JPS5954962A - 多層分析材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は多）−分析材料に関し、特に液体試料中の過酸
化水素の１を実施、す本賜金、または特定　１゜の成分
をオキシダーゼ酵素反応系に導入し生成した過酸化水素
の定量により液体試料中の特定の成分の定量を実施する
場合に有効なペルオキシダーゼを含む過酸化水素検出皇
芭指系薬系を含む多層・９１材料ｔｖｚ’ｓ、ｖ７す６
□青０下・９・、：、、・′ｔａｔｙｉ５酵素をＦ″“
・華隼ヤ質又“そ０反応生成物を、酸化すると同時に生
、成されるＨ２Ｏ２を適当な手段に半す定、ｉ′σする
定量性は、近年、ますます重要になってきて諭る。そ９
理、中ははルオキンダーゼを用いて色素の生成反応に導
き、比色的にＨ２０□を定量する方法をはじめとして、
電極反応などの手段によりＨ２０□を定量する方法など
Ｈ２０□の定−廿は確実に実施できるからである。

このような原理に基づく、比色定量法としては１、・１
．トラ、イングー（Ｐ、Ｔｒｉｎｄｅｒ）が導入した試
薬系：１　　　　　　　・ を用いる方法（「Ａｎｎ、　ＣＩ　ｉｎ、　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ。ＪＪ。

′□゛°□・）・〆為７（ｌ！７ｉ、り））がよく知ら
れている。

、この方法は、：オキシダーゼ酵素によって生成する、
〆■■２０□にペルオキシダーゼを泗用させ、′ｌ−ア
ミノアンチピリン（！ｆ、たはその、類縁体）とフェノ
ール類（またはナフトール類）との酸化カップリング反
応を起させ、生成した色素を定量するものであ６・″−
０反応系０利点は・１″′夕］−で酵素０種類を変えて
も同じ検出系を利用することができる点にあり、広り１
．各、種のせ析項、−への応用が検討されている。これ
らのうち、、臨本化学検査上特に重要なものは、グルコ
ースオキシダ「ゼ、・コレステロ←ルオキシグ、−ゼー
　ウ、リカーゼ、グリセロールオギ゛シダーゼ、フオ久
う牙グルコースオキシダーゼなどである。　　　。

これらのオキシダーゼ酵素と生成するＨ２Ｏ２の検出系
とを一体型の多層分析フィルムや、濾紙片等への含浸ス
）　ＩＪツブスの形体とした臨床検査用分析材料も広く
実用化されている。

、、これらの分析材料は、被検物ノ呵の竺串に直接、関
与する試藁類を含有する組成物が、支持体となるＰ紙μ
ｓ物、、や、フ４　ノｂ、ム上の支紳体（１，含浸ある
いは塗布さ、れ、た型体をして吟る。。　　。

□、　　　１　　、、：・ 一体型の多層分析材料（フィルム）は種、、々の構成、
盆、！ており、必要に応：じて、各種、の機能、層が、
積１−され、、た形で組み込まれて−る。これらの機能
□ 層として公知のものとし、では、液体、、試料の均一展
開の目的とした展開ｔ―（、特公昭！　ｊ、−２／、Ａ
　７７、特開Ｆｌ！よｊ−／Ａグ３ｊ６）、探射測定の
白色赦乱面及び５．上１−にある有色成分と生盛された
検出用、、、色素、とを光学的に隔離する為の芥、遮蔽
層（特公昭ｊ３−コ１６７７、特開昭、ｊ／−グ、Ｏ／
、、り１５特開昭ｊｔ−，２７４（λｇ、特開昭、ｔ　
ｊ　＝　、２ぶグＪり、特開昭１３−／Ａ４ｔ３ｊｔ等
）、物質の選択的な拡散を目的としたパ、リヤ一層（￥
ｊ開昭１２−３．１１　ｊ、ｊ　）または液体遮断層、
（特願昭ｊ４．−７７Ａ、２７Ｆ、：５％部昭ｊ　、、
７．７／　、７．　Ａ　、、２７．、ｊ）、生成色素の
媒染による効率的な検出を目的と：した検出層（特開昭
ｊ／−弘０．　、／　Ｐ、／　、　、ｔ￥ｊ開、昭！３
−７・３１ｊ− θざり）、生成色素の他層への移動の防止を目的とした
マイグレー、ジョン防止層（特開昭！弘−コタフｏｏ　
）、層間の接着性改良を泪的とした接着層（特開昭、！
よ−１４’／−３夕ｔ・等）などがある。

これらの多層分析フィルムの試薬層にグルコ、−スオキ
シダニゼまたはコレステロールニス、テラーゼおよびコ
レステ、ロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、≠−
アミノアンチピリンおよび／、７７ジヒドロキシナフタ
レンを含むＨ２Ｏ２検出呈色試薬組成物を用いた。グル
コース定量用またはコレステロール、定量用多層分析フ
ィルムにおいて、検量線の傾き（ｒ）が比較的小さく、
グルコースま斥はコレ、ステロールの含有量が多い高濃
度域においてγ、が小さく、結果として定量精度が不十
分でかつ測牟範囲が不十分という問題があった。。、本
発明者らはこの問題点を解決するために鋭意研究を続け
たところ、意外にも、湿式の（水溶液系で実施される）
グルコースまたはコレステロールの定量に一発牟光学濃
度が不足で低感度という理由で用いられなかった水に対
す、る溶解度が、グーアミノｌ− アンチピリンよりも小さいｔ−アミノアンチピリン誘導
体およびグーアミノアンチピリン類似のグーアミノ−３
−ピラゾリン−！−オンの／、、２゜３−トリ置換体が
乾式の多層分析フィルムの試薬層に用いた場合に前述の
問題点が解消されることを見出し本発明に到達した。

本発明の目的はペルオキシダーゼを含むＨ２Ｏ２検出呈
色試薬組成物を含む試薬層を有する多層分析材料におい
て、検量線の傾き（ｒ）が犬きく、被検成分の高濃度領
域にち・いてもｒが大きく維持され、測定範囲が拡大さ
れた高感度かつ定量精度がすぐれた多層分析材料を提供
することである。

本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオキシダー
ゼを含むＨ２Ｏ２検出呈色試薬組成物を含む試薬層を有
する多層分析材料において、検悩°線のｒが大きく、被
検成分の高濃度領域においてもｒが大きく維持され、測
定範囲が拡大された高感度でかつ定量精度がすぐれた多
層分析材料を掠供することである。

本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオキシダー
ゼを含むＨ２０□検出呈色試薬組成物を含む試薬層を有
する多層分析材料において、検量線のγが大きく、被検
成分の高濃度減圧おいてもγが大きく維持され、測定範
囲が拡大された高感度で定量精度がすぐれており、かつ
短時間に測定可能な多層分析材料を提供することである
。

本発明の他の目的はグルコースオキシダーゼおよびはル
オキシダーゼを含むＨ２Ｏ２検出呈色試薬組成物を含む
試薬層を有するグルコース定量用多層分析材料において
、検量線のγが大きく、グルコース含有量の多い高濃度
域においてもγが大きく維持され、測定範囲が拡大され
た高感度で定量精度がすぐれており、かつ短時間で測定
可能なグルコース定量用多層分析材料を提供することで
ある。

本発明は、（１）水不浸透性光透過性支持体の上に、少
なくともはルオキシダーゼ、およびイルオキシダーゼと
過酸化水素の存在下で検出可能な変化を生じうる色原体
とカプラーの組合せを含む過酸化水素検出用呈色指示薬
組成物を含む試薬Ｉ＠、ならびに多孔性展開）脅の二つ
の層を少なくとも有し、この順に積層されてなる多を一
分析材料において、前記色原体が、ｚ、ｔ’Ｃにおいて
水に対する溶解度がグーアミノ−２，３−ジメチル−／
−フェニル−３−ピラゾリン−よ−オンの溶解度より小
さいグーアミノ−３−ピラゾリン−ｊ−オンの／ｌλ、
３−トリ置換体であることを％徴とする多１―分析材料
であり、その主要な実施態様は、＋２）　　前記カプラ
ーがペルオキシダーゼの共存下に前記弘−アミノー３−
ピラゾリン−！−オンのｌ、λ、３−トリ置換体と酸化
的カプリング反応により色素を形成しうる化合物である
（１）に記載の多ｌ−分析材料。

（３）前記試薬層にはルオキ７ダーゼとともに前記弘−
アミノー３−ピラゾリン−ｊ−オンのｌ。

コ、３−トリ置換体および前記カプラーが含有されてい
る＋１）または（２）に記載の多１−分析材料。

（４）前記試薬層または他のいずれか一つの層にオキシ
ダーゼが含有されている（１）ないしく３）に記載の多
層分析材料。

一ター ＋５１　　前記オキシダーゼがグリコレートオキシダー
ゼ、マレートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、
ヘキソースオキシクーゼ、コレステロールオキシダーゼ
、Ｌ−グルコノラクトンオキシタ”−ゼ、ガラクトース
オキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、ピルベートオ
キシダーゼ、ウリカーゼ、アスコルベートオキシダーゼ
、ラクテートオキシダーゼ、グリシンオキシダーゼ、グ
リセロールオキシダーゼからなる群から選ばれた１種で
ある（４）に記載の多層分析材料。

（６）前記オキシダーゼがグルコースオキシダーゼであ
る（４）に記載の多層分析材料。

（７）前記オキシダーゼがコレステロールオキシダーゼ
である（４）に記載の多層分析材料である。

本発明の多層分析材料における光透過性水不浸透性支持
体は波長的ｓｏｏ１１ｍから約りＯＯｎｍの範囲の少な
くともある範囲の波長領域の電磁波（紫外線、近紫外線
、可視光、または近赤外線）を約ａｏ％以上、好ましく
は約Ｘｔ％以上透過させることができ、実質的に水をそ
の内部に浸透さ１０− せることかなく、かつ文の表面に設けられる後述の試薬
層または下、塗層に、含有されるバインダーポリマーま
たは他の成分と実質的に化学反応を生じさせ柔い素材か
らなる。、前述の規準にあうかぎり支持体として用いる
ことができる素材は何でもよい。支持体としては、ポリ
エチレンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカル
ボネート、ポリメチルメタクリレート、ポリスチレン、
セルロースエそチル（例、セルロースジアセテート、セ
ルローストリアセテート、セルロースアセテートプロピ
ネート）などのポリマーからなる透明シートまたはフ、
イルムや透明ガラス板などで厚さ約ｊ・２μ慴から約コ
ｍｍ、好捷しくけ約７０μ密から約Ｏ０，ｔｍｍの範囲
のものを用いることができる。

支持体の表面には試薬層（または他の機能層）を支持、
体に一体に接着す、ることを容易にする目的で公知の下
塗層を設けるか、あるいは支持体の表面を公知の化学的
処理、（例、酸処理、アルカリ処理）または物理化学的
処理（例、コロナ放電処理、グロー放電処理、紫外線照
射処理、火陥処理）を施すことができる。

本発明の多１−分析材料に用いられる少なくともにルオ
キシダーゼを含む試薬層とは少なくともペルオキシダー
ゼを含む過酸化水素検出用呈色指示薬組成物（以下、Ｈ
２０□呈色試薬という。）を含む試薬組成物が親水性バ
インダーポリマーのマトリクスの中に分散または溶解さ
れてなる試薬層である。

Ｈ２０□１色試薬はペルオキシダーゼ、およヒ啄ルオキ
シダーゼと過酸化水素の存在下で検出可能な色変化（一
般に発色または色相の変化）を生じうる色原体とカプラ
ーの組み合せを含む呈色指示薬組成物である。

本発明においてＨ２０□呈色試薬に用いることができる
色原体は１．２！０′Ｃにおいて水に対する溶解度が≠
−アミノー２．３−ジメチル−７−フェニル−３−ピラ
ゾリン１−！−オン（≠−アミノアンチピリン）（遊離
アミン体・で）の溶解度より小さいｌ−アミノ−３−ピ
ラゾリン−よ−オンのｌ。

コ＊ｉ−ト’）置換体（以下、トリ置換−μｍアミノ−
３−ピラゾリン−よ−オンという。）（遊離アミン体で
）である。具体的には、Ｊｊ’Ｃの冷水（蒸留水程度の
精製水）１０−に対する遊離アミン体の溶解量が約ｚｇ
以下、好ましくはＯ，コｇ以下のトリ置換−グーアミノ
ー３−ピラゾリンーｊ−オンを用いることができる。前
述の水に対する溶解度を満す化合物として≠−アミノア
ンチビリイの分子量（２ｏｉ、Ｊ）より大きい分子量の
トリ置換−≠−アミノー３−ピラゾリンーｊ−オンを選
択することが！き、多くの場合、ｌ−アミノアンチピリ
ンの分子量より大き、い分子量のトリ置換−≠−アミノ
ー３−ピラゾリンーよ一オンが好ましい結果を与える。

本発明に用いることができるトリ置換−≠−アミノー、
３−ピラゾリン−よ−オ、ンとして次の一般式〔１〕か
ら〔４〕の化合物がある。（ピラゾリン核に、付けた数
字は位置畢号を示す。）　７３一 原子、臭素原子、沃紫原子　）を、ｎは□１５コまたは
３を表わす。ｎが２″！ｆたは３の場合、Ｘは同じハロ
ゲン原子でも異がるハロゲン原子でもよい。Ｘの位置は
いずれでもよ、い。ＲおよびＲ３はそれぞれアルギル基
またはフ王ニル基を表：わし、両者は同じでも異なって
もよい。

−ｌ　グー 一般式〔２〕においてＲ１は水素原子、低級アルキル基
またはアルコキシ基を表わし、その位置はいずれでもよ
い。Ｒ２およびＲ３はそれぞれアルキル基またはフェニ
ル基を表わし、両者は同じでも異なってもよい。ただし
、Ｒが水素原子の場合にはＲとＲがともにメチル基の組
合せは除く。

一般式〔３〕において、Ｌはメチレン基またはエチレン
基を、ＲおよびＲはそれぞれアルキル基またはフェニル
基を表わし、両者は同じでも異なってもよい。

　１１ 一般式〔４〕においてＲ１１はアルキル基を表わす。Ｒ
およびＲ３はそれぞれアルキル基またはフェニル基を表
わし、両者は同じでも異なってもよい。Ｒ１１、Ｒ２、
Ｒ３の炭素原子数の合計は２以上である。Ｒ２とＲ３が
アルキル基の場合、Ｒ１１、Ｒ”、Ｒ３は三者が同じ、
そのうち王者が同じ、および王者が異なる組合せのいず
れでもよい。

一般式〔１〕で表わされるトリ置換−μｍアミノ−３−
ピラゾリン−！−オンにおける／−位のハロゲノ置換フ
ェニル基の例として、λ−クロロフェニル基、３−クロ
ロフェニル基、≠−クロロフェニル＆、２１ｔ−）クロ
ロフェニル基、３ｅ４’−ジクロロフェニル基、３．ｊ
−ジクロロフェニル基、コ、４Ｚ、ｊ−トリクロロフェ
ニル基、ｔｔ−ブロモフェニル基、ｌ−ヨードフェニル
基なトラあげることができる。

一般式し２〕において　Ｒ１が低級アルキル基の場合、
炭素原子数１ないし５の直鎖状または分岐状のアルキル
基を表わし、その具体例としてメチル基、エチル基、プ
ロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソアミル基な
どがある。Ｒが低級アルコキシ基の場合、そのアルキル
基部分は炭素原子数１ないし５の直鎖状または分岐状の
アルキル基を表わし、低級アルコキシ基の具体例として
メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、
イソプロポキン基などがある。Ｒ１の結合位置は弘−位
が好ましい。好ましいＲ１−置換フェニル基の具体例と
してグーメチルフェニル基、≠−エチルフェニル基、弘
−メトキシフェニル基、４７−ニトキシフエニル基など
をあげることができる。

一般式［１］ないし〔５〕において、Ｒ２がアルキル基
の場合、炭素原子数１ないし１８の直鎖状または分岐状
アルキルを表わし、その具体例としてメチル基、エチル
基、プロピル基、ブチル基、ｌ　７− はメチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、ドデ
シル基、トリデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル
基、イソプロピル基、イソブチル基、イソアミル基など
をあげることができる。Ｒがアルキル基の場合、炭素原
子数１ないし１８の直鎖状または分岐状アルキル基、ま
たは炭素原子数３ないし１８のシクロアルキル基を表わ
し、その具体例と１−で、前述のＲ２の具体例としてあ
げたアルキル基のほかに、シクロプロピル基、シクロは
メチル基、シクロヘキシル基、シクロヘキシルメチル基
、λ−シクロヘキシルエチル基、ａ７％チルシクロヘキ
シル基、クーエチルシクロヘキシル基がある。

一般式〔４〕において、Ｒ１１は炭素原子数１ない１７
１８の直鎖状または分岐状アルキル基を表わ１−１その
具体例として前述のＲの具体例としてあげたアルキル基
がある。

一般式〔３〕において、Ｌとして（はメチレン基が好ま
しい。

一般式〔１〕ないし〔４〕で表わされるトリ置−／　ｒ
− 換−グーアミノー３−ピラゾリン−よ一オンはいずれも
そのグー位のアミノ基が酸付加塩となったｅ−７ンモニ
オー３−ビライリンーｊ−オンヲモ包含するものであっ
て、酸付加□塩な慢・晟する酸の例として塩化水素酸、
臭化水素酸、沃化水素酸、硝酸、渦塩素酸、硫酸などの
無機酸、蟻酸１．酢酸、ゾロピオン酸、蓚酸、グルタル
酸５．３．．４−ジメチルグルタル酸、りんご帖、酒石
酸５．ｐ、−トルエンスルホン酸４どΩ有機酸をあげる
ことができる。

好ましい酸付加塩の例として塩１ヒ水累酸ｔ」加塩をあ
げることがアきる− ７般４［１，：ｌない！　（４，、］で表わされるトリ
置換−クーアミノー３−ピラゾリン−逃−オくまたはそ
れらの酸付加塩のうちで好ましり化合物はｌ−位、ツー
位、または３７位のいずれ、かの位置に少なくとも７個
のベンゼン核を有する。置換基（フェニル基、置換フェ
ニル基またはヂンどル基）を有する化合物である。

一般昏ｃｔ〕ないし〔４〕で表わされるトリ置換−７−
アミノ−３−ピ２ゾリン＝ｊ−オンの具体例、を第１表
に今、げる。、、これらの化合物のうちでは化合物（１
）かＣ？αＵでのｌり種の化合物およびそれシ、の酸付
加塩が好、ましく、化金物（ｑ）、（７）、α槌および
それらのモノ塩酸塩が最も好ましい。

本発明においてＨ２０□呈色試薬に用いることができる
カプラーははルオキシダーゼの共存下に色原体と酸化的
カプリング反応にょシ色素を形成しうる化合物である。

カプラーと［２て特開昭弘ターＪｉ０９りｌ、特開昭１
０−／３７／りλ、ｒｃｌ　Ｉｎ１ｃａｌ　Ｃｈｅｒｎ
ｉｓｔｒｙＪ　、２　ｆ−（８）、　１１３！−ｔｉｔ
ｘ２（ｌＰ７ｒ）、Ｃ，Ｅ、に、Ｍｅｅｓ。

Ｔ−Ｈ，Ｊａｍｅ　Ｂ編１−Ｔｈｅ　Ｔｈｅｏｒｙ　ｏ
ｆ　ｔｈｅＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃ　Ｐｒｏｃｅｓｓ
ＪＴｈｆｒｄ　Ｅｄｉｔ′ｉｏｎ（Ｍａｃｍｉｌｌａｎ
　Ｃｏ、、／２４ｆ年発行）３１７　′−３２６ページ
などに記載のフェノール、ナフトール、およびハロゲン
原子（塩素原子、臭素原子なト）、アルキル基、アルコ
キシ基、フェニル基、フェノキシ基、ニトロ基、または
ヒドロキシ基ヲ有するフェノール誘導体およびナフトー
ル誘導体、前記の「Ｔｈｅ　Ｔｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ｔｈ
ｅ　ＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃＰｒｏｃｅｓｓ　Ｊ　Ｔ
ｈ１ｒｄ　Ｅｄｉ、ｔｉｏｎ　３　ｆ　７−　！りｔば
一ジ、特開昭タフ−４１１ｔ！Ｊなどに記載のパラスト
基を有するフェノール誘導体およびナフトール誘導体、
特開昭ゲタ−１０９りｌに記載のアルキル基を有するヒ
ドロキ・シキノリン類および他の置換基をも□たないヒ
ドロキ多キノリン類、前記の［Ｔｈｅ　Ｔｈｃ！ｏｒｙ
　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃ　Ｐｒｏｃ
ｅｓｓＪＴｈｉｒｃｌ：Ｅｄ：１ｔｉｏｎ、”Ｊ　ｒ７
−３２．ｉどに記載：の活性メチジし基金：有鎖状化合
−お□よび活性メチレン基含有環状イヒ谷ｉなどがある
。

これらのカプラーのうちで本発明に好ましい力□プラー
は、一般式〔６〕で表わされるフェノール表わされるす
７トールｔたはナフトール誘導体である。

□　一般式〔６〕においてＲ６２ないしＨ６６はそれぞ
れ水素原子、ヒドロキシル基、アルキル基、アルコキシ
基、フェニル基、ヘンシル基、フェネチル基、ニトロ基
またはハロゲン原子（塩素原子、臭素原子または沃素原
子）を表わし、ＲないしＲ６６のうち少なくとも１個は
水素原子で□あり、残余の置換基はいかなる組合せでも
よい。　　　　　□一般式〔７〕においてＲ７１ないし
Ｒ７８はそれぞれ水素原子、ヒドロキシル基、アルキル
基、アルコキシ基、フェニル基、ベンジル基、フェネチ
ル基、ニトロ基またはハロゲン原子（塩素−子、臭素原
子、または沃素原子）を表わし、Ｒ７１ないり、　Ｒ７
８のうち少なくとも１個はヒドロキシル基、少なくとも
グ個は水素原子であり、残余の置換基はいかなる組合せ
でもよい。

一般式〔６〕におけるＲ６２ないしＲ６６、一般式〔７
〕におけるＲ７１ないしＲ７８がアルキル基の場合、そ
の例として炭素原子数１ないし１８の直鎖状または分岐
状アルキル基、または炭素原子−一ター 数３なりし１８のシクロアルキル基があり、その具体例
としてメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、は
メチル基、ヘキシル基、インブーピル基、イソブチル基
、イソアミル基、シクロプロ：　！　％、　ニクロはメ
チル基、シクロヘキシル基表２ ＲないＬＲ，ＲないしＲがアルコ キシ基の場合、そめ例として炭素原子数１ないし　　　
□ｘｓｉ直鎖状または分岐状アルキル基、または炭素原
子数３ないし１８シクロアルキル基を有スるアルコキシ
ル基があシ、その具体例としてメトキシ基Ｊエトキシ基
、プロポキシ基、ブトキシ漏、はンチルオキシ基、イソ
プロピル基、イソアミル基、イソアミル基、シクロプロ
ピルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロへキシ
ルオキシ基などをあげることができる。

一般式〔６〕で表わされるフェノールまたはフェノール
誘導体の具体例として第２表の化合物がある。

３０− 一般式〔７〕で表わされるナフトールまたはナフトール
誘導体の具体例として第３表の化合物がある。

３３− ３５３− これらの化合物のうちでは、ナフトール誘導体が好まし
く、ｉ、’ｙ−ジヒドロキシナフタレンおよび弘−メト
キシ−／−ナフトールが最も好ましい。

イルオキシダーゼとして特公昭ｊ４−ｕｊＪＰり、特公
昭１７−ｊｊ、２０等に開示の植物起源および動物起源
のペルオキシダーゼ（ＢＣ／、／ｉ。

７）、および特開昭５７−？？／？コ等に開示の微生物
起源のペルオキシダーゼ（ＥＣ／、／／。

７）のうちから適宜に７種または、２種以上を組合せて
用いることができる。

植物起源のペルオキシダーゼの例として、西洋わさび、
じゃがいも、いちじく樹液、かぶ、だいこんから抽出さ
れたはルオキシダーゼ全、動物起源のペルオキシダーゼ
の例として、牛乳からＭ出されたラクトペルオキシダー
ゼ、白血球から抽出さｎ７１ベルドペルオキシダーゼを
、微生物起源のペルオキシダーゼとしてＡｌｔｅｒｎａ
ｒｉａ　　属、Ｃｏｃｈ　Ｉ　ｉ　ｏｂｏ　ｌ　ｕｓ属
、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ　属、Ｐｅ１ｌｉｃｕｌａｒｉ
ａ属に属し非特異的ベルオギシー３　を− ダーゼ生産能ヲ有する微生物起源のベルオキシダ＝イヲ
、・それぞれ潰げることができる。。

その他に特公昭！ｔ−≠ｊｊｒＰり、特公昭ｊ７〒！１
．２０等に開示のチオシアン酸鉄、タンニン酸鉄、フェ
ロシアン化鉄（いス汎も鉄＜＋−１）化合物）、クロム
硫酸カリウム、沃化ナトリウム、沃化カリウム、モリブ
デン酸アンモニウム、モリブデン酸カリウム等のペルオ
キシダーゼ活性′に’ｆｉｆする無機化付物を用いるこ
ともできる。

これらのうちで植物起源または微生物起源の非特異的ペ
ルオキシダーゼが好ましい。

本発明の多層分析材料においては、少なくともペルオキ
シダーゼを含む試薬Ｉ−はペルオキシダーゼ、お工び色
原体とカプラーの組合せが親水性ポリマーバインダーの
中に溶解１ｙｒ−は分散されてなるものである。バイン
ダーとして用いることができる親水性ポリマーはペルオ
キシダーゼ、色原体およびカプラーと実質的に相互作用
を生ずることがなく、被膜形成能を有するものであｎは
何でもよい。親水性ポリマーの例としてゼラチン、酸処
３７− 環ゼラチン、脱イオン化ゼ□ラチシ、ゼレチシ誘導体（
例、アシル化ゼラチン）、ボ亀ビニ１ルナルコール、ポ
リビニルピロリド□ン、ポリビニルベンゼンスルホン酸
ナトリウ入、カルボキシメチルセルロース、ナトリウム
カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ王チルセルｄ
−ス、メチルセルロース、プルランＪプルラン誘導□体
□昶すナクリルナミ□ド、アクリルアミドコポリマ」（
例、デクリルアミドー’Ｎ−ビニルピロリドンコポリマ
□二、アクカ元アミドーコーヒドロキシエチ寡アクリル
アミトコ蒲すマー）、′ヲおけることができる。試薬層
□の厚さく：乾燥厚さ）は約！μｍ□から約／υ０′＃
臀、好ましくは約７０μｍから杓！θμ′ｍの範囲であ
名。

試薬層におけるベル□オキシダーゼのｔｏｗｎは約ｊ千
Ｕ／’ｍ・２から約ｌθ万ＴＪ／’ｍ’２、好ましく（
グ約１万１７／ｍ’２から約を万Ｕ’／ｍ’２の範囲で
゛ある。

色原体ｔカプラーの組付せの含′有量は液体試料に含有
される七予想さｎる被□検成分の最大誉有１に対応する
化学量論による＊またはそれＬす多鈷量が必要であり、
この量は当業者が実□験にＬシ決め衣ことができる。　
　　　″　　□ ・被検物質が過酸化尿素＋なく、□化学反応に上り過酸
化水氷を＋ｍする反応基に血みとむことができる場合に
は、被検物質か酸氷と相互作用し七過酸化水素を生成す
名ための触媒としてオキシ漬゛−ゼｔ□試薬Ｌ―ｔたは
他６層に含有させておくこ左がでする。オキシダーゼは
被検物質に応じて画数され・る必要がちゐ。オキシダニ
ゼとしてｔ″ｉ１種のオキシダーセラ”用いられること
はもちろん、−一の連続反応を進行右ぜる複数種の酵素
の組付せ（その□中’（７）／種はオキシダーゼである
。□）番用いること感できる。さらに必要人場合にはオ
キシダニゼ□とと甑にそのオキシダーゼの補因子お上び
／４’ｒｃは補酵素を組合せて用い為ことはいうまでも
ない。

オキシダーゼ（必要な場合には補酵素もと４”Ｋ＋はペ
ルオキシダーゼ、おＬθ色原体とカプラーの組合せを含
む試薬層に含有させ為が、あるａ−試薬層よりも上側（
試薬層を基準にして支持体から遠い側）の層に含有させ
るか、さらにははルミキジダーゼ、および色原体とガプ
ラーの組付せ？含む試薬とそれ、Ｃシも上側の層（ｌ膚
または複数の鳩）の両方（まｋは合計３１以上）に含有
させることができる。ここで試薬層ニジ上側の胸という
表現には多孔性展開層をも含めることがぞき：る。

オキシターぜが触媒するｉ質の反応に癲酸□素の存在が
□必須であＪ１多層分析材料に゛お区ては□酸素は空気
中から展開層を経て他の層内へ拡□散す為ので、尤キシ
ダニゼ：が触媒する□酸化反応め効率的な□進行にと・
つては酸素□の項中べの拡散の′効率的な□達成を目的
とじた特□願昭！６−タ３ｔ３１Ｋ′開示□した、オキ
シダーゼ全ベルオキレダーゼ、お上び色原体とカプラー
め□組番せを含む□試薬層ｉシ正側の１層□、ことに多
孔性展開層まπは多孔性展開層に隣接する層に含有させ
た構成の多層分析材料とすることカ好マしい。またコレ
ステ蚊−ルエ□ズテルの、ｃケに親油性物□質が被検物
質でおる場合にｎ、□親水性バインダ□−ポリ壕−ゲ有
ｆ′る層へは□被接物質が浸透しに□くいので、ことに
多孔性展關層メ丙□部にオキシダーゼ會含有させること
が好ましい計１本□発明の多層分析材料に含Ｍさせるこ
と：′ができ４Ａ　Ｏ− るオキシダーゼとして酸素（０２）ｋアクセ“シタとす
る□オキシタ」セがあげられ、そあ例として次の酵素を
あげることができる。０内はＥＣ”Ｎ’ｕｍｂ’ｅｒを
表わす。　　″　□ グリ□コレートオキシダーゼ　　　　（／、／、’Ｊ、
／）マレートオキシダーゼ　　　　　　（／、ｉ、’ｓ
、：ｔ）”　グルコース膚廠シダーゼ　　　　　（ｉ、
ｉ、３．ａ）ヘキソースオキシダーゼ　　　’　　　（
／、／、Ｊ、ｒ）コ゛し東テロ゛−ルオキシダーゼ　　
　（／、／、Ｊ、ｔ）了り−ルアルゴ□ニルオキシダー
ゼ　（／、／、３．７）□Ｌ：二グルコノラ□クトンオ
キシダー−ｙ”（ｔ　、／’、　３．　ｒ　）ガラク峯
−スオキシダーゼ　　　　（八／’　、　Ｊ　、り）ア
ルコ−元オキシダーゼ　　　　　（へ／、云／Ｊ）ｒ、
−一−ヒドロギシ酸オキレダーゼ（、ｌ、ｉ、ｊ、ｌｓ
）アルデヒドオキシダーゼ　　　　　（／、２．Ｊ、／
）キサゾチンオキシダ」ゼ□　　　　（／、２□ｆＪ、
、２）ビルベニトオキレダーゼ　　　　　（／　０．２
二３’、ｓ）ビルベ」トオキジダービ（ＣｏＡアセチル
化）　　’（ｉ、ａ、’ｓ、旬ラトうテロールオギシダ
ーゼ　　　（／、３．３’、２）Ｄ−アスノにル亨−ト
オキシダーセ（／、弘、Ｊ、／）−グｌ− Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ　　　　（／、１．Ｊ、Ｊ）
Ｄ−アざノ翠オキシダニゼ　　　　（ハル、３．３）ア
ミ、ンオキシダーゼ（フラビイ含有ン（ハル、３．リピ
リドキサミンホスフエートオキシダニゼ　　　（／、４
Ａ。３．りアミンオキシダーゼ（銅含有）　　　＜／、
μ、ｊ、６）Ｄ−グルタメートオキシダーゼ、　　（ハ
ル、ｊ、７）サルコシンオキシダーゼ　　　　　（／、
Ｊ−，３，／）Ｎ−、メチルアミノ酸オキシ〆−ゼ　（
八！、Ｊ、２）Ｎ６−メチル−Ｌ−リシンオキシダーゼ
（八！Ｊ、４Ａ）ウリカーゼ（ウレートオキシダ、−ゼ
）　　（／、７．、！４ｊ）スルフィトオキシダーゼ　
　　　　＜ｉ、ｒ、、ｙ。／）アスコルベートオキシダ
ーゼ　　　＜ｉ、ｉｏ、３．ｊ）３−ヒドロキシアント
ラニレートオキシタ―ゼ　（／、１０．Ｊ、Ｊ’）アル
ギニンコーモノオキシゲナーセ（／、／Ｊ、／２．／）
リシンコーモノオキシゲナ下ゼ　　＜ｉ、ｉ、ｔ、ｉ４
．コ）トリプトファンコーモノオキシゲナーゼ（／　、
　ｉａ、ｉａ、３）ラクテートオキシダーゼ　、、、。

（ラクテートλ−モノオキシゲナーゼバ／、　／３，１
２．ＩＩ）ジメチルアニリ・ンモノオキシゲナーゼ　　
（ｔ、／ａ、／、３Ｊ）コレステロール７α−モノオキ
シゲナーゼ（／　、　／４ｔ、／Ｌ／７）Ｆｌａｖｏｐ
ｒｏｔｅｉｎ−１ｉｎｋｅｄｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｔ
ｅ　　　　　　　　　　　（／、／４に、／４Ｉ、１）
フェニルアラニンモノオキシゲナーゼ　（／、／４４．
／ｌ、／）クリセロールオキシグーゼ（東洋醸造から販
売ングリシンオキシダーゼ（化学大辞典第３巻（ｌり６
０年２月発行）に記載） オキシダーゼを含む複数種の酵素の組合せの例として以
下のものがある。

グリ＋ｔロールキナーゼ（２，７，／、３０）お工びＬ
−α−グリセロ燐酸オキシダーゼ（／。

１、タタ　３；！！友は特開昭１３−７２１タコ、特開
昭ｊ　、？−Ｊ　４Ｚ　Ｊ’　Ｐ　Ｊに開示）の組合せ
（％開昭ｓＪ−，２ｐｔり３に開示］ トリグリセリド加水分解活性をもつＩＪ／ξ−ゼ、クリ
セロールキナーゼ（Ｊ、７．／、ｔｏ）お工びＬ−α−
グリセロ燐酸オキシダーゼ（ｌ。

、／、タタ、ｊ：、まｙｃｌｄ＃開、昭３３−７コｒｙ
ａ、特開昭ｊ　ｊ−Ｊ　４ＡＩ　Ｐ　Ｊ４Ｃ開示）の組
合せ（％開ｌ１１８ｊ３−コ仏ｌり３に開示） エステラーゼ作用金もつりノ々−ゼ、プロテアーゼおよ
びコレステロールオキシダーゼ（／、／。

３．６）の組合せ（％開昭ｊＯ−／３７１５’、２に開
示） グルタミルピルベートトランスアミナーゼ（アラニンア
ミントランスフエラ、−ゼと同じ。コ。

ｊ、／、−２）およ−びピルベートオキシダーゼ（／、
コ、Ｊ、Ｊ）の組合せ（特願昭５６−２３６．３−に開
示） グルタミルオキサロアセテートトランスアミナーゼ（グ
ルタミン−オキソ酸アミントランスフェラーゼと同じ。

コ、ｔ、／　、／ｊ）、オキサロアセテートデカルボキ
シラーゼ（≠、／、／。

３ンお工びピルベートオキシダーゼ（／、ｊ。

３．３）の組合せ（特願昭ｊｓ−４３６３２に開示） こ些らのオキシダーゼのうちで、本発明の多層分析材料
において好ましいのは、グリコレートオキシダーゼ、マ
レートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキソ
ースオキシフ”−ゼ、コレステロールオキシダーゼ、Ｌ
−グ化コノラクトンオー弘　グー キシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、キサンチンオ
キシダーゼ、ピルベートオキシダーゼ、ウリカーゼ、ア
スコルベートオキシダーゼ、ラフチー峠オ、キシターゼ
、グリシンオキシダーゼ、クリセロールオキシダーゼな
ど、およびオキシダーゼを含む複数種の酵素の組合せと
して例示し罠組合−があげら乃る。

オキシダーゼの多ノー分析材料中における含有量は１．
生として液、体試料に含有さ、れる過酸化水素全生成す
る被検物質の予想される最大量とオキシダーゼお工びペ
ルオキシダーゼの活性、値の比により決めることができ
、、これは尚業者が実験にニジ決めることができるが、
おお工その含有量として約ｌ千Ｕ／ｍ”から約１０）５
Ｕ／ｍ２、好ましくは約３千Ｕ／ｍ２から約ｚ）５Ｕ／
ｍ２の範囲である。

オキシダーゼがグルコニスオキシダーゼ党場合には、そ
の含有量は約コ千Ｕ／ｍ２から約≠万Ｕ／Ｍ’！好まし
くは約弘千Ｕ／ｍ２から約コ万Ｕ／１ｎ２の範囲である
。

ペルオキシダーゼ、およびオキシダーゼはそ、れ−ＩＩ
Ｌ、ｔ− ぞれの活性が最大になる最適ｐＨ値があり、さらにはそ
れぞれの活性はイオン強度や近傍に共存する陽イオンや
陰イオンの種類による影響をもうける。従って多層分析
材料においては、第一にペルオキシダーゼを含む試薬層
、オキシダーゼを含む層、ま７ｃはペルオキシダーゼと
オキシダーゼをともに含む試層それぞれのｐＨ値全、□
ついで必要に応じてイオン強度や共存するイオン種など
の因子を最適に設定することが、工い分析結果、（定量
精度、くシかえし再現性などについて）を得るためには
きわめて重要で条る。かかる目的の為に多孔性展開層、
試薬層、光遮蔽層その他の機能層中に酸、アルカリ、塩
、緩衝剤、解離剤、界面活性剤などを含有させておくこ
とは本発明の実施に描って重要なことである。こｎら反
応条件設定の為の試薬類の種類、量などは、分析の目的
その他（工って大きく変化するので、目的に従って適宜
、選択する必要がある。

ペルオキシダーゼ、および色原体と力、プラー組合せケ
含む試薬層に酸、アルカリまたは緩衝剤を含有返せて過
酸化水素の存在下で検出可能な変化を起させるには、啄
ルオキシダニゼの最適１）　Ｈ値であるｐＨフ、Ｏを中
心にしてＩ）Ｈ約ｔ、Ｏから約２．０１好ましくは約１
．０から１．０の範囲のｐＨ値範囲の下で変化音生じさ
せることが好ましい□。　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　・オキシダーゼはその最適ｐＨｆｌｉ！ｆ
は酵素の種類により異なるが、例示すれば１．グルコー
スオキシダーゼ：ｐＨ約！６６；ヘキソースオキシダー
ゼ：ｐＨ約Ｊ、にコレステロールオキシダーゼ：ｐＨ約
ｊ、ｒ；ガラクトースオキシダーゼ；ｐＨ約７゜０＋プ
ルコニルオキシダーゼ：ｐＨ約７．ｊ＋、ウリカーゼ：
　ｐＨ７，、ｒ　Ｐ−ｒ　、！、７アスコルベ→トオキ
シダーゼ：ｐＨ約ｊ、ＡｉＬ−α−グリセ−燐酸オキシ
ダーゼ：ｐＨ７□、ｊ〜７．７である。・オキシダーゼ
？含む層はオキシダーゼの種類にエフそれぞれの最適ｐ
Ｈ値またはその近傍のｐ　Ｈ値範囲に調整することが好
ましい。ペルオキシダーゼの最適ｐＨ値と異なる最適ｐ
Ｊ（値をもっオキ・シダーゼはそれ故に別々の層に含有
させることが好ましい。例えばグルコースオキシダーゼ
を多孔性展開層または後述する接着層に含有させる場合
には、多孔性展開層まｍは接着層に使用条件下において
グルコースオキシダーゼの最適ｐＨｆｌ！であるｐＨｊ
、ｉＧを中心としてｐＨ３；　６からｐＨ７・６、好ま
しくＶｉｐＦＩ＆、ＯからｐＨ７，０（１）範囲に維持
することができる酸ま罠は緩衝剤を加えることができる
。　　　。

試薬層、他の層、または多孔性展開層に含有させること
ができる酸、アルカリまたは緩衝剤として脂肪族ヒドロ
キシカルボン酸（例、グリコール酸、乳酸、α−ヒドロ
キシ酪酸、：グリセリン酸、タルトロン酸、シんご酸、
酒石酸、くえん酸）、脂肪族ジカルボン酸（例、マロン
酸、こはく酸、グルタル酸、α−メチルグルタル酸、β
−メチルグをタル酸、！、３−ジメチルグをタル酸、α
。

α′−ジメチルグルタル酸）、脂肪族千ツカをボン酸（
例、酢酸、プロピオン酸、酪酸）、・、水酸化リチウム
、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、日本化学会編「
化学便覧、基礎編」　（東京、丸善−＜Ａ　１− ■、／りｔぶ年発行）／、？／、２−／３２０ページに
記載の緩衝剤（例、くえん酸水素カリウム−くえん酸、
燐酸二水素カリウムー燐酸水紫二ナトリウム）　、・、
　ｒ　Ｂｉｏ、ｃｈｅｍｉｓ　ｔ・ｆｙＪ、　ｊ　（，
２）、ｌＡ７″７−４７７（／′り６６〕のＮｏｒｍａ
ｎ　　Ｅ、Ｑ６ｉ＞ｄら著［Ｈｙｄｒｂｇｅｎ　　Ｉｏ
ｎ　Ｂｕｆｆｅｒｓ　　ｆｏｒ　ＩＪｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌＲｅｓｅａ？ｃｈ　Ｊ　Ｒ，Ｍ、’ＣｔＤａｗｓｏｎ
　ｅ’ｔ　ａｌｊＪ４１Ｄａｔ、ｅ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｃ
ｈｅｉｎｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｊ第−版、　（
Ｏｘｆｏｒｄ　ａｔ　ｔｈｅ　Ｃ］ａｒｅｎｄｏ６　Ｐ
ｒｅｓｓ、　　／り６り年発行）４４７４−ｊｃ＃ペー
ジ、ｆ”　Ａｎａｌｙｔ’ｉｃ、ａｌＢｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒ幻、△！ヱ、３００−ｊｌｏで／ｌｌ’０）等に
記載の緩衝剤（例、−一（Ｎ−キルホリノ）エタンスル
ホン酸、Ｎ−λ−ヒドロキシエチルピベラジンニＮ′−
コーヒドロキシプＯＡＲンーＪ−スルホン酸（Ｈｅｐｐ
ｓｏ）ナトリウム塩またはカリウム塩、Ｎ□−」−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ：’−Ｊ−プロノにンスル
ホン酸（Ｅｐｒｉｓ）ナトリウム塩ま罠はカリウムｆｆ
１）ｊＮ−［：）リス（ヒドロキシメチル）メチル〕＝
３−アミノプロパンスルホン酸（ＴａｐＪナトリウム塩
ま罠はカー弘タ− リウム塩−その他の緩衝剤（例、下、レイン酸モノナナ
トリウムまたはモノカリウム塩、Ｊ、、Ｊ−ジメチルグ
ルタル酸モノナトリウムまたにモノカリウム塩）、無機
酸（硫酸、燐酸）がある。これらのうちではくえん酸、
酒石酸、りんご酸、グルタル酸、α−メチルグルタル酸
、β−メチルグルタル酸、α、αＩ−ジメチルグルタル
酸、Ｊ、Ｊ−ジメチルグルタル酸、水酸化リチウム、Ｈ
ｅｐｐｓ。

Ｎａ塩またはに塩、Ｅｐｐｓ　Ｎａ　塩ｔｚはに塩、Ｔ
ａｐｓ　Ｎａ　塩またはに塩が好ましい。

試薬層、試薬層工ｐ上側の他の層または多孔性展開層の
いずｎか１層または複数の層には保恒剤として全血、血
漿ま７ｔは血清中に添加されているＮａＦＫよる測定値
の低下またはバラつきとして現れる干渉作用を除去する
目的で、Ｆｅイオンとの間に２５°Ｃにおける水ｉｏｏ
ｇに対する溶解度が０１−ｇ以下の水にＭ溶性の塩を形
成しうる陽イオンを含む化合物（離溶性Ｆ塩形成性化合
物）ｔ％願昭５７−／Ｊ１７！’０明細書の記載に従っ
て含有させることができる。陽イオンとしてはＭｇＭｇ
２■、Ｉ　Ｃ、２，＜Ｑ　、Ｅ　ａ２（Ｅｌなどがあり
、対陰イオンとしては蟻酸イオン、酢酸イオン、プロピ
オン酸イオンなどの低級脂肪族モノカルボン酸陰イオン
、マロン酸イオン、グルタル酸イオン、３゜Ｊ−ジメチ
ルグルタル酸イオンなどの低級脂肪族ジカルボン酸陰イ
オン、グリコール酸イオン、乳酸イオン、′りんご酸イ
オン、酒石酸イオン、くえん酸イオン、：ザリチル酸イ
オンなどのヒドロキシカルボン能隘イオン、塩素陰イオ
ン、臭素陰イオン々どめハロゲン陰イオン、硝酸イオン
誓燐酸イオン、硫酸イオン、アジド陰イオン（Ｎａｅ）
などがある。離溶性Ｆ塩形成性化合物の層中の含有量は
多層分析材料１７７１，２にっき０．Ｊｍｅｑから／ｅ
ｑ、好ましくはｏ　；Ｊｍｅｑから０．ｊｅｑの範囲で
ある。

試薬層、試薬層工９上側の他の層ま罠は多孔性展開層の
いずれか１層ま罠は複数の層には血中カタラーゼによる
発色光学濃度の減少、すなわち測定値の低下として現詐
る干渉作用を除去する主目的で、Ｊｊ’Ｃにおける水／
　００ｇに対する溶解度が７ｇ以上の水溶性モノカルボ
ン酸またはその塩を含有させることができる。

水溶性モノカルボン酸またはその塩としては脂肪族モノ
カルボン酸およびその塩、芳香族モノカルボン酸および
その垣、芳香族置換脂肪族モノカルボン酸およびその塩
のいず扛か１種ま罠は一種以上を組合せて用いることが
できる。脂肪族モノカルボン酸としては炭素原子数７乃
至ｊの直鎖または分岐状の飽和脂肪族モノカルボンがあ
げらｎｌその具体例として、蟻酸、酢酸、プロピオン酸
、酪酸、吉草酸、イソ吉草酸があけられる。脂肪族モノ
カルボン酸の塩としては炭素原子数ｌ乃至ｊの直錯また
は分岐状の飽和脂肪族モノカルボン酸のアルカリ金属塩
（例、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩）および
アンモニウム塩があケラれ、その具体例として、蟻酸、
酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、イソ酪酸、イン吉
草酸のそｎぞれリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩
お工びアンモニウム塩があげられる。

芳香族モノカルボン酸塩の具体例として安息香−６，２
− 酸リチウム、安息香酸す）ｉ　ＩＪウム、安息香酸カリ
ウム、安息香酸アンモニウムｓ”’トルイル酸ナトリウ
ム、０−トルイル酸カリウム、”　ｍ　’　トルイル酸
ナトリウム、ｐ−）ルイル酸ナトリウム、ｐ−トルイル
酸カリウム、ｐ＝−）ルイル酸アンモニ、。

ラムがあげられる。

芳香族置換脂肪族モノカルボン酸およびその塩の具体例
としてフェニル酢酸、フェニル酢酸ナトＩＪ　ラム、フ
ェニル酢酸カリウム、フェニル酢酸アンモニウムがあげ
られる。

これらの水溶性モノカルボン酸またはその塩で好ましい
化合物は酢酸、プロピオン酸、Ｓ酸ナトリウム、蟻酸カ
リラム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸アンモニ
ウム、プロピオン酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム
、プロピオン酸アンモニウムである。水溶性モノカルボ
ン酸またはその塩の層中の含有量は多層分析材料／、２
にっきｏ＝ｉｍｅｑから／ｅｑ、好ましくは・ｏ６．２
ｍｅｑから０　、ｊｅｑの範囲である。

本発明の多層分析材料にお・ける多孔性展開層ｊ３− （以下、□展鴎層というとどがある。）は分析材料の最
外面に位置しＣ＋＊わ□ぢ、“分析材料におい七試薬層
に関して支持体と反Ｍ’ａｒＢ最外市は位置する。）て
、被検体液が□点着される而ｔあ１、′キめ作用一点播
された被検体液が被検体を含んだまま液体の容量には無
関係に単位面積当り＃１ぼ二定容量の被検体液を試薬層
に供給す息機能を朱子こ左□である。この作用（展開作
□用）・に工り委なくともペルオキシダーゼを□含む試
薬層（以下、試薬層ということがある。ンに供給さｎ’
Ｍ”被ニ一体液の喀誉□、さらには被検体液に含まれる
被検体の合量は単荷面□積当りほぼ等しいととに′なシ
、を尼との作用が存在するゆえに、罷定量分□析に際し
て被検体液を正確に秤取しな□くても定量分析が実施で
合名とと錫童味す□る。省熱のととてあふが１被検体□
液を正確に秤取して定量分析を実施することを排薩する
ものでもないし、被検体液を正確に秤取することにエフ
定量の精度が高□まる場合がある。　　″本発明の分析
材料における多孔性展開層どして、特開昭ゲタ−ｒｉｔ
ｅｔ　（特公昭′□！３二、２′／ｌす７）、米国特爵
第３９Ｐコ／ｚ”’を舟に薗示きバている非線−等芳的
多孔性層・（例、シシブランクイルｉ二壕πはブラツレ
ユボリマ二層：：微示祿体ま：たは粒子を接瘤剤士励合
すふど左によら製造された球体ｔｋは粒子間め相崖納谷
空間にヱリ当方的多孔性が形成きれていも層）、特開昭
ｊ□：ｊ二φ□Ｏｔ！９に開宗含れて・いる微小球状台
−女が水に工す膨潤しない接着剤によす点接触状に接Ｎ
さ扛て形成されに三次元格手構造＠からなる連続空隙含
有等方的多孔性構造物層、″特開昭ｉ’　ｉ’　−ｉ　
ｉψ３７６に開示されプい・る“水洗された織物ま７ｃ
は親水化処理織物・からなる・繊維質異方性多□孔性展
面ｊ−１特開昭ｊクーロ）３ｊりに開宗慮れている物細
的活性化処理きれた表面を有す巻禮輸からなる繊維質異
方性多孔性展開層、ｍ願昭！゛に−ｉｐ：ｑｙ。

に幽示されていする合成ボリマニ繊維ノ瘤ルゾ會含む抄
造紙、□抄造Ｆ紙または不織１からなる繊維質異方性多
孔性展開層ケ用い込ととがｔき、かつこれら□の雇１層
はとこにあけに特許：明細□１１に一示の方法によシ“
設けるどとができる。を元特開昭ｕ９’−Ｊ−Ｊｌｒｌ
に開示されているごとく、二酸化チタン、酸化亜鉛、ｔ
たは硫酸バリウムの微粉末を含有するメンブラソフイル
ターまたはタラタレユボリマ一層は後述する光遮蔽層（
輻射線ブ占ツキジグ層、白色背景層または光反射層）を
かねる展開層どして本発明において用いるととがで囁る
。さらにカーボンブラッグ奮含有するメンブラソフイル
ターまπはプラッシュポリマ一層を後述する光遮蔽層？
かねる展開層として用いることができる。

被検体液が全血の場合、□・好せ・しい展開層とし１前
述の三次元格子構造物からなる連続空隙官有等方的多孔
性構造物層および前述の繊維質異方性多孔性展開層があ
げら扛る。　　′１・・Ｊ　、■・・・、・′：・本発
明の多Ｉ−分析材料におい叱は試薬層と展開層の間に水
および被検体透過性の光遮蔽ｒ＊　＜色遮蔽層、輻射線
ブロッキング層、・背景Ｎま、たけ光反射層ともいう。

）□を設けることができる。光遮蔽層は、罠とえは、赤
血球を含・む全血の如く、□被検体液が着色粒子を含む
場合に有用な眉である。即ち光遮蔽層□・め片側にある
着色粒予め一色はとの層に−よ　６− エらてきえぎられて反対側、すなわち透明支持体側から
は着色粒子の色は全く見見す、従うそ比色定ｉｋまたに
螢光測光足置に当づて“瘤色粒子が定量の妨害′ｒ′し
ない。：１艙１ｉ１層は、ニー化チセシ微粉末、□硫＠
ｌ　７’　！す″ｌｌＪｌｌ粉入、酸イｉ血鉛薇粉凍、
□アルは二☆ム微粉末ま是はガー諭ンブラックめ如き微
粉体を水おＬ′□び被検体透過性の親尿性□ポリ−ｒ−
ぶインダー中に分散した層で□、’！／ｌ’ｚから／’
　００μｍ１好まり、＜Ｋオμｍか・ら３’　Ｏ’　ｉ
ｔ　ｍメ’ｉＡ’ｌｌＡの庫ざがあυ、′被検体液およ
び一一体は通過しちるものである。光遮蔽層めポリ→−
バイシク゛ニーとしては試薬層に・用・田πのど同じ種
類の親米性ボがマーの中から適′＊□に選１択し′ｉ角
いることが＋きる。

光遮蔽層とじては元酸化チタン微粉末酸化亜鉛□微□粉
□硫酸バリウム゛微粉末まにはカーボンブラックな・ど
の光遮蔽能を・有する微粒子上官んだメンブラソフイル
ター（プラッシュポリマ」層）＝多ｍ質光遮蔽ｊ−どし
て用いること力菟できる。多孔質元通艙層は特軸□昭弘
り□−！’３１ｒ’ｌ（′特□公□昭よ３−コ／　Ａ　
７７　）’を罠ば特開昭ｊｒｔＡ−，２□９７０′：Ｏ
に開−、ｔ’？’− 示の方法にニジ設けることができる。

本発明の多層分析材料においては展開層を試薬層、光遮
蔽層、ま罠は必要にニジ設けられる他の層の上に接着し
積層して一体化する罠めの接着を強化する目的で接着層
を設けることができる。ことに展開層として多孔性のシ
ート状、フィルム状または膜状の素材を用いる場合には
接着層を設けることが好ましい。

接宥剤としては試薬層のバインダーとして用いらｎてい
る水お工び被検体透過性親水性ポリマーを用いることが
でき、この場合には接着層の親水性ポリマーが半乾きの
状態のとき、または親水性ポリマー奮水または界面活性
剤全含む水で湿潤させておいて、展開層として用いる多
孔性のシート状、フィルム状ま罠は膜状の素材を適当な
圧力？かけて接７ＩＩＪ＃Ｉに接層することができる。

接着層の厚さはｏ、Ｊ′μ７７Ｌから／　ｊ　Ａ　ｍ　
ｓ好ましくは０゜ｊμＴｒＬから５３ｍの範囲である。

本発明の多層分析材料には前記の諸層のほかに必要に応
じて、特開昭ｊ、ｚ−３４Ｌｒｅ、特願昭！４−／７６
２７μ、特願昭ｊｊ；−／７６２７１に開示のバイヤ一
層または液体遮断層、特開昭ｘｉ−４Ｌｏｉ９／、％開
−４Ｌｏｉ３１０１Ｙ等に開示の検出層または媒染層、
特開昭ｔ４Ａ−コタ７００に開示のマイグレーション阻
止層、特開昭！ｌ−コ４７り３（特公昭ｊ７−２１２７
７）、特開昭ｊ／−μ０／　９／等に開示の中間層、特
開昭ｊＪ−ｉｉｉｏｒｙ、特開昭ｊ７−４’　０６４Ａ
Ｐ、特開昭１７−１０６６０．％願昭！７−４／２３６
等に開示の蛋白質全通過させることができる親水性バイ
ンダーポリマーを用いた層、特開昭ｊｊ−ｔｚμりに開
示の試薬含有微粒子分散層、実開昭５７−μλ９ｊ／に
開示の一定面積の液体試料点着供給用ポーラス体（ノソ
ツチ）、％顧昭！６−タＪｔ３コに開示の酵素等の試薬
を含む定面積多孔性層を設けることができる。

本発明の多層分析材料はここまでの説明から明らかなと
おり、透明支持体の上に順にペルオキシダーゼを含む試
薬層および展開層が設けられ層構成を有するが、好まし
い実施態様として、透明支持体の上に順にペルオキシダ
ーゼを含む試薬層、光遮蔽層および展開層が設けられた
構成を有するもの、透明支持体の上に順に４ルオキシダ
ーゼ？含む試薬層、光遮蔽層、接着層および展開層が設
けらｆＬ、た構成を有するもの、透明支持体の上に順に
はルオキシダーゼを含む試薬層、オキシダーゼ全含む光
遮蔽層および展開層が設けられた構成を有するもの、透
明支持体の上に順にはルオキシダーゼを含む試薬層、光
遮蔽層、オキシダーゼ’１１む接着層、および展開層が
設けられた構成を有するもの、透明支持体の上に順にペ
ルオキシダーゼを含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼ
全台む接Ｍ層、およびオキシダーゼ全含む展開層が設け
らｆｌＪ構成？有するもの、透明支持体の上に順にペル
オキシダーゼを含む試薬層、オキシダーゼ全含む光遮蔽
層、オキシダーゼ全含む接着層、および展開層が設けら
Ｔ′Ｌ７′ｃ構成？有するもの、透明支持体の上に順に
はルオキシダーゼおよびオキシダーゼ全含む試薬層、光
遮蔽層、および展開層が設けらｆＬだ構成全有するもの
、透明支持体の上に順に１０− はルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬層、オ
キシダーゼ全含む光遮蔽層、接着層、および展開層が設
けらｎだ構成を有するもの、透明支持体の上に１順にペ
ルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬ノー、光
遮蔽層、オキシダーゼｔｌむ試薬層、お工び展開層が設
けら扛た構成を有するもの、さらにこｎらの層構成のバ
リエーション、などがある。

本発明の多層分析材料は前述の特許明細書に開示の方法
に従って製造することができ、その具体例は彼記する実
施例に詳細に説明されている。ま九本発明の多層分析材
料は前述の特許明細書に開示の操作手順と同様にして被
検体液中の被検物質？定量することができる。本発明の
多層分析材料は実開昭ｊ弘−／Ａコλりμ、特開ｔ）［
ｒ仏−／ｊ６０７り、実開昭ｊ６−／≠２弘５μ、特願
昭ｊｊ−／３１１００に開示のスライド枠に収めて化学
分析スライドまｙｃは特願昭１６−ｊ７タコ弘に開示の
液体試料展開補助材？多孔性展開層の上に設けた構造の
化学分析スライドとして用いるのが６　ｌ− 製造、輸送、保管、測定操作などの全てめ面セ好ましい
。　　　　　　　　　　　　□　・“　ぴ　１″□実施
例 ゼラチン下塗りが施されである厚さ／　Ｊ’　、ｔ　ｐ
ｍの透明ボ□・リエ、、チレンテレブタンー）　’（Ｐ
ＥＴ）フィルム上に、量□記組成から成る血中グルコー
ス濃度定量用の試薬−を乾燥、後の膜厚がおよそハタ呻
になるよう（−塗布、乾燥した。　　　　　　　：ベル
オキシダーゼ　′　　　　　　２ｊθｏｒＨＩＪ／、７
−シヒドロキシナフタレン　　　　　　　ｊｆ化合物（
６）′／♂ｔ ゼラチン。

ノニオンＨ８，１，ｌＯ（日本油脂■製活面活性剤；ポ
リオキシエチレン ノニルフェニルエーテル） この主に、θ１．２ｆのノ、ニオンＨ８，ｚ１０１びグ
ルヲースオキシダーゼｊθ”、ｏ、ｏｏＩＵを含ム二酸
化テ、タン微粉末ｒｆをゼラチ、ン／ｆｌ＝混合分散し
たうめよ、り成る光遮蔽層を乾燥膜厚が、およそ７１μ
ｍになるように塗布、乾燥した。

この上に水／θ、ｏｍ１世にゼラチン＆ｆを溶解し、更
にこれにノニオンＨ８，ｚｌｏをｏ、、２ｆを加えて、
接着層伶布液とした。これを、・光遮蔽層の上に乾燥膜
厚がグμｍと：なるように塗布、乾燥し接着層を、形成
させた。次に１．：接着層に３．０・ｂ菊２の割合で水
を湿し水として供給、湿潤させたのち、綿／、０θ係の
ブロード（東洋紡製１０θ双　ブロード）を圧着ラミネ
ートシ、乾燥させて多孔性・展開層を設け、グルコース
定量用の多層分析材料・を完成させた。　　　　　□、
　　　　・、　　・・・。

この材料を１−ｌＣｍ×７′、°オｃｒｎめ正方形のチ
ップ１＝裁断、したのち、特開昭ｊ　７’　ｆ、　６’
　３４ｔ　、ｔ　２冒；開・示のプラスチ、ツクヤウ、
ントに収めて・グルコース定量用化学分析スライドとし
た。−・Ｘ〜バリン採血したヒト全血およびそれに□・
それぞれ異なる量のグルコースを加えてグルコース濃度
が異なるヒト全血試料３種（グルコース含有量は第９表
に示す。）を調製し、それぞれから６μｌをミクロピペ
ットで採取し、上記の分析スライドの脹開層の上に点着
し、３７６Ｃで６分間インクベーションしたのち、波長
３００　ｎｍの測定光でＰＥＴフィルム側から反射測光
して発色光学濃度−６グー を測定し検量線を作成した。測定結果を第９表および第
１図に示す。・ 比較例　□／□′ ・試薬層の組成中の化合物（６）のかわりに化合物（Ｃ
／）（・クーアミノアンチピリン）を／♂２加えたほか
□は実施例／と同様にし・てグルコース定量用゛化学分
析スライドを作製し、実施例′／ど同様の測定を行ない
検量線を作成した。測定結果を第り表および第７図に示
す＝　　　□ −ざ！＝ 第グ表および第１図から本発明のグルコース定量用多層
分析材料（フィルム）を用いた化学分析スライドにおい
ては比較例／の化学分析スラ・ｆドに比べ゛〔、同じグ
ルコース濃度に対し°Ｃ発色光学濃度が大きく、ｒも大
きく、従ってより高感度であり、かつグルコース濃度が
大きい領域までｒが大きく保たれていて、測定範囲が拡
大されていることがわかる。またγがより大きいことが
ら測定精度がよいこともわかる。

実施例　２ ゼラチン下塗りが施され°Ｃある厚さ７２０μｍの透明
ＰＥＴフィルム上に、下記組成から成る血中グルコース
濃度定量用の試薬層を乾燥後の膜厚がおよそ／オμｍに
なるように塗布、乾燥した。

ペルオキシダーゼ　　　　　　２ＪθθｏＩＵグルコー
スオキシダーゼ　　　グθθθＯＩＵ／、７−シヒドロ
キシナフタレン　　　　　　　！ｆ化合物（６）モノ塩
酸塩　　　　　　　　　λθ１ゼラチン　　　　　　　
　　　　　　−〇ｏ１１ノニオンＨ８２／θ　　　　　
　　　　　　コＶ二の」−ニ、ｏ　、、２ｆ（７）／ニ
オｙＨ，Ｓ、ｘ１０を含む二酸化チタン微粉末！ｆをゼ
ラチン７ｆ１：混合分散したものより成る光遮蔽層を乾
燥膜厚がおよそ／りμｍになるよう（二塗布、乾燥し：
た。この上に水１００ｍ４中にゼラチンクｖとノニオン
Ｈ８コ／θのθ、　−ｆ　ｆを加えて、接着層、塗布液
とした。

これを光遮蔽層の上に乾燥膜厚がりμｍ１″−なるよう
に塗布、乾燥し接着層を形成させた。

次に、接着層に３θ２／ｍ２の割合で水を湿し水として
供給、湿潤させたのち、綿１０ｏ％のブ１１−ド（東洋
紡製／θθ双　ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥さ
せて多孔性展開層を設け、グルコース定量用の多層分析
材料を完成させた。

この材料を／　、ｔｃｍ×／　、ｊＣｍの正方形のチッ
プ（：裁断したのち、特開昭！２−６３’ｌｊ、２１：
開示のプラスチックマウントに収めてグルコース定量用
化学分析スライドとした。

ヘノミリン採血したヒト全血およびそれにそれぞれ異な
る量のグルコースを加えてグルコース濃度が異なるヒト
全血試料３種類（グルコース濃度は一６？− 第ｆ表１′−示す。）を調製し、・それぞれから乙μｌ
を□ミク町ピペットで採取し、上記の分析スライドの・
展開層の上に点着し、３７°Ｃでｇ分イ、ンクベーνヨ
ンしたのち波長、ｒ　００　ｎｍの測定光でＰＥＴフィ
ルム側から反射光学濃度を測定し、検量線を作成した。

測定結果を第オ表および第２図に示す。

比較例　コ・ 試薬層の組成中の化合物（６）モノ塩酸塩のかわり（コ
化合物（ＣＩ）モノ塩酸環コθ７配合したほかは実施例
−と同様にしてグルコース定量用化学分析スライドを作
製し、実施例コと同様の測定を行ない、検量線を作成し
た。測定結果を第！表および第一図に・示す。　　　　
□　　　　・□ □ ６２− □第ｆ表ｉ□よｄ第一図から本発明のグルコース定置用
字゛層”分析材料□で・ブ・イルム）を用いた化学分析
スライ下丘おい゛ては比較例２の化学分析ス゛ライｒに
比べ忙□′Ｊ同じグルｊ−ズ濃□度に対し゛で発色光学
濃度が大きく、”ｒ４：、天き≧、従ってよ＆）高感度
であり、□からグル→ニス濃雇が大き（□；）領域まで
ン示大：永く裸たれでいて、測定範囲力１拡矢さｎ、で
いるこ・とがわガ―□る。★たｒがよ□り太き（・′）
ことから測□定精度がよいこと：□′も６が名。　　　
　　　　　□実施例　３−　　　：　′　・−□ 化合″＋ｋ（ｅ＞モノ塩酸塩の厚わりにｊヒ合物＜Ｉ）
　、”　（ｅ）’；（７）　、　（１ｇＪをそれぞれ／
“Ｊ’ｆ□配合□じんほかは実施例−と同様にして７種
のグルコース定置用化学分析スライドを作製した。

比較例　３ 化合物（６）モノ塩酸塩のかわりに化合物（０，２）（
４ｔ−アミノ−／、、２−ジメチル−３−フェニル−３
−ピラゾリン−ｊ−オン）を／Ｊ”ｆ／配合したほかは
実施例λと同様にしてグルコース定量用化学分析スライ
ドを作製した。

化学分析スラ・イド（多層分析材料）の相対感度　　・
実施例３の７種の化、学分析スラ・イド、比較例λおよ
び３の２種の化学分析スライ、ドの合計′１に種（＝−
″ついてグ／３．　：１７・−ス添加ヒト、、全血（血
漿分離後へキソキナーゼー〇−ｔ−ＤＰＨ法による検定
値ニゲ　□ルコース濃、度／　００　ｍ？　／　ｄ　１
．　）および蒸留水をそれぞれｇμｌ展開層に点着し、
３り０Ｃでｇ分インクベーションした複波長ンθθｎｍ
の測定光でＰＥＴフィルム側から反射測光して発色光学
濃度を測定した。ついで次式に・より化学分析スライド
（多層分析材料）の相対感阜を算出した。

ＯＤ（スライドオニ蒸留水）：：一　　　　　□但し、
ＯＤ（スライドｎ：ヒト全血）は化学分　″析スライド
ｎ（ｎは／からにまでの番号数字を表わす。この数字は
４種の化学分析スライド（＝第を表のとおりわりふった
。）を用いて上記のヒト全７２− 血につい゛〔測定した発色光学濃度値を表わすっ他も同
様の意味を表わす。

冷水に対する溶解量 二二二〇、凸′　−霞 化合物（１）、（６）、（γ）、０本　（Ｃ／）、（Ｃ
，２）それぞれにつＪ・て冷水（、ｓｒｏＣの蒸餉水）
／θｍ窮：□　対する溶解量をテストした。テストは１
０１以上の溶：解散Ｊθ、コをこえｊｆ以下の溶解量、
および０１．２りまたは０．２ｆ以下の溶解量の３レベ
ルにわけて判定した二判定結果は第６表に示す。

水溶液系における相対感度 、　　色原−として化合讐１す、（６）、（力、０本（
Ｃ／）、　。

１　　（Ｃ，２）をそれぞれ用い、カプラーとして７□
′：□、クージヒ□ド占キシナフタレンを用いて次の組
成の発色液を調整した。

０□　−□　　　　　　７ｏア、。。１゜／、ｖ　７−
ｉ；’ｅ　）°１“ｖｔ７ｊｖ、＞　　ｔｏμｍ°１０
ベルオキンダーゼ　　　　　　　　　　！θＩＵ燐酸緩
衝液で　　　　　　　ｐＨ６，０に緩衝上記組成の発色
液！ｍｌをとり３２°Ｃで３分インクベーションし、そ
の時点でＨ２Ｏ２水溶液７３− （７ｍ、ｍｏｌｅから、＜ｍｍｏｌｅ（ｙ）範囲内のｙ
レベルおよびブランク）１０μｌを滴下し、さら１１３
７°ＣでｌＯ分インクベーションし、・直ちに波長！／
！ｎｍの測定光で透過測光法１：より発色光学濃度値を
測定した。Ｈ２Ｏ２濃度と発色光学濃度値（Ｈ２０２水
溶液での発色光学濃度値からブランクの発色光学濃度値
をさ、しひいた値）との関係を直交軸グラフにプロット
して検量線の勾配を定め、化合物（ＣＩ）の場合の検量
線の勾配（二対する他の化合物の場合の検量線の勾配の
比を求めて、化合物（ＣＩ）を基準値／とする他の化合
物の相対感度を求めた。相対感度値、を第を表に示す。

第６表から、本発明に用いた化合物は比較例として用い
た化合物に比ベヤ水溶液系（＝おける感度はおおむね低
く、冷水１一対する溶解値は小さｖｌが、化学分析スラ
イド（多層分析材料）′における感度は著しく高いこと
が明らかである。

実施例　グ ゼラチン下塗りが施されである厚さ／　Ｊ’　ｒ　ｐｍ
の透明ＰＥＴフ・ｆシム上に、下記組成から成る血中グ
ルコース濃度定量用の試薬層を乾燥後の膜厚がおよそン
まｐｒｎ（’Ｃなるように塗布、□″乾燥た。

はルオキシダーゼ　　　　　　）、ｆ′・θθθ１Ｕハ
フージヒドロキシナフタレン　　　　　　　□・：！１
化合物（６）′・　　　　　　　　　　　／？２ゼラチ
ン　　　　　　　　　　′　　コθｏｒ／ニオｙＨ８，
２１０’　　　　　　　　　、２ｔこの上に、Ｏ１λ１
ｆのノニオンＨ８ｘ／ｌｊ及びグルコースオキシダー□
ゼｊθ、θθθＩ’ｉＵを含む二酸化チタン微粉末ｒｆ
をゼラチン／り（＝混合分散したものより成る光遮蔽層
を乾燥膜厚がおよそ／オμｍになるよう（二塗布、乾燥
した。　　□この上；−水ＩＯ・ｏｒｉｘｌ中にゼラチ
ン４ｔ？１３．３＝ジメチルグルり□−ル酸θ、夕？、
およびノニオｙＨＳ、２’１０のＯ，’　＋　ｓＦを加
えて接１層塗布液をｌＩｌ製した。これを、□光遮蔽層
の上１ユ乾燥膜厚ぶりμｍとなるように塗布、乾燥し接
着層を形成させた計次に、接着層＋＝ｓｏｙ／ｍ２の割
合モ水を湿し水として供給二湿潤させたのち、綿／ｌｊ
ｏ％のプ【ゴー￥（東洋紡製／□ｏ’ｏ双　ブロード）
を圧着う（イ”　　）しｓ乾燥させて多孔性展開層を設
け、グルコース定量用のφ層分析粉料を完成させた。

この材料を／、１ｃｍｍ×／、タＣｍの正方□形ｂテッ
プ（巳裁断したのち、特開軸オフー６３グｊユに開示の
プラスチックマウント（二収めてグル□コニズ定量用イ
ヒ学分析ズライドとした。

ヒト血漿、およびはト血漿にそれぞれ異なる量のグルコ
ースｉ加先でグルコース濃度が翼なるヒト血漿１料３種
（グルコース含有量は第７表（＝示す。）を調製し、そ
れぞれからｇμｌをミグＵビ啄ットで採取し、上記の化
学分析スライドの展開朧の上に点着し、３７°Ｃで２分
インクベ□二：Ｖヨンしたのち波長オθθｎｍの測定光
でＰＥＴフィルム側か□ら反射測光して発色光学濃度を
測定し、検量線を作成した。測定結果を第り表および第
１図に示す。　　　　　　　□　　　・　　　　　□・
比較例　・グ 化合物（６）のかわりに化合ｖ１：Ｊ（Ｃ／）　（ｇ−
アミノアンチピリン）を７？？用いたほかは実施例グと
同様にして比較用のグルコース定量用化学分析スライド
を作製し、実施例（と同様に□して発色光学濃度を測定
し、検量線を作成した。測定結果を第２表および第３図
に示す。

−♂θ− 第２表および第３図から弱酸３，３−ジメチルグルタル
酸を加えて低ｐ　Ｉ：’Ｌ、値に調整した接着層を有し
、使用時においては低ｐＨ値（二維持されている試薬層
を有する本発明のグルコース定Ｍｉ用多層分析材料（〕
・ｆルム）、においては、同様に使用時（二おいて低ｐ
、、Ｈｔ　：　雑持されている比較例りの多層分析材料
（フィルム）に比べ°Ｃ同じグルコース濃度に対して発
色光学濃度が大きく、ｒも大きく、従ってより高感度で
あり、か・つグルコース濃度が大きい領域までｒが大き
く堡たれていて測定範囲が拡大され°Ｃいることがわか
る。またｒがより大きいことから測定精度がよいことも
わかる。

実施例　！ 化合物０槌／♂２を用いたほかは実施例グと同様にし、
てグルコース定量用化学分析スライドを作製し、実施例
グと同様にして発色光学゛潤度を測定したところ、はぼ
実施例グと同じ結果かえられた。

実施例　６ 光遮蔽層の組成 二酸化チタン微粉末　　　　　　　　　　　Ｉｆゼラ、
チン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　／２コレ
ステ＋ｆｆ−ルオキシダーゼ　　　　、！ｌ−００，０
０１Ｕ／ニオ７Ｈ８，２１００、，２ｆ 接着層塗布液の＋ｉｉｇ或 ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　　４ｔ７西１・
酸すトリウム　　　　　　　　　　　　、−２、コレス
テロールエステラーゼ　　　コ！００θＩＵノモオンＨ
８２１００，，２，ｆ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｍ
１上記の光遮蔽層および接着層にかえたほかは実施例／
と同様にしてコレステロール分析ス−ｊ−（ドを作製し
た。

このスライドについて、遊離コレステロールおよびエス
テル型コレステロールヲ遊１１１Ｊｆｆｌコレステロー
ル換＄　３７　ｊ　ｍｆ／ｄｌｌ含有する非溶血ヒト血
清および部分溶血ヒト血清を用いそれぞれから／θμｌ
をミクロピペットで取り、展開層に点着して発色テスト
を行った。３２°Ｃ，を分のインクベーション後の波長
！θＱｐｍでのＰＥＴフィルム側からの反射測光：＝劣
る発色光学濃度はそれぞれ０８ｊ３及び０．！／であっ
た。

比較例　よ 試薬層の組成 ペルオキシダーゼ　　　　　　　、２ｊＯＯＯＩＵ／、
７−シヒドロキシナフタレン　　　　　　　７５’化合
物（Ｃ／）　　　　　　　　　　　　　／♂７ゼラチン
　　　　　　　　　　　　　、２ｏｏｙノニオンＨ８２
１００，，２ｆ／ 上記の試薬層にかえたほかは実施例２と同様にしてコレ
ステロール・分析用スライドを作製した。

このスライドについて、実施例１０と同じ試料を用いて
実施例ｔと同様にして発色テストヲ行なった。３７°（
１分のインクベーション後の波長！ｏ　ｏ　ｎｍでの反
射測光による発色光学濃度は非溶血血清でＯ１≠ｒ溶血
血清でｏ、ｐｔであった。

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第３図は本発明の多層分析材料および比較
例の多層分析材料を用いて、グルコース含有量が異なる
レベルのヒト全血試料およびヒト血漿試料を用いて求め
た試料中のグルコース含有ｒ　３− 量と反射測光法により測定した発色光学濃度との関係に
基いて作製した検量線である。図において、黒丸（・）
および白ぬき三角形（ハ）をプロットした曲線はそれぞ
れ本発明および比較例のグルコース定量用多層分析材料
（フィルム）についての検量線を表わす。 特許出願人　富士写真フィルム株式会社−ｇ　グー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　水不浸透性光透過性支持体の上に、少なくと
   もペルオキシダーゼ、およびはルオキシダーゼと過酸化
   水素の存在下で検出可能な変化を生じうる色原体とカプ
   ラーの組合せを含む過酸化水素検出用呈色指示薬組成物
   を含む試薬１ｇ　、ならびに多孔性展開層の二つの１−
   を少なくとも肩し、この順に精１−されてなる多層分析
   材料に唇いて、前記色原体が２ｊ″′Ｃにおいて水に対
   する溶解度が弘−アミノ−２，３−ジメチル−ｌ−フェ
   ニル−３−ピラゾリン−ｊ−オンの溶解度より小さいグ
   ーアミノ−３−ピラゾリン−よ−オンの／、、２．３−
   トリ置換体であ衣ことを特徴と４る多層分析材料。 （２）前記カプラーがはルオキシダーゼの共存下に前記
   ｌ−アミノ−３−ピラゾリン−！−オンの／、Ｊ、、？
   −）り置換体と酸化的カプリング反応により色素を形成
   しうる化合物である％Ｗ！ｆ請求の範囲／に記載の多１
   −分析材料。　　　　　□（３）前記試薬層にはルオキ
   シダーゼとともに前記グーアミノ−３−ピラゾｌｊンー
   ！−オンの７゜コ、Ｊ−）り置換体および前記カプラー
   が含有されている特許請求の範囲ンまたはｄに記載の多
   層分析材料。　　　　　　　　　　□ （４）前記：試薬＠または他のいずれか一つの層にオキ
   シ少−ゼが含有されている特許請求の範囲ｌないし３に
   □記載め多層分析材料。 （５）前記オキシダーゼがグリ士レートオキシダーゼ、
   マレートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキ
   ソースオキシダニゼ、コレステロ」ルオキシダーゼ、Ｌ
   −グルコノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオキシ
   ダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、ピルベートオキシダ
   ーゼ、ウリカーゼ、ケスコルベートオキシダーゼ、ラク
   テートオキシダーゼ、グリシンオキシダ、−ゼ、グリセ
   ロールオキシダーゼからなる群から選ばれた１種である
   特許請求の範囲佐に記載の多１−分析材料。 （６）前記オキシダーゼがグルコースオキシダーゼであ
   る特許請求の範囲参に記載の多層分析材料″。 （γ）　前記パ′ダー・、′・瀘”Ｌｙ　、１．　ｆ　
   ｏ　−ＪＬ／オ“７．、ど九・。 ダーゼである特許請求の範囲グに記載の多１−分析１１ 材料。・１く■　　　：′　　聾　□″□　リ