JPS6348457A - 乾式多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アナライト（分析目標成分、定量目的物質）
が、直接に又は間接的に、オキシダーゼの存在下で過酸
化水素（Ｈ２０２と略す）を生成する種類である場合に
利用することができる。

液状検体中のアナライト定量用の乾式多層分析要素に関
し、更に詳細には、オキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２分解酵素、
フェロシアン化アルカリ、色原体の≠種を必須成分とし
て透明支持体面の片側に保持させ、かつＨ２Ｏ２分解酵
素は色原体とは別異の層として支持体からより遠い位置
に配置した構造の、液状検体中のアナライト定量用乾式
多層分析要素に係るものである。

〔従来技術〕

臨床化学検量において、液状検体中に含まれる分析目標
成分、即ちアナライトを定量するために、たとえば血清
試料を、アナライトを基質とするオキシダーゼ又はアナ
ライトから誘導される物質を基質とするオキシダーゼと
接触させ、その結果生成するＨ２Ｏ２を発色法で定量す
る方法が繁用されている。

Ｈ２Ｏ２の定量法は、Ｈ２Ｏ２分解酵素たとえばペルオ
キシダーゼＴＰＯＤと略記する）の存在下で色原体を酸
化させて色素を形成する方法が一般的である。

色原体はこれを２Ｆ！Ａに分類することができる。

すなわち、色原体自身が酸化されて有色色素に変化する
ロイコ色素型のものと、色原体自身が酸化されてもその
酸化体は色がないが、これが共存するカプラーと縮合（
カプリング）したときに始めて検出可能な色素が形成さ
れるカプリング型（またはデベロッパー型）との２種が
知られている。

かかるＨ２Ｏ２発生系のアナライトを定量するために多
くの試薬組成物が開発され、又乾式分析用の分析要素も
多数公表されている。

Ｈ２Ｏ２定量に当って７エロシアン化アルカリを必須取
分とする定量組成物の例として、グルコースオキシダー
ゼ、ＰＯＤ、≠−アミノアンチピリン（≠ＡＡと略記す
る）、カプラー（たとえばフェノール）に加えて、７エ
ロシアン化アルカリを併用するグルコース定量用組成物
が特開昭弘？−３０タタ／号に１またウリカーゼ（尿酸
オキシダーゼ）またはコレステロールオキシダーゼ、Ｐ
ＯＤ、≠ＡＡ、カプラー（たとえば３．ｊ−ジクロロー
コーヒドロキシにンゼ／スルホンｍｔ　たｈそのＮａ塩
、Ｋ塩）と７エロシアン化アルカリを主成分とする尿酸
またはコレステロール定量用組成物が特開昭よ６−／ｊ
よｒ！−号に記載されている。

これらの記載から明らかなことは、フェロシアン化アル
カリ併用の効果は、定量のとき妨害物として作用する検
体中の還元性物質、特にビリルビンの影響をなくすこと
ができることである。しかしこの定量組成物は、使用に
当って水溶液の形態、又は担体に保持させた乾式分析要
素の形態のいずれについても、全取分共存の一剤型で供
試されるために、限定された色原体を用いねばならず、
又通用できるアナライトも上記３項目に限定され、特に
乾式分析要素の場合生成した色素が不安定であるという
欠点を有していることが判明した。

全成分−剤型の別例として、特公昭３７−よ７２６号に
、グルコース定量組放物即ち、グルコースオキシダーゼ
、ＰＯＤ、ロイコ色素、フェロシアン化カリウムヲ成分
とするものの例があるが、このフェロシアン化カリウム
Ｆｉ　Ｈ２Ｏ２−ＰＯＤの酸化反応により生成した色素
を逆に還元して無色化するための還元剤としての役目が
明記されている。

従来技術は上記の如く、液状検体中の特定アナライトを
定量するために、そのアナライトと特異的に作用してＨ
２Ｏ２を発生するオキシダーゼ、ＰＯＤ、色原体、フェ
ロシアン化アルカリからなる定電用組成物を用いるもの
である。しかし全成分を一液として供試する方法をとる
ためＫ、色原体が酸化されて有色色素が生成する反応と
、詳細な理由は不明であるが、せっかく生成した色素が
退色する反応とが同時に生起する現象が観察され、定ｉ
′註能が劣化する結果となる。特に８２０２発収量の多
い場合、並びに色原体として３置換イミダノ一ルロイコ
色素を用いた時この現象は顕著である。虫取色素の退行
の原因の一つとして共存するＨ２Ｏ２によることが想像
される。

オキシダーゼ、過酸化水素分解酵素（ＰＯＤで代表する
ン、フェロシアン化アルカリ、色原体の≠成分を必須と
する定量組成物の反応式はコレステロールを例にして述
べると次の如くである。

マ　　　　　　マ ｎ　　　　　　ｎ この反応式は特開昭≠ター！０タタｌ、並びにＦｏｓｓ
ａｔｉら：　「Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙＪコＡ（２１１２７〜２３１（／９１０）にヨッテ示
唆されたものである。又、このＩＩ酸成分共存の形態で
、コレステロール又は尿酸の定量組成物をｐ紙に含浸、
乾燥させた試験紙型（試薬ストリップ）の乾式分析要素
が前記特開昭３６−１１１１１２号に示されている。

乾式分析要素として、試験紙型のものの他に多層フィル
ム型があるが、後者の方が操作面と定量性能の面ですぐ
れているとされている（近藤朝士：「ぶんせき」１？１
４４（力　！３≠頁〜）。本発明者らは前記ｌ成分から
なるコレステロール定量組成物を用いて、Ｄ、Ｍ、Ｄａ
ｐｐｅｎら：　ｒｃＩｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ
ＪＪｒ　（５）　　／　／　ｒり〜（ｌりｒλ）の記載
に準じた、ｌ成分共存の多層フィルム型の追試をした所
、生成した色素が不安定で、分析操作時間内で退色が起
き、定量性能が低下する現象を見出し九。

そこで鋭意研究の結果、オキシダーゼ、ＰＯＤ、フェロ
シアン化アルカリ、色原体のｌ成分を一層中に共存させ
るよシも、色原体だけを別異の層にして分離すると色素
退行が見られないばかりか、後述の如き予期せざる利点
があることを発見し本発明に到達した。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、液状検体中のアナライトを定量するた
めの、信頼性および汎用性の高い層構成ｔ−ｉする、オ
キシダーゼ存在下で生成するＨ２Ｏ２を定量する方式の
乾式多層分析要素を提供することにある。

本発明の他の目的は血液中のヘモグロビン等による影響
（干渉）による誤差が排除され喪乾式多層分析要素を提
供することである。

本発明の他の目的はＨ２Ｏ２測定用呈色試薬系を含有し
、高精度の定量分析がｃＪｌ施できる乾式多層分析要素
を提供することである。

〔発明の構成〕

本発明は、オキシダーゼの存在下で生成する過酸化水素
を定量することにより水性液体試料中のアナライトを定
量しうる呈色試薬組成物を含有する層を光透過性水不透
過性支持体の上に有する乾式多層分析要素において、前
記要素中にアナライト又はアナライトから誘導される物
質に特異的に作用して過酸化水素を生成するオキシダー
ゼ、過酸化水素分解酵素、フェロシアン化アルカリ、色
原体を必須成分とする呈色試薬組成物を前記支持体の片
面上の層に乾燥状態で保持させる際に、過酸化水素分解
酵素含有層と色原体含有層とを別異の層とし、かつ前者
を後者よシ前記支持体から遠い層として配置したことを
特徴とする乾式多層分析要素である。

〔発明の構成の詳細な説明〕

本発明の乾式多層一体型分析要素を具体例によって説明
する。

第１図はその基本構造を示すもので、水不透過性透明支
持体ＩＯの片面上に色原体含有層λＯを置き、その上に
、即ち支持体から更に遠い側に別異の層としてＰＯＤ、
フェロシアン化アルカリを含有する層３０を配置した構
造とする。分析操作はＳの方向から液状試料を点着して
供給し、発色した色原体の色濃度の測定は反射測光法に
よって支持体側から行なわれる。Ｌは反射測光用光源で
あり、■は反射拡散光を測定する方向および反射拡散光
（図示せず）を示したものである。

第１図に示し九構造による血清中コレステロール定量用
の本発明の多層フィルム型分析要素の例を示す。

透明支持体１０の上にロイコ型色原体を含む層２０がち
り、その上に密層して別異の層として特開昭≠ターｓ、
１ｒｔｒ号、特開昭７！−１ｔｌＩＬＪｓｔ号、特開昭
５７−２≠ｔｓｒ号などに示された構造の試料展開作用
を有する層（展開層）よコが設けられ、この層中にＰＯ
Ｄ、フェロシアン化アルカリに加えてコレステロールと
反応してＨ２Ｏ２を発生する試薬とその他必要な補助試
薬、ＢａＳＯ４、またにＴｉＯ２微粒子の如き光反射厄
介が保存されている。

この層よコは試薬層、反射層、試料展開の３役を兼ねた
ものである。（試薬展開層という）第２図はコレステロ
ールを定量するための不発明の多層分析要素の別の実施
態様例である。

水不透過性透明支持体１０の上に色原体含有層２０、そ
の上に酸化チタン微粒子含む光反射層≠Ｏ１その上にＰ
ＯＤ、フェロシアン化アルカリ、コレステロールオキシ
ダーゼを含むＨ２Ｏ２発生試薬組成物、その他の補助試
薬を含む織物からなる展開層兼試薬層（試薬展開層）！
−が設けられ次ものである。

本図に示す態様の多層分析要素においては第１図の態様
に較べ、色原体層ｐｆ＠２０とＰＯＤ、フェロシアン化
アルカリ含有試薬展開層！−との間に光反射層≠Ｏが介
在し、両層が数μｍ以上隔離された構造である。

第３図は全血を試料とし、その血漿部分のグルコース濃
度を分析するグルコース定量用多層分析要素の態様例で
ある。その構成は、水不透過性透明支持体ｉｏの上に、
カプリング型色原体（≠ＡＡとナフトール誘導体）含有
層２０．その上に、ＰＯＤ、フェロシアン化アルカリ、
グリコースオキシダーゼ、その他の補助試薬を含む層過
酸化水素分解＃素含肩３０、更にその上に酸化チタン微
粒子を含む光反射層（色遮蔽層もかねる）≠Ｏ１更にそ
の上に全血を展開する織物展開層ｊＯが配置しである。

第１〜３図に例示した如く、本発明の多層分析要素は、
透明支持体に近い側に色原体含有層を設け、遠イ側にオ
キシダーゼ十ＰＯＤ＋７エロシアン化アルカリを含有す
る過酸化水素分解＃素含有層を設けた構成によυ、足奮
組底物中の色原体を他の成分から隔離する構造としたも
のである。また、いずれの実施態様においても、支持体
上の各層が一体化されて積層されている一体型多層分析
要素であることが好ましい。

第２図を用いて本発明の多層分析要素の定量原理並びに
特徴について述べる。第２図に示す多層分析要素におい
て、試薬展開層ｊ２上に点着されたコレステロールを含
む血清は、はぼその容量に比例した拡が９をもって展開
層中に速やかに浸入する。血清中のコレステロールはそ
こに存在するコレステロールオキシダーゼによって酸化
され、Ｈ２Ｏ２が生成する。このＨ２０２は共存するフ
ェロシアンイオンを酸化し、フェリシアンイオンが生成
する。このフェリシアンイオンは光反射層グＯを通過し
て色原体層−〇に到達し、色原体を有色色素に酸化して
色素を形成するが、色素生収量は血清中のコレステロー
ル量に相関する。

以上が本発明の多層分析要素の定量原理である。

この説明から明らか々ように、本発明の要素の特徴は、 ■　アナライトを酸化するオキシダーゼは分析要素の最
外層又は最外層に近い所にあるために、反応に必要な酸
素が供給され易い状態におかれ酸化反応が円滑速かに進
行する。

■　色原体は、アナライト−オキシダーゼによるＨ２Ｏ
２生底反応現場から離れた位置に存在し、色原体の有色
色素への変化は主として、Ｈ２Ｏ２→フエロシアンイオ
ン→フエリシアンイオ／の如く中介物によって酸化され
て色素となる。そこで色原体から生成した色素が直接Ｈ
２Ｏ２に接触して変化をうける機会が少なく、従って退
色も見られない。この事は、試料中のアナライト含有量
が異常に高い場合、即ちＨ２Ｏ２生成量が多い場合に特
に効果が犬であった。

■　本質的に安定な化合物とはいえない色原体が、分析
要素の中で最も空気に触れにくい場所に存在するので、
製造、保存、使用時を通して分析要素の安定性が向上し
た。

■　従来技術の如き、オキシダーゼ、ＰＯＤ、フェロシ
アンアルカリ、色原体共存の定量組取物は、色原体とし
てカプリン型（テベロツノξ−型ンに限定されておシ、
またアナライトもグルコース、コレステロール、尿酸の
ｊＩＮ、分に限られていたが、本発明の乾式多層分析要
素においてはロイコ色素型の色原体も使用でき、又、ア
ナライトもオキシダーゼの基質となυうるものはこれを
対象にすることができる。

■　オキシダーゼを最外層または最外層に近い層にオキ
シダーゼが含有されるので、コレステロールのように親
油性であるゆえに親水性パイ／ダー層内を移動しにくい
アナライトラ容易に酸化反応系に導入できるので、適用
可能なアナライトの種類が多い。

次に本発明の乾式多層分析要素を構成する層について説
明する。

光透過す水不透過性支持体としては従来公知の多層分析
要素に用いられている光透過性（透明な）水不透過性支
持体を用いることができる。その具体例としてはポリエ
チレンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボ
ネート、ポリスチレン、セルロースエステル（例、セル
ロースジアセテート、セルローストリアセテート、セル
ロースアセテートピロビオネート等ン等のポリマーから
なる厚さ約３０μｍから約／Ｉｌ’ｌｌｌ、好ましくは
約ｔｏμｍから約３００μｍの範囲の透明な、すなわち
波長的２００ｎｍから約り００ｎｍの範囲内の少なくと
も一部の波長範囲の電磁輻射線を透過させる平滑な表面
ヲ有するフィルム状（シート状）または平板状の支持体
を用いることができる。支持体の表面には必要に応じて
公知の下塗層または接眉層を設けて支持体の上に設けら
ねる吸水層または色原体含有層等と支持体との接着を強
固にすることができる。

本発明の多層分析要素には吸水層を支持体に接して設け
ることができる。吸水層は水を吸収して膨潤する親水性
ポリマーを主厄分とする層で、吸水層の界面に到達また
は浸ａした水性液体試料の水を吸収できる層であシ、全
血試料を用いる場合には水性液体取分、血漿の色原体含
有層への浸透を促進する作用を有している。吸水層に用
いられる親水性ポリマーは水吸収時の膨潤率が３０ｏＣ
で約／！Ｏチから約２０００チ、好ましくは約コｓ０４
から約／！００％の範囲のポリマーである。

親水性ポリマーの具体例として特開昭ｊター１７ｉｒｔ
≠号、特開昭６０−／／！ｒｒ！り号等に開示の酸処理
ゼラチン、脱イオンゼラチン等のゼラチン、フタル化ゼ
ラチン、ヒドロキシアクリレートグラ７トゼラチン等の
ゼラチン誘導体、特開昭！ター／７／ｒＪ４＜号、特開
昭ｔ、ｏ＝ｉ／ｒｒｒり号等に開示のアガロース、プル
ラン、プルラン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニ
ルアルコール、ポリビニルピロリドン等がある。これら
の親水性ポリマーは単独で、あるいは２種以上を組合せ
て用いることができる。吸水層には一般的にはゼラチン
またはゼラチン誘導体が好ましいが、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルアルコール等モ好ましい。

吸水層の乾燥時の厚さは約／μｍから約ｉｏ。

μｍ、好ましくは約３μｍから約３０μｍの範囲、被覆
量では約／？／ｍ２から約１００９／ｍ２、好ましくは
約Ｊｔ／＠２から約３０　？　／　ｍ　２である。吸水
層には公知のｐＨ緩衝剤、有機カルボン酸、酸性ポリマ
ー、塩基性ポリマー等を含有させて使用時（分析操作実
施時）のｐＨを調節することができる。さらに吸水層に
は公知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることが
できる。吸水層は実質的に透明であることが好ましい。

色原体含有層は色原体が親水性ポリマーバインダー中に
実質的に一様に分散含有されている吸水層で水浸透性の
層又は色原体が実質的に一様に含浸含有されている多孔
性層である。色原体含有層に用いられる親水性ポリマー
バインダーとしては前述の吸水層に用いられるのと同様
な親水性ポリマーがある。色原体含有層の乾燥時の厚さ
は約３μｍから約！Ｏμｍ、好ましくは約！μｍから約
３０μｍの範囲、被覆量では約３９／ｍ２がら約！　Ｏ
ｆ／ｍ　２、好ましくは約！ｆ／７ＦＬ２から約３０　
Ｓ’／ｍ　２の範囲である。色原体含有層には公知のｐ
Ｈ緩衝剤、有機カルボン酸、酸性ポリマー、塩基性ポリ
マー等を含有させて使用時（分析操作実施時）のｐＨ′
ｔ−調節することができる。さらに色原体含有層には公
知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることができ
る。色原体含有層は実質的に透明であることが好ましい
が、必要に応じて層中に二酸化チタン微粒子、硫酸バリ
ウム微粒子、カーボンブラック等を少量分散含有させて
光学的回能を調節することができる。

色原体含有層はまた、特開昭６７−≠り！り号に記載の
方法により多孔性層に色原体（カプリング型色原体の場
合にはカプラーとともに］を含浸含有させて設けること
もできる。

過酸化水素分解酵素含肩層は過酸化水素分解酵素を含み
、さらにアナライ１１−呈色反応系に導入するためにオ
キシダーゼと７エロシアン塩を含む層である。この層に
おいて、アナライト又はアナライトから誘導された物質
がオキシダーゼの存在下に空気中の酸素により酸化され
て過酸化水素を生成し、ついで生成した過酸化水素は過
酸化水素分解酵素（例、ＰＯＤ）の存在下に７エロシア
ンイオンをフェリシアンイオンに酸化する。生成したフ
ェリシアンイオンは支持体に近い側（下側）の色原体含
有層に拡散移行して色原体を酸化して（カプリング型色
原体の場合には酸化された色原体はさらにカプラーとカ
プリングして）発色（呈色）させる。過酸化水素分解酵
素含有層にはアナライトから過酸化水素分解酵素の基Ｊ
Ｘを生成させるための成分、例えば、コレステロールエ
ステルのためのコレステロールエステラーゼ又はコレス
テロールエステラーゼ活性を有する酵素組成物を含有さ
せることができる。

過酸化水素分解酵素含有Ｉｉｉは過酸化水素分解酵素、
オキシダーゼと７エロシアン塩が実質的に一様に含浸含
有されている多孔性層又は親水性ポリマーバインダー中
に実質的に一様に分散含有されている吸水性で水浸透性
の層である。過酸化水素分解酵素含有層が多孔性層の場
合には、その層は多孔性展開層に前記の成分が含浸含有
されているもの（試薬展開層）が好ましい。試薬展開層
の厚さは多孔性展開層と同じである。過酸化水素分解酵
素含有層が親水性ポリマーバインダーを含有する層の場
合には、その層は前記の成分が親水性ポリマーバインダ
ー中に実質的に一様に分散含有されている吸水性で水浸
透性の実質的に非孔性の層、又Ｖ′ｉ特開昭！ター／コ
０６１７号等に記載の微粒子含有多孔！！４：ｒＷＩと
することができる。親水性ポリマーバインダー含有過酸
化水素分解＃素含有層の厚さ又は被覆量は後記の色原体
含有層と同じである。

多孔性展開層としては特開昭！Ｊ−／Ａ≠３よ６号、特
開昭６７−６ｌｓＪ！り号等に記載の織物展開層（例、
ブロード、ボブリン等の平織等）、特開昭ＡＯ−２２コ
アｔり号等に記載の編物展開層（例、トリコット編、ダ
ブルトリコット編、ミラーズ編等）、特開昭！７−／≠
１２！０号に記載の有機ポリマー繊維ノξルプ含有抄造
紙からなる展開層、特開昭≠ターＪＪｒｒｒ号、米国特
許３゜タタコ、ｉｒｅ号等に記載のメンブランフィルタ
（プラッシュポリマー層）、ポリマーミクロビーズ、ガ
ラスミクロビーズ、珪藻土が親水性ポリマーバインダー
に保持されてなる連続微空隙含有多孔性層等の非繊維等
方的多孔性展開層、特開昭！！−タＯｒよ２号に記載の
ポリマーミクロビーズが水で膨潤しないポリマー接着剤
で点接触状に接着されてなる連続微空隙含有多孔性層（
三次元格子状粒状構造物層）からなる非繊維等方的多孔
性展開層等を用いることができる。

これらの多孔性展開層のうちで後述するように酸素を含
む定量用組成物（試薬組成物）を展開層中に含有保持さ
せる態様においては、定量用組成物を展開層中に含有保
持させやすい点で織物展開層、編物展開層に代表される
繊維質展開層が好ましい。

多孔性展開層に用いられる織物生地または編物生地は特
開昭７７−４１．！！夕号に記載のクロー放電処理１＋
はコロナ放電処理に代表される物理的活性化処理を布生
地の少なくとも片面に施すか、またＶｉ特開昭よｊ−／
６≠ＪＪ＆号、特開昭！７−６６３！り号等に記載の水
洗脱脂処理、親水性ポリマー含浸等親水化処理、ま九は
これらの処理工程を適宜に組み合せて逐次実施すること
により布生地を親水化し、下側（支持体に近い側ンの層
との接着力を増大させることができる。

試薬層重′ｆｃは吸水１−と展開層との間に色遮蔽層ま
たは光反射層を設けることができる。色遮蔽層または光
反射ｒ−は光遮蔽性または光遮蔽性と光反射層を兼ね備
えた二酸化チタン微粒子まｆｃ　ｔｒｉ硫酸バリウム微
粒子等の白色微粒子全ゼラチン等の親水性ポリマーバイ
ンダーに分散含有してなる乾燥時の厚さ約２μｍから約
２０μｍの範囲の層である。

さらに試薬層、吸水層、色遮蔽ｒ＠″１ｆｃｔ′ｉ光反
射層の上には展開層を強固に接層一体化する目的でゼラ
チンに代表される親水性ポリマーからなる公知の接層層
を設けることができ、る。接Ｎ層の乾燥時の厚さは約０
．５μｍから約ｊμｍの範囲である。

試薬層、吸水層、色遮蔽層または光反射層、接Ｎ層、展
開層、試薬組成物を含有する展開層等には界面活性剤を
含有させることができる。その例としてノニオン性界面
活性剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例として、
ｐ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｐ−
ノニルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシ
エチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシ
ドール（ノニルフェニルボリグリシジルエーテルン、オ
クチルグルコシド等がある。ノニオン性界面活性剤を展
開層に含Ｍさせることにより水性液体試料の展開作用（
メータリング作用）がより良好になる。ノニオン注界面
活性剤管試薬層または吸水層に含有させることによシ分
析操作時に水性液体試料中の水が試薬層または吸水層に
実質的に一様に吸収されやすくなり、また展開層との液
体接触が迅速にかつ実質的に一様になる。

次に、本発明の多層分析要素に用いることができる定量
用組放物の異方について説明する。

１ず、オキシダーゼについては、液体試料中の分析目標
物質、すなわち各アナライト毎に直接これ全酸化するオ
キシダーゼ、又はアナライトから誘導される物質を酸化
するオキシダーゼが用いられる。オキシダーゼとしては
、丸線、国富ら編「＃素ハンドブック」（東京、朝食書
店、／りｒ二年発行）；馬場、和国、北村、奥田編「臨
床酵素ハンドフック」（東京、講談社、１９♂λ年発行
）　：　Ｍ、Ｄｉｘｏｎ、Ｅ、Ｃ，Ｗｅｂｂ編ｒ’Ｅｎ
ｚｙｍｅｓｊｒｄ　　ｅｄ、Ｊ（Ｌｏｎｄｏｎ、Ｌｏｎ
ｇｍａｎ　社、／り７り年発行）；　Ｈ，Ｕ、Ｂｅｒｇ
ｍｅｙｅｒら編ｒＭｅｔｈｏｄｓ　　ｏｆ　　Ｅｎｚｙ
ｍａｔｉｃ　　Ａｎａｌｙｓｉｓｊｒｄ　　ｅｄ、Ｊ（
Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、ＶｅｒｌａｇＣｈｉｍｉｅ　　ｔり
？３〜／りｒ６年元行）等に記載の公知のオキシダーゼ
がある。オキシダーゼの具体例として、グルコース、コ
レステロール、尿酸、乳酸、グリセリン、プリン、ポリ
アミン、有機酸、アルコール、フェノール類、アミノ酸
などの各オキシダーゼ、グリセロ燐酸、サルコシン、ピ
ルビン酸、コリン、グリコール酸、アシルコエンザイム
Ａなどのアナライトから誘導さハる物質を酸化する各オ
キシダーゼなどがある。さらにイムノアッセイ（免疫分
析）において、抗原、ハプテン、又は抗体に標識（ラベ
ル）物質として結合させたオキシダーゼ、又は免疫反応
の結果遊離するオキシダーゼもこの範囲に含まれる。

これらの諸種のオキシダーゼの含有量は通常多層分析要
素／　ｍ　２　Ｍシ約１ｏｏＵから約／θ万Ｕ、好まし
くは約３００Ｕから約を万Ｕの範囲である。

過酸化水素分解酵素としては、ペルオキシダーゼ（ＰＯ
Ｄ）、カタラーゼ、血液等の生物体液含有される諸種の
過酸化水素分解活性を有する酵素等前記の諸成書等に記
載の公知の酵素を用いることができる。これらのうちで
はＰＯＤが最も一般的である。

ペルオキシダーゼとしては、前記の諸灰書、特公昭ｊ４
−１ＩＬ！！Ｆり号、特公昭ｊ７−６６２０号等に記載
の植物超厚および動物超厚のペルオキシダーゼ（ＥＣ／
、／／、／、７）、特公昭！ｒ−６０３よ号等に記載の
微生物起原のペルオキシダーゼ（ＥＣ／、１／、／、７
）ｆ用いることができる。これらのうちでは植物超厚ま
７’（は微生物起原の非特異的ペルオキシダーゼが好ま
しい。好ましいペルオキシダーゼの例として、西洋わさ
びペルオキシダーゼ、大根ペルオキシダーゼ、Ｃｏｃｈ
ｌｉｏｂｏｌｕｓ属、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａｊｉｇの微
生物から抽出したペルオキシダーゼがある。

分析操作時にｐＨｊ、Ｏからｔ、Ｏ１好ましくはｐＨ６
，０から７．０の範囲に維持さねるようにペルオキシダ
ーゼが含有される層″１ｆｃｌ−ｉその隣接層等に公知
のｐＨ緩衝剤を含有させることができる。ペルオキシダ
ーゼの含有量は通常多層分析要素７ｍ２当り約／千Ｕか
ら約ｉｏ万Ｕ、好ましくは約コ千Ｕから約６万Ｕの範囲
である。

色原体としては、ロイコ色素型（自己順色型）のもの、
およびカプリング型（デベロッパー型）のものいずれも
用いることができる。ロイコ色素型色原体として、公知
のベンジジン型化合物類、ジフェニルアミン型化合物類
、トリアリールメタン型化合物類、３を換イミダゾール
型化合物類等の多種のロイコ色累金用いることができる
。カプリング型色原体として、公知のアンチピリン（別
名７エナゾン）型化合物類、ペンゾナアゾリノンヒドラ
ゾン化合物類等の多種の化合物を用いることができる。

カプリング型色原体と組合せて用いるカプラーとして、
公知の７工ノール型化合物類、ナフトール型化合物類、
アニリ合物化合物類、プリマキン等がある。

ロイコ色素としては時分ＦＨ３ｓ７−ｚｓ／り号に記載
の−−（≠−ヒドロキシー３．ｊ−ジメトキシフェニル
）−≠、ｚ−ビス〔≠−（ジメチルアミノ）フェニルコ
イミダゾール等のトリアリールイミダゾールロイコ色素
類；特開昭！？−／り３３１２号に記載の−−（Ｊ、Ｊ
’−ジメトキシ−グーヒドロキシフェニル）−！−（≠
−（ジメチルアミノ）フェニル〕−よ一フェネチルイミ
ダゾール等のジアリールイミダゾールロイコ色素類；特
開昭ｔｏ−一お弓７７号に記載のλ−（ｊ、ｊ−ジメト
キシ−グーヒドロキシフェニル）−１−〔弘−（ジメチ
ルアミノ）フェニル〕−ヨーメチルイミダゾール：２−
（ｊ、ｊ−ジメトキシ−グーヒドロキシフェニル）−≠
−〔≠−（ジメチルアミノ）フェニル］−６−＜ｔＡ−
ヒドロキシブチル）イミダゾール等のジアリールイミダ
ゾールロイコ色素類；特開昭Ａ／−１ｔＹｔＯ号に記載
の一一（２−フェニル−３−インドリル）−１ＬＬ、　
１−ジ〔弘−（ジメチルアミノ）フェニルコイミダゾー
ル等のジアリールモノヘテロアリールイミダゾールロイ
コ色素類等がある。

カプリング型色原体としては、ｒＡｎｎ、Ｃｌ１ｎ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、ｔ　、２１Ａ−２７（／り６り）
に記載のｌ−アミノアンチビリ／（別名≠−アミノフエ
ナゾン、すなわち／−フェニル−コツ３−ジメチルー≠
−アミノ−３−ピラゾリン−よ−オン）；特開昭ｊター
よ≠２６２号等に記載の／−（，２，≠。

Ａ　−）　ＩＪ　クロロフェニル）　−２、３−’；ｊ
　チルー≠−アミノー３−ピラゾリン−よ−オン；／−
（ｊ、ｊ−ジクロロフェニル）−２，３−ジメチル−≠
−アミノー３−ピラノリンーよ一オン等の／−ＩＪｔ換
フェニル−，２，３−ジメチル−≠−アミノー３−ピラ
ゾリンー！−オン類；特開昭≠ター１０タタ１号等に記
載の／−フェニル−，２゜３−ジメチルアミノ−３−ピ
ラゾリン−よ−オン等の≠−アミノアンチピリン類縁体
を用いることかできる。これらの化合物のうちでは、≠
−アミノアンチピリン；／−（ｊ、≠、６−ドリクロロ
フエニル）−１，ｊ−ジメチル−≠−アミノー３−ピラ
ゾリンー！−万ン；／−（，３，！−ジクロロフェニル
）−λ、３−ジメチルー≠−ｙミノー３−ピラゾリン−
よ−オン等が好ましい。

カプラーとして、ｒＡｎ・ｎ、Ｃｈｉｎ、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、　Ｊ、６、コ４（−，２７（／り６り）、特開昭シ
タ−！Ｏタタ／号、特開昭！０−／３７／り２号、特開
昭！／−ｔｔｏｉｙｉ号、特開昭ｊｊ−／Ａ４ｔＪｊＡ
号、特開昭ｊ６−／２４ｔＪりｒ号、特開昭よ６−／！
！ｒｊλ号等に記載のフェノール：２−ヒドロキシ−／
−ペンセンスルホン酸；≠−ヒドロキシー／−ベンゼン
スルホン酸’、Ｊ、ｊ−ジクロフーコーヒドロキシ−ｌ
−ベンゼンスルホン酸；−−ヒドロキシ−３−メトキシ
−ｌ−ベンゼンスルホン酸等のフェノールスルホン酸類
（アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩を含む）；／−
ナフトール；λ−ナフトール；ｌ、７−シヒドロキシナ
フタレ／等のジヒドロキシナフタレン類、ｌ−ヒドロキ
シーコーナフタレンスルホン酸；ｌ−ヒドロキシ−弘−
ナフタレンスルホン酸等のナフトールスルホン酸類（ア
ルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩を含む）：その他の
フェノール又はナフトール誘導体等がある。これらの化
合物のうちでは／、７−シヒドロキシナフタレン；ｌ−
ヒドロキシ＝λ−ナフタレンスルホン酸（Ｎａ塩、Ｋ塩
、Ｌｉ塩を含む）’、３．！−ジクロローコーヒドロキ
シ−／−ペンセンスルホン酸；コーヒドロキシー３−メ
トキシ−ｌ−ベンゼンスルホンＲ（Ｎ　ａｋＸ、Ｋ塩、
Ｌｉ塩を含む）等が好ましい。

本発明の多層分析要素には液体試料を適用しての分析操
作実施時のＩ）Ｈｉ’に所望の値（一般的にＩｒ１ｐＨ
２，ｊから１０．Ｏの範聞内の特定の値）１衝できる公
知の緩衝剤から適宜選択して含有させることができる。

用いうる緩衝剤としては、日本化学金繰「化学便覧　基
礎編」（東京、丸善■、／’？ＡＡ年発行）／３１２−
／３．２０頁、Ｒ，Ｍ、Ｃ，Ｄａｗｓｏｎ　　ｅｔａｔ
編ｒＤａｔａ　ｆｏｒ　ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＲｅｓ
ｅａｒｃｈｊ第−版（Ｏｘｆｏｒｄ　ａｔ　　ｔｈｅＣ
ｌａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、／り６り年発行）≠７
Ａ−ｒｏｔ頁、ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ９　、ａ６
７−≠７７頁以降（／Ｐ６４年）、ｒＡｎａｌｙｔｉｃ
ａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　ｔｏｔｉ、　３ｏｏ
−Ｊ／＋１：）頁（／り１０年）等に記載のＥ）Ｈ緩衝
剤系がある。

ｐＨ緩衝剤の具体例として、トリス（ヒドロキシメチル
）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）を含む緩衝剤；燐酸塩を含
む緩衝剤；硼酸塩を含む緩衝剤；酢酸または酢酸塩を含
む緩衝剤；拘ｉ酸または拘焦酸塩を含む緩衝剤；グリシ
ンを含む緩衝剤等；およびこれらのいずれかと必要によ
υ組合せられる酸、アルカリまたは塩がある。好ましい
緩衝剤の具体例として、燐酸二水素カリウム−燐酸水素
二ナトリウム；’ｌ’ｒｉｓ−硼酸ナトリウム；Ｔｒｉ
ｓ−硼酸ナトリウム−ＢＤＴＡ−２Ｎａ塩；Ｔｒｉｓ−
酸；酢酸−酢酸す）　ＩＪウム；拘Ｗｋ酸−燐酸二水素
ナトリウム等がある。

本発明の乾式多層分析要素は前述の諸特許明細書に記載
の公知の方法によυ調製することができる。

本発明の多層分析要素は一辺約／！冨翼から約３ｏｍｒ
ｔの正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し
、特公昭！７−２１３３／号、実開昭５６−／≠２≠よ
り号、特開昭５７−６３≠５２号、実開昭！？−３，ｕ
ｊｒＯ号、特聚昭５ｒ−ｓｏｉ／グ≠号等に記載のスラ
イド枠に収めて化学分析スライドとして用いることが、
製造、包装、輛送、保存、測定操作等諸種の観点で好せ
しい。使用目的によっては、長いテープ状でカセットま
たはマガジンに収めて用いること、または小片を開口の
あるカードに貼付−１ｆＣｉｘ収めて用いることなども
できる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により水ｈａ鉢体試料中アナライト（被検取分）の
定量分析を実施できる。すなわち約！μｍから約３０μ
ｍ、好ましくはｒμｍから７ｊμｌの範囲の全血、血漿
、血清等の水ｈａ体試料滴を展開層に魚屑し、７分から
１０分の範囲で、約２００Ｃから約弘Ｏ０Ｃの範囲の実
質的に一定の温度で、好ましくは３７°Ｃ近傍の実質的
に一定の温度でインクベーションし、光透過性支持体側
から試某層の色の″ｊｆＳ竿濃度ケ可祝光（又は近紫外
線）′？を用いて反射測光し、予め作成しｆＣ検量線を
用いて比色測足法の原理により水囲欣体試料中のアナラ
イト含有籠ヲ求めることができる。

魚屑する水は液体試料の世、インクベーション時間と温
度は一足にすることに工９被検成分の定量分析を＾精度
で実施できる。この測定操作は特開昭ｊＪ−７７７≠６
号、特開昭Ｊ−ｒ−２／！Ａｔ。

号、特開昭！ｒ−／ｌ／１６７号等に記載の化学分析装
置により極めて容易な操作で高精度の測定をすることが
できる。

実施例１ ゼラチン下塗贋が設けられた厚さ１８０ｕ−の無色透明
ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（支持
体）の上に下記の被覆量になるようにして色原体含有層
を水溶液を用いて塗布し乾燥した。

の アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　２３１１／ＩＩ”
ノニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリ
シジル単位含有）　　　　　１．０ｇ７ｍ”１．７−ジ
しドロキシナフタレン　　　　２３０＋＊ｇ／ｍ”４−
アミノアンチピリン　　　　　　　９６０Ｂ／ｍ２ビス
（ビニルスルホニルメチル）エーテル２５０−ｇ／鏑２ 色原体含有層の上に下記の被覆量になるようにして光遮
蔽層を水溶液を用いて塗布し乾燥した。

兄（Ｊ」１暖良覆１− アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　３．８ｇ／ｓ”
ルチル型二酸化チタン微粒子　　　　４０ｇ／ｌａ２ノ
ニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリシ
ジル単位含有）　　　　　１．３ｇ７ｍ２光遮蔽層の上
に下記の被覆量になるようにして接着層を水溶液を用い
て塗布し乾燥した。

１１（匹夫ＬｊＬ アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　６．７ｇ／輸’
ノニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリ
シジル単位含有）　　　　２６０ｍｇ／ｍ’ついで接着
層の表面に水を３０ｇ７ｍ２の割合でほぼ一様に供給し
て湿潤させ、その上に５０Ｄ相当のＰＥＴ紡績糸を３６
ゲージで編んだ厚さ約２５０１Ｊｍのトリコット編物布
をほぼ一様に軽く圧力をかけてラミネート接着して展開
層を設けた。ついで展開層の上から下記の被覆量になる
ようにコレステロール検出試薬組成物水溶液を塗布し展
開層中に試薬組成物を含浸させ、乾燥させてペルオキシ
ダーゼ含有試薬展ｒＭＮを有するコレステロール定量用
−体型多層分析要素を調製した。

コレスーロール　　−　　　　の ノニルフェノキシポリエトキシエタノール（平均９〜１
０オキシ工チレン単位含有）　１６０ａｇ／ｍ２燐酸二
水素−カリウム　　　　　　　　４５ｍｇ／ｍ”Ｍｕ−
水素二カリウム　　　　　　　　　８０ｓ＋ｇ／曽”コ
レステロールエステラーゼ　　　　４５００１１７ｍ”
コレステロールオキシダーゼ　　　　　８００ＬＩ／ｍ
”ペルオキシダーゼ　　　　　　　　　４０００υ／　
ｉｅ　Ｎフェロシアン化カリウム　　　　　　　１３０
ｍｇ／−”ポリビニルピロリドン（平均分子１３６万）
２．７ｇ／ｍ”得られたコレステロール定量用多層分析
要素は一辺１５ｍａ＋の正方形のチップに裁断し、特開
昭５８−３２３５０号に記載のスライド枠に収めてコレ
ステロール定量用化学分析スライドとした。

比較例１ 実施例１のコレステロール検出用試薬組成物からフェロ
シアン化カリウムとペルオキシダーゼを除き１色原体含
有層のかわりに下記被覆量の呈色試薬層を設けたほかは
実施例１と同様にして比較用コレステロール定量用化学
分析スライドを調製した。

一゛の アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　２３ｇ７ｍ”ノ
ニルフェニルボリグリシジルエーテル（平均１０グリシ
ジル単位含有）　　　　　１．０ｇ／ｍ’ペルオキシダ
ーゼ　　　　　　　　　４００００／論２１．７−ジし
ドロキシナフタレン　　　　２３０ｍｇ／ａ”４−アミ
ノアンチピリン　　　　　　　９６０−ｇ７ｍ”ビス（
ビニルスルホニルメチル）エーテル２５０−ｇ　／　ｍ
　２ 比較例２ 実施例１のコレステロール検出用試薬組成物からペルオ
キシダーゼを除き、比較例１と同じ呈色試薬層を設けた
ほかは実施例１と同様にして比較用コレステロール定員
用化学分析スライドを調製した。

性１［■」 調製した３種類のコレステロール定量用化学分析スライ
ドの検量線を次のようにして作成した。

まずコレステロール濃度の異なる人血漿を５種用意して
ｒｃｌｉｎｉｃａｌ　ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＪ２０（４）
、４７０−４７５（１９７４）に記載のＣ，Ｃ，ＡＩＩ
ａｉｎらの方法でコレステロール濃度を求めた。ついで
同じ５種の人血漿１０ＬＩＬを分析スライドの試薬展開
層に点着し、３７℃で６分インクベーションし、直ちに
中心波長６４０ｎｍの可視光で透明支持体側から反射測
光して色原体含有層又は呈色試薬層の反射光学濃度を測
定した。

得られた結果は第１表のとおりであった。

３種のコレステロール分析スライドについてヘモグロビ
ンの影響（干渉）による誤差を調べた。

コレステロール濃度１ｉｔ）＋ｇ／ｄＬ；ヘモグロビン
不含有と検定されたコントロール血清にヒトヘモグロビ
ンを添加してヘモグロビン濃度を２５０ｍｇ／ｄＬ；５
００鋤ｇ／ｄＬに調整したコントロール血清を用意した
。

このコントロール血清１０μＬを分析スライドの試薬展
開層に点着し、３７℃で６分インクベーションし、直ち
に中心波長６４０ｎ−の可視光で透明支持体側から反射
測光して色原体含有層又は呈色試薬層の反射光学濃度を
測定し、ヘモグロビン不含有コントロール血清の場合の
反射光学濃度値からの誤差パーセンテージを求めた。得
られた結果は第２表のとおりであった。

第２表の結果から１本発明のコレステロール定量用多層
分析要素においてはヘモグロビンの干渉による誤差が極
めて少ないことが明らかである。

実施例２ ゼラチン下塗層が設けられた厚さ１８０ｇａ＋の無色透
明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（支
持体）の上に下記の被覆量になるようにして色原体含有
層を水溶液を用いて塗布し乾燥した。

の アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　２３ｇ／（７）２
ノニルフエニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリ
シジル単位含有）　　　　　１．０ｇ／Ｊ１．７−シヒ
ドロキシナフタレン　　　　２３０ａｇ／ｍ２４−アミ
ノアンチピリン　　　　　　　９６０Ｂ／端２ビス（ビ
ニルスルホニルメチル）エーテル２５０翔ｇ／輸２ 色原体含有層の上に下記の被覆量になるようにして光遮
蔽層を水溶液を用いて塗布し乾燥した。

゛　　　　の　　　量 アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　３．８ｇ／ｍ２
ルチル型二酸化チタン微粒子　　　　４０ｇ／ａ＋”ノ
ニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリシ
ジル単位含有）　　　　　１．３ｇ／鴎”光遮蔽層の上
に下記の被覆量になるようにしてペルオキシダーゼ含有
接着層を水溶液を用いて塗布し乾燥した。

ペル　　シ　−ゼ　　　　　の　　ｌ アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　６．７ｇ／−’
ノニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリ
シジル単位含有）　　　　　１．０ｇ７ｍ’フェロシア
ン化カリウム　　　　　　　０．５ｇ／ｍ２ペルオキシ
ダーゼ　　　　　　　　１６００Ｕ／ｍ２グルコースオ
キシダーゼ　　　　　　６０００７ｍ２ついで接着層の
表面に水を３０［１／ＩＩ”の割合でほぼ一様に供給し
て湿潤させ、その上に綿１００％の１００双紡績糸から
なる厚さ約１４０μ−の平織布をほぼ一様に軽く圧力を
かけてラミネート接着して展開１を設は乾燥させてグル
コース定量用一体型多層分析要素を調製した。この要素
を実施例１と同様にしてスライド枠に収めてグルコース
定量用化学分析スライドを調製した。

比較例３ ゼラチン下塗層が設けられた厚さ１８０μ−の無色透明
ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（支持
体）の上に下記の被覆量になるようにしてペルオキシダ
ーゼと色原体を含む呈色試薬層を水溶液を用いて塗布し
乾燥した。

呈上」（乳層！す創覆１ アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　２０ｇ／ｍ２ノ
ニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリシ
ジル単位含有）　　　　９００Ｂ／ｍ２１．７−シヒド
ロキシナフタレン　　　　２００＋ａｇ／ｍ２４−アミ
ノアンチピリン　　　　　　　　８５ｋｇ／ｍ”グルコ
ースオキシダーゼ　　　　　　４０００１１／ｍ”ペル
オキシダーゼ　　　　　　　　　７００００７ｍ’ビス
（ビニルスルホニルメチル）エーテル２２０ｍｇ／ｍ” 呈色試薬層の上に下記の被覆量になるようにして光遮蔽
層を水溶液を用いて塗布し乾燥した。

Ｌ（１１α炭１１ アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　３．８ｇ７ｍ２
ルチル型二酸化チタン微粒子　　　　４０Ｈ／ｍ’ノニ
ルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリシジ
ル単位含有）　　　　　１．３ｇ／ｍ”光遮蔽層の上に
下記の被覆量になるようにして接着層を水溶液を用いて
塗布し乾燥した。

接ｍｍ アリカリ処理ゼラチン　　　　　　　　６．７ｇ／ｍ”
ノニルフェニルポリグリシジルエーテル（平均１０グリ
シジル単位含有＞　　　　２６０＋ｍｇ／＠”その後は
実施例２と同様にして比較用グルコース定量用化学分析
スライドを調製した。

１膨Ｌ（ 調製した２種類のグルコース定量用化学分析スライドの
検量線を次のようにして作成した。

まずグルコース濃度の異なる人血漿を６種用意してヘキ
ソキナーゼ−Ｇ−６−Ｐ　Ｄ　Ｈ法でグルコース濃度を
求めた。ついで同じ６種の人血漿１０ｕＬを分析スライ
ドの試薬展開層に点着し、３７℃で６分インクベーショ
ンし、直ちに中心波長５４０ｎｍの可視光で透明支持体
側から反射測光して色原体含有層又は呈色試薬層の反射
光学濃度を測定した。得られた結果は第３表のとおりで
あった。

［以下余白］ 第　　３　　表 第３表の結果から１本発明のグルコース定星用多層分析
要素においては検量線の勾配がグルコース濃度の広い範
囲にわたって大きいので、測定精度が高いことが明らか
になった。

［以下余白］

【図面の簡単な説明】

第１〜３図はそれぞれ本発明の乾式多層分析要素の３つ
の実施態様例を示す断面模式図である。 １０：光透過性水不透過性支持体 ２０：色原体含有層 ３０：過酸化水素分解酵素含有層 ４０：光反射層又は色遮蔽層 ５０：多孔性展開層 ５２：過酸化水素分解酵素含有試薬展開層Ｓ二点着され
る液体試料 り二反射測光用光源（図示せず） Ｖ二反射拡散光測定機構（図示せず）及び測定方向特許
出願人　富士写真フィルム株式会社第１図 第２図 第３０Ｉ 手続補正書（自発） 昭和６２年１０月　６日 １　事件の表示　　昭和６１年特許願第１９３７０５号
２　発明の名称　　乾式多層分析要素 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　　神奈川県南足柄市中沼２１０番地富士写真
フィルム株式会社東京本社 電話（０３）４０６−２５３７ ４　補正により増加する発明の数　なし５　補正の対象 明細書のｒ発明の詳細な説明ｊの欄 ６　補正の内容 （１）明細書第８頁第１９行と第２０行の間に次の文章
を挿入する。 「　特開昭６１−１２４３９３には、ペルオキシダーゼ
を含有する多層分析要素におけるペルオキシダーゼの経
時劣化を防止して多層分析要素の保存経時安定性を改良
する目的で、ペルオキシダーゼ、水素供与体（本発明の
要素におけるカプリング型の色原体に相当する）及びカ
プラーを含有する過酸化水素検出多層分析要素において
、ペルオキシダーゼと水素供与体とを互いに別層に分離
して配置する提案がなされている。しかしこの要素にお
いては共存する試薬組成物中の他の成分やポリマーバイ
ンダーと反応して多層分析要素の経時劣化を生じる可能
性のあるフェロシアン化アルカリを呈色試薬組成物中の
１成分として含有させることζ５ついては一切言及して
いない。１ （２）明細書第２５頁第４行の文末に次の文章を挿入す
る。 「ノニオン性界面活性剤の含有量（被覆量）は、含有さ
せることができる各層について１１ｍ２当り通常約２０
ｍｇから約１５ｇ、好ましくは約５０１１１ｇから約１
０ｇの範囲である。」 （３）明！ｌＨ書第２７頁第１３行と第１４行の間に次
の文章を挿入する。 ｒ　フェロシアン化アルカリとしては、フェロシアンイ
オン（ヘキサシアノ鉄（ＩＩ）ｌイオン；すなわちＣＦ
ｅ（ＣＮ）ａｌ’−）を含有するか又は放出しうる化合
物を用いることができる。フェロシアン化アルカリとし
ては、ヘキサシアノ鉄（ＩＩ）１のアルカリ金属塩、ア
ルカリ土類金属塩、これらの混合金属塩を用いることが
できる。 フェロシアン化アルカリの具体例と、して、フェロシア
ン化ナトリウムＮａ４［Ｆｅ（ＣＮ）６コ；フェロシア
ン化カリウムに４［Ｆｅ（ＣＮ）ａｌ：ヘキサシアノ鉄
（ＩＩ）Ｍリチウム；ヘキサシアノ鉄（ｎ）ｉｆマグネ
シウム；ヘキサシアノ鉄（Ｉｆ）酸カルシウムがある。 これらの化合物のうちで、フェロシアン化ナトリウムと
フェロシアン化カリウムが好ましい。フェロシアン化ア
ルカリの含有量（被覆量）は、通常多層分析要素１１Ｉ
２当り約０．１ミリモルから約１０ミリモル、好ましく
は約０．５ミリモルから約５ミ１几ルの範囲である。Ｊ
（４）明細書第３２頁第１行と第２行の間に次の文章を
挿入する。 ｒ　色原体の含有ｊ１（被覆ｉｔ）は、いずれも多層分
析要素ＩＩＩ＋２当り、ロイコ色素型（自己顕色型）の
色原体の場合約０．５ミリモルからｍ’］１０ミリモル
、好ましくは約１ミＩＪモルから約５ミリモルの範囲、
カプリング型の色原体の場合約０．５ミリモルから約１
０３９モル、好ましくは約１ミリモルから約５ミリモル
の範囲、カプリング型の色原体に組合せるカプラーにつ
いて約０．５ミリｔｎから約４０ミリモル、好ましくは
約１ミリモルから約２０ミリモルの範囲である。」 （５）明細書第３３頁第６行の行末のｒＴｒｉｓ−Ｊの
次の空白部分に咋１Ｊを挿入する。 （６）明細書第３４頁６行の行末の°ｒ子なわち」を「
例えば、」に訂正する。 以上

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）オキシダーゼの存在下で生成する過酸化水素を定
   量することにより水性液体試料中のアナライトを定量し
   うる呈色試薬組成物を含有する層を光透過性水不透過性
   支持体の上に有する乾式多層分析要素において、前記要
   素中にアナライト又はアナライトから誘導される物質に
   特異的に作用して過酸化水素を生成するオキシダーゼ、
   過酸化水素分解酵素、フェロシアン化アルカリ、色原体
   を必須成分とする呈色試薬組成物を前記支持体の片面上
   の層に乾燥状態で保持させる際に、過酸化水素分解酵素
   含有層と色原体含有層とを別異の層とし、かつ前者を後
   者より前記支持体から遠い層として配置したことを特徴
   とする乾式多層分析要素。
2. （２）前記支持体の上に設けられた各層が一体に積層さ
   れている特許請求の範囲第１項に記載の乾式多層分析要
   素。