酸オクチ
ル、没食子酸ステアリル、５−メチルピロガロー
ル、５−エチルピロガロール、５−プロピルピロ
ガロール、５−ブチルピロガロール、５−ペンチ
ルピロガロール、５−イソプロピルピロガロー
ル、５−イソブチルピロガロール、５−イソアミ
ルピロガロール。 本発明に用いることができるピロガロール誘導
体は一般式〔１〕で表わされる化合物である。一
般式〔１〕で表わされるピロガロール誘導体にお
ける置換基Q¹がアルキル基の場合、アルキル基
としては炭素原子数１乃至20の直鎖状または分岐
状のアルキル基で、その具体例としてはメチル
基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル
基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル
基、ドデシル基、オクタデシル基、エイコシル
基、イソプロピル基、イソブチル基、イソアミル
基、４−メチルペンチル基、６−メチルヘプチル
基がある。 置換基Q¹が−COOQ²基の場合、Q²はアルキル
基を意味する。 好ましい置換基Q¹として、メトキシカルボニ
ル基、エトキシカルボニル基、プロポクシカルボ
ニル基、ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシ
カルボニル基、オクチルオキシカルボニル基、デ
シルオキシカルボニル基、オクタデシルオキシカ
ルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、イソ
ブトキシカルボニル基、イソアミルオキシカルボ
ニル基、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチ
ル基、ペンチル基、イソプロピル基、イソブチル
基、イソアミル基があげられる。 本発明の過酸化水素検出呈色指示薬組成物また
は定量分析フイルムには媒染剤を含有させること
ができる。媒染剤としては特開昭51−40191、特
開昭53−89796、特開昭53−131089などや前述の
「The Theory of the Photographic Process」
第366−372頁に記載されているカチオン性ポリマ
ー、ならびに後記するアニオン性ポリマーなどを
用いることができる。本発明に用いられる過酸化
水素検出呈色指示薬が過酸化水素の存在下に化学
的相互作用によりアニオンになりうる染料が形成
される場合にはカチオン性ポリマーなどのカチオ
ン性物質を、カチオン性染料が形成される場合に
はアニオン性ポリマーなどアニオン性物質を媒染
剤として用いることができるのはいうまでもな
い。媒染剤は形成される染料の吸収波長領域の光
（近紫外線、可視光または近赤外線）を吸収しな
い、すなわち比色分析を妨害しないことが好まし
いこともまたいうまでもない。以下では媒染剤と
してカチオン性ポリマー媒染剤またはアニオン性
ポリマー媒染剤を用いる場合を主にして説明す
る。媒染ポリマーなる語をカチオン性ポリマーと
アニオン性ポリマーを包含する語として用いる。 本発明に用いられるアニオン性ポリマーはポリ
マーの高分子鎖そのもの、または高分子鎖に結合
した原子または原子団の中にアニオン原子または
アニオン原子団を含むポリマーである。アニオン
性ポリマーとしては通常のアニオン性ポリマーの
他に酸型の陽イオン交換樹脂をも用いることがで
き、好ましくは通常のアニオン性ポリマーまたは
陽イオン交換樹脂は水溶性または水により膨潤し
うる性質をもつ（水膨潤性）ポリマーである。ア
ニオン性ポリマーは単独で、または２種以上を組
合せて用いることができる。アニオン性ポリマー
は皮膜形成能を有するものも有しないものもいず
れも用いることができる。皮膜形成能を有しない
アニオン性ポリマーは皮膜形成能を有するバイン
ダーポリマーとともに用いることが好ましい。 アニオン性ポリマーの具体例としてはその高分
子鎖の構成繰返単位（Constitutional Repeating
Unit に対する術語で、以下CRUと略記する。）
の全部またはCRUのうちの特定の割合のものが
（規則的または不規則的な配列いずれでもよい）
アニオン性原子団としてカルボキシラト基（−
COO ）、スルホナト基（−SO₃ ）またはホス
ホナト基（−PO₃ ² ）、またはカウタカチオンを
有する前記アニオン性原子団が結合した構造であ
るようなポリマーまたはコポリマーがある。ここ
でカウンタカチオンとしてはアルカリ金属イオン
（例、Li 、Na 、Ｋ 、Cs ）、アルカリ土類
金属イオン（例、Mg² 、Ca² 、Sr² 、Ba²
）、アンモニウムイオン（NH₄ ）がある。 前記CRUを含むアニオン性ポリマーの具体例
としては次のものがあげられる。 メチルビニルエーテルー無水マレイン酸共重合
体のアルカリ加水分解物（CRUとしてジリチウ
ム、ジナトリウムまたはジカリウム １，２−ジ
カルボキシラトエチレンを含むコポリマー） ポリアクリル酸アルカリ金属塩またはアルカリ
土類金属塩 ポリ−Ｎ−（β−スルホ−α，α−ジメチルエ
チル）アクリルアミドのアルカリ金属塩またはア
ルカリ土類金属塩 ポリスチレン−ｐ−スルホン酸のアルカリ金属
塩またはアルカリ土類金属塩 スチレン−ｐ−スルホン酸と親水性ビニルモノ
マーとの共重合体のアルカリ金属塩またはアルカ
リ土類金属塩（親水性ビニルモノマーの例：アク
リル酸、アクリル酸アルキルエステル（例：メチ
ルアクリレート）、アクリル酸ヒドロキシアルキ
ルエステル（例：β−ヒドロキシエチルアクリレ
ート）、アクリルアミド（例：アクリルアミド、
Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルア
クリルアミド、Ｎ−（β−スルホナト−α，α−
ジメチルエチル）アクリルアミド、Ｎ−エチル−
Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、アクリルモル
ホリド

【式】 Ｎ−アクリロイルピペリジン、Ｎ−アクリロ
イルピペラジン）、メタアクリル酸ヒドロキシア
ルキルエステル（例：β−ヒドロキシエチルメタ
アクリレート）、メタアクリルアミド（例：メタ
アクリルアミド、メタアクリルモルホリド）） ポリビニルホスホン酸のアルカリ金属塩 Ｍはリチウム、ナトリウムまたはカリウム） カルボキシメチルセルロース カルボキシエチルセルロース アルギン酸およびそのアルカリ金属塩 好ましいアニオンポリマーとして次のものがあ
げられる。 ポリスチレン−ｐ−スルホン酸カリウム スチレン−ｐ−スルホン酸カリウム−アクリル
モルホリドコポリマー スチレン−ｐ−スルホン酸カリウム−アクリル
アミドコポリマー スチレン−ｐ−スルホン酸カリウム−Ｎ−イソ
プロピルアクリルアミドコポリマー スチレン−ｐ−スルホン酸ナトリウム−Ｎ−エ
チル−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド コポリ
マー ポリ−Ｎ−（β−カリウムスルホナト−α，α
−ジメチルエチル）アクリルアミド Ｎ−（β−カリウムスルホナート−α，α−ジ
メチルエチル）アクリルアミド−β−ヒドロキシ
エチルアクリレート コポリマー Ｎ−（β−カリウムスルホナト−α，α−ジメ
チルエチル）アクリルアミド−Ｎ−エチルアクリ
ルアミド コポリマー 媒染ポリマーがペルオキシダーゼやその他の酵
素の活性を実質的に阻害しない場合には過酸化水
素検出呈色試薬を含む層に含有させることができ
る。ペルオキシダーゼやその他の酵素の活性を実
質的に阻害しないのは多くの場合アニオン性ポリ
マーである。また媒染ポリマーを含み他の試薬成
分を含まない染料固定層として過酸化水素検出呈
色試薬を含む層と別個の層として設けることもで
き、さらに媒染ポリマーを過酸化水素検出呈色試
薬と染料固定層の両方に含有させることもでき
る。媒染ポリマーは１種だけを用いれば通常は十
分であるが、必要に応じて２種以上を組合せて用
いることもできる。媒染ポリマーを過酸化水素検
出呈色試薬を含む層と染料固定層の両方に含有さ
せる場合、両方の媒染ポリマーは同種の媒染ポリ
マーであつても異種の媒染ポリマーであつてもよ
い。さらに媒染ポリマーは必要に応じて過酸化水
素検出呈色試薬を含む層または染料固定層以外の
層に含有させることもできる。 本発明の定量分析フイルムの過酸化水素検出呈
色指示薬と媒染ポリマーを含む試薬層、過酸化水
素検出呈色指示薬を含む呈色反応層、および媒染
ポリマーを含む染料固定層はいずれもバインダー
ポリマーを含有することができる。バインダーポ
リマーとしてはゼラチン、カゼイン、アガロー
ス、澱粉、ポリビニルアルコール、ポリビニルピ
ロリドン、ポリアクリルアミド、ポリエチレング
リコールなど公知の親水性ポリマーを用いること
ができ、さらに親水性ポリマーとともに公知の硬
膜剤（硬化剤または架橋剤）をも用いることがで
きる。試薬層、呈色反応層または染料固定層はバ
インダーポリマーの中にそれぞれ過酸化水素検出
呈色指示薬と媒染ポリマーとの混合物、過酸化水
素検出呈色指示薬、または媒染ポリマーを分散ま
たは溶解させた分散液または溶液を公知の塗布法
により支持体の上に塗布し乾燥するか、または多
孔性支持体の表面および内部に含浸して用いる。
試薬層、呈色反応層または染料固定層が支持体の
上に塗布して設けられる場合にはその層の厚さは
いずれも1μmから100μm、好ましくは2μmから
50μmの範囲である。染料固定層がバインダーポ
リマーを含まない媒染ポリマーのみからなる場
合、その層厚は1μmから50μm、好ましくは3μm
から30μmの範囲である。 以下、本発明の実施態様例を示す図面を参照し
ながら本発明を説明する。 第１図は過酸化水素検出呈色指示薬を含む試薬
組成物を自己支持性の多孔質支持体の表面および
内部に含浸させた試薬含浸支持体２３からなる定
量分析フイルムである。自己支持性の多孔質支持
体としては濾紙、普通紙、不識布、メンブランフ
イルター、多孔性のプラスチツクフイルムなど公
知のフイルム状またはシート状物を用いることが
できる。特開昭54−156079、特開昭54−160296、
実開昭56−142454、特開昭57−63452等に開示さ
れているスライド枠に定量分析フイルムを収めて
用いる場合には多孔質支持体は前記の材料のほか
に識物のようにしなやかな材料をも用いることが
できる。この定量分析フイルムをフイルム状また
はシート状の支持体の上に接着して用いることが
でき、この場合の構成はこの後に説明する第２図
に示される定量分析フイルムに類似する。 第２図はフイルム状またはシート状の支持体１
０の上に過酸化水素検出呈色指示薬を含む試薬層
２０を設けた構成の定量分析フイルムである。支
持体は透明でも不透明でもよい。 第３図はフイルム状またはシート状の支持体の
上に媒染ポリマーを含有する染料固定層２１と過
酸化水素検出呈色指示薬を含む呈色反応層２２が
この順に設けられている構成の定量分析フイルム
である。支持体は透明でも不透明でもさしつかえ
ないが、好ましくは透明支持体である。 第４図から第８図に示す定量分析フイルムにお
いては試薬層、呈色反応層、または染料固定層が
支持体と多孔性層の間に設けられており、多孔性
層と試薬層、呈色反応層、または染料固定層は流
体接触（この定義は前記の特開昭51−40191明細
書などに開示されている。）しており、好ましく
は一体に接着されている構成をもつものである。
多孔性層は多孔性展開層または定面積多孔性層と
して用いられ、いずれも試料液体が点着され、そ
の試料液体を下の層に供給する機能を有するもの
で、好ましくは試料液体を単位面積当りほぼ一定
量になるようにして（多孔性展開層の場合）、ま
たはその形と同じ大きさに展開して一定面積当り
ほぼ一定量になるようにして（定面積多孔性層の
場合）下の層に供給する機能を有するものであ
る。 第４図はフイルム状またはシート状の支持体１
０の上に過酸化水素検出呈色指示薬と媒染ポリマ
ーを含む試薬層２０、および多孔性展開層３１を
この順に設けた構成の定量分析フイルムである。 第５図はフイルム状またはシート状の支持体１
０の上に媒染ポリマーを含む染料固定層２１、過
酸化水素検出呈色指示薬を含む呈色反応層２２、
光反射層４０、および多孔性展開層３１をこの順
に設けた構成の定量分析フイルムである。 第４図または第５図に示した定量分析フイルム
の多孔性展開層は特開昭49−53888に開示されて
いるブラツシユポリマー（一般名メンブランフイ
ルター）、珪藻土、微結晶材料（例えば微結晶セ
ルロース（FMCコーポレーシヨンの商標名アビ
セル）などの多孔性微粉体をバインダーポリマー
の中に分散させた多孔性層、ガラスやポリマーの
微小球形ビーズを互いに点接着させた多孔性集合
体層、特開昭55−90859に開示されている水で膨
潤しない有機ポリマーの微小球形ビーズを水不溶
性接着剤で点接着させた凝集三次元格子状粒状構
造物の層などの非繊維等方的多孔性層、特開昭55
−164356に開示されている親水化処理した識物、
特開昭57−66359に開示されている物理的親水化
処理（例、グロー放電処理、プラズマ処理、コロ
ナ放電処理、紫外線照射、火陥処理）した識物、
特開昭57−148250に開示されている疎水性ポリマ
ー繊維と天然セルロース繊維の混合パルプから抄
造された紙または紙、不識布、紙、合成紙な
どの繊維質異方的多孔性層を用いることができ
る。非繊維等方的多孔性層を多孔性展開層として
試薬層２０または光反射層４０の上に設ける方法
は前記の特開昭49−53888、特開昭55−90859等に
開示の方法によることができ、繊維質異方的多孔
性展開層を多孔性展開層として試薬層２０または
光反射層４０の上に設ける方法は前記の特開昭55
−164356、特開昭57−66359、特開昭57−148250
に開示されている方法によることができる。 定面積多孔性層は実開昭57−42951にポーラス
層として開示されている層の素材（例、識物、
紙、メンブランフイルター）および設け方に従つ
て設けることができる。定面積多孔性層の素材は
多孔性展開層の素材と同じもの用いることができ
るほか、内部が多孔性で水などの液体を保持で
き、かつ孔が一方の表面から他方の表面に通じて
いるものであれば、広く何でも用いることができ
る。定面積多孔性層を試薬層または光反射層など
の上に設ける方法は実開昭57−42951に開示の方
法や前記の多孔性展開層を設ける方法と同じ方法
によることができる。 光反射層４０は特開昭49−53888、特開昭51−
40191、特開昭55−164356等に開示されている酸
化チタン微粉末または硫酸バリウム微粉末等の白
色顔料を親水性バインダーポリマーに分散した
層、特開昭49−53888等に開示されている酸化チ
タン微粉末または硫酸バリウム微粉末等の白色顔
料を分散させたブラツシユポリマー層（メンブラ
ンフイルター）、特開昭49−53888等に開示されて
いるブラツシユポリマー層、特開昭55−26428に
開示されている多孔性金属膜からなる水浸透性の
層、特開昭55−26429に開示されている金属粉末
を含む水浸透性の層などを用いることができ、こ
れらの層の設け方もまた前記の特許明細書に開示
の方法によることができる。 第６図は支持体１０の上に過酸化水素検出呈色
指示薬を含む呈色反応層２２、媒染ポリマーを含
む染料固定層２１、光反射層４０、多孔性展開層
３１をこの順に設けた構成の定量分析フイルムで
あつて、第５図に示した定量分析フイルムにおい
て呈色反応層と染料固定層との位置関係が逆転し
た構成を持つている。過酸化水素検出呈色指示薬
に形成される染料の吸収波長領域の光を吸収して
比色分析を妨害するような化合物が含有されない
かぎり、呈色反応層と染料固定層との位置関係は
自由に選ぶことができるので、過酸化水素検出呈
色指示薬に空気酸化されるおそれのある成分を含
むなどの理由により呈色反応層を空気にふれない
ように下側の層に設けたい場合に効果がある。 第７図は支持体１０の上に媒染ポリマーを含む
染料固定層２１、過酸化水素検出呈色指示薬を含
む呈色反応層２２をこの順に設け、その上に密接
させて多孔性でそのサイズが保持しうる水の量以
上の液体試料が供給されるように定められた一定
面積の多孔性層、すなわち定面積多孔性層３２を
設けた構成の定量分析フイルムである。定面積多
孔性層をもつ定量分析フイルムは特に過酸化水素
の含有量が微少な水性液体試料または過酸化水素
の発生量が微少な前駆物質を含む水性液体試料の
中の過酸化水素の量を定量するのに適している。
呈色反応層と定面積多孔性層の間に光反射層を設
けることができる。また呈色反応層と染料固定層
の位置を（第６図に示した定量分析フイルムにお
ける場合と同じく）逆転させることもできる。 第８図は支持体１０の上に過酸化水素検出呈色
指示薬と媒染ポリマーを含む試薬層２０、光反射
層４０、定面積多孔性層３２をこの順に設けた構
成の定量分析フイルムである。第７図および第８
図においては定面積多孔性層が他の層より小さい
ように示してあるが、定面積多孔性層は呈色反応
層または試薬層の形およびサイズをこえない形お
よびサイズであればよく、従つて呈色反応層また
は試薬層と同じ形およびサイズであつてもさしつ
かえない。 第３図から第８図に示した定量分析フイルムの
支持体はポリエチレンテレフタレート、セルロー
スエステル（セルロースジアセテート、セルロー
ストリアセテート、セルロースアセテートプロピ
オネートなど）、ポリカルボネート（ビスフエノ
ールＡのポリカルボネートなど）、ポリメチルメ
タアクリレート、ポリスチレンのような種々のポ
リマーのフイルムまたはシートで厚さが約25μm
から約0.3mm、好ましくは約50μmから約0.2mmの範
囲のものを用いることができる。支持体は無色透
明または過酸化水素検出指示薬から生成する媒染
染料が吸収する波長の光に対して透明なものを用
いることができるほか、顔料（例、酸化チタン微
粉末、硫酸バリウム微粉末、酸化亜鉛微粉末、カ
ーボンブラツク）等を混入して遮光性にしたもの
をも用いることができる。遮光性支持体を用いる
場合には、比色測定する際に支持体を剥離除去す
るかまたは支持体のない側から反射測光法により
比色測定することができる。遮光性支持体を用い
ることにより試薬層、呈色反応層または染料固定
層に光分解しやすい試薬成分を含有させる場合に
有利である。 本発明の定量分析フイルムの試薬層、呈色反応
層または染料固定層の中には過酸化水素と異なる
被検成分（以下前駆被検成分という。）と化学反
応により過酸化水素を生成することができる試薬
組成物系（以下、過酸化水素生成試薬系という。）
を含むことができる。あるいは過酸化水素生成試
薬系を含む試薬層（以下過酸化水素生成試薬層）
を試薬層、呈色反応層または染料固定層と別個に
設けることもできる。過酸化水素生成試薬系は、
１段階の化学反応で前駆被検成分から過酸化水素
を生成する試薬組成物系と複数段階の素反応が連
続する化学反応で前駆被検成分から過酸化水素を
生成する試薬組成物系のいずれでもよく、過酸化
水素生成試薬系に応じて過酸化水素生成試薬系を
試薬層、呈色反応層または染料固定層の中に含ま
せるか、またはこれらの層とは別個の１層または
複数層の過酸化水素生成試薬層を設けることがで
きる。前駆被検成分と過酸化水素生成試薬系の例
として特開昭50−137192、特開昭50−131588、特
開昭55−124499等に開示されているコレステロー
ルエステル、コレステロール、コレステロールエ
ステラーゼ、コレステロールオキシダーゼおよび
このいずれかと反応するかまたはこのいずれかを
含む過酸化水素生成試薬系、特開昭49−53888、
特開昭51−40191、特開昭55−124499、特開昭55
−164356等に開示されているグルコース、グルコ
ースオキシダーゼ、およびこのいずれかと反応す
るかまたはこのいずれかを過酸化水素生成試薬
系、特開昭53−24892、特開昭53−24893、特開昭
53−26382等に開示されているトリグリセリド、
グリセリン、リパーゼ、グリセリンキナーゼ、α
−グリセロホスフエートオキシダーゼなど、およ
びこのいずれかと反応するかまたはこのいずれか
を含む過酸化水素生成試薬系、特開昭53−41291
等に開示されているアスコルビン酸、アスコルビ
ン酸オキシダーゼ、およびこのいずれかと反応す
るかまたはこのいずれかを含む過酸化水素生成試
薬系、特開昭53−105292、特開昭54−73096等に
開示されている乳酸塩、乳酸、ラクテートデヒド
ロゲナーゼ、ラクテートオキシダーゼ、およびこ
のいずれかと反応するかまたはこのいずれかを含
む過酸化水素生成試薬系、米国特許4062731、特
開昭54−50393、特開昭55−124499等に開示され
ている尿酸、ウリカーゼ、およびこのいずれかと
反応するかまたはこのいずれかを含む過酸化水素
生成試薬系をあげることができるが、前記の前駆
被検成分用の過酸化水素生成試薬系に限られるこ
となく、他の前駆被検成分用の過酸化水素生成試
薬系をも用いることができることはいうまでもな
い。 第２図乃至第８図の実施態様例に示した場合を
含めて本発明の定量分析フイルムを多層一体型構
造とする場合には前述の特開昭49−53888、特開
昭51−40191、特開昭55−90859、特開昭55−
164356、特開昭57−66359、特開昭55−26428、特
開昭55−26429、実開昭57−42951等に開示されて
いる方法またはゼラチン−ハロゲン化銀乳剤層を
有する通常のカラー写真感光材料またはインスタ
ント黒白またはカラー写真感光材料の製造方法と
して確立している公知の種々の塗布方法をそのま
ま、またはわずかに改変して製造することができ
る。 次に本発明の定量分析フイルムを用いて過酸化
水素を定量する方法を説明する。本発明の定量分
析フイルムを用いての定量分析の際の操作は定量
分析フイルムへの被検試料液の点着と染料固定層
に生ずる着色の光学濃度の測定、および必要に応
じての点着後のインクベーシヨンである。被検試
料液の点着およびインクベーシヨンは前述の諸特
許明細書や特開昭53−81292、特開昭53−76044、
特開昭53−76095、特開昭56−77746、実開昭56−
146241、実開昭57−28356等に開示されている被
検試料液点着用の道具または測定装置を用い、こ
れらに開示されている方法に従つて実施すること
ができる。第４図乃至第８図に示した構成の定量
分析フイルムを用いる場合には5μから50μの
範囲内の微少量の被検試薬液の点着で非常な高精
度の定量分析を実施できる。一方第１図乃至第３
図に示した定量分析フイルムを用いる場合には定
量分析フイルムを被検試料液の中に浸してひきあ
げ、必要に応じてインクベーシヨンし、ついで比
色測定する方法により定量分析することができ
る。この場合、特開昭51−82685、特開昭51−
144293、実開昭52−134381等に開示されている比
色測定装置を用いて分析することができる。 実施例 １ 厚さ180μmの写真フイルム用の無色透明ポリエ
チレンテレフタレート（PET）フイルムの上に
次の組成の染料固定層溶液を乾燥後の厚さが5μm
になる様にして塗布、乾燥して染料固定層を設け
た。 染料固定層溶液組成 ポリスチレン−ｐ−スルホン酸 カリウム ５ｇ ゼラチン 10ｇ サーフアクタント10G １ｇ 主成分 水 100ml ついで染料固定層の上に次の組成の試薬層塗布
液を乾燥後の厚さが10μmになる様にして塗布、
乾燥して、試薬層を設けた。 試薬層溶液組成 Ｎ，Ｎ−ビス（β−ヒドロキシエチル）−ｍ−
トルイジン 100mg ４−アミノアンチピリン塩酸塩 120mg 没食子酸プロピル 50mg ゼラチン 3.2ｇ サーフアクタント10G 100mg ペルオキシダーゼ 1100単位 水 15ml このようにして調製された多層塗布フイルムの
上に微粒子状二酸化チタンを含有したセルロース
トリアセテートより成るメンブランフイルター
（フジミクロフイルター500○Ｒ 富士写真フイルム
(株)製）を湿式圧着（試薬層を少量の水でほぼ一様
に湿らせておいてその上にメンブランフイルター
を軽く圧力をかけて圧着する）により張り合せて
本発明の過酸化水素検出用多層定量分析フイルム
（E1）を調製した。 このフイルムを面積0.5cm²の正方形に裁断し、
標準的に調整した各種過酸化水素水溶液を8μ
ずつ最上層のメンブランフイルターの上に付着さ
せ30℃で５分インクベーシヨンして発色光学濃度
を支持体を通して反射光学濃度として測定したと
ころ、下表の結果がえられた。

【表】 比較例 １ 没食子酸プロピルを含まないほかは実施例１に
おける試薬層塗布液と同じ組成の試薬層塗布液を
用いるほかは実施例１と同様にして過酸化水素検
出用多層定量分析フイルム（C1）を作製した。 定量分析フイルム（E1）と（C1）とを同様に
過酸化水素水溶液を用いて発色させた所ほぼ同等
の発色を示した。 10^-2mole／水容液の8μで反射光学濃度
（緑色フイルターを通して測定した値）は2.80
（E1）と2.83（C1）であつた。 ついで定量分析フイルム（E1）と（C1）を下
記の条件下に強制経時テストをした。 (a) 45℃乾燥条件（充分量の乾燥剤（シリカゲル
粉末）を存在させた密閉容器内に保存したこと
を表わす。以下の例でも同様。） (b) 25℃50％RH（湿度） 一定時間（日）経時させた各々の定量分析フ
イルムを、前述と同様に10^-2ｍ ole／水容
液を点着して発色させた。その時観測した反射
光学濃度（緑色フイルターを通した）の強制経
時させる前に得た反射光学濃度に対する割合を
第１表および第２表に示す。

【表】

【表】 実施例 ２ 没食子酸プロピルの代りに第３表に記載の各種
の酸化防止剤を含有させたほかは実施例１と同様
にして過酸化水素検出用多層定量分析フイルムを
調製し、45℃、乾燥条件下で強制サーモ試験を実
施した。実施例１と同様にして評価された結果を
第３表に示す。第３表の判定欄の記号は次の内容
を意味する。 ○：反射光学濃度の減少率がきわめて少ない
（本発明） △：反射光学濃度の減少率が少ない（本発明） ×：反射光学濃度の減少率が多い（実用するこ
とができない）（比較例）

【表】 実施例 ３ 実施例１の試薬層溶液組成において没食子酸プ
ロピルの代りに没食子酸イソブチルを用い、更に
グルコースオキシダーゼ1500単位を添加したほか
は実施例１と同様にしてグルコース用多層定量分
析フイルムを調製した。 この定量分析フイルムを一辺1.5cmの正方形に
裁断した。この分析フイルムのメンブランフイル
ター（多孔性展開層）に100，200，300及び500
mg／ｄ グルコース濃度にグルコースを添加し
て調整した市販コントロール血清10μを点着し
37℃で５分インベーシヨンして発色させた。 没食子酸イソブチル（50mg）を用いた場合の結
果は次のとおりであつた。 グルコース水溶液
反射光学濃度（波長600nmでの測定値） 100mg／ｄ 0.73 200 1.14 300 1.48 500 1.97 この定量分析フイルムを45℃、乾燥条件に強制
経時テストし、20日後に同様の発色テストを実施
したところ、反射光学濃度値の減少率はグルコー
ス水溶液濃度100mg／ｄから500mg／ｄの範囲
で０％であつた、すなわち、反射光学濃度値は全
く減少しなかつた。 同様にして他の没食子酸エステルを用い、45℃
乾燥条件下で強制経時テストし20日後に同様にし
て発色テストを実施したところ、反射光学濃度値
の減少率はグルコース濃度100mg／ｄから500
mg／ｄの範囲で平均して次の値であつた。

【表】 実施例 ４ 染料固定層塗布液組成 ポリ〔Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｎ−（ビニル
ベンジン）アンモニウムクロリド〕のラテツク
ス水溶液（30％） 15ｇ ゼラチン 10ｇ サーフアクタント10G １ｇ 水 80ｇ 試薬層塗布液組成 １，７−ジヒドロキシナフタレン 80mg ４−アミノアンチピリン塩酸塩 120mg 没食子酸エチル 20mg ゼラチン 3.2ｇ サーフアクタント10G 100mg ペルオキシダーゼ 1100単位 水 15ml 上記の染料固定層塗布液及び試薬層塗布液を順
に実施例１と同様にして塗布した。（染料固定層
の乾燥後の層厚5μm、試薬層の乾燥後の層厚
10μm）ついで次の組成の光ブロツキング層（光
遮蔽・反射層）塗布液を乾燥後の層厚が7μmにな
るようにして試薬層の上に塗布乾燥した。 光ブロツキング層塗布液組成 TiO₂微粉末 19.5ｇ ゼラチン 6.8ｇ スルホこはく酸ジオクチルナトリウム 1.0ｇ 水 87ｇ このようにして調製した重層塗布物の上に更に
100番手、厚さ180μmのブロード織り綿布を湿式
圧着して過酸化水素検出用多層定量分析フイルム
（E4）を調製した。 比較例 ２ 没食子酸エチルを含まないほかは実施例４の試
薬層塗布液組成と同じ組成の試薬層塗布液を用い
たほかは実施例４と同様にして過酸化水素検出用
多層定量分析フイルム（C2）を調製した。 定量分析フイルム（E4）と（C2）をともに45
℃乾燥条件下で２週間強制劣化させた後、実施例
１と同様にして過酸化水素水溶液を付着させ30℃
で５分インクベーシヨンした後に試薬層の発色濃
度を反射測光したところ光学濃度値の減少率の平
均値は次のとおりであつた。 定量分析フイルム（E4） ２％ 定量分析フイルム（C2） 50％

【図面の簡単な説明】

第１図乃至第８図は本発明の定量分析フイルム
の実施態様例の断面概念図である。第１図乃至第
８図において番号は次の事項を表わす。 １０……支持体、２０……試薬層、２１……染
料固定層、２２……呈色反応層、２３……試薬含
浸支持体、３１……多孔性展開層、３２……定面
積多孔性層、４０……光反射層。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ペルオキシダーゼ作用をする物質、過酸化水
   素とペルオキシダーゼ作用をする物質との存在下
   に検出可能な変化を起こす水素供与体とカプラー
   との組合せとを含む過酸化水素検出呈色指示薬組
   成物において、該組成物に一般式〔１〕で表わさ
   れるピロガロール誘導体が含有されることを特徴
   とする過酸化水素検出呈色指示薬組成物。 一般式〔１〕においてQ¹はアルキル基または
   −COOQ²基を表わし、Q²はアルキル基を表わす。 ２ ペルオキシダーゼ作用をする物質、過酸化水
   素とペルオキシダーゼ作用をする物質との存在下
   に検出可能な変化を起こす水素供与体とカプラー
   との組合せとを含む過酸化水素検出呈色指示組物
   を含有する試薬層を有する定量分析フイルムにお
   いて、該組成物に一般式〔１〕で表わされるピロ
   ガロール誘導体が含有されることを特徴とする定
   量分析フイルム。 一般式〔１〕においてQ¹はアルキル基または
   −COOQ²基を表わし、Q²はアルキル基を表わす。 ３ 前記試薬層が呈色反応層と染料固定層を有す
   る特許請求の範囲２に記載の定量分析フイルム。 ４ 前記試薬層が単一の層である特許請求の範囲
   ２に記載の定量分析フイルム。