JPH01233368A - 乾式分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の属する分野］ 本発明は液体中の特定成分の検出定量に有用な乾式分析
要素、特に過酸化水素を生成し得るか過酸化水素を生成
する反応に関与するような特定成分の検出に適する乾式
分析要素に関する。

［従来技術］ 液体中の特定成分を、その成分が関与する反応の結果生
成する過酸化水素を検出して定量する分析方法は、種々
知られている。それらの中で、米国特許４，０８９，７
４７号や特開昭５９−１９３３５２号に記載されたイミ
ダゾール核を有するロイコ色素を利用する方法がある。

これらロイコ色素は、１モルの過酸化水素から１モルの
色素を生成し、色素の分子吸光係数が高いので、検出感
度が高い利点をもつ一方、発色後退色するために、正確
な測定が難しい欠点を有していた。

ロイコ色素の退色を実質的に除くために、ロイコ色素を
疎水性溶媒に溶解した溶液を親水性媒体中に分散して、
水浸透性層に含ませる方法が有効であることがすでに見
出された（特願昭６２−８２０６１号、新井ら）、シか
し疎水性溶媒に溶解し親水性媒体中に分散されたロイコ
色素は、発色速度が低下する。

またロイコ色素を疎水性溶媒に溶解した溶液の分散物は
、通常用いられるようなアニオン系界面活性剤を用いて
も、４０℃で二、三時間、または５℃で１週間程度保存
したとき、分散物の平均粒子径が大きくなった。すなわ
ち分散物は不安定であった。

［解決しようとする技術的課題］ 本発明において第一の課題は、ロイコ色素の発色を利用
して、液体中の特定成分が関与する反応の結果生成する
過酸化水素を検出することにより、上記特定成分を定量
する乾式分析要素において、発色速度を低下させずにロ
イコ色素の退色による分析精度の低下を実質的に除くこ
とである。

本発明において第二の課題は、ロイコ色素を疎水性溶媒
に溶解した溶液が親水性媒体中に安定に分散された乾式
分析要素を得ることである。

［技術的課題の解決手段］ 上記の技術的課題は、下記−最大［Ｉ］で表されるロイ
コ色素を脂肪族高級アルコールを含む疎水性溶媒に溶解
した溶液の親水性媒体中への分散物として、水浸透性層
に含む乾式分析要素によって、同時にまたは個別に解決
された。

−最大［Ｉ］において、Ｒ’は置換されてもよいアリー
ル基を、Ｒ２は置換されてもよいアルキル基を、Ｒ３は
ｉ換されてもよいアリール基を表す。

Ｒ１で表されるアリール基例えばフェニル基の、有して
もよい置換基は、例えばヒドロキシ基、アルコキシ基、
アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基等で
あるが、ジアルキルアミノ基、例えばジメチルアミノ基
、ジエチルアミノ基が好ましい。

Ｒ２で表されるアルキル基、例えばメチル基、エチル基
等は、無置換でもよいが、置換されてもよく、例えばフ
ェニル基、フェノキシ基、４−ジメチルアミノフェニル
基等で置換されてもよい。

Ｒ３で表されるアリール基の有してもよい置換基は、例
えばヒドロキシ基、アルコキシ基（炭素原子数１ないし
４が好ましい）等である。

Ｒ１で表されるアリール基の代表例は４−ジメチルアミ
ノフェニル基および４−ジエチルアミノフェニル基であ
る。Ｒ２で表されるアルキル基の代表例はベンジル基お
よびフェネチル基であり、好ましいのはフェネチル基で
ある　Ｒ３で表されるアリール基の代表例は４−ヒドロ
キシフェニル基および３．５−ジメトキシ−４−ヒドロ
キシフェニル基である。

上記ロイコ色素の合成法は特開昭５９−１９３３５２号
に記載されている。

上記第二の技術的課題は、下記−最大［１１］で表され
るロイコ色素および脂肪族高級アルコールを疎水性溶媒
に溶解した溶液を親水性媒体中に分散し、この分散物を
水浸透性層に含有させることを特徴とする乾式分析要素
の製造方法によって解決された。

一般式［ｎＪにおいて、Ｒ４は置換されてもよいアリー
ル基を、　ＲＳは置換されてもよいアリール基または置
換されてもよいアルキル基を、Ｒ“は置換されてもよい
アリール基を表す。

Ｒ４およびＲ５で表されるアリール基（例えばフェニル
基）の有してもよい置喚基は、例えばヒドロキシ基、ア
ルコキシ基、アミン基、アルキルアミノ基、ジアルキル
アミノ基等であるが、ジアルキルアミノ基、例えばジメ
チルアミノ基、ジエチルアミノ基が好ましい　Ｒ４およ
びＲ５で表される置換されてもよいアリール基は、互い
に同じでも異なってもよいが、合成上は同じとするのが
好都合である。

Ｒ５で表されるアルキル基、例えばメチル基、エチル基
等は、無置換でもよいが、置換されてもよく、例えばフ
ェニル基、フェノキシ基、４−ジメチルアミノフェニル
基等で置換されてもよい。

Ｒ″で表されるアリール基の有してもよい置換基は、例
えばヒドロキシ基、アルコキシ基（炭素原子数１ないし
４が好ましい）等である。

Ｒ４およびＲＡで表されるアリール基の代表例は４−ジ
メチルアミノフェニル基および４−ジエチルアミノフェ
ニル基である　Ｒ％で表されるアルキル基の代表例はベ
ンジル基およびフェネチル基であり、好ましいのはフェ
ネチル基である。Ｒ′で表されるアリール基の代表例は
４−ヒドロキシフェニル基および３．５−ジメトキシ−
４−ヒドロキシフェニル基である。

上記ロイコ色素の合成法は米国特許４，０８９，７４７
号、特開昭５１１９３３５２号等に記載されている。

［発明の具体的構成］ 体液などに含有されている生化学物質を定量するに適す
る乾式分析要素はすでに知られており、例えば特開昭４
９−５３８８８号（米国特許第３，９９２，１５８号に
対応）、同５５−１６４３５６号、同５９〜１０２３８
８号等に記載されている。乾式分析要素では一最に、被
検成分と分析要素内に含まれる試薬との反応の反応生成
物または未反応成分の量を、光学的に、例えば発色、変
色、蛍光、発光等の分光測光により測定し、被検成分を
定量する。乾式分析要素を用いると、簡便、迅速に、し
かも高い精度で液体中の特定成分、例えば生化学的活性
物質の分析ができる。

本発明の分析要素は、少なくとも１つの水浸透性層を有
する。好ましくは、少なくとも２Ｎの水浸透性層を有す
る。支持体を有しなくてもよいが、水不浸透性支持体を
有することが好ましい、支持体はまた光透過性であるこ
とが好ましい。

ロイコ色素は、試料液中の所要の特定成分と分析要素中
の組成物との相互作用によって生成してもよいし、上記
特定成分の関与、例えば触媒作用の下に、分析要素中の
成分の間の相互作用によって生成してもよい、相互作用
は単一の反応から成ってもよいし、複数の反応から成っ
てもよい、「相互作用」なる用語は、化学活性、酵素−
基質複合体の形成におけるような触媒活性、抗原−抗体
反応におけるような免疫原活性、その他、染料の濃度が
直接的また間接的に特定の分析物質の存在または濃度を
示すような検出可能な染料を生成できる全ての型の化学
的または物理的相互作用を指す。

上記の相互作用組成物は、選択される分析反応系によっ
て決まる。試料液中の酵素活性を測定する場合には、相
互作用組成物に当該酵素に対する基質を含むことを必要
とする。試料液中の被検成分が酵素の基質である場合に
は、相互作用組成物に当該基質に対する酵素活性物質を
含むことにより、分析を実行することができる。

本発明で有用な相互作用組成物は、Ｍえば酸化酵素活性
を有する物質を含むものである。酵素、例えばグルコー
スオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ、コレステ
ロールオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ等のよう
なオキシダーゼ活性物質を、このような酵素に対する基
質である成分の分析のために分析要素の試薬層や液体展
開層（後述）に含ませることができる。またこれらの基
質を別の酵素反応や免疫反応（抗原抗体反応）の結果生
ずる酵素、基質、抗原、抗体等の分析にも適用できる。

試薬組成物は、総てを一つの水浸透性層に含んでもよく
、別の１以上の水浸透性層に分けて含有させてもよい０
例えば３つの試薬層を設け、被検成分と試薬との反応に
より中間体を生成する組成物を支持体から最も遠い第３
の試薬層に、生成した中間体と反応して過酸化水素を与
える組成物（指示薬）を第２の試薬層に、ロイコ色素を
含む分散物を支持体に最も近い第１の試薬層に含んでも
よい、２つの試薬層を設け、被検成分と試薬との反応に
より過酸化水素を与える組成物（指示薬）を支持体から
遠い第２の試薬層に、ロイコ色素を含む分散物を支持体
に近い第１の試薬層に含んでもよい、また被検成分と試
薬との反応により中間体を生成する組成物を支持体から
遠い第２の試薬層に、生成した中間体と反応して過酸化
水素を与え葛組成物とロイコ色素分散物を支持体に近い
第１の試薬層に含んでもよい。

試薬組成物は全部を親水性ポリマーを結合剤とする実質
的に均一な層に含ませてもよいが、一部を多孔性層に含
んでもよい、特開昭６２−１３８７５６号、同一１３８
７５７号、同一１３８７５８号（特願昭６０−２７９８
５９号、同一２７９８６０号、同一２７９８６１号）に
記載されたような複数の多孔性層のいずれかに含有させ
ることもできる。試薬組成物の少なくとも一部を多孔性
層に含有させるには、試薬組成物の適当な溶液または分
散液を予め含浸まなは塗布した多孔性展開層を、他の水
浸透性層、例えば親水性ポリマーを結合剤とする実質的
に均一な層の−Ｅに特開昭５５＝１６４３５６号のよう
な方法で接着させる方法も有用である。多孔性層を他の
水浸透性層（例えば下塗り層、接着層、吸水層、第１試
薬層）の上に前記特開昭５５−１６４３５６号のような
方法で接着させた後、試薬組成物の溶液または分散液を
多孔性層に塗布してもよい、多孔性層への含浸または塗
布には公知の方法を利用できる。塗布には例えばデイツ
プ塗布、押し出し塗布、ドクター塗布、ホッパー塗布、
カーテン塗布等を適宜選択して用いる。

本発明に用いる有用なロイコ色素の具体例を以下に示す
。

前記−最大［１］または［ｔｌ］のロイコ色素は、分散
物として乾式分析要素の少なくとも１つの水浸透性層に
含まれる。水浸透性層は多孔性層であってもよいが、親
水性ポリマーを結合剤とする無孔層が好ましい、ｆｆｌ
水性ポリマーとして例えば、ゼラチンおよびこれらの誘
導体（例えばフタル化ゼラチン）、セルロース誘導体（
例えばヒドロキシエチルセルロース）、アガロース、ア
クリルアミド重合体、メタアクリルアミド重合体、アク
リルアミドまたはメタアクリルアミドと各種ビニル性七
ツマ−との共重合体等が利用できる。

疎水性溶媒、親水性媒体、および分散方法は、以下に述
べるように、公知のものを用いることができる。

前記ロイコ色素は、これらの親水性ポリマーの連続相の
中に、疎水性溶媒に溶解した溶液の分散物として含まれ
る。疎水性溶媒としては、重層ゼラチン／ハロゲン化銀
カラー写真感光材料で普通に用いられる疎水性溶媒を利
用できる０例えば、米国特許２，３２２，０２７号に記
載された溶媒を用いることができる０例えば、フタル酸
ジエステル類、例えばジブチルフタレート、ジシクロへ
キシルフタレート、ジー２−エチルへキシルフタレート
、デシルフタレート等；リン酸エステル類、例えばトリ
フェニルホスフェート、トリクレジルホスフェート、２
−エチルへキシルジフェニルホスフェート、トリシクロ
へキシルホスフェート、トリー２−エチルへキシルホス
フェート；安息香酸エステル類、例えば２−エチルへキ
シルベンゾエート；アミド類、例えばＮ、Ｎ−ジエチル
ラウリルアミド、Ｎ−テトラデシルピロリドン；フェノ
ール類、例えば２．４−ジ−ｔ−アミルフェノール、脂
肪酸エステル類、例えばくえん酸トリオクチル：炭化水
素類、例えばパラフィン；ハロゲン化炭化水素、例えば
塩素化パラフィン等を挙げることができる。これらは一
般に高沸点溶媒である。

ロイコ色素をこれらの高沸点溶媒中に溶解する際、高沸
点溶媒のみを用いてもよいが、低沸点溶媒を同時に用い
てもよいし、またまず低沸点溶媒に溶解した後、高沸点
溶媒と混合してもよい、低沸点溶媒としては、沸点が５
０℃以上、１６０℃以下の有機溶媒、例えば脂肪酸エス
テル類、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸−２−エ
トキシエチル；ケトン類、例えばメチルエチルケトン；
アミド類、例えばジメチルホルムアミド等が利用できる
。

本発明においては、上記高沸点溶媒の他に脂肪族高級ア
ルコールを加えることが特徴である８本発明で用いる脂
肪族高級アルコールは炭素数１２ないし３０の直鎖また
は分岐鎖の１価のアルコールである。炭素数１４から２
０が好ましい、２級または３級アルコールでもよいが、
１級アルコールが好ましい０代表例はセチルアルコール
、ステアリルアルコールである。炭素鎖に不飽和部分を
有してもよい。

脂肪族高級アルコールは、高沸点溶媒に対し０．１ない
し２０重量％の範囲で使用できる。好ましいのは６ない
し１５重量％である。ロイコ色素を、脂肪族高級アルコ
ールを含む疎水性溶媒に溶解し、該溶液を親水性媒体水
溶液中に分散してもよいし、ロイコ色素を疎水性溶媒に
溶解した後、脂肪族高級アルコールを添加した溶液と、
親水性媒体水溶液中に分散してもよい。

ロイコ色素の上記溶液を前記親水性ポリマーの水溶液中
に分散するためには、公知の種々の分散方法、特に水中
油滴型分散物の調製に適する分散方法を用いることがで
きる（例えば特開昭５５−１２９１３６号、同５９−２
０３６３２号、同６２−８６３６３号記載の方法）、ロ
イコ色素の有ｖ１溶媒溶液（乳化助剤を含んでもよい）
に水（乳化助剤を含んでもよい）を加えて油中水滴型乳
化物を形成させた後水中油滴型に転相させ適当なバイン
ダー（ＪＩ！水性コロイド〉を添加する方法（特開昭５
５−１２９１３６号、同５９−２０３６３２号）は有用
である０分散に当たって界面活性剤を乳化助剤として用
いることが好ましい。

乳化助剤として適用できる界面活性剤は例えばアルキレ
ンオキシド化合物；例えば ポリエチレングリコール（以下ＰＥＧと略記）、ＰＥＧ
／ポリプロピレングリコール縮合物ＰＥＧアルキルエー
テル、 ＰＥＧアルキルフェニルエーテル ＰＥＧアルキルエステル類 ＰＥＧソルビタンエステル類 ＰＥＧアルキルアミン類 ＰＥＧアミド類 グリシドール誘導体；例えば アルケニルこはく酸ポリグリシドール アルキルフェノールポリグリシドール 多価アルコール脂肪酸エステル類 糖アルキルエステル類 糖ウレタン類 糖エーテル類 サポニン（ステロイド系） サポニン（トリテルペノイド系） アルキルカルボ７１１１６頭、 アルキルスルホン酸類 アルキルスルホこはく酸類；例えばジー２−エチルへキ
シルスルホこはく酸ナトリウム アルキルベンゼンスルホン酸類；例えばドデシルベンゼ
ンスルホン酸ナトリウム、アルキルナフタレンスルホン
酸 アルキル硫酸エステル類 アルキルりん酸エステル類 アルキルフェノキシポリエトキシアルキルスルホン酸類 ポリオキシエチレンアルキルりん酸エステル類アミノ酸
類 アミノアルキルスルホン酸類 アミノアルキル硫酸エステル類 アミノアルキルりん酸エステル類 アルキルベタイン類、 アミンイミド類、 アミンオキシド類、 アルキルアミン塩類 脂肪族第四級アンモニウム塩類 芳香族第四級アンモニウム塩類 複Ｔ：環第四級アンモニウム塩；例えばピリジニウム塩
類、イミダゾリウム塩類脂肪族スルホニウム塩類 脂肪族ホスホニウム塩類 等である。

疎水性溶媒と親水性媒体の割合は通常、８：１からに１
０程度であるが、ロイコ色素の必要な含有量、分散の安
定性、要求される分散物の物理的特性等により決められ
る。３：１から１：４程度が好ましいことが多い。

本発明においてロイコ色素を含む疎水性溶液を親水性媒
体溶液中に分散するには、大きいせん断力を有する高速
撹拌型分散機、超音波エネルギーを利用した分散機を用
いることができる。具体的にはコロイドミル、ホモジナ
イザー、毛細管式乳化装置、電磁歪素子を用いた超音波
乳化装置、ボールマン笛を用いた乳化装置等があげられ
る。高速撹拌型分散機はせん断力を与える要部（インペ
ラー）が液中で毎分５００ないし２００００回転するも
ので、デイシルバー、ポリトロン、ホモミキサー、ホモ
ブレンダー、ケディミル、ジェットアジター等の商品名
で知られる。

ロイコ色素分散物（またはこれを含む親水性媒体）の層
を水不浸透性支持体の上に設けるには、分散物から成る
液を支持体の上に塗布し、乾燥する方法が適用できる。

塗布には例えばデイツプ塗布、押し出し塗布、ドクター
塗布、ホッパー塗布、カーテン塗布等を適宜選択して用
いる。

本発明は公知の多種の乾式分析要素に適用することが出
来る０分析要素は多孔性層、試薬層のほか、支持体、展
開層、検出層、光遮蔽層、接着層、ろ過層、吸水層、下
塗り層その他の層を含む多重層の構成を有してもよい、
かような分析要素として、米国特許第３，９９２，１５
８号、同４，０４２，３３５号および特開昭５５−１６
４３５６号各明細書に開示されたものがある。

光透過性水不透過性支持体を用いる場合、本発明の乾式
分析要素の実用的に採りうる構成は（１）支持体上に試
薬層、その上に展開層を有するもの。

（２）支持体上に検出層、試薬層、展開層をこの順に有
するもの。

（３）支持体上に試薬層、光反射層、展開層をこの順に
有するもの。

（４）支持体上に検出層、試薬層、光反射層、展開層を
この順に有するもの。

（５）支持体上に検出層、光反射層、試薬層、展開層を
この順に有するもの。

（６）支持体上に第二試薬層、光反射層、第一試薬層、
展開層をこの順に有するもの。

（７）支持体上に検出層、第二試薬層、光反射層、第一
試薬層、展開層をこの順に有するもの。

上記（１）ないしく５）において試薬層は異なる複数の
層から成ってもよい、支持体と試薬層または検出層との
間には吸水層を設けてもよい、上記（１）ないしく３〉
と（６）において試薬層と検出層または展開層の間にろ
過層を設けてもよい。

上記（３）ないしく７）において光反射層と検出層、試
薬層または展開層との間、試薬層と検出層との間または
試薬層と展開層の間に、さらにろ過層を設けてもよい、
試薬層が複数層から成る場合に、試薬層と試薬層の間に
さらにろ過層を設けてもよい。

本発明は全血、血漿または血清中の種々の分析物質の定
量に有用である０本発明は、例えばグルコース、コレス
テロール、尿酸、グリセロール、トリグリセリド、尿酸
、ビリルビンなどの代謝物質の定量に有用であるのみな
らず、クレアチンキナーゼ、トランスアミナーゼ（例え
ばアラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギンア
ミノトランスフェラーゼ）、加水分解酵素（例えばアミ
ラーゼ、酸性ホスファターゼ、アルカリホスファターゼ
等）等の酵素活性の測定にも有用である。

本発明は又、特定の抗体または抗原を用いた免疫分析に
も使用できる。

本発明の乾式分析要素の試薬層としては、親水性ポリマ
ーを結合剤とする実質的に均一の層のほか、例えば特開
昭５８−７０１６３号、特開昭６１−４９５９号、特願
昭６０−２５６４０８号、同６０−２７９８５９号、同
６０−２７９８６０号、同６０−２７９８６１号等に記
載されたような多孔性層も用いることができる。

前記ロイコ色素を含む試薬層にはロイコ色素分散相のほ
か、酵素、補酵素、酵素に対する基質、酸化剤、Ｍ衝剤
等を含有させることができる。

本発明の分析要素の試薬層に含有させることができるＭ
衝剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やＢｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ誌　第５巻　第２号、４６７ページ
より４７７ページ（１９６６年）に記載されているグツ
ド（Ｇｏｏｄ　）の）Ｉｆｆｒ剤などを挙げることがで
きる。これらのｕｉｉ剤はｒ蛋白質・酵素の基礎実験法
Ｊ（堀尾武−ほか著、南江堂、１９８１年）、前記Ｂｉ
ｏｃｈｅ＋５ｉｓｔｒｙ誌第５巻等の文献を参考にして
選択することができる。

多孔性層を展開層として利用する場き、液体計量作用を
有する層であることが好ましい、液体計量作用とは、そ
の表面に点着供給された液体試料を、その中に含有して
いる成分を実質的に偏在させることなく、面の方向に単
位面積当りほぼ一定量の割合で広げる作用である。

展開層その他の多孔性層を構成する材料としては、ｒ紙
、不織布、織物生地（例えば平織生地）、編物生地（例
えば、トリコット編）、ガラス繊維ｒ紙等を用いること
ができる。展開層としては、これらのうち織物、編物等
が好ましい、織物等は特開昭５７−６６３５９号に記載
されたようなグロー放電処理をしてもよい、展ｒｍ層に
は、展開面積、展開速度等を調節するため、特開昭６０
−２２２７７０号、特願昭８１−１２２８７５号、６１
−１２２８７８号、６１−１４３７５４号に記載したよ
うな親水性高分子あるいは界面活性剤を含有してもよい
。

多孔性層を接着し積層するための接着層を、試薬層、光
反射層、濾過層、吸水層、検出層等の層の上に設けても
よい、接着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着する
ことができるような親水性ポリマー、例えばゼラチン、
ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなる
。

本発明の分析要素は光反射層を有してもよい。

例えば、試薬層と検出層との間、または試薬層と液体展
開層との間に、光反射層を設けることができる。光反射
層は、検出層、試薬層等に生じた検出可能な変化（色変
化、発色等）を光透過性を有する支持体側から反射測光
する際に、展開層に点着供給された被検液の色、特に試
料が全血である場合のヘモグロビンの赤色、ビリルビン
の黄色等を遮蔽するとともに光反射層または背景層とし
て８！能する。光反射層は、親水性ポリマーをバインダ
ーとして、酸化チタン、硫酸バリウム等の光反射性微粒
子が分散された水浸透性の屑であることが好ましい、バ
インダーとしてはゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアク
リルアミド等が好ましい。

ゼラチンのような硬化可能なポリマーには硬膜剤を加え
てもよい０分析要素には、必要に応じ展開層、試薬層、
検出層等に酸化チタン等の粒子を含有させてもよい。

本発明の分析要素は、液体展開層とは別に全血球を実質
的にろ過して除去する層を有してもよい。

例えば特開昭５８−７０１６３号、特開昭６１−４９５
９号、特願昭６０−２５８４０８号、同６０−２７９８
５９号、同６０−２７９８６０号、同６０−２７９８６
１号等に記載されたような多孔性層は好適である。

試料全血を適用後、試験結果を早く又は正確に得るため
に、インキュベーション（加熱）を要素に対して行なう
ことができる。

分析成分が存在するならば、サンプル中の分析成分の濃
度に基づく速度で分析物質が相互作用組成物と相互作用
する０色素を検出するための適当な装＝に分析要素を通
すことによって、色素の形、成速度を測定するか、分析
成分濃度に対応して形成された色素の量を測定する０色
素は当業者に公知の適当な分光光度測定装置、例えば米
国特許４゜５８４．２７５号や、特願昭６１−２０７０
４５号に記載された装置を用いて検出できる。

本発明をさらに具体的に説明するため以下に実施例およ
び参考例を記載する。

〔参考例〕

■分散 ロイコ色素（下記＊）酢酸塩　　　１．１ｇ塩酸塩　　
　０．１５ｇ Ｎ、Ｎ−ジエチルラウリルアミド　　２０ｇステアリル
アルコール　　　　　　２．５ｇネ　２−（４−ヒドロ
キシ−３，５−ジメトキシフェニル）−４−（４−（ジ
メチルアミノ）フェニル〕−５−フェネチルイミダゾー
ル 保温ジャケット、温度計、高速インペラ攪拌器を装備し
たタンク中で、上記組成物を約８０℃に保ちながら３０
分間低速撹拌を行ない、完全に溶解した後溶液の温度を
５０℃まで下げる。温度を５０℃に保ちながら、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ソーダ１．２５ｇを含む５０℃の
２０％ゼラチン溶液１２０ｇを添加して約１分間低速回
転で混合した後、５７００ｒｐｍで３０分間高速攪拌し
た。

１２％ゼラチン溶液　２９０ｃｃを添加して再び１０分
間低速攪拌して希釈し、水中油滴型乳化物１を得た。平
均粒径は０．１４ミクロンであった。

前記のロイコ色素溶液をステアリルアルコールを省略し
て調製し、水中油滴型乳化物２を得た。

平均粒径は０．２１ミクロンであった。

■乳化物の安定性 乳化物１および２を、４０℃で３時間、５℃で１週間、
４０℃で３時間後５℃で１週間、保存したときの平均粒
子径（μＲ１）の変化を第１表に示す。

＊は凝集の発生を示す。

■発色の再現性 前記■で調製した乳化物ｌおよび２をそれぞれ厚さ１８
０μｌのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィル
ム上に乾燥膜厚が２０μｍになるように塗布、乾燥し、
この上に下記組成の液を乾燥膜厚が７μ凛になるように
塗布、乾燥して、光反射層を設けた。

水　　　　　　　　　　　　　　　　　　６２ｇアルカ
リ処理ゼラチン　　　　　３．４ｇルチル型酸化チタン
　　　　　３４ｇ ポリオキシエチレン（ｎ；１０） ノニルフェニルエーテル　　　０．３ｇこの上にゼラチ
ン溶液を塗布、乾燥し、厚さ２μ屑の接着層を設けた。

この接着層に３０ｇ７ｍ２の割合で水を供給し温潤させ
た後、３６フイラメント、５０デニールのポリエチレン
テレフタレート紡績糸を４０ゲージでニット状に編んだ
生地を圧着（ラミネート）して、展開層を設けた０次い
でこの展開層上に２％ヒドロキシ１０ビルセルロースの
エチルアルコール溶液を１１２当たり２００ｃｃ塗布し
乾燥した。

次にこれを１．５ｃｍＸ　１．５ｃｍの正方形に裁断し
、特開昭５７−６３４５２に開示されたマウントに収め
て、フェリシアンイオン分析スライドとした。

この分析スライドにフェリシアン化カリ５０−ｇ／ｄｌ
ｌの液を１０μ！点着し、１０秒後の反射光学濃度を６
４０ｎａ＋で測定した。これを１０回反復して発色の再
現性を調べた。その結果を第２表に示す。

第２表中の数字（標準偏差を除く）は反射光学濃度であ
る。

第２表 第２表から乳化物ｌを用いた場合の発色の繰り返し再現
性は、乳化物２を用いた場合に比し良好であったことが
わかる。

［実施例１］ 下記組成Ａのロイコ色素溶液を調製した。

Ａ　： ２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル〉
−４−（４−（ジメチルアミノ）フェニルツー５−フェ
ネチルイミダゾール （ロイコ色素）　酢酸塩　　　　４．４２２−（４−ヒ
ドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）−４−（４−
（ジメチルアミノ）フェニル〕−５−７エネチルイミダ
ゾール 塩酸塩　　　　　　　　　　　０．６　。

Ｎ、Ｎ−ジエチルラウリルアミド　　　９０１１ステア
リルアルコール　　　　　２．５ｇ旦１ＬＺ１１ 下記組成りのゼラチン溶液を作成した。

Ｂ　・ アルカリ処理ゼラチン　　　　２３０ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　１４００　ｇグルコースオキ
シダーゼ　　４００００　Ｕペルオキシダーゼ　　　　
　７００００　Ｕ（Ｕは国際単位を表す） ジー２−エチルへキシルスルホ コハク酸ナトリウム　　　　　　５ｇ ビス〔（ビニルスルホニルメチル カルボニル）アミノコメタン　　２．３ｇル化宵ａ４設 Ｂ液をＴＫオートホモミキサー（特殊機械工業社製乳化
器）で約６０００回転／分でかくはんしながらＡ液を添
加し、約３０分間分散させて、乳化物を調製した。

ｌ−２，化ム試ゑｌ役１１ 上記乳化物を、ゼラチン下塗りされている厚さ１８０μ
ｍの透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィル
ム（支持体）の上に１１当たり１５０ｇの割合で塗布し
、乾燥した。

１−３．先主１１ 発色試薬層の上に、各成分について下記の被覆量から成
る光反射層（乾燥層厚７μりを、水分散液の塗布・乾燥
により設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　２．９　ｇ７ｍ”
ルチル型二酸化チタン微粒子　　　１３　ｇ７ｍ２ノニ
ルフエノキシボリグリシド （平均１０グリシド一ル単位含有）　４００　ｍｇ７ｘ
２１−４．援１１− 光反射層の上に下記の被覆量で（乾燥厚５μｍ）接着層
を、水分散液の塗布・乾燥により設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　６．７　ｇ７１ノ
ニルフェノキシポリグリシド （平均１０グリシド一ル単位含有）　Ｂｏｏ　ｚｇ７ｘ
２１−５．１Ｌ訃１ 上記接着層の表面に水を３０ｇ／ｘ２の割合でほぼ一様
に供給して湿潤させ、その上に５０デニール相当のＰＥ
Ｔ紡績糸を３６ゲージ編みした厚さ約２５０μ層のトリ
コット編物布地を軽く圧着しくラミネート）接着させて
、多孔性展開層とした。

次に、ポリマー含有エタノール分散液を下記の被覆量に
なるように展開層の上から塗布し、乾燥して、グルコー
ス定量分析用多層分析フィルムを作製した。

ヒドロキシプロピルセルロース （メトキシ基２８〜３０％。

ヒドロキシプロポキシ基７〜１２％含有。

２％水溶液の２０℃での粘度５０ｃｐｓ）　　５２７ｍ
２ノニルフエノキシボリエトキシ エタノール （平均４０オキシ工チレン単位）　　　　５００　ｍｇ
７ｍ２１−６．１４＆１１且 得られたグルコース定量分析用分析フィルムを一辺１５
ｎｍの正方形チップに裁断し、特開昭５８−３２３５０
号に記載のスライド枠に収めてグルコース定量用生化学
分析スライドを完成した。

この分析スライドは各層とも均一な面状を示した。

［比較Ｆ！４１］ Ａ液の組成中ステアリルアルコールを除いた以外はすべ
て実施例１と同じ方法で、グルコース分析スライドを完
成した。この分析スライドの面を観察すると、発色試薬
層に１．２あたり１ないし２個、光反射層に１１２あた
り１５ないし２０１１ｍのほぼ円形のむらを生じていた
。

［測定例１］ 血清アルブミン７％溶液にグルコースを５０Ｍｇ／ｄ１
、Ｌ００ｍｓ／ｄ１．２００ｍｇ／ｄ１．３００ｍｇ／
ｄｆそれぞれ添加した管理血清を用意した。実施例１お
よび比較例１で作成したグルコース分析スライドの展開
層上に、上記４種の管理血清を各１０μＩ点着し、３７
℃で６分インクベーション後、波長５４０ｎ＋ｍでＰＥ
Ｔ支持体側から反射測光により、分析スライドの発色光
学濃度を測定した。結果を第３表に示す。

（次ページへ） 第３表 第３表に示すように、実施例１のグルコース分析スライ
ドは比較例１と同じ分析結果を与えた。

１１０Ｏｘ／ｄｉのグルコースを含む管理血清を用いた
実験を１０回反復し、繰り返し再現性を評価した。

測定された反射光学濃度を上の測定で作成した検量線を
用いて、含有量に換算し、統計計算した。

（次ページへ） 第４表 第４表に示すように、本発明の実施例１の分析要素は、
比較例に比し標準偏差が小さく、再現性が優れていた。

出願人　　富士写真フィルム株式会社 手続を市−ＬＥ書（自発）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）水平浸透性支持体の上に少なくとも一つの水浸透性
   層を有し、該水浸透性層のうち少なくとも一つに液体中
   の特定成分に対し相互作用する組成物を含む、前記液体
   中の前記特定成分を検出するための乾式分析要素であっ
   て、前記組成物が下記一般式［Ｉ］で表されるロイコ色
   素を含み、該ロイコ色素が脂肪族高級アルコールを含む
   疎水性溶媒に溶解された溶液の親水性媒体中への分散物
   として、水浸透性層に含まれることを特徴とする乾式分
   析要素。 ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］ （一般式［Ｉ］において、Ｒ＾１は置換されてもよいア
   リール基を、Ｒ＾２は置換されてもよいアルキル基を、
   Ｒ＾３は置換されてもよいアリール基を表す）２）水平
   浸透性支持体の上に少なくとも２つの水浸透性層を有し
   、該水浸透性層のうち少なくとも一つに前記ロイコ色素
   を含む特許請求の範囲１）の乾式分析要素。 ３）水平浸透性支持体の上に少なくとも一つの水浸透性
   層を有し、該水浸透性層のうち少なくとも一つに液体中
   の特定成分に対し相互作用する組成物を含む、液体中の
   特定成分を検出するための乾式分析要素の製造方法であ
   って、下記一般式［II］で表されるロイコ色素および脂
   肪族高級アルコールが疎水性溶媒に溶解された溶液を、
   親水性媒体中に分散し、該分散物を水浸透性層に含有さ
   せることを特徴とする乾式分析要素の製造方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼［II］ （一般式［II］において、Ｒ＾４は置換されてもよいア
   リール基を、Ｒ＾５は置換されてもよいアリール基また
   は置換されてもよいアルキル基を、Ｒ＾６は置換されて
   もよいアリール基を表す、） ４）ロイコ色素を、脂肪族高級アルコールを含む疎水性
   溶媒に溶解し、該溶液を親水性媒体中に分散することを
   特徴とする特許請求の範囲３）の製造方法。 ５）ロイコ色素を疎水性溶媒に溶解し、脂肪族高級アル
   コールを添加した溶液を、親水性媒体中に分散すること
   を特徴とする特許請求の範囲３）の製造方法。